Применение бактериального штамма lactobacillus casei для получения композиции, предназначенной для воздействия на пролиферацию т-клеток

1 Данное изобретение относится к применению молочнокислых бактерий для воздействия на пролиферацию Т-клеток для усиления специфического иммунного ответа на инфекционный агент. Молочнокислые бактерии (LAB) обычно используются для продукции ферментированных пищевых продуктов, в частности, молочных продуктов. Предполагаемое действие молочнокислых бактерий на здоровье впервые было исследовано Мечниковым (The prolongation of life. 1st ed.New York: GP Putman's Sons, 1908), и с тех пор являлось объектом многих исследований. В настоящее время, в общем, подтверждено, что различные молочнокислые бактерии могут выполнять роль, полезную для здоровья. Данные бактерии также называют пробиотиками, обозначая этим названием живые микроорганизмы, которые при поглощении их в достаточном количестве оказывают положительное действие на здоровье, сверх обычного питательного действия. Бактерии-пробиотики, в частности, описаны среди видов, принадлежащих к родам Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus и Lactococcus, часто применяемых в молочной промышленности. Полагают, что пробиотики действуют, в частности, на уровне кишечной флоры, препятствуя развитию патогенных микроорганизмов,и/или более непосредственно действуя на иммунную систему. Например, имеются наблюдения, что потребление бактерий-пробиотиков или ферментированной пищи, такой как йогурт,содержащий данные бактерии, приводит к снижению количества патогенных бактерий; в отношении иммунной системы сообщалось о различных эффектах: об активации клеток, участвующих в специфическом или неспецифическом иммунном ответе, таких как лимфоциты и макрофаги, о повышении уровня иммуноглобулинов, и в частности, IgA; о повышении уровня активирующих иммунную систему цитокинов, и т.д. (для обзора ср., например, MEYDANI and НА (Am J Clin Nutr, 71, 861-7217, 2000. В целом, авторы исследований, проведенных на различных молочнокислых бактерияхпробиотиках, склонялись к заключению, что некоторые виды или по меньшей мере некоторые штаммы данных видов обладают иммуностимуляторными свойствами. С другой стороны, механизм(-ы), лежащий(-е) в основе данных свойств и потенциально вовлеченные компоненты иммунной системы остаются не определенными. Поэтому становится необходимым прояснить данные аспекты, в частности, для того, чтобы предложить более прицельные способы применения различных видов или штаммов бактерий-пробиотиков. Некоторые исследования, проведенные на людях и животных, предполагают, что бактерии вида L. casei оказывают полезное действие на 2 здоровье и, в частности, положительное действие на иммунную систему. Так, на мышах показано, что потребление ферментированного молока,содержащего штамм L. casei DN-114001, повышает резистентность к инфекции Salmonella typhimurium[PAUBERT-BRAQUET et al., Int J Immunother,4:153, (1995)]; одновременно наблюдали активацию макрофагов и увеличение количества циркулирующих IgA. 30 декабря 1994 г. штамм DN-114001 помещали в CNCM (Collection National de CulturesInstiut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, В Париже, под номером I-1518; данный штамм и его комбинация с йогуртными заквасками для получения кисломолочных продуктов, описаны в заявке РСТ WO 96/20607 на имя COMPAGNIEGERVAIS DANONE. В недавно проведенном на людях исследовании также сообщается, что потребление ферментированного молока, содержащего штамм L.casei DN-114001, индуцирует усиление резистентности к Salmonella typhimurium. Данный эффект объясняется действием на неспецифический врожденный иммунитет [YOON et al., Int JImmunother; 15, 79-89 (1999)]. Авторы изобретения исследовали, оказывает ли L. casei также действие на адаптивный иммунитет, который, в отличие от врожденного иммунитета, приводит к специфическому иммунному ответу против данного патогенного агента. С этой целью авторы изобретения исследовали действие L. casei, вводимых пероральноin vivo, на стимуляцию ex vivo Т-клеточной пролиферации в ответ на антигены, представляющие различные типы обычных патогенных агентов: бактериальный антиген (столбняк); антиген грибкового происхождения (Candida) и вирусный антиген (грипп). Ими получены наблюдения для каждого из тестируемых антигенов, что прием в пищу L.casei приводит к повышению пролиферативной способности Т-клеток, и, в частности, CD3+субпопуляций, в ответ на активацию указанным антигеном. Данный эффект особенно проявляется в случае антигена вируса гриппа. Предметом настоящего изобретения является применение бактериального штамма видаL. casei для получения композиции, которую можно вводить перорально для усиления специфичного системного иммунного ответа против патогенного микроорганизма. Данное усиление иммунного ответа следует из усиления пролиферативной способности Т-клеток, специфичных к антигенам указанных патогенных микроорганизмов. По предпочтительному осуществлению настоящего изобретения, указанный микроорганизм представляет собой патоген, распростра 3 няющийся воздушным путем, в частности, патоген дыхательных путей. Особенно относящимися к делу патогенами являются бактерии или вирусы; среди последних следует упомянуть, например, риновирусы,респираторно-синцитиальный вирус(RSV) и миксовирусы (ортомиксовирусы, такие как вирусы гриппа (грипп типа А, В и С), или парамиксовирусы и, в частности, вирусы парагриппа). В контексте осуществления настоящего изобретения указанный штамм L. casei может использоваться отдельно или в комбинации с другими молочнокислыми бактериями вида L.casei или других видов. Преимущественно он может использоваться с йогуртными заквасками, а именно, Lactobacillus bulgaricus и Streptococcus termophilus. Он может использоваться в виде целых бактерий, которые могут быть живыми или нет,и также в виде бактериального лизата, или в виде бактериальных фракций. Предпочтительно, композиция, полученная в контексте применения согласно изобретению,содержит по меньшей мере 105, предпочтительно по меньшей мере 107, в основном от 1 х 108 до 1,5 х 109 клеток L.casei на мл. При использовании L. casei с йогуртными заквасками указанная композиция также преимущественно включает в себя по меньшей мере 107, предпочтительно от 2 х 108 до 1 х 109 клеток S. thermophilus на мл и по меньшей мере 5 х 105, предпочтительно от 4 х 106 до 2 х 107 клетокL. bulgaricus на мл. Штаммом L. casei, особенно подходящим для применения согласно изобретению, является штамм CNCM I-1518. Композиции, полученные согласно изобретению, могут вводиться в виде пищевых продуктов или пищевых добавок. Они, например, могут представлять собой молочные продукты и, в частности, кисло-молочные продукты, включающие в себя, по меньшей мере, указанный штамм L. casei, необязательно комбинированный с другими молочнокислыми бактериями, например с йогуртными заквасками. Композиции, полученные согласно изобретению, могут использоваться в контексте профилактики и лечения патологических состояний инфекционного происхождения и, в частности, вирусного происхождения, и, в частности, гриппа. Предпочтительно для получения оптимального эффекта их вводят, по меньшей мере, в течение одной недели и преимущественно, по меньшей мере, в течение 10 суток, в количестве, соответствующем поглощению по меньшей мере 107, предпочтительно по меньшей мере 108, в основном от 109 до 1012 клеток L.casei. Настоящее изобретение будет лучше понято за счет дальнейшего последующего описания, которое относится к неограничивающимLactobacillus casei в плане усиления специфического ответа на микробные антигены. Пример 1. Действие Lactobacillus casei на Т-клеточную пролиферацию в ответ на антигенную стимуляцию. Исследование двойным слепым методом против плацебо проводили для тестирования действия приема в пищу кисломолочного продукта, включающего в себя штамм Lactobacilluscasei DN-114001 (CNCM I-1518), на Тклеточную пролиферацию в ответ на антигенную стимуляцию. Условия данного исследования являются следующими. Субъекты. 88 здоровых субъектов в возрасте от 18 до 50 лет рекрутировали в Department of InfectiousDiseases, Washington Hospital Center (Вашингтон, DC). Субъекты с наличием в истории жизни гепатита или проблем с почками, сердечнососудистых дисфункций, иммунологических или желудочно-кишечных заболеваний, тяжелой астмы или сахарного диабета, субъекты,перенесшие лечение антибиотиками или иммуносупрессорами менее чем за 3 месяца до начала исследования, субъекты с наличием в истории жизни злоупотребления алкоголем или алкогольной зависимости, субъекты с известной непереносимостью или гиперчувствительностью к молочным продуктам, субъекты на низкокалорийной диете, субъекты, которых вакцинировали от гриппа в течение предшествующего сезона, и также беременные женщины и женщины, кормящие грудью, исключались из исследования. Протокол и условия исследования были утверждены комитетом Research CommitteeBoard, который контролирует исследования,проводимые на человеке. Выбранных субъектов случайным образом разделяли на 2 группы. Группа из 47 субъектов (26 женщин и 21 мужчина) ежесуточно получала по 100 мл кисломолочного продукта, содержащего 2% жира,включающего йогуртные закваски (L. bulgaricus и S. thermophilus) и штамм Lactobacillus caseiDN-114001, и продаваемого DANONE под торговой маркой ACTIMEL. Группа из 41 субъекта (22 женщины и 19 мужчин) получала плацебо в течение 28 суток: 100 мл в сутки молока, разбавленного водой (1/5 об./об.), с добавлением сахара для получения уровня калорийности, эквивалентной таковому для ACTIMEL. Субъектов из двух групп просили воздерживаться от употребления йогурта или других ферментированных молочных продуктов в течение исследования. Средний возраст (стандартное отклонение указано в скобках) субъектов составлял 36 (7,3)ACTIMEL и группы плацебо. Перед началом потребления ACTIMEL или плацебо у каждого субъекта из 2 групп брали пробу крови (55 мл) для определения фоновых значений. Субъектам наносили контрольные визиты на 9, 18 и 28 сутки, и заполняли краткий вопросник касательно их самочувствия, возможных побочных эффектов и также развития любых заболеваний, возможно препятствующих интерпретации результатов. Пробу крови брали во время каждого визита для целей иммунологических экспериментов. Для каждой индивидуальной пробы крови выполняли общий анализ крови и биохимический анализ крови. В дополнение к этому, проводили фенотипический анализ лейкоцитов и их субпопуляций (Т-клетки и субпопуляции, Вклетки, моноциты и NK-клетки) путем проточной цитометрии. Оценка клеточной пролиферации. Пролиферативный ответ Т-клеток субъектов группы ACTIMEL и субъектов группы плацебо в отношении трех микробных антигенов:Candida, столбняка и гриппа, определяли ex vivo путем измерения включения 3HTdR, как описано ниже. Подготовка клеток. 30 мл гепаринизированной крови из каждой взятой пробы обрабатывали следующим образом: пробирку центрифугировали в течение 10 мин при 1500 об./мин. Плазму осторожно переносили в помеченные пробирки для замораживания и хранили при 70 С [sic]. Кровь переносили в центрифужную пробирку объемом 15 мл и разводили 1:3 PBS. 10 мл Ficoll-Hypaque добавляли в центрифужную пробирку объемом 50 мл и покрывали 30 мл разведенной крови. Пробирку центрифугировали в течение 2 мин при 2000 об./мин при температуре окружающей среды. Верхний слой PBS отбирали, а мононуклеарные клетки объединяли и переносили в центрифужную пробирку объемом 15 мл. Добавляли 10 мл HBSS, встряхивали на вортексе(vortex) и центрифугировали при 1500 об./мин в течение 10 мин; супернатант отбирали, и ресуспендировали осадок в 2-3 мл HBSS. Добавляли 8 мл HBSS, и центрифугировали пробирку при 1500 об./мин в течение 6 мин. Выполнение данного протокола повторяли дважды, и полученные клетки ресуспендировали в 1-2 мл PBS, и затем встряхивали на вортексе. Клетки подсчитывали, оценивая их жизнеспособность по выведению трипанового синего, и доводили их концентрацию до 2x208/мл. Получение антигенов. Столбнячный антиген: подготовку проводили в день проведения анализа. Маточный раствор получали путем разведения столбнячного токсоида (CONNAUGHT LABORATORY, Willowdale, Канада) до 1:1000 в PBS. 6 Антигены Candida albicans: маточный раствор получали путем разведения антигенов Candida albicans (BAYER CO, Elkert, IN) до 1:1000 вPBS. Антигены гриппа: маточный раствор получали путем разведения препарата антигенов вируса гриппа (NIBSC, Herts, Англия) до 1:125 вPBS. Применяли планшеты для микротитрования (96 лунок). В каждую лунку вносили по 100 мкл маточного раствора антигена и 100 мкл клеток до конечной концентрации 2 х 105 клеток на лунку. В контрольные лунки вносили по 100 мкл PBS вместо маточного раствора антигена. Планшеты инкубировали при 37 С, 5% CO2 в течение 5 суток; за 18 ч до конца инкубации добавляли 20 мкл 50 мкКи/мл 3HTdR (NEWENGLAND NUCLEAR, Бостон, МА). Клетки из лунок каждого планшета собирали на фильтры,и считывали данные фильтры непосредственно в бета-счетчике MATRIX 9600 (PACKARD INSTRUMENTS) с целью измерения включения 3HTdR, которое выражается в СРМ (число счетов в минуту). Для каждого субъекта из группы, получавшей ACTIMEL, и для каждого субъекта из группы, получавшей плацебо, оценивали пролиферацию путем определения индекса стимуляции (SI) по следующей формуле:SI = [среднее СРМ для стимулированных клеток/среднее СРМ для нестимулированных клеток (контрольная лунка)] Статистический анализ. Описательные статистические параметры(среднее, стандартное отклонение, медиана) использовали для подведения итогов по пролиферативному ответу Т-клеток на воздействие каждого антигена, для каждой из групп исследования, к моменту измерения. Вследствие уклона распределения пролиферативного ответа для данных пролиферации применяли трансформацию к натуральному логарифму. Изменения пролиферативного ответа по сравнению с фоновым значением применяли для статистического моделирования [LITTLE etSAS Institute INC, (1996)]. Модуляции пролиферативного ответа по сравнению с фоновым значением, как функция времени, представляли с использованием способа сглаживания кривой,как описано DIGGLE et al. [Analysis of Longitudinal Data. New York: University Press Inc, 1994]. Для исследования траектории пролиферативного ответа строили смешанную линейную модель. Данная модель позволяет осуществить приведение данных пролиферации к кривой второго порядка для каждой группы исследования. Данная модель определяется следующим уравнением:Yijt означает изменение пролиферативного ответа по сравнению с фоновым значением дляi-того субъекта в j-той группе продукта в момент времени t; трансформация к натуральному логарифму применялась к каждой переменной,Yijt = log (пролиферация в момент времени t) log (фоновое значение).ij означает интерцепцию для i-того субъекта в j-той группе продукта. Она отражает эффект случайности в модели, ijMVN (0,G), G содержит компоненты колебания в диагональной структуре (MVN: мультинормальное распределение переменной). 1j и 2j представляют собой коэффициенты регрессии Т и Т 2 для j-той группы продукта; Т представляет собой момент измерения(0, 9, 18 или 28 сутки), и Т 2 представляет собой квадрат Т.ijt представляет собой коэффициент ошибки:ijtMVN (0, R), и R = 2In, где In означает матрицу идентичности n х n. Статистические оценки проводили для следующих гипотез:a) оценка того, равен ли 0 оценочный коэффициент регрессии. Н 0: 1j = 0 против H1: 1j0 (для линейного члена) и Н 0: 2j = 0 против H1: 2j0 (для квадратного члена). Если 1j и 2j не отличаются от 0, траектория отсутствует. Если 2j значимо отлично от 0, имеет место траектория второго порядка. Если только 1j значимо отлично от 0,имеет место линейная траектория.b) Сравнение на предмет того, являются ли траектории двух групп идентичными. Н 0: 11 = 12 против H1: 1112 (для линейного члена) и Н 0: 21 = 22 против H1: 2122 (для квадратного члена). Для проведения анализов использовали статистический пакет SAS. Результаты. В табл. 1 ниже приведены демографические данные, касающиеся субъектов, и оценка фонового значения пролиферации. Таблица 1SD = стандартное отклонение Т-клеточная пролиферация в ответ на конкретные микробные антигены Средние значения, стандартные отклонения и медианы пролиферации ex vivo мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) для каждой группы (ACTIMEL и плацебо), в разные моменты времени забора проб, приведены ниже в табл. 2. Таблица 2 Между двумя группами исследования нет значимых различий по фоновым значениям (0 сутки) пролиферативного ответа по отношению к трем микробным антигенам. На фиг. 1 проиллюстрированы изменения пролиферативного ответа в зависимости от времени для каждого антигена в двух группах исследования: группа ACTIMEL, сплошная линия; группа плацебо, пунктирная линия. Результаты статистического моделирования представлены ниже в табл. 3.Candida. В группе ACTIMEL фоновый ответ, равный 3,03,4 на 0 сутки, возрастал до 3,23,5 на 9 сутки и до 4,35,6 на 18 сутки и затем падал до 2,32,6 на 28 сутки (табл. 2). Оценочные коэффициенты для линейного члена Т и квадратного члена Т 2 составляют 0,028 и 0,0012 соответственно (табл. 3). Эти два значения статистически значимо отличаются от 0 (р = 0,030 и 0,013 соответственно). Данные наблюдения означают,что имеется значимая положительная тенденция в изменении пролиферативного ответа на антиген Candida. Пролиферативный ответ вначале возрастает, а затем снижается, как показано на фиг. 1 а. В группе плацебо проявляется малое изменение в течение периода исследования. Оценочные коэффициенты регрессии для Т и Т 2 составляют 0,017 и 0,0007. Данные значения не являются значимо отличными от 0 (р = 0,232 и 0,208 соответственно). Данные наблюдения означают,что в течение периода исследования не имеется значимого изменения пролиферативного ответа в контрольной группе. Как показано на фиг. 1 а,кривая для группы плацебо является более плоской, чем кривая для группы ACTIMEL. Несмотря на то, что для группы ACTIMEL показано наличие значимой траектории, разница между двумя кривыми не достигает уровня статистической достоверности (р = 0,540 для Т и р = 0,458 для Т 2, табл. 3). Столбняк. В группе ACTIMEL ответ постепенно возрастает от фонового уровня в течение 18 суток,и затем падает. Оценочные коэффициенты регрессии для Т и Т 2 составляют 0,043 и 0,0011,соответственно (табл. 3). Эти два значения значимо отличаются от 0 (р = 0,001 и 0,020 соответственно). Как и в случае Candida, позитивное изменение пролиферативного ответа в течение периода времени исследования является значимым в группе ACTIMEL. В группе плацебо среднее значение возрастало от 7,3 на 0 сутки до 11,8 на 9 сутки, затем падало до 7,9 на 18 сутки,и снова возрастало до 8,7 на 28 сутки (фиг. 1b). Даже при наличии незначимого коэффициента для члена второго порядка Т 2 (-0,0008, р = 0,141,табл. 3), значимый оценочный коэффициент ТACTIMEL с группой плацебо, статистические тесты не показывают каких-либо достоверных различий между двумя кривыми (р = 0,630 и 0,626 для Т и Т 2 соответственно). Грипп. В группе ACTIMEL проявляются более четкие изменения, нежели в группе плацебо. Среднее значение возрастало от 1312,6 на 0 сутки до 19,717,1 на 9 сутки, оставалось на данном уровне до 18 суток и затем падало до 13,912,7 на 28 сутки (фиг. 1 с). Два оценочных коэффициента для Т и Т 2 значимо отличаются от нуля (р = 0,001). Данные статистические показатели указывают на то, что позитивное изменение пролиферативного ответа в течение периода исследования является значимым (табл. 2). В группе плацебо проявлялись изменения,сходные с теми, что наблюдались в случае столбняка. Средние значения возрастали на 9 сутки, падали на 18 сутки и снова возрастали на 28 сутки, как проиллюстрировано на фиг. 1 с. Два оценочных коэффициента регрессии значимо не отличаются от 0 (значения р составляют 0,181 и 0,475 для Т и Т 2 соответственно), указывая на то, что изменения пролиферативного ответа на антиген гриппа не характеризуются достоверной траекторией. При сравнении оценочных параметров группы ACTIMEL и группы плацебо наблюдали значимые различия как для линейных параметров, так и для параметров второго порядка (р = 0,045 для Т и р = 0,027 для Т 2) (табл. 3). Данные выводы указывают на то, что изменения пролиферативного ответа двух групп исследования являются достоверно различными. Пример 2. Действие Lactobacillus casei на пролиферацию субполяций Т-лимфоцитов в ответ на стимуляцию антигеном гриппа. Конкретная природа Т-субпопуляции(й),которая(ые) отвечает(ют) на микробные антигены in vitro, неизвестна. Каждая из конкретных субпопуляций Т-лимфоцитов, таких как те, что представлены фенотипамиCD3+CD4+,CD3+CD8+, CD3+CD25+ и CD3+CD45+, может считаться первичным реагирующим элементом,или данные субпопуляции в комбинации могут участвовать в общем пролиферативном ответе на стимулирующие антигены. Предполагая, что конкретные субпопуляции лимфоцитов являются главными элементами, реагирующими на стимулирующие антигены, с использованием статистической модели,описанной выше в примере 1, проводили анализы субпопуляций Т-клетокCD3+CD4+,CD3+CD8+, CD3+CD25+ и CD3+CD45+, для определения того, является ли пролиферативный ответ, полученный для каждой из данных 4 субпопуляций, достоверно различным в группах 11 В данных анализах значения пролиферативного ответа, изначально основанные на общем количестве РВМС, для каждой субпопуляции конвертировали в новые значения, вычисленные согласно общей частоте встречаемостиCD3+CD45+ Т-клеток в каждой пробе крови. На следующей стадии проводили статистический анализ для каждой субпопуляции, как описано выше в примере 1. Средние значения, стандартные отклонения и медианы каждой из групп плацебо и ACTIMEL, приведенные для четырех субпопуляций лимфоцитов, даны ниже в табл. 4. Таблица 4 Различия между фоновыми значениями двух групп исследования не было статистически значимым. С использованием статистической модели,описанной выше в примере 1, для каждой из четырех субпопуляций лимфоцитов анализировали изменения пролиферации относительно данных фоновых значений в ответ на антиген гриппа. На фиг. 2 в логарифмической шкале проиллюстрированы изменения пролиферации в каждой из данных субпопуляций и в каждой из двух групп исследования. Результаты статистического моделирования приведены ниже в табл. 5. Таблица 5 12 Пролиферативные ответы каждой из четырех субпопуляций лимфоцитов согласуются с таковыми, наблюдаемыми на всех РВМС. В течение воздействия антигена гриппа наблюдаются значимые изменения в группе ACTIMEL четырех субпопуляций лимфоцитов. Данные изменения могут быть представлены в виде функции времени второго порядка. Наблюдались малые изменения четырех субпопуляций в группе плацебо. Кроме того, различия между двумя группами были достоверными для всех субпопуляций лимфоцитов. Заключение Данные результаты показывают, что для 3 тестируемых антигенов характерно повышение пролиферативного ответа, индуцированное антигенной стимуляцией, которое было выше в группе ACTIMEL по сравнению с группой плацебо. В случае антигена гриппа данное повышение в группе ACTIMEL является статистически достоверным по сравнению с наблюдаемым в группе плацебо, как для всех РВМС, так и для субпопуляций Т-клетокACTIMEL индуцировало у рассмотренных субъектов иммунологическое примирование invivo на микробные антигены и, в особенности,на антигены вируса гриппа, который был выражен лучше, чем наблюдаемый в группе плацебо. Данное повышение ответа коррелирует с частотой и статусом активации СD3+-Т-клеток и их субпопуляций у субъектов группыACTIMEL. Кроме того, положительная корреляция с наличием маркера активации CD25 позволяет предполагать участие активации in vivo специфичных для гриппа Т-клеток, экспрессирующих СD25-рецепторы к IL-2, и способных более эффективно отвечать на антигены гриппа. По анализу субпопуляций Т-клеток можно также предполагать, что в пролиферативном ответе возможно участвуют субпопуляции CD4+ иCD8+, соответствующие антигену гриппа. Значимость при анализе пролиферации Тсубпопуляции СD3+/CD8+ позволяет предполагать возможность примирования in vivo группы специфичных для гриппа цитотоксических СD8+-клеток. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение бактериального штамма вида L. casei для получения композиции, которая может вводиться перорально, для воздействия на пролиферацию Т-клеток, специфичных в отношении антигенов патогенных микроорганизмов, для усиления специфического системного иммунного ответа на патогенный микроорганизм. 2. Применение по п.1, характеризующееся тем, что указанный патогенный микроорганизм представляет собой патоген дыхательных путей. 3. Применение по любому из пп.1 и 2, характеризующееся тем, что указанный патогенный микроорганизм представляет собой вирус,выбранный из риновирусов, респираторносинцитиального вируса и миксовирусов. 4. Применение по п.3, характеризующееся тем, что указанный вирус представляет собой вирус гриппа. 14 5. Применение по любому из пп.1-4, характеризующееся тем, что указанный штамм L.casei представляет собой штамм CNCM I-1518. 6. Применение по любому из пп.1-5, характеризующееся тем, что указанная композиция существует в виде продукта питания или пищевой добавки. 7. Применение по любому из пп.1-6, характеризующееся тем, что указанная композиция существует в виде кисло-молочного продукта.