Пероральные композиции с контролируемым высвобождением левозимендана

1 Область техники Настоящее изобретение относится к пероральным фармацевтическим композициям, которые контролируемо высвобождают левозимендан, со сниженной частотой развития нежелательных эффектов. Левозимендан, или (-)-4(1,4,5,6-тетрагидро-4-метил-6-оксо-3-пиридазинил)фенил]гидразоно]пропандинитрил, применим для лечения застойной сердечной недостаточности. Предпосылки изобретения Левозимендан, который представляет (-)-энантиомер 4-(1,4,5,6-тетрагидро-4-метил-6-оксо-3-пиридазинил)фенил]гидразоно]пропандинитрила,и способ его получения описаны в европейском патенте 565546 В 1. Левозимендан эффективен при лечении сердечной недостаточности и характеризуется сильным кальцийзависимым связыванием с тропонином. Левозимендан представлен формулой Влияние левозимендана на кровообращение у человека описано в Sundberg, S. et al., Am.J. Cardiol., 1995; 75: 1061-1066. Фармакокинетика левозимендана после внутривенного и перорального введения человеку описана в Sandell,E.-P. et al., J. Cardiovasc. Pharmacol., 26 (Suppl. 1),S57-S62, 1995. Применение левозимендана для лечения ишемии миокарда описано в WO 93/21921. Клинические исследования подтвердили положительное действие левозимендана у больных сердечной недостаточностью. Известно, что пероральное введение левозимендана сопряжено с трудностями, особенно если целью является создание терапевтического эффекта в течение продолжительного периода времени. Во-первых, время полувыведения левозимендана из организма человека мало, приблизительно 1 ч. Следовательно, при использовании традиционных пероральных композиций немедленного высвобождения левозимендан приходится принимать часто в течение дня. Вовторых, левозимендан характеризуется быстрым всасыванием из желудочно-кишечного тракта. Следовательно, при использовании традиционных пероральных композиций немедленного высвобождения в плазме быстро и резко достигаются максимальные концентрации левозимендана, как правило, в течение 1 ч. Высокие концентрации левозимендана в плазме способствуют увеличению частоты сердечных сокращений, что является нежелательным эффектом для больных сердечной недостаточностью. Пероральные композиции длительного действия дают множество преимуществ по сравнению с традиционными пероральными композициями быстрого высвобождения. Таки 002829 2 ми преимуществами являются меньшие перепады концентрации лекарственного средства в плазме и, как результат, устойчивый терапевтический эффект, сниженная частота введения и уменьшение побочных эффектов. Как правило,композиции длительного действия готовят путем смешивания лекарственного средства, средства, контролирующего высвобождение, и возможных наполнителей и прессования смеси в матриксные таблетки. Типичные композиции длительного действия высвобождают лекарственное средство как в верхних, так и в нижних отделах желудочно-кишечного тракта. Попытки вводить левозимендан в виде традиционных препаратов длительного действия были неудовлетворительными. При введении левозимендана в виде препаратов длительного действия, которые традиционно используются в данной области для оказания терапевтического эффекта в течение продолжительного периода времени, часто наблюдаются нежелательные эффекты, такие как сильная головная боль, учащенное сердцебиение и повышенная частота сердечных сокращений. Таким образом,существует потребность в новых способах и композициях для перорального введения левозимендана, в частности в способах и композициях, которые обеспечивают терапевтический эффект левозимендана в течение продолжительного периода времени и которые позволяют избежать недостатков, присущих традиционным препаратам левозимендана длительного действия. Сущность изобретения Было выяснено, что в нижних отделах желудочно-кишечного тракта, в частности в толстом кишечнике, левозимендан подвергается метаболизму бактериями, заселяющими кишечник. Данный метаболический путь в итоге приводит к образованию активного метаболита, (R)N-[4-(1,4,5,6-тетрагидро-4-метил-6-оксо-3-пиридазинил)фенил]ацетамида (II), характеризующегося существенно большим временем полувыведения, чем таковое левозимендана. Было установлено, что накопление активного метаболита являлось причиной развития нежелательных эффектов, связанных с препаратами левозимендана длительного действия. Обнаружение активного метаболита и пути его образования сделало возможным разработку препаратов контролируемого высвобождения, которые демонстрируют меньшую частоту развития нежелательных эффектов и которые хорошо подходят для лечения больных сердечной недостаточностью. Таким образом, целью настоящего изобретения является обеспечение пероральных композиций, в частности композиций, которые обеспечивают терапевтический эффект в течение продолжительного периода времени, из которых левозимендан высвобождается постепенно и предпочтительно, по существу, полностью 3 до того, как достигнет нижних отделов желудочно-кишечного тракта, в частности толстого кишечника, таким образом, что образование активного метаболита остается на низком уровне. Таким образом, концентрация активного метаболита в плазме пациента остается на достаточно низком уровне, чтобы избежать нежелательных эффектов, вызываемых накоплением активного метаболита, в то время как терапевтический эффект будет оказываться в течение продолжительного периода времени. Краткое описание рисунков На фиг. 1 показан анализ калибровочного образца, взятого у добровольца, на предмет содержания активного метаболита (II) по данным жидкостной хроматографии - тандемной массспектрометрии. На фиг. 2 показан анализ образца плазмы,взятого у добровольца после введения, на предмет содержания активного метаболита (II) по данным жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии. На фиг. 3 показана кривая растворения invitro композиции 1 из примера 1 в фосфатном буфере рН 5,8. На фиг. 4 показана кривая растворения invitro композиции 2 из примера 1 в фосфатном буфере рН 5,8. На фиг. 5 показана кривая растворения invitro композиции 3 из примера 1 в фосфатном буфере рН 5,8. На фиг. 6 показана кривая растворения invitro ссылочной композиции из примера 3 в фосфатном буфере рН 5,8. Подробное описание Настоящее изобретение относится к пероральной системе доставки левозимендана, усовершенствованной по сравнению с традиционными препаратами немедленного высвобождения и длительного действия. Преимущества включают: меньшее максимальное содержание левозимендана в плазме, что, следовательно, снижает частоту развития нежелательных эффектов вследствие высокого содержания левозимендана, таких как повышенная частота сердечных сокращений; сниженная частота введения и сниженное накопление активного метаболита (II), что подразумевает лучшую переносимость данного лекарственного средства, т.е. меньшую частоту развития нежелательных эффектов, вызываемых активным метаболитом,таких как сильная головная боль, учащенное сердцебиение и повышенная частота сердечных сокращений. Содержание метаболита (II) в плазме хорошо коррелирует с частотой развития нежелательных эффектов, таких как сильная головная боль, учащенное сердцебиение и повышенная частота сердечных сокращений. При оптималь 002829 4 ной терапии левозименданом больных сердечной недостаточностью постоянное содержание метаболита (II) в плазме должно быть менее 20 нг/мл, предпочтительно менее 10 нг/мл. Преимущества достигаются в соответствии с настоящим изобретением с помощью композиции контролируемого высвобождения, содержащей а) терапевтически эффективное количество левозимендана и б) компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, предназначенный для обеспечения высвобождения левозимендана в организме пациента в течение продолжительного периода времени и постоянного содержания метаболита (II) в плазме менее 20 нг/мл, предпочтительно менее 10 нг/мл. Термин "продолжительный период времени" означает, по крайней мере, свыше 1 ч, предпочтительно, по крайней мере, свыше 2 ч после введения. Термин "постоянное содержание метаболита (II)", употребленный выше, относится к среднему значению среди группы пациентов. Предпочтительно термин "компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства" относится, как правило, к различным технологиям, которые могут быть применены для контролирования и продления высвобождения левозимендана по настоящему изобретению. Такие технологии включают матриксные препаративные формы (матриксные таблетки,гранулы или пилюли) или препаративные формы с покрытием (например, таблетки, гранулы или пилюли с покрытием или микрокапсулы). Компоненты, контролирующие высвобождение лекарственного средства, такие как матриксные или покрывающие материалы, хорошо известны в данной области. Выбор данных материалов и их количеств зависит от желаемого профиля высвобождения и является обычным для специалиста в данной области. В качестве компонента, контролирующего высвобождение лекарственного средства, могут быть применены любые материалы, контролирующие высвобождение, например матриксные или покрывающие материалы или их сочетания, которые применимы для достижения профиля высвобождения по настоящему изобретению. Типичные компоненты, контролирующие высвобождение, применимые по настоящему изобретению, включают, не ограничиваясь, полимеры, образующие гидрофильные гели, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза,гидроксипропилцеллюлоза,карбоксиметилцеллюлозы, альгиновая кислота или их смесь; растительные жиры и масла,включая растительные твердые масла, такие как гидрированное соевое масло, загущенное касторовое масло или масло касторового семени(продаваемое под торговым наименованием Cutina НR), масло хлопкового семени (продаваемое под торговыми наименованиями Sterotex иLubritab) или их смесь; эфиры жирных кислот,такие как триглицериды насыщенных жирных кислот или их смеси, например глицерилтри 5 стеараты, глицерилтрипальмитаты, глицерилтримиристаты, глицерилтрибегенаты (продаваемые под торговым наименованием Compritol) и эфир глицерилпальмитостеариновой кислоты. В соответствии с настоящим изобретением можно также применять композиции, предназначенные для продолжительного времени нахождения в верхних отделах желудочнокишечного тракта, например в желудке. Это снижает риск метаболизма левозимендана в толстом кишечнике и последующего образования активного метаболита (II). Преимуществом таких композиций, например плавающих или плавучих композиций, является то, что им может быть задано значительно большее суммарное время высвобождения, поскольку достижение нижних отделов желудочно-кишечного тракта у них занимает значительно больше времени. Композиции, характеризующиеся продолжительным временем нахождения в желудке, описаны, например, в патентах США 4126672,4814178, 4777033, 5232704 и европейском патенте 539059. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением может быть применена любая композиция с контролируемым/продолжительным высвобождением левозимендана, которая обеспечивает постоянное содержание метаболита (II) в плазме менее 20 нг/мл, предпочтительно менее 10 нг/мл. Постоянное содержание метаболита (II) в плазме может быть измерено для любой композиции путем введения композиции левозимендана добровольцу или группе добровольцев один или несколько раз в сутки в течение нескольких суток до тех пор, пока не установится постоянное содержание метаболита (II) в плазме. Содержание активного метаболита (II) в плазме может быть, кроме того, измерено в соответствии с методикой, подробно описанной в примере 2. Одним аспектом настоящего изобретения является композиция с контролируемым высвобождением левозимендана для перорального введения, которая характеризуется своим профилем растворения in vitro. В частности, настоящее изобретение относится к композиции контролируемого высвобождения для перорального введения, содержащей а) терапевтически эффективное количество левозимендана и б) компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, предназначенный для обеспечения высвобождения левозимендана в организме пациента в течение продолжительного периода времени, причем указанная композиция способна показывать суммарное время растворения in vitro, определенное в соответствии с basket assembly methodUSP XXII в фосфатном буфере рН 5,8 (при 50 и 100 об/мин), по существу, от 1 до 4 ч, по крайней мере, на 90% содержания левозимендана. 6 Более предпочтительно, композиция по настоящему изобретению характеризуется суммарным временем растворения in vitro, no существу, от 1 до 3 ч, по крайней мере, на 90% содержания левозимендана. Компонент или компоненты, контролирующие высвобождение лекарственного средства, могут быть выбраны, как описано выше. Типичные компоненты, контролирующие высвобождение, включают, не ограничиваясь, полимеры, образующие гидрофильные гели, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза,карбоксиметилцеллюлозы,альгиновая кислота или их смесь; растительные жиры или масла или эфиры жирных кислот,такие как гидрированное соевое масло, загущенное касторовое масло или глицерилпальмитостеарат. Способ определения профиля растворения композиций по настоящему изобретению in vitro описан в примере 3. Композиция по настоящему изобретению может находиться, например, в форме таблетки,капсулы, гранул или порошка. Особенно предпочтительное осуществление настоящего изобретения достигается путем объединения части быстрого высвобождения,содержащей левозимендан необязательно в сочетании с наполнителем, с частью контролируемого высвобождения, содержащей левозимендан и компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства. Компонент,контролирующий высвобождение лекарственного средства, может быть выбран, как описано выше, но предпочтительно представляет собой полимер, образующий гидрофильный гель. Особенно предпочтительной является композиция,включающая (а) часть быстрого высвобождения в форме порошка, содержащего левозимендан в сочетании, по крайней мере, с одним наполнителем, и (б) часть контролируемого высвобождения в форме гранул, содержащих левозимендан и контролирующий высвобождение полимер, образующий гидрофильный гель. Часть быстрого высвобождения в форме порошка и часть контролируемого высвобождения в форме гранул предпочтительно находятся в составе свободно текущей смеси, которой могут быть заполнены капсулы, такие как желатиновые капсулы и капсулы из ГПМЦ. Особенно предпочтительная композиция по настоящему изобретению содержит 0,0520%, предпочтительно 0,1-10%, более предпочтительно 0,2-3% левозимендана от массы композиции. Доза лекарственного средства разделена между частями быстрого высвобождения и контролируемого высвобождения. Как правило,приблизительно 25-75%, предпочтительно приблизительно 30-70%, более предпочтительно приблизительно 40-60% лекарственного средства по массе находится в части контролируемого высвобождения. 7 Как правило, суточная доза левозимендана у человека при пероральном применении составляет приблизительно 0,1-20 мг, обычно приблизительно 0,5-10 мг, в виде однократной суточной дозы или разделенной на несколько доз в сутки. Дозировка зависит, например, от возраста, массы тела и состояния пациента. Композиция предпочтительного осуществления включает приблизительно 0,1-5 мг, обычно 0,2-2 мг левозимендана, поделенного между частями быстрого высвобождения и контролируемого высвобождения. Предпочтительное максимальное постоянное содержание левозимендана в плазме для лечения застойной сердечной недостаточности составляет в пределах от приблизительно 1 до приблизительно 100 нг/мл, более предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 60 нг/мл, и наиболее предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 50 нг/мл. Подходящим наполнителем для части быстрого высвобождения является такой наполнитель, как микрокристаллическая целлюлоза или лактоза. Микрокристаллическая целлюлоза является предпочтительным наполнителем и доступна в различных видах, таких как AvicelPH101, Avicel PH102 или Avicel PH-200. Количество наполнителей в части быстрого высвобождения составляет приблизительно 20-70%,предпочтительно приблизительно 30-60% от массы композиции. К части быстрого высвобождения может быть добавлено подходящее смазывающее вещество, такое как стеариновая кислота или стеарат магния. Стеариновая кислота является предпочтительным смазывающим веществом. Контролирующие высвобождение полимеры, образующие гидрофильные гели, включают,не ограничиваясь, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозы, альгиновую кислоту или их смесь. Предпочтительной является смесь альгиновой кислоты с другим полимером, образующим гидрофильный гель, в частности, смесь альгиновой кислоты с гидроксипропилметилцеллюлозой. Коммерчески доступна гидроксипропилметилцеллюлоза различных типов, например, Methocel K100 (м.м. 26000 г/моль),Methocel K4M (м.м. 86000 г/моль), Methocel К 15 М (м.м. 120000 г/моль) и Methocel K100M. Вязкость данных типов в 2% водном растворе(20 С) составляет 100, 4000, 15000 и 100000 сПз соответственно. Предпочтительной является гидроксипропилметилцеллюлоза с вязкостью 502000 сПз. Methocel K100 является предпочтительным типом гидроксипропилметилцеллюлозы. К части контролируемого высвобождения может быть добавлено подходящее смазывающее вещество, такое как стеариновая кислота или стеарат магния. Стеариновая кислота является предпочтительным смазывающим веществом. 8 Количество полимера, образующего гидрофильный гель, в особенно предпочтительном осуществлении настоящего изобретения составляет приблизительно 20-80%, предпочтительно 30-70% от массы композиции. Предпочтительно полимер, образующий гидрофильный гель,представляет собой смесь альгиновой кислоты с гидроксипропилметилцеллюлозой. Подходящее количество альгиновой кислоты составляет приблизительно 10-50%, предпочтительно 2040% от общей массы полимера, образующего гидрофильный гель. Количество части быстрого высвобождения в особенно предпочтительном осуществлении настоящего изобретения составляет приблизительно 20-80%, предпочтительно приблизительно 30-70%, более предпочтительно приблизительно 40-60% от массы композиции. Количество смазывающего вещества, если таковое присутствует, составляет приблизительно 0,310%, более предпочтительно приблизительно 0,5-5% от массы композиции. Другое предпочтительное осуществление настоящего изобретения достигается путем смешивания компонента, контролирующего высвобождение лекарственного средства, левозимендана и наполнителей, например всех в порошкообразной форме, и заполнения указанной смесью капсул, таких как желатиновая капсула или капсула из ГПМЦ. Компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, может быть выбран, как описано выше, но предпочтительно представляет собой полимер, образующий гидрофильный гель, который в данном осуществлении применяют в количестве приблизительно 10-70%, предпочтительно приблизительно 15-60%, наиболее предпочтительно приблизительно 20-40% от массы композиции. Контролирующие высвобождение полимеры, образующие гидрофильные гели,включают, не ограничиваясь, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозы, альгиновую кислоту или их смесь. Наиболее предпочтительным компонентом, контролирующим высвобождение лекарственного средства, является гидроксипропилметилцеллюлоза и особенно гидроксипропилметилцеллюлоза, обладающая вязкостью 502000 сПз, такая как Methocel К 100, и альгиновая кислота или их смесь. Подходящее количество наполнителя (например, микрокристаллической целлюлозы или лактозы), применяемое в данном осуществлении, составляет приблизительно 30-90%, предпочтительно приблизительно 4080%, наиболее предпочтительно приблизительно 50-70% от массы композиции. Левозимендан применяют в количестве, описанном применительно к предыдущему предпочтительному осуществлению. Еще одно предпочтительное осуществление настоящего изобретения находится в форме матриксной таблетки, которую получают путем 9 смешивания компонента, контролирующего высвобождение лекарственного средства, левозимендана и наполнителей, таких как микрокристаллическая целлюлоза, лактоза и/или стеариновая кислота, и прессования смеси в матриксные таблетки с помощью подходящей таблетировочной машины. Опять же, компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, может быть выбран, как описано выше. Предпочтительно компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства,представляет полимер, образующий гидрофильный гель, или растительный жир, или масло,или эфир жирной кислоты, как описано выше. В данном осуществлении компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, применяют в количестве приблизительно 0,5-60% от массы композиции, а подходящее применяемое количество наполнителя (например, микрокристаллической целлюлозы) составляет приблизительно 30-99% от массы композиции. Если компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, представляет собой полимер, образующий гидрофильный гель, например гидроксипропилметилцеллюлозу и предпочтительно гидроксипропилметилцеллюлозу, обладающую вязкостью 50-2000 сПз,такую как Methocel K100, и альгиновую кислоту или их смесь, то компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, применяют в количестве приблизительно 5-60%,предпочтительно приблизительно 10-50%, наиболее предпочтительно приблизительно 15-40% от массы композиции, а подходящее количество наполнителя (например, микрокристаллической целлюлозы) составляет приблизительно 30-95%,предпочтительно приблизительно 50-90%, наиболее предпочтительно приблизительно 60-85% от массы композиции. Если компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, представляет собой растительный жир, или масло, или эфир жирной кислоты, такой как гидрированное соевое масло, загущенное касторовое масло или глицерилпальмитостеарат, то компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, применяют в количестве приблизительно 0,5-30%, предпочтительно приблизительно 2-20%, наиболее предпочтительно приблизительно 3-15% от массы композиции, а подходящее количество наполнителя (например, микрокристаллической целлюлозы) составляет приблизительно 70-99%,предпочтительно приблизительно 80-98%, наиболее предпочтительно приблизительно 85-97% от массы композиции. Левозимендан применяют в количестве, описанном применительно к предыдущему предпочтительному осуществлению. Следующие примеры предназначены для дальнейшего разъяснения настоящего изобретения без ограничения его объема.Methocel K100LV Стеариновая кислота Порошкообразная часть: ЛевозименданMethocel K100LV Стеариновая кислота Порошкообразная часть: ЛевозименданMethocel K100LV Стеариновая кислота Порошкообразная часть: ЛевозименданMethocel K100LV Стеариновая кислота Порошкообразная часть: Левозимендан В приведенных выше примерах материал для гранулированной части просеивали и смешивали до гомогенного состояния в подходящем смесителе, таком как смеситель Turbula или контейнерный смеситель Zanchetta. Порошкообразную смесь просеивали через 0,6 мм сито. Смесь подвергали сухому гранулированию путем прессования (с помощью таблетировочной машины). В данной методике массу прессовали с применением Bepex PharmapactorL200/50P с силой сжатия приблизительно 45 кН. Прессованную массу просеивали и гранулы размером 0,7-1,7 мм собирали. Материал для порошкообразной части за исключением стеариновой кислоты просеивали и смешивали до гомогенного состояния в подходящем смесителе, таком как смеситель Turbula или контейнерный смеситель Zanchetta. Гранулированную часть и порошкообразную часть и стеариновую кислоту смешивали до гомогенного состояния в подходящем смесителе,таком как смеситель Turbula или контейнерный смеситель Zanchetta. Данной массой заполняли твердые желатиновые капсулы 3. Вместо твердых желатиновых капсул также могут быть применены капсулы из ГПМЦ 3. Пример 2. Определение содержания активного метаболита (II) в плазме человека с помощью жидкостной хроматографии - тандемной масс-спек-трометрии. Приготовление калибровочных образцов. Активный метаболит (II) в 20 мкл фосфатного буфера, рН 7,2, добавляют к 0,5 мл плазмы, 11 не содержащей анализируемого соединения. Количества добавленного анализируемого соединения составляют 0,100, 0,250, 0,500, 1,00, 2,50,3,75, 5,00, 7,50 и 12,5 нг. После встряхивания в течение 20 с и выдерживания в течение 10 мин 2500 пг внутреннего стандарта (R)-N-[4-(1,4,5,6 тетрагидро-4-этил-6-оксо-3-пиридазинил)фенил] ацетамида добавляли в 20 мкл фосфатного буфера, рН 7,2. Смесь встряхивали в течение 1 мин и выдерживали в течение 15 мин. Калибровочные образцы подщелачивали 50 мкл 0,1 М гидроксида натрия и встряхивали в течение 20 с. Калибровочные образцы экстрагировали добавлением 5 мл этилацетата : гексана (8:2) путем встряхивания в течение 3 мин. После центрифугирования в течение 7 мин органический слой отделяют и концентрируют при 40 С, применяя испаритель TurboVap. Когда калибровочные образцы становятся сухими, добавляют 200 мкл этилацетата : гексана (8:2), встряхивают в течение 1 мин и концентрируют при 40 С, применяя испаритель TurboVap. После этого добавляют 200 мкл метанола - 2 мМ ацетата аммония (1:1),калибровочные образцы встряхивают в течение 1 мин и выдерживают в течение 5 мин. После центрифугирования в течение 7 мин супернатант переносят в неиспользованный конический сосуд автоматического сэмплера для анализа с помощью жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии. Приготовление образцов. Образцы обрабатывают, как описано выше, но первая порция буфера не содержит анализируемого соединения. Жидкостная хроматография - тандемная масс-спектрометрия. Анализы проводят с помощью тандемного квадрупольного масс-спектрометра РЕ SciexAPI 300, оборудованного нагреваемым распылительным устройством ввода. Для проведения ВЭЖХ используют систему Hewlett-Packard HP 1090L. Применяемая колонка представляет колонку для обращенно-фазовой хроматографииLiChrosorb RP-18 (250 мм х внутренний диаметр 4 мм, Е. Merck). Подвижная фаза состоит из метанола - 2 мМ ацетата аммония, рН 5, (60:40 по объему). Скорость элюции составляет 1 мл/мин. Аликвоту 100 мкл экстракта вводят в колонку для жидкостной хроматографии. Элюент из колонки вытекает в массспектрометр без разделения потока. Напряжение на распределительной игле устанавливают равным 4 кВ. Применяют давление газа (азота) в распылителе 5 бар. Нагреватель устройства ввода устанавливают на 500 С. Напряжение на дисковой диафрагме составляет 25 В. Положительные ионы отбирают в квадрупольный масс-анализатор. Измерения проводят с использованием выбранной методики мониторинга реакции. Первый квадрупольный фильтр масс-спектрометра, Q1,устанавливают на пропускание протонированных молекул при m/z 246 для активного метаболита(II) и m/z 260 для внутреннего стандарта индуцируемой столкновением фрагментации в Q2. Соответствующие полученные ионы при m/z 204 иm/z 218 затем пропускаются в Q3 для регистрации. Используют время пребывания 200 мс и время задержки 100 мс. Выбранные хроматограммы мониторинга реакции записывают с использованием РЕ Sciex API 300 Data System. Количественное определение и расчеты. Отношение площади пиков анализируемого соединения и его внутреннего стандарта изображается на графике против концентраций. Определение уравнений калибровочной кривой и концентраций неизвестных образцов проводят с помощью РЕ Sciex API 300 Data System и программы РЕ Sciex McQuan 1.4. Порогом количественного определения является 0,200 нг/мл. Строят калибровочную кривую для активного метаболита (II). Специфичность. Полученные ионы активного метаболита(II) и его внутреннего стандарта регистрируются в соответствии с выбранной методикой мониторинга реакции. Методика является специфичной по отношению к фону, создаваемому плазмой. В"пустых" экстрактах плазмы перекрывающихся пиков не наблюдается. На фиг. 1 и 2 показаны калибровочный образец плазмы и образец плазмы после введения, взятые у добровольца. Пример 3. Эксперименты in vitro и in vivo с использованием композиций по настоящему изобретению. Композиции 1, 2 и 3 из примера 1 подвергали тесту растворения. Скорость растворения композиций исследовали в соответствии с методикой Фармакопеи США XXII (basket assembly method) в фосфатном буфере, рН 5,8, при 50 об/мин. Результаты по композициям 1, 2 и 3 приведены соответственно на фиг. 3, 4 и 5. Композиции 1, 2 и 3 из примера 1 затем вводили здоровым добровольцам в виде разовой пероральной дозы 2 мг левозимендана. Каждая группа состояла из 9 пациентов. Содержание метаболита (II) в плазме определяют через 12 ч после введения. Результаты приведены в табл. 1. Таблица 1 Концентрация метаболита (II) (пг/мл) в плазме у здоровых добровольцев через 12 ч после разовой пероральной дозы левозимендана (n=9) Клиническое испытание 3001047 Субъект 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Среднее С.О. = стандартное отклонение= меньше порога определения (200 пг/мл) 13 Пример 4. Эксперименты in vitro и in vivo с использованием ссылочных композиций. Ссылочную композицию, состоящую из Левозимендана 2,0 мгAvicel PH101 101,6 мг Стеариновой кислоты 1,4 мг,подвергали тесту растворения. Композицию готовили путем просеивания и смешивания порошкообразного материала до гомогенного состояния и заполнения данной массой твердых желатиновых капсул 3. Скорость растворения композиций исследовали в соответствии с методикой Фармакопеи США XXII (basket assembly method) в фосфатном буфере, рН 5,8, при 100 об/мин. Результаты приведены на фиг. 6. Ссылочную композицию затем вводили 8 здоровым добровольцам в виде разовой пероральной дозы 2 мг левозимендана. Содержание метаболита (II) в плазме определяли через 12 ч после введения. Результаты приведены в табл. 2. Таблица 2 Концентрация метаболита (II) (пг/мл) в плазме у здоровых добровольцев через 12 ч после разовой пероральной дозы левозимендана (n=8) Клиническое испытание 3001047 Субъект Ссылочная композиция 1 2 283 3 1330 4 1260 5 253 6 268 7 492 8 833 Среднее 590 С.О. 496 С.О. = стандартное отклонение= меньше порога определения (200 пг/мл) Таким образом, композиции по настоящему изобретению, характеризующиеся суммарным временем растворения in vitro, определенным в соответствии с методикой basket assemblymethod Фармакопеи США XXII в фосфатном буфере, рН 5,8, составляющим, по существу, 1-4 ч,по крайней мере, на 90% от содержания левозимендана, способствуют появлению значительно меньшего содержания метаболита (II) in vivo,чем ссылочная композиция, которая характеризуется большим временем растворения. Пример 5. Содержание левозимендана и активного метаболита (II) в плазме после 7 суток введения левозимендана. В ходе долгосрочного клинического исследования здоровым добровольцам три раза в сутки в течение 7 суток перорально вводили 1 мг левозимендана. В ходе обработки следили за содержанием левозимендана и метаболита (II) в плазме. Применяемая композиция была аналогична компози 002829 14 ции 3 из примера 1 за исключением того, что общее количество левозимендана составляло 1 мг, а микрокристаллической целлюлозы (Avicel РН-200) 51,0 мг. Среднее содержание левозимендана в плазме через 1 и 4 ч после введения последней дозы(7 сутки) и метаболита (II) через 8 ч после введения последней дозы (7 сутки) приведены в табл. 3. Таблица 3 Среднее содержание левозимендана и активного метаболита (II) в плазме после 7 суток введения левозименданаN = число пациентов Результаты показывают, что композиция по настоящему изобретению обеспечивает постоянное и терапевтически эффективное содержание левозимендана в плазме в течение продолжительного периода времени в то время, как постоянное содержание в плазме метаболита (II) остается на допустимом уровне. Пример 6. Дальнейшие примеры композиций. Композиция 6 (капсула). Левозимендан 1,0 мгAvicel PH-200 80,5 мг Стеариновая кислота 6,4 мг Левозимендан, Methocel K100 LV и микрокристаллическую целлюлозу (Avicel) просеивали и смешивали в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Стеариновую кислоту просеивали и смешивали с данной массой в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Данной массой затем заполняли белые желатиновые капсулы 3 с помощью машины для заполнения капсул Наrrо Hofliger, MG2 или аналог. Данные по растворению указанной композиции (Фармакопея США XXII, фосфатный буфер, рН 5,8, 100 об/мин) приведены в табл. 4. Таблица 4 Кривая растворения in vitro для композиции 6 в фосфатном буфере, рН 5,8, 100 об/минMethocel K100 LV 30,0 мг Кроскармелоза натрия 0,27 мгAvicel PH-200 100,0 мг Стеариновая кислота 4,0 мг Левозимендан, Methocel K100 LV, кроскармелозу натрия и микрокристаллическую целлюлозу (Avicel) смешивали в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Порошкообразную смесь затем просеивали и смешивали в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Стеариновую кислоту затем просеивали и смешивали с порошкообразной смесью в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Данную массу затем спрессовывали в таблетки с помощью подходящей таблетировочной машины (диаметр штампа 7 мм и радиус вогнутости 10,5 мм,твердость 60 Н). Данные по растворению указанной композиции (Фармакопея США XXII, фосфатный буфер, рН 5,8, 100 об/мин) следующие. Таблица 5 Кривая растворения in vitro для композиции 7 в фосфатном буфере, рН 5,8, 100 об/мин% растворения 10 33,7 20 47,8 30 60,9 40 72,6 50 78,5 60 82,5 90 88,5 120 90,0 180 92,2 240 94,8 300 96,9 Композиция 8 (матриксная таблетка). Левозимендан 1,0 мг Кроскармелоза натрия 0,11 мгAvicel PH-200 100,0 мг Левозимендан, кроскармелозу натрия и микрокристаллическую целлюлозу (Avicel) смешивали в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Порошкообразную смесь затем просеивали и смешивали в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Akofine NF (гидрированное растительное масло) затем просеивали и смешивали с порошкообразной смесью в подходящем смесителе (Turbula или аналоге). Данную массу затем спрессовывали в таблетки с помощью подходящей таблетировочной машины (диаметр штампа 7 мм и радиус вогнутости 10,5 мм, твердость 60 Н). Разнообразные модификации и вариации раскрытых осуществлений могут быть проведены без выхода за рамки объема настоящего изо 002829 16 бретения, определенного в следующей формуле изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Композиция контролируемого высвобождения для перорального введения, включающая а) терапевтически эффективное количества левозимендана и б) компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства,для обеспечения высвобождения левозимендана в течение продолжительного периода времени и постоянного содержания метаболита (II) в плазме менее 20 нг/мл, предпочтительно менее 10 нг/мл. 2. Композиция по п.1, в которой указанный компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, позволяет левозимендану, по существу, полностью высвободиться до того, как указанная композиция достигнет толстого кишечника. 3. Композиция по п.1 или 2, в которой указанный компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства, представляет полимер, образующий гидрофильный гель, или растительный жир, или масло, или эфир жирной кислоты. 4. Композиция контролируемого высвобождения для перорального введения, включающая а) терапевтически эффективное количество левозимендана и б) компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства,для обеспечения высвобождения левозимендана в течение продолжительного периода времени,где суммарное время растворения in vitro, определенное в соответствии с методикой basketassembly method Фармакопеи США XXII в фосфатном буфере, рН 5,8, составляет, по существу,1-4 ч, по крайней мере, на 90% от содержания левозимендана. 5. Композиция контролируемого высвобождения для перорального введения, включающая (а) часть быстрого высвобождения, содержащую левозимендан необязательно в сочетании, по крайней мере, с одним наполнителем, и(б) часть контролируемого высвобождения, содержащую левозимендан и компонент, контролирующий высвобождение лекарственного средства. 6. Композиция по п.5, включающая (а) часть быстрого высвобождения в форме порошка, содержащего левозимендан, в сочетании, по крайней мере, с одним наполнителем, и (б) часть контролируемого высвобождения в виде гранул,содержащих левозимендан и контролирующий высвобождение полимер, образующий гидрофильный гель. 7. Композиция по п.5 или 6, в которой часть быстрого высвобождения содержит левозимендан и микрокристаллическую целлюлозу. 8. Композиция по п.6 или 7, в которой контролирующий высвобождение полимер, образующий гидрофильный гель, представляет гид 17 роксипропилметилцеллюлозу, альгиновую кислоту или их смесь. 9. Композиция по любому из пп.5-8, в которой приблизительно 25-75%, предпочтительно приблизительно 30-70%, более предпочтительно приблизительно 40-60% от массы лекарственного средства составляет часть контролируемого высвобождения. 18 10. Композиция по любому из пп.5-9, в которой количество полимера, образующего гидрофильный гель, составляет приблизительно 2080%, предпочтительно приблизительно 30-70% от массы композиции.