Способ лечения заболевания желудочно-кишечного тракта и/или инфекции желудочно-кишечного тракта, и/или диареи, антимикробная композиция для перорального введения и способ ее получения, пища для человека или корм для животных или птиц

Номер патента: 2771

Опубликовано: 29.08.2002

Автор: Мелрос Грэм Джон Гамильтон

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Способ лечения или профилактики человека, животного или птицы, пораженного заболеванием желудочно-кишечного тракта, желудочно-кишечной инфекцией или диареей, вызванной инфекцией желудочно-кишечного тракта, отличающийся тем, что перорально вводят названным человеку, животному или птице антимикробно эффективное количество антимикробного вещества, содержащего полимер или сополимер с молекулярной массой, по меньшей мере, 1000, имеющий повторяющееся звено формулы

Рисунок 1

где R - Н или С14алкил, или указанное звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, причем полимер или сополимер содержит карбоксильные группы в количестве от 0,1 до 5 молей на 1 кг массы полимера или сополимера.

2. Способ по одному из пп.1 или 2, отличающийся тем, что полимер или сополимер включает одно или несколько повторяющихся звеньев, выбранных из группы, структуры которых представлены следующими формулами:

Рисунок 2

или

Рисунок 3

где n _1 и R - Н или С14алкил.

3. Способ по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что инфекция является микробной инфекцией.

4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что инфекция является коли-бактериозом и/или вызвана пролиферацией бактерий Escherichia соli.

5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что инфекция вызвана пролиферацией бактерий Helicobactor pylori.

6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что инфекция вызвана пролиферацией бактерий Staphylococcus aureus.

7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что антимикробное вещество вводят собакам, свиньям, овцам, лошадям, крупному рогатому скоту или кошкам.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что антимикробное вещество вводят свиньям.

9. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что антимикробное вещество вводят домашней птице, уткам, индюкам, перепелам или фазанам.

10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что антимикробное вещество частично или полностью включают в систему регулируемого высвобождения.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что названная система регулируемого высвобождения является рН-чувствительной.

12. Способ по одному из пп.10 или 11, отличающийся тем, что в качестве системы регулируемого высвобождения используют систему на основе нерастворимых, поперечно-сшитых полимеров и/или сополимеров акриловой кислоты или полимеров и/или сополимеров акриловой кислоты и акриламида.

13. Способ по любому из пп.10-12, отличающийся тем, что система регулируемого высвобождения является поперечно-сшитой и/или является абсорбентом и во влажном состоянии образует гель.

14. Способ по любому из пп.10-13, отличающийся тем, что систему регулируемого высвобождения нагревают для ее стерилизации.

15. Антибактериальная композиция для перорального введения человеку, животному или птице, пораженного заболеванием желудочно-кишечного тракта, желудочно-кишечной инфекцией или диареей, вызванных инфекцией желудочно-кишечного тракта, отличающаяся тем, что она включает антимикробное вещество, содержащее полимер или сополимер с молекулярной массой, по меньшей мере, 1000, имеющий повторяющееся звено формулы

Рисунок 4

где R - Н или С1-C4алкил, или указанное звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, причем полимер или сополимер содержит карбоксильные группы в количестве от 0,1 до 5 молей на 1 кг массы полимера или сополимера, и фармацевтически или ветеринарно приемлемый носитель, подходящий для перорального введения.

16. Композиция по п.15, отличающаяся тем, что носитель включает систему регулируемого высвобождения.

17. Композиция по п.16, отличающаяся тем, что система регулируемого высвобождения включает внешнюю полимерную матрицу из нерастворимого поперечно-сшитого абсорбирующего полимера, имеющего ионные группы.

18. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что абсорбирующий полимер внешней полимерной матрицы представлен акриловой кислотой и/или сополимерами акриламида и акриловой кислоты.

19. Способ получения композиции по одному из пп.17 или 18, отличающийся тем, что добавляют внешнюю полимерную матрицу к раствору, и/или суспензии, и/или эмульсии антимикробного вещества.

20. Способ по п.18, отличающийся тем, что в процессе добавления полимерной матрицы к раствору, и/или суcпензии, и/или эмульсии антимикробного вещества растворяют антимикробное вещество в водном растворе щелочи или основания, нейтрализуют полученный раствор кислотой, добавляют к нейтрализованному раствору нерастворимые, поперечно-сшитые абсорбирующие полимеры акриловой кислоты и/или сополимеры акриламида и акриловой кислоты с образованием влажных набухших гранул.

21. Способ по одному из пп.19 или 20, отличающийся тем, что далее композицию высушивают, по крайней мере, частично или полностью.

22. Пища для человека или корм для животных или птиц, отличающаяся тем, что содержит композицию по одному из пп.17 или 18.

 

Текст

Смотреть все

1 Область техники Настоящее изобретение относится к лечению заболеваний желудочно-кишечного тракта человека, животных или птиц, нуждающихся в указанном лечении, путем приема внутрь полимерных антимикробных композиций. Уровень техники В условиях интенсивного разведения свиней наблюдается массовое заболевание колибактериозом животных, отнятых от грудного вскармливания. Например, интенсивное разведение свиней широко распространено в Европе,США и Австралии. Так в США основной причиной падежа отнятого от грудного вскармливания молодняка является колибактериоз (Leman et al., 1986). Заболевание связано с пролиферацией кишечной палочки Escherichia coli в передней тонкой кишке у животных, отнятых от грудного вскармливания, и вызывает падеж или потерю нормального прироста в весе животных. Наблюдается также массовое заболевание свиней, вызванное другими бактериями, которые часто сопровождают колибактериоз. Аналогичные заболевания наблюдаются у других животных в условиях интенсивного разведения, особенно в птицеводстве. В прошлом были предприняты попытки лечения указанного заболевания путем приема внутрь антимикробных композиций или путем вакцинации. Однако было показано, что ни один из способов не был эффективен. Причиной потери активности антимикробных композиций при кормлении животных считается тот факт, что белковые компоненты, входящие в состав корма, и содержимое желудочно-кишечного тракта представляют собой реактивную и разрушительную среду по отношению к любому хемотерапевтическому средству. Следовательно, антимикробный агент будет неэффективен in vivo в желудочно-кишечном тракте,даже, если этот агент активен in vitro. Кроме того, для обеспечения практической эффективности к антимикробным средствам для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта часто предъявляется ограничивающее требование, заключающееся в том, что такие средства должны поддерживать низкий уровень бактерий в двенадцатиперстной кишке и достаточно высокий уровень в нижних участках желудка. В то же время тот факт, что антимикробные средства проявляют активность in vivo, не означает, что они будут вызывать прирост в весе, так как известно, что даже кормление смесью, состоящей из нескольких коммерческих антимикробных средств, вызывает различный или частичный прирост и даже отрицательное изменение в весе по сравнению с контрольными животными. В связи с этим существует необходимость в разработке эффективных средств для профилактики и/или лечения заболеваний человека, 002771 2 и/или животных, и/или птиц, нуждающихся в указанном лечении, путем приема внутрь антимикробных композиций. Более того, необходимо, чтобы находящиеся на лечении человек,и/или животные, и/или птицы набирали в весе. Согласно настоящему изобретению предлагается использовать полимеры, полученные преимущественно на основе акролеина и содержащие повторяющееся звено формулы: где R - H или алкил, обычно C1-C4,или содержащие указанное повторяющееся звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, возможные структуры которых представлены, но не исчерпывая всех возможных структур, следующими формулами: или где n 1, R - как определено выше. Указанные полимеры в данном описании далее названы "полимеры согласно изобретению" и представляют собой широкий спектр антимикробных и/или противоопухолевых средств, действующих in vivo и пригодных для лечения пероральным методом. Известно, что степень проникновения молекул через мембраны находится в обратнопропорциональной зависимости от их молекулярной массы. Таким образом, в данной области техники известно и общепринято утверждение,что молекулы, введенные пероральным путем и обладающие молекулярной массой 1000, настолько ограниченно проникают через стенки кишечника, что их потенциальная токсичность сведена к минимуму. Полимеры по изобретению, являясь альдегидами, особенно реакционноспособны по отношению к белкам. (Действительно, при проведении микробиологических тестов обычным и простым способом гашения/инактивации активности полимеров по изобретению является добавление белка). Следовательно, нельзя было предположить, что полимеры согласно изобретению будут проявлять значительную микробиологическую активность в кишечнике, особенно в присутствии белковых кормов. Согласно настоящему изобретению предложен способ профилактики и/или лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта у человека, животных или птиц и способ увеличения прироста в весе у пациентов человека, животных или птиц с инфекциейи/или заболеванием жулудочно-кишечного тракта. Способ заключается во введении указанным пациентам - чело 3 веку, животным или птицам эффективного количества фармацевтической композиции или пищевой добавки, содержащих эффективное количество полимеров согласно изобретению в смеси с фармацевтически или ветеринарно приемлемыми носителем, разбавителем, адъювантом, наполнителем или системой регулируемого высвобождения. Сущность изобретения Объектом настоящего изобретения является способ профилактики и лечения дисфункциональных/патологических состояний у человека, животных или птиц, особенно, заболеваний желудочно-кишечного тракта, связанных с колибактериозом, диареей, смертностью и/или снижением прироста в весе. Описание изобретения Настоящее изобретение основано на ряде обнаружений. Во-первых, было обнаружено, что благодаря высокой молекулярной массе, полимеры по изобретению не способны проникать через биологические мембраны и могут быть эффективно использованы в желудочно-кишечном тракте,так как их проникновение через кишку в поток крови минимально для того, чтобы потенциально вызвать токсичность. В особенности, было обнаружено, что полимеры согласно изобретению имеют молекулярную массу 1000 и, в основном, 2000, что сводит к минимуму их проникновение через мембраны кишечника. В результате было установлено, что в то время как полимеры согласно изобретению проявляют токсичность при внутривенном введении, они не проявляют токсичность при пероральном введении. Следовательно, было обнаружено, что полимеры по изобретению имеют минимальную токсичность и обладают преимуществами при использовании в качестве хемотерапевтических средств для лечения любого организма, имеющего мембраны кишечника, например, человека,животных или птиц. В основном, полимеры согласно изобретению, полученные с использованием ионного инициирования/катализации, являются более гидрофильными, чем полимеры, полученные с использованием свободнорадикального инициирования/катализации, и гидрофильность указанных полимеров можно увеличить путем включения в их структуру гидрофильных групп,особенно карбоксильных групп или гидрофильных мономеров, особенно акриловой кислоты. В частности, осторожное нагревание полимеров согласно изобретению, полученных методом ионного инициирования/катализации, в присутствии воздуха при температуре от комнатной до 100 С, предпочтительно при 80-85 С, приводит к получению полимеров согласно изобретению,содержащих 0,1-5 молей карбоксильных групп на 1 кг, и растворимых в воде, особенно при рН,равном рН среды двенадцатиперстной кишки, и такие полимеры могут быть предпочтительно 4 использованы при указанном введении в желудочно-кишечный тракт. Полимеры согласно изобретению проявляют антимикробную активность необыкновенно широкого спектра действия in vivo, что позволяет их использовать в способе лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта у человека, животных или птиц. Показано, что полимеры согласно изобретению увеличивают прирост в весе у человека,животных или птиц. Показано также, что полимеры согласно изобретению являются противоопухолевыми средствами in vivo. Согласно первому аспекту данного изобретения, предложен способ лечения in vivo злокачественных опухолей у человека, животных или птиц, заключающийся во введении указанным человеку, животным или птицам эффективного количества фармацевтической или ветеринарной композиции или пищевой добавки, содержащих эффективное количество полимеров,содержащих повторяющееся звено формулы:,где R - Н или алкил, обычно С 1-С 4, или содержащие указанное повторяющееся звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, возможные структуры которых представлены, но не исчерпывая полностью всех возможных структур, следующими формулами:,где n 1, R имеет указанное выше значение,в смеси с фармацевтически или ветеринарно приемлемыми носителем, разбавителем,адъювантом, наполнителем или системой регулируемого высвобождения. Согласно второму аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения и/или профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта, и/или инфекции, и/или диареи у человека, животных или птиц, вызванных микробной инфекцией желудочно-кишечного тракта человека, животных или птиц. Способ заключается во введении человеку, животным или птицам эффективного количества фармацевтической или ветеринарной композиции или пищевой добавки, содержащих эффективное количество полимера, указанного в первом аспекте изобретения, в смеси с фармацевтически или ветеринарно приемлемыми носителем, разбавителем, адъювантом, наполнителем или системой регулируемого высвобождения. Согласно третьему аспекту на 5 стоящего изобретения предложен способ увеличения прироста в весе у человека, животных или птиц, имеющих злокачественные опухоли и/или страдающих вызванными микробами заболеваниями желудочно-кишечного тракта, и/или инфекцией, заключающийся во введении человеку, животным или птицам эффективного количества фармацевтической или ветеринарной композиции или пищевой добавки, содержащих эффективное количество полимера, указанного в первом аспекте изобретения, в смеси с фармацевтически или ветеринарно приемлемыми носителем, разбавителем, адьювaнтом, наполнителем или системой регулируемого высвобождения. В связи с тем, что полимеры согласно изобретению предназначены для профилактики и/или лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, в настоящее время показано, что у поросят на свиноводческой ферме, получавших такие полимеры в питьевой воде ad libitum, наблюдается снижение продолжительности диареи (в днях) и снижение числа кишечных палочек в экскрементах. Более того, как и предполагалось, действие полимеров значительно эффективнее по сравнению с частичным действием,оказываемым при введении коммерческих антимикробных средств одновременно с вакцинацией. Кроме того, в настоящее время обнаружено, что полимеры согласно изобретению в полимерных системах с регулируемым высвобождением не только снижают продолжительность диареи у животных, но и приводят к чрезвычайно высокому приросту в весе. Как показано в примере 17, у поросят наблюдается низкая смертность, а прирост в весе у некоторых из них на 46% выше по сравнению с контрольными животными. В связи с этим предполагается, что полимеры согласно изобретению можно использовать в качестве добавок в твердый корм животным в форме полимерных систем с регулируемым высвобождением, так как в этом случае полимеры согласно изобретению будут выделяться постепенно и, в основном, в двенадцатиперстной кишке. Кроме того, предполагается,что содержание полимеров согласно изобретению в системе с регулируемым высвобождением приведет к снижению разрушающего взаимодействия как с содержимым желудочнокишечного тракта, так и с белковыми компонентами корма, особенно в процессе стерилизации корма путем нагревания. Более того, отказ животных в приеме указанных композиций по причине вкусовых ощущений будет значительно снижен. При использовании полимеров согласно изобретению для лечения заболеваний и/или инфекции у человека, животных или птиц, нуждающихся в лечении, например, поросят с диареей, вызванной колибактериозом, предпочтительно начинать лечение немедленно после отнятия от грудного вскармливания и непременно продолжать лечение в течение последующих 5 6 дней, иногда последующих 30 дней, но, предпочтительно, по крайней мере, в течение последующих 15 дней после отнятия от грудного вскармливания, и в периоды, когда наблюдается диарея. Предпочтительно проводить лечение в форме с регулируемым высвобождением, причем содержание полимеров согласно изобретению должно составлять теоретически 5-50%(мас./мас.). Предпочтительно добавлять форму с регулируемым высвобождением/гранулы в корм либо в процессе приготовления корма, либо во время кормления, таким образом, чтобы корм содержал 1-20% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 2-8% (мас./мас.) гранул. Например,если поросенок весом 5 кг съедает в день 500 г корма, содержащего 4% (мас./мас.) гранул с регулируемым высвобождением, содержащих 25% (мас./мас.) полимеров согласно изобретению, то расчетная доза для полимеров по изобретению должна составлять 1000 мг/кг (живого веса)/день, в форме с регулируемым высвобождением она составляет практически 50-5000 мг/кг/день и предпочтительно 500-2500 мг/кг/день. Если полимеры согласно изобретению вводят в форме, отличной от формы с регулируемым высвобождением, то следует использовать меньшие дозы - 25-500 мг/кг/день. Схема введения и величины доз аналогичны для лечения и других микробиологических инфекций или раковых заболеваний. Как проявляемая полимерами согласно изобретению антимикробная активность in vivo в присутствии огромного количества реакционноспособных белков, содержащихся в желудочно-кишечном тракте, так и выявленный спектр хемотерапевтическихактивностей являются удивительными. Согласно неопубликованным исследованиям полимеры согласно изобретению проявляют также противокоагуляционную активность по отношению к крови человека и различных животных. Такой особенный спектр удивительных активностей in vivo предполагает,что неожиданно полимеры согласно изобретению имеют такую активность, связанную с адсорбционным внутренним взаимодействием типа лектин-селектин-интегрин. Композиции для введения по способу согласно изобретению могут быть получены известными в данной области техники способами(в области получения ветеринарных и фармакологических композиций), включающими смешение, измельчение, размалывание, гомогенизацию, суспендирование, растворение, эмульгирование и диспергирование и, если необходимо,смешение полимеров согласно изобретению с выбранными наполнителями, разбавителями,носителями и адъювантами. Для перорального введения фармацевтические или ветеринарные композиции могут быть приготовлены в форме таблеток, пастилок, лепешек, пилюль, капсул, элексиров, порошков, 7 включающих лиофилизированные порошки,растворы, гранулы, суспензии, эмульсии, сиропы и настойки. Могут быть также приготовлены композиции пролонгированного или замедленного действия, например, в форме частиц со специальным покрытием, многослойных таблеток или микрогранул. Предпочтительно, чтобы система с регулируемым высвобождением состояла из рН-чувствительных, поперечносшитых водно-абсорбционных гранул, которые в воде образуют гель. Твердые формы для перорального введения могут содержать фармацевтически или ветеринарно приемлемые связующие, подсластители, дезинтегранты, разбавители, ароматизирующие добавки, обволакивающие вещества, консерванты, смазывающие вещества, и/или вещества пролонгированного действия. К подходящим связующим относятся: аравийская камедь, желатин, кукурузный крахмал, трагакант, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза или полиэтиленгликоль. Подходящими подсластителями являются: сахароза, лактоза, глюкоза, аспартам или сахарин. Подходящими дезинтегрантами являются: кукурузный крахмал, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, ксантановая камедь, бентонит,альгиновая кислота или агар. Подходящими разбавителями являются: лактоза, сорбит, маннит, декстроза, каолин, целлюлоза, карбонат кальция, силикат кальция или моногидрофосфат кальция. Подходящие ароматические и вкусовые добавки включают: мятное масло, масло грушанки, добавку с запахом вишни, апельсина или малины. К подходящим веществам для покрытия относятся полимеры акриловой и/или метакриловой кислоты, и/или их эфиры, и/или их амиды, воска, жирные спирты, зеин, щеллак или клейковина. Подходящими консервантами являются: бензоат натрия, витамин Е, альфатокоферол, аскорбиновая кислота, метилпарабен, пропилпарабен или бисульфат натрия. Подходящими смазывающими веществами являются: стеарат магния, стеариновая кислота,олеат натрия, хлорид натрия или тальк. Подходящие вещества пролонгированного действия включают моностеарат глицерина или дистеарат глицерина. Жидкие формы для перорального введения, кроме указанных выше компонентов,могут содержать жидкий носитель. Подходящие жидкие носители включают воду, масла, такие как оливковое масло, арахисовое масло, подсолнечное масло, масло сафлора красильного,кунжутное масло, кокосовое масло, жидкий парафин, этиленгликоль, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, этанол, пропанол, изопропанол,глицерин, жирные спирты, триглицериды или их смеси. Суспензии для перорального ведения могут, кроме того, содержать диспергирующие и/или суспендирующие агенты. К подходящим суспендирующим агентам относятся: натрийкарбоксиметилцеллюлоза,метилцеллюлоза,гидроксипропилметилцеллюлоза,поливинил 002771 8 пирролидон, альгинат натрия или цетиловый спирт. Подходящие диспергирующие агенты включают: лецитин, сложные эфиры полиоксиэтилена и жирных кислот, таких как стеариновая кислота, полиоксиэтиленсорбитол моно- или диолеат, -стеарат или -лаурат, полиоксиэтиленсорбитан моно- или диолеат, -стеарат или-лаурат и подобные им. Эмульсии для перорального введения могут включать одно или более эмульгирующих веществ. Подходящими эмульгирующими веществами могут быть указанные выше диспергирующие вещества или камеди, такие как аравийская камедь или трагакант. Согласно четвертому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения гранул, содержащих полимеры, определенные в первом аспекте изобретения, в смеси с фармацевтически или ветеринарно приемлемыми носителем, разбавителем, адъювантом, наполнителем и/или с системой регулируемого высвобождения, главным образом, в полимерной матрице. Способ включает добавление полимерной матрицы к раствору, суспензии или эмульсии полимеров согласно первому аспекту изобретения. Согласно пятому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения гранул или подобных твердых композиций, содержащих полимеры согласно первому аспекту изобретения, в основном, заключенные в полимерной матрице. Этот способ определен в четвертом аспекте изобретения и включает следующие стадии:(i) растворение полимеров в водном щелочном или основном растворе; (ii) нейтрализацию указанного раствора кислотой; (iii) добавление к указанному нейтрализованному раствору нерастворимых поперечно-сшитых абсорбирующих полимеров акриловой кислоты и/или сополимеров акриламида и акриловой кислоты для образования набухших влажных гранул;(iv) по желанию, полное или частичное высушивание указанных набухших влажных гранул. Полученные таким образом влажные,набухшие гранулы в виде влажных, частично высушенных или полностью высушенных гранул могут быть использованы в качестве добавок, например, в корм для животных. Действие указанной композиции рассчитано таким образом, что карбоксильные группы, содержащиеся в полимерной матрице и расположенные на ее внешней поверхности, обеспечивают, по существу, сохранение полимеров согласно изобретению внутри полимерной матрицы в кислой среде желудка. Однако в щелочной среде двенадцатиперстной кишки карбоксильные группы матрицы ионизируются и отталкиваются друг от друга, что приводит к быстрому набуханию гранул и высвобождению полимеров согласно изобретению, которому способствует отталкивание собственных ионизированных групп и в конечном итоге приводит к высвобождению полимеров согласно изобретению за счет диффузии, 9 скорость которой приблизительно соответствует скорости прохождения пищи через двенадцатиперстную кишку. В данном изобретении был использован термин "controlled release system"("система регулируемого высвобождения") в том же контексте и включает те же примеры,как это описано в работе "Controlled Drug Delivery" (RobinsonLee, 1987). Полимер акриловой кислоты или сополимер акриламида и акриловой кислоты может быть заменен на другие рНчувствительные системы регулируемого высвобождения, известные в данной области техники(Robinson and Lee, 1987). Например, растворимые анионные или нерастворимые, поперечносшитые и анионные целлюлозные системы или растворимые и анионные или нерастворимые, поперечно-сшитые и анионные полимеры на основе акриловой кислоты и/или ее производных. Предпочтительными являются поперечно-сшитые и нерастворимые полимеры, так как они набухают и менее подвергаются метаболизму. В заключение следует отметить, что описанные композиции могут быть использованы для профилактики злокачественных опухолей и/или инфекционных заболеваний и, в особенности, приводят к увеличению прироста в весе человека, животных или птиц с желудочнокишечными инфекциями. Изобретение можно использовать для лечения человека, животных,например, собак, свиней, овец, лошадей, крупного рогатого скота, кошек, или птиц, например,домашней птицы, уток, индюков, перепелов или фазанов, с инфекционными заболеваниями желудочно-кишечного тракта, вызванными, например, Escherichia соli. Предпочтительным использованием изобретения является использование его для увеличения прироста в весе поросят, отнятых от грудного вскармливания, с диареей, вызванной пролифирацией бактерийEscherichia coli в передней тонкой кишке. Изобретение можно использовать для лечения человека с заболеванием желудочно-кишечного тракта, вызванным, например, бактериямиStaphylococcus aureus и/или Helicobactor pylori. Далее приводятся примеры осуществления данного изобретения, которые не следует рассматривать, как ограничивающие изобретение. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Примеры 1-13. Получение полимеров согласно изобретению. Пример 1.(а) Использование свободно-радикального инициатора/свободно-радикального катализатора: 9,64 г перегнанного акролеина и 25 г метанола помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,525 г перекиси бензоила, и раствор перемешивают в атмосфере азота при 60 С. Реакцию проводят в течение около 88 ч. По завершению реакции реакционная смесь окрашена в интенсив 002771 10 но желтый цвет и имеет содержание твердого осадка 30,5%. 13 С-ЯМР (300 МГц)(относительно d4 метанола при 49,00): 33,27 (СН); 33,53 (СН); 33,79 (СН); 33,87 (СН 2); 37,03 (СН); 37,29 (СН); 37,54 (СН); 37,64 (СН 2); 97,15 (СН); 103,37(СН); 104,34 (СН); 139,36 (СН); 139,78 (СН 2); 196,72 (СН). В 13 С-ЯМР-спектре сигнал при 196,72 свидетельствует о наличии некоторых остатков акролеина с углеродом альдегидной группы, а сигналы при 139,78 и 139,36 соотвествуютCH2 и СН винильной группы, соответственно. Кроме сигнала резонанcной абсорбции при 196,72 (СН), других сигналов, соответствующих СНО-группе, в спектре не наблюдается. Спектр соотвествует полиакролеину, состоящему из сопряженных тетрагидропирановых циклов и некоторого количества свободных дигидроксиметильных групп. Циклы принимают либо конформацию кресла, либо конформацию ванны, что приводит к наличию в спектре большего количества химических сдвигов, чем можно было бы ожидать. Было показано, что полиакролеин характеризуется меньшим временем удерживания, как показателя величины молекулярной массы полимера, по сравнению с полиэтиленгликолем 2000. Молекулярную массу полимеров определяли по времени удерживания с использованием колонки Porasil GPC 60 Angstrom на жидкостном хроматографе Waters Associated ModelALC/GPC 204, оборудованным дифференциальным рефрактометром R401.(б) Использование ионного инициатора/катализатора. 1,6 г Перегнанного акролеина помещают в химический стакан объемом 200 мл и добавляют деионизированную воду до 20 мл, а затем добавляют, примерно, 0,5 мл 0,2 М раствора гидроксида натрия при перемешивании до рН около 10-11. Раствор мутнеет и выпадает белый осадок. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и фильтруют. Осадок тщательно промывают деионизированной водой до нейтрального значения рН фильтрата. Продукт можно осторожно высушить при нагревании на воздухе, сначала при комнатной температуре с последующим повышением температуры до,приблизительно, 1005 С. В качестве альтернативы, как в данном случае, продукт может быть высушен в вакууме с образованием мелкодисперсного порошка бело-желтого цвета; затем порошок растворен в метаноле и упарен досуха и затем снова растворен в метаноле или других растворителях. Как правило, содержание карбоксильных групп в полимере согласно изобретению составляет 0,1-5 молей/кг, времена удерживания, определенные методом ГПХ, в основном меньше времени удерживания полиэтиленгликоля 2000.(СН). В дальнейших опытах в каждом случае использовали швейцарских белых мышей, две группы по 10 особей (обработанные и контрольные, соответственно). Было показано, что растворы полимеров согласно изобретению в водном триэтаноламине с рН 8 проявляют острую внутривенную токсичность в дозе 320 мг/кг и острую оральную токсичность в дозе более 5000 мг/кг (при этом в течение 14 дней не наблюдается летальных исходов или аномальных симптомов). Пример 2. 6,489 г Перегнанной акриловой кислоты, 0,56 г перегнанного акролеина и 15 г метанола загружают в круглодонную колбу объемом 50 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,33 г перекиси бензоила и реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота при 60-65 С. Реакцию проводят в течение около 66 ч, после чего содержимое колбы становится очень вязким, содержание твердых веществ составляет 57,7% (соответствует 100% конверсии). Вязкий продукт переносят в чашку Петри и высушивают на горячей пластине для удаления растворителя. Высушивание завершают в сушильном шкафу при 80 С и получают прозрачный полимер светло-желтого цвета. Сополимер полностью растворим в теплой воде(приблизительно 50 С) и после этого остается растворенным даже при охлаждении раствора. Чтобы убедиться в том, что твердый продукт является полимером, был проведен простой опыт с диализом: 10 г водного раствора,содержащего 0,65% твердого продукта, помещают в диализную трубку и орошают проточной водой в течение приблизительно 66 ч. Раствор извлекают из диализной трубки и определяют содержание твердого вещества как равное 0,68%. На основании полученных данных был сделан вывод, что твердый материал является полимером, так как весь твердый материал остается в диализной трубке, а нижний предел проникновения твердого вещества через диализную трубку составляет 2000 mwt. Пример 3. 2,8 г Диэтилацетальакролеина загружают в круглодонную колбу объемом 100 мл и содержимое продувают азотом. Затем добавляют раствор 0,216 г персульфата калия в 7,5 г воды при перемешивании в атмосфере азота. Колбу погружают в масляную баню, нагретую до 60-70 С, и реакционную смесь перемешивают в течение приблизительно 20 ч. После выделения осадка желтого цвета и высушивания при 50 С получают 0,915 г продукта. Пример 4. 4 г Перегнанной акриловой кислоты, 4,81 г диэтилацетальакролеина и 15 г метанола помещают в круглодонную колбу объемом 50 мл и продувают азотом. Затем добав 13 12 ляют 0,3 г перекиси бензоила и продолжают перемешивание в атмосфере азота при 60-65 С в течение 70 ч (содержание твердых веществ соответствует 50% конверсии). 13 С-ЯМР (300 МГц) (относительно d4 метанола при 49,00): 15,58 (СН 3); 18,31 (СН 3); 35,52 (СH2); 36,24 (CH2); 37,07 (CH2); 42,36(СН); 42,85 (СН); 58,32 (CH2); 130,00 (СН); 131,57(СН 2); 178,51 (СН). Пример 5. 3,8 г Диэтилацетальакролеина,3,3 г винилпирролидона и 19 г метанола загружают в круглодонную колбу объемом 50 мл и тщательно продувают азотом. Затем добавляют 0,71 г азобисизобутиронитрила, и колбу нагревают на масляной бане при 60-65 С при перемешивании в атмосфере азота в течение 72 ч. Конверсия составляет 44%. Сополимер растворим в метаноле. Пример 6. Аналогично вышеописанным примерам, 3,9 г диэтилацетальакролеина, 1,16 г акриловой кислоты, 7,5 мл воды и 0,216 г персульфата калия нагревают в атмосфере азота при перемешивании на масляной бане при 6070 С в течение, приблизительно, 24 ч, после чего выделяют воскообразный продукт белого цвета, который нерастворим в воде, но набухает в метаноле, ацетоне, тетрагидрофуране или метилэтилкетоне. Пример 7. Аналогичные результаты получают путем нагревания и перемешивания в описанных выше условиях реакционной смеси следующего состава: 14,5 г метанола, 3,62 г перегнанного акролеина, 1,21 г перегнанной акриловой кислоты и 0,265 г перекиси бензоила. Через 40 ч конверсия составляет 40%. Примеры 8-11. Смесь мономеров 50:50 обрабатывают следующим образом: 2,35 г перегнанного акролеина, 2,88 г перегнанной акриловой кислоты и 14,5 г метанола загружают в круглодонную колбу объемом 50 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,2625 г перекиси бензоила и после нагревания при 60-70 С в течение 48 ч конверсия составляет 70%. Полимер набухает в метаноле, но не растворим в воде. Аналогичные продукты получают при различном соотношении мономеров, а именно, акролеин:акриловая кислота - 30:70 (пример 9),10:90 (пример 10), 2,5:97,5 (пример 11). Продукты, полученные согласно примерам 10 и 11, растворимы в воде и остаются в диализной трубке после диализа (нижний предел удерживания мембраны 2000 mwt). Пример 12. Аналогичный продукт получают в описанных выше условиях из реакционной смеси следующего состава: 1,8 г акролеина,3,3 г винилпирролидона и 0,071 г азобисизобутиронитрила. Конверсия - 42%. Полимер набухает в метаноле или воде. Пример 13. К раствору 1,02 г полиэтиленгликольакрилата и 0,5 мл акролеина в 5 мл метанола добавляют 30 мг перекиси бензоила. Смесь перемешивают и кипятят с обратным холодиль 13 ником в течение 48 ч, конверсия - 90%. Маслообразный остаток (1,2 г) подвергают хроматографии на Sephadex LH-20 (18 г) в метаноле. Структуру полученного полимера устанавливают методом ЯМР. Пример 14. Молодых взрослых самок мышей прививают внутрибрюшинно асцитными опухолевыми клетками Эрлиха (2,3 х 10560) и через одну неделю отбирают мышей с набухшей брюшной полостью для дальнейших опытов: 15 таких мышей подвергают 2 раза в день в течение 3 дней и 1 раз в день в течение следующих 3 дней внутрибрюшинным инъекциям полимеров согласно изобретению в 0,5% водном растворе карбоната натрия дозой 100 мг/кг мыши; контрольную группу мышей, включающую 15 особей с асцитной опухолью Эрлиха, подвергают только инъекции раствора карбоната натрия. Затем мышей обеих групп умерщвляют, собирают брюшинную жидкость и подсчитывают число опухолевых клеток: Контрольная группа Номер Число перитональмыши ных клеток х 109 1 2,30 2 3,55 3 2,13 4 0,05 5 2,55 6 2,27 7 2,93 8 1,93 9 2,34 10 5,58 11 2,23 12 1,65 13 4,76 14 2,01 15 3,36 х = 2,64 Обработанная группа Номер Число перитональмыши ных клеток х 109 16 0,97 17 0,54 18 0,14 19 0,06 20 0,11 21 0,07 22 0,27 23 0,93 24 0,36 25 1,04 26 0,12 27 0,64 28 0,16 29 0,67 30 0,54 х = 0,44 Результаты анализа с использованием tкритерия показали, что различие между средними величинами, полученными для контрольной и обработанной групп, отличаются с достоверностью более 99%. Пример 15. Полимеры согласно изобретению суспендируют/растворяют в питьевой воде для поросят. В течение первых 2-3 дней концентрация полимеров в питьевой воде составляет 0,1% (мас./об.); а затем в течение следующих 7 дней - 0,05% (мас./об.). Питьевая вода постоянно доступна (ad libitum) для поросят. Поглощение полимеров согласно изобретению при питье поросят составляет, приблизительно, 200 мг/кг веса животного/день. Исследуют три группы 28-дневных, только что отнятых от грудного вскармливания поросят, (средний вес 5,6 кг) при лечении: 1. Только полимеры согласно изобретению; 2. Только в соответствии с известной схемой вакцинации; 14 3. Без лечения (контрольная группа). В течение 14 дней опыта поросят выдерживают в обычной обстановке на ферме, причем, если при ежедневном осмотре обнаруживают особи с диареей, то этим животным делают инъекции антибиотика. Лечение Лечение только потолько лимером по вакциизобретению нацией Число 28-дневных поросят в группе Продолжительность диареи в днях (средняя величина/особь) Число инъекций антибиотика (средняя величина/особь) Число особей с высокой численностью Пример 16. В типичном низкомасштабном опыте полимеры согласно изобретению (35 г) растворяют при перемешивании в воде (638 г),содержащей карбонат натрия (19 г), и затем раствор немедленно нейтрализуют до рН 7,2 10%ным раствором соляной кислоты. Добавляют дискретно сахарозу (32 г, подсластитель) при постоянном перемешивании, а затем добавляют либо абсорбирующий полимер акриловой кислоты (64 г; CARBOROL 934, B.F. Goodrich,США), либо абсорбирующий сополимер акриламида и акриловой кислоты (64 г; ALCOSORBAB 3S, Allied Colloids, Англия). Полученные набухшие бисерные частицы приобретают светло-желтый цвет, свойственный раствору полимеры. Бисерные частицы/гранулы можно использовать во влажной форме, но обычно перед использованием их высушивают либо частично, либо полностью при температуре до 45 С. Однако можно сушить при более высокой температуре до 90-100 С. Теоретически, исходя из твердых добавок, полученные гранулы содержат 25% (мас./мас.) полимера согласно изобретению по отношению к добавленным твердым веществам. Для оценки степени высвобождения полимеров при рН, соотвествующим рН среды желудка и двенадцатиперстной кишки, проводят два опыта. Во-первых, полученные как указано выше, полностью высушенные бисерные частицы (200 мг) осторожно перемешивают в 0,1 М растворе соляной кислоты (100 мл). Аликвоты(10 мл) отбирают периодически и разбавляют избытком 0,2 М водного раствора бикарбоната натрия. Максимальное высвобождение полимеров в 0,1 М растворе соляной кислоты, определенное по высоте пика поглощения при 265 нм, 15 составляет, приблизительно, 35% через, приблизительно, 45 мин. Во-вторых, напротив, результаты сравнительного опыта при перемешивании в 0,1 М водном растворе бикарбоната натрия свидетельствуют о том, что высвобождение составляет 35% через, приблизительно, 20 мин и 90-100% через 3-5 ч. На эти свойства шариков не влияет нагревание, которое может использоваться в коммерческом производстве кормов для снижения содержания микроорганизмов(90 С/30 мин). Пример 17. В первом опыте двум группам(каждая по 10 особей) 21-дневных поросят с ферм, отнятых от грудного вскармливания, вводили перорально дозу гемолитических бактерийE.coli (50 мл; 109 КОЕ/мл), полученных из изолятов, выделенных из животных, больных колибактериозом. В этот же день одна группа получала ad libitum корм, содержащий 19% белковых компонентов и 3,75% (мас./мас.) распыленных на корм полностью высушенных бисерных частиц/гранул. Теоретически, содержание полимеров согласно изобретению в гранулах составляло, приблизительно, 25% (мас./мас.). Далее,группа "без лечения" получала только корм. Каждый поросенок съедал, приблизительно, 500 г корма в день. Мазки ректальных фекалий берут в исходный момент и через 48 ч после инфицирования Е.соli. Через три дня (в течение которых два поросенка из группы без лечения погибли от острой секреторной диареи) всех оставшихся поросят умерщвляли и определяли численность Е.соli в кусочках ткани двенадцатиперстной кишки полуколичественным методом, обычно используемым в микробиологии. После соскобов слизистой оболочки подсчет колоний проводят на чашках, которые засеивали предварительно разведенными образцами, причем оценку результатов проводят по условной шкале от 0 (самое низкое разведение) до 4 (самое большое разведение). После вскрытия не обнаружено ни одного случая воспаления слизистой оболочки желудка. В ниже следующей таблице приведены результаты оценки численности гемолитических бактерий Е.соli в ректальных фекалиях поросят в двух группах в день инфицирования и через 48 ч. Исходный момент Обработка с Без лечения лечением 1 2 0 0 1 1 1 0 0 1 0 2 0 1 1 1 0 0 0 0 Итого: 4 8 Через 48 ч Обработка с Без лечения лечением 1 0 3 1 4 2 4 0 3 1 2 1 1 1 4 0 4 2 2 2 28 10E.coli в фекалиях поросят, получавших полимеры согласно изобретению, значительно ниже по сравнению с животными без лечения (Х 2=16,24; р=0,001). Кроме того, определяют распределение гемолитических бактерий E.coli в верхней (25%) и в средней (50%) части тощей кишки животных У животных с лечением наблюдается значительное снижение численности гемолитических бактерий E.coli как в верхней части (25%)(Х 2=7,38; р 0,01), так и в средней части (50%) тощей кишки (Х 2=16,24; р 0,001). Другой опыт проводили в аналогичных условиях за исключением того, что в каждую группу включают по 15 особей поросят, только что отнятых от грудного вскармливания. Дозу для исходного инфицирования бактериями Е.соli снижают до 1/3 от указанной выше, гранулы прологированного действия содержали 20% (маc./маc.) полимера согласно изобретению. В течение 21 дня регистрируют прирост в весе и продолжительность диареи в днях у животных. Полученные статистически достоверные результаты свидетельствуют о том, что после лечения животных наблюдается значительное снижение продолжительности диареи и увеличение прироста в весе по сравнению с контрольной группой. Прирост в живом весе и продолжительность диареи в днях Группа Контрольная Обработанная Число 15 15 Средний исходный вес (кг),4,77 4,43 1-ый день Стандартная ошибка 0,22 0,19 Относительная величина (%) 100,00 92,00 Средний конечный вес (кг),6,63 7,31 21 -ый день Стандартная ошибка 0,35 0,36 Относительная величина (%) 100,00 110,30 Средний прирост в весе в 94,18 137,33 день (г), 0 - 21 дней Стандартная ошибка 10,27 13,16 Относительная величина 100,00 146,00(%) Продолжительность диареи в 32 13 дняхt=2,47; p=0,02 (двухфазный анализ)Ни одного случая диареи через 10 дней 5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что инфекция вызвана пролиферацией бактерий Helicobactor pylori. 6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что инфекция вызвана пролиферацией бактерий Staphylococcus aureus. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что антимикробное вещество вводят собакам, свиньям, овцам, лошадям, крупному рогатому скоту или кошкам. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что антимикробное вещество вводят свиньям. 9. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что антимикробное вещество вводят домашней птице, уткам, индюкам, перепелам или фазанам. 10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что антимикробное вещество частично или полностью включают в систему регулируемого высвобождения. 11. Способ по п.10, отличающийся тем, что названная система регулируемого высвобождения является рН-чувствительной. 12. Способ по одному из пп.10 или 11, отличающийся тем, что в качестве системы регулируемого высвобождения используют систему на основе нерастворимых, поперечно-сшитых полимеров и/или сополимеров акриловой кислоты или полимеров и/или сополимеров акриловой кислоты и акриламида. 13. Способ по любому из пп.10-12, отличающийся тем, что система регулируемого высвобождения является поперечно-сшитой и/или является абсорбентом и во влажном состоянии образует гель. 14. Способ по любому из пп.10-13, отличающийся тем, что систему регулируемого высвобождения нагревают для ее стерилизации. 15. Антибактериальная композиция для перорального введения человеку, животному или птице, пораженного заболеванием желудочно-кишечного тракта, желудочно-кишечной инфекцией или диареей, вызванных инфекцией желудочно-кишечного тракта, отличающаяся тем, что она включает антимикробное вещество,содержащее полимер или сополимер с молекулярной массой, по меньшей мере, 1000, имеющий повторяющееся звено формулы где n 1 и R - Н или С 1-С 4 алкил. 3. Способ по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что инфекция является микробной инфекцией. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что инфекция является колибактериозом и/или вызвана пролиферацией бактерий Escherichia соli. где R - Н или С 1-C4 алкил, или указанное звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, причем полимер или сополимер содержит карбоксильные группы в количестве от 0,1 до 5 молей на 1 кг массы полимера или сополимера, и фармацевтически или ветеринарно приемлемый носитель, подходящий для перорального введения.Drug Delivery", Marcell Dekker, 1987. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ лечения или профилактики человека, животного или птицы, пораженного заболеванием желудочно-кишечного тракта, желудочно-кишечной инфекцией или диареей, вызванной инфекцией желудочно-кишечного тракта, отличающийся тем, что перорально вводят названным человеку, животному или птице антимикробно эффективное количество антимикробного вещества, содержащего полимер или сополимер с молекулярной массой, по меньшей мере, 1000, имеющий повторяющееся звено формулы где R - Н или С 1-С 4 алкил, или указанное звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, причем полимер или сополимер содержит карбоксильные группы в количестве от 0,1 до 5 молей на 1 кг массы полимера или сополимера. 2. Способ по одному из пп.1 или 2, отличающийся тем, что полимер или сополимер включает одно или несколько повторяющихся звеньев, выбранных из группы, структуры которых представлены следующими формулами: 16. Композиция по п.15, отличающаяся тем, что носитель включает систему регулируемого высвобождения. 17. Композиция по п.16, отличающаяся тем, что система регулируемого высвобождения включает внешнюю полимерную матрицу из нерастворимого поперечно-сшитого абсорбирующего полимера, имеющего ионные группы. 18. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что абсорбирующий полимер внешней полимерной матрицы представлен акриловой кислотой и/или сополимерами акриламида и акриловой кислоты. 19. Способ получения композиции по одному из пп.17 или 18, отличающийся тем, что добавляют внешнюю полимерную матрицу к раствору, и/или суспензии, и/или эмульсии антимикробного вещества. 20 20. Способ по п.18, отличающийся тем, что в процессе добавления полимерной матрицы к раствору, и/или суcпензии, и/или эмульсии антимикробного вещества растворяют антимикробное вещество в водном растворе щелочи или основания, нейтрализуют полученный раствор кислотой, добавляют к нейтрализованному раствору нерастворимые, поперечно-сшитые абсорбирующие полимеры акриловой кислоты и/или сополимеры акриламида и акриловой кислоты с образованием влажных набухших гранул. 21. Способ по одному из пп.19 или 20, отличающийся тем, что далее композицию высушивают, по крайней мере, частично или полностью. 22. Пища для человека или корм для животных или птиц, отличающаяся тем, что содержит композицию по одному из пп.17 или 18.

МПК / Метки

МПК: A61K 31/765, C08L 29/14

Метки: диареи, перорального, введения, инфекции, птиц, тракта, пища, человека, получения, способ, корм, антимикробная, композиция, заболевания, лечения, желудочно-кишечного, животных

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/11-2771-sposob-lecheniya-zabolevaniya-zheludochno-kishechnogo-trakta-i-ili-infekcii-zheludochno-kishechnogo-trakta-i-ili-diarei-antimikrobnaya-kompoziciya-dlya-peroralnogo-vvedeniya-i-spos.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способ лечения заболевания желудочно-кишечного тракта и/или инфекции желудочно-кишечного тракта, и/или диареи, антимикробная композиция для перорального введения и способ ее получения, пища для человека или корм для животных или птиц</a>

Похожие патенты