Антитела против il-22ra, их партнеры по связыванию и способы их применения при воспалениях
Номер патента: 9026
Опубликовано: 26.10.2007
Авторы: Сивакумар Паллавур В., Киндсвогель Уэйн, Чандрасекер Ясмин А., Диллон Стейси Р., Сюй Вэньфэн, Сиадак Энтони У., Ленер Джойс М., Мур Маргарет Д.
Формула / Реферат
1. Способ продуцирования антитела против полипептида, предусматривающий инокуляцию животного полипептидом, выбранным из группы:
(a) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 1 (Pro) до аминокислоты 6 (Asp);
(b) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 26 (Ser) до аминокислоты 32 (Pro);
(c) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 41 (Lys) до аминокислоты 47 (Asp);
(d) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, простирающейся от аминокислоты 49 (Val) до аминокислоты 62 (Cys);
(e) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 41 (Lys) до аминокислоты 62 (Cys);
(f) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 84 (Ala) до аминокислоты 97 (Ser);
(g) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 103 (Thr) до аминокислоты 108 (Asp);
(h) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 130 (Arg) до аминокислоты 135 (His);
(i) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 164 (Gly) до аминокислоты 166 (Lys);
(j) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 175 (Tyr) до аминокислоты 179 (Glu);
(k) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 193 (Lys) до аминокислоты 196 (Ala);
(l) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 203 (Lys) до аминокислоты 209 (Thr);
(m) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3; и
(n) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:4,
где указанный полипептид вырабатывает иммунный ответ у животного путем продуцирования антитела; и выделение указанного антитела из указанного животного, где указанное антитело специфически связывается с полипептидом IL-22RA (SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3) и снижает активность либо IL-20 (SEQ ID NO:8), либо IL-22 (SEQ ID NO:6).
2. Способ по п.1, где указанное антитело, продуцированное указанным способом, снижает провоспалительную активность либо IL-20 (SEQ ID NO:8), либо IL-22 (SEQ ID NO:6).
3. Способ по п.1, где указанное антитело, продуцированное указанным способом, нейтрализует взаимодействие либо IL-20 (SEQ ID NO:8), либо IL-22 (SEQ ID NO:6) с IL-22RA (SEQ ID NO:2).
4. Способ по п.3, где нейтрализацию указанным антителом определяют путем детекции нейтрализации либо IL-20 (SEQ ID NO:8), либо IL-22 (SEQ ID NO:6) в клеточном анализе на нейтрализацию in vitro.
5. Способ по п.1, где указанное антитело, продуцированное указанным способом, снижает провоспалительную активность IL-20 (SEQ ID NO:8) и IL-22 (SEQ ID NO:6).
6. Способ по п.1, где указанное антитело, продуцированное указанным способом, нейтрализует взаимодействие IL-20 (SEQ ID NO:8) и IL-22 (SEQ ID NO:6) с IL-22RA (SEQ ID NO:2).
7. Способ по п.3, где нейтрализацию указанным антителом определяют путем детекции нейтрализации IL-20 (SEQ ID NO:8) и IL-22 (SEQ ID NO:6) в клеточном анализе на нейтрализацию in vitro.
8. Антитело, продуцированное способом по п.1, где указанное антитело связывается с полипептидом SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3, и антитело дополнительно включает водорастворимый полимер.
9. Способ по п.2, где антителом, продуцированным указанным способом, является (а) поликлональное антитело, (b) мышиное моноклональное антитело, (с) гуманизованное антитело, происходящее от антитела (b), (d) фрагмент антитела или (е) человеческое моноклональное антитело.
10. Способ по п.2, где антитело, продуцированное указанным способом, дополнительно включает радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу или токсин.
11. Способ по п.9, где антитело дополнительно включает полиэтиленгликоль.
12. Способ по п.5, где антителом, продуцированным указанным способом, является (а) поликлональное антитело, (b) мышиное моноклональное антитело, (с) гуманизованное антитело, происходящее от антитела (b), (d) фрагмент антитела или (е) человеческое моноклональное антитело.
13. Способ по п.5, где антитело, продуцированное указанным способом, дополнительно включает радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.
14. Способ по п.12, где антитело дополнительно включает полиэтиленгликоль.
15. Антитело или фрагмент антитела, которые связываются с полипептидом, содержащим последовательность аминокислотных остатков, представленную в SEQ ID NO:3, и снижают провоспалительную активность либо IL-20 (SEQ ID NO:8), либо IL-22 (SEQ ID NO:6), где антитело дополнительно включает водорастворимый полимер.
16. Антитело или фрагмент антитела по п.15, где указанное антитело или указанный фрагмент антитела снижает провоспалительную активность IL-20 (SEQ ID NO:8) и IL-22 (SEQ ID NO:6).
17. Антитело или фрагмент антитела по п.15, где указанным антителом или фрагментом антитела является (а) поликлональное антитело, (b) мышиное моноклональное антитело, (с) гуманизованное антитело, происходящее от антитела (b), (d) фрагмент антитела или (е) человеческое моноклональное антитело.
18. Антитело или фрагмент антитела по п.15, где указанное антитело дополнительно включает радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.
19. Антитело по п.17, которое дополнительно включает полиэтиленгликоль.
20. Антитело или фрагмент антитела по п.16, где указанным антителом или фрагментом антитела является (а) поликлональное антитело, (b) мышиное моноклональное антитело, (с) гуманизованное антитело, происходящее от антитела (b), (d) фрагмент антитела или (е) человеческое моноклональное антитело.
21. Антитело или фрагмент антитела по п.16, где указанное антитело дополнительно включает радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.
22. Антитело по п.20, где антитело дополнительно включает полиэтиленгликоль.
23. Способ подавления или ингибирования IL-22-индуцированной или IL-20-индуцированной пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток и предшественников гемопоэтических клеток, где указанный способ предусматривает культивирование клеток костного мозга или периферической крови с композицией, содержащей антитело, указанное в п.3, в количестве, достаточном для подавления пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток в клетках костного мозга или периферической крови, по сравнению с клетками костного мозга или периферической крови, культивируемыми в отсутствии указанного антитела.
24. Способ по п.23, где указанными гемопоэтическими клетками и предшественниками гемопоэтических клеток являются лимфоидные клетки.
25. Способ по п.24, где указанными лимфоидными клетками являются макрофаги или Т-клетки.
26. Способ ослабления IL-22-индуцированного или IL-20-индуцированного воспаления у млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему количества композиции, включающей антитело, определенное в п.3, которое ослабляет воспаление.
27. Способ подавления или ингибирования IL-22-индуцированной и IL-20-индуцированной пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток и предшественников гемопоэтических клеток, где указанный способ предусматривает культивирование клеток костного мозга или периферической крови с композицией, содержащей антитело, определенное в п.5, т количестве, достаточном для подавления пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток в клетках костного мозга или периферической крови, по сравнению с клетками костного мозга или периферической крови, культивируемыми в отсутствии указанного антитела.
28. Способ по п.27, где указанными гемопоэтическими клетками и предшественниками гемопоэтических клеток являются лимфоидные клетки.
29. Способ по п.28, где указанными лимфоидными клетками являются макрофаги или Т-клетки.
30. Способ ослабления IL-22-индуцированного и IL-20-индуцированного воспаления у млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему количества композиции, включающей антитело, продуцированное способом по п.5, которое ослабляет воспаление.
31. Способ подавления или ингибирования IL-22-индуцированной и IL-20-индуцированной пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток и предшественников гемопоэтических клеток, где указанный способ предусматривает культивирование клеток костного мозга или периферической крови с композицией, содержащей антитело или фрагмент антитела по п.15 в количестве, достаточном для подавления пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток в клетках костного мозга или периферической крови, по сравнению с клетками костного мозга или периферической крови, культивируемыми в отсутствии указанного антитела или фрагмента антитела.
32. Способ по п.31, где указанными гемопоэтическими клетками и предшественниками гемопоэтических клеток являются лимфоидные клетки.
33. Способ по п.32, где указанными лимфоидными клетками являются макрофаги или Т-клетки.
34. Способ ослабления IL-22-индуцированного и IL-20-индуцированного воспаления, предусматривающий введение млекопитающему количества композиции, включающей антитело или фрагмент антитела по п.15, которое ослабляет воспаление.
35. Способ подавления или ингибирования IL-22-индуцированной и IL-20-индуцированной пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток и предшественников гемопоэтических клеток, где указанный способ предусматривает культивирование клеток костного мозга или периферической крови с композицией, содержащей антитело или фрагмент антитела по п.16 в количестве, достаточном для подавления пролиферации или дифференцировки гемопоэтических клеток в клетках костного мозга или периферической крови, по сравнению с клетками костного мозга или периферической крови, культивируемыми в отсутствии указанного антитела.
36. Способ по п.35, где указанными гемопоэтическими клетками и предшественниками гемопоэтических клеток являются лимфоидные клетки.
37. Способ по п.36, где указанными лимфоидными клетками являются макрофаги или Т-клетки.
38. Способ ослабления IL-22-индуцированного и IL-20-индуцированного воспаления, предусматривающий введение млекопитающему количества композиции, включающей антитело или фрагмент антитела, определенного в п.3, которое ослабляет воспаление.
39. Способ подавления воспалительного ответа у млекопитающего, предусматривающий:
(1) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке;
(2) введение композиции, содержащей антитело, определенное в п.3, в фармацевтически приемлемом носителе;
(3) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке после введения композиции;
(4) сравнение уровня амилоидного белка А в сыворотке на стадии (1) с уровнем амилоидного белка А в сыворотке на стадии (3), где отсутствие увеличения или снижения уровня амилоидного белка А в сыворотке является показателем подавления воспалительного ответа.
40. Способ подавления воспалительного ответа у млекопитающего с воспалением, предусматривающий:
(1) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке;
(2) введение композиции, содержащей антитело, определенное в п.5, в фармацевтически приемлемом носителе;
(3) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке после введения композиции;
(4) сравнение уровня амилоидного белка А в сыворотке на стадии (1) с уровнем амилоидного белка А в сыворотке на стадии (3), где отсутствие увеличения или снижения уровня амилоидного белка А в сыворотке является показателем подавления воспалительного ответа.
41. Способ подавления воспалительного ответа у млекопитающего с воспалением, предусматривающий:
(1) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке;
(2) введение композиции, содержащей антитело по п.15, в фармацевтически приемлемом носителе;
(3) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке после введения композиции;
(4) сравнение уровня амилоидного белка А в сыворотке на стадии (1) с уровнем амилоидного белка А в сыворотке на стадии (3), где отсутствие увеличения или снижения уровня амилоидного белка А в сыворотке является показателем подавления воспалительного ответа.
42. Способ подавления воспалительного ответа у млекопитающего с воспалением, предусматривающий:
(1) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке;
(2) введение композиции, содержащей антитело по п.16, в фармацевтически приемлемом носителе;
(3) определение уровня амилоидного белка А в сыворотке после введения композиции;
(4) сравнение уровня амилоидного белка А в сыворотке на стадии (1) с уровнем амилоидного белка А в сыворотке на стадии (3), где отсутствие увеличения или снижения уровня амилоидного белка А в сыворотке является показателем подавления воспалительного ответа.
43. Способ лечения млекопитающего, страдающего воспалительным заболеванием, в патогенезе которого определенную роль играют IL-22 или IL-20, где указанный способ предусматривает введение антагониста IL-22 или IL-20 млекопитающему для ослабления воспаления, где указанный антагонист включает (i) антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид, которые специфически связываются с полипептидом или фрагментом полипептида IL-22RA (SEQ ID NO:3), или (ii) полипептид или фрагмент полипептида IL-22RA (SEQ ID NO:3), где воспалительная активность либо IL-22 (SEQ ID NO:6), либо IL-20 (SEQ ID NO:8) является сниженной.
44. Способ по п.43, где указанным заболеванием является хроническое воспалительное заболевание.
45. Способ по п.44, где указанным хроническим воспалительным заболеванием является хроническое воспалительное заболевание, включая воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, артрит, атопический дерматит или псориаз.
46. Способ по п.43, где указанным воспалительным заболеванием является острое воспалительное заболевание.
47. Способ по п.46, где указанное острое воспалительное заболевание включает эндотоксемию, сепсис, синдром токсического шока или инфекционное заболевание.
48. Способ по п.43, где указанное антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид дополнительно включают радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.
49. Способ лечения млекопитающего, страдающего воспалительным заболеванием, в патогенезе которого определенную роль играют IL-22 и IL-20, где указанный способ предусматривает введение антагониста IL-22 и IL-20 млекопитающему для ослабления воспаления, где указанный антагонист включает (i) антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид, которые специфически связываются с полипептидом или фрагментом полипептида IL-22RA (SEQ ID NO:3), или (ii) полипептид или фрагмент полипептида IL-22RA (SEQ ID NO:3), где воспалительная активность IL-22 (SEQ ID NO:6) и IL-20 (SEQ ID NO:8) является сниженной.
50. Способ по п.49, где указанным заболеванием является хроническое воспалительное заболевание.
51. Способ по п.50, где указанное хроническое воспалительное заболевание включает воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, артрит, атопический дерматит или псориаз.
52. Способ по п.49, где указанным заболеванием является острое воспалительное заболевание.
53. Способ по п.52, где указанное острое воспалительное заболевание включает эндотоксемию, сепсис, синдром токсического шока или инфекционное заболевание.
54. Способ по п.49, уфх указанное антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид дополнительно включают радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.
55. Антитело, включающее моноклональное антитело, которое специфически связывается с антигенным эпитопом человеческого IL-22RA (SEQ ID NO:3), из группы:
(a) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 1 (Pro) до аминокислоты 6 (Asp);
(b) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 26 (Ser) до аминокислоты 32 (Pro);
(c) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 41 (Lys) до аминокислоты 47 (Asp);
(d) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, простирающейся от аминокислоты 49 (Val) до аминокислоты 62 (Cys);
(e) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 41 (Lys) до аминокислоты 62 (Cys);
(f) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 84 (Ala) до аминокислоты 97 (Ser);
(g) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 103 (Thr) до аминокислоты 108 (Asp);
(h) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 130 (Arg) до аминокислоты 135 (His);
(i) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 164 (Gly) до аминокислоты 166 (Lys);
(j) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 175 (Tyr) до аминокислоты 179 (Glu);
(k) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 193 (Lys) до аминокислоты 196 (Ala);
(l) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, простирающейся от аминокислоты 203 (Lys) до аминокислоты 209 (Thr);
(m) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3; и
(n) эпитопа, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:4,
где указанное антитело снижает или нейтрализует активность либо человеческого IL-22 (SEQ ID NO:8), либо IL-20 (SEQ ID NO:6), и антитело дополнительно включает водорастворимый полимер.
56. Антитело по п.55, где указанное антитело снижает или нейтрализует активность человеческого IL-22 (SEQ ID NO:6) и IL-22 (SEQ ID NO:8).
57. Антитело по п.55, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из (а) мышиного моноклонального антитела, (b) гуманизованного антитела, происходящего от антитела (а), (с) фрагмента антитела или (d) человеческого моноклонального антитела.
58. Антитело по п.57, где указанное антитело дополнительно включает полиэтиленгликоль.
59. Антитело по п.56, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из (а) мышиного моноклонального антитела, (b) гуманизованного антитела, происходящего от антитела (а), (с) фрагмента антитела или (d) человеческого моноклонального антитела.
60. Антитело по п.59, где указанное антитело дополнительно включает полиэтиленгликоль.
61. Способ лечения патологического состояния у индивидуума, ассоциированного с активностью IL-22RA, где указанный способ предусматривает введение антитела по п.55 в количестве, эффективном для лечения указанного патологического состояния.
62. Способ по п.61, где указанным патологическим состоянием является хроническое воспалительное состояние.
63. Способ по п.62, где указанное хроническое воспалительное состояние включает воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, артрит, атопический дерматит или псориаз.
64. Способ по п.61, где указанным патологическим состоянием является острое воспалительное состояние.
65. Способ по п.64, где указанное острое воспалительное состояние включает эндотоксемию, сепсис, синдром токсического шока или инфекционное заболевание.
66. Способ лечения млекопитающего, страдающего воспалительным заболеванием, в патогенезе которого определенную роль играет IL-22RA, где указанный способ предусматривает введение антагониста IL-22RA млекопитающему для ослабления воспаления, где указанный антагонист включает антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид, которые специфически связываются с полипептидом или фрагментом полипептида IL-22RA (SEQ ID NO:3), и где указанная воспалительная активность является сниженной.
67. Способ по п.66, где указанным заболеванием является хроническое воспалительное заболевание.
68. Способ по п.67, где указанное хроническое воспалительное заболевание включает воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, артрит, атопический дерматит или псориаз.
69. Способ по п.66, где указанным заболеванием является острое воспалительное заболевание.
70. Способ по п.69, где указанное острое воспалительное заболевание включает эндотоксемию, сепсис, синдром токсического шока или инфекционное заболевание.
71. Способ по п.66, где указанное антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид дополнительно включают радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.
72. Способ по п.66, где указанное антитело, фрагмент антитела или связывающий полипептид дополнительно включают полиэтиленгликоль.
73. Способ ослабления воспаления, предусматривающий введение млекопитающему, страдающему таким воспалением, композиции антитела по п.55 в количестве, достаточном для ослабления воспаления.
Текст
009026 Уровень техники Цитокины представляют собой небольшие растворимые белки, которые опосредуют различные биологические эффекты, включая регуляцию роста и дифференциацию клеток многих типов (см., например, Arai et al., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); PaulSeder, Cell 76:241 (1994. Группу цитокинов составляют такие белки, как интерлейкины, интерфероны,колониестимулирующие факторы, факторы некроза опухоли и другие регуляторные молекулы. Так, например, человеческий интерлейкин-17 представляет собой цитокин, который стимулирует экспрессию интерлейкина-6, внутриклеточной адгезивной молекулы 1, интерлекина-8, гранулоцитарного макрофагального колониестимулирующего фактора и простагландина Е 2 и участвует в преимущественном созревании гемопоэтических предшественников CD34+ в нейтрофилы (Yao et al., J. Immunol. 155:5483(1995); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183:2593 (1996. Рецепторы, которые связываются с цитокинами, обычно состоят из одного или нескольких целых мембранных белков, которые связываются с цитокином с высокой аффинностью и передают сигнал события связывания с клеткой через цитоплазматические части некоторых рецепторных субъединиц. Цитокиновые рецепторы были разделены на несколько классов, исходя из сходства их внутриклеточных доменов, связывающихся с лигандом. Так, например, рецепторные цепи, ответственные за связывание и/или передачу интерферонового сигнала, являются членами семейства цитокиновых рецепторов классаII, на что указывает присутствие внутриклеточного домена 200, состоящего из 200 остатков. Продемонстрированная in vivo активность цитокинов и их рецепторов иллюстрирует клиническую эффективность и необходимость присутствия других цитокинов, рецепторов цитокинов, агонистов цитокинов и антагонистов цитокинов. Так, например, продемонстрированная активность in vivo семейства провоспалительных цитокинов иллюстрирует высокую клиническую эффективность антагонистов провоспалительных молекул и необходимость их получения. Настоящее изобретение направлено на получение антагонистов провоспалительных цитокинов IL-20 и IL-22. Такими антагонистами настоящего изобретения, которые могут блокировать, ингибировать, снижать, подавлять или нейтрализовать активностьIL-22 или IL-20, либо обоих IL-20 и IL-22, являются растворимые рецепторы IL-22RA и нейтрализующие антитела против IL-22RA. Кроме того, настоящее изобретение относится к использованию этих антагонистов для лечения воспалительного заболевания, а также к их композициям и способам получения. Подробное описание изобретения 1. Обзор По сравнению с другими изобретениями настоящее изобретение относится к новому применению растворимого рецептора, обозначаемого "Zcytor11" или "IL-22RA", и нейтрализующих антител против рецепторов цитокина IL-22RA. Настоящее изобретение также относится к фрагментам растворимого полипептида IL-22RA и к гибридным белкам, которые могут быть использованы для лечения человеческих воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Антитела против IL-22RA антитела и растворимые рецепторы IL-22RA настоящего изобретения, включая нейтрализующие анти-IL-22RА антитела, могут быть использованы для блокирования, ингибирования, снижения, подавления или нейтрализации активности IL-22 или IL-20, либо обоих IL-20 и IL-22, в целях лечения конкретных заболеваний человека, таких как псориаз, псориазный артрит, артрит, эндотоксемия, воспалительное заболевание кишечника(ВЗК), колит и другие описанные здесь воспалительные состояния. Иллюстративная нуклеотидная последовательность, кодирующая человеческий Zcytor11 (IL-22RA),представлена SEQ ID NO:1; а кодируемый полипептид представлен в SEQ ID NO:2. IL-22RA представляет собой субъединицу рецептора для IL-20 и IL-22. Zcytor11 (IL-22RA) описан в совместном патенте США 5965704, в совместной публикации WIPO WO 02/12345, и в публикации WIPO WO 02/072607. Анализ человеческого кДНК-клона, кодирующего IL-22RA (SEQ ID NO:1), выявил открытую рамку считывания, кодирующую 574 аминокислоты (SEQ ID NO:2), и включающую внеклеточный лигандсвязывающий домен, состоящий примерно из 211 аминокислотных остатков (остатки 18-228 SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3), трансмембранный домен, состоящий примерно из 23 аминокислотных остатков (остатки 229-251 SEQ ID NO:2), и внутриклеточный домен, состоящий примерно из 313 аминокислотных остатков(остатки 252-574 SEQ ID NO:2). Таким образом, молекулами настоящего изобретения являются полипептиды, включающие цитокинсвязывающий домен, содержащий аминокислотные остатки 18-228 SEQ IDNO:2, SEQ ID NO:3. В одном из вариантов растворимого рецептора настоящего изобретения указанный растворимый IL-22R присоединен к константной области тяжелой цепи (репрезентативный вариант представлен в SEQ ID NO:4). Для каждого специалиста очевидно, что границы этих доменов являются приблизительными. Возможна также делеция остатков у концов этих доменов. Как описано ниже, настоящее изобретение относится к отдельным полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 90%, или более чем на 95%, например на 96, 97, 98%, или более чем на 99% или более идентична стандартной аминокислотной последовательности 18-228 SEQ ID NO:2, которая также представлена как SEQ ID NO:3, где отдельный полипептид специфически связывается с антителом, которое, в свою очередь, специфически связывается с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3. Репрезентативными полипептидами являются полипептиды, содержащие либо-1 009026 аминокислотные остатки SEQ ID NO:2, либо аминокислотные остатки SEQ ID NO:3. Кроме того, настоящее изобретение также относится к отдельным полипептидами, описанным выше, которые связываются с IL-22 (например, последовательность человеческого полипептида IL-22 представлена в SEQ IDNO:6). Полинуклеотидная последовательность человеческого IL-22 представлена в SEQ ID NO:5. Полинуклеотидная последовательность мышиного IL-22 представлена в SEQ ID NO:10, а соответствующий полипептид представлен в SEQ ID NO:11. Настоящее изобретение также относится к отдельным описанным выше полипептидам, которые связываются с IL-20 (например, с последовательностью человеческого полипептида IL-20, представленной в SEQ ID NO:8; публикация WIPOWO 99/27103). Полинуклеотидная последовательность человеческого IL-20 представлена в SEQ ID NO:7. Настоящее изобретение также относится к отдельным полипептидам и к эпитопам, содержащим по крайней мере 15 смежных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3. Репрезентативными полипептидами являются полипептиды, которые либо содержат SEQ ID NO:3, его антигенный эпитоп или функциональный фрагмент, связывающийся с IL-20 или IL-22, либо состоят из них. Кроме того, настоящее изобретение также относится к отдельным полипептидам, описанным выше,которые связываются с IL-22 или IL-20, либо блокируют, ингибируют, снижают, подавляют или нейтрализуют их активность. Настоящее изобретение также относится к вариантам полипептидов IL-22RA, где аминокислотная последовательность указанного варианта полипептида идентична аминокислотным остаткам последовательности SEQ ID NO:3 по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 90%,или более чем на 95%, например на 96, 97, 98%, или более чем на 99% или более, и где любое различие между аминокислотной последовательностью варианта полипептида и соответствующей аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3 обусловлено одной или несколькими консервативными аминокислотными заменами. Такие консервативные аминокислотные замены описаны ниже. Кроме того, настоящее изобретение также относится к отдельным полипептидам, описанным выше, которые связываются с IL-22 или IL-20, либо блокируют, ингибируют, снижают, подавляют или нейтрализуют их активность. Настоящее изобретение, кроме того, относится к антителам и к фрагментами антител, которые специфически связываются с указанными полипептидами. Примерами антител являются нейтрализующие антитела, поликлональные антитела, мышиные моноклональные антитела, гуманизованные антитела,происходящие от мышиных моноклональных антител, и человеческие моноклональные антитела. Иллюстративные фрагменты антител включают F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv и минимальные распознающие компоненты. Нейтрализующие антитела, предпочтительно, связываются с IL-22RA так, что это приводит к блокированию, ингибированию, снижению, подавлению или нейтрализации взаимодействия IL20 и IL-22 с IL-22RA, при этом, такие нейтрализующие антитела против IL-22RA, которые блокируют,ингибируют, снижают, подавляют или нейтрализуют связывание либо IL-20 или IL-22 с IL-22RA, также входят в объем настоящего изобретения. То есть нейтрализующие антитела против IL-22RA могут либо связываться с каждым из IL-20 или IL-22 по отдельности, либо блокировать, ингибировать, снижать, подавлять или нейтрализовать их действие, либо они могут связываться одновременно как с IL-20, так иIL-22, либо блокировать, ингибировать, снижать, подавлять или нейтрализовать их действие. Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим носитель, пептид, полипептид или антитело,описанные в настоящем изобретении. Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемый носитель и по крайней мере один из таких экспрессирующих векторов,или рекомбинантный вирус, содержащий указанные экспрессирующие векторы. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемый носитель и описанные здесь полипептид или антитело. В настоящем изобретении также рассматриваются антиидиотипические антитела или фрагменты антиидиотипических антител, которые специфически связываются с антителом или с фрагментом антитела, которые, в свою очередь, специфически связываются с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3 или ее фрагмент. Репрезентативное антиидиотипическое антитело связывается с антителом, которое специфически связывается с полипептидом, состоящим из SEQ IDNO:3. Настоящее изобретение также относится к гибридным белкам, содержащим полипептид IL-22RA и иммуноглобулиновую часть. В таких гибридных белках иммуноглобулиновой частью может быть константная область тяжелой цепи иммуноглобулина, такая как человеческий Fc-фрагмент. Настоящее изобретение также относится к отдельным молекулам нуклеиновой кислоты, которые кодируют такие гибридные белки. Настоящее изобретение также относится к поликлональным и моноклональным антителам, которые связываются с полипептидами, содержащими внеклеточный домен IL-22RA, такой как мономерный, гомодимерный, гетеродимерный и мультимерный рецепторы, включая растворимые рецепторы. Кроме того, такие антитела могут быть использованы для ингибирования связывания лигандов IL-22RA, IL-22-2 009026 Кроме того, сверхэкспрессия или позитивная регуляция IL-22 и IL-20 проиллюстрирована в образцах, взятых у человека из области поражения псориазом, и из области поражения кожным атопическим дерматитом, что дает основание предположить, что IL-22, подобно IL-20, играет определенную роль в патологическом процессе развития человеческого псориаза, атопического дерматита или других воспалительных заболеваний кожи и эпителиальных тканей. Кроме того, как описано ниже, сверхэкспрессияIL-20 или IL-22 у трансгенных мышей приводила к уплотнению эпидермальной ткани и вовлечению в патологический процесс иммунных клеток, что является признаком псориазного фенотипа, и кроме того,инъекция IL-22 нормальным мышам приводила к уплотнению эпидермальной ткани и вовлечению в патологический процесс иммунных клеток, что является признаком псориазного фенотипа, который был устранен под действием антагониста растворимого рецептора IL-22RA2 (zcytor16; публикация WIPOIL-22 участвует в развитии псориаза, атопического дерматита или других воспалительных заболеваний кожи и эпителиальных тканей. Для терапевтического лечения воспалительных заболеваний могут быть использованы сами антагонисты активности IL-22 и IL-20, такие как растворимые рецепторы IL-22RA и антитела против этих рецепторов, включая моноклональные и нейтрализующие антитела против человеческого IL-22RA настоящего изобретения, а в частности, отдельные антагонисты к IL-22 и антагонисты кIL-20, и антагонисты как к IL-22, так и к IL-20, могут быть использованы для лечения псориаза. Кроме того, антагонисты активности IL-22, такие как растворимые рецепторы IL-22RA и антитела против этих рецепторов, включая моноклональные и нейтрализующие антитела против человеческого IL-22RA настоящего изобретения, могут быть использованы для терапевтического лечения других воспалительных заболеваний, например, для связывания с IL-22 и с IL-20 (с одним из них, либо с тем и другим), а также для блокирования, ингибирования, снижения, подавления или нейтрализации их действия, для лечения атопического дерматита, ВЗК, колита, эндотоксемии, артрита, ревматоидного артрита и псориазного артрита, респираторного заболевания взрослых (РЗВ), септического шока, недостаточности многих органов,воспалительного заболевания легких, такого как астма или бронхит, бактериальной пневмонии, псориаза,экземы, атопического и контактного дерматита, и воспалительного заболевания кишечника, такого как язвенный колит и болезнь Крона. Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут очевидны из нижеследующего подробного описания изобретения. Кроме того, различные работы, цитируемые ниже, во всей своей полноте приводятся в настоящее описание посредством ссылки. 2. Определения Ниже приводится подробное описание различных терминов. Нижеследующие определения терминов приводятся для лучшего понимания настоящего изобретения. Используемый здесь термин "нуклеиновая кислота" или "молекула нуклеиновой кислоты" означает полинуклеотиды, такие как дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) или рибонуклеиновая кислота(РНК), олигонуклеотиды, фрагменты, генерируемые с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), и фрагменты, генерируемые любым из таких способов, как лигирование, вырезание, обработка эндонуклеазой и обработка экзонуклеазой. Молекулы нуклеиновой кислоты могут состоять из мономеров, которые представляют собой природные нуклеотиды (такие как ДНК и РНК), или аналоги природных нуклеотидов (например, -энантиомерные формы природных нуклеотидов) или их комбинацию. Модифицированные нуклеотиды могут иметь альтерации в молекулах сахаров и/или в молекулах пиримидиновых или пуриновых оснований. Модификации в сахарах включают, например, замену одной или нескольких гидроксильных групп галогенами, алкильными группами, аминами и азидогруппами, либо сахара могут быть функционализированы с образованием простых эфиров или сложных эфиров. Более того, вся сахарная группа может быть заменена стерически подобными и электронно-подобными структурами, такими как аза-сахара и карбоциклические аналоги сахаров. Примерами модификаций оснований являются алкилированные пурины и пиримидины, ацилированные пурины или пиримидины или другие основания с хорошо известными заменами гетероциклическими группами. Мономеры нуклеиновой кислоты могут быть связаны фосфодиэфирными связями или аналогами таких связей. Аналогами фосфодиэфирных связей являются фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфоранилотиоат, фосфоранилидат, фосфорамидат и т.п. Термин "молекула нуклеиновой кислоты" также включает так называемые "связанные с пептидом нуклеиновые кислоты", которые содержат природные или модифицированные основания нуклеиновых кислот, присоединенные к полиамидному основу. Нуклеиновые кислоты могут быть либо одноцепочечными, либо двухцепочечными. Термин "комплемент молекулы нуклеиновой кислоты" означает молекулу нуклеиновой кислоты,имеющую, по сравнению со стандартной нуклеотидной последовательностью, комплементарную нуклеотидную последовательность и обратную ориентацию. Так, например, последовательность 5'ATGCACGGG 3' комплементарна 5'CCCGTGCAT 3'. Термин "вырожденная нуклеотидная последовательность" означает последовательность нуклеотидов, которая, по сравнению со стандартной молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид,включает один или несколько вырожденных кодонов. Вырожденные кодоны содержат различные триплеты нуклеотидов, но кодируют один и тот же аминокислотный остаток (то есть каждый из триплетовGAU и GAC кодирует Asp). Термин "структурный ген" означает молекулу нуклеиновой кислоты, транскрибируемую в матричную РНК (мРНК), которая затем транслируется в аминокислотную последовательность, характерную для данного конкретного полипептида. Термин "выделенная молекула нуклеиновой кислоты" означает молекулу нуклеиновой кислоты, которая не интегрирована в геномную ДНК организма. Так, например, молекула ДНК, кодирующая фактор роста, которая была отделена от геномной ДНК клетки, является изолированной молекулой ДНК. Другим примером изолированной (выделенной или отдельной) молекулы нуклеиновой кислоты является химически синтезированная молекула нуклеиновой кислоты, которая не интегрирована в геном организма. Молекула нуклеиновой кислоты, которая была выделена из организма конкретного вида, имеет меньший размер, чем полноразмерная молекула ДНК хромосомы данного организма. Термин "конструкция молекулы нуклеиновой кислоты" означает молекулу нуклеиновой кислоты,одноцепочечную или двухцепочечную, которая была модифицирована путем вмешательства человека, в результате чего она содержит объединенные и смежные сегменты нуклеиновой кислоты, расположенные в таком порядке, который не встречается в природе. Термин "линейная ДНК" означает некольцевые молекулы ДНК, имеющие свободный 5'- и 3'-концы. Линейная ДНК может быть получена из замкнутых кольцевых молекул ДНК, таких как плазмиды, путем ферментативного гидролиза или физического разделения. Термин "комплементарная ДНК (кДНК)" означает одноцепочечную молекулу ДНК, которая образуется из мРНК-матрицы под действием фермента обратной транскриптазы. Обычно, праймер, комплементарный фрагментам мРНК, используется для инициации обратной транскрипции. Для каждого специалиста также очевидно, что термин "кДНК" означает двухцепочечную молекулу ДНК, состоящую из такой одноцепочечной молекулы ДНК и ее комплементарной ДНК-цепи. Термин "кДНК" также означает клон молекулы кДНК, синтезированный из РНК-матрицы. Термин "промотор" означает нуклеотидную последовательность, которая регулирует транскрипцию структурного гена. Обычно, промотор локализован в 5'-некодируещей области гена, проксимальной к сайту инициации транскрипции структурного гена. Элементы последовательности внутри промоторов,которые функционируют как инициаторы транскрипции, часто характеризуются консенсусными нуклеотидными последовательностями. Такими промоторными элементами являются сайты связывания с РНКполимеразой, последовательности TATA, последовательности СААТ, элементы, специфичные к дифференцировке (DSE; McGehee et al., Mol. Endocrinol. 7:551 (1993, элементы, индуцирующие ответный сигнал с образованием циклического AMP (CRE), элементы сывороточного ответа (SRE; Treisman, Seminars in Cancer Biol. 1:47 (1990, элементы, опосредующие глюкокортикоидный ответ (GRE), и сайты связывания для других факторов транскрипции, таких как CRE/ATF (O'Reilly et al., J. Biol. Chem. 267:19938(1992, AP2 (Ye et al., J. Biol. Chem. 269:25728 (1994, SP1, белок, связывающейся с элементом, индуцирующий сАМР-ответ (CREB; Loeken, Gene Expr. 3:253 (1993 и октамерные факторы (в общих чертах,см. Watson et al., eds., Molecular Biology of the Gene, 4th ed. (The Benjamin/Cummings Publishing Company,Inc. 1987) и LemaigreRousseau, Biochem. J. 303:1 (1994. Если промотор является индуцибельным промотором, то скорость транскрипции повышается в ответ на действие индуцирующего агента. В противоположность этому, скорость транскрипции не регулируется индуцирующим агентом в том случае,если данный промотор является конститутивным промотором. Известны также репрессируемые промоторы."Коровый промотор" содержит главные нуклеотидные последовательности, необходимые для функционирования промотора, включая ТАТА-бокс и сайт инициации транскрипции. В соответствии с этим, коровый промотор может обладать, а может и не обладать, детектируемой активностью в отсутствии специфических последовательностей, которые могут усиливать активность или сообщать ткани специфическую активность. Термин "регуляторный элемент" представляет собой нуклеотидную последовательность, которая модулирует активность корового промотора. Так, например, регуляторный элемент может содержать нуклеотидную последовательность, которая связывается с клеточными факторами, обеспечивающими транскрипцию исключительно или преимущественно в конкретных клетках, тканях или органеллах. Регуляторные элементы таких типов обычно ассоциируются с генами, которые экспрессируются по "клеточно-специфическому", "тканеспецифическому" или "органелло-специфическому" механизму."Энхансер" представляет собой регуляторный элемент определенного типа, который может повышать эффективность транскрипции независимо от расстояния или ориентации данного энхансера по отношению к сайту инициации транскрипции. Термин "гетерологичная ДНК" означает молекулу ДНК или популяцию молекул ДНК, которые обычно не присутствуют в данной клетке-хозяине. Молекулы ДНК, гетерологичные по отношению к конкретной клетке-хозяину, могут содержать ДНК, происходящую от клетки-хозяина определенного вида (то есть эндогенную ДНК), при условии, что ДНК хозяина присоединена к ДНК, не принадлежащей данному хозяину (то есть к экзогенной ДНК). Так, например, молекула ДНК, содержащая ДНК-сегмент,не принадлежащий данному хозяину и кодирующий полипептид, функционально присоединенный к-4 009026 ДНК-сегменту данного хозяина, содержащему транскрипционный промотор, рассматривается как гетерологичная молекула ДНК. И наоборот, гетерологичная молекула ДНК может содержать эндогенный ген, функционально присоединенный к экзогенному промотору. В качестве другого примера может служить молекула ДНК, содержащая ген, происходящий от клетки дикого типа, и такая молекула рассматривается как гетерологичная ДНК, если данная молекула ДНК вводится в мутантную клетку, в которой отсутствует ген дикого типа."Полипептид" представляет собой полимер, состоящий из аминокислотных остатков, связанных пептидными связями, независимо от того, является ли он природным или синтетическим. Полипептиды,имеющие примерно менее чем 10 аминокислотных остатков, обычно называются "пептидами"."Белок" представляет собой макромолекулу, содержащую одну или несколько полипептидных цепей. Белок может также содержать непептидные компоненты, такие как углеводные группы. Углеводы и другие непептидные заместители могут быть присоединены к белку клеткой, в которой этот белок продуцируется, и могут варьироваться в зависимости от типа клетки. В настоящем описании белки определяются по структуре их аминокислотного остова, при этом заместители, такие как углеводные группы,обычно не определяются, но тем не менее, они могут присутствовать. Пептид или полипептид, кодируемый молекулой ДНК, не принадлежащей данному хозяину, представляет собой "гетерологичный" пептид или полипептид. Термин "клонирующий вектор" означает молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида, космида или бактериофаг, которые способны автономно реплицироваться в клетке-хозяине. Клонирующие векторы обычно содержат один или небольшое число сайтов распознавания рестриктирующей эндонуклеазой, которые позволяют осуществлять детектируемое встраивание молекулы нуклеиновой кислоты без потери основной биологической функции данного вектора, а также нуклеотидных последовательностей, кодирующих маркерный ген, подходящий для его использования в целях идентификации и отбора клеток, трансформированных клонирующим вектором. Маркерными генами обычно являются гены, которые сообщают резистентность к тетрациклину или резистентность к ампициллину. Термин "экспрессирующий вектор" означает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую ген, который экспрессируется в клетке-хозяине. Обычно экспрессирующий вектор содержит транскрипционный промотор, ген и терминатор транскрипции. Экспрессия гена обычно осуществляется под контролем промотора, и такой ген называют "функционально присоединенным" к этому промотору. Аналогичным образом, регуляторный элемент и коровый промотор считаются функционально присоединенными друг к другу в том случае, если регуляторный элемент модулирует активность корового промотора. Термин "рекомбинантный хозяин" означает клетку, которая содержит гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, такую как клонирующий вектор или экспрессирующий вектор. В контексте настоящего изобретения, примером рекомбинантного хозяина является клетка, продуцирующая IL-22RA из экспрессирующего вектора. В противоположность этому, IL-22RA может продуцироваться клеткой, которая является "природным источником" IL-22RA и которая не содержит экспрессирующего вектора."Интегрирующиеся трансформанты" представляют собой рекомбинантные клетки-хозяева, в которых гетерологичная ДНК интегрирована в геномную ДНК клеток."Гибридный белок" представляет собой гибридный белок, экспрессируемый молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидные последовательности по крайней мере двух генов. Так, например, гибридный белок может содержать по крайней мере часть полипептида IL-22RA, присоединенного к полипептиду, который связывается с аффинной матрицей. Такой гибридный белок служит средством для выделения больших количеств IL-22RA с использованием аффинной хроматографии. Термин "рецептор" означает клеточно-ассоциированный белок, который связывается с биологически активной молекулой, называемой "лигандом". Это взаимодействие опосредует воздействие лиганда на клетку. Рецепторы могут быть мембраносвязанными, цитозольными или ядерными; мономерными(например, рецептор тиреотропного гормона, бета-адренергический рецептор) или мультимерными (например, рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGF), рецептор гормона роста, рецептор IL-3, рецептор GM-CSF, рецептор G-CSF, рецептор эритропоэтина и рецептор IL-6). Мембраносвязанные рецепторы характеризуются мультидоменной структурой, содержащей внеклеточный лигандсвязывающий домен и внутриклеточный эффекторный домен, который обычно участвует в передаче сигнала. В некоторых мембраносвязанных рецепторах внеклеточный лигандсвязывающий домен и внутриклеточный эффекторный домен расположены в отдельных полипептидах, которые содержат полноразмерный функциональный рецептор. В общих чертах, связывание лиганда с рецептором вызывает конформационное изменение в рецепторе, которое приводит к взаимодействию между эффекторным доменом и другой молекулой (молекулами) в клетке, что, в свою очередь, приводит к изменению метаболизма клетки. События метаболизма,которые часто бывают связаны со взаимодействиями "рецептор-лиганд", включают транскрипцию гена,фосфорилирование, дефосфорилирование, увеличение продуцирования циклического AMP, мобилизацию клеточного кальция, мобилизацию мембранных липидов, клеточную адгезию, гидролиз инозита липидов и гидролиз фосфолипидов."Растворимый рецептор" представляет собой рецепторный полипептид, который не связан с кле-5 009026 точной мембраной. Растворимые рецепторы, главным образом, представляют собой связывающиеся с лигандом рецепторные полипептиды, которые не содержат трансмембранных и цитоплазматических доменов, и другое вещество, связывающееся с клеточной мембраной, такое как гликофосфоинозит (gpi). Растворимые рецепторы могут содержать и другие аминокислотные остатки, такие как аффинные метки,облегчающие очистку полипептида или вводящие сайты присоединения полипептидов к субстрату, или последовательности константной области иммуноглобулина. Многие рецепторы клеточной поверхности имеют природные растворимые аналоги, продуцируемые посредством протеолиза или транслируемые из альтернативно сплайсированных мРНК. Растворимые рецепторы могут быть мономерными, гомодимерными, гетеродимерными или мультимерными, причем мультимерные рецепторы обычно содержат не более чем 9 субъединиц, предпочтительно не более чем 6 субъединиц, а наиболее предпочтительно не более чем 3 субъединиц. Считается, что рецепторные полипептиды, в основном, не содержат трансмембранных и внутриклеточных полипептидных сегментов, если у них отсутствует достаточная часть этих сегментов, которые обеспечивали бы мембранное заякоривание или передачу сигналов, соответственно. Растворимые рецепторы цитокинов класса I и класса II обычно содержат внеклеточный цитокинсвязывающий домен, не содержащий трансмембранного домена и внутриклеточного домена. Так, например,репрезентативными растворимыми рецепторами являются растворимые рецепторы для CRF2-4 (также известный как IL-10RB) (Genbank, регистрационный номер Z17227), представленные в SEQ ID NO:44 иSEQ ID NO:45; растворимый рецептор для IL-10RA (Genbank, рег. номера U00672 и NM001558), представленный в SEQ ID NO:46; растворимый рецептор для pDIRS1 (также известный как IL-20RB) (Genbank, регистрационный номер AY358305), представленный в SEQ ID NO:47, и растворимый рецептор для IL-22RA (патент США 5965704), представленный в SEQ ID NO:3. Каждый специалист может легко определить, какие последовательности из известных последовательностей цитокинов класса I или класса II включают внеклеточный цитокинсвязывающий домен, не содержащий трансмембранного домена и внутриклеточного домена. Кроме того, с использованием генетического кода, каждый специалист может легко определить полинуклеотиды, кодирующие такие растворимые рецепторные полипептиды. Термин "секреторная сигнальная последовательность" означает ДНК-последовательность, кодирующую пептид ("секреторный пептид"), который, будучи компонентом более крупного полипептида,направляет этот более крупный полипептид по секреторному пути внутри клетки, в которой он синтезируется. Во время транспорта по такому секреторному пути более крупный полипептид обычно расщепляется с удалением секреторного пептида."Выделенный полипептид" представляет собой полипептид, который, в основном, не содержит примесных клеточных компонентов, таких как углевод, липид или другие белковые примеси, ассоциированные в природе с данным полипептидов. Обычно, препарат выделенного полипептида содержит полипептид в высокоочищенной форме, т.е. полипептид, имеющий по крайней мере примерно 80% чистоту,по крайней мере примерно 90% чистоту, по крайней мере примерно 95% чистоту, более чем 95% чистоту, например 96, 97 или 98% чистоту или выше, либо более чем 99% чистоту. Одним из показателей того,что данный белковый препарат содержит отдельный полипептид, является появление одиночной полосы после проведения электрофореза данного белкового препарата в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН) и окрашивания геля кумасси бриллиантовым голубым. Однако термин "отдельный(или "выделенный") не исключает присутствия того же самого полипептида в альтернативных физических формах, таких как димеры или альтернативно гликозилированные или дериватизированные формы. Используемые здесь термины "амино-концевой" и "карбокси-концевой" означают положения в полипептидах. Эти термины, если они встречаются в контексте настоящего описания, используются по отношению к конкретной последовательности или части полипептида для указания ближайшего или относительного положения. Так, например, определенная последовательность полипептида, расположенная у карбокси-конца по отношению к рассматриваемой последовательности, находится со стороны карбоксиконца рассматриваемой последовательности, но она необязательно должна находиться у карбокси-конца всего полипептида. Термин "экспрессия" означает биосинтез генного продукта. Так, например, в случае структурного гена, экспрессия приводит к транскрипции этого структурного гена в мРНК и трансляции мРНК в один или несколько полипептидов. Используемый здесь термин "сплайсированный вариант" означает альтернативные формы РНК,транскрибируемые из гена. Вариант сплайсинга обычно продуцируется посредством использования сайта альтернативного сплайсинга в транскрибируемой молекуле РНК, или реже, между отдельно транскрибируемыми молекулами РНК, и такой сплайсинг может приводить к образованию нескольких мРНК,транскрибируемых из того же самого гена. Сплайсированные варианты могут кодировать полипептиды,имеющие модифицированную аминокислотную последовательность. Используемый здесь термин"сплайсированный вариант" означает полипептид, кодируемый сплайсированным вариантом мРНК,транскрибируемой из гена. Используемый здесь термин "иммуномодулятор" включает цитокины, факторы роста стволовых клеток, лимфотоксины, костимулирующие молекулы, факторы гемопоэза и т.п., и синтетические аналоги этих молекул.-6 009026 Термин "пара комплемент/антикомплемент" означает неидентичные молекулы, которые образуют нековалентно связанную стабильную пару в соответствующих условиях. Так, например, биотин и авидин(или стрептавидин) являются членами-прототипами пары комплемент/антикомплемент. Другими примерами пар комплемент/антикомплемент являются пары рецептор/лиганд, пары антитело/антиген (или гаптен или эпитоп), пары смыслового/антисмыслового полинуклеотидов и т.п. Если желательна последующая диссоциация пары комплемент/антикомплемент, то предпочтительно, чтобы указанная пара комплемент/антикомплемент имела аффинность связывания менее чем 109 М-1."Антиидиотипическое антитело" представляет собой антитело, связывающееся с доменом вариабельной области иммуноглобулина. В контексте настоящего описания, антиидиотипическое антитело связывается с вариабельной областью анти-IL-22RA антитела, и таким образом, антиидиотипическое антитело имитирует эпитоп IL-22RA."Фрагмент антитела" представляет собой часть антитела, такую как F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab и т.п. Фрагмент антитела, независимо от его структуры, связывается с тем же самым антигеном, который распознается интактным антителом. Так, например, фрагмент моноклонального антитела против IL-22RA связывается с эпитопом IL-22RA. Термин "фрагмент антитела" также включает синтетические или генетически сконструированные полипептиды, связывающиеся со специфическим антигеном, такие как полипептиды, состоящие из вариабельной области легкой цепи, "Fv-фрагменты, состоящие из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, рекомбинантные одноцепочечные полипептидные молекулы, в которых вариабельные области легкой и тяжелой цепей связаны пептидным линкером ("scFv-белки"), и минимальные распознающие единицы, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельную область."Химерное антитело" представляет собой рекомбинантный белок, содержащий вариабельные домены и гипервариабельные области (области, определяющие комплементарность), происходящие от антитела грызуна, а остальная часть молекулы антитела происходит от антитела человека."Гуманизованные антитела" представляют собой рекомбинантные белки, в которых мышиные гипервариабельные области моноклонального антитела были перенесены из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей мышиного иммуноглобулина в вариабельный домен человеческого антитела. Конструирование гуманизованных антител для их терапевтического применения для лечения человека, которые происходят от мышиных антител, таких как антитела, которые связываются с человеческим белком или нейтрализуют этот белок, может быть осуществлено любым специалистом. Используемый здесь термин "терапевтическое средство" означает молекулу или атом, конъюгированные с молекулой антитела с получением конъюгата, который может быть использован для терапии. Примерами терапевтических средств являются лекарственные средства, токсины, иммуномодуляторы,хелатообразующие агенты, соединения бора, фотоактивные агенты или красители и радиоактивные изотопы."Детектируемая метка" представляет собой молекулу или атом, которые могут быть конъюгированы с молекулой антитела с получением молекулы, которая может быть использована для диагностики. Примерами детектируемых меток являются хелатообразующие агенты, фотоактивные агенты, радиоактивные изотопы, флуоресцентные агенты, парамагнитные ионы или другие маркерные молекулы. Используемый здесь термин "аффинная метка" означает полипептидный сегмент, который может быть присоединен ко второму полипептиду для облегчения очистки или детекции второго полипептида или для введения сайтов связывания второго полипептида с субстратом. В принципе, в качестве аффинной метки может быть использован любой пептид или белок, для которого являются доступными антитело или другой специфически связывающийся агент является доступным. Аффинными метками являются агенты полигистидинового пути, белок A (Nilsson et al., EMBO J. 4:1075 (1985); Nilsson et al., Methods Enzymol. 198:3 (1991, глутатион-S-трансфераза (SmithJohnson, Gene 67:31 (1988, аффинная метка Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 82:7952 (1985, вещество Р, пептид FLAG(Hopp et al., Biotechnology 6:1204 (1988, пептид, связывающийся со стрептавидином, или другой антигенный эпитоп или связывающий домен. См. в общих чертах, работу Ford et al., Protein Expression andPurification 2:95 (1991). Молекулы ДНК, кодирующие аффинные метки, являются коммерчески доступными (например, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ)."Оголенное антитело", в отличие от фрагмента антитела, представляет собой целое антитело, не конъюгированное с терапевтическим средством. "Оголенными" антителами являются как поликлональные, так и моноклональные антитела, а также некоторые рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизованные антитела. Используемый здесь термин "компонент антитела" включает как целое антитело, так и его фрагмент."Иммуноконъюгат" представляет собой конъюгат компонента антитела с терапевтическим средством или с детектируемой меткой. Используемый здесь термин "гибридный белок антитела" означает рекомбинантную молекулу, содержащую компонент антитела и полипептидный компонент IL-22RA. Примером гибридного белка антитела является белок, содержащий внеклеточный домен IL-22RA, и либо Fc-домен, либо антигенсвязы-7 009026 вающую область."Полипептид-мишень" или "пептид-мишень" представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит по крайней мере один эпитоп, и которая экспрессируется на клетке-мишени,такой как опухолевая клетка, или клетка, которая несет антиген инфекционного агента. Т-клетки распознают пептидные эпитопы, презентируемые молекулой главного комплекса гистосовместимости полипептиду-мишени или пептиду-мишени, и обычно, обеспечивают лизис клетки-мишень или рекрутинг других иммунных клеток в область клетки-мишени, что приводит к цитолизу клетки-мишени."Антигенный пептид" представляет собой пептид, который связывается с молекулой главного комплекса гистосовместимости и образует комплекс ГКГ-пептид, который распознается Т-клеткой, индуцируя тем самым цитотоксический лимфоцитарный ответ после его презентации Т-клетке. Таким образом,антигенные пептиды способны связываться с соответствующей молекулой главного комплекса гистосовместимости и индуцировать цитотоксический Т-клеточный ответ, такой как лизис клетки или специфическое высвобождение цитокина, по отношению к клетке-мишени, которая связывается с антигеном или экспрессирует этот антиген. Антигенный пептид может связываться в присутствии молекулы главного комплекса гистосовместимости класса I или класса II, на антиген-презентирующей клетке или на клетке-мишени. В эукариотах, РНК-полимераза II катализирует транскрипцию структурного гена с продуцированием мРНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть сконструирована так, что она будет содержать матрицу РНК-полимеразы II, в которой РНК-транскрипт имеет последовательность, комплементарную последовательности специфической мРНК. РНК-транскрипт называется "антисмысловой РНК", а молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антисмысловую РНК, называется "антисмысловым геном". Антисмысловые молекулы РНК способны связываться с молекулами мРНК, что приводит к ингибированию трансляции мРНК.IL-22RA" представляет собой олигонуклеотид, имеющий последовательность (а) способную образовывать стабильный триплекс с фрагментом гена IL-22RA или (b) способную образовывать стабильный дуплекс с фрагментом мРНК-транскрипта гена IL-22RA."Рибозим" представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую каталитический центр. Этот термин включает РНК-ферменты, самосплайсирующиеся РНК, саморасщепляющиеся РНК и молекулы нуклеиновой кислоты, которые осуществляют эти каталитические функции. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая рибозим, называется "геном рибозима"."Внешняя вспомогательная последовательность" представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая направляет эндогенный рибозим, РНКазу Р, к внутриклеточной мРНК конкретного организма, что приводит к расщеплению мРНК под действием РНКазы Р. Молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует внешнюю вспомогательную последовательность, называется "геном внешней вспомогательной последовательности". Термин "вариант гена IL-22RA" означает молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая представляет собой модификацию SEQ IDNO:3. Такими вариантами являются природный полиморфизм генов IL-22RA, а также синтетические гены, кодирующие аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, содержащую консервативные аминокислотные замены. Другие варианты генов IL-22RA представляют собой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие описанные здесь нуклеотидные последовательности с инсерциями или делециями. Вариант гена IL-22RA может быть идентифицирован, например, путем установления гибридизации данного гена с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1,или с ее комплементом, в жестких условиях. Альтернативно, вариант гена IL-22RA может быть идентифицирован путем сравнения последовательностей. Считается, что две аминокислотных последовательности имеют "100% идентичность", если аминокислотные остатки этих двух аминокислотных последовательностей являются одинаковыми при их сопоставлении на максимальное соответствие путем выравнивания. Аналогичным образом, две нуклеотидные последовательности имеют "100% идентичность", если нуклеотидные остатки этих двух нуклеотидных последовательностей являются одинаковыми при их сопоставлении на максимальное соответствие путем выравнивания. Сравнение последовательностей может быть осуществлено с использованием стандартных компьютерных программ, таких как программы, входящие в пакет программ для обработки данных по биоинформатике, LASERGENE, которые были разработаны DNASTAR (Madison,Wisconsin). Другие методы сравнения двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей путем их оптимального выравнивания хорошо известны специалистам (см., например, PeruskiPeruski,The Internet and the New Biology: Tools for Genomic and Molecular Research (ASM Press, Inc. 1997), Wu etGene Biotechnology, pages 123-151 (CRC Press, Inc. 1997) и Bishop (ed.), Guide to Human Genome Computing, 2nd Edition (Academic Press, Inc. 1998. Конкретные методы определения идентичности последовательностей описаны ниже. Независимо от конкретно используемого метода идентификации варианта гена IL-22RA или вари-8 009026 анта полипептида IL-22RA, вариант гена или полипептид, кодируемый вариантом гена, может быть функционально охарактеризован на способность специфически связываться с анти-IL-22RA антителом. Вариант гена IL-22RA или вариант полипептида IL-22RA может быть также функционально охарактеризован на способность связываться с его лигандом IL-22 с использованием описанного здесь биологического или биохимического анализа. Используемый здесь термин "аллельный вариант" означает любую из двух или более альтернативных форм гена, находящегося в том же самом локусе хромосомы. Аллельный вариант обычно продуцируется посредством мутации и может приводить к фенотипическому полиморфизму в данных популяциях. Генные мутации могут быть молчащими (не вносить изменений в кодируемый полипептид), либо они могут кодировать полипептиды, имеющие модифицированную аминокислотную последовательность. Используемый здесь термин "аллельный вариант" также означает белок, кодируемый аллельным вариантом гена. Термин "ортолог" означает полипептид или белок, полученный от одного вида, который является функциональным аналогом полипептида или белка, происходящего от другого вида. Различия в последовательностях ортологов являются результатом образования новых видов."Паралоги" представляют собой различные, но структурно родственные белки, продуцируемые организмом. Очевидно, что паралоги образуются в результате дупликации генов. Так, например, -глобин,-глобин и миоглобин являются паралогами по отношению друг к другу. Настоящее изобретение включает функциональные фрагменты генов IL-22RA. В контексте настоящего изобретения, термин "функциональный фрагмент" гена IL-22RA означает молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует часть полипептида IL-22RA, и которая представляет собой описанный здесь домен или которая, по крайней мере, специфически связывается с анти-IL-22RA антителом. Из-за неточности стандартных аналитических методов очевидно, что молекулярные массы и длины полимеров имеют приблизительные величины. Если такие величины выражены как "примерно X" или"приблизительно X", то следует учесть, что эта величина X указана с точностью 10%. 3. Продуцирование полинуклеотидов или генов IL-22RA Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие человеческий ген IL-22RA, могут быть получены путем скрининга человеческой ДНК или геномной библиотеки с использованием полинуклеотидных зондов на основе SEQ ID NO:1. Эти методы являются стандартными и хорошо известными и могут быть осуществлены с использованием наборов для клонирования, закупаемых у поставщиков. См., например,Ausubel et al. (eds.), Short Protocols in Molecular Biology, 3rd Edition, John WileySons 1995; Wu et al.,Methods in Gene Biotechnology, CRC Press, Inc. 1997; AvivLeder, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 69:1408(1972); Huynh et al., "Constructing and Screening cDNA Libraries in gt10 и gt11", DNA Cloning: A Practical Approach Vol. I, Glover (ed.), pages 49 (IRL Press, 1985); Wu (1997), pages 47-52. Молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют человеческий ген IL-22RA, могут быть также получены посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием олигонуклеотидных праймеров, имеющих нуклеотидные последовательности, полученные на основе нуклеотидных последовательностей гена или кДНК IL-22RA. Общие методы скрининга библиотек с помощью ПЦР описаны например, в работе Yu et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction to Screen Phage Libraries", Methods inMolecular Biology, Vol. 15: PCR Protocols: Current Methods and Applications, White (ed.), Humana Press,Inc., 1993. Кроме того, методы применения ПЦР для выделения родственных генов описаны, например, в работе Preston, "Use of Degenerate Oligonucleotide Primers and the Polymerase Chain Reaction to Clone GeneFamily Members", Methods in Molecular Biology, Vol. 15: PCR Protocols: Current Methods and Applications,White (ed.), Humana Press, Inc. 1993. В качестве альтернативы, ген IL-22RA может быть получен методом синтеза молекул нуклеиновой кислоты путем взаимного праймирования длинных олигонуклеотидов и описанных здесь нуклеотидных последовательностей (см., например, Ausubel (1995. Хорошо известные методы с применением полимеразной цепной реакции позволяют синтезировать молекулы ДНК, имеющие длину по крайней мере в две тысячи нуклеотидов (Adang et al., Plant Molec. Biol. 21:1131 (1993),Bambot et al., PCR Methods and Applications 2:266 (1993), Dillon et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction for the Rapid Construction of Synthetic Genes", Methods in Molecular Biology, Vol. 15: PCR Protocols:al., PCR Methods Appl. 4:299 (1995. Описание синтеза полинуклеотидов см., например, в работе GlickPasternak, Molecular Biotechnology, Principles and Applications of Recombinant DNA (ASM Press 1994), Itakura et al., Annu. Rev. Biochem. 53:323 (1984) и Climie et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87:633 (1990). 4. Продуцирование вариантов гена IL-22RA Настоящее изобретение относится к различным молекулам нуклеиновой кислоты, включая молекулы ДНК и РНК, которые кодируют описанные здесь полипептиды IL-22RA. Каждый специалист, исходя из вырожденности генетического кода, может легко установить, что эти полинуклеотидные последовательности могут значительно варьироваться. Кроме того, настоящее изобретение также относится к отдельным растворимым, мономерным, гомодимерным, гетеродимерным или мультимерным рецепторным полипептидам, содержащим по крайней мере одну субъединицу рецептора IL-22RA, которая является, в-9 009026 основном, гомологичной рецепторному полипептиду SEQ ID NO:3. Таким образом, в настоящем изобретении рассматриваются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептид IL-22RA и содержащие вырожденные нуклеотиды SEQ ID NO:1 и их РНК-эквиваленты. В табл. 1 представлены однобуквенные коды, принятые для обозначения положений вырожденных нуклеотидов. В столбце "разрешение" представлены нуклеотиды, обозначенные буквенным кодом. В столбце "комплемент" указаны коды для комплементарного(ых) нуклеотида(ов). Так, например, код Y означает либо С, либо Т, а его комплемент R означает А или G, где А комплементарен Т, a G комплементарен С. Таблица 1 Вырожденные кодоны, охватывающие все возможные кодоны для данной аминокислоты, представлены в табл. 2. Таблица 2 Для каждого специалиста очевидно, что в определении вырожденного кодона вводится некоторая- 10009026 неопределенность, характерная для всех возможных кодонов, кодирующих аминокислоту. Так, например, вырожденный кодон для серина (WSN), в некоторых случаях, может кодировать аргинин (AGR), а вырожденный кодон для аргининина (MGN), в некоторых случаях, может кодировать серин (AGY). Аналогичная взаимосвязь имеется между кодонами, кодирующими фенилаланин и лейцин. Таким образом,некоторые полинуклеотиды, охватываемые вырожденной последовательностью, могут кодировать варианты аминокислотных последовательностей, но каждый специалист может легко идентифицировать такие варианты последовательностей путем сравнения с аминокислотными последовательностями SEQ IDNO:3. Варианты последовательностей могут быть легко протестированы на их функциональность, как описано ниже. Различные виды организмов могут иметь "преимущественно используемый кодон". В общих чертах, см. Grantham et al., Nucl. Acids. Res. 8:1893 (1980), Haas et al., Curr. Biol. 6:315 (1996), WainHobson et al., Gene 13:355 (1981), GrosjeanFiers, Gene 18:199 (1982), Holm, Nuc. Acids. Res. 14:3075"преимущественно используемый кодон" или "предпочитаемые кодоны" обычно употребляется по отношению к тем транслируемым в белок кодонам, которые наиболее часто используются в клетках определенного вида, т.е. в этих клетках, из всех возможных кодонов, кодирующих каждую аминокислоту,преимущественно используются один или несколько репрезентативных кодонов (см. табл. 2). Так, например, аминокислота треонин (Thr) может кодироваться кодонами АСА, АСС, ACG или ACT, но в клетках млекопитающих наиболее часто используемым кодоном является АСС; а в организмах других видов, например, в клетках насекомых, в дрожжах, вирусах или в бактериях, могут оказаться предпочтительными другие кодоны, кодирующие Thr. Предпочтительные кодоны для конкретных видов могут быть введены в полинуклеотиды настоящего изобретения различными известными методами. Введение предпочтительных последовательностей кодонов в рекомбинантную ДНК может, например, повышать продуцирование белка путем обеспечения более эффективной трансляции белка в конкретных клетках или организмах. Поэтому, описанные здесь последовательности вырожденных кодонов служат в качестве матрицы для оптимизации экспрессии полинуклеотидов в различных клетках и организмах, обычно используемых специалистами и описанных в настоящем изобретении. Последовательности, содержащие предпочтительные кодоны, могут быть протестированы и оптимизированы на экспрессию в организмах различных видов и проанализированы на функциональность, как описано в настоящем изобретении. кДНК, кодирующая IL-22RA, может быть выделена различными методами, такими как зондирование полноразмерной или неполной человеческой кДНК одной или несколькими сериями вырожденных зондов, сконструированных на основе описанных последовательностей. кДНК может быть также клонирована с помощью полимеразной цепной реакции с использованием праймеров, сконструированных из описанных здесь репрезентативных последовательностей человеческого IL-22RA. Кроме того, кДНКбиблиотека может быть использована для трансформации или трансфекции клеток-хозяев, а экспрессия представляющей интерес кДНК может быть детектирована с помощью антитела против полипептида IL22RA. Каждому специалисту известно, что последовательность, описанная в SEQ ID NO:1, представляет собой одну аллель человеческого IL-22RA, но, при этом, предполагается, что имеется аллельное разнообразие и может происходить альтернативный сплайсинг. Аллельные варианты этой последовательности могут быть клонированы путем зондирования кДНК или геномных библиотек различных индивидуумов в соответствии со стандартными процедурами. Аллельные варианты описанных здесь нуклеотидных последовательностей, включая последовательности, содержащие молчащие мутации, и последовательности, в которых такие мутации приводят к изменениям в аминокислотной последовательности, входят в объем настоящего изобретения, поскольку они представляют собой белки, которые являются аллельными вариантами описанных здесь аминокислотных последовательностей. Молекулы кДНК, генерируемые из альтернативно сплайсированных мРНК и сохраняющие свойства полипептида IL-22RA, входят в объем настоящего изобретения, поскольку они представляют собой полипептиды, кодируемые такими кДНК и мРНК. Аллельные варианты и варианты сплайсинга этих последовательностей могут быть клонированы путем зондирования кДНК или геномных библиотек различных индивидуумов или тканей в соответствии со стандартными процедурами, известными специалистам. С применением обсуждаемых выше методов каждый специалист может получить различные полипептиды, которые содержат субъединицу растворимого рецептора IL-22RA, которая является, в основном, гомологичной SEQ ID NO:1, или которая кодирует аминокислоты SEQ ID NO:3 или их аллельные варианты, и которые сохраняют лигандсвязывающие свойства рецептора IL-22RA дикого типа. Такие полипептиды могут также включать дополнительные полипептидные сегменты, описанные в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления изобретения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизоваться в жестких условиях с молекулами нуклеиновой кислоты, содержащими описанные здесь нуклеотидные последовательности. Так, например, такие молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизоваться в жестких условиях с молекулами нуклеиновой кислоты, содержащими нуклеотид- 11009026 ную последовательность SEQ ID NO:1, или с молекулами нуклеиновой кислоты, содержащими нуклеотидную последовательность, комплементарную SEQ ID NO:1, или с их фрагментами. В общих чертах, жесткие условия выбирают так, чтобы температура для конкретной последовательности при определенной ионной силе и при определенном рН была примерно на 5 С ниже температуры плавления (Tm). Tm представляет собой температуру (при определенной ионной силе и при определенном рН), при которой 50% последовательности-мишени гибридизуется с точно соответствующим зондом. После гибридизации молекулы нуклеиновой кислоты могут быть промыты для удаления негибридизованных молекул нуклеиновой кислоты в жестких условиях или в условиях высокой жесткости. См., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A laboratory manual, Second Edition (Cold Spring HarborRev. Biochem. Mol. Biol. 26:227 (1990. Компьютерные программы для анализа последовательностей,такие как OLIGO 6,0 (LSR; Long Lake, MN) и Primer Premier 4,0 (Premier Biosoft International; Palo Alto,CA), а также сайты в Интернете, являются доступными средствами для анализа данной последовательности и вычисления Tm исходя из критериев, определяемых пользователем. Это позволяет специалистам адаптировать условия гибридизации и промывки для их использования с конкретным полинуклеотидным гибридом. Настоящее изобретение также относится к выделенным полипептидам IL-22RA, которые имеют, в основном, аналогичную последовательность, идентичную полипептидам SEQ ID NO:3 или их ортологам. Используемый здесь термин "идентичность, в основном, аналогичных последовательностей" относится к полипептидам, имеющим последовательность, которая по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%,по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95%, например на 96, 97, 98%, или более чем на 95% идентична последовательностям, представленным в SEQ ID NO:3 или их ортологам. Так, например, варианты и ортологи рецепторов IL-22RA могут быть использованы для генерирования иммунного ответа и продуцирования перекрестно реагирующих антител против человеческого IL-22RA. Такие антитела могут быть гуманизованы и модифицированы как описано ниже, и могут быть использованы для терапевтического лечения псориаза, псориазного артрита, ВЗК, колита, эндотоксемии, а также в других описанных здесь терапевтических целях. В настоящем изобретении также рассматриваются варианты молекул нуклеиновой кислоты IL22RA, которые могут быть идентифицированы с использованием двух критериев путем определения сходства между кодируемым полипептидом и аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3 и путем гибридизационного анализа. Такими вариантами IL-22RA являются молекулы нуклеиновой кислоты,которые (1) гибридизуются с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 (или с ее комплементом) в жестких условиях промывки, где жесткую промывку осуществляют при следующих условиях: 0,5-2SSC с 0,1% ДСН при 55-65 С, и (2) кодируют полипептид,имеющий последовательность, которая по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или более чем на 95%, например на 96, 97, 98 или 99%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3. Альтернативно, варианты IL-22RA могут быть охарактеризованы как молекулы нуклеиновой кислоты, которые (1) гибридизуются с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 (или с ее комплементом) в условиях очень жесткой промывки, где жесткую промывку осуществляют при следующих условиях: 0,l-0,2SSC с 0,1% ДСН при 50-65 С, и (2) кодируют полипептид, имеющий последовательность, которая по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или более чем на 95%, например на 96, 97, 98 или 99% или более, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3. Процентную идентичность последовательностей определяют стандартными методами. См., например, Altschul et al., Bull. Math. Bio. 48:603 (1986) и HenikoffHenikoff, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA,89:10915 (1992). Вкратце, две аминокислотных последовательности выравнивают для оптимизации оценок выравнивания с использованием штрафа за пробел-пропуск=10, штрафа за пробел-удлинение=1 и оценочных матриц "BLOSUM62" HenikoffHenikoff (см. ниже), представленных в табл. 3 (аминокислоты обозначены стандартными однобуквенными кодами). Затем процент идентичности вычисляют по формуле: ([Общее число идентичных соответствий]/[длина более длинной последовательности+число пробелов, вводимых в более длинную последовательность для выравнивания двух последовательностей]100). Каждому специалисту известно, что для выравнивания двух аминокислотных последовательностей разработано множество алгоритмов. Алгоритм "FASTA" Pearson и Lipman, разработанный для поиска сходства последовательностей, представляет собой подходящий метод выравнивания белков для оценки уровней идентичности описанной здесь аминокислотной последовательности и аминокислотной последовательности предполагаемого варианта IL-22RA. Алгоритм FASTA описан Pearson и Lipman, Proc.Nat'l. Acad. Sci. USA, 85:2444 (1988) и Pearson, Meth. Enzymol. 183:63 (1990). Вкратце, алгоритм FASTA предусматривает сначала оценку сходства последовательностей путем идентификации совпадающих областей запрашиваемой последовательности (например, SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3) и тестируемой последовательности, которые имеют самую высокую плотность идентичности (если параметр ktup=1) или пары идентичностей (если ktup=2), без учета консервативных аминокислотных замен, инсерций или делеций. Затем десять областей с самой высокой плотностью идентичности снова оценивают путем сравнения сходства всех пар аминокислот с использованием матрицы аминокислотных замен, и концы этих областей "подравнивают" так, чтобы эти области включали только те остатки, которые обеспечивают самую высокую оценку. Если имеется несколько областей с оценками, превышающими величину "отсечки" (вычисленную по формуле, предварительно выведенной исходя из длины последовательности и величины ktup), то оценивают усеченные исходные области для того, чтобы определить, можно ли эти области объединить так, чтобы достичь приблизительного выравнивания с пробелами. И наконец, области двух аминокислотных последовательностей с наивысшей оценкой выравнивают с использованием модифицированного алгоритма Нидлмана-Вунша-Селлерса (NeedlemanWunsch, J. Mol. Biol. 48:444(1970); Sellers, SIAM J. Appl. Math. 26:787 (1974, который учитывает аминокислотные инсерции и делеции. Репрезентативными параметрами для анализа FASTA являются: ktup=1, штраф за пробелпропуск=10, штраф за пробел-удлинение=1 и матрица замен=BLOSUM 62. Эти параметры могут быть введены в программу FASTA путем модификации файла оценочной матрицы ("SMATRIX"), как описано в приложении 2 работы Pearson, Meth. Enzymol. 183:63 (1990).FASTA может быть также использована для определения идентичности последовательностей молекул нуклеиновой кислоты с использованием отношения, описанного выше. Для сравнения нуклеотидных последовательностей величина ktup может составлять в пределах от 1 до 6, предпочтительно от 3 до 6 и наиболее предпочтительно 3, а другие параметры являются такими, как они были определены выше. Настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептид,который, по сравнению с описанной здесь аминокислотной последовательностью, имеет консервативную аминокислотную замену. Так, например, могут быть получены варианты, которые содержат одну или несколько аминокислотных замен в SEQ ID NO:3, где в аминокислотной последовательности IL-22RA алкиламинокислота заменена другой алкиламинокислотой, ароматическая аминокислота заменена другой ароматической аминокислотой, серосодержащая аминокислота заменена другой серосодержащей аминокислотой, гидроксисодержащая аминокислота заменена другой гидроксисодержащей аминокислотой, кислотная аминокислота заменена другой кислотной аминокислотой, основная аминокислота заменена другой основной аминокислотой или двухосновная монокарбоновая аминокислота заменена другой моносновной монокарбоновой аминокислотой. Так, например, для часто встречающихся аминокислот"замена консервативной аминокислотой" может быть осуществлена между аминокислотами следующих групп: (1) глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин, (2) фенилаланин, тирозин, триптофан, (3) серин и треонин, (4) аспартат и глутамат, (5) глутамин и аспарагин и (6) лизин, аргинин и гистидин. ТаблицаBLOSUM62 представляет собой матрицу аминокислотных замен, созданную исходя примерно из 2000 локальных множественных выравниваний сегментов последовательностей белка, представляющих собой высококонсервативные области, принадлежащие более чем 500 группам родственных белков (HenikoffHenikoff, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 89:10915 (1992. В соответствии с этим частота замен в BLOSUM62 может быть использована для определения консервативных аминокислотных замен, которые могут быть внесены в аминокислотные последовательности настоящего изобретения. Хотя можно создать аминокислотные замены только на основе химических свойств аминокислот (как обсуждалось выше), однако,термин "замена консервативных аминокислот" предпочтительно означает замену, представленную вBLOSUM62 величиной более чем -1. Так, например, аминокислотная замена является консервативной в том случае, если такая замена охарактеризована в BLOSUM62 величиной 0, 1, 2 или 3. В соответствии с этой системой предпочтительные консервативные аминокислотные замены охарактеризованы в BLOSUM62 величиной, равной по крайней мере 1 (например, 1, 2 или 3), а более предпочтительные консервативные аминокислотные замены охарактеризованы в BLOSUM62 величиной, равной по крайней мере 2 (например, 2 или 3). Конкретные варианты IL-22RA охарактеризованы как варианты, имеющие последовательность, которая по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или более чем на 95%, например на 96, 97, 98, 99% или более, идентична соответствующей аминокислотной последовательности (например, SEQ ID NO:3), где модификации в аминокислотной последовательности обусловлены одной или несколькими консервативными аминокислотными заменами. Консервативные аминокислотные замены в гене IL-22RA могут быть внесены, например, путем замены нуклеотидов в последовательности SEQ ID NO:1 другими нуклеотидами. Такие варианты "консервативных аминокислот" могут быть получены путем олигонуклеотид-направленного мутагенеза, линкерсканирующего мутагенеза, мутагенеза с использованием полимеразной цепной реакции и т.п. (см.Ausubel (1995) и McPherson (ed.), Directed Mutagenesis: A Practical Approach (IRL Press 1991. Вариант полипептида IL-22RA может быть идентифицирован по его способности специфически связываться с антителами против IL-22RA. Белки настоящего изобретения могут также содержать неприродные аминокислотные остатки. Неприродными аминокислотами являются, но не ограничиваются ими, транс-3-метилпролин, 2,4 метанпролин, цис-4-гидроксипролин, транс-4-гидроксипролин, N-метилглицин, алло-треонин, метилтреонин, гидроксиэтилцистеин, гидроксиэтилгомоцистеин, нитроглутамин, гомоглутамин, пипеколиновая кислота, тиазолидинкарбоновая кислота, дегидропролин, 3- и 4-метилпролин, 3,3-диметилпролин, третлейцин, норвалин, 2-азафенилаланин, 3-азафенилаланин, 4-азафенилаланин и 4-фторфенилаланин. Специалистам хорошо известны несколько методов включения неприродных аминокислотных остатков в белки. Так, например, может быть использована in vitro система, в которой нонсенс-мутации подавляются химически аминоацилированными тРНК-супрессорами. Методы синтеза аминокислот и аминоацилирования тРНК хорошо известны специалистам. Транскрипцию и трансляцию плазмид, содержащих нонсенс-мутации, обычно осуществляют в бесклеточной системе, содержащей экстракт S30 E.coli, а также коммерчески доступные ферменты и другие реагенты. Белки очищают хроматографией. См., например,Robertson et al., J. Am. Chem. Soc. 113:2722 (1991), Ellman et al., Methods Enzymol. 202:301 (1991), Chunget al., Science 259:806 (1993) и Chung et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:10145 (1993). Во втором способе трансляцию осуществляют в ооцитах Xenopus путем микроинжекции мутированной мРНК и химически аминоацилированных супрессорных тРНК (Turcatti et al., J. Biol. Chem. 271:19991 (1996. В третьем способе клетки E.coli культивируют в отсутствии природной аминокислоты, которая является замененной (например, фенилаланина) и в присутствии нужной(ых) неприродной(ых) аминокислоты(от) (например, 2-азафенилаланина, 3-азафенилаланина, 4-азафенилаланина или 4 фторфенилаланина). Неприродную аминокислоту включают в белок вместо ее природного аналога. См.Koide et al., Biochem. 33:7470 (1994). Природные аминокислотные остатки могут быть превращены в неприродные аминокислоты путем химической in vitro модификации. Для дополнительного расширения диапазона замен, химическая модификация может быть объединена с сайт-направленным мутагенезом(WynnRichards, Protein Sci. 2:395 (1993. Аминокислотные остатки IL-22RA могут быть заменены ограниченным числом неконсервативных аминокислот; аминокислотами, которые не кодируются генетическим кодом; аминокислотами, не встречающимися в природе; и синтезированными аминокислотами. Незаменимые аминокислоты в полипептидах настоящего изобретения могут быть идентифицированы в соответствии с известными процедурами, такими как сайт-направленный мутагенез или аланинсканирующий мутагенез (CunninghamWells, Science 244:1081 (1989), Bass et al., Proc. Nat'l Acad. Sci.USA 88:4498 (1991), CoombsCorey, "Site-Directed Mutagenesis and Protein Engineering", Proteins: Analysis and Design, Angeletti (ed.), pages 259-311 (Academic Press, Inc. 1998. В последнем методе одиночные аланиновые мутации вносят в каждый остаток данной молекулы и полученные мутантные молекулы тестируют на биологическую активность для идентификации аминокислотных остатков, которые играют решающую роль в активности молекулы. См. также Hilton et al., J. Biol. Chem. 271:4699 (1996). Хотя анализ последовательностей может быть проведен для дополнительного определения лиган- 14009026 дсвязывающей области IL-22RA, однако, аминокислоты, которые играют определенную роль в активности связывания с IL-22RA (например, связывания IL-22RA с лигандом IL-22 или с анти-IL-22RA антителом), могут быть также определены путем физического анализа структуры, определенной такими методами, как ядерный магнитный резонанс, кристаллография, электронная дифракция или фотоаффинное мечение в комбинации с мутацией аминокислот в предполагаемом сайте контактирования. См.,например, de Vos et al., Science 255:306 (1992), Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899 (1992) и Wlodaver et al.,FEBS Lett. 309:59 (1992). Множественные аминокислотные замены могут быть созданы и протестированы известными методами мутагенеза и скрининга, например, методами, описанными Reidhaar-Olson и Sauer (Science 241:53(1988 или BowieSauer (Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:2152 (1989. Вкратце, эти авторы описывают методы одновременной рандомизации двух или нескольких положений в полипептиде, отбора на функциональный полипептид, а затем секвенирования мутагенизированных полипептидов для определения спектра допустимых замен в каждом положении. Другими методами, которые могут быть использованы,являются фаговое представление (например, Lowman et al., Biochem. 30:10832 (1991), Ladner et al., патент США 5223409, Huse, международная публикация WO 92/06204 и область-направленный мутагенез(Derbyshire et al., Gene 46:145 (1986) и Ner et al., DNA 7:127 (1988. Кроме того, IL-22RA, меченный биотином или ФИТЦ, может быть использован для экспрессионного клонирования путем экспрессии лигандов IL-22RA. Варианты описанных нуклеотидных и полипептидных последовательностей IL-22RA могут быть также генерированы путем "перестановки" ДНК, как описано у Stemmer, Nature 370:389 (1994), Stemmer,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 91:10747 (1994) и в международной публикации WO 97/20078. Вкратце, варианты молекулы ДНК генерируют in vitro путем гомологичной рекомбинации посредством рандомизированной фрагментации родительской ДНК с последующей повторной сборкой посредством ПЦР с получением произвольно внесенных точковых мутаций. Для внесения в этот процесс дополнительной изменчивости этот метод может быть модифицирован с использованием семейства родительских молекул ДНК, таких как аллельные варианты или молекулы ДНК, происходящие от организмов различных видов. Отбор или скрининг на нужную активность с последующими дополнительными повторениями процесса мутагенеза и анализа обеспечивают быструю "эволюцию" последовательностей путем выбора нужных мутаций при одновременном отборе для исключения нежелательных замен. Описанные здесь методы мутагенеза могут быть объединены с высокоэффективными автоматизированными методами скрининга для детекции активности клонированных и мутагенизированных полипептидов в клетках-хозяевах. Мутагенизированные молекулы ДНК, кодирующие биологически активные полипептиды или полипептиды, связывающиеся с анти-IL-22RA антителами, могут быть выделены из клеток-хозяев и быстро секвенированы на современном оборудовании. Эти методы позволяют быстро определить роль отдельных аминокислотных остатков в представляющем интерес полипептиде, и могут быть применены для полипептидов с неизвестной структурой. Настоящее изобретение также включает "функциональные фрагменты" полипептидов IL-22RA и молекул нуклеиновых кислот, кодирующих такие функциональные фрагменты. Для получения функциональных фрагментов молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид IL-22RA, могут быть осуществлены рутинные делеционные анализы молекул нуклеиновой кислоты. Так, например, ДНКмолекулы, имеющие нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, могут быть гидролизованы нуклеазой Ваl31 с получением серии "гнездовых" делеций. Затем эти фрагменты встраивают в экспрессирующие векторы в соответствующей рамки считывания, и экспрессированные полипептиды выделяют и тестируют на их способность связываться с анти-IL-22RA антителами. Одной из альтернатив расщеплению экзонуклеазой является олигонуклеотид-направленный мутагенез, осуществляемый для введения делеций или стоп-кодонов в целях детекции продуцирования нужного фрагмента. Альтернативно, конкретные фрагменты гена IL-22RA могут быть синтезированы с помощью полимеразной цепной реакции. Этот общий метод был проиллюстрирован путем исследования усечения на одном из концов или на обоих концах последовательностей интерферонов и систематизирован HorisbergerDiMarco, Pharmac.Ther. 66:507 (1995). Кроме того, стандартные методы функционального анализа белков описаны, например, у Treuter et al., Molec. Gen. Genet. 240:113 (1993), Content et al. "Expression and preliminary deletion(1995); Yamaguchi et al., Biochem. Pharmacol. 50:1295 (1995) и у Meisel et al., Plant Molec. Biol. 30:1 (1996). Анализ описанных здесь конкретных последовательностей позволяет выявить серию репрезентативных функциональных фрагментов, представленных в табл. 4. Нуклеотиды, кодирующие дополнительные функциональные варианты доменов человеческого IL-22RA, описанные ниже и не представленные в табл. 4, могут быть оценены по сравнению с SEQ ID NO:1. Такими функциональными фрагментами являются, например, нижеследующие нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1: нуклеотиды 85-381, 206-717 и 85-717 SEQ ID NO:1 и соответствующие кодируемые ими аминокислотные последова- 15009026 тельности, представленные в SEQ ID NO:2 и в SEQ ID NO:3 соответственно. Таблица 4 В настоящем изобретении также рассматриваются функциональные фрагменты гена IL-22RA, которые, по сравнению с описанной здесь аминокислотной последовательностью, имеют аминокислотные замены. Вариант гена IL-22RA может быть идентифицирован исходя из его структуры путем определения уровня ее идентичности с описанными нуклеотидными и аминокислотными последовательностями,как уже обсуждалось выше. Альтернативным методом для идентификации варианта гена исходя из его структуры является установление способности молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей возможный вариант гена IL-22RA, гибридизоваться с молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, такую как SEQ ID NO:1. Настоящее изобретение также включает использование функциональных фрагментов полипептидовIL-22RA, антигенных эпитопов, эпитоп-несущих фрагментов полипептидов IL-22RA, и молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих такие функциональные фрагменты, антигенные эпитопы и эпитоп-несущие фрагменты полипептидов IL-22RA. Указанные фрагменты используются для генерирования полипептидов для их использования в целях продуцирования антител и партнеров по связыванию, которые связываются с IL-22 или с обоими IL-20 и IL-22, либо блокируют, ингибируют, снижают, подавляют или нейтрализуют их активность. "Функциональный" полипептид IL-22RA или его фрагмент, определенные в настоящем описании, характеризуются их способностью блокировать, ингибировать, снижать, подавлять или нейтрализовать воспалительную, пролиферативную или дифференцирующую активность IL-20 илиIL-22, а также их способностью индуцировать или ингибировать специализированные функции клеток или их способностью специфически связываться с анти-IL-22RA антителом, с клеткой, с IL-20 или IL-22. Как было описано ранее, IL-22RA имеет структуру и домены цитокинового рецептора класса II, описанные в настоящем изобретении. Таким образом, в настоящем изобретении также рассматривается использование гибридных белков, включающих (а) полипептидные молекулы, содержащие один или несколько описанных выше доменов; и (b) функциональные фрагменты, содержащие один или несколько таких доменов. В другую полипептидную часть гибридного белка может быть введен другой цитокиновый рецептор класса II, такой как IL-10R, IL-13R, IL-20RA, IL-20RB, IL-10RB (CRF2-4), IL-22RA2, либо неприродный и/или неродственный секреторный сигнальный пептид, обеспечивающий секрецию данного гибридного белка. Настоящее изобретение также относится к полипептидным фрагментам или к пептидам, содержащим описанный здесь эпитоп-несущий фрагмент полипептида IL-22RA. Такие фрагменты или пептиды могут содержать "иммуногенный эпитоп", который является частью белка, индуцирующего гуморальный ответ в том случае, если в качестве иммуногена используется весь белок. Иммуногенные эпитоп-несущие пептиды могут быть идентифицированы стандартными методами (см., например, Geysen et al., Proc. Nat'l.Acad. Sci., USA, 81:3998 (1983. В противоположность этому, полипептидные фрагменты или пептиды могут содержать "антигенный эпитоп", являющийся областью белковой молекулы, с которой может специфически связываться антитело. Некоторые эпитопы состоят из линейных или непрерывных аминокислотных фрагментов, и антигенность такого эпитопа не нарушается денатурирующими агентами. Хорошо известно, что относительно короткие синтетические пептиды, которые могут имитировать эпитопы белка, могут быть использованы для стимуляции продуцирования антител против данного белка (см., например, Sutcliffe et al.,Science 219:660 (1983. В соответствии с этим антигенные эпитоп-несущие пептиды, антигенные пептиды, эпитопы и полипептиды настоящего изобретения могут быть использованы для выработки антител,связывающихся с описанными здесь полипептидами, а также для идентификации и скрининга моноклональных антител против IL-22RA, которые обладают нейтрализующим действием, и которые могут связываться с IL-22 и IL-20 (с одним из них или с обоими) или блокировать, ингибировать, снижать, подавлять или нейтрализовать их активность. Такие нейтрализующие моноклональные антитела настоящего изобретения могут связываться с антигенным эпитопом IL-22RA. Для определения областей в SEQ IDNO:3, которые имеют наибольший антигенный потенциал, могут быть использованы профили гидрофильности Хоппа/Вуда (Норр et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. 78:3824-3828, 1981; Hopp J. Immun. Meth. 88:118, 1986 и Triquier et al., Protein Engineering 11:153-169, 1998). Этот профиль характеризуется скользящим окном из шести остатков. Скрытые остатки G, S и Т и открытые остатки Н, Y и W не учитывались. В IL22RA эти области могут быть определены любым специалистом. Кроме того, антигенные эпитопы IL22RA в SEQ ID NO:3, предсказанные по кривой Джеймсона-Вольфа, например, с использованием программы DNASTAR Protean (DNASTAR, Inc., Madison, WI), являются предпочтительными антигенными- 16009026 эпитопами и могут быть получены любым специалистом. Такие антигенные эпитопы включают:(12) аминокислотные остатки 203 (Lys) - 209 (Thr) SEQ ID NO:3. Другими эпитопами являются нижеследующие пептиды, которые потенциально продуцируются из невосстановленного полноразмерного человеческого IL-22RA, расщепленного CnBr: пептид 6 (SEQ IDID NO:60) и пептид 11 (SEQ ID NO:61). Цистеины связаны дисульфидными связями, что приводит к образованию возможной связи между пептидами 7 (SEQ ID NO:57) и 10 (SEQ ID NO:60). В частности, SEQID NO:56 соответствует аминокислотным остаткам 1 (Pro) - 92 (Met) SEQ ID NO:3; SEQ ID NO:57 соответствует аминокислотным остаткам 93 (Thr) - 120 (Met) SEQ ID NO:3; SEQ ID NO:58 соответствует аминокислотным остаткам 121 (Ile) - 160 (Met) SEQ ID NO:3; SEQ ID NO:59 соответствует аминокислотным остаткам 161 (His) - 185 (Met) SEQ ID NO:3; SEQ ID NO:60 соответствует аминокислотным остаткам 186 (Ile) - 199 (Met) SEQ ID NO:3, a SEQ ID NO:61 соответствует аминокислотным остаткам 200NO:3), которые играют важную роль в связывании "лиганд-рецептор", являются Tyr-60, Phe-164, Tyr-93,Arg-112, Lys-210 и Glu-211 SEQ ID NO:2 (и соответствующими остатками SEQ ID NO:3). Кроме того,первичными остатками SEQ ID NO:2 (и соответствующими остатками SEQ ID NO:3), которые играют важную роль в регуляции связывания "лиганд-рецептор", являются Tyr-60 и Phe-164 SEQ ID NO:2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO:3), а вторичными остатками являются остатки Tyr-93, Arg-112, Lys210 и Glu-211 SEQ ID NO:2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO:3). В предпочтительных вариантах изобретения антигенные эпитопы, с которыми связываются нейтрализующие антитела настоящего изобретения, содержат остатки SEQ ID NO:2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO:3), играющие важную роль в связывании "лиганд-рецептор", например, с IL-22RA и с IL-20 или IL-22 (с одним из них или с обоими). Антигенные эпитоп-несущие пептиды и полипептиды могут содержать по крайней мере от 4 до 10 аминокислот, по крайней мере от 10 до 15 аминокислот или примерно от 15 до 30 аминокислот описанной здесь аминокислотной последовательности. Такие эпитоп-несущие пептиды и полипептиды могут быть продуцированы путем фрагментации полипептида IL-22RA или химическими методами пептидного синтеза, описанными ниже. Кроме того, эпитопы могут быть отобраны путем фагового представления библиотек рандомизированных пептидов (см., например, LaneStephen, Curr. Opin. Immunol. 5:268(1993) и Cortese et al., Curr. Opin. Biotechnol. 7:616 (1996. Стандартные методы идентификации эпитопов и продуцирования антител из небольших пептидов, содержащих эпитоп, описаны, например, MoleUniversity Press 1995) и Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, pages 9.3.1-9.3.5 and pages 9.4.1-9.4.11 (John WileySons, 1997). Для любого полипептида IL-22RA, включая его варианты и гибридные белки, каждый специалист может легко получить полностью вырожденную полинуклеотидную последовательность, кодирующую указанный вариант, с использованием информации, имеющейся выше в табл. 1 и 2. Кроме того, каждый специалист может использовать стандартную компьютерную программу для выявления вариантов IL22RA, исходя из описанных здесь нуклеотидных и аминокислотных последовательностей. 5. Продуцирование полипептидов IL-22RA Полипептиды настоящего изобретения, включая полноразмерные полипептиды; растворимые мономерные, гомодимерные, гетеродимерные и мультимерные рецепторы; полноразмерные рецепторы; фрагменты рецепторов (например, лигандсвязывающие фрагменты и антигенные эпитопы), функциональные фрагменты и гибридные белки могут быть продуцированы в рекомбинантных клетках-хозяевах стандартными методами. Для экспрессии гена IL-22RA, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, должна быть функционально присоединена к регуляторным последовательностям, которые регулируют транскрипционную экспрессию в экспрессирующем векторе, а затем она должна быть введена в клетку-хозяина. Помимо последовательностей регуляции транскрипции, таких как промоторы и энхансеры, экспрессирующие векторы могут включать последовательности регуляции трансляции и- 17009026 маркерный ген, который является подходящим для отбора клеток, несущих этот экспрессирующий вектор. Экспрессирующие векторы, которые могут быть использованы для продуцирования чужеродного белка в эукариотических клетках, обычно содержат: (1) прокариотические ДНК-элементы, кодирующие бактериальный сайт инициации репликации, и маркер резистентности к антибиотикам, обеспечивающие рост и отбор экспрессирующего вектора в бактериальном хозяине; (2) эукариотические ДНК-элементы,регулирующие инициацию транскрипции, такие как промотор; и (3) ДНК-элементы, регулирующие процессинг транскриптов, такие как последовательность терминации транскрипции/полиаденилирования. Как обсуждалось выше, экспрессирующие векторы могут также включать нуклеотидные последовательности, кодирующие секреторную последовательность, которая направляет гетерологичный полипептид по секреторному пути клетки-хозяина. Так, например, экспрессирующий вектор IL-22RA может содержать ген IL-22RA и секреторную последовательность, происходящую от любого секретированного гена. Белки IL-22RA настоящего изобретения могут экспрессироваться в клетках млекопитающих. Примерами подходящих клеток-хозяев млекопитающих являются клетки почки Африканской зеленой мартышки (Vero; ATCC CRL 1587), клетки почки человеческого эмбриона (293-НЕK; ATCC CRL 1573),клетки почки детеныша хомячка (ВНК-21, ВНК-570, ATCC CRL 8544, ATCC CRL 10314), клетки почки собак (MDCK; ATCC CCL 34), клетки яичника китайского хомячка (СНО-K1; ATCC CCL61; СНО DG44(Chasin et al., Som. Cell. Molec. Genet. 12:555, 1986, клетки гипофиза крысы (GH1; ATCC CCL82), клетки HeLa S3 (ATCC CCL2.2), клетки крысиной гепатомы (H-4-II-E; ATCC CRL 1548), SV40 трансформированные клетки почки обезьяны (COS-1; ATCC CRL 1650) и клетки мышиного эмбриона(NIH-3T3; ATCC CRL 1658). Что касается млекопитающего-хозяина, то следует отметить, что сигналы регуляции транскрипции и трансляции могут происходить от вирусных источников млекопитающего, например, аденовируса, вируса коровьей папиломы, обезьяньего вируса или т.п., в которых регуляторные сигналы ассоциированы с конкретным геном, имеющим высокий уровень экспрессии. Подходящие последовательности регуляции транскрипции и трансляции могут быть также получены из генов млекопитающих, например, из генов актина, коллагена, миозина и металлотионеина. Последовательности регуляции транскрипции включают промоторную область, достаточную для обеспечения регуляции инициации синтеза РНК. Подходящими эукариотическими промоторами являются промотор гена металлотионеина I (Hamer et al., J. Molec. Appl. Genet. 1:273 (1982, промоторы ТК вируса герпеса (McKnight, Cell 31:355 (1982, ранний промотор SV40 (Benoist et al., Nature 290:304 (1981,промотор вируса саркомы Рауса (Gorman et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 79:6777 (1982, промотор цитомегаловируса (Foecking et al., Gene 45:101 (1980 и промотор вируса опухоли молочной железы мышей (в общих чертах, см. Etcheverry "Expression of Engineered Proteins in Mammalian Cell Culture", ProteinEngineering: Principles and Practice, Cleland et al., (eds.), pages 163-181 (John WileySons, Inc. 1996. Альтернативно, прокариотический промотор, такой как промотор РНК-полимеразы бактериофагаT3, может быть использован для регуляции экспрессии гена IL-22RA в клетках млекопитающего в том случае, если прокариотический промотор регулируется эукариотическим промотором (Zhou et al., Mol.Cell. Biol. 10:4529 (1990) and Kaufman et al., Nucl. Acids. Res. 19:4485 (1991. В некоторых вариантах осуществления изобретения, ДНК-последовательность, кодирующая полипептид растворимого рецептора IL-22RA или фрагмент полипептида IL-22RA, функционально присоединена к другим генетическим элементам, необходимым для ее экспрессии, обычно, к промотору и терминатору транскрипции в экспрессирующем векторе. Такой вектор также обычно содержит один или несколько селективных маркеров и один или несколько сайтов инициации репликации, хотя для каждого специалиста очевидно, что в некоторых системах, селективные маркеры могут находиться в отдельных векторах, а репликация экзогенной ДНК может обеспечиваться интеграцией в геном клетки-хозяина. Выбор промоторов, терминаторов, селективных маркеров, векторов и других элементов может быть осуществлен любым специалистом путем рутинного экспериментирования. Многие из таких элементов описаны в литературе и являются коммерчески доступными. Множество компонентов комплекса растворимого рецептора могут быть котрансфицированы на отдельных экспрессирующих векторах, либо они могут находиться в одном экспрессирующем векторе. Такие методы экспрессии множества компонентов белковых комплексов хорошо известны специалистам. Экспрессирующий вектор может быть введен в клетки-хозяева различными стандартными методами, включая трансфекцию с использованием фосфата кальция, трансфекцию с помощью липосом, доставку путем микроинжекции, электропорацию и т.п. Трансфицированные клетки могут быть отобраны и размножены с получением рекомбинантных клеток-хозяев, содержащих экспрессирующий вектор, стабильно интегрированный в геном клеткихозяина. Методы встраивания векторов в эукариотические клетки и методы отбора таких стабильных трансформантов с использованием доминантного селективного маркера описаны Ausubel (1995)Murray (ed.), Gene Transfer and Expression Protocols (Humana Press, 1991). Так, например, одним из подходящих селективных маркеров является ген, сообщающий резистентность к антибиотику неомицину. В этом случае, отбор осуществляют в присутствии лекарственного- 18009026 средства типа неомицина, такого как G418 или т.п. Системы отбора могут быть также использованы для увеличения уровня экспрессии представляющего интерес гена, т.е. для осуществления процесса, называемого "амплификацией". Амплификацию осуществляют путем культивирования трансфектантов в присутствии небольшого количества селективного агента с последующим увеличением количества этого селективного агента для отбора клеток, продуцирующих высокие уровни продуктов встроенных генов. Подходящим амплифицируемым селективным маркером является ген дигидрофолатредуктазы (DHFR),сообщающий резистентность к метотрексату. Могут быть также использованы и другие гены резистентности к лекарственным средствам (например, ген резистентности к гигромицину, ген резистентности ко многим лекарственным средствам и ген резистентности к пуромицинацетилтрансферазе). Альтернативно, маркеры, которые вводят измененный фенотип, такие как белок, флуоресцирующий в зеленом диапазоне спектра, или белки клеточной поверхности, такие как CD4, CD8, ГКГ класса I, и щелочная фосфатаза плаценты, могут быть использованы для отделения трансфицированных клеток от нетрансфицированных клеток такими методами, как сортировка клеток по интенсивности флуоресценции(FACS) или разделение с использованием магнитных сфер. Полипептиды IL-22RA могут быть также получены путем культивирования клеток млекопитающих с использованием системы доставки вирусов. Репрезентативными вирусами, подходящими для этой цели, являются аденовирус, ретровирусы, герпесвирус, вирус коровьей оспы и адено-ассоциированный вирус (AAV). Аденовирус, т.е. вирус на основе двухцепочечной ДНК, в настоящее время является наиболее изученным вектором для переноса генов, используемым в целях доставки гетерологичной нуклеиновой кислоты (в общих чертах, см. Becker et al., Meth. Cell. Biol. 43:161 (1994) и DouglasCuriel, ScienceMedicine, 4:44 (1997. Преимуществами такой аденовирусной системы является возможность встраивать относительно крупные ДНК-вставки, способность реплицироваться до высоких титров, способность инфицировать клетки млекопитающих широкого ряда и гибкость, которая позволяет использовать эту систему с большим числом доступных векторов, содержащих различные промоторы. В результате делеции частей аденовирусного генома, в него могут быть встроены более крупные вставки (до 7 т.п.н.) гетерологичной ДНК. Эти вставки могут быть встроены в вирусную ДНК путем прямого лигирования или путем гомологичной рекомбинации с котрансфицированной плазмидой. Одним из возможных вариантов является делеция главного гена Е 1 из вирусного вектора, которая приводит к неспособности этого вектора к репликации, если только ген Е 1 не будет поставляться клеткойхозяином. Т-клетка, например, человеческие клетки 293, инфицированные аденовирусным вектором(АТСС.CRL-1573, 45504, 45505), могут быть выращены в виде адгезивных клеток или в виде суспензионной культуры при относительно высокой клеточной плотности с продуцированием значительного количества белка (см. Garnier et al., Cytotechnol. 15:145 (1994.IL-22RA может быть также экспрессирован в других высших эукариотических клетках, таких как клетки птиц, грибов, насекомых, дрожжей или растений. Для введения клонированных генов IL-22RA в клетки насекомых, эффективной является бакуловирусная система. Подходящие экспрессирующие векторы были получены на основе вируса множественного ядерного полиэдроза Autographa californica(AcMNPV) и содержат хорошо известные промоторы, такие как промотор белка теплового шока (hsp) 70 дрозофилы, промотор предраннего гена вируса ядерного полиэдроза Autographa californica (ie-1), промотор задержанного раннего гена 39 К, промотор бакуловируса р 10 и промотор металлотионеина дрозофилы. Второй метод получения рекомбинантного бакуловируса предусматривает использование системы на основе транспозонов, описанной Luckow (Luckow et al., J. Virol. 67:4566 (1993. Эта система, в которой используются векторы для переноса, поставляется в наборе BAC-to-BAC (Life Technologies, Rockville,MD). В этой системе используется вектор для переноса PFASTBAC (Life Technologies), содержащий транспозон Tn7 и применяемый для переноса ДНК, кодирующей полипептид IL-22RA в бакуловирусный геном, интегрированный в E.coli в виде крупной плазмиды, называемый "бакмидой". См. Hill-PerkinsBiol. Chem. 270:1543 (1995). Кроме того, векторы для переноса могут включать ДНК, лигированную с сохранением рамки считывания и кодирующую эпитопную метку у С- или N-конца экспрессируемого полипептида IL-22RA, например, эпитопную метку Glu-Glu (Grussenmeyer et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. 82:7952 (1985. С применением известной техники, вектор для переноса, содержащий ген IL-22RA,трансформируют в E.coli и скринируют на бакмиды, которые содержат прерываемый ген lacZ, указывающий на присутствие рекомбинантного бакуловируса. Затем бакмидную ДНК, содержащую рекомбинантный бакуловирусный геном, выделяют стандартными методами. Репрезентативный вектор PFASTBAC может быть в значительной степени модифицирован. Так,например, полиэдриновый промотор может быть удален, и вместо него может быть встроен промотор основного белка бакуловируса (известный также как промотор Pcor, р 6.9 или промотор MP), экспрессия которого является более ранней при бакуловирусной инфекции, при этом, было показано, что он является предпочтительным для экспрессии секретируемых белков (см., например, Hill-PerkinsPossee, J. Gen.Virol. 71:971 (1990), Bonning et al., J. Gen. Virol. 75:1551 (1994) и ChazenbalkRapoport, J. Biol. Chem. 270:1543 (1995. В таких конструкциях вектора для переноса может быть использован короткий или длинный вариант промотора основного белка. Более того, могут быть сконструированы векторы для пе- 19009026 реноса, в которых секреторные сигнальные последовательности нативного IL-22RA заменены секреторными сигнальными последовательностями, происходящими от белков насекомых. Так, например, в данных конструкциях, вместо секреторной сигнальной последовательности нативного IL-22RA может быть использована секреторная сигнальная последовательность, происходящая от экдистероидглюкозилтрансферазы (EGT), меллитина пчел (Invitrogen Corporation; Carlsbad, CA) или gp67 бакуловируса (PharMingen: San Diego, CA). Для трансфекции клеток-хозяев используют рекомбинантный вирус или бакмиду. Подходящими клетками-хозяевами насекомых являются клеточные линии, происходящие от IPLB-Sf-21, яичниковая клеточная линия куколки Spodoptera frugipedra, такая как Sf9 (АТСС CRL 1711), Sf21AE и Sf21 (Invitrogen Corporation; San Diego, CA), а также клетки Schneider-2 Drosophila и клеточная линия HIGH FIVEO(Invitrogen), происходящая от Trichoplusia ni (патент США 5300435). Коммерчески доступные бессывороточные среды могут быть использованы для выращивания и поддержания жизнеспособности клеток. Подходящими средами для клеток Sf9 являются среды Sf900 II (Life Technologies) или ESF 921 (Expression Systems), а для клеток T.ni - среды Ех-сеllО 405 (JRH Biosciences, Lenexa, KS) или ExpressFiveO (Life Technologies). При использовании рекомбинантного вируса, клетки обычно культивируют,начиная с плотности инокуляции приблизительно 2-5105 клеток и до плотности 1-2106 клеток, и на этом этапе добавляют исходный рекомбинантный вирус при множественности заражения (m.o.i.) 0,1-10,а обычно примерно более 3. Хорошо известные методы получения рекомбинантных белков в бакуловирусных системах описаны Bailey et al. "Manipulation of Baculovirus Vectors", Methods in Molecular Biology, Vol. 7: Gene Transferand Expression Protocols, Murray (ed.), pages 147-168 (The Humana Press, Inc. 1991), Patel et al., "The baculovirus expression system", DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover et al. (eds.), pages 205244 (Oxford University Press 1995), Ausubel (1995), pages 16-37-16-57, Richardson (ed.), Baculovirus Expression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995) и Lucknow "Insect Cell Expression Technology", Protein Engineering: Principle and Practice, Cleland et al., (eds.) pages 183-218 (John WileySons, Inc. 1996). Для экспрессии описанных здесь генов могут быть также использованы клетки грибов, включая дрожжевые клетки. Дрожжами, представляющими особый интерес для этой цели, являются Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris и Pichia methanolica. Подходящими промоторами для экспрессии в дрожжах являются промоторы, происходящие от GAL1 (галактозы), PGK (фосфоглицераткиназы), ADH (алкогольдегидрогеназы), АОХ 1 (алкогольоксидазы), HIS4 (гистидинол-дегидрогеназы) и т.п. Было сконструировано множество векторов для клонирования в дрожжах, и эти векторы являются легко доступными. Такими векторами являются векторы на основе YIp, такие как YIp5; векторы YRp, такие как YRp17; векторы YEp, такие как YEp13; и векторы YCp, такие как YCp19. Методы трансформации клеток S. cerevisiae экзогенной ДНК и получения из этих клеток рекомбинантных полипептидов описаны, например, Kawasaki, патент США 4599311, Kawasaki et al., патент США 4931373, Brake, патент США 4870008,Welch et al., патент США 5037743 и Murray et al., патент США 4845075. Трансформированные клетки отбирают по их фенотипу, определяемому селективным маркером, в основном, по резистентности к лекарственному средству или по способности расти в отсутствии конкретного питательного вещества(например, лейцина). Подходящей системой векторов для использования в Saccharomyces cerevisiae является система векторов РОТ 1, описанная Kawasaki et al. (патент США 4931373), позволяющая проводить отбор трансформированных клеток по их способности расти в среде, содержащей глюкозу. Другими промоторами и терминаторами, подходящими для их использования в дрожжах, являются промоторы и терминаторы, происходящие от генов гликолитических ферментов (см., например, Kawasaki, патент США 4599311, Kingsman et al., патент США 4615974 и Bitter, патент США 4977092) и гены алкогольдегидрогеназы. См. также патенты США 4990446, 5063154, 5139936 и 4661454. Системы трансформации для других дрожжей, включая Hansenula polymorpha, Schizosaccharomycespombe, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces fragilis, Ustilago maydis, Pichia pastoris, Pichia methanolica,Pichia guillermondii и Candida maltosa, известны специалистам. См., например, Gleeson et al., J. Gen. Microbiol. 132:3459 (1986) и Cregg, патент США 4882279. Клетки Aspergillus могут быть использованы в соответствии с методами, описанными McKnight et al. в патенте США 4935349. Методы трансформации Acremonium chrysogenum описаны Sumino et al. в патенте США 5162228. Методы трансформацииNeurospora описаны Lambowitz в патенте США 4486533. Так, например, использование Pichia methanolica в качестве хозяина для продуцирования рекомбинантных белков описано Raymond, в патенте США 5716808; Raymond, в патенте США 5736383,Raymond et al., Yeast 14:11-23 (1998) и в международных публикацияхWO 97/17450, WO 97/17451,WO 98/02536 и WO 98/02565. Молекулы ДНК, используемые для трансформации Р. methanolica, обычно получают в виде двухцепочечных кольцевых плазмид, которые перед трансформацией предпочтительно линеаризуют. Для продуцирования полипептидов в P. methanolica, промотором и терминатором в такой плазмиде могут быть промоторы и терминаторы гена P. methanolica, такого как ген утилизации спирта P.methanolica (AUG1 или AUG2). Другими подходящими промоторами являются промоторы, происходящие от генов дигидроксиацетонсинтазы (DHAS), формиатдегидрогеназы (FMD) и каталазы (CAT). Для- 20009026 облегчения интеграции ДНК в хромосому хозяина, предпочтительно, чтобы весь экспрессионный сегмент плазмиды был фланкирован по обоим концам ДНК-последовательностями хозяина. Подходящим селективным маркером для использования в Pichia methanolica является ген ADE2 Р. methanolica, который кодирует фосфорибозил-5-аминоимидазолкарбоксилазу (AIRC; ЕС 4.1.1.21) и позволяет ade2 содержащим клеткам-хозяевам расти в отсутствии аденина. Для крупномасштабного промышленного культивирования, при котором желательно минимизировать использование метанола, могут быть использованы клетки-хозяева, в которых делетированы оба гена утилизации метанола (AUG1 и AUG2). Для продуцирования секретированных белков, клетки-хозяева могут быть дефицитными по гену вакуолярной протеазы (РЕР 4 и PRB1). Для облегчения введения плазмиды, содержащей ДНК, кодирующую представляющий интерес полипептид, в клетки P. methanolica, используется электропорация. Клетки P. methanolica могут быть трансформированы путем электропорации с использованием экспоненциально затухающего импульсного электрического поля, где напряженность поля составляет от 2,5 до 4,5 кВ/см, а предпочтительно примерно 3,75 кВ/см, и где постоянная времени (t) составляет от 1-40 мс, а наиболее предпочтительно примерно 20 мс. Экспрессирующие векторы могут быть также введены в протопласты растения, в интактные ткани растений или в отдельные клетки растений. Методами введения экспрессирующих векторов в ткань растения являются прямое инфицирование ткани растения бактерией Agrobacterium tumefaciens или совместное культивирование ткани растения с этой бактерией; доставка путем микроинжекции; инъекция ДНК; электропорация и т.п. См., например, Horsch et al., Science 227:1229 (1985), Klein et al., Biotechnology 10:268 (1992) и Miki et al., "Procedures for Introducing Foreign DNA into Plants", Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Glick et al. (eds.), pages 67-88 (CRC Press 1993). Альтернативно, гены IL-22RA могут быть экспрессированы в прокариотических клетках-хозяевах. Подходящие промоторы, которые могут быть использованы для экспрессии полипептидов IL-22RA в прокариотических хозяевах, хорошо известны специалистам, и такими промоторами являются промоторы, способные распознавать полимеразы Т 4, T3, Sp6 и Т 7; промоторы PR и PL бактериофага лямбда, промоторы trp, recA, промоторы белков теплового шока, промоторы lacUV5, tac, lpp-lacSpr, phoA и lacZE.coli, промоторы В. subtilis, промоторы бактериофагов Bacillus, промоторы Streptomyces, промотор int бактериофага лямбда, промотор bla pBR322 и промотор CAT гена хлорамфеникол-ацетилтрансферазы. Прокариотические промоторы описаны Glide, J. Ind. Microbiol. 1:277 (1987), Watson et al., MolecularBiology of the Gene, 4th Ed. (Benjamin Cummins 1987) и Ausubel et al. (1995). Подходящими прокариотическими хозяевами являются E.coli и Bacillus subtilis. Подходящими штаммами E.coli являются BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS, BL21(DE3)pLysE, DH1, DH4I, DH5, DH5I,DH5IF, DH5IMCR, DH10B, DH10B/p3, DH11S, C600, HB101, JM101, JM105, JM109, JM110, K38, RP1,Y1088, Y1089, CSH18, ER1451 и ER1647 (см., например, Brown (ed.), Molecular Biology Labfax (AcademicPress 1985. При экспрессии полипептида IL-22RA в бактериях, таких как E.coli, указанный полипептид может сохраняться в цитоплазме, обычно в виде нерастворимых гранул, либо он может направляться в периплазматическое пространство секреторной бактериальной последовательностью. В первом случае, клетки лизируют, а гранулы выделяют и денатурируют с использованием, например, гуанидинизотиоцианата или мочевины. Затем денатурированный полипептид может быть подвергнут рефолдингу и димеризации путем разведения денатуратом, например, путем диализа против раствора мочевины и комбинации восстановленного и окисленного глутатиона, и последующего диализа против забуференного физиологического раствора. В последнем случае, полипептид может быть выделен из периплазматического пространства в растворимой и функциональной форме путем разрушения клеток (например, путем обработки ультразвуком или воздействия осмотическим шоком) с высвобождением содержимого периплазматического пространства и выделением белка, не прибегая к денатурации и рефолдингу. Методы экспрессии белков в прокариотических хозяевах хорошо известны специалистам (см., например, Williams et al., "Expression of foreign proteins in E. coli using plasmid vectors and purification of specific polyclonal antibodies", DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover et al. (eds.), page 15in Bacteria", Protein Engineering: Principles and Practice, Cleland et al. (eds.), page 101 (John WileySons,Inc. 1996. Стандартные методы введения экспрессирующих векторов в клетки бактерий, дрожжей, насекомых и растений описаны, например, Ausubel (1995). Общие методы экспрессии и выделения чужеродного белка, продуцируемого клеточной системой млекопитающего, описаны в литературе, например, Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins inMammalian Cell Culture", Protein Engineering: Principles and Practice, Cleland et al. (eds.), pages 163 (WileyLiss, Inc. 1996). Стандартные методы выделения белка, продуцируемого бактериальной системой, описаны, например, Grisshammer et al., "Purification of over-produced proteins from E.coli cells", DNA Cloning 2:Expression Systems, 2nd Edition, Glover et al. (eds.), pages 59-92 (Oxford University Press 1995). Разработанные методы выделения рекомбинантных белков из бакуловирусной системы описаны Richardson (ed.),Baculovirus Expression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995). В качестве альтернативы, полипептиды настоящего изобретения могут быть синтезированы методами полного твердофазного синтеза, частичного твердофазного синтеза, конденсации фрагмента или классического синтеза в растворе. Такие методы синтеза хорошо известны специалистам (см., например,Merrifield J. Am. Chem. Soc. 85:2149 (1963), Srewart et al. "Solid Phase Peptide Synthesis" (2nd Edition),(Pierce Chemical Co., 1984), BayerRapp, Chem. Pept. Prot. 3:3 (1986), Atherton et al., Solid Phase PeptideSynthesis: A Practical Approach (IRL Press, 1989), FieldsColowick, "Solid-Phase Peptide Synthesis", Methods in Enzymology, Vol. 289 (Academic Press 1997) и Lloyd-Williams et al., Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins (CRC Press, Inc. 1997. Изменения, вносимые в общие стратегии химического синтеза, такие как "природное химическое лигирование" и "лигирование экспрессированного белка", также являются стандартными (см., например, Dawson et al., Science 266:776 (1994), Hackeng et al.,Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 94:7845 (1997), Dawson, Methods Enzymol. 287:34 (1994), Muir et al., Proc. Nat'l.Acad. Sci. USA 95:6705 (1998) и SeverinovMuir, J. Biol. Chem. 273:16205 (1998. Пептиды и полипептиды настоящего изобретения включают по крайней мере 6, по крайней мере 9 или по крайней мере 15 смежных аминокислотных остатков SEQ ID NO:3. В качестве иллюстрации могут служить полипептиды, которые могут содержать по крайней мере 6, по крайней мере 9 или по крайней мере 15 смежных аминокислотных остатков SEQ ID NO:3. В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды содержат 20, 30, 40, 50, 100 или более смежных остатков данных аминокислотных последовательностей. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие такие пептиды и полипептиды, могут быть использованы в качестве праймеров и зондов для полимеразной цепной реакции. Кроме того, полипептиды IL-22RA и их фрагменты могут экспрессироваться в высших эукариотических клетках в виде мономеров, гомодимеров, гетеродимеров или мультимеров. Такие клетки могут быть использованы для продуцирования мономерных, гомодимерных, гетеродимерных и мультимерных полипептидов рецептора IL-22RA, которые содержат по крайней мере 1 полипептид IL-22RA ("IL-22RAсодержащие рецепторы" или полипептиды "IL-22RA-содержащих рецепторов"), либо они могут быть использованы в качестве аналитических клеток в системах скрининга. В одном из аспектов настоящего изобретения полипептид настоящего изобретения, содержащий внеклеточный домен IL-22RA, продуцируется культивируемой клеткой, и эту клетку используют для скрининга на лиганды для рецептора,включая природный лиганд, IL-22, а также агонисты и антагонисты природного лиганда. Для систематизации этого подхода, кДНК или ген, кодирующие рецептор, объединяют с другими генетическими элементами, необходимыми для их экспрессии (например, с транскрипционным промотором), и полученный экспрессирующий вектор встраивают в клетку-хозяина. Клетки, которые экспрессируют ДНК и продуцируют функциональный рецептор, отбирают и используют в различных системах скрининга. Каждый компонент комплекса мономерного, гомодимерного, гетеродимерного и мультимерного рецептора может быть экспрессирован в той же самой клетке. Кроме того, компоненты комплекса мономерного, гомодимерного, гетеродимерного и мультимерного рецептора могут быть также присоединены к трансмембранному домену или к другой мембраносвязанной молекуле, что позволяет осуществлять сборку комплекса и проводить скрининг трансфектантов, описанных выше. В анализе полипептидов-антагонистов IL-20 и IL-22 и антител против IL-20 и IL-22 настоящего изобретения, клетками млекопитающих, подходящими для экспрессии IL-22RA-содержащих рецепторов или других рецепторов, которые, как известно, связываются с IL-20 или IL-22 (например, клетки, экспрессирующие IL-22RA/CRF2-4, и IL-22RA, IL-20RB, IL-22RA/IL-20RB или IL-22RA/IL-20RB) и для передачи опосредуемого рецептором сигнала, являются клетки, экспрессирующие другие субъединицы рецептора, которые могут образовывать функциональный комплекс с IL-22RA (или IL-20RA). Эти субъединицы могут включать субъединицы семейства рецепторов интерферонов или рецепторов других цитокинов класса II или класса I, например, CRF2-4 (Genbank, рег.Z17227), IL-10R (Genbank, рег.U00672 и NM001558), IL-22RA (совместный патент США 5965704), zcytor7 (IL-20RA) (совместный патент США 5945511), IL-20RA/IL-20RB (публикация WIPOWO 01/46232) и IL-9R. Также предпочтительно использовать клетку, происходящую от организма того вида, в котором экспрессируется данный рецептор. В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанная клетка зависит от экзогенно вводимого гемопоэтического фактора роста для ее пролиферации. Предпочтительными клеточными линиями этого типа являются человеческая клеточная линия TF-1 (АТСС,CRL-2003) и клеточная линия AML-193 (АТСС,CRL-9589), которые представляют собой GM-CSF-зависимые клеточные линии человеческого лейкоза и клетки BaF3 (PalaciosSteinmetz, Cell 41:727-734, (1985, которые представляют собой IL-3-зависимую мышиную пре-В-клеточную линию. Другими клеточными линиями являются клетки ВНК, COS-1 и СНО. Подходящие клетки-хозяева могут быть сконструированы для продуцирования необходимых субъединиц рецептора и другого клеточного компонента, необходимого для вырабатывания нужного клеточного ответа. Этот подход является предпочтительным, поскольку клеточные линии могут быть сконструированы так, чтобы они экспрессировали субъединицы рецептора, происходящего от организма любого вида, что тем самым позволяет устранить возможные ограничения,- 22009026 обусловленные видовой специфичностью. Ортологи кДНК человеческого рецептора, происходящие от организма определенного вида, такого как мышиная кДНК в клеточной линии BaF3, могут быть клонированы и использованы в клеточных линиях, происходящих от организма того же вида. Клеточные линии, зависящие от одного гемопоэтического фактора роста, такого как GM-CSF или IL-3, могут быть сконструированы так, чтобы они зависели от другого цитокина, действие которого опосредуется рецептором IL-22RA, таким как IL-22. Клетки, экспрессирующие функциональный рецептор, используются в скрининг-анализах. Ряд подходящих анализов известен специалистам. Эти анализы основаны на детекции биологического ответа в клетке-мишени. Одним из таких анализов является анализ на пролиферацию клеток. Клетки культивируют в присутствии или в отсутствии тестируемого соединения, а клеточную пролиферацию детектируют, например, путем измерения уровня включения меченного тритием тимидина или путем проведения колориметрического анализа на основе метаболического расщепления бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2 ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) (Mosman J. Immunol. Meth. 65:55-63, (1983. Альтернативный анализ предусматривает использование клеток, которые затем конструируют так, чтобы они экспрессировали репортерный ген. Такой репортерный ген присоединяют к промоторному элементу, чувствительному к ассоциированному с данным рецептором пути, и этот анализ позволяет детектировать активацию транскрипции репортерного гена. Предпочтительным промоторным элементом, предназначенным для этой цели, является элемент сывороточного ответа или SRE. См., например, Shaw et al., Cell 56:563-572 (1989). Предпочтительным репортерным геном является ген люциферазы (de Wet et al., Mol. Cell. Biol. 7:725(1987. Экспрессию гена люциферазы детектируют посредством хемилюминисценции методами, известными специалистам (например, Baumgartner et al., J. Biol. Chem. 269:29094-29101 (1994); SchenbornGoiffin, Promega Notes, 41:11, 1993). Наборы для анализа на люциферазную активность являются коммерчески доступными и поставляются, например, фирмой Promega Corp., Madison, WI. Клеточные линии-мишени такого типа могут быть использованы для скрининга библиотек химических веществ, кондиционированных клетками культуральных сред, грибных бульонов, образцов почвы, проб воды и т.п. Так, например, банк образцов кондиционированных клетками сред может быть проанализирован на клетке-мишени для идентификации клеток, продуцирующих лиганд. Затем позитивные клетки используют для продуцирования библиотеки кДНК в экспрессирующем векторе млекопитающего, которую разделяют на пулы, трансфицируют в клетки-хозяева и экспрессируют. Затем образцы среды трансфицированных клеток анализируют, после чего позитивные клетки разделяют на пулы, и подвергают повторной трансфекции, субкультивированию и повторному анализу для выделения клонированной кДНК, кодирующей лиганд. Несколько клеточных линий, чувствительных к IL-20, известны специалистам или они могут быть сконструированы, и такими линиями являются, например, клеточная линия Baf3/DIRS1/cytoR11 (публикация WIPOWO 02/072607). Кроме того, известны несколько клеточных линий, чувствительных к IL22 (Dumoutier et al., J. Immunol. 164:1814-1819, 2000; Dumoutier et al., L. Proc. Nat'l. Acad. Sci. 97:1014410149, 2000; Xie M.H. et al., J.Biol.Chem. 275:31335-31339, 2000; Kotenko S.V. et al., J. Biol.Chem. 276:2725-2732, 2001), а также клеточные линии, которые экспрессируют субъединицу IL-22RA рецептора(человеческая почечная карцинома); SW480 (АТССCCL-228) (человеческая аденокарцинома толстой кишки); HepG2 (АТССНВ-8065) (человеческая гепатома); РС 12 (АТССCRL-1721) (мышиная модель нервных клеток; крысиная феохромоцитома) и MES13 (АТССCRL-1927) (мышиная почечная мезангиальная клеточная линия). Кроме того, кандидатами на клеточные линии, чувствительные к IL-22,также являются некоторые клеточные линии, экспрессирующие IL-22RA (рецептор IL-22): A549 (АТССCCL-185) (человеческая карцинома легких); G-361 (АТССCRL-1424) (человеческая меланома) иCaki-1 (АТССНТВ-46) (человеческая почечная карцинома). Кроме того, могут быть сконструированы клеточные линии, чувствительные к IL-22, например, описанная здесь клеточная линияBaf3/cytoR11/CRF2-4 (публикация WIPOWO 02/12345). Эти клетки могут быть использованы в анализах на функционирование IL-22RA в качестве антагониста IL-20 или IL-22 или противовоспалительного фактора. Другой метод скрининга, рассматриваемый в настоящем изобретении, предусматривает использование гибридных рецепторных полипептидов. Эти гибридные полипептиды подразделяются на два класса. К первому классу относится полипептид, в котором внутриклеточный домен IL-22RA присоединен к лигандсвязывающему домену второго рецептора. Гибридные рецепторные полипептиды второго класса включают внеклеточный (лигандсвязывающий домен) IL-22RA (SEQ ID NO:3), соединенный с внутриклеточным доменом второго рецептора, предпочтительно, гемапоэтического цитокинового рецептора, и трансмембранный домен. Мономеры, гомодимеры, гетеродимеры и мультимеры гибридных рецепторовIL-22RA настоящего изобретения, принадлежащих ко второму классу, экспрессируются в клетках, которые, как известно, восприимчивы к сигналам, передаваемым вторым рецептором. В целом, эти два класса гибридных рецепторов обеспечивают идентификацию восприимчивой клетки и могут быть использованы в целях разработки анализа для детекции IL-22 или IL-20. Кроме того, такие клетки могут быть использованы в присутствии IL-22 или IL-20 для обнаружения антагонистов растворимого рецептора на- 23009026 стоящего изобретения в анализе на конкурентное связывание. В таком анализе снижение степени пролиферации или активности передачи сигнала IL-22 или IL-20 в присутствии растворимого рецептора настоящего изобретения иллюстрирует антагонистическую активность. Кроме того, анализы на связывание растворимого рецептора IL-22RA, т.е. клеточные анализы, могут быть также использованы для детекции связывания с IL-22 или IL-20 или блокирования, ингибирования, снижения, подавления или нейтрализации активности IL-22 или IL-20. 6. Получение гибридных белков и конъюгатов IL-22RA Один из основных классов аналогов IL-22RA включает варианты, имеющие аминокислотную последовательность, которая содержит мутацию в описанной здесь аминокислотной последовательности. Другой основной класс аналогов IL-22RA включает антиидиотипические антитела и их фрагменты, описанные ниже. Кроме того, рекомбинантные антитела, содержащие антиидиотипические вариабельные домены, могут быть использованы в качестве аналогов (см., например, Monfardini et al., Proc. Assoc. Am.Physician 108:420 (1996. Поскольку вариабельные домены антиидиотипических антител против IL22RA имитируют IL-22RA, то эти домены могут обладать IL-22RA-связывающей активностью. Методы продуцирования антиидиотипических каталитических антител известны специалистам (см., например,Joron et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 672:216 (1992), Friboulet et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 47:229 (1994) иAvalle et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 864:118 (1998. Другим способом идентификации аналогов IL-22RA является использование комбинаторных библиотек. Методы создания и скрининга фагового представления описаны, например, Kay et al., Phage Display of Peptides and Proteins (Academic Press, 1996), Verdine, патент США 5783384, Kay et al., патент США 5747334 и Kauffman et al., патент США 5723323. Полипептиды IL-22RA используются как in vivo, так и in vitro. Так, например, растворимая формаIL-22RA может быть добавлена в культуральную клеточную среду для ингибирования действия лигандаIL-22RA, продуцируемого культивируемыми клетками. Гибридные белки IL-22RA могут быть использованы для экспрессии IL-22RA в рекомбинантном хозяине и для выделения продуцированного IL-22RA. Как описано ниже, конкретные гибридные белкиIL-22RA также используются в диагностике и в терапии. Гибридный белок одного типа содержит пептид, который высвобождает полипептид IL-22RA из рекомбинантной клетки-хозяина. Для направления полипептида IL-22RA по секреторному пути эукариотической клетки-хозяина, в IL-22RAэкспрессирующем векторе присутствует секреторная сигнальная последовательность (также известная как сигнальный пептид, лидерная последовательность, препропоследовательность или препоследовательность). Эта секреторная сигнальная последовательность может происходить от IL-22RA, однако,подходящая сигнальная последовательность может также происходить и от другого секретируемого белка или белка, синтезированного de novo. Секреторную сигнальную последовательность функционально присоединяют к IL-22RA-кодирующей последовательности так, чтобы две эти последовательности были соединены с сохранением рамки считывания и были расположены так, чтобы они направляли только что синтезированный полипептид по секреторному пути клетки-хозяина. Секреторные сигнальные последовательности обычно расположены со стороны 5'-конца по отношению к нуклеотидной последовательности, кодирующей нужный полипептид, хотя некоторые секреторные сигнальные последовательности могут быть расположены в другом участке представляющей интерес нуклеотидной последовательности(см., например, Welch et al., патент США 5037743; Holland et al., патент США 5143830). Хотя секреторная сигнальная последовательность IL-22RA или другой белок, продуцируемый клетками млекопитающих (например, сигнальная последовательность тканевого активатора плазминогена,описанная, например, в патенте США 5641655), могут быть использованы для экспрессии IL-22RA в рекомбинантных млекопитающих-хозяевах, однако, для экспрессии в дрожжевых клетках предпочтительной является дрожжевая сигнальная последовательность. Примерами подходящих сигнальных последовательностей дрожжей являются последовательности, происходящие от дрожжевого -фактора феромона, стимулирующего созревание дрожжей (кодируемого геном MF1), инвертазы (кодируемой геном SUC2) или кислотной фосфотазы (кодируемой геном РНO5). См., например, Romanos et al., "Expression of Cloned Genes in Yeast", DNA Cloning 2: A Practical Approach, 2nd Edition, Glover and Hames(eds.), pages 123-167 (Oxford University Press, 1995). Растворимые рецепторные полинуклеотиды IL-22RA могут быть получены путем экспрессии усеченной ДНК, кодирующей внеклеточный домен, например, полипептид, который содержит SEQ IDNO:3, или соответствующую область нечеловеческого рецептора. При этом предпочтительно, чтобы полипептид этого внеклеточного домена был получен в форме, в основном, не содержащей трансмембранных и внутриклеточных полипептидных сегментов. Для направления экспорта этого рецепторного домена из клетки-хозяина, ДНК рецептора присоединяют ко второму сегменту ДНК, кодирующему секреторный белок, такой как секреторный пептид t-PA. Для облегчения очистки секретированного рецепторного домена может быть осуществлено удлинение С-конца, например, к рецепторному полипептиду могут быть присоединены полигистидиновая метка, вещество Р, пептид Flag (Hopp et al., Biotechnology 6: 1204-1210 (1988), поставляемый фирмой Eastman Kodak Co., New Haven, CT), либо другой полипептид- 24009026 или белок, который является доступным для антитела или другого специфически связывающегося агента. Кроме того, антигенные эпитопы IL-22RA могут быть получены из внеклеточных цитокинсвязывающих доменов как описано выше. В альтернативном способе, внеклеточный домен рецептора IL-22RA или другой компонент рецептора цитокина класса I или II может быть экспрессирован в виде гибрида с константными областями тяжелой цепи иммуноглобулина, обычно с Fc-фрагментом, который содержит два домена константной области и шарнирную область, но не содержит вариабельной области (см. Sledziewski A.Z. et al., патенты США 6018026 и 5750375). Такими гибридами являются растворимые полипептиды IL-22RA настоящего изобретения. Один из таких гибридов представлен в SEQ ID NO:4. Указанные гибриды обычно секретируются в виде мультимерных молекул, где Fc-фрагменты связаны друг с другом дисульфидными связями, а два рецепторных полипептида расположены в непосредственной близости друг от друга. Гибриды этого типа могут быть использованы для аффинной очистки когнатного лиганда из раствора в качестве средства для in vitro анализа, в целях блокирования, ингибирования или уменьшения сигнала invitro путем специфического титрования лиганда, и в качестве антагонистов in vivo путем их парентерального введения для связывания циркулирующего лиганда и его выведения из кровотока. Для очистки лиганда, химеру IL-22RA-Ig добавляют в образец, содержащий лиганд (например, в кондиционированную клетками культуральную среду или в экстракты тканей) в условиях, стимулирующих связывание рецептор-лиганд (обычно при температуре, рН и ионной силе, близких к физиологическим параметрам). Затем комплекс химера-лиганд разделяют с помощью смеси с использованием белка А, который иммобилизуют на твердом носителе (например, на нерастворимых полимерных сферах). После этого, лиганд элюируют стандартными химическими методами, например, в солевом или рН-градиенте. Альтернативно, сама химера может быть связана с твердым носителем, при этом, связывание и элюирование осуществляют как описано выше. Эти химеры могут быть использованы in vivo для регуляции воспалительных ответов, включая ответы острой фазы, такие как продуцирование сывороточного амилоида A (SAA), Среактивного белка (CRP) и т.п. Химеры с высокой аффинностью связывания вводят парентерально (например, внутримышечно, подкожно или внутривенно). Циркулирующие молекулы связываются с лигандом и выводятся из кровотока в соответствии с нормальным физиологическим процессом. Для применения в анализах эти химеры связывают с носителем посредством Fc-области и используют в анализе формата ELISA. Для облегчения выделения анти-IL-22RA антитела и связывающих партнеров настоящего изобретения может быть преимущественно применен анализ, в котором используется лигандсвязывающий рецептор (или антитело, один из членов пары комплемент/антикомплемент) или его связывающий фрагмент, и коммерчески доступное биосенсорное устройство (BIAcore, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Такой рецептор, антитело, компонент пары комплемент/антикомплемент или фрагмент иммобилизуют на поверхности рецепторного чипа. Применение этого устройства описано Karlsson, J. Immunol. Methods 145:229-40, 1991 и CunninghamWells, J. Mol. Biol. 234:554-63, 1993. Рецептор, антитело, компонент или фрагмент ковалентно связывают с использованием амина или сульфгидрила с декстрановыми волокнами, которые присоединяют к золотой пленке в проточной кювете. Затем через эту кювету пропускают тестируемый образец. Если лиганд, эпитоп или компонент-партнер пары комплемент/антикомплемент присутствуют в образце, то они будут связываться с иммобилизованным рецептором, антителом или партнером, соответственно, что будет приводить к изменению индекса преломления среды, который детектируется по изменению поверхностного плазмонного резонанса золотой пленки. Эта система позволяет определить константу ассоциации и диссоциации, исходя из которой может быть вычислена аффинность связывания. Альтернативно, связывание лиганд/рецептор может быть проанализировано методомSELDI(TM) (Ciphergen, Inc. Palo Alto, CA). Кроме того, для того, чтобы определить, связываются ли различные моноклональные антитела с одними и теми же или с различными эпитопами на полипептиде IL22RA, в экспериментах на конкурентное связывание может быть использована программа BIACORE,описанная выше, и такая программа применяется для облегчения картирования эпитопов нейтрализующих антител настоящего изобретения, которые связываются с одним IL-22 или с обоими IL-20 и IL-22,или блокируют, ингибируют, снижают, подавляют или нейтрализуют их активность. Лигандсвязывающие рецепторные полипептиды могут быть также использованы в других аналитических системах, известных специалистам. Такими системами являются анализ Скэтчарда для определения аффинности связывания (см. Scatchard, Ann. NY Acad. Sci. 51:660-72, 1949) и калориметрические анализы (Cunningham et al., Science 253:545-48, 1991; Cunningham et al., Science 245:821-25, 1991). Настоящее изобретение также относится к различным другим полипептидным гибридам и к родственным мультимерным белкам, содержащим один или несколько полипептидных гибридов. Так, например, растворимый рецептор IL-22RA может быть получен в виде гибрида с димеризующим белком, как описано в патентах США 5155027 и 5567584. Для этих целей предпочтительными димеризующими белками являются домены константной области иммуноглобулина, например, IgG1, и легкой k-цепи иммуноглобулина человека. Гибриды "иммуноглобулин - растворимый IL-22RA" может быть экспрессирован в генетически сконструированных клетках для продуцирования различных мультимерных аналогов рецептора IL-22RA. К растворимому рецептору IL-22RA могут быть присоединены вспомогательные- 25009026 домены для их нацеливания на специфические клетки, ткани или макромолекулы (например, коллаген или клетки, экспрессирующие IL-22RA-лиганды, IL-22 или IL-20). Полипептид IL-22RA может быть присоединен к двум или более молекулам, таким как аффинная метка для очистки и нацеливающий домен. Полипептидные гибриды могут также содержать один или несколько рестрикционных сайтов, в частности, сайтов, расположенных между доменами. См. Tuan et al., Connective Tissue Research 34:1-9,1996. В бактериальных клетках часто бывает желательным экспрессировать гетерологичный белок в качестве гибридного белка для снижения токсичности, повышения стабильности и увеличения выхода экспрессированного белка. Так, например, IL-22RA может экспрессироваться в виде гибридного белка, содержащего полипептид глутатион-S-трансферазы. Гибридные белки глутатион-S-трансферазы обычно являются растворимыми и легко удаляются из лизатов E.coli на колонках с иммобилизованным глутатионом. В аналогичных методах, гибридный белок IL-22RA, содержащий полипептид белка, связывающегося с мальтозой, может быть выделен на колонке с амилозной смолой, а гибридный белок, содержащий С-конец усеченного белка А, может быть выделен с использованием IgG-сефарозы. Разработанные методы экспрессии гетерологичного полипептида, используемого в бактериальной клетке в качестве гибридного белка, описаны, например, Williams et al., "Expression of Foreign Proteins in E.coli Using Plasmid Vectors and Purification of Specific Polyclonal Antibodies", DNA Cloning 2: A Practical Approach, 2ndEdition, GloverHames (Eds.), pages 15-58 (Oxford University Press, 1995). Кроме того, могут быть использованы коммерчески доступные экспрессионные системы. Так, например, система очистки белка Ха,PINPOINT (Promega Corporation; Madison, WI) позволяет осуществлять выделение гибридного белка,содержащего полипептид, который в процессе экспрессии становится биотинилированным смолой, содержащей авидин. Пептидными метками, которые могут быть использованы для выделения гетерологичных полипептидов, экспрессированных либо прокариотическими, либо эукариотическими клетками, являются полигистидиновые метки (которые обладают аффинностью к смоле, образующей хелатные комплексы с никелем), метки c-myc, белок, связывающийся с кальмодулином (выделенный с помощью аффинной хроматографии на кальмодулине), вещество Р, метка RYIRS (которая связывается с антителами против RYIRS), метка Glu-Glu и метка FLAG (которая связывается с антителами против FLAG). См., например, LuoZheng et al., Gene 186:55 (1997). Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие такие пептидные метки,поставляются, например, фирмой Sigma-Aldrich Corporation (St. Louis, МО). Другая форма гибридного белка содержит полипептид IL-22RA и константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, обычно Fc-фрагмент, который содержит два или три домена константной области и шарнирную область, но не содержит вариабельной области. В качестве иллюстрации можно указать на патент США 5723125, Chang et al., где описан гибридный белок, содержащий человеческий интерферон и Fc-фрагмент человеческого иммуноглобулина. С-конец интерферона присоединен к N-концу Fcфрагмента пептидным линкером. Примером пептидного линкера является пептид, содержащий, главным образом, Т-клеточную последовательность, которая является иммунологически инертной. Репрезентативный пептидный линкер имеет следующую аминокислотную последовательность: GGSGG SGGGGSGGGG S (SEQ ID NO:9). В этом гибридном белке репрезентативным Fc-фрагментом является 4-цепь человеческого иммуноглобулина, которая остается стабильной в растворе и имеет незначительную комплемент-активирующую активность или вообще не имеет такой активности. В соответствии с этим в настоящем изобретении рассматривается гибридный белок IL-22RA, содержащий молекулу IL-22RA и человеческий Fc-фрагмент, где С-конец данной молекулы IL-22RA присоединены к N-концу Fc-фрагмента пептидным линкером, таким как пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ IDNO:4. IL-22RA-часть может представлять собой молекулу IL-22RA или ее фрагмент. Так, например, гибридный белок может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3 и Fc-фрагмент (например, Fc-фрагмент человеческого иммуноглобулина) (SEQ ID NO:4). В другом варианте изобретения гибридный белок IL-22RA содержит последовательность IgG; молекулу IL-22RA, ковалентно связанную с амино-концом последовательности IgG; и сигнальный пептид,ковалентно связанный с амино-концом IL-22RA-части, где последовательность IgG состоит из следующих элементов в указанном порядке: шарнирной области, CH2-домена и СН 3-домена. В соответствии с этим последовательность IgG не содержит CH1-домена. IL-22RA-часть обнаруживает описанную здесь активность IL-22RA, например, способность связываться с лигандом IL-22RA. Этот общий метод продуцирования гибридных белков, содержащих антитело и части, не принадлежащие антителу, описан LaRochelle et al., ЕР 742830 (WO 95/21258). Гибридные белки, содержащие IL-22RA-часть и Fc-фрагмент, могут быть использованы, например,как средство для in vitro-анализа. Так, например, присутствие лиганда IL-22RA в биологическом образце может быть детектировано с использованием гибридного белка "IL-22RA-иммуноглобулин", в которомIL-22RA-часть используются для связывания с лигандом, а макромолекула, такая как белок А или антиFc антитело, используется для связывания гибридного белка с твердым носителем. Такие системы могут быть использованы для идентификации агонистов и антагонистов, которые препятствуют связыванию- 26009026 лигандов IL-22RA, например, IL-22 или оба IL-20 и IL-22 с их рецептором. Другими примерами гибридных белков антител являются полипептиды, содержащие антигенсвязывающий домен и фрагмент IL-22RA, содержащий внеклеточный домен IL-22RA. Такие молекулы могут быть использованы для доставки в конкретные ткани в целях создания благоприятных условий реализации IL-22RA-связывающей активности. Настоящее изобретение также относится к различным другим полипептидным гибридам. Так, например, часть домена или весь домен, сообщающий биологическую функцию и находящийся в IL-22RA настоящего изобретения, может быть заменен функционально эквивалентным(и) доменом(ами), взятого(ых) от другого члена семейства цитокиновых рецепторов. Полипептидные гибриды могут экспрессироваться в рекомбинантных клетках-хозяевах с продуцированием ряда гибридных аналогов IL-22RA. Полипептид IL-22RA может быть соединен с двумя или более молекулами или доменами, такими как аффинная метка для очистки и домен, обеспечивающий доставку. Полипептидные гибриды могут также содержать один или несколько рестрикционных сайтов, а в частности, сайтов, расположенных между доменами. См., например, Tuan et al., Connective Tissue Research 34:1 (1996). Гибридные белки могут быть получены методами известными специалистам, путем продуцирования каждого компонента гибридного белка или их химического конъюгирования. Альтернативно, полипептид, кодирующий оба компонента гибридного белка в соответствующей рамке считывания, может быть продуцирован известными методами и экспрессирован описанными здесь методами. Общие методы ферментативного и химического расщепления гибридных белков описаны, например, Ausubel (1995),pages 16-19-16-25.IL-22RA-связывающие домены могут быть дополнительно охарактеризованы путем физического анализа структуры, определенной такими методами, как ядерный магнитный резонанс, кристаллография,электронная дифракция или фотоаффинное мечение в комбинации с мутацией аминокислот агонистов лиганда IL-22RA в предполагаемом сайте контактирования. См., например, de Vos et al., Science 255:306(1992), Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899 (1992) и Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59 (1992). В настоящем изобретении также рассматриваются химически модифицированные композиции IL22RA, в которых полипептид IL-22RA связан с полимером. Репрезентативными полипептидами IL-22RA являются растворимые полипептиды, не содержащие функциональный трансмембранный домен, такие как полипептид, состоящий из аминокислотных остатков SEQ ID NO:3. Обычно, полимер является водорастворимым, так что конъюгат IL-22RA не осаждается в водной среде, такой как физиологическая среда. Примером подходящего полимера является полимер, который был модифицирован так, чтобы он содержал одну реакционноспособную группу, такую как активированный сложный эфир для ацилирования или альдегид для алкилирования. Таким образом, степень полимеризации может регулироваться. Примером реакционноспособного альдегида является пропиональдегид полиэтиленгликоля или его моно(C1 С 10)алкокси-, или арилокси-производные (см., например, Harris et al., патент США 5252714). Такой полимер может быть разветвленным или неразветвленным. Кроме того, смесь полимеров может быть использована для получения конъюгатов IL-22RA. Конъюгаты IL-22RA, используемые в терапии, могут содержать фармацевтически приемлемые водорастворимые полимерные группы. Подходящими водорастворимыми полимерами являются полиэтиленгликоль(ПЭГ),монометокси-ПЭГ,моно(C1-С 10)алкокси-ПЭГ,арилокси-ПЭГ,поли(Nвинилпирролидон)ПЭГ, трезилмонометокси-ПЭГ, ПЭГ-пропиональдегид, бис-сукцинимидилкарбонатПЭГ, гомополимеры пропиленгликоля, сополимер полипропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт, декстран, целлюлоза или другие полимеры на основе углеводов. Подходящий ПЭГ может иметь молекулярную массу в пределах примерно от 600 до 60000, включая, например, 5000, 12000, 20000 и 25000. Конъюгат IL-22RA может также содержать смесь указанных водорастворимых полимеров. Один из примеров конъюгата IL-22RA содержит IL-22RA-часть и полиалкилоксидную часть, присоединенную к N-концу молекулы IL-22RA. Одним из подходящих полиалкилоксидов является ПЭГ. Репрезентативным примером является IL-22RA, который может быть модифицирован методом присоединения ПЭГ, известным как "ПЭГилирование". ПЭГилирование IL-22RA может быть осуществлено проведением любой из реакций ПЭГилирования, известных специалистам (см., например, ЕР 0154316,Delgado et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9:249 (1992), DuncanSpreafico, Clin.Pharmacokinet. 27:290 (1994) и Francis et al., Int. J. Hematol. 68:1 (1998. Так, например, ПЭГилирование может быть осуществлено проведением реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой полиэтиленгликоля. В альтернативном методе, конъюгаты IL-22RA получают путем конденсации активированного ПЭГ, в котором концевая гидрокси- или аминогруппа ПЭГ заменена активированным линкером (см., например, Karasiewicz et al., патент США 5382657). Для осуществления ПЭГилирования путем ацилирования необходимо проведение реакции активированного эфирного производного ПЭГ с полипептидом IL-22RA. Примером активированного сложного эфира ПЭГ является ПЭГ, этерифицированный N-гидроксисукцинимидом. Используемый здесь термин"ацилирование" включает взаимодействие между IL-22RA и водорастворимым полимером посредством амидного, карбаматного, уретанового связывания и т.п. Методы получения ПЭГилированного IL-22RA- 27009026 путем ацилирования обычно включают стадии (а) реакции взаимодействия полипептида IL-22RA с ПЭГ(таким как реакционноспособный эфир альдегидного производного ПЭГ) в условиях, при которых одна или несколько групп ПЭГ присоединяется к IL-22RA, и (b) получения реакционного(ых) продукта(ов). В общих чертах, оптимальные реакционные условия, необходимые для проведения реакций ацилирования,могут быть определены исходя из известных параметров и нужных результатов. Так, например, чем больше отношение ПЭГ:IL-22RA, тем больше процент поли-ПЭГилированного продукта IL-22RA. Продукт ПЭГилирования, осуществляемого путем ацилирования, обычно представляет собой полиПЭГилированный продукт IL-22RA, где -аминогруппы лизина ПЭГилированы посредством ацильной линкерной группы. Примером такой связывающей группы является амид. Обычно, полученный IL-22RA является по крайней мере на 95% моно-, ди- или три-ПЭГилированным, хотя, в зависимости от реакционных условий, могут быть получены некоторые молекулы, имеющие более высокую степень ПЭГилирования. ПЭГилированные молекулы могут быть отделены от неконъюгированных полипептидов IL22RA стандартными методами очистки, такими как диализ, ультрафильтрация, ионообменная хроматография, аффинная хроматография и т.п. ПЭГилирование, проводимое посредством алкилирования, обычно предусматривает осуществление реакции концевого альдегидного производного ПЭГ с IL-22RA в присутствии восстановителя. Группы ПЭГ могут быть присоединены к полипептиду посредством группы -CH2-NH. Кроме того, антитела против IL-22RA настоящего изобретения или их фрагменты могут быть ПЭГилированы методами, известными специалистам, и методами, описанными здесь. Для дериватизации, проводимой посредством восстановительного алкилирования с получением моноПЭГилированного продукта, необходимо присутствие различных типов первичных аминогрупп,подходящих для дериватизации и обладающих различной реакционной способностью. Обычно, такую реакцию проводят при рН, который позволяет использовать разность между рКа -аминогрупп лизиновых остатков и -аминогрупп N-концевого остатка данного белка. Посредством такой селективной дериватизации можно регулировать присоединение водорастворимого полимера, содержащего реакционноспособную группу, такую как альдегид, к белку. Конъюгирование с полимером происходит преимущественно у N-конца белка без какой-либо значительной модификации других реакционноспособных групп,таких как аминогруппы боковой цепи лизина. Настоящее изобретение относится к получению, в основном, гомогенного препарата монополимерных конъюгатов IL-22RA. Восстановительное алкилирование для продуцирования, в основном, гомогенной популяции молекул конъюгата монополимерного IL-22RA может включать стадии: (а) взаимодействия полипептида IL22RA с реакционноспособным ПЭГ в условиях восстановительного алкилирования при рН, подходящем для селективной модификации -аминогруппы у амино-конца IL-22RA, и (b) получения реакционного(ых) продукта(ов). Восстановитель, используемый для восстановительного алкилирования, должен быть стабильным в водном растворе и должен обладать способностью к восстановлению Шиффова основания, образующегося только в начальном процессе восстановительного алкилирования. Репрезентативными восстановителями являются борогидрид натрия, цианоборогидрид натрия, диметиламиноборан,триметиламиноборан и пиридинборан. Для, в основном, гомогенной популяции монополимерных конъюгатов IL-22RA, условиями реакции восстановительного алкилирования являются условия, позволяющие осуществлять селективное присоединение водорастворимой полимерной части к N-концу IL-22RA. Такие реакционные условия, в основном, предусматривают использование разности между рКа -аминогрупп лизина и -аминогруппы уN-конца. рН также влияет на отношение полимер:белок. В основном, при более низком рН желательно использовать большее количество полимера по отношению к белку, поскольку чем меньше реакционная способность N-концевой -группы, то большее количество полимера требуется для достижения оптимальных условий. При более высоком рН не требуется большого отношения полимер:IL-22RA, поскольку, в этом случае, имеется большее число реакционноспособных групп. Обычно рН находится в пределах от 3 до 9 или от 3 до 6. Этот метод может быть использован для получения IL-22RA-содержащих конъюгатов гомодимерного, гетеродимерного или мультимерного растворимого рецептора. Другим фактором, необходимым для рассмотрения, является молекулярная масса водорастворимого полимера. В общих чертах, чем выше молекулярная масса полимера, тем меньшее число полимерных молекул могут быть присоединены к белку. Для проведения реакций ПЭГилирования типичная молекулярная масса составляет в пределах примерно от 2 до 100 кДа, примерно от 5 до 50 кДа, или примерно от 12 до 25 кДа. Молярное отношение "водорастворимый полимер:IL-22RA" обычно составляет в пределах от 1:1 до 100:1. Обычно, для полиПЭГилирования, молярное отношение "водорастворимый полимер:IL22RA" составляет от 1:1 до 20:1, а для полиПЭГилирования оно составляет от 1:1 до 5:1. Общие методы продуцирования конъюгатов, содержащих полипептид и водорастворимые полимерные части, известны специалистам. См., например, Karasiewicz et al., патент США 5382657,Greenwald et al., патент США 5738846, Nieforth et al., Clin. Pharmacol. Ther. 59:636 (1996), Monkarsh etal., Anal. Biochem. 247:434 (1997. Этот метод может быть использован для получения IL-22RAсодержащих конъюгатов гомодимерного, гетеродимерного или мультимерного растворимого рецептора.- 28009026 В настоящем изобретении рассматриваются композиции, содержащие пептид и полипептид, такие как описанные здесь растворимый рецептор или антитело. Эти композиции могут также содержать носитель. Таким носителем может быть стандартный органический или неорганический носитель. Примерами таких носителей являются вода, буферный раствор, спирт, пропиленгликоль, макрогол, кунжутное масло, кукурузное масло и т.п. 7. Выделение полипептидов IL-22RA Полипептиды настоящего изобретения могут быть очищены от загрязняющих макромолекул, а в частности, от других белков и нуклеиновых кислот и от инфекционных и пирогенных агентов до уровня чистоты, составляющего примерно по крайней мере 80%, примерно по крайней мере 90%, примерно по крайней мере 95% или более чем 95%, например 96, 97, 98% или более чем 99%. Полипептиды настоящего изобретения могут быть также очищены до фармацевтической чистоты, составляющей более чем 99,9%. В некоторых препаратах очищенный полипептид, в основном, не содержит других полипептидов,а в частности, других полипептидов животного происхождения. Для получения препаратов IL-22RA, выделенных из природных источников (например, из ткани человека), синтетических полипептидов IL-22RA, рекомбинантных полипептидов IL-22RA и гибридных полипептидов IL-22RA, выделенных из рекомбинантных клеток-хозяев, могут быть применены методы фракционирования и/или стандартной очистки. В общих чертах, для фракционирования образцов может быть использована преципитация сульфатом аммония и экстракция кислотой или хаотропом. Репрезентативными стадиями очистки могут быть хроматография на гидроксиапатитах, эксклюзионная хроматография, жидкостная экспресс-хроматография белков (ЖЭХБ) и обращенно-фазовая жидкостная высокоэффективная хроматография. Подходящими хроматографическими средами являются дериватизированные декстраны, агароза, целлюлоза, полиакриламид, двуокись кремния для специального применения и т.п. Подходящими также являются PEI-, DEAE-, QAE- и Q-производные. Репрезентативными хроматографическими средами являются среды, дериватизированные фенильными, бутильными или октильными группами, такие как фенил-сефароза FF (Pharmacia), Toyopearlbutyl 650 (Toso, Haas, Montgomeryville,PA), октилсефароза (Pharmacia) и т.п., или полиакриловые смолы, такие как Amberchrom CG 71 (TosoHaas) и т.п. Подходящими твердыми носителями являются стеклянные сферы, смолы на основе двуокиси кремния, целлюлозные смолы, агарозные сферы, перекрестно-сшитые агарозные сферы, полистироловые сферы, перекрестно-сшитые полиакриламидные смолы и т.п., которые являются нерастворимыми в используемых условиях. Эти носители могут быть модифицированы реакционноспособными группами,которые позволяют присоединять белки посредством аминогрупп, карбоксильных групп, сульфгидрильных групп, гидроксильных групп и/или углеводных групп. Примерами химического связывания являются активация бромцианом, активация Nгидроксисукцинимидом, активация эпоксидом, активация сульфгидрилом, активация гидразидом и использование карбоксильных и амино-производных для карбодиимидного связывания. Эти и другие твердые среды хорошо известны, широко используются специалистами и являются коммерчески доступными. Выбор конкретного метода выделения и очистки полипептидов может быть осуществлен путем рутинного экспериментирования и определяется отчасти свойствами выбранного носителя. См., например,Affinity Chromatography: PrinciplesMethods (Pharmacia LKB Biotechnology 1988) и Doonan, Protein Purification Protocols (The Humana Press, 1996). Любой специалист может самостоятельно разработать другие различные способы выделения и очистки IL-22RA. Так, например, анти-IL-22RA антитела, полученные как описано ниже, могут быть использованы для выделения больших количеств белка методом иммуноаффинной очистки. Полипептиды настоящего изобретения могут быть также выделены исходя из их конкретных свойств. Так, например, для очистки богатых гистидином белков, включая белки, содержащие полигистидиновые метки, может быть использована адсорбционная хроматография с иммобилизованным ионом металла (IMAC). Вкратце, на гель сначала загружают ионы двухвалентного металла и получают хелатный комплекс (Sulkowski, Trends in Biochem. 3:1 (1985. Богатые гистидином белки адсорбируются на этой матрице с различными аффинностями в зависимости от используемого иона металла и элюируются путем конкурентного элюирования, снижения рН или использования сильных хелатообразующих агентов. Другими методами очистки являются очистка гликозилированных белков путем проведения аффинной хроматографии на лектине и ионообменной хроматографии (М. Deutscher (ed.), Meth. Enzymol. 182:529 (1990. В других вариантах осуществления изобретения, для облегчения очистки может быть сконструирован гибрид представляющего интерес полипептида и аффинной метки (например, белка,связывающегося с мальтозой, домена иммуноглобулина). Кроме того, лигандсвязывающие свойства внеклеточного домена IL-22RA могут быть использованы для очистки, например, IL-22RA-содержащих растворимых рецепторов, например, путем проведения аффинной хроматографии, где лиганд IL-22 связывают с колонкой, с которым впоследствии связываетсяIL-22RA-содержащий рецептор, а затем этот рецептор элюируют стандартными хроматографическими методами. Полипептиды IL-22RA или их фрагменты могут быть также получены методами химического синтеза, как описано выше. Полипептиды IL-22RA могут быть мономерными или мультимерными, гликози- 29009026 лированными или негликозилированными; ПЭГилированными или неПЭГилированными, и могут включать, а могут и не включать, исходный метиониновый аминокислотный остаток. 8. Получение антител против белков IL-22RA Антитела против IL-22RA могут быть получены, например, с использованием продукта IL-22RAэкспрессирующего вектора или IL-22RA, выделенного из природного источника в качестве антигена. В частности, используемые антитела против IL-22RA "специфически связываются" с IL-22RA. Считается,что антитела специфически связываются в том случае, если они обладают по крайней мере одним из нижеследующих двух свойств: (1) способностью связываться с IL-22RA с пороговым уровнем связывающей активности и (2) неспособностью к значительному перекрестному взаимодействию с полипептидами, родственными полипептиду IL-22RA. Что касается первого свойства, то считается, что антитела специфически связываются в том случае,если они связываются с полипептидом, пептидом или эпитопом IL-22RA с аффинностью связывания (Ка) 106 М-1 или более, предпочтительно 107 М-1 или более; более предпочтительно 108 М-1 или более; а наиболее предпочтительно 109 М-1 или более. Аффинность связывания антитела может быть легко определена любым специалистом, например, путем анализа Скэтчарда (Scatchard, Ann. NY Acad. Sci. 51:660,1949). Что касается второго свойства, то считается, что антитела неспособны к значительному перекрестному взаимодействию с родственными полипептидными молекулами, если, например, в стандартном Вестерн-блот-анализе, эти антитела позволяют обнаруживать полипептид IL-22RA, но не позволяют обнаруживать известные полипептиды. Примерами известных родственных полипептидов являются известные цитокиновые рецепторы. Анти-IL-22RA антитела могут быть получены с использованием антигенных пептидов и полипептидов, несущих эпитоп IL-22RA. Антигенные пептиды и полипептиды настоящего изобретения, несущие антигенный эпитоп, содержат последовательность, состоящую по крайней мере из 9 или из примерно 1530 аминокислот, находящихся в SEQ ID NO:3 или в другой описанной здесь аминокислотной последовательности. Однако для индуцирования антител, которые связываются с IL-22RA, могут быть использованы пептиды или полипептиды, содержащие более крупную часть аминокислотной последовательности настоящего изобретения, состоящую из 30-50 аминокислот, или последовательность любой длины,включая полноразмерную аминокислотную последовательность полипептида настоящего изобретения. При этом, желательно, чтобы аминокислотная последовательность эпитоп-несущего пептида была выбрана так, чтобы он, в основном, растворялся в водных растворителях (т.е. эта последовательность должна включать относительно гидрофильные остатки, а гидрофобные остатки должны, в основном, отсутствовать). Кроме того, для продуцирования антитела может также оказаться желательным, чтобы аминокислотные последовательности содержали пролиновые остатки. В качестве примера можно отметить, что возможные антигенные сайты в IL-22RA были идентифицированы методом Джеймсона-Вольфа (JamesonWolf, CABIOS 4:181 (1988, осуществляемым с помощью программы PROTEAN (version 3.14) LASERGENE (DNASTAR; Madison, WI). В этом анализе были использованы параметры по умолчанию. Метод Джеймсона-Вольфа позволяет предсказать потенциальные антигенные детерминанты путем комбинирования шести главных подпрограмм для структурного предсказания белков. Вкратце, для идентификации аминокислотных последовательностей, представляющих области с наибольшей локальной гидрофильностью (параметр: семь усредненных остатков), сначала был использован метод Хоппа-Вудса(Норр et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 78:3824 (1981. Bo второй стадии был использован метод Эмини(Emini et al., J. Virology 55:836 (1985 для подсчета поверхностной вероятности (параметр: порог поверхностного разрешения (0,6)=1). В третьей стадии был использован метод Карплуса-Шульца (KarplusSchultz, Naturwissenschaften 72:212 (1985 для предсказания гибкости цепи остова (параметр: порог гибкости (0,2)=1). В четвертой и пятой стадиях анализа предсказания вторичной структуры были применены к указанным данным с использованием методов Чу-Фасмана (Chou "Prediction of Protein Structural(1978 (параметры Чу-Фасмана: конформационная таблица=64 белка, порог -области=103; порог области=105; параметры Гарнье-Робсона: константы разрешенияи =0). В шестой подпрограмме, параметры гибкости и факторы гидрофобности и гидрофильности/доступности растворителя были объединены для определения показателя контура поверхности, называемого "индексом антигенности". И наконец, к индексу антигенности была применена функция расширения пика, что позволяет расширять главные поверхности пики путем добавления 20, 40, 60 или 80% величины соответствующего пика для подсчета дополнительной свободной энергии, высвобождаемой в результате подвижности областей поверхности по отношению к внутренним областям. Однако эти вычисления не применимы ни к одному из главных пиков, которые присутствуют в спиральной области, поскольку спиральные области имеют тенденцию к меньшему сохранению гибкости. Результаты этого анализа показали, что нижеследующие аминокислотные последовательности SEQID NO:3 должны составлять подходящие антигенные пептиды и для определения тех областей в SEQ ID
МПК / Метки
МПК: C07K 16/28
Метки: связыванию, воспалениях, способы, партнеры, il-22ra, антитела, против, применения
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-9026-antitela-protiv-il-22ra-ih-partnery-po-svyazyvaniyu-i-sposoby-ih-primeneniya-pri-vospaleniyah.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антитела против il-22ra, их партнеры по связыванию и способы их применения при воспалениях</a>
Антитела против il-12 и способы их применения
Номер патента: 6673
Опубликовано: 24.02.2006
Авторы: Шили Дэвид, Перитт Дэвид, Скэллон Бернард, Джайлс-Комар Джилл, Найт Дэвид М.
МПК: A61P 37/00, C07K 16/24, A61K 39/395...
Метки: il-12, против, антитела, способы, применения
Формула / Реферат:
1. Выделенное антитело против IL-12 млекопитающего, содержащее по меньшей мере одну вариабельную область, включающую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 7 и одну аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 8, причем указанное антитело специфично связывается по меньшей мере с одним эпитопом, включающим от 1-3 аминокислот до полной последовательности SEQ ID NO: 9. 2. Выделенная молекула...
Антитела против tnf, композиции, способы и применения
Номер патента: 7005
Опубликовано: 30.06.2006
Авторы: Джайлс-Комар Джилл, Найт Дэвид М., Скаллон Бернард, Шили Дэвид, Хивнер Джордж
МПК: A61P 37/00, A61K 39/395, C07K 16/24...
Метки: способы, композиции, антитела, применения, против
Формула / Реферат:
1. По меньшей мере одно выделенное антитело млекопитающего против TNF, содержащее по меньшей мере одну вариабельную область, содержащую SEQ ID NO: 7 или 8. 2. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая по меньшей мере одно выделенное антитело млекопитающего против TNF, содержащее по меньшей мере одну вариабельную область, содержащую SEQ ID NO: 7 или 8. 3. Прокариотическая или эукариотическая клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую...
Моноклональные антитела к растворимому рецептору лпнп человека, способы их получения и применения и гибридомы, продуцирующие указанные антитела
Номер патента: 7494
Опубликовано: 27.10.2006
Авторы: Бельзер Илана, Суисса Дани, Смоларски Моше, Дреано Мишель, Антонетти Франческо, Йонах Начум
МПК: C12N 5/20, C07K 16/28, A61P 31/20...
Метки: применения, получения, способы, растворимому, антитела, указанные, человека, продуцирующие, моноклональные, гибридомы, рецептору, лпнп
Формула / Реферат:
1. Моноклональное антитело, химерное антитело, полностью гуманизированное антитело, антитело к антиидиотипическому антителу или его фрагмент, которое специфически распознает и связывает растворимый рецептор ЛПНП человека и его фрагменты, которое получают путем иммунизации животных формой +291 растворимого рецептора ЛПНП человека, включающей аминокислотную последовательность от Asp +4 до Glu +291 последовательности ЛПНП человека, и которое...
Модифицированные антитела и способы применения
Номер патента: 7388
Опубликовано: 27.10.2006
Авторы: Ханна Набил, Браславски Гари Р., Чинн Паул
МПК: A61K 39/395, A61K 47/48, A61K 51/10...
Метки: модифицированные, способы, антитела, применения
Формула / Реферат:
1. Применение антитела с делетированным СH2-доменом, специфически связанного с антигеном TAG-72, который характеризуется наличием раковых клеток у пациента с подавлением костного мозга, при изготовлении лекарства для лечения рака у вышеупомянутого пациента. 2. Применение по п.1, где антиген TAG-72 является антигеном TAG-72 человеческого организма, а антитело - человеческое антитело с делетированным СH2-доменом, реактивное с человеческим...
Антитела повышенной продуктивности к белку активации фибробластов и способы их применения
Номер патента: 5401
Опубликовано: 24.02.2005
Авторы: Леже Оливье, Парк Джон Эдуард, Бамбергер Уве, Реттиг Вольфганг Й., Гарин-Чеса Пилар, Салдана Джоуз
МПК: A61K 47/48, A61P 35/00, C07K 16/40...
Метки: применения, активации, антитела, продуктивности, фибробластов, белку, повышенной, способы
Формула / Реферат:
1. Антитело, имеющее гипервариабельные участки моноклонального антитела F19 мыши (ATCC HB 8269), специфически связывающееся с белком активации фибробластов, отличающееся тем, что оно имеет модификации каркасного участка, которые приводят к повышенной продуктивности данного антитела в клетках-хозяевах по сравнению с химерным антителом, содержащим вариабельные области указанного антитела F19 и чужеродные константные области, причем уровень его...
Предыдущий патент: Применение ферментированного экстракта зародышей пшеницы в кормлении животных
Следующий патент: Производные 3-замещённого-4-пиримидона
Случайный патент: Коническое пищевое изделие и способ его изготовления