Способ получения водной фармацевтической композиции, включающей активный ингредиент, в высшей степени нерастворимый в воде

1 Данное изобретение относится к способу получения водной фармацевтической композиции, включающей активный ингредиент, в высшей степени нерастворимый в воде. В частности, оно относится к способу получения фармацевтической композиции, в которой активный ингредиент диспергирован в липосомах. Проводятся большие исследования для разработки новых способов получения липосомальных препаратов в области фармацевтики. Однако возникает много трудностей, особенно с активными ингредиентами, практически не растворимыми в воде, в частности, растворимость которых в воде составляет 0,01% (маc./об.). Фактически, применяемый в настоящее время способ получения липосом, содержащих активные ингредиенты, имеющие низкую растворимость в воде, включаетa) солюбилизирование активного ингредиента и заранее выбранных фосфолипидов в подходящем органическом растворителе, например,хлороформе;b) выпаривание этого растворителя при пониженном давлении для получения активного ингредиента/фосфолипидной пленки;c) добавление второго органического растворителя, например, трет-бутилового спирта;d) замораживание раствора, полученного при температуре жидкого азота;f) гидратацию лиофилизированного раствора с буферным раствором для получения суспензии многослойных липосом (MLV); иg) обработку этой суспензии ультразвуком для получения суспензии более мелких липосом(SUV). Пример этого способа описан A. Sharma et(1994). Однако недостаток этого способа заключается в том, что он очень трудоемкий и ведет к присутствию следов органических растворителей в липосомах. Однако указанные авторы, исследовав различные способы получения многослойных липосом, такие как гидратация сухих липидных пленок (ручное встряхивание), оттаивание и различные способы, такие как экструзия и обработка ультразвуком для последующего уменьшения (последующая обработка) размера липосом (MLV - SUV) сделали заключение о том,что способ, подробно описанный выше и включающий указанные фазы а)-g), является наиболее приемлемым (loc, cit. стр.890, правая колонка, строки 51-57). Однако указанные авторы не описывают, как первый способ получения многослойных липосом и второй способ уменьшения размера липосом могут сочетаться друг с другом.WO-A-96 40064, ЕР-А-0 578 629, DE-A-4 038 075 и DE-А-4 430 593 описывают фармацевтические композиции, в которых активный ин 002281 2 гредиент, не растворимый в воде, диспергирован в липосомах. Таким активным ингредиентом является циклоспорин А, мелатонин и, соответственно, таксол. Однако ни один из вышеупомянутых документов не описывает способ получения водной композиции липосомы, объединяющий замораживание и оттаивание с экструзией. Неожиданно было обнаружено, что замораживание и оттаивание в сочетании c экструзией обеспечивают получение композиций водных липосом активных ингредиентов, имеющих растворимость в воде 0,01% (маc./об.), без применения какого-либо органического растворителя. В данном описании и формуле изобретения активные ингредиенты, имеющие растворимость в воде 0,01% (маc./об.), определяются как "в высшей степени нерастворимые в воде". Типичными примерами активных ингредиентов, в высшей степени нерастворимых в воде,являются следующие: лонидамин (растворимость: 3 х 10-6 г/мл),мелатонин ("практически не растворимый", G.S.(растворимость: 1x10-4 г/мл). Липосомы композиций в соответствии с данным изобретением предпочтительно состоят из компонента, выбранного из группы, включающей фосфоглицериды, глицериды, диглицериды, триглицериды, фосфолипиды, галактозильные и глюкозильные липиды, холестерин и его производные, сфинголипиды и их смеси. Более предпочтительно, они состоят из фосфолипидов. В соответствии со способом, согласно настоящему изобретению получают липосомальные композиции, включающие фосфатидилхолин, лизофосфатидилхолин, N-ацилфосфатидилхолин, фосфатидил этаноламин, фосфатидилсерин, сфингомиелин, неполярные липиды,триглицериды, свободные жирные кислоты, DL-токоферол. Обычно размер липосом в соответствии с данным изобретением составляет менее 500 нм,предпочтительно, 50-250 нм. Целью настоящего изобретения является разработка способа получения водной фармацевтической композиции. Заявленный способ получения фармацевтической композиции с активным ингредиентом, имеющим растворимость в воде не выше 0,01 % (маc./об.), диспергированным в липосомах, включает следующие стадии:a) диспергирование активного ингредиента в липидах при температуре 20-30 С;b) суспендирование полученной дисперсии в водной фазе;c) выдерживание суспензии при температуре окружающей среды в течение 0-48 ч;d) замораживание при температуре от -15 до -200 С;g) фильтрация через фильтрующую мембрану с порами, имеющими диаметр 500-1000 нм;h) экструзия через мембрану с порами,имеющими диаметр 50-400 нм; и одновременно;i) удаление незахваченного активного ингредиента. Продолжительность фазы с) зависит от количества активного ингредиента, в высшей степени нерастворимого в воде, накапливаемого в липосомах. Поэтому у специалиста в данной области не возникает никаких трудностей, поскольку несколько простых рутинных экспериментов определят правильное время для каждого типа активного ингредиента и липосомальной композиции. Водная фаза преимущественно состоит из водного раствора хлористого натрия в количестве 0,05-0,9% (маc./об.). Обычно количество используемого липида составляет 0,01-0,4 вес.ч. на каждую весовую часть водного раствора. В свою очередь, количество активного ингредиента обычно составляет 0,01-0,3 вес.ч. на каждую весовую часть липида. Обычно диспергирующим устройством служит гомогенизатор типа "Ultraturrax ". Обычно экструзию осуществляют с применением сжатого воздуха или инертного газа,выбранного из группы, включающей азот, гелий и аргон, в качестве экструзионного газа. Предпочтительным инертным газом является гелий. В экструзионной фазе давление предпочтительно составляет 500-5500 кРа, а температура 2075 С, более предпочтительно, 40-65 С. Типичными примерами подходящих экструдеров являются экструдеры типа "Lipex BiomembranesThermobarrel" или "Emulsiflex CC Avestin" с фильтрами, имеющими поликарбонатные мембраны Costar с размером пор 50-600 нм. Обычно фазу h) повторяют, по меньшей мере, дважды и не более 8 раз, предпочтительно, 6 раз. Нижеследующие примеры иллюстрируют данное изобретение, никоим образом не ограничивая его. Пример 1. 100 мг мелатонина диспергируют в 1 г фосфолипида при 30 С в течение 10 мин, применяя гомогенизатор типа "Ultraturrax ". Сразу же после этого дисперсию суспендируют в 10 мл водного раствора хлористого натрия в количестве 0,9% (маc./об,) с примене 002281 4 нием указанного гомогенизатора, а затем нагревают в водяной бане при 55 С в течение 20 мин. Полученную таким образом суспензию подвергают следующему циклу охлаждения и нагревания:- охлаждение в жидком азоте в течение 1 мин,- нагревание до 55 С до тех пор, пока фосфолипиды не станут полностью жидкими. Этот цикл повторяют 6 раз. Суспензию дважды пропускают через фильтр 0,6 мкм в устройстве "Lipex Biomembrane". Таким образом получают суспензию "больших многослойных везикул" (MLV), которую подвергают 6 циклам непрерывной экструзии с применением 10-мл экструдера типа "Lipex Biomembranes ExtruderThermobarrel" с 0,1-мкм поликарбонатными фильтрами "Costar" при 55 С, используя гелий в качестве экструзионного газа, при давлении 100-4800 кРа. В результате вышеописанных операций получают три партии продукта (LM/186,LM/188 и LM/190). Эти партии подвергают следующим исследованиям:- количество мелатонина в водной липосомальной композиции (анализ ВЭЖХ);- количество мелатонина, накопленного в липосомах. Нижеследующая таблица показывает измеряемые параметры и их значение: Параметры Размер липосом Количество мелатонина Полученные данные представлены в табл. 1,показывающей:- концентрацию мелатонина, полученную в водном липосомальном составе, выраженную в виде средней величины для трех партий,8,05 х 10-3 г/мл;- средний размер липосом в трех партиях составляет 93 нм;- накопленное количество, выраженное в виде средней величины для трех партий, составляет 80,5 мкг/мг;- в составах не происходит агрегации липосом. Таблица 1 Количество, опреде- Средний Накопленное ленное в результате размер количество ВЭЖХ (мг/мл)LM/190 7,9 98 79 Выражено в виде мкг лекарственного средства на мг использованных фосфолипидов. Партии 5 Анализ ВЭЖХ проводят в соответствии со следующей процедурой:- детектирование: УФ 254 нм. Два вида приборов используют для анализа среднего размера липосом; 1) DELSA 440 Coulter,2) классификатор частиц "NICOMP Submicron" модель 370. Процедура является следующей:a) для анализов, проводимых с применением прибора 1), 1 мл липосомальной суспензии разбавляют 10 мл водного раствора хлористого натрия, содержание которого составляет 0,9%b) для анализов, проводимых с применением прибора 2), 0,5 мл раствора а) разбавляют 10 мл водного раствора хлористого натрия, содержание которого составляет 0,9% (маc./об.). Пример 2. Повторяют процедуру, описанную в примере 1, используя 2 г фосфолипида и 50 мг лонидамина вместо 1 г фосфолипида и 100 мн мелатонина. Таким образом получают три партии продукта (LM/195, GN/1L и GL/2L). Полученные данные представлены в табл. 2, показывающей,что- концентрация лонидамина в водной композиции изменилась с первоначальной величины растворимости, составляющей 3 х 10-6 г/мл, на среднюю величину для трех партий, составляющую 3,83 х 10-3 г/мл;- средний размер липосом для трех партий составляет 79,6 нм;- накопленное количество, выраженное в виде средней величины для трех партий, составляет 19,2 мкг/мг;- в составах не происходит агрегации липосом. Таблица 2 Количество, опреде- Средний Накопленное ленное в результате размер количество ВЭЖХ (мг/мл)GN/2L 4,54 76 22,7 Выражено в виде мкг лекарственного вещества на мг использованных фосфолипидов. Партии Пример 3. Повторяют процедуру, описанную выше в примере 1, используя 2 г фосфолипида и 200 мг мелатонина вместо 1 г фосфолипида и 100 мг мелатонина. Таким образом получают три партии продукта (GN/1M, GN/2M и GN/3M). Полученные данные представлены в табл. 3, показывающей,что- концентрация мелатонина в водном липосомальном составе, выраженная в виде средней величины для трех партий, составляет 13,5 х 10-3 г/мл;- средний размер липосом для трех партий составляет 92,6 нм;- накопленное количество, выраженное в виде средней величины для трех партий, составляет 67,6 мкг/мг;- в составах не происходит агрегации липосом. Таблица 3 Количество, опре- СреднийНакопленное деленное в резульразмер количество тате ВЭЖХ (мг/мл)GN/3M 16,03 98 80,15 Выражено в виде мкг лекарственного вещества используемых фосфолипидов. Партии Пример 4. Повторяют процедуру, описанную выше в примере 2, за исключением того, что для экструзии применяют поликарбонатную мембрану размером 0,2 мкм, а не 0,1 мкм. Таким образом получают три партии продукта (GN/3L, GN/4L и GN/5L). Полученные данные представлены в табл. 4, показывающей, что в увеличение количества лонидамина с 20 до 50 мг, фосфолипида с 1 до 2 г и применение для экструзии мембраны размером 0,2 мкм вместо 0,1 мкм, приводит к существенному повышению концентрации лонидамина в водной композиции в соответствии с примером 2. Фактически, средняя величина концентрации лонидамина составляет 4,47 х 10-3 г/мл. Таблица 4 Количество, опреде- Средний Накопленное ленное в результате размер количество ВЭЖХ (мг/мл)GN/5L 4,75 109 23,75 Выражено в виде мкг лекарственного вещества используемых фосфолипидов. Партии Пример 5. 20 мг циклоспорина А диспергируют в 1 г фосфолипида при 30 С в течение 10 мин с применением гомогенизатора типа "Ultraturrax". Сразу же после этого дисперсию суспендируют в водном растворе хлористого натрия в количестве 0,9% (мас./об.) с применением указанного гомогенизатора, а затем нагревают в водяной бане при 65 С в течение 20 мин. Полученную таким образом суспензию подвергают следующему циклу охлаждения и нагревания:- охлаждение в жидком азоте в течение 1 мин,- нагревание до 65 С до тех пор, пока фосфолипиды не станут полностью жидкими. Этот цикл повторяют 6 раз. 7 Суспензию дважды пропускают через фильтр 0,6 мкм фильтров в приборе "Lipex Biomembrane". Таким образом получают суспензию больших многослойных везикул (MLV), которую подвергают 6 циклам непрерывной экструзии с применением 10-мл экструдера типа "Lipex Biomembrane Extruder Thermobarrel" с 0,1-мкм поликарбонатными фильтрами "Costar" при 65 С, используя гелий в качестве экструзионного газа при давлении 10004800 кРа. Таким образом получают три партии продукта (LM/416A, LM/416B и LM/416C). Полученные данные представлены в табл. 5,показывающей, что- концентрация циклоспорина А в водном липосомальном составе, выраженная в виде средней величины для трех партий, составляет 0,96 х 10-3 г/мл;- средний размер липосом в трех партиях составляет 103 нм;- накопленное количество, выраженное в виде средней величины для трех партий, составляет 9,6 мкг/мг;- в составах не происходит агрегации липосом. Таблица 5 Количество, опреде- Средний Накопленное ленное в результате размер количество ВЭЖХ (мг/мл)LM/416C 0,98 107 9,8 Выражено в виде мкг лекарственного вещества используемых фосфолипидов. Партия Пример 6. Повторяют процедуру, описанную выше в примере 1, применяя 2 г фосфолипидов и 50 мг биндарита вместо 1 г фосфолипидов и 100 мг мелатонина. Таким образом получают три партии продукта (LM/356, LM/357 и LM/358). Полученные данные представлены в табл. 6,показывающей, что- концентрация биндарита в водной липосомальной композиции изменилась с первоначальной величины растворимости, составляющей 1 х 10-4 г/мл, на среднюю величину для трех партий, составляющую 4 мг/мл;- средний размер липосом для трех партий составляет 108,3 нм;- накопленное количество, выраженное в виде средней величины для трех партий, составляет 20,2 мкг/мг;- в составах не происходит агрегации липосом. Таблица 6 Партии Количество, опре- Средний Накопленное деленное в резульразмер количество тате ВЭЖХ (мг/мл)LM/358 4 106 20 Выражено в виде мкг лекарственного вещества на мг использованных фосфолипидов. 8 Пример 7. 30 мг циклоспорина А диспергируют в 2 г фосфолипида при 30 С в течение 10 мин с применением гомогенизатора типа "Ultraturrax". Сразу же после этого дисперсию суспендируют в водном растворе хлористого натрия в количестве 0,9% (мас./об.) с применением указанного гомогенизатора и оставляют при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Затем полученную суспензию нагревают в водяной бане при 65 С в течение 20 мин. Полученную таким образом суспензию подвергают следующему циклу охлаждения и нагревания:- охлаждение в жидком азоте в течение 1 мин,- нагревание до 65 С до тех пор, пока фосфолипиды не станут полностью жидкими. Этот цикл повторяют 6 раз. Суспензию дважды пропускают через фильтр 0,6 мкм в приборе "Lipex Biomembrane". Таким образом получают суспензию больших многослойных везикул (MLV), которую подвергают 6 циклам непрерывной экструзии с применением 10-мл экструдера типа"Lipex Biomembrane Extruder Thermobarrel" с 0,1-мкм поликарбонатными фильтрами "Costar" при 65 С, используя гелий в качестве экструзионного газа при давлении 1000-4800 кРа. Таким образом получают три партии продукта (LM/422a, LM/422b и LM/422c). Полученные данные представлены в табл. 7, показывающей, что- концентрация циклоспорина А в водном липосомальном составе, выраженная в виде средней величины для трех партий, составляет 3 мг/мл;- средний размер липосом в трех партиях составляет 119,5 нм;- накопленное количество, выраженное в виде средней величины для трех партий, составляет 15 мкг/мг;- в составах не происходит агрегации липосом. Таблица 7 Количество, опреде- Средний Накопленное ленное в результате размер количество ВЭЖХ (мг/мл)LM/422 с 2,8 119 14 Выражено в виде мкг лекарственного вещества используемых фосфолипидов. Партии ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения водной фармацевтической композиции с активным ингредиентом,имеющим растворимость в воде не выше 0,01%(мас./об.), диспергированным в липосомах, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:a) диспергирование этого активного ингредиента в липидах при температуре 20-30 С;b) суспендирование этой дисперсии в водной фазе;c) выдерживание этой суспензии при температуре окружающей среды в течение 0-48 ч;d) замораживание при температуре от -150 до -200 С;g) фильтрация через фильтрующую мембрану с порами, имеющими диаметр 500-1000 нм;h) экструзия через мембрану с порами,имеющими диаметр 50-400 нм; и одновременноi) удаление не захваченного активного ингредиента. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что водная фаза состоит из водного раствора хлористого натрия в количестве 0,05-0,9% (маc./об.). 10 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем,что количество используемых липидов составляет 0,01-0,4 вес.ч. на каждую весовую часть воды. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что количество используемого активного ингредиента составляет 0,01-0,3 вес.ч. на каждую весовую часть липидов. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся применением на стадии h) экструзионного газа, выбранного из группы, включающей воздух, азот, гелий и аргон. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что экструзионный газ имеет давление, составляющее 500-5500 кРа. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что стадию h) проводят при температуре, составляющей 20-75 С. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что температура составляет 40-65 С. 9. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что стадию h) повторяют, по меньшей мере, дважды и не более 8 раз.