Лекарственный препарат для терапевтического лечения вирусного гепатита

1 Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям для перорального введения,содержащим природный интерферон человека, выделенный из лимфобластных клеток или лейкоцитов. Более конкретно, эти композиции могут быть использованы для лечения вирусных инфекций, а в частности,вирусного гепатита, опухолей, и синдромов иммунодефицита. Эффективные дозы интерферона в этих композициях значительно ниже, чем дозы, используемые для парентерального введения.-, -, -интерфероны обычно вводят путем инъекций и используют для терапевтического лечения. Наиболее широко используемым интерфероном является -интерферон (HowardMetal. Le Scienze n/311 vol. LIII 72-80, 1994). В существующих в настоящее время лекарственных препаратах, предназначенных для лечения острого или хронического вирусного гепатита-интерферон как единственный терапевтический агент. Термин "вирусный гепатит" означает, по крайней мере, пять различных патологий, вызываемых различными агентами, а именно, А, В,С, D, Е. Общим направлением терапевтического лечения является лечение указанных патологий-интерфероном, дозы которого зависят от вида гепатита, общего состояния пациента и от других меняющихся факторов. Обычно, при лечении интерфероном, у больных хроническим гепатитом (B, C, D) достигается почти нормализация клинических и биохимических параметров. Однако при остром гепатите, активность интерферона пока не является эффективной, хотя при гепатите С, терапевтическое лечение интерфероном позволяет снижать скорость перехода этого заболевания в хроническое состояние. Циклы терапевтического лечения предусматривают подкожное введение через день рекомбинантного -интерферона (г -IFN) в дозах около 5.000.000 ед., которые в конкретных случаях могут достигать до 9.000.000 ед./день. Продолжительность циклов терапевтического лечения составляет от около шести месяцев до одного года (в среднем девять месяцев). Во многих случаях, нежелательные побочные эффекты заставляют прервать курс терапевтического лечения. Фактически, некоторые пациенты, а особенно те, у которых наблюдается прогрессирующая стадия заболевания, или тяжелые физиологические расстройства, не выдерживают такого лечения, а поэтому это лечение должно быть прекращено. Указанными побочными эффектами являются: повышенная температура, тошнота, рвота, усталость, боли и депрессия. 2 Кроме того, стоимость такого лечения непосредственно связана с использованием больших количеств активного ингредиента (каждый год более чем 8.000 новых случаев заболевания в Италии и 300.000 во всем мире), и с необходимостью госпитализации в результате возникновения побочных эффектов при парентеральном введении (дневной стационар или амбулаторное лечение). И, наконец, в случае прогрессирующего активного вирусного гепатита, альтернативой к лечению интерфероном является лишь трансплантация печени. Клиническое лечение направлено на увеличение дозировки и продолжительности терапевтического цикла (Kasahora А.К., et al., Hepatology; 21, 291-297, (1995), однако клинические данные (см. Paoletti A. Et al., clin. Ter. 146(5),343-349, 1995), указывают на тяжелые побочные эффекты, низкую переносимость этого лечения пациентами и высокую стоимость лечения. Garcia и др. (Garcia De Ancos J.L. et al., J.Hepatol. 11:s11-s18, 1990), сообщают, что, по оценкам специалистов, стоимость лечения для каждого пациента составляет 700.000-2.000.000 английских фунтов. Capri S. сообщает (Capri S. AdisIntern., Milano, pp.41-49, 1994), что стоимость каждого терапевтического лечения интерфероном составляет 70.000.000 итал. лир на пациента. Отсюда можно сделать вывод, что существующий препарат интерферона, предназначенный для лечения гепатита, не является оптимальным. Кроме того, клинические результаты свидетельствуют о лучшей терапевтической эффективности в случае тех пациентов, которые не имеют острую потребность в такой терапии, а именно: у молодых индивидуумов; у индивидуумов на начальной стадии заболевания, у индивидуумов, инфицированных генотипичным вирусом 2 или 3; и у индивидуумов с низким уровнем виремии. В противоположность этому,меньший терапевтический эффект может быть получен в случае тех индивидуумов, которые реально нуждаются в терапевтическом лечении(индивидуумы с низкой иммунной восприимчивостью), например, индивидуумы, страдающие агрессивной формой заболевания (активным хроническим гепатитом), индивидуумы с продолжительным течением заболевания, т.е. свыше 50 случаев. Таким образом, те пациенты,которые нуждаются в немедленном лечении интерфероном, имеют более низкие шансы на выздоровление (см. Bianchi F.B., la rivista delmedico pratico, ott.; 1995). Авторами настоящей заявки была разработана фармацевтическая композиция, содержащая природный -интерферон человека, выделенный из лимфобластов или лейкоцитов, и предназначенный для перорального введения в дозах, которые значительно ниже, чем дозы, 3 обычно используемые для парентерального введения. Эта композиция сохраняет физикохимические, биологические и фармакологические свойства активного ингредиента неизменными и обладает терапевтическим действием, в основном, аналогичным действию известных композиций, но, при этом, не имеет недостатков, свойственных стандартным композициям. Эту композицию предпочтительно изготавливают в жидкой форме с концентрацией 100-500 ед./мл, предпочтительно около 150 ед./мл, более предпочтительно, в виде унифицированных стандартных доз, а наиболее предпочтительно в дозах около 1 мл. Указанная композиция действует путем активации механизмов защиты организма против вирусных инфекций и против роста опухолей, и стимулирует иммунный ответ. Для большей гарантии успешного лечения,вместо рекомбинантного интерферона, полученного путем клонирования одного подтипа,было выбрано использование природного интерферона. Хотя интерфероны лейкоцитов и лимфобластов обладают одними и теми же терапевтическими свойствами, однако, интерферон лейкоцитов может оказаться более предпочтительным. Дело в том, что его получают из стабилизированных клеточных линий, не прибегая к помощи доноров. Способ очистки интерферонов известен специалистам, и описан, например, в патенте США 4732683; в работе Cantel К.Hirvonen S.Texas Report on Biology and Medicina, Vol. 35, p. 138, 1977; и в работе Zoon К.С. et al., Science 207, р. 527, 1980. В основном, пероральное введение лучше переносится пациентами; позволяет более легко разрабатывать схемы введения и дозировки; снижает риск возникновения аллергических реакций вплоть до его устранения; индуцирует механизм передачи и амплификации сигнала; и дает прекрасный терапевтический эффект, при этом, используемые дозы в 100 раз ниже, чем дозы известных препаратов для парентерального введения. Такие низкие дозы устраняют риск возникновения побочных токсических эффектов, и делают их более доступными для лечения с точки зрения удовлетворения возрастающих требований и резкого снижения стоимости лечения. Предпочтительный препарат, полученный в форме стандартных доз в виде небольших объемов (1 мл) для питья делает активное вещество быстро доступным; дает хороший стандарт стерильности благодаря использованию исходной емкости с однократными дозами; позволяет точно определить выбранную дозу; обеспечивает поглощение активного вещества, непосредственно адсорбируемого слизистой оболочкой 4 ротовой части глотки; способствует легкому,без усилий, проглатыванию; а также обеспечивает легкий и безопасный способ введения для всех пациентов с высоким шансом проглатывания, в отличие от таблеток или пастилок, которые должны содержаться во рту до их полного растворения. Кроме того, композицию настоящего изобретения удобно использовать для лечения в домашних условиях или на рабочем месте в качестве профилактических мер в борьбе с вирусными патологиями, а также для лечения хронических заболеваний, которые требуют продолжительных циклов терапии (даже ежегодных), и которые часто рецидивируют. Эта композиция может быть использована также в сочетании с другими лекарственными средствами для достижения синергического действия и оптимизации терапевтических схем. Нижеследующие клинические исследования продемонстрировали терапевтический эффект. Перед началом пероральной терапии индивидуумов, страдающих гепатитом или другими патологиями, с использованием природного-интерферона человека, были проведены сравнения электрофоретической картины белка и концентраций IgG, IgA, IgM за две недели до и через две недели после терапевтического лечения, которые позволили сделать качественноколичественную оценку иммунного ответа индивидуумов. Индивидуумы, восприимчивые к терапии с использованием доз 450 ед./день, обнаруживали снижение уровней 2- и -глобулинов, IgG, отношения IgG/IgA, и одновременное увеличение концентраций IgA и IgM; имели хорошие показатели на удаление антигена HBVe и на изменение сероспецифичности, а именно, на установление стабильной ремиссии этой патологии. С другой стороны, индивидуумы, являющиеся восприимчивыми к подобной терапии со снижением концентрации альбумина в сыворотке, IgG, IgA, IgM, с одновременным увеличением 1-глобулиновой фракции, должны быть подвержены серологической конверсии в течение более длительного периода времени. Кроме того, индивидуумы, которые обладают восприимчивостью с увеличением уровнейIgG, и отношения IgG/lgA, и одновременно со снижением IgM и отношения IgA/IgM, должны быть резистентными к этой терапии. Прослеживание этих параметров (маркеров) может быть использовано для разработки схем терапевтического лечения в клиниках, а также для врача-клинициста. Клинические исследования, проведенные на здоровых индивидуумах В табл. 1 представлены различные терапевтические схемы. Таблица 1 Взятие проб крови А 1(3dsg) 450 UI 1T0,T1,T2,T3,Т 4,dB плацебо Т 5,Т 6,Т 7 где Т 0 = фон; T1 = 1-й день после первого введения; Т 2 = 2-ой день после первого введения, Т 3 = 3 ий день после первого введения, Т 4 = 4-ый день после первого введения, Т 5 = 5-ый день после первого введения, Т 6 = 1-ый день после введения суспензии, Т 7 = 2-ой день после введения суспензии; 3dsg = 3 дозы; 1dsg = 1 доза; UI = ед.; placebo - плацебо. Эксп. Изменение индуцированного биологического ответа в зависимости от терапевтической схемы измеряли на образцах крови, взятых в различное время. В частности, измеряли активность в зависимости от дня введения дозы активного вещества, одноразового или многократного введения, и от продолжительности терапевтического цикла. Анализ данных показал, что природный интерферон человека, полученный от лимфобластов или от лейкоцитов и введенный в низких дозах пероральным способом, способен модулировать (в зависимости от дозы и продолжительности терапевтического цикла) экспрессию мембранного антигена в мононуклеарных клетках крови здорового индивидуума. В частности,очевидно, что в зависимости от терапевтической схемы, фармацевтическая композиция способна увеличить популяцию CD4- и CD8-клеток. Наблюдалась также повышенная экспрессия маркеров клеточной активации, таких как антигеныDR и рецептор интерлейкина-2. Как показано в табл. 2 и 3, наилучшие результаты дала терапевтическая схема с использованием дозы 450 ед./день 5 д. (эксп. b). Действительно, наблюдалось увеличение (% и абсолютное) CD3-, CD4-, DR1-, CD25-лимфоцитов. Такое увеличение наблюдалось в различных случаях, больше всего в дни Т 3, Т 4, T5, с последующим снижением в дни Т 6 и Т 7. Та же самая схема введения доз, но с более коротким терапевтическим циклом (1 день)(эксп. a), менее явно влияла на % и абсолютное число мононуклеарных клеток в крови (табл. 4 и 5). Действительно, в этом эксперименте, увеличение среднего процента, но не абсолютного уровня Т-, CD8-лимфоцитов, и лимфоцитов,взаимодействующих с антигеном главного ком Дозы плекса гистосовместимости класса II, наблюдалось на день Т 3. Другие условия эксперимента давали меньшее увеличение иммунного ответа. Поэтому, было показано, что природный-интерферон человека, полученный либо от лимфобластов, либо от лейкоцитов и вводимый в низких дозах пероральным способом, играет важную роль в модуляции иммунного ответа,как в афферентной, так и эфферентной фазе, и имеет терапевтическое применение для лечения инфекционных заболеваний и других состояний иммунодефицита. Клинические исследования индивидуумов,страдающих гепатитом Вирусный гепатит В. 14 пациентов в возрасте от 4 до 59 лет,страдающих хроническим гепатитом В, принимали участие в рандомизированных исследованиях. Все эти пациенты ранее лечились стероидами или стероидазотиопурином в различные периоды времени от нескольких месяцев до нескольких лет, однако, при этом, ни по клинической симптоматике, ни по биохимическим параметрам заболевания не наблюдалось улучшения, а в некоторых случаях развивался цирроз печени. Терапевтическое лечение путем однократного введения 150 ед./день было начато сразу после прекращения предыдущего лечения, и эффект этого введения прослеживали путем контроля за любыми изменениями иммунного ответа, гематологических и биохимических параметров, сывороточных маркеров вирусной инфекции, и гистохимии образцов, взятых при биопсии печени. Время наблюдения варьировалось от 15 до 32 месяцев, и полученные результаты могут быть систематизированы следующим образом: 1) в течение первых 3-6 недель лечения у всех пациентов был зарегистрирован кратковременный спад биохимических функций печени (т.е. наблюдалось 2-3-кратное увеличение уровней аланинаминотрансферазы (ALT, без ухудшения клинических симптомов заболевания; 2) это явление продолжалось в течение 4-6 недель,3) у всех подвергшихся лечению пациентов наблюдалась интенсивная активация иммунной системы, даже после терапевтического лечения; 4) у 7 пациентов наблюдалось исчезновение ДНК HBV и НВсАg в сыворотке и стабильная серологическая конверсия; 5) у одного пациента обнаруживался повышенный титр НВсАg, т.е. выше, чем исходное значение; 6) у остальных 9 пациентов указанный титр был значительно снижен. Поэтому можно сделать вывод, что у 50% пациентов наблюдалась стабильная ремиссия заболевания. 8 Вирусный гепатит С. Стандартная терапия вирусного гепатита С предусматривает использование -интерферона путем парентерального введения. 6 пациентов с активным хроническим гепатитом С подвергались терапевтическому лечению путем перорального введения дозы интерферона 150 ед./день, причем это лечение начинали сразу после прекращения стероидной терапии. Время наблюдения (равное продолжительности лечения) варьировалось от 19 до 69 недель. В основном, все пациенты обнаруживали хорошую переносимость лечения, и у всех этих пациентов было зарегистрировано значительное повышение жизненных сил и аппетита, а также лучшая выносливость к физическим нагрузкам. В течение всего периода наблюдения, у тех пациентов, которые прекращали лечение на 19 неделе из-за суставных болей, не наблюдалось нормализации уровней трансаминазы, за исключением одного пациента, у которого была зарегистрирована биохимическая и клиническая ремиссия заболевания. Полученные результаты представлены в табл. 2-5.LIII 72-80 (1994). 2) Saracco G., Rizzetto M. Biomed. Pharmacother. 49 (2),55-57 (1995). 3) Kasahara А.К., et al., Hepatology; 21.,291-297 (1995). 4) Paoletti A. et al.; Clin. Ter. 146(5), 343349 (1995). 5) Garcia De Ancos J.L. et al.; J. Hepatol. 11:sll-sl8 (1990). 6) Capri S. Adis International, Milano, pp 4149 (1994). 7) Bianchi F.B., La rivista del medico pratico,Ott. (suppl.5) (1995). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение природного -интерферона человека для изготовления лекарственного препарата в жидкой форме для перорального введения в дозах, составляющих 100-500 ед./день,для терапевтического лечения вирусного гепатита у человека и животных. 2. Применение природного -интерферона человека по п.1, отличающееся тем, что интерферон человека получен из лимфобластных клеточных культур. 3. Применение природного -интерферона человека по п.1, отличающееся тем, что интерферон человека получен из лимфоцитов. 4. Применение природного -интерферона человека по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что лекарственный препарат вводят в виде разовых унифицированных доз, составляющих около 1 мл. 5. Лекарственный препарат в жидкой форме для перорального введения, содержащий природный -интерферон человека, полученный из лимфобластных клеточных культур или из лимфоцитов, в концентрации от 100 ед./мл до 500 ед./мл, для терапевтического лечения вирусного гепатита у человека и животных.