Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний бактериальной и микоплазменной этиологии

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ И МИКОПЛАЗМЕННОЙ ЭТИОЛОГИИ Изобретение относится к ветеринарной медицине и используется для лечения бактериальных инфекций. Фармацевтическая композиция содержит в своем составе два действующих вещества, относящихся к группам тетрациклинов и амфениколов в апротонных растворителях. Дополнительно композиция может содержать катионы двухвалентных металлов. В качестве действующих веществ, относящихся к группам тетрациклинов и амфениколов, могут быть использованы доксициклин и флорфеникол и их ближайшие аналоги в виде фармацевтически приемлемых солей. Жуков Олег Иванович, Сазонов Антон Алексеевич, Жукова Наталья Николаевна, Драгункина Оксана Сергеевна, Панфилова Марина Николаевна, Бугаев Алексей Анатольевич (RU) Романова Н.В. (RU)(56) Маркелов И.А. и др. Разработка и исследование лекарственной формы на основе антибиотиков флорфеникола и доксициклина. Вавиловские чтения-2007. Материалы конференции, посвященной 120-й годовщине со дня рождения академика Николая Ивановича Вавилова. 26-30 ноября 2007 г. Часть 1. Саратов, Научная книга, 2007, с. 315-316RU-C1-2178698 Абрамов C.B. и др. Терапевтическая эффективность нового препарата на основе флорфеникола и доксициклина на телятах. Международный вестник ветеринарии. 4, 2010,Санкт-Петербург, с. 39-42 СА-A1-2485491(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "НИТА-ФАРМ" (RU) Изобретение относится к области ветеринарной медицины, представляет собой антибактериальный комплексный препарат для лечения респираторных заболеваний и заболеваний желудочно-кишечного тракта у сельскохозяйственных животных. Желудочно-кишечные и респираторные заболевания существенно ограничивают возможности развития животноводства. Наиболее часто инфекционные заболевания протекают в смешанной форме, что осложняет течение болезни и выбор эффективного лекарственного средства. Для лечения таких ассоциированных инфекций целесообразно применять комбинированные лекарственные средства, позволяющие преодолеть проблему резистентности к антибиотикам и значительно расширить спектр антимикробного действия. Известна антибактериальная композиция (RU 1341765, МПК A61K 31/65, опубл. 06.2001 г.), включающая аскорбиновую кислоту, левомицетин и пропиленгликоль в качестве растворителя, с целью повышения биологической активности дополнительно содержащая сульфадимезин, окситетрациклина гидрохлорид, новокаин и полиэтиленгликоль-400 при следующем соотношении компонентов, мас.%: Известен антибактериальный препарат (RU 2089183, МПК A61K 31/00, опубл. 10.09.1997 г.), содержащий следующее соотношение компонентов, мас.%: Недостаток данных аналогов связан с невысокой эффективностью в присутствии новокаина сульфаниламидов, которые используются в данных препаратах наряду с антибиотиками старого поколения, к которым у многих штаммов есть резистентность. Наиболее близким аналогом является препарат для лечения животных (RU 2277418, МПК A61K 31/65, опубл. 10.06.2006 г.), содержащий левомицетин, окситетрациклина гидрохлорид, магний хлористый, 1,2-пропиленгликоль, полиэтиленоксид 400 при следующем соотношении компонентов, г на 100 см 3 препарата: Данный аналог имеет следующие недостатки: содержит недостаточно эффективные антибиотики старого поколения, в том числе левомицетин, обладающий токсическим действием на кроветворную и иммунную систему, характеризуется более узким спектром действия и применяется только для лечения бронхопневмонии у одного вида животных (КРС-телята). Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является создание композиции на основе доксициклина и флорфеникола для лечения заболеваний бактериальной этиологии с более высокой эффективностью и широким спектром действия за счет введения антибиотиков более нового поколения и обладающей синергетическим эффектом. Технический результат изобретения - повышение эффективности лечения заболеваний бактериальной и микоплазменной этиологии у КРС, МРС и свиней при снижении доз с уменьшением токсического эффекта. Технический результат достигается применением комплексного препарата, включающего следующие компоненты (в различных сочетаниях): доксициклин или его фармацевтически приемлемые соли,флорфеникол, органический растворитель и дополнительно вспомогательные вещества: катионы двухвалентных металлов, воду, антиоксидант, солюбилизатор. Известно, что широкий спектр антимикробной активности препаратов, как правило, достигается путем комбинирования нескольких лекарственных веществ на базе одной или нескольких групп химических соединений. При этом сочетание различных химических структур в композиции позволяет достичь их синергетического эффекта и получить препараты с более широким спектром действия. Это свидетельствует об актуальности разработки удобного в применении и безопасного комплексного антибактериального препарата на основе доксициклина и флорфеникола, использование которого позволит повысить эффективность лечения широкого спектра смешанных форм инфекционных заболеваний у сельскохозяйственных животных. Доксициклин и флорфеникол являются антибиотиками широкого спектра бактериостатического действия, охватывающего микроорганизмы различных морфологических групп, характеризуются длительными периодами полувыведения из организма, что позволяет уменьшить частоту применения препарата. Доксициклин - полусинтетический антибиотик из группы тетрациклинов, является препаратом широкого спектра бактериостатического действия. По химической структуре представляет собой 6-диокси 5-окситетрациклин и имеет механизм действия, общий для всех тетрациклинов - подавление синтеза протеинов в микробной клетке с нарушением связи транспортных аминоацил-РНК с 30S субъединицей рибосомальной мембраны. Доксициклин, являясь представителем группы тетрациклинов, по сравнению с другими антибиотиками этого ряда обладает более высокой способностью за счет своих липофильных свойств проникать в микробную клетку. В обычно применяемых концентрациях действует бактериостатически на вне- и внутриклеточно расположенных возбудителей. К доксициклину высокочувствительны: грамположительные микроорганизмы Staphylococcus spp. (в т.ч. Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis), Streptococcus spp. (в т.ч. Streptococcus pneumoniae),Clostridium spp., Listeria spp.; и грамотрицательные микроорганизмы: Neisseria gonorrhoeae, Neisseriameningitidis, Haemophilus influenzae, Klebsiella spp., Entamoeba histolytica, Escherichia coli, Shigella spp.,Enterobacter, Salmonella spp., Yersinia spp. (ранее Pasteurella spp.), Bacteroides spp., Treponema spp. (в т.ч. штаммы, устойчивые к др. антибиотикам, например к современным пенициллинам и цефалоспоринам). Наиболее чувствительны Haemophilus influenzae и внутриклеточные патогены. Доксициклин активен в отношении большинства возбудителей опасных инфекционных заболеваний: чумного, туляремийного,сибиреязвенного микробов, легионелл, бруцелл, холерного вибриона, риккетсий, возбудителей сапа,хламидий. Не действует на большинство штаммов протея, синегнойной палочки и грибы. В меньшей степени, чем другие антибиотики тетрациклинового ряда, угнетает кишечную флору. По степени антибактериальной активности доксициклин превосходит природные тетрациклины. В отличие от тетрациклина и окситетрациклина обладает более высокой терапевтической эффективностью. Флорфеникол относится к группе амфениколов. Особенности молекулярной структуры флорфеникола обусловливают его более низкую токсичность и более высокую антимикробную активность по сравнению с его аналогом - левомицетином (хлорамфениколом). Во-первых, замещение одной из гидроксильных групп на атом фтора повышает чувствительность микроорганизмов, устойчивых к хлорамфениколу. Во-вторых, в молекуле флорфеникола, в отличие от хлорамфеникола, отсутствует нитрогруппа,оказывающая токсическое влияние на систему кроветворения и иммунную систему, что повышает безопасность его применения. Кроме того, флорфеникол мало применялся ранее в ветеринарной практике на территории Российской Федерации, и в настоящее время к нему не должно существовать резистентных микроорганизмов. Механизм действия флорфеникола связан с нарушением синтеза белка в микробных клетках. Флорфеникол оказывает бактериостатическое действие на чувствительные к нему микроорганизмы. Он эффективен в отношении многих грамположительных и грамотрицательных бактерий, риккетсий, спирохет, действует на штаммы бактерий, устойчивых к пенициллину, стрептомицину, сульфаниламидам, эффективен в отношении бактерий, которые производят ацетилтрансферазу и являются устойчивыми к хлорамфениколу. Флорфеникол обладает широким спектром антибактериального действия, в том числе в отношении Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Pasteurella haemolitica, Bordetella bronchiseptica, Haemophilus sp., Micopiasma hyopneumoniae, Micopiasma hyorhinis, Omitobacterium rhinotracheaie, E. coli, Salmonella sp., Staphylococcus aureus, Streptococcus sp., Shigella sp., Klebsiella sp., Proteus sp. Слабоактивен в отношении кислотоустойчивых бактерий, синегнойной палочки, клостридий и простейших. Лекарственная устойчивость к препарату развивается относительно медленно, при этом, как правило, перекрестной устойчивости к другим химиотерапевтическим средствам не возникает. Приготовление и применение композиции Способ приготовления композиции заключается в смешении компонентов. При этом навеску доксициклина гиклата (1-10%) и антиоксиданта (0,1-0,5%) вносят в расчетное количество органического растворителя, затем при перемешивании вносят расчетное количество воды (2-17%) (реакция экзотермическая), соединение магния (0,1-5%) и после охлаждения до комнатной температуры - навеску флорфеникола (5-15%) и поливинилпирролидона (коллидона) (1-5%), перемешивают до полностью гомогенного состояния и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Примеры конкретного выполнения Пример 1. Данный состав обладает максимальным синергетическим эффектом и минимальным болевым эффектом. Пример 2. Данный пример обладает максимальным синергетическим эффектом. Пример 3. Данный состав композиции обладает максимальной эффективностью по отношению к грамотрицательным микроорганизмам. Пример 4. Композиция данного состава обладает максимальной эффективностью по отношению к грамположительным микроорганизмам. Данный состав композиции обладает минимальной вязкостью. Пример 6. Данный состав композиции обладает максимальной физико-химической стабильностью. Ниже приведены данные по терапевтической эффективности и титрации доз при использовании состава по примеру 1. Всего в эксперименте было использовано 92 головы крупного рогатого скота, с диагнозом трахеит 14 голов, мастит, эндометрит - 5 животных, диспепсия - 3 головы, бронхопневмония - 70 голов; мелкого рогатого скота с диагнозом бронхопневмония - 15 голов; свиней, больных энтеритом, - 20 животных. Определение переносимости и терапевтической эффективности препарата проводили на молодняке КРС, МРС и свиней на базе хозяйств Саратовской области. Схема исследования представлена в табл. 1-5. Таблица 1. Схема исследования препарата на телятах Оценку клинического состояния животных с диагнозом трахеит проводили ежедневно на протяжении всего эксперимента. Отбор проб крови для проведения морфологического и биохимического исследований осуществляли до введения, через 1 ч и 120 ч после введения препарата. Было назначено лечение по разработанной схеме, представленной в табл. 1. После первой инъекции на начало вторых суток у 30% животных уменьшился кашель и появился аппетит. На третий день у животных на 64-79% исчезли такие симптомы, как кашель, болезненность трахеи, хрипы. На четвртые сутки процент выздоровления составил 91%. К концу пятых суток животные выглядели клинически здоровыми. Таблица 2. Схема исследования препарата на коровах За клиническим состоянием животных с диагнозом мастит, эндометрит и диспепсия наблюдали в течение 4 дней, т.е. до полного выздоровления. Было назначено лечение по разработанной схеме эксперимента, представленной в табл. 3. После инъекции препарата в дозе 1 мл/10 кг м.ж. на 4 сутки у коров регистрировали полное клиническое выздоровление. Определение предварительной переносимости и терапевтической эффективности препарата также проводили на телятах с диагнозом диспепсия. Эксперимент проводили согласно схеме исследования,представленной в табл. 3, в дозе 1 мл/15 кг м. ж., 1 р/день, в течение трх дней, внутримышечно. У животных после третьей инъекции наступило полное клиническое выздоровление. Таблица 3. Схема исследования препарата на телятах Схема исследования переносимости и терапевтической эффективности препарата на МРС и свиньях представлена в табл. 4 и 5. Оценку клинического состояния ягнят с диагнозом бронхопневмония и поросят, больных энтеритом, проводили ежедневно на протяжении всего эксперимента. Таблица 4. Схема исследования препарата на мелком рогатом скоте Таблица 5. Схема исследования препарата на свиньях Диагноз ягнятам ставили на основании клинических признаков и данных анамнеза. Животным с терапевтической целью было назначено лечение по разработанной схеме (табл. 4). На четвртые сутки процент выздоровления составил 90%. К концу пятых суток животные выглядели клинически здоровыми. Из приведенных результатов следует, что внутримышечное введение заявленного препарата ягнятам при бронхопневмонии в дозе 1 мл/10 кг м.ж., 1 раз в день в течение 3 дней, приводит к терапевтическому эффекту. Определение переносимости и терапевтической эффективности заявленного препарата проводили также на поросятах. Животным на основании клинической картины и анамнестических данных был поставлен диагноз - энтерит. С терапевтической целью животным применяли заявленный препарат в дозе 1 мл/10 кг м.ж., 1 раз в день в течение 3 дней. После инъекции препаратов улучшение состояния животных наступило к концу первых суток. У поросят исчезли такие симптомы, как боль при пальпации, слабость, угнетение; улучшился аппетит. На третий день каловые массы приняли физиологически нормальную консистенцию; у 70% животных появился аппетит; температура тела пришла в норму. На четвртые сутки поросята выглядели клинически здоровыми. Процент выздоровления животных составил: на вторые сутки - 53%; на третьи сутки - 87%; на четвртые сутки - 100%. При титрации доз препарата группы животных формировали по принципу аналогов с учтом возраста, живого веса, условий кормления, содержания и поставленного диагноза. Препарат применяли,руководствуясь схемой титрации доз (табл. 6), были использованы телята 4-месячного возраста с диагнозом бронхопневмония. Проведнные исследования подтверждаются результатами гематологического и биохимического анализа крови (табл. 7, 8). Таблица 6. Схема титрации доз препарата Исследовали морфологический состав периферической крови и биохимические показатели плазмы крови. По результатам исследований морфологического состава периферической крови телят при внутримышечном введении препарата наблюдается незначительное увеличение гемоглобина и количества эритроцитов, а также несущественное повышение лейкоцитов в пределах физиологической нормы у данной группы животных после введения препарата. Таблица 7. Гематологические показатели Из представленных результатов исследований биохимических показателей сыворотки крови телят при внутримышечном введении препарата следует, что он не обладает токсическими свойствами. Показатели ферментов креатининкиназа, аспартатаминотрансфераза и аланинаминотрансфераза уменьшаются на протяжении всего эксперимента, а креатининкиназа снижается до нормальных значений, что говорит о выраженной положительной динамике выздоровления. Уровень фермента щелочной фосфатазы на всем протяжении эксперимента не изменяется и остатся в пределах начальных значений. Повышенный уровень данного фермента может быть связан с частичным гемолизом эритроцитов. Концентрации креатинина, мочевины, глюкозы и билирубина в сыворотке крови телят не изменяются и остаются в пределах нормальных значений, следовательно, препарат не обладает гепато- и нефротоксичностью. Показатели общего белка и альбуминов повышаются в сыворотке крови телят, что ещ раз доказывает благоприятное действие препарата на биохимические и обменные процессы организма животного. Таблица 8. Результаты биохимических исследований сыворотки крови телят Активность креатинкиназы превышает показатели нормы до начала эксперимента, что характерно для острого миокардита, развивающегося на фоне бронхопневмонии. Во время эксперимента у животных групп 6 и 7 активность падает, что, очевидно, связано с правильным подбором вводимой дозы лекарственного препарата и достижением терапевтического эффекта. Щелочная фосфатаза представлена во всех тканях, особенно высокая концентрация в печени, желчном протоке, почках, костях и плаценте. В ходе эксперимента снижается во всех группах, кроме группы 1. Терапевтический эффект достигнут. Повышение аспартатаминотрансферазы (ACT), превышающее повышение АЛТ, характерно для повреждения сердечной мышцы; если же показатель АЛТ выше, чем ACT, то это, как правило, свидетельствует о разрушении клеток печени. Активность аспартатаминотрансферазы повышается в группах 1, 2,3 и 5 по сравнению с начальной точкой, в группах 4, 6 и 7 происходит снижение активности. Все колебания активности происходят в рамках физиологических норм. Все колебания активности аланинаминотрансферазы происходят в рамках физиологических норм,за исключением группы 1. В заявляемом комплексном препарате выявлено синергетическое действие доксициклина и флорфеникола для штаммов Streptococcus pyogenes 163 и Clostridium novyi 198 - табл. 9 (Отчет ФГУЗ Рос НИПЧИ "Микроб", 2011). Таблица 9. Показатели МПК (минимальной подавляющей концентрации) антибактериальных препаратов к тест-штаммам Аналогично, эффективность лечения была подтверждена и для других приведенных примеров. Выводы: 1. Препарат хорошо переносится животными и показывает высокую терапевтическую эффективность при внутримышечной инъекции в терапевтической дозе 1 мл/10 кг м.ж., как при ежедневном применении, так и с интервалом 48 часов; и в дозе 1 мл/5 кг м.т.ж., с интервалом 72 часа при дробном введении препарата не более 5 мл в одно место инъекции. 2. Аллергические реакции при введении препарата в исследуемых дозах отсутствуют. 3. Побочные явления (нарушение координации движений с признаками болезненности, подергивание задней конечностью со стороны инъекции, боковое положение) присутствовали в единичных случаях при введении препарата в дозе 1 мл/6,7 кг м.ж., как при ежедневном применении, так и с интервалом 48 часов, что может быть связано с индивидуальной непереносимостью препарата животными. 4. Препарат обладает синергетическим действием доксициклина и флорфеникола в отношении штаммов Streptococcus pyogenes 163 и Clostridium novyi 198. Таким образом, заявляемый препарат характеризуется широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов и обладает синергетиче-7 019956 ским действием. Препарат показал высокую эффективность при лечении заболеваний бактериальной и микоплазменной этиологии у КРС, МРС и поросят. Препарат не оказывает отрицательного влияния на организм животных, не обладает побочными эффектами, за исключением случаев индивидуальной непереносимости. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения по сравнению с препаратами на основе отдельно доксициклина и флорфеникола и аналогом, содержащим левомицетин и окситетрациклина гидрохлорид. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний бактериальной и микоплазменной этиологии, содержащая флорфеникол и доксициклин по крайней мере в одном апротонном полярном растворителе, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит катионы двухвалентных металлов в количестве, мас.%: флорфеникол - 5-15, доксициклин - 1-10, катионы двухвалентных металлов - 0,1-5, вода - 217, апротонный полярный растворитель - остальное. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве катионов двухвалентных металлов содержит катионы магния и кальция в виде соединений, таких как оксиды, хлориды, ацетаты, сульфаты. 3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве апротонного полярного растворителя содержит пирролидоновый растворитель, или N,N-диметилацетамид, или N,N-диметилформамид, или диметилсульфоксид, или их комбинации. 4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что в качестве апротонного полярного пирролидонового растворителя содержит растворитель, представляющий собой N-метил-2-пирролидон или 2-пирролидон. 5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит натрия формальдегид сульфоксилат в качестве антиоксиданта в количестве 0,1-0,5%. 6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит поливинилпирролидон в качестве солюбилизатора в количестве 1-5%.