Препарат, защищающий печень при гепатите

1 Изобретение относится к фармакологии, а именно к разработке комбинации антиоксидантов (АО), необходимых для нормального функционирования организма, обладающих гепатопротекторной активностью. Известен антиоксидант -токаферола ацетат (витамин Е), применяющийся в эксперименте и клинике как средство патогенетической терапии токсического и вирусного гепатита [1,2, 3, 4, 5]. Известно также, что витамин Е, являясь стабилизатором мембран гепатоцитов, обладает слабой гепатопротекторной активностью. Витамин Е выбран нами в качестве прототипа. Цель изобретения - создание комбинации антиоксидантов, взаимосвязанных в обмене,обеспечивающих синергизм и потенцирование эффекта и проявляющих свойства гепатопротекторов, т.е. лекарственных средств, защищающих печень от острой печеночной недостаточности, возникающей как при моделировании ее поражения, подобного при вирусном гепатите, с помощью D-галактозамина гидрохлорида,так и при моделировании токсического гепатита хлорированными углеводородами (CCl4 и хлоксилом). Сущность изобретения заключается в том,что препарат, защищающий печень при гепатите, включающий витамин Е, дополнительно содержит убихинон-9 или -10 и селенит натрия при следующих весовых соотношениях ингредиентов в расчете на 1 кг массы тела: Витамин Е 1 мг 100 мг Убихинон-9 или -10 1 мг - 100 мг Селенит натрия 0,01 мг - 0,1 мг В результате применения предложенного препарата происходит торможение первоначальных пусковых молекулярных механизмов повреждения клеточных мембран, обеспечивающих нормальное функционирование клетки,а также процессы анаболизма и стимуляцию иммунных механизмов. Повышение эффективности лечения гепатита связано с применением комбинации природных веществ, абсолютно необходимых для нормального функционирования организма,тесно взаимосвязанных в обмене, а именно регулирующих окислительные процессы в клетках, стабилизирующих субклеточные и клеточные мембраны гепатоцитов, улучшающих и нормализирующих детоксирующую, экскреторную и белоксинтетическую функции печени, а также стимулирующих клеточный иммунитет. Улучшение детоксирующей и экскреторной функций печени комбинацией убихинонов-9(Q9) или -10 (Q10) , витамина Е (-токоферола ацетат) и селенита натрия (Na2SeO3) связано с нормализацией функционирования микросомальных монооксигеназ и цитохрома Р-450, а также усилением синтеза белка гранулярной цитоплазматической сетью гепатоцитов (5). Приведенный экспериментальный материал в 2 таблицах 1 - 4 подтверждает более высокую гепатопротекторную активность у комбинации АО: убихинона-9 или -10, витамина Е и селенита натрия по сравнению с каждым из них в отдельности при поражении печени хлорированными углеводами: CCl4, хлоксилом и Dгалактозамина гидрохлоридом. Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что АО: убихиноны-9 или -10, витамин Е и селенит натрия, вводимые крысам в курсовых дозах, ограничивают процесс цитолиза гепатоцитов, снижая в 2-3 раза активность ферментов АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы (гистидазы) в сыворотке крови. Комбинации, включающие убихиноны-9 или -10 селенит натрия и витамин Е проявляют потенцирование эффекта,т.е. снижают активность ферментов маркеров цитолиза гепатоцитов практически до контрольного уровня. Необходимо отметить, что в контроле, т.е. у интактных животных, активность фермента гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови не определяется, т.е. соответствует нулю. При поражении печени хлорированными углеводородами: CCl4, хлоксилом и Dгалактозамина гидрохлоридом его активность в крови резко возрастает. Появление активности гистидазы - фермента, катализирующего дезаминирование аминокислоты гистидина, свидетельствует о катаболическом пути обмена белка,а также снижении синтеза белка и содержания альбуминов в сыворотке крови. Сами АО: убихиноны-9 или -10, витамин Е, селенит натрия и их комбинации не вызывают появления активности гистидазы в сыворотке крови крыс. На основании морфологических исследований печени нами установлено, что природные АО: витамин Е, убихиноны-9 или -10 и селенит натрия уменьшали выраженность деструктивных процессов в гепатоцитах, ускоряли в них компенсаторные и репаративные процессы. При этом лечебно-профилактический эффект витамина Е выражался в уменьшении жировой дистрофии и распространенности центролобулярных некрозов. Антинекротический эффект убихинонов-9 или -10 был выражен более значительно, чем у витамина Е. Антинекротический эффект селенита натрия был наивысшим. Электронно-микроскопическое исследование, проведенное в динамике, выявило лишь незначительные изменения в цитоплазматической сети (ЦС) и митохондриях (Мх) центролобулярных гепатоцитов. Эти изменения выражались в вакуолизации и некоторой дегрануляции ЦС. Далее отмечались признаки усиления компенсаторнорегенераторных процессов в гепатоцитах, особенно выраженных в гранулярной цитоплазматической сети (ГЦС). Все мембранные структуры были четко контурированы, однако проявлялась чуть более выраженная гипертрофия и гиперплазия Мх и органелл белкового синтеза. При комбинированном применении АО компенсаторно-регенераторные процессы в гепатоци 3 тах выражены особенно четко со стороны ГЦС и Мх. Наиболее выраженным защитным действием при поражении печени CCl4 и хлоксилом, а также D-галактозамина гидрохлоридом обладают комбинации антиоксидантов, содержащие витамин Е, убихиноны-9 или -10 и селенит натрия. Таким образом, электронно-микроскопическая картина гепатоцитов свидетельствует не только об усилении защитного действия тройных комбинаций АО, проявляющегося в сохранении целостности клеточных и субклеточных мембран, но и об активации компенсаторнорегенераторных процессов в гепатоцитах. При исследовании на светооптическом уровне площади некрозов при поражении печени CCl4 , хлокислом (2 г/кг) и D-галактозамина гидрохлоридом уменьшаются тройными комбинациями АО более значительно, чем АО, примененными в отдельности. Указанные природные АО и их комбинации восстанавливали детоксицирующую функцию печени, угнетенную CCl4 , хлоксилом и Dгалактозамина гидрохлоридом, они укорачивали длительность гексеналового сна, удлиненного этими веществами, и повышали содержание цитохрома Р-450 - основного компонента системы микросомальных монооксигеназ в печени,ответственного за метаболизм ксенобиотиков(таблицы 2 и 3). Эти результаты подтверждаются данными электронной микроскопии,выявившими уменьшение деструктивных процессов, а также гипертрофию и гиперплазию ГЦС и АЦС в светлых центролобулярных гепатоцитах, ответственных за антитоксическую функцию печени. АО и их комбинации восстанавливали экскреторную функцию печени, угнетенную CCl4,хлоксилом и D-галактозамина гидрохлоридом. Выявлено, что селенит натрия более эффективно, чем убихинон-9 или -10, а также витамин Е,ускорял элиминацию БСФ из крови животных во все сроки наблюдений. Он восстанавливал экскреторную функцию печени при поражении ее ССl4 на 28-е сутки, в то время как убихинон-9 или -10, а также витамин Е не восстанавливали ее к этому сроку (таблица 4). Восстановление экскреторной функции печени под влиянием селенита натрия при поражении печени хлоксилом наблюдалось на 21-е сутки, а при поражении D-галактозамина гидрохлоридом - на 7-е сутки. В эти же сроки восстанавливали экскреторную функцию печени при поражении ее хлоксилом и D-галактозамина гидрохлоридом убихиноны-9 или-10 и витамин Е (таблица 4). Убихиноны-9 или -10 в 5 раз более активно улучшали экскрецию БСФ из крови кроликов,пораженных как хлорированными углеводородами, так и D-галактозамина гидрохлоридом,исходя из изоэффективности применяемых доз,однако полное восстановление ими экскреторной функции печени наблюдалось в те же сроки,что и при действии витамина Е. Наиболее вы 000210 4 раженным гепатопротекторным эффектом обладали комбинации антиоксидантов, содержащие в своем составе селенит натрия, они проявляли потенцирование эффекта. Наивысшая активность наблюдалась у комбинаций АО: убихинонов-9 или -10; витамина Е и селенита натрия,которые восстанавливали экскреторную функцию печени при поражении ее CCl4 и хлоксилом в более ранние сроки (21-е и 7-е сутки), а при поражении D-галактозамина гидрохлоридом даже на 3-и сутки. Таким образом, синергические отношения убихинонов-9 или -10 и витамина Е и селенита натрия при комбинированном их применении приводят к усилению фармакотерапевтического эффекта. Комбинирование указанных АО, взятых в строго определенных дозах ведет к возрастанию мембраностабилизирующего их эффекта, что проявляется в нормализации активности цитоплазматических ферментов АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови, уменьшении или отсутствии некротических и дистрофических изменений гепатоцитов, восстановлении метаболической (детоксицирующей) и экскреторной функции печени, а также активации компенсаторнорегенеративных процессов в гепатоцитах. Сущность изобретения поясняется следующими примерами. Пример 1. Крысам массой тела от 150,0 до 250,0 г,с поражением печениDгалактозамином, близким по патогенезу вирусному гепатиту, вводили комбинацию антиоксидантов, состоящую из убихинонов-9 или -10 в дозе 1 мг/кг, витамина Е в дозе 1 мг/кг, селенита натрия в дозе 1 мкг/кг. На первые сутки после затравки животных (срок максимального поражения печени) комбинация антиоксидантов, в указанных дозах, проявила потенцирование гепатопротекторного эффекта, обнаружив уменьшение цитолиза гепатоцитов примерно в 2 раза(активность АлАТ, АсАТ, гистидазы, морфологические изменения), улучшение детоксицирующей (метаболической) функции печени примерно в 1,3-2 раза (цитохром Р-450, гексеналовый сон) и незначительное улучшение экскреторной функции (элиминация бромсульфалеина из крови). Пример 2. Крысам массой тела от 150,0 до 250,0 г, с поражением печени D-галактозамина гидрохлоридом, близким по патогенезу вирусному гепатиту, вводили комбинацию антиоксидантов, состоящую из убихинонов-9 или -10 в дозе 100 мг/кг, витамина Е в дозе 1300 мг/кг,селенита натрия в дозе 100 мкг/кг. На первые сутки после затравки животных (срок максимального поражения печени) комбинация антиоксидантов, в указанных дозах, не проявила гепатопротекторного эффекта по всем исследованным тестам (цитолиз гепатоцитов - активность АлАТ, АсАТ, гистидазы: морфология печени; детоксицирующая и экскреторная функция печени). 5 Таким образом, при применении комбинации антиоксидантов (убихиноны-9 или -10, витамин Е, селенит натрия) в качестве гепатопротекторного лекарственного средства необходимо строго придерживаться найденных эффективных доз антиоксидантов и их соотношения. ФОМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 6 личающийся тем, что препарат дополнительно содержит убихинон-9 или -10 и селенит натрия при следующих весовых соотношениях в расчете на 1 кг массы тела: Витамин Е 1-100 мг Убихинон-9 или -10 1-100 мг Селенит натрия 0,01-0,1 мг Препарат, защищающий печень при вирусном гепатите, включающий витамин Е, от Влияние убихинонов-9, -10 (Q9; Q10), витамина Е (Е), селенита натрия (Se) и их комбинаций на активность ферментов аланинаспартатаминотрансфераз (АлАТ, АсАТ) и гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс в срок максимального поражения печени CCl4, хлоксилом и D-галактозамина гидрохлоридом Влияние антиоксидантов: витамина Е, убихинонов -9 и -10 (Q9; Q10), селенита натрия (Se) и их комбинаций на длительность гексеналового сна у крыс в срок максимального поражения печени CCl4, хлоксилом, D-галактозамином (ДГА) Таблица 2 Длительность гексеналового сна (мин) Статисти Препарат ческий по 3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки казатель 1 Контроль-"40,33,7 42,51,5 41,02,0 Восстановление антиоксидантами: витамином Е, убихинонами-9, -10, селенитом натрия и их комбинациями детоксирующей функции печени по показателю содержания цитохрома Р-450 в печени, пораженной хлорированными углеродами и D-галактозамина гидрохлоридом Таблица 3 Содержание цитохрома Р-450, нМоль/мг белка Стат. показаСтат. пока Препарат 1 час 1 сутки 3 сутки 7 сутки тель затель 1 Контроль (интаМm 2,10,13 2,120,14 2,150,12 2,140,14 ктные животные) 2 Восстановление антиоксидантами: витамином Е, убихинонами-9,-10, селенитом натрия и их комбинациями экскреторной функции печени, пораженной CCl4, хлоксилом и D-галактозамина гидрохлоридом ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ: 1. Малиновская В.В. "Возрастные особенности системы интерферона". Дисс. на соиск. д.м.н., Москва, 1985. 2. Фролов В.М., Пересадин Н.А., Декалюк И.В., Пшеничный И.Я. "Коррекция токаферола ацетатом и спленином иммунологических нарушений у больных вирусным гепатитом В". Ж. Врачебное дело, 1992 (4), с.90-91. 3. Фролов М.В., Пересадин Н.А., СидороваB.C., Германов В.Т., Пустовой Ю.Г. "Применение реоферона и антиоксидантов при хроническом гепатите у детей". Ж. Педиатрия, 1992,4-6, с. 60-62. 4. Рейзис А.Р., Малиновская В.В., Шехаде С., Дроидина А.К., Маркарян А.С., Назаренко И.В., Михайлов М.И. "Сочетанное применение рекомбинантного альфа-2-интерферона (реаферона) и антиоксидантов в лечении хронического вирусного гепатита у детей". Ж. Материнство и детство, 1992, 37 (6-7), с. 29-31. 5. Виноградова Л.Ф. "Патогенетические механизмы токсического и аллергического поражений печени и экстремальная фармакотерапия антиоксидантами: витамином Е, убихиноном, селенитом натрия и их комбинациями". Дисс. на соиск. уч. степени д-ра биол. наук.М.,1990.