Моноклональное антитело к двойному интегриновому белку и его фрагмент, фармацевтическая композиция и способ лечения

007617 Область техники, к которой относится изобретение Данная заявка частично основана на предварительной заявке США 60/223363, поданной 7 августа 2000 г., и претендует на приоритет в соответствии с ней, причем она включена здесь полностью в качестве ссылки. Настоящее изобретение относится к антителам, включая их определенные части или варианты, специфичным по отношению по меньшей мере к одному альфа-V-бета 3, aльфa-V-бeтa 5 двойному интегриновому (двойной интегрин) белку или к его фрагменту, так же как к нуклеиновым кислотам, кодирующим такие антитела против двойного интегрина, комплементарным нуклеиновым кислотам, векторам,клеткам-хозяевам и способам их получения и применения, включая терапевтические составы, введение и устройства. Известный уровень техники В настоящий момент существуют веские доказательства того, что прогрессия опухолевого роста зависит от ангиогенеза, образования новых кровеносных сосудов, которые обеспечивают опухоли питательными веществами и кислородом, служат для удаления продуктов жизнедеятельности и для использования в качестве каналов для доставки метастазирующих опухолевых клеток в отдаленные участки(Gastl et al., Oncol. 54:177-184). В последних исследованиях была дополнительно определена роль интегринов в процессе ангиогенеза. Интегрины являются гетеродимерными трансмембранными белками, которые играют решающую роль в клеточной адгезии к внеклеточному матриксу (ЕСМ), который в свою очередь опосредует клеточное выживание, пролиферацию и миграцию в результате внутриклеточной сигнализации. В процессе ангиогенеза количество интегринов, которые экспрессируются на поверхности активированных эндотелиальных клеток, регулирует решающие адгезивные взаимодействия с разнообразными белками ЕСМ для регуляции отдаленных биологических событий, таких как клеточная миграция, пролиферация и дифференцировка. Конкретно, близко родственные, но различные интегрины V3 и V5, как показано, опосредуют независимые пути в процессе ангиогенеза. Антитело, выработанное против V3, блокировало ангиогенез, индуцированный основным фактором роста фибробластов(bFGF), в то время как антитело, специфичное по отношению к V5, ингибировало ангиогенез, индуцированный фактором роста эндотелия сосудов (VEGF) (Eliceiri, et al., J. Clin. Invest.103: 1227-1230 (1999);Friedlander et al., Science 270: 1500-1502 (1995. Антитела млекопитающих, не являющихся человеком, химерные, поликлональные (например, антисыворотка) и/или моноклональные антитела (Mab) и фрагменты (например, продукты их протеолитического расщепления или их гибридные белки) являются потенциальными лекарственными средствами,которые после их исследования пытались применить в некоторых случаях для лечения определенных заболеваний. Однако такие антитела или фрагменты могут вызвать иммунный ответ при введении человеку. Такой иммунный ответ может привести к опосредованному иммунными комплексами выведению антител или фрагментов из кровотока и сделать невозможным для лечения повторное введение, снижая тем самым терапевтическую ценность для больного и ограничивая повторное введение антитела или фрагмента. Например, повторное введение антител или фрагментов, включающих части, происходящие не от человека, может вести к сывороточной болезни и/или анафилаксии. Для избежания данной и других проблем было предпринято большое количество подходов к снижению иммуногенности таких антител и их частей, включая химеризацию и гуманизацию, как хорошо известно из данной области техники. Данные и другие подходы, однако, все еще могут приводить к антителам или фрагментам, имеющим некоторую иммуногенность, низкую аффинность, низкую авидность, или приводить к проблемам культивирования клеток, масштабам, продукции и/или низким выходам. Таким образом, такие антитела или фрагменты могут быть далеки от идеала в плане их получения или применения в качестве белков для терапии. В связи с этим существует необходимость в получении антител против двойного интегрина или их фрагментов, которые преодолевают одну или более из данных проблем, а также необходимость улучшения известных антител или их фрагментов. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к выделенному моноклональному антителу человека, специфическому в отношении по меньшей мере одного выделенного двойного интегринового белка альфа-V-бета 3, альфа-V-бета 5, или его фрагменту, содержащим вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи антитела человека, включающие аминокислотную последовательность SEQ ID No:7 или 8 соответственно. Также изобретение относится к выделенному фрагменту указанного моноклонального антитела, содержащему по крайней мере одну вариабельную область тяжелой и легкой цепи анитела человека, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No:7 или 8 соответственно. Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей указанное антитело или его фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель. Также изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей указанное антитело или его.-1 007617 Изобретение также относится к прокариотической или эукариотической клетке-хозяину, содержащей указанную выделенную нуклеиновую кислоту. Наконец, изобретение относится к способу лечения или профилактики заболевания, характеризующегося ростом или метастазированием опухолевых клеток у индивидуума, предусматривающий введение индивидууму указанного антитела или его фрагмента в количестве, эффективном для лечения или профилактики заболевания. Описание фигур На фиг. 1 представлен график двукратных разведений анти-V3 Mab, которые инкубировали в планшетах, покрытых V3 в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали дважды и тестировали после инкубации со специфичным антителом козы против IgG каппа человека, меченногоHRP, в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты еще раз промывали, индуцировали развитие окраски с помощью субстрата OPD, и ОП измеряли при 490 нм. На фиг. 2 представлен график. Клетки М 21, меченные кальцеином, преинкубировали с образцами антител в отсутствие или в присутствии P1F6, асцитов против V5 в течение 30 мин, затем их добавляли к планшетам, покрытым витронектином, на 45 мин. Несвязавшиеся клетки М 21 удаляли с помощью двух промывок HBSS с кальцием по 150 мкл/лунка. Планшет считывали на флуориметре при 485-538 нм. На фиг. 3 представлен график клеточной адгезии, когда собирали клетки MDAMB435L2 и преинкубировали с различными концентрациями GenO95 в течение 10 мин. Опухолевые клетки затем добавляли к планшетам Linbro, покрытым витронектином, и инкубировали при 37 С в течение 1 ч. Лунки промывали три раза и к каждой лунке добавляли краситель Cell Titer AQ на основе МТТ. Клеточную адгезию определяли на планшетном ридере для ИФА, где ОП при 490 нм является прямо пропорциональной клеточной адгезии. Негативным контролем служила клеточная адгезия к лункам, покрытым БСА (данные не показаны). Каждая точка данных соответствует трем определениям. На фиг. 4A-D представлены графики связывания антител к V3, где данный лиганд преинкубировали при двукратных разведениях, начиная с 10: г/мл, в 50 мМ ЭДТА в 1% БСА-HBSS (в отсутствиеCNTO 95, С 372, с 7 Е 3 или LM609 IgG, и инкубировали в течение 1 ч при 37 С. LM609 или CNTO 95 добавляли в концентрации 20: г/мл в соответствующем буфере (+/-Ca) в течение 30 мин при 37 С. Планшеты тестировали с помощью козьих антимышиных Fc IgG, HRP, или козьих Fc IgG против иммуноглобулинов человека, HRP. На фиг. 4E-G представлены графики связывания антител к V5, где данный лиганд преинкубировали при двукратных разведениях, начиная с 10: г/мл, в 50 мМ ЭДТА в 1% БСА-HBSS (в отсутствиеCNTO 95, C372, с 7 Е 3 IgG, и инкубировали в течение 1 ч при 37 С. VNR139 добавляли в концентрации 10: г/мл в соответствующем буфере (+/-Ca) в течение 30 мин при 37 С. Планшеты тестировали с помощью козьих антимышиных Fc IgG, HRP. На фиг. 5 А-В представлен график кривой насыщения связывания GenO95 (фиг. 5 А) и ReoPro (фиг. 5 В) к планшетам, покрытым V3. На фиг. 6 А-В представлен график кривой насыщения связывания GenO95 (фиг. 5 А) и ReoPro (фиг. 5 В) к планшетам, покрытым V5. На фиг. 7 А-С представлены кривые насыщения связывания с графиками связывания с (фиг. 7 А):A375S2; (фиг. 7 В): НТ-29; (фиг. 7 С): М 21. Клеткам давали распластываться в течение 2 дней перед экспериментом и использовали в количестве 1 х 105 клеток/лунка в момент начала эксперимента. 125-IGenO95 (1 мкКи/мкг) добавляли в 1% ростовых средах и инкубировали с клетками в течение 1,5 ч при 37 С. Неспецифическое связывание определяли, применяя 100 х холодных mAb в средах. Клетки промывали 3 х и считали количество связанной радиоактивности. Каждая кривая представляет собой результат 4-5 отдельных опытов и каждая точка данных эксперимента является средним трех образцов. На фиг. 8 А-С представлены кривые насыщения связывания с графиками связывания с (фиг. 8 А):A375S2; (фиг. 8 В): НТ-29; (фиг. 8 С): М 21. Клеткам давали распластываться в течение 2 дней перед экспериментом и использовали в количестве 1105 клеток/лунка в момент начала эксперимента. 125-I ReoPro (1 мкКи/мкг) добавляли в 1% ростовых средах и инкубировали с клетками в течение 1,5 ч при 37 С. Неспецифическое связывание определяли, применяя 100 х холодных mAb в средах. Клетки промывали 3 х и считали количество связанной радиоактивности. Каждая кривая представляет собой результат 4-5 отдельных опытов и каждая точка данных эксперимента является средним трех образцов. На фиг. 9 представлено образование микрокапилляров эндотелиальных клеток из шариков МС,культивируемых в фибриновых гелях. Линзы объектива: 40 Х. Тест выполняли, как описано в методах примера 4. На фиг. 10 представлен график количественной оценки образования капилляров в фибриновом геле в средах, содержащих 30 нг/мл bFGF, растворенном в 0,1% сыворотке. Число микрокапиллярных разрастаний количественно оценивали, как описано в методах примера 4. Контролем обозначается контроль с носителем, IgG мыши (М) и человека (Н) служили в качестве негативных контролей. LM-P1F6 представ-2 007617 ляет собой сочетание как LM609, так и P1F6. Каждый столбик является средним из определений в 6 лунках (+/- станд. откл.). На фиг. 11 представлен график количественной оценки образования капилляров в фибриновом геле в полных средах. Число микрокапиллярных разрастаний количественно оценивали, как описано в методах примера 4. Контролем обозначается контроль с носителем, IgG мыши (m) и человека (h) служили в качестве негативных контролей. LM-P1F6 представляет собой сочетание как LM609, так и P1F6. Каждый столбик является средним из определений в 6 лунках (+/- станд. откл.). Фиг. 12. Клетки НТ 29 (фиг. 12 А, В и С) экспрессируют на своей поверхности V5, но не V3 интегрин. Клетки HUVEC (фиг. 12D, Е и F) и A375S.2 (фиг. 12G, Н и I) экспрессируют на своей поверхности V5 и V3 интегрин. Опухолевые клетки и клетки эндотелия окрашивали иммунофлуоресцентным красителем и анализировали с помощью проточной цитометрии. Гистограмма слева представляет собой фоновую флюоресценцию в присутствии изотипически сходного антитела. Гистограмма справа представляет собой позитивное окрашивание. A, D, G, LM609 (mAb, направленное на V3, 10 мкг/мл); В, Е,Н, P1F6 (mAb, направленное на V5, 10 мкг/мл); и С, F, I, GenO95 (10 мкг/мл). Фиг. 13. Адгезия HUVEC на планшетах, покрытых белком матрикса. Тестирование адгезии выполняли, как описано в методах примера 5. Данные планшета считывали на флуориметре при 485-538 нм. В качестве негативного контроля служила клеточная адгезия на лунках, покрытых БСА. На фиг. 13 степень клеточной адгезии в присутствии различных концентраций антитела наносили как процент от клеточной адгезии в отсутствие антитела, которую принимали за 100%. Каждая точка данных является средним из трех определений (+/- станд. откл.). Фиг. 14. Адгезия клеток меланомы человека на планшетах, покрытых белком матрикса. Тестирование адгезии выполняли, как описано в методах. В качестве негативного контроля служила клеточная адгезия на лунках, покрытых БСА. На фиг. 14 степень клеточной адгезии в присутствии различных концентраций антитела наносили как процент от клеточной адгезии в отсутствие антитела, которую принимали за 100%. Каждая точка данных является средним из трех определений (+/- станд. откл.). Фиг. 15. Адгезия клеток НТ 29 карциномы ободочной кишки человека к витронектину. Тестирование адгезии выполняли, как описано в методах. В качестве негативного контроля служила клеточная адгезия на лунках, покрытых БСА. Данные на фиг. 15 нанесены как процент от максимального связывания(в отсутствие антитела) и являются средними из трех определений (+/- станд. откл.). Фиг. 16A-D. Миграция HUVEC по отношению к 2 мкг/мл витронектину. Тестирование выполняли,как описано в методах, и клеткам давали мигрировать в течение 6 ч. Микрофотографии демонстрируют примеры областей (10 х объектив линзы) клеточной миграции на фиг. 16 А - отсутствие антитела, на фиг. 16 В - GenO95 (5 мкг/мл), на фиг. 16 С - GenO95 (40 мкг/мл). Фиг. 16D является графическим представлением клеточной миграции в присутствии различных концентраций GenO95. Данные нормализованы к проценту от контроля (без антитела), который принимался за 100%, и каждая точка представляет собой среднее из трех транслуночных фильтров (+/- станд. откл.). Фиг. 17. Миграция HUVEC по отношению к 2 мкг/мл витронектину в присутствии антител противV3 и V5. Тестирование миграции выполняли, как описано в методах и клеткам давали мигрировать в течение 6 ч. LM609 и P1F6 являются mAb, направленными против V3 и V5 соответственно. Данные,представленные на фиг. 17, нормализованы к проценту от контроля (без антитела), который принимался за 100%, и каждый столбик представляет собой среднее из трех транслуночных фильтров (+/- станд. откл.). В качестве негативных контролей служили БСА, мышиные IgG и IgG человека. LM609-P1F6 представляет собой сочетание обоих антител. Антитела и БСА применяли в концентрации 10 мкг/мл. Фиг. 18 А-Е. Миграция HUVEC по отношению к 2% FBS. При тестировании миграции ей давали проходить в течение 4 ч, и данные получали, как описано в методах. Фиг. 18A является графическим представлением клеточной миграции в присутствии LM609, P1F6, сочетания LM609+P1F6, сходных по изотипу контрольных антител (человека и мыши). Антитела и белки применяли в концентрации 10 мкг/мл. Фиг. 18 В является графическим представлением клеточной миграции в присутствии ReoPro иGenO95. Микрофотографии демонстрируют примеры областей (10 х объектив линзы) клеточной миграции на фиг. 18 С - отсутствие антитела, на фиг. 18D - GenO95 (5 мкг/мл) и на фиг. 18 Е - GenO95 (20 мкг/мл). Данные нормализованы к проценту от контроля (без антитела), который принимался за 100%, и каждая точка представляет собой среднее из трех транслуночных фильтров (+/- станд. откл.). Фиг. 19 А-Е. Миграция клеток A375S.2 по отношению к 10% FBS. При тестировании миграции ей давали проходить в течение 4 ч, и данные получали, как описано в методах. Антитела применяли в концентрации 10 мкг/мл. Фиг. 19A является графическим представлением клеточной миграции в присутствии различных концентраций GenO95. Фиг. 19B является графическим представлением клеточной миграции в присутствии LM609, P1F6, сочетания LM609+P1F6, сходных по изотипу контрольных антител(человека и мыши). Данные нормализованы к проценту от контроля, который принимался за 100%, и каждая точка представляет собой среднее из трех транслуночных фильтров (+/- станд. откл.). Микрофотографии демонстрируют примеры областей (10 х объектив линзы) клеточной миграции на фиг. 19 С отсутствие антитела, на фиг. 19D - GenO95 (5 мкг/мл) и на фиг. 19E - GenO95 (20 мкг/мл).-3 007617 Фиг. 20 А-Е. Миграция HUVEC по отношению к витронектину в присутствии bFGF. Нижнюю часть фильтров камеры для миграции покрывали витронектином 2 мкг/мл и тест проводили, как описано в методах. Клеткам давали мигрировать в течение 6 ч. На фиг. 20 А-Е каждая точка данных представляет собой среднее из трех транслуночных фильтров (+/- станд. откл.). Фиг. 20A - bFGF; фиг. 20B - GenO95 (5 мкг/мл); фиг. 20C - GenO95 (40 мкг/мл); фиг. 20D - без bFGF. Фиг. 20E - ингибирование клеточной миграции в присутствии различных антител показано графически. Фиг. 21A-D. Инвазия клеток A375S.2 через фибронектиновый гель (5 мг/мл). При тестировании инвазии ей давали проходить в течение 24 ч, и данные получали, как описано в методах. Микрофотографии демонстрируют примеры областей (4 х объектив линзы) клеточной инвазии на фиг. 21 А - отсутствие антитела, на фиг. 21B - GenO95 (10 мкг/мл), фиг. 21C и D являются графическим отображением клеточной инвазии в присутствии GenO95, 10 Е 5 F(ab')2, LM609, P1F6, LM-PIF6 (LM609-P1F6), IgG человека и мыши (H-IgG и M-IgG). График на фиг. 21D: концентрация всех антител и белков составляет 10 мкг/мл. Данные нормализованы к проценту от контроля (без антитела), который принимался за 100%, и каждая точка представляет собой среднее из трех транслуночных фильтров (+/- станд. откл.). Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к выделенным, рекомбинантным и/или синтетическим антителам человека, примата, грызуна, млекопитающих, химерным, гуманизированным антителам и/или антителам с встроенной CDR против двойного интегрина, и дополнительно антиидиотипическим антителам к двойному интегрину, а также композиции и молекулам кодирующих нуклеиновых кислот, включающие, по меньшей мере, один полинуклеотид, кодирующий, по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина или антиидиотипическое антитело. Настоящее изобретение дополнительно включает, но не ограничивается этим, способы получения и применения таких нуклеиновых кислот и антител, а также антиидиотипических антител, включая диагностические и терапевтические композиции, способы и устройства. Применяемые здесь термины "антитело против двойного интегрина альфа-V-бета 3, альфа-V-бета 5", "антитело против двойного интегрина", "часть антитела против двойного интегрина" или "фрагмент антитела против двойного интегрина", и/или "вариант антитела против двойного интегрина" и т.п. включают любой белок или пептид, содержащий молекулу, которая включает по меньшей мере часть молекулы иммуноглобулина, такую как, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одну определяющую комплементарность область (CDR) тяжелой или легкой цепи, или его лиганд-связывающую часть, вариабельную область тяжелой цепи или легкой цепи, константную область тяжелой цепи или легкой цепи,каркасную область или любую другую его часть, или по меньшей мере одну часть рецептора или связывающего белка двойного интегрина, которая может быть включена в антитело настоящего изобретения. Такое антитело необязательно дополнительно влияет на специфический лиганд, так когда, но не ограничиваясь этим, такое антитело модулирует, снижает, увеличивает, действует как антагонист, действует как агонист, смягчает, облегчает, блокирует, ингибирует, аннулирует и/или вмешивается в активность или связывание по меньшей мере одного двойного интегрина или в активность или связывание рецептора двойного интегрина in vitro, in situ и/или in vivo. В качестве неограничивающего примера служит подходящее антитело против двойного интегрина, конкретная часть или вариант настоящего изобретения,которое может связывать по меньшей мере один двойной интегрин, или его конкретные части, варианты или домены. Подходящее антитело против двойного интегрина, конкретная часть или вариант может также необязательно влиять по меньшей мере на одну активность или функцию двойного интегрина, такую как, но не ограничиваясь этим, синтез РНК, ДНК или белка, высвобождение двойного интегрина,проведение сигнала с рецептора двойного интегрина, мембранное расщепление двойного интегрина, активность двойного интегрина, продукцию и/или синтез двойного интегрина. Термин "антитело" дополнительно предназначен для охвата антител, фрагментов их гидролиза, конкретных их частей и вариантов,включая миметики антител или включая части антител, которые имитируют структуру и/или функции антитела или его конкретного фрагмента или части, включая одноцепочечные антитела и их фрагменты. Функциональные фрагменты включают антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают двойной интегрин млекопитающих. Например, изобретением охватываются фрагменты антител, способные связывать двойной интегрин или его части, включая, но не ограничиваясь этим, Fab (например, в результате гидролиза папаином), Fab' (например, в результате гидролиза пепсином и частичного восстановления) иF(ab')2 (например, в результате гидролиза пепсином), facb (например, в результате гидролиза плазмином),pFc' (например, в результате гидролиза пепсином или плазмином), Fd (например, в результате гидролиза пепсином, частичного восстановления и реагрегации), Fv или scFv (например, в результате молекулярнобиологических подходов) фрагменты (см., например, Colligan, Immunology, выше). Такие фрагменты могут быть получены путем ферментативного расщепления, синтеза или рекомбинантных способов, как известно в данной области техники и/или описано здесь, антитела могут быть также получены в различных укороченных формах с применением генов антител, в которые введены один или более стоп-кодонов выше по отношению к природному сайту терминации. Например, может быть создан комбинированный ген, кодирующий часть тяжелой цепи F(ab')2 с включенными последовательностями ДНК, кодирующими CH1 домен и/или шарнирную область тяжелой цепи. Различные части-4 007617 антител могут быть объединены вместе химически с помощью общепринятых способов, или могут быть получены в виде близкого белка с применением генно-инженерных способов. Применяемый здесь термин "антитело человека" относится к антителу, в котором по существу каждая часть белка (например CDR, каркас, CL, СH домены (например СH1, СH2, СH3), шарнирная область,(VL, VH является неиммуногенной для человека и имеет только минорные различия или вариации в последовательности. Аналогично антитела, созданные как антитела приматов (обезьяны, бабуина, шимпанзе и т.п.), грызунов (мыши, крысы, кролика, морской свинки, хомяка и тому подобное) и других млекопитающих, создают как антитела, специфичные для видов, подродов, родов, подсемейств, семейств. Более того, химерные антитела включают любое сочетание, представленное выше. Такие изменения и вариации необязательно и предпочтительно сохраняют или снижают иммуногенность у человека или других видов по сравнению с немодифицированными антителами. Таким образом, антитело человека отличается от химерного или приближенного к человеческому антителу. Следует подчеркнуть, что антитело человека может продуцироваться животным, не являющимся человеком, или прокариотической или эукариотической клеткой, которая способна экспрессировать функционально реорганизованные гены иммуноглобулина человека (например, тяжелой цепи и/или легкой цепи). Более того, когда антитело человека представляет собой одноцепочечное антитело, оно может включать линкерный пептид, который не найден в природных антителах человека. Например, Fv может включать линкерный пептид, такой как имеющий от двух до приблизительно восьми глициновых или других аминокислотных остатков, который связывает вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи. Такие линкерные пептиды рассматриваются как имеющие человеческое происхождение. Могут быть также применены биспецифические, гетероспецифические, гетероконъюгатные или сходные антитела, которые являются моноклональными, предпочтительно человеческими или приближенными к человеческим, антитела, которые имеют специфичность связывания к по меньшей мере двум различным антигенам. В представленном случае одна из специфичностей связывания соответствует по меньшей мере одному двойному интегриновому белку, а другая соответствует любому другому антигену. Способы создания биспецифических антител известны в данной области техники. Обычно, рекомбинантное получение биспецифических антител основывается на коэкспрессии двух иммуноглобулиновых пар тяжелая цепь-легкая цепь, где две тяжелые цепи имеют разную специфичность (Mulstein and Cuello,Nature 305:537 (1983. Из-за случайного перебора тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов данные гибридомы (квадромы) продуцируют возможную смесь из 10 различных молекул антител, из которых только одна имеет точную биспецифическую структуру. Очистка подходящей молекулы, которую обычно осуществляют с помощью стадий аффинной хроматографии, является достаточно громоздкой, а выход продукта низким. Сходные методики раскрыты, например, в WO 93/08829, патентах США 6210668, 6193967, 6132992, 6106833, 6060285, 6037453, 6010902, 5989530, 5959084, 5959083, 5932448,5833985, 5821333, 5807706, 5643759, 5601819, 5582996, 5496549, 4676980, WO 91/00360, WO 92/00373,EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986),каждый полностью включен здесь в качестве ссылки. Антитела против двойного интегрина (называемые также антитела к двойному интегрину), применяемые в способах и композициях настоящего изобретения, могут необязательно быть охарактеризованы по высокоаффинному связыванию с двойным интегрином и как необязательно и предпочтительно имеющие низкую токсичность. В частности, антитело, конкретный фрагмент или вариант изобретения, в котором индивидуальные компоненты, такие, как вариабельная область, константная область и каркас индивидуально и/или совместно необязательно и предпочтительно обладают низкой иммуногенностью,является пригодным для настоящего изобретения. Антитела, которые могут быть использованы в изобретении, необязательно характеризуются их способностью лечить больных в течение продолжительных периодов с измеряемым облегчением симптомов и низкой и/или приемлемой токсичностью. Низкая или приемлемая иммуногенность и/или высокое сродство, также как другие подходящие свойства, могут вносить вклад в достижение терапевтических результатов. "Низкая иммуногенность" определяется здесь как развитие значительных ответов НАНА, НАСА или НАМА у менее чем приблизительно 75% или предпочтительно менее чем приблизительно у 50% лечившихся больных, и/или развитие низких титров у лечившихся больных (менее чем приблизительно 300, предпочтительно менее чем приблизительно 100 при измерении иммуноферментным методом с двойными антигенами) (Elliott et al., Lancet 344:1125-1127(1994), полностью включены здесь в качестве ссылки). Применение. Выделенные нуклеиновые кислоты настоящего изобретения могут быть применены для получения по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина или его специфического варианта, которые могут быть применены для измерения или действия в клетке, ткани, органе или у животного (включая млекопитающих и человека), для диагностики, мониторинга, модуляции, лечения, облегчения, помощи в предотвращении инцидентов или снижении симптомов по меньшей мере одного состояния, связанного с двойным интегрином, выбранного из, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере, иммунного нарушения или заболевания, сердечно-сосудистого нарушения или заболевания, инфекционного, злокачественного и/или неврологического нарушения или заболевания, или другого известного или описанно-5 007617 го состояния, связанного с двойным интегрином. Такой способ может включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина в клетку,ткань, орган, животному или больному, нуждающемуся в такой модуляции, лечении, облегчении, профилактике или в снижении симптомов, действия или механизмов. Эффективное количество может включать количество от приблизительно 0,001 до 500 мг/кг на однократное (например, болюсное), многократное или непрерывное введение, или до достижения в сыворотке концентрации 0,01-5000 мкг/мл сывороточной концентрации на однократное, многократное или непрерывное введение, или любой эффективный его диапазон или величину, как делают и определяют с применением известных способов, как описано здесь или известно из относящейся к этому области техники. Цитирование. Все цитируемые здесь публикации или патенты полностью включены здесь в качестве ссылки, так как они демонстрируют уровень техники к моменту создания настоящего изобретения, и/или дают описание и возможность осуществления настоящего изобретения. Публикации ссылаются на любые научные или патентные публикации, или любую другую информацию, доступную из любого источника информации, включая все зарегистрированные электронные или печатные материалы. Следующие рекомендации полностью включены здесь в качестве ссылки: Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology,John WileySons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2ndEdition, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., ed., Current Protocols in Immunology, John WileySons, Inc., NY (19942001); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John WileySons, NY, NY, (1997-2001). Антитела настоящего изобретения. По меньшей мере одно антитело против двойного интегрина настоящего изобретения может быть необязательно получено с помощью клеточной линии, смешанной клеточной линии, иммортализованных клеток или популяции клона иммортализованных клеток, как хорошо известно в данной области техники. См., например, Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John WileySons, Inc., NY,NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor,NY (1989); Harlow and Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, etProtocols in Protein Science, John WileySons, NY, NY, (1997-2001), каждая полностью включена здесь в качестве ссылки. Антитела человека, которые специфичны для двойных интегриновых белков человека или их фрагментов, могут быть выработаны против подходящего иммуногенного антигена, такого как выделенный и/или двойной интегриновый белок или его часть (включая синтетические молекулы, такие как синтетические пептиды). Сходным образом могут быть выработаны другие специфические или общие антитела млекопитающих. Получение иммуногенных антигенов и продукция моноклональных антител может быть выполнена с применением сходных подходов. В одном подходе получают гибридому путем слияния подходящей линии иммортализованных клеток (например, миеломной клеточной линии, такой как, но не ограничиваясь этим, Sp2/0, Sp2/0-AG14,NS0, NS1, NS2, AE-1, L.5, 243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144,ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMALWA,NEURO 2A или подобные им, или гетеромиеломы, или продукты их слияния, или любая клетка, или гибридная клетка, происходящая из них, или любой другой подходящей клеточной линии, как известно в данной области техники. См., например, www.atcc.org, www.lifetech.com. и тому подобное, с клетками,продуцирующими антитела, такими как, но не ограничиваясь этим, выделенные или клонированные клетки селезенки, периферической крови, лимфы, миндалин или других тканей, содержащих иммунные или В-клетки, или любые другие клетки, экспрессирующие константные или вариабельные области тяжелой или легкой цепи, каркас или последовательности CDR, либо эндогенной, либо гетерогенной нуклеиновой кислоты, такой как рекомбинантная или эндогенная, вирусная, бактериальная, из водорослей,прокариотическая, из амфибий, насекомых, рептилий, рыб, млекопитающих, грызунов, лошадей, овец,коз, баранов, приматов, эукариотическая, геномная ДНК, кДНК, рДНК, митохондриальная ДНК или РНК, ДНК или РНК хлоропластов, гяРНК, мРНК, тРНК, одноцепочечная, двуспиральная или трехспиральная, гибридная и тому подобное или любое их сочетание. См., например, Ausubel, выше, и Colligan,Immunology, выше, глава 2, полностью включенные здесь в качестве ссылки. Клетки, продуцирующие антитела, могут быть также получены из периферической крови или предпочтительно селезенки или лимфатических узлов человека или других подходящих животных, которые были иммунизированы интересующим антигеном. Любая другая подходящая клетка-хозяин может быть также применена для экспрессии гетерологичной или эндогенной нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело, его конкретного фрагмента или варианта настоящего изобретения. Гибридные клетки (гибридомы) или рекомбинантные клетки могут быть выделены с применением селективных условий культивирования или других подходящих известных способов и клонированы путем лимитирующего разведения, или клеточной сортировки, или другими известными способами. Клетки, которые продуцируют ан-6 007617 титела с желаемой специфичностью, могут быть отобраны с помощью подходящего тестирования (например, ИФА). Могут быть применены другие подходящие способы получения или выделения антител с требуемой специфичностью, включая, но не ограничиваясь этим, способы, при которых рекомбинантное антитело выбирается из библиотеки пептидов или белков (например, но не ограничиваясь этим, библиотеки бактериофагов, рибосом, олигонуклеотидов, РНК, кДНК или тому подобное, демонстрационной библиотеки; например, доступной от Cambridge antibody Technologies, Cambridgeshire, UK; MorphoSys, Martinsreid/Planegg, DE; Biovation, Aberdeen, Scotland, UK; BioInvent, Lund, Sweden; Dyax Corp., Enzon, Affymax/Biosite; Xoma, Berkeley, CA; Ixsys. См., например, патенты ЕР 368684, PCT/GB 91/01134; PCT/GB 92/01755; PCT/GB 92/002240; PCT/GB 92/00883; PCT/GB 93/00605; US 08/350260 (5/12/94); PCT/GB 94/01422; PCT/GB 94/02662; PCT/GB 97/01835; (CAT/MRC); WO 90/14443; WO 90/14424; WO 90/14430;(BioInvent); WO 88/06630; WO 90/3809 (Dyax); US 4704692 (Enzon); PCT/US 91/02989 (Affymax); WO 89/06283; EP 371998; EP 550400; (Xoma); EP 229046; PCT/US 91/07149 (Ixsys); или из пептидов или белков, созданных случайным перебором - патенты США 5723323, 5763192, 5814476, 5817483, 5824514,5976862, WO 86/05803, ЕР 590689 (Ixsys, сейчас Applied Molecular Evolution (AME), каждый включен здесь полностью в качестве ссылки), или такие, при которых основываются на иммунизации трансгенных животных (например, мышей SCID, Nguyen et al., Microbiol. Immunol. 41:901-907 (1997); Sandhu etal., Crit. Rev. Biotechnol. 16:95-118 (1996); Eren et al., Immunol. 93:154-161 (1998), каждая включена здесь полностью в качестве ссылки, также как относящиеся к этому патенты и заявки), которые способны продуцировать репертуар антител человека, как известно из соответствующей области техники и/или описано здесь. Такие способы включают, но не ограничиваются этим, рибосомный дисплей (Hanes et al., Proc.(ноябрь 1998; способы продукции антитела одиночными клетками (например, способ антитела выбранного лимфоцита ("SLAM") (патент США 5627052, Wen et al., J. Immunol. 17:887-892 (1987); Babcook etReports 19:125-134 (1994); Jonak et al., Progress Biotech, Vol.5, In Vitro Immunization in Hybridoma Technology, Borrebaeck, ed., Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, Netherlands (1988. Могут быть применены также способы конструирования или приближения к человеческим антител,не относящихся к человеку, или антител человека и они хорошо известны в данной области техники. Обычно антитело, приближенное к человеческому, или сконструированное антитело имеет один или более аминокислотных остатков от источника, не являющегося человеком, например, но не ограничиваясь этим, от мыши, крысы, примата, не являющегося человеком, или другого млекопитающего. Данные аминокислотные остатки человека часто обозначаются как "импортируемые" остатки, которые обычно берут от "импортируемого" вариабельного, константного или другого домена известной последовательности человека. Известные последовательности Ig человека раскрыты, например, вKabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), каждый из которых включен здесь в качестве ссылки. Такие импортируемые последовательности могут быть использованы для снижения иммуногенности или для снижения, увеличения или модификации связывания, аффинности, нормального функционирования, ненормального функционирования, авидности, специфичности, полупериода жизни или любой другой подходящей характеристики, как известно в данной области техники. Обычно часть или все последовательности CDR не от человека или человека сохраняются, в то время как последовательности не от человека вариабельной и константной областей замещаются аминокислотами от человека или другими аминокислотами. Антитела могут быть также необязательно приближены к человеческим с сохранением высокого сродства к антигену и других благоприятных биологических свойств. Для достижения данной цели гуманизированные антитела, могут быть необязательно получены с помощью процесса анализа родительских последовательностей и различных гуманизированных концептуальных продуктов с применением трехмерных моделей родительских и гуманизированных последовательностей. Обычно доступны трехмерные модели иммуноглобулинов, и они хорошо знакомы специалистам в данной области техники. Доступны компьютерные программы, которые иллюстрируют и демонстрируют вероятные трехмерные конформационные структуры выбранных кандидатов последовательностей иммуноглобулинов. Рассмотрение данных изображений позволяет анализировать предполагаемую роль остатков в функционировании кандидатной последовательности иммуноглобулина, т.е. анализировать остатки, которые влияют на способность кандидатного иммуноглобулина связывать свой антиген. Таким способом могут быть выбраны остатки FR и скомбинированы консенсусные и импортируемые последовательности так, чтобы достигалась желаемая характеристика антитела, такая как повышенная аффинность для антигена(ов)-мишени(ей). В целом остатки CDR прямо и наиболее существенно вовлечены во влияние на связывание антигена. Конструирование антител настоящего изобретения или приближение их к человеческим может быть выполнено с применением любого известного способа, такого как, но не ограничиваясь этим, те, что описаны в Winter (Jones et al., Nature 321:522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323WO 90/14443, WO 90/14424, WO 90/14430, EP 229246, каждый включен здесь полностью в качестве ссылки, в том числе цитируемые в них ссылки. Антитело против двойного интегрина может также необязательно вырабатываться путем иммунизации трансгенного животного (например, мыши, крысы, хомячка, примата, не являющегося человеком,и т.п.), способного продуцировать репертуар антител человека, как здесь описано и/или как известно в данной области техники. Клетки, которые продуцируют антитело человека против двойного интегрина,могут быть выделены из таких животных и иммортализованы с применением подходящих способов, таких как описанные здесь способы. Трансгенные мыши, которые могут продуцировать репертуар антител человека, связывающих антигены человека, могут быть получены известными способами (например, но не ограничиваясь этим, изложенными в патентах США 5770428, 5569825, 5545806, 5625126, 5625825, 5633425, 5661016 и 5789650, выпущенном Lonberg et al.; Jakobovits et al. WO 98/50433, Jakobovits et al. WO 98/24893, LonbergBiotechnol. 14(7):845-851 (1996), каждый из которых включен здесь полностью в качестве ссылки). Обычно данные мыши включают по меньшей мере один трансген, включающий ДНК по меньшей мере-8 007617 из одного локуса иммуноглобулина человека, который является функционально реорганизованным, или который может подвергаться функциональной реорганизации. Эндогенные локусы иммуноглобулинов у таких мышей могут быть разрушены или удалены для уничтожения способности животного продуцировать антитела, кодируемые эндогенными генами. Скрининг антител на специфическое связывание со сходными белками или фрагментами может быть с удобством достигнут при применении дисплейных библиотек пептидов. Данный способ включает скрининг больших коллекций пептидов для индивидуальных членов, имеющих желаемую функцию или структуру. Скрининг антител при применении дисплейных библиотек пептидов хорошо известен в данной области техники. Демонстрируемые последовательности пептидов могут составлять от 3 до 5000 или более аминокислот в длину, обычно от 5-100 аминокислот в длину, и часто от приблизительно 8 до 25 аминокислот в длину. В дополнение к прямым химическим методам синтеза для создания пептидных библиотек описано несколько способов с рекомбинантной ДНК. Один тип включает экспонирование пептидной последовательности на поверхности бактериофага или клетки. Каждый бактериофаг или клетка содержат последовательность нуклеотидов, кодирующую конкретную экспонируемую пептидную последовательность. Такие способы описаны в патентных публикациях РСТ 91/17271, 91/18980,91/19818 и 93/08278. Другие системы для генерации пептидных библиотек сочетают особенности как химического синтеза in vitro, так и рекомбинантных способов. См. патентные публикации РСТ 92/05258, 92/14843 и 96/19256. См. также патенты США 5658754 и 5643768. Дисплейные пептидные библиотеки, вектор и наборы для скрининга поставляются такими поставщиками, как InvitrogenXoma, Colligan, выше; Ausubel, выше; или Sambrook, выше, каждый из указанных выше патентов и публикаций полностью включен здесь в качестве ссылки. Антитела настоящего изобретения могут быть также получены с применением по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело против двойного интегрина, при обеспечении трансгенными животными или млекопитающими, такими как козы, коровы, лошади, овцы и т.п., которые продуцируют такие антитела в своем молоке. Таких животных можно получить, применяя известные способы. См., например, но не ограничиваясь этим, патенты США 5827690; 5849992; 4873316; 5849992; 5994616; 5565362; 5304489 и т.п., каждый из которых полностью включен здесь в качестве ссылки. Антитела настоящего изобретения могут быть дополнительно получены с применением по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело против двойного интегрина, при обеспечении трансгенными растениями и культивируемыми растительными клетками (например, но не ограничиваясь этим, табака или кукурузы), которые продуцируют такие антитела, их конкретные части или варианты в частях растения или в выделенных из них культивируемых клетках. Нелимитирующим примером являются листья трансгенного табака, экспрессирующие рекомбинантные белки, успешно применяемые для обеспечения большими количествами рекомбинантных белков, например, при использовании индуцибельного промотора. См., например, Cramer et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 240:95-118 (1999) и цитируемые здесь ссылки. Трансгенную кукурузу также применяли для экспрессии белков млекопитающих на уровне коммерческого получения с биологической активностью, эквивалентной получаемой в других рекомбинантных системах или при очистке из природных источников. См., например, Hood et al.,Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) и цитируемые здесь ссылки. Антитела получали также в больших количествах из семян трансгенных растений, включая фрагменты антител, такие как одноцепочечные антитела (scFv), включая семена табака и клубни картофеля. См., например, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) и цитируемую здесь ссылку. Таким образом, антитела настоящего изобретения могут быть также получены с применением трансгенных растений в соответствии с известными способами. См.также, например, Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (окт., 1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994); и цитируемые здесь ссылки. См. также обычно для экспрессии антител в растениях, но не ограничиваясь этим. Каждая из указанных выше ссылок полностью включена здесь в качестве ссылки. Антитела изобретения могут связывать двойной интегрин человека с широким диапазоном аффинности (KD). В предпочтительном осуществлении по меньшей мере одно mAb человека настоящего изобретения может необязательно связывать двойной интегрин с высокой аффинностью. Например, mAb человека может связывать двойной интегрин человека с KD, равной или меньшей чем приблизительно 10-7 М, такой как, но не ограничиваясь этим, 0,1-9,9 (или любой диапазон или величина в данных пределах) X 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12, 10-13 или любой диапазон или величина в данных пределах. Аффинность или авидность антитела к антигену может быть определена экспериментально с применением подходящего способа. (См., например, Berzofsky, et al., "Antibody-Antigen Interactions," In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W.H.(например, концентрации соли, рН). Таким образом, измерения аффинности и других антигенсвязывающих параметров (например, KD, Ka, Kd) предпочтительно осуществляют со стандартизованными растворами антитела и антигена и со стандартизованным буфером, таким как описанный здесь буфер. Молекулы нуклеиновых кислот. Применив представленную здесь информацию, могут быть получены с использованием описанных здесь или известных из соответствующей области техники способов такие нуклеотидные последовательности, как кодирующие, по меньшей мере, 70-100% смежных аминокислот по меньшей мере одной SEQID No:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, их специфических фрагментов, вариантов или консенсусных последовательностей, или положенных на хранение векторов, включающих по меньшей мере одну из таких последовательностей, молекулу нуклеиновой кислоты настоящего изобретения, кодирующую по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина. Молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения могут быть в форме РНК, такой как мРНК,гяРНК, тРНК или в любой другой форме, или в форме ДНК, включая, но не ограничиваясь этим, кДНК и геномную ДНК, полученные клонированием или выработанные синтетическим путем, или любых их сочетаний. ДНК может быть трехспиральной, двуспиральной или одноцепочечной, или любым их сочетанием. Любая часть по меньшей мере одной цепи ДНК или РНК может быть кодирующей цепью, также известной как смысловая цепь, или она может быть некодирующей цепью, обозначаемой также как антисмысловая цепь. Выделенные молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения могут включать молекулы нуклеиновых кислот, включающие открытую рамку считывания (ORF), необязательно с одним или более интронов, например, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одну конкретную часть по меньшей мере одной CDR, такой как CDR1, CDR2 и/или CDR3, по меньшей мере одной тяжелой цепи (например,SEQ ID No:1-3) или легкой цепи (например, SEQ ID No:4-6), молекулы нуклеиновых кислот, включающие кодирующую последовательность для антитела против двойного интегрина или вариабельную область (например, SEQ ID No:7, 8), и молекулы нуклеиновых кислот, которые включают последовательность нуклеотидов, по существу отличную от описанных выше, но которая в результате вырожденности генетического кода, все еще кодирует по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина, как здесь описано и/или известно в данной области техники. Конечно, генетический код хорошо известен в данной области техники. Таким образом, для специалиста в данной области техники должно быть общепринятым создание таких вариантов антисмысловых нуклеиновых кислот, которые кодируют специфические антитела против двойного интегрина настоящего изобретения. См., например, Ausubel, et al., выше, и такие варианты нуклеиновых кислот включены в настоящее изобретение. Неограничивающие примеры выделенных молекул нуклеиновых кислот настоящего изобретения включают SEQ ID No:10, 11,12, 13, 14, 15, соответствующие неограничивающим примерам нуклеиновой кислоты, кодирующей, соответственно, НС CDR1, НС CDR2, НС CDR3, LC CDR1, LC CDR2, LC CDR3, вариабельную область НС и вариабельную область LC. В другом варианте в изобретении предлагаются молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитело против двойного интегрина, имеющее последовательность аминокислот, такую как кодируемая нуклеиновой кислотой, содержащейся в плазмиде, положенной на хранение с обозначенными названиями клоновидепозитов АТССсоответственно, положенных на хранение. Как здесь указывается, молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения, которые включают нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против двойного интегрина, могут включать, но не ограничиваться этим, те из них, которые кодируют последовательность аминокислот фрагмента антитела как такового; кодирующую последовательность полного антитела или его части; кодирующую последовательность антитела, фрагмента или части, а также дополнительные последовательности, такие как кодирующая последовательность, по меньшей мере одного сигнального лидирующего пептида или гибридного пептида с или без указанных выше дополнительных кодирующих последовательностей, таких как по меньшей мере один интрон, совместно с дополнительными некодирующими последовательностями,включая, но не ограничиваясь этим, некодирующие 5' и 3' последовательности, такие как транскрибируемые нетранслируемые последовательности, которые играют роль в транскрипции, процессинге мРНК, включая сигналы сплайсинга и полиаденилирования (например, рибосомальное связывание и стабильность мРНК); дополнительную кодирующую последовательность, которая кодирует дополнительные аминокислоты, такие как те, что обеспечивают дополнительные функции. Таким образом, последовательность, кодирующая антитело, может быть слита с маркерной последовательностью, такой как последовательность, кодирующая пептид, который способствует очистке гибридного антитела, включающего фрагмент или часть антитела. Полинуклеотиды, которые избирательно гибридизуются с описанным здесь полинуклеотидом. В настоящем изобретении предлагаются выделенные нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются в селективных условиях гибридизации с раскрытыми здесь полинуклеотидами. Таким образом, полинуклеотиды данного осуществления могут быть использованы для выделения, детекции и/или количественного определения нуклеиновых кислот, включающих такие полинуклеотиды. Например, полинуклео- 10007617 тиды настоящего изобретения могут быть применены для идентификации, выделения или амплификации частичных или полноразмерных клонов в депозитарной библиотеке. В некоторых осуществлениях полинуклеотиды представляют собой выделенные последовательности геномной ДНК или кДНК или, в другом варианте, комплементарные к кДНК из библиотеки нуклеиновых кислот человека и млекопитающих. Предпочтительно библиотека кДНК включает по меньшей мере 80% полноразмерных последовательностей, предпочтительно по меньшей мере 85 или 90% полноразмерных последовательностей и более предпочтительно по меньшей мере 95% полноразмерных последовательностей. Библиотеки кДНК могут быть нормализованы для увеличения представленности редких последовательностей. Условия низкой или средней жесткости гибридизации обычно, но не исключительно, применяются для последовательностей, имеющих пониженную идентичность последовательности относительно непосредственно комплементарных последовательностей. Условия средней или высокой жесткости могут быть необязательно применены для последовательностей с более высокой идентичностью. Условия с низкой жесткостью дают возможность селективно гибридизовать последовательности, имеющие приблизительно 70% идентичных последовательностей, и могут быть применены для идентификации ортологических или паралогических последовательностей. Необязательно полинуклеотиды настоящего изобретения должны кодировать по меньшей мере часть антитела, кодируемого описываемыми здесь полинуклеотидами. Полинуклеотиды данного изобретения охватывают последовательности нуклеиновых кислот, которые могут быть применены для селективной гибридизации с полинуклеотидом, кодирующим антитело настоящего изобретения. См., например, Ausubel, выше; Colligan, выше, каждый полностью включен здесь в качестве ссылки. Конструкция нуклеиновых кислот. Выделенные нуклеиновые кислоты настоящего изобретения могут быть получены с применением(а) рекомбинантных способов, (b) способов синтеза, (с) способов очистки или их сочетаний, как хорошо известно в данной области техники. Выгодно, чтобы нуклеиновые кислоты могли включать последовательности в добавление к полинуклеотиду настоящего изобретения. Например, в нуклеиновую кислоту может быть вставлен сайт мультиклонирования, включающий один или более сайтов эндонуклеазной рестрикции, с целью выделения полинуклеотида. Могут быть включены также транслируемые последовательности с целью выделения транслированного полинуклеотида настоящего изобретения. Например, гексагистидиновая маркерная последовательность обеспечивает удобными вариантами очистки белков настоящего изобретения. Нуклеиновая кислота настоящего изобретения, исключая кодирующую последовательность, является необязательно вектором, адаптером или линкером для клонирования и/или экспрессии полинуклеотида настоящего изобретения. К таким клонируемым и/или экспрессируемым последовательностям могут быть добавлены дополнительные последовательности для оптимизации их функции при клонировании и/или экспрессии с целью выделения полинуклеотида или для улучшения введения полинуклеотида в клетку. Применение векторов клонирования, экспрессионных векторов, адаптеров и линкеров хорошо известно в данной области техники. (См., например, Ausubel, выше; или Sambrook, выше). Рекомбинантные способы конструирования нуклеиновых кислот. Композиции выделенных нуклеиновых кислот данного изобретения, таких как РНК, кДНК, геномная ДНК или любое их сочетание, могут быть получены из биологических источников с применением любого количества способов клонирования, известных специалистам в данной области техники. В некоторых осуществлениях для идентификации желаемой последовательности в кДНК или библиотеке геномной ДНК применяют олигонуклеотидные зонды, которые селективно гибридизуют в жестких условиях с полинуклеотидами настоящего изобретения. Выделение РНК и конструкции кДНК и геномных библиотек хорошо известны специалистам в данной области техники. (См., например, Ausubel, выше; или Sambrook, выше). Скрининг нуклеиновых кислот и способы выделения. Можно провести скрининг кДНК или геномной библиотеки с применением зонда на основе последовательности полинуклеотида настоящего изобретения, такого как раскрытые здесь. Зонды могут быть применены для гибридизации с последовательностями геномной ДНК или кДНК для выделения гомологичных генов в том же самом или отличном организмах. Специалисты в данной области техники должны понимать, что в опыте могут быть применены различные степени жесткости гибридизации; и либо гибридизация, либо среда для отмывки может быть жесткой. Как только условия гибридизации становятся более жесткими, должна соблюдаться более высокая степень комплементарности между зондом и мишенью для возникновения образования дуплекса. Степень жесткости может контролироваться одним или более факторами, такими как температура, ионная сила, рН и присутствие частично денатурирующего растворителя, такого как формамид. Например, жесткость гибридизации обычно изменяется путем изменения полярности реакционного раствора путем, например, манипуляций с концентрацией формамида от 0 до 50%. Степень комплементарности (идентичность последовательностей), требуемая для определяемого связывания должна варьировать в соответствии с жесткостью среды для гибридизации и/или среды для отмывки. Степень комплементарности оптимально должна составлять 100 или 70-100% или любые- 11007617 диапазон или величину в данных пределах. Однако должно быть понятно, что минорные вариации последовательности в зондах и праймерах могут быть компенсированы снижением жесткости гибридизации и/или среды для отмывки. Способы амплификации РНК или ДНК хорошо известны в данной области техники и могут быть применены в соответствии с настоящим изобретением без чрезмерного экспериментирования на основе представленных здесь указаний и руководств. Известные способы амплификации ДНК или РНК включают, но не ограничиваются этим, полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и близкие к ней процессы амплификации (см., например, патенты США 4683195, 4683202, 4800159, 4965188, принадлежащие Mullis et al.; 4795699 и 4921794, принадлежащие Tabor et al.; 5142033, принадлежащий Innis; 5122464, принадлежащий Wilson, et al.; 5091310, принадлежащий Innis; 5066584, принадлежащий Gyllensten, et al.; 4889818, принадлежащий Gelfand, et al.; 4994370, принадлежащий Siver, et al.; 47 66067, принадлежащий Biswas; 4656134, принадлежащий Ringold), и амплификацию, опосредуемую РНК, при которой применяют антисмысловую РНК к последовательности-мишени в качестве матрицы для синтеза двуспиральной ДНК (патент США 5130238, принадлежащий Malek et al., с торговой маркой NASBA), полное содержание ссылок которых включено здесь в качестве ссылки. (См., например, Ausubel, выше; или Sambrook, выше). Например, способ полимеразной цепной реакции (ПЦР) может быть применен для амплификации последовательностей полинуклеотидов настоящего изобретения и относящихся к ним генов непосредственно из библиотек геномной ДНК или кДНК. ПЦР и другие способы амплификации in vitro также могут быть полезны, например, для клонирования последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белки, которые будут экспрессироваться, для получения нуклеиновых кислот, которые будут применяться в качестве зондов для определения присутствия желаемой мРНК в образцах, для секвенирования нуклеиновых кислот или для других целей. Примеры методологий, достаточных для объяснения специалистам в области методов амплификации in vitro, можно найти в Berger, выше, Sambrook, выше, и Ausubel,выше, а также в Mullis, et al., патент США No 4683202 (1987); и Innis, et al., PCR Protocols A Guide toMethods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Имеющиеся в продаже наборы для ПЦР для геномной амплификации известны в данной области техники. См., например, Advantage-GCGenomic PCR Kits (Clontech). Дополнительно, например, может быть использован ген белка 32 Т 4 (Boehringer Mannheim) для улучшения выхода длинных продуктов ПЦР. Синтетические способы для конструирования нуклеиновых кислот. Выделенные нуклеиновые кислоты настоящего изобретения могут быть также получены путем прямого химического синтеза с помощью известных способов (см., например, Ausubel et al. выше). Химический синтез обычно дает одноцепочечный олигонуклеотид, который может быть превращен в двуспиральную ДНК путем гибридизации с комплементарной последовательностью или путем полимеризации с ДНК-полимеразой с использованием одной цепи в качестве матрицы. Специалист в данной области техники должен знать, что в то время как химический синтез ДНК может быть ограничен последовательностями из приблизительно 100 или более оснований, более длинные последовательности могут быть получены путем лигирования более коротких последовательностей. Рекомбинантные экспрессионные кассеты. В настоящем изобретении дополнительно предлагаются рекомбинантные экспрессионные кассеты,включающие нуклеиновую кислоту настоящего изобретения. Последовательность нуклеиновой кислоты настоящего изобретения, например, кДНК или геномная последовательность, кодирующая антитело настоящего изобретения, может быть применена для конструирования рекомбинантной экспрессионной кассеты, которая может быть введена по меньшей мере в одну желаемую клетку-хозяин. Рекомбинантная экспрессионная кассета должна обычно включать полинуклеотид настоящего изобретения, оперативно связанный с регуляторными последовательностями - инициаторами транскрипции, которые должны управлять транскрипцией полинуклеотида в предназначенной клетке-хозяине. Для управления транскрипцией нуклеиновых кислот настоящего изобретения могут быть применены как гетерологичные, так и негетерологичные (т.е. эндогенные) промоторы. В некоторых осуществлениях выделенные нуклеиновые кислоты, которые служат в качестве промотора, энхансера или других элементов, могут быть введены в подходящее положение (выше, ниже кодирующей части или в интрон) негетерологичной формы полинуклеотида настоящего изобретения, так,чтобы позитивно или негативно регулировать экспрессию полинуклеотида настоящего изобретения. Например, эндогенные промоторы могут быть изменены in vivo или in vitro путем мутации, делеции и/или замены. Векторы и клетки-хозяева. Настоящее изобретение также относится к векторам, которые включают выделенные молекулы нуклеиновой кислоты настоящего изобретения, к клеткам-хозяевам, в которые с помощью генной инженерии встроены рекомбинантные векторы, и к получению по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина с помощью рекомбинантных способов, как это хорошо известно в соответствующей области техники. См., например, Sambrook, et al. выше; Ausubel, et al. выше, каждый включен здесь полностью в качестве ссылки.- 12007617 Полинуклеотиды могут быть необязательно соединены с вектором, содержащим селективный маркер для размножения в хозяине. Обычно плазмидный вектор вводят в осадке, таком как осадок фосфата кальция, или в комплексе с заряженным липидом. Если вектор представляет собой вирус, он может быть упакован in vitro с применением подходящей упаковывающей клеточной линии и затем трансдуцирован в клетки-хозяева. Вставка ДНК должна быть оперативно связана с подходящим промотором. Экспрессионные конструкты должны дополнительно включать сайты инициации транскрипции, ее терминации и в транскрибируемой области рибосомосвязывающий сайт для трансляции. Кодирующая часть зрелых транскриптов,экспрессируемых конструктами, должна предпочтительно включать в начале сайт инициации трансляции и кодон ее терминации (например, UAA, UGA или UAG), подходящим образом расположенный на конце мРНК, которая будет транслироваться, с UAA и UAG, предпочтительными для экспрессии в клетках млекопитающих или эукариотических клетках. Экспрессионные векторы должны предпочтительно, но необязательно, включать по меньшей мере один селективный маркер. Такие маркеры включают, например, но не ограничиваются этим, гены устойчивости культуры эукариотических клеток к метотрексату (МТХ), дигидрофолатредуктазе (DHFR, патенты США 4399216; 4634665; 4656134; 4956288; 5149636; 5179017; ампициллину, неомицину(G418), микофенолкислоте или глутаминсинтетазе (GS, патенты США 5122464; 5770359; 5827739) и гены устойчивости к тетрациклину или ампициллину для культивирования Е. coli и других бактерий или прокариот (указанные выше патенты полностью включены здесь в качестве ссылки). Подходящие среды и условия культивирования для описанных выше клеток-хозяев известны в данной области техники. Подходящие векторы должны быть вполне очевидными для специалистов в данной области техники. Введение векторного конструкта в клетку-хозяина может быть выполнено путем трансфекции с помощью фосфата кальция, трансфекции, опосредованной ДЭАЭ-декстраном, трансфекции, опосредованной катионными липидами, электропорации, трансдукции, инфицирования или других известных способов. Такие способы описаны в данной области техники, например, Sambrook выше, главы 1-4 и 16-18; Ausubel выше, главы 1, 9, 13, 15, 16. По меньшей мере одно антитело настоящего изобретения может быть экспрессировано в модифицированной форме, такой как гибридный белок, и может включать не только сигналы секреции, но также дополнительные гетерологические функциональные области. Например, область дополнительных аминокислот, особенно заряженных аминокислот, может быть добавлена к N-концу антитела для улучшения стабильности и сохранения в клетке-хозяине, в течение очистки или в течение последующего манипулирования и хранения. К антителу настоящего изобретения могут быть добавлены также пептидные части для облегчения очистки. Такие области могут быть удалены перед окончательным получением антитела или по меньшей мере одного его фрагмента. Такие способы описаны во многих стандартных лабораторных руководствах, таких как Sambrook выше, главы 17.29-17.42 и 18.1-18.74; Ausubel выше, главы 16, 17 и 18. Специалистам в данной области техники известны многочисленные экспрессионные системы, пригодные для экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей белок настоящего изобретения. В противоположном варианте нуклеиновые кислоты настоящего изобретения могут быть экспрессированы в клетке-хозяине путем включения (с помощью манипулирования) в клетке-хозяине, которая содержит эндогенную ДНК, кодирующую антитело настоящего изобретения. Такие способы хорошо известны в данной области техники, например, как описано в патентах США 5580734, 5641670,5733746 и 5733761, полностью включенных здесь в качестве ссылки. Примерами клеточных культур, пригодных для получения антител, их конкретных частей или вариантов, являются клетки млекопитающих. Системы клеток млекопитающих часто должны быть в форме монослоев клеток, хотя могут быть применены также суспензии клеток млекопитающих или биореакторы. Ряд подходящих линий клеток-хозяев, способных экспрессировать интактные гликозилированные белки, разрабатывается в данной области техники и включает клеточные линии COS-1 (например, АТССG2, P3x63Ag8.653, SP2/0-Ag14, клетки 293, клетки HeLa и т.п., которые вполне доступны от, например,American Type Culture Collection, Manassas, Va (www.atcc.org). Предпочтительные клетки-хозяева включают клетки лимфоидного происхождения, такие как клетки миеломы и лимфомы. Особенно предпочтительными клетками-хозяевами являются клеткиCRL-1851). В особенно предпочтительном осуществлении рекомбинантная клетка представляет собой клетку Р 3 х 63 Аb8.653 или SP2/0-Ag14. Экспрессионные векторы для данных клеток могут включать одну или более из следующих последовательностей, контролирующих экспрессию, таких как, но не ограничиваясь этим, сайт старта репликации; промотор (например, поздний или ранний промоторы SV40, промотор CMV (патенты США 5168062; 5385839), промотор HSV tk, промотор pgk (фосфоглицераткиназы), промотор EF-1 альфа (патент США 5266491), по меньшей мере один промотор иммуноглобулина человека; энхансер и/или- 13007617 сайты процессинга информации, такие как сайты связывания рибосом, сайты сплайсинга РНК, сайты полиаденилирования (например, дополнительный расширенный сайт Т Ag поли A SV 40) и последовательности терминации транскрипции. См., например, Ausubel et al. выше; Sambrook, et al. выше. Другие клетки, пригодные для получения нуклеиновых кислот или белков настоящего изобретения, известны и/или доступны, например, по каталогу клеточных линий и гибридом американской коллекции типов культур (www.atcc.org), или от других известных или коммерческих источников. Когда применяют эукариотические клетки-хозяева, последовательности полиаденилирования или терминации транскрипции обычно включают в вектор. Примером терминаторной последовательности является последовательность полиаденилирования от гена гормона роста быка. Могут быть также включены последовательности для точного сплайсинга транскрипта. Примером последовательности для сплайсинга является интрон VP1 из SV 40 (Sprague, et al., J. Virol. 45:773-781 (1983. Дополнительно в вектор могут быть включены последовательности генов для контроля репликации в клетке-хозяине, как известно из данной области техники. Очистка антитела. Антитело против двойного интегрина может быть открыто в культурах рекомбинантных клеток и очищено с помощью хорошо известных способов, включая, но не ограничиваясь этим, очистку с помощью протеина А, осаждения сульфатом аммония или этанолом, кислотной экстракции, анионо- или катионообменной хроматографии, хроматографии на фосфоцеллюлозе, хроматографии на основе гидрофобного взаимодействия, аффинной хроматографии, хроматографии на гидроксилапатите и хроматографии на лектине. Для очистки может быть также применена высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). См., например, Colligan, Current Protocols in Immunology, или Current Protocols in ProteinScience, John WileySons, NY, NY, (1997-2001), например, главы 1, 4, 6, 8, 9, 10, каждая включена здесь полностью в качестве ссылки. Антитела настоящего изобретения включают природные очищенные продукты, продукты методик химического синтеза и продукты, полученные с помощью рекомбинантных способов из эукариотического хозяина, включая, например, дрожжи, высшее растение, насекомое и клетки млекопитающих. В зависимости от хозяина, применяемого в рекомбинантном способе получения, антитело настоящего изобретения может быть гликозилированным или может быть негликозилированным, предпочтительно гликозилированным. Такие способы описаны во многих стандартных лабораторных руководствах, таких какSambrook, выше, разделы 17.37-17.42; Ausubel, выше, главы 10, 12, 13, 16, 18 и 20, Colligan, Protein Science, выше, главы 12-14, все включены здесь полностью в качестве ссылки. Антитела против двойного интегрина. Выделенные антитела настоящего изобретения включают последовательности аминокислот раскрытого здесь антитела, кодируемые любым подходящим полинуклеотидом, или любого выделенного или полученного антитела. Предпочтительно, чтобы антитело человека или антигенсвязывающий фрагмент связывали двойной интегрин и в результате этого частично или существенно нейтрализовали по меньшей мере одну биологическую активность белка. Антитело, или его конкретная часть, или вариант,которое частично или предпочтительно существенно нейтрализует по меньшей мере одну биологическую активность по меньшей мере одного двойного интегринового белка или фрагмента, может связывать белок или фрагмент и таким образом ингибировать активность, опосредованную связыванием двойного интегрина с рецептором двойного интегрина, или опосредованную другими зависимыми от двойного интегрина или опосредуемыми им механизмами. Применяемый здесь термин "нейтрализующее антитело" относится к антителу, которое может ингибировать активность, зависимую от двойного интегрина,на приблизительно 20-120%, предпочтительно на по меньшей мере около 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70,75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% или более в зависимости от способа тестирования. Способность антитела против двойного интегрина ингибировать активность, зависимую от двойного интегрина, предпочтительно оценивают по меньшей мере по одному тесту на подходящий двойной интегриновый белок или рецептор, как здесь описано и/или как известно в данной области техники. Антитело человека изобретения может представлять собой любой класс (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD и т.п.) или изотип и может включать легкую цепь каппа или лямбда. В одном осуществлении антитело человека включает тяжелую цепь IgG или определенный фрагмент, например, по меньшей мере один из изотиповIgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Антитела данного типа могут быть получены путем применения трансгенной мыши или другого трансгенного млекопитающего, не являющегося человеком, включающих по меньшей мере один трансген легкой цепи человека (например, IgG, IgA и IgM (например, l, 2, 3, 4), как здесь описано и/или известно из данной области техники. В другом осуществлении антитело человека против двойного интегрина человека включает тяжелую цепь IgG1 и легкую цепь IgG1. По меньшей мере одно антитело изобретения связывает по меньшей мере один конкретный эпитоп,специфичный по меньшей мере для одного двойного интегринового белка, субъединицы, фрагмента,части или любого их сочетания. По меньшей мере один эпитоп может включать по меньшей мере одну связывающую область для антитела, которая включает по меньшей мере одну часть указанного белка,причем эпитоп предпочтительно включает по меньшей мере одну внеклеточную, растворимую, гидрофильную, внешнюю или цитоплазматическую часть указанного белка. По меньшей мере один конкрет- 14007617 ный эпитоп может включать любое сочетание по меньшей мере одной аминокислотной последовательности по меньшей мере из 1-3 аминокислот к полной конкретной части смежных аминокислот SEQ IDNo:9, 16 или 17. Обычно антитело человека или антигенсвязывающий фрагмент настоящего изобретения должен включать антигенсвязывающую область, которая включает по меньшей мере одну область человека, определяющую комплементарность (CDR1, CDR2 и CDR3), или вариант по меньшей мере одной вариабельной области тяжелой цепи и по меньшей мере одну область человека, определяющую комплементарность (CDR1, CDR2 и CDR3), или вариант по меньшей мере одной вариабельной области легкой цепи. Нелимитирующим примером является антитело или антигенсвязывающая часть или вариант, которые могут включать по меньшей мере одну из CDR3 тяжелых цепей, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No:3, и/или CDR3 легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQID No:6. В конкретном осуществлении антитело или антигенсвязывающий фрагмент может иметь антигенсвязывающую область, которая включает по меньшей мере часть по меньшей мере одной CDR тяжелой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и/или CDR3), имеющую аминокислотную последовательность соответствующих CDR 1, 2 и/или 3 (например, SEQ ID No:1, 2 и/или 3). В другом конкретном осуществлении антитело или антигенсвязывающая часть или вариант может иметь антигенсвязывающую область, которая включает по меньшей мере часть по меньшей мере одной CDR легкой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и/илиCDR3), имеющую аминокислотную последовательность соответствующих CDR 1, 2 и/или 3 (например,SEQ ID No:4, 5 и/или 6). В предпочтительном осуществлении три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи антитела или антигенсвязывающего фрагмента имеют аминокислотную последовательность соответствующей CDR по меньшей мере от одного mAb GenO95, GenOl0l, CNTO 95, C372A, как здесь описано. Такие антитела могут быть получены с помощью химического присоединения друг к другу различных частей (например, CDR, каркаса) антитела с применением общепринятых способов, путем получения и экспрессии (т.е. одной или более) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело с применением общепринятых способов технологии рекомбинантных ДНК или путем использования любого другого подходящего способа. Антитело против двойного интегрина может включать по меньшей мере одну из вариабельных областей тяжелой или легкой цепи, имеющую определенную аминокислотную последовательность. Например, в предпочтительном осуществлении антитело против двойного интегрина включает по меньшей мере одну вариабельную область от по меньшей мере одной тяжелой цепи, необязательно имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No:7, и/или по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи, необязательно имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No:8. Антитела,которые связывают двойной интегрин человека и которые включают определенную вариабельную область тяжелой или легкой цепи, могут быть получены с применением подходящих способов, таких как фаговый дисплей (Katsube, Y., et al., Int. J. Mol. Med, 1(5):863-868 (1998, или способы, в которых применяются трансгенные животные, как известно из данной области техники и/или описывается здесь. Например, трансгенная мышь, включающая трансген функционально реорганизованной тяжелой цепи иммуноглобулина человека и трансген, включающий ДНК от локуса легкой цепи иммуноглобулина человека, который может подвергаться функциональной реорганизации, может быть иммунизирована двойным интегрином человека или его фрагментом для индукции выработки антител. Если это желательно, клетки, продуцирующие антитела, могут быть выделены и могут быть получены гибридомы или другие иммортализованные клетки, продуцирующие антитела, как здесь описано и/или как известно в данной области техники. В противоположном варианте антитело, его конкретная часть или вариант может быть экспрессирован с применением кодирующей нуклеиновой кислоты или ее части в подходящей клеткехозяине. Изобретение также относится к антителам, антигенсвязывающим фрагментам, цепям иммуноглобулинов и аминокислотам, включающим CDR, в последовательности, которая является, по существу, той же самой, что и описанная здесь аминокислотная последовательность. Предпочтительно, такие антитела или антигенсвязывающие фрагменты и антитела, включающие такие цепи или CDR, могут связывать двойной интегрин человека с высокой аффинностью (например, KD меньшей или равной приблизительно 10-9 М). Аминокислотные последовательности, которые являются, по существу, теми же самыми, что и описанные здесь аминокислотные последовательности, включают последовательности, включающие консервативные аминокислотные замены, так же как делеции аминокислот и/или вставки. Консервативная замена аминокислот обозначает замену первой аминокислоты второй аминокислотой, которая имеет химические или физические свойства (например, заряд, структуру, полярность, гидрофобность/гидрофильность), которые сходны с таковыми первой аминокислоты. Консервативные замены включают замену одной аминокислоты на другую внутри следующих групп: лизин (K), аргинин (R) и гистидин (Н); аспартат (D) и глутамат (Е); аспарагин (N), глутамин (Q), серии (S), треонин (Т), тирозин(Y), K, R, H, D и Е; аланин (А), валин (V), лейцин (L), изолейцин (I), пролин (Р), фенилаланин (F), триптофан (W), метионин (М), цистеин (С) и глицин (G); F, W и Y; С, S и Т. Коды аминокислот. Аминокислоты, которые составляют антитела против двойного интегрина настоящего изобретения,- 15007617 часто имеют аббревиатуру. Обозначения аминокислот могут быть указаны в виде обозначения аминокислоты ее однобуквенным кодом, ее трехбуквенным кодом, названием или трехнуклеотидным кодоном(ами), как хорошо понятно из данной области техники (см. Alberts, В., et al., Molecular Biology of The Антитело против двойного интегрина настоящего изобретения может включать одну или более аминокислотных замен, делеций или добавок либо за счет природных мутаций или за счет манипуляций,проведенных человеком, как здесь описано. Конечно, число аминокислотных замен, которые может сделать специалист в данной области техники, должно зависеть от многих факторов, включая описанные выше. Вообще говоря, число аминокислотных замен, вставок или делеций для любого данного антитела против двойного интегрина должно составлять не более 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, быть таким как 130 или любого диапазона или величины в данном пределе, как здесь описано. Аминокислоты в антителе против двойного интегрина настоящего изобретения, которые существенны для функционирования, могут быть идентифицированы с помощью способов, известных в данной области техники, таких как сайт-направленный мутагенез или аланин-сканирующий мутагенез (например, Ausubel выше, главы 8, 15; Cunningham and Wells, Science 244:1081-1085 (1989. В последней методике вводятся одиночные мутации по аланину для каждого его остатка в молекуле. Полученные мутантные молекулы затем тестируют на биологическую активность, такую как, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одна активность, нейтрализующая двойной интегрин. С помощью структурного анализа,- 16007617 такого как кристаллизация, ядерный магнитный резонанс или фотоаффинное промечивание, могут быть также идентифицированы места, которые являются критическими для связывания антитела (Smith, et al.,J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992) и de Vos, et al., Science 255:306-312 (1992. Антитела против двойного интегрина настоящего изобретения могут включать, но не ограничиваются этим, по меньшей мере одну часть, последовательность или сочетание, выбранные из от 5 до всех смежных аминокислот, по меньшей мере одной из SEQ ID No:1, 2, 3, 4, 5, 6. Антитело против двойного интегрина может дополнительно необязательно включать полипептид по меньшей мере из 70-100% смежных аминокислот, по меньшей мере из одной из SEQ ID No:7, 8. В одном осуществлении последовательность аминокислот цепи иммуноглобулина или ее часть (например, вариабельная область, CDR) имеет 70-100% идентичность (например, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76,77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 или любой диапазон или величину в данных пределах) по отношению к аминокислотной последовательности соответствующей цепи по меньшей мере одной из SEQ ID No:7, 8. Например, аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи можно сравнить с последовательностью SEQ ID No:8, или аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи можно сравнить с SEQ ID No:7. Предпочтительно, чтобы 70-100% идентичность аминокислот (т.е. 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 или любой диапазон или величина в данных пределах) определяли с применением подходящего компьютерного алгоритма,как известно в данной области техники. Примеры последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепей предлагаются вSEQ ID No:7, 8. Антитела настоящего изобретения или их конкретные варианты могут включать любое число смежных остатков аминокислот от антитела настоящего изобретения, где данное число выбрано из группы целых чисел, состоящей из 10-100% от числа смежных остатков в антителе против двойного интегрина. Необязательно данная последовательность смежных аминокислот составляет по меньшей мере приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210,220, 230, 240, 250 или более аминокислот в длину или любой диапазон или величину в данных пределах. Более того, число таких последовательностей может быть любым целым числом, выбранным из группы,состоящей от 1 до 20, таким как по меньшей мере 2, 3, 4 или 5. Как понятно специалистам в данной области техники, настоящее изобретение включает по меньшей мере одно биологически активное антитело настоящего изобретения. Биологически активные антитела имеют специфическую активность по меньшей мере 20, 30 или 40%, предпочтительно по меньшей мере 50, 60 или 70% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 80, 90 или 95-100%, от природного (несинтетического) эндогенного или близкого к нему и известного антитела. Способы тестирования и количественного измерения ферментативной активности и субстратной специфичности хорошо известны специалистам в данной области техники. В другом варианте изобретение относится к антителам человека и антигенсвязывающим фрагментам, как здесь описано, которые модифицированы путем ковалентного присоединения органической части. Такая модификация может давать антитело или антигенсвязывающий фрагмент с улучшенными фармакокинетическими свойствами (например, увеличенным полупериодом жизни в сыворотке in vivo). Органическая часть может быть линейной или разветвленной гидрофильной полимерной группой, группой жирной кислоты или группой сложного эфира жирной кислоты. В конкретных осуществлениях гидрофильная полимерная группа может иметь молекулярную массу от приблизительно 800 до приблизительно 120000 Да и может представлять собой полиалкановый гликоль (например, полиэтиленгликоль (ПЭГ),полипропиленгликоль (ППГ), углеводный полимер, аминокислотный полимер или поливинилпиролидон,а группа жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты может включать от приблизительно восьми до приблизительно сорока атомов углерода. Модифицированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты изобретения могут включать одну или более органических частей, которые ковалентно, прямо или непрямо, связаны с антителом. Каждая органическая часть, которая связана с антителом или антигенсвязывающим фрагментом изобретения может независимо представлять собой гидрофильную полимерную группу, группу жирной кислоты или группу сложного эфира жирной кислоты. Применяемый здесь термин "жирная кислота" охватывает монокарбоновые кислоты и дикарбоновые кислоты. "Гидрофильная полимерная группа" в качестве применяемого здесь термина относится к органическому полимеру, который лучше растворим в воде, чем в октане. Например, полилизин является более растворимым в воде, чем в октане. Таким образом, антитело, модифицированное путем ковалентного присоединения полилизина, охватывается изобретением. Гидрофильные полимеры, подходящие для модификации антител изобретения, могут быть линейными или разветвленными и включают, например, полиалкановые гликоли (например, ПЭГ, монометоксиполиэтиленгликоль (мПЭГ), ППГ и тому подобное), углеводы (например, декстран, целлюлозу, олигосахариды, полисахариды и т.п.), полимеры гидрофильных аминокислот (например, полилизин, полиаргинин,полиаспартат и т.п.), полиалкановые оксиды (например, полиэтиленоксид, полипропиленоксид и т.п.) и поливинилпиролидон. Предпочтительно, чтобы гидрофильный полимер, который модифицирует антитело изобретения, имел молекулярную массу от приблизительно 800 до приблизительно 150000 Да в виде отдельной молекулярной структуры. Например, могут быть использованы ПЭГ 5000 и ПЭГ 2000, где под- 17007617 строчный индекс представляет собой среднюю молекулярную массу полимера в Дальтонах. Гидрофильная полимерная группа может быть замещена от одной до приблизительно шести алкильными группами,группами жирных кислот или сложных эфиров жирных кислот. Гидрофильные полимеры, которые замещают группой жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты, могут быть получены с помощью применения подходящих способов. Например, полимер, включающий аминогруппу, может быть присоединен к карбоксильной группе жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты, а активированная карбоксильная группа (например, активированная N,N-карбонилдиимидазолом) жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты может быть присоединена к гидроксильной группе полимера. Жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот, которые подходят для модификации антител изобретения, могут быть насыщенными или могут содержать одну или более ненасыщенных единиц. Жирные кислоты, которые подходят для модификации антител изобретения, включают, например, ндодеканоат (C12, лаурат), н-тетрадеканоат (С 14, миристат), н-октадеканоат (C18, стеарат), н-эйкозаноат(С 20, арахидат), н-докозаноат (С 22, бегенат), н-триаконтаноат (С 30), н-тетраконтаноат (С 40), цис-9 октадеканоат (C18, олеат), все цис-5,8,11,14-эйкозатетраеноат (С 20, арахидонат), октандиовую кислоту,тетрадекандиовую кислоту, октадекандиовую кислоту, докозандиовую кислоту и тому подобное. Подходящие сложные эфиры жирных кислот включают моноэфиры дикарбоновых кислот, которые включают линейную или разветвленную низшую алкильную группу. Низшая алкильная группа может включать от одного до приблизительно двенадцати, предпочтительно от одного до приблизительно шести, углеродных атомов. Модифицированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты человека могут быть получены с применением подходящих способов, таких как путем взаимодействия с одним или более модифицирующих агентов. "Модифицирующий агент" в качестве применяемого здесь термина относится к подходящей органической группе (например, гидрофильному полимеру, жирной кислоте, сложному эфиру жирной кислоты), которая включает активирующую группу. "Активирующая группа" представляет собой химическую часть или функциональную группу, которая может в подходящих условиях взаимодействовать со второй химической группой, образуя в результате этого ковалентную связь между модифицирующим агентом и второй химической группой. Например, взаимодействующие с амином активирующие группы включают электрофильные группы, такие как тозилат, мезилат, гало (хлоро, бромо, фторо,иодо), N-гидроксисукцинимидиловые сложные эфиры (NHS) и т.п. Активирующие группы, которые взаимодействуют с тиолами, включают, например малеимид, иодацетил, акрилолил, дисульфиды пиридила, тиол 5-тиол-2-нитробензойной кислоты (TNB-тиол) и тому подобное. Альдегидная функциональная группа может быть присоединена к амин- или гидразинсодержащим молекулам и азидная группа может вступать в реакцию с группой, содержащей трехвалентный фосфор, с образованием фосфорамидатных или фосфоримидных связей. Подходящие способы для введения активирующих групп в молекулы известны в данной области техники (см., например, Hermanson, G.Т., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996. Активирующая группа может быть прямо связана с органической группой (например, с гидрофильным полимером, жирной кислотой, сложным эфиром жирной кислоты) или через линкерную часть, например, двухвалентную группу С 1-С 12, где один или более углеродных атомов могут быть замещены гетероатомом, таким как кислород, азот или сера. Подходящие линкерные части включают, например, тетраэтиленгликоль, -(СН 2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- и -СН 2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-. Модифицирующие агенты, которые включают линкерную часть, могут быть получены, например, путем взаимодействия моно-Вос-алкилдиамина (например, моно-Восэтилендиамина, моно-Вос-диаминогексана) с жирной кислотой в присутствии 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) с образованием амидной связи между свободным амином и карбоксильной группой жирной кислоты. Защитная группа Boc может быть удалена из продукта путем обработки трифторуксусной кислотой (ТФУ) для экспонирования первичного амина, который можно затем присоединить к другому карбоксилату, как описано, или который можно ввести в реакцию с малеиновым ангидридом и полученный продукт циклизовать для получения активированного малеимидного производного жирной кислоты (cм., например, Thompson, et al., WO 92/16221, полные указания которого включены здесь в качестве ссылки). Модифицированные антитела изобретения могут быть получены путем взаимодействия антитела человека или антигенсвязывающего фрагмента с модифицирующим агентом. Например, органические части могут быть связаны с антителом сайт-неспецифическим способом с помощью применения взаимодействующего с амином модифицирующего агента, например, сложного эфира NHS или ПЭГ. Модифицированные антитела человека или антигенсвязывающие фрагменты можно также получать путем восстановления дисульфидных связей (например, внутрицепочечных дисульфидных связей) антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Восстановленное антитело или антигенсвязывающий фрагмент можно затем ввести в реакцию с реагирующим с тиолом модифицирующим агентом для получения модифицированного антитела изобретения. Модифицированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты человека, включающие органическую часть, которая связана со специфическими сайтами антитела настоящего изобретения, могут быть получены с применением подходящих способов, таких как обратный протео- 18007617 лиз (Fish et al., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen et al., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994);Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996). Антиидиотипические антитела к композициям антител против двойного интегрина. В дополнение к моноклональным или химерным антителам против двойного интегрина настоящее изобретение также направлено на антиидиотипическое (анти-Id) антитело, специфичное для таких антител изобретения. Анти-Id антитело представляет собой антитело, которое узнает уникальные детерминанты, обычно ассоциированные с антигенсвязывающей областью другого антитела. Анти-Id антитело может быть получено путем иммунизации животного того же вида и генотипа (например, линии мышей) в качестве источника Id антитела антителом или его областью, содержащей CDR. Иммунизированное животное должно узнавать и отвечать на идиотипические детерминанты антитела, применяемого для иммунизации, и продуцировать анти-Id антитело. Анти-Id антитело может быть также использовано в качестве "иммуногена" для индукции иммунного ответа у еще одного животного, продуцирующего так называемое анти-анти-Id-антитело. Композиции антител против двойного интегрина. В настоящем изобретении также предлагается по меньшей мере одна композиция антитела против двойного интегрина, включающая по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть или более антител против двойного интегрина, как описано здесь и/или как известно в данной области техники, которые предлагаются в композиции, смеси или форме, не существующей в природе. Такие композиции включают композиции,не существующие в природе, включающие по меньшей мере один или два полноразмерных антитела,усеченных с С- и/или N-конца варианта, домена, фрагмента или конкретных варианта аминокислотной последовательности антитела против двойного интегрина, выбранной из группы, состоящей из 70-100% смежных аминокислот SEQ ID No:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или их конкретных фрагментов, доменов или вариантов. Предпочтительные композиции антител против двойного интегрина включают по меньшей мере один или два полноразмерных антитела, фрагмента, домена или варианта в виде по меньшей мере однойCDR- или LBR-содержащих частей последовательности антитела против двойного интегрина из 70-100%SEQ ID No:1, 2, 3, 4, 5, 6 или их конкретных фрагментов, доменов или вариантов. Дополнительные предпочтительные композиции включают 40-99% по меньшей мере из одной из 70-100% SEQ ID No:1, 2, 3, 4,5, 6 или их конкретных фрагментов, доменов или вариантов. Проценты для таких композиций определяют по массе, объему, концентрации, молярности или моляльности в виде жидких или сухих растворов,смесей, суспензии, эмульсий или коллоидов, как известно в данной области техники или описано здесь. Композиции антител против двойного интегрина настоящего изобретения могут дополнительно включать по меньшей мере одно или любое подходящее и эффективное количество композиции или фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина для клетки, ткани, органа, животного или больного, нуждающихся в такой модуляции, обработке или терапии, необязательно дополнительно включающей по меньшей мере один, выбранный по меньшей мере из одного антагониста TNF (например, но не ограничиваясь этим, антитела к TNF или его фрагмента, растворимого рецептора TNF или его фрагмента, его гибридного белка или низкомолекулярного антагониста TNF), антиревматического агента (например, метотрексата, ауранофина, ауротиоглюкозы, азатиоприна, этанерсепта, золото(3)-тиомалата натрия, сульфата гидроксихлорохина, лефлуномида, сульфазалцина), релаксанта мышц, наркотика, нестероидного противовоспалительного лекарства (NSAID),анальгетика, анестетика, седативного агента, местного анестетика, блокатора нервно-мышечной передачи, антимикробного агента (например, аминогликозида, противогрибкового, антипаразитарного, противовирусного агентов, карбапенема, цефалоспорина, флурорхинолона, макролида, пенициллина, сульфонамида, тетрациклина, других антимикробных средств), антипсориазного агента, кортикостероида, анаболического стероида, агента, связанного с лечением диабета, минеральных, питательных добавок, тиреоидного агента, витамина, гормона, регулирующего кальциевый обмен, противодиарейного агента,откашливающего агента, противорвотного агента, противоязвенного агента, слабительного, антикоагулянта, эритропоэтина (например, эпоэтина альфа), филграстима (например G-CSF, Neupogen), сарграмостима (GM-CSF, Leukine), иммунизации, иммуноглобулина, иммуносупрессивного агента (например базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба), гормона роста, лекарства гормонозаместительной терапии,модулятора эстрогенных рецепторов, мидриатического агента, циклоплегического агента, алкилирующего агента, антиметаболитного агента, ингибитора митозов, радиофармацевтического агента, антидепрессанта, противоманиакального агента, противопсихотического агента, анксиолитика, гипнотического агента, симпатомиметика, возбуждающего средства, донепезила, такрина, лекарства против астмы, агониста бета-адренорецепторов, вдыхаемого стероида, ингибитора лейкотриенов, метилксантина, кромолина, адреналина или его аналога, дорназы альфа (Pulmozyme), цитокина или антагониста или антитела к цитокину. Неограничивающие примеры таких цитокинов включают, но не ограничиваются этим, любой из с IL-1 до IL-23, IL-6, противоопухолевые антитела, химиотерапевтические агенты или лучевая терапия. Подходящие дозировки хорошо известны в данной области техники. См., например, Wells et al., eds.,- 19007617Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), каждая из ссылок полностью включена здесь в качестве ссылки. Такие противораковые и антиинфекционные агенты могут также включать молекулы токсинов, которые ассоциированы, связаны, совместно составлены или совместно введены по меньшей мере с одним антителом настоящего изобретения. Токсин может необязательно действовать, селективно уничтожая патологическую клетку или ткань. Патологическая клетка может быть раковой или другой клеткой. Такие токсины могут быть, но не ограничиваются этим, очищены или представлять собой рекомбинантный токсин или фрагмент токсина, включающий по меньшей мере один функциональный цитотоксический домен токсина, например, он выбран по меньшей мере из одного из рицина, дифтерийного токсина, токсина змеиного яда или бактериального токсина. Термин токсин также включает как эндотоксины, так и экзотоксины, продуцируемые любыми существующими в природе, мутантными или рекомбинантными бактериями или вирусами, которые могут вызывать любое патологическое состояние у человека и других животных, включая токсический шок, который может приводить к смерти. Такие токсины могут включать, но не ограничиваются этим, термолабильный энтеротоксин (LT) энтеротоксичной Е. coli, термостабильный энтеротоксин (ST), цитотоксин Shigella, энтеротоксины Aeromonas, токсин-1 синдрома токсического шока (TSST-1), энтеротоксин A (SEA), В (SEB) или С (SEC) стафилококка, энтеротоксины стрептококка и т.п. Такие бактерии включают, но не ограничиваются этим, штаммы видов энтеротоксичной Е. coli (ЕТЕС), энтерогеморрагической Е. coli (например, штаммы серотипа 0157:Н 7), виды Staphylococcus (например, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), виды Shigella (например, ShigellaCo., Rahway, N.J., 1992; Wood et al., FEMS Microbiology Immunology, 76:121-134 (1991); Marrack et al.,Science, 248:705-711 (1990), содержание ссылок которых полностью включено здесь в качестве ссылок. Соединения, композиции или сочетания антител против двойного интегрина могут дополнительно включать по меньшей мере одно из любых подходящих вспомогательных средств, таких как, но не ограничиваясь этим, разбавитель, связующее средство, стабилизатор, буферы, соли, липофильные растворители, консерванты, адъювант или т.п. Предпочтительными являются фармацевтически приемлемые вспомогательные средства. Нелимитирующие примеры и способы получения таких стерильных растворов хорошо известны в данной области техники, в таких работах, как, но не ограничиваясь этим,Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Фармацевтически приемлемые носители обычно могут быть выбраны так, чтобы они подходили для способа введения, растворимости и/или стабильности композиции антитела против двойного интегрина,фрагмента или варианта, как хорошо известно в данной области техники или описано здесь. Фармацевтические наполнители и добавки, применяемые в настоящей композиции, включают, но не ограничиваются этим, белки, пептиды, аминокислоты, липиды и углеводы (например, сахара, включая моносахариды, ди-, три-, тетра- и олигосахариды; производные сахаров, такие как альдиты, альдоновые кислоты, этерифицированные сахара и тому подобное; и полисахариды или полимеры сахаров), которые могут присутствовать по одиночке или в сочетании, включая по одиночке или в сочетании 1-99,99% по массе или объему. Примеры белковых наполнителей включают сывороточный альбумин, такой как сывороточный альбумин человека (HSA), рекомбинантный альбумин человека (rHA), желатин, казеин и т.п. Представители аминокислотных/антительных компонентов, которые могут также вносить вклад в буферную емкость, включают аланин, глицин, аргинин, бетаин, гистидин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, цистеин, лизин, лейцин, изолейцин, валин, метионин, фенилаланин, аспартам и тому подобное. Одной предпочтительной аминокислотой является глицин. Углеводные наполнители, подходящие для применения в изобретении, включают, например, моносахариды, такие как фруктоза, мальтоза, галактоза, глюкоза, D-манноза, сорбоза и тому подобное; дисахариды, такие как лактоза, сахароза, трегалоза, целлобиоза и тому подобное; полисахариды, такие как раффиноза, мелезитоза, мальтодекстрины, декстраны, крахмалы и тому подобное; и альдиты, такие как маннит, ксилит, мальтит, лактит, ксилит, сорбит (глюцит), миоинозит и тому подобное. Предпочтительными углеводными наполнителями для применения в настоящем изобретении являются маннит, трегалоза и раффиноза. Композиции антител против двойного интегрина могут также включать буфер или агент, доводящий рН; обычно буфер является солью, полученной из органической кислоты или основания. Примерами- 20007617 буферов являются буферы, включающие соли органических кислот, такие как соли лимонной кислоты,аскорбиновой кислоты, глюконовой кислоты, карбоновой кислоты, винной кислоты, янтарной кислоты,уксусной кислоты или фталевой кислоты; Трис, триметамина гидрохлорид, или фосфатные буферы. Предпочтительными буферами для применения в настоящем изобретении являются соли органических кислот, такие как цитрат. Дополнительно композиции антител против двойного интегрина изобретения могут включать полимерные наполнители/добавки, такие как поливинилпирролидоны, фиколлы (полимерный сахар), декстраты (например, циклодекстрины, такие как 2-гидроксипропилциклодекстрин), полиэтиленгликоли,отдушки, противомикробные агенты, подсластители, антиоксиданты, антистатические агенты, поверхностно-активные вещества (например, полисорбаты, такие как "TWEEN 20" и "TWEEN 80"), липиды (например, фосфолипиды, жирные кислоты), стероиды (например, холестерин) и хелатирующие агенты (например ЭДТА). Данные и дополнительные известные фармацевтические наполнители и/или добавки, подходящие для применения в композициях антитела против двойного интегрина, его части или варианта в соответствии с настоящим изобретением, известны в данной области техники, например, как перечислено вDesk Reference", 52nd ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), достижения которых полностью включены здесь в качестве ссылки. Предпочтительными веществами носителя или наполнителя являются углеводы (например, сахариды и альдиты) и буферы (например, цитраты) или полимерные агенты. Составы. Как отмечалось выше, в изобретении предлагаются стабильные составы, которые предпочтительно представляют собой физиологический раствор или выбранную соль в фосфатном буфере, а также растворы консервантов и составы, содержащие консервант, а также составы консервантов для множественного применения, подходящие для фармацевтического или ветеринарного применения, включающие по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина в фармацевтически приемлемом составе. Составы консервантов включают по меньшей мере один известный консервант или необязательно выбранный из группы, состоящей по меньшей мере из одного фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, ртутьнитритфенила, феноксиэтанола, формальдегида, хлорбутанола, хлористого магния (например, гексагидрата), алкила парааминобензойной кислоты (например, метила, этила,пропила, бутила и т.п.), хлорида бензалкония, хлорида бензэтония, дегидроацетата натрия и тимерозала или их смесей в водном разбавителе. Может быть использована любая концентрация или смесь, как известно в данной области техники, такая как 0,001-5% или любой диапазон или величина в данных пределах, такая как, но не ограничиваясь этим, 0,001, 0,003, 0,005, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,05, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3,0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9,3,0, 3,1, 3,2, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,3, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9 или любой диапазон или величина в данных пределах. Неоганичивающие примеры включают, без консерванта, 0,1-2% м-крезол (например,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0%), 0,1-3% бензиловый спирт (например, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5%), 0,0010,5% тимерозал (например, 0,005, 0,01), 0,001-2,0% фенол (например, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0%),0,0005-1,0% алкил(ы) парааминобензойной кислоты (например, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005,0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, 0,9, 1,0%) и т.п. Как отмечалось выше, в изобретении предлагается предмет производства, включающий упаковочный материал и по меньшей мере один флакон, включающий раствор по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина с описанными выше буферами и/или консервантами, необязательно в водном разбавителе, где указанный упаковочный материал включает этикетку, которая указывает, что такой раствор может храниться в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 ч или более. Изобретение дополнительно включает предмет производства, включающий упаковочный материал, первый флакон, включающий лиофилизованное по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина, и второй флакон, включающий водный разбавитель из описанного выше буфера или консерванта, где указанный упаковочный материал включает этикетку, в которой дается инструкция больному как провести реконституцию по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина в водном разбавителе для образования раствора, который может храниться свыше двадцати четырех часов или более. По меньшей мере одно антитело против двойного интегрина, применяемое в соответствии с настоящим изобретением, может быть получено с помощью рекомбинантных способов, включая получение клеток млекопитающих или трансгенных животных, или оно может быть очищено из других биологических источников, как здесь описано или известно в данной области техники. Диапазон по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина в продукте настоящего изобретения включает количества, получаемые при реконституции, если во влажной/сухой системе оперируют концентрациями от приблизительно 1,0 мкг/мл до приблизительно 1000 мг/мл, хотя более низкие или более высокие концентрации возможны, и они зависят от носителя, предназначаемого для доставки,например, составы растворов должны различаться в случае трансдермального пластыря, легочного,трансмукозного или осмотического способов или способа доставки с помощью микропомпы. Предпочтительно, чтобы водный разбавитель необязательно дополнительно включал фармацевти- 21007617 чески приемлемый консервант. Предпочтительные консерванты включают те, которые выбраны из группы, состоящей из фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, алкила парааминобензойной кислоты (метила, этила, пропила, бутила и т.п.), хлорида бензалкония, хлорида бензэтония, дегидроацетата натрия и тимерозала или их смесей. Концентрация консерванта, применяемого в составе, представляет собой концентрацию, достаточную для оказания противомикробного эффекта. Такие концентрации зависят от выбранного консерванта и легко определяются специалистом в данной области техники. Другие наполнители, например агенты, определяющие изотоничность, буферы, антиоксиданты,усилители консервантов, могут быть необязательно и предпочтительно добавлены к разбавителю. Агент,определяющий изотоничность, такой как глицерин, обычно применяют в известных концентрациях. Для обеспечения улучшенного контроля рН предпочтительно добавляют физиологически толерантный буфер. Составы могут иметь широкий диапазон рН, такой как от приблизительно рН 4 до приблизительно рН 10, и предпочтительны диапазоны от приблизительно рН 5 до приблизительно рН 9, а наиболее предпочтителен диапазон от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0. Предпочтительно, чтобы составы настоящего изобретения имели рН между приблизительно 6,8 и приблизительно 7,8. Предпочтительные буферы включают фосфатные буферы, наиболее предпочтительно фосфат натрия, особенно забуференный фосфатным буфером физиологический раствор (ЗФР). Для снижения агрегации к составам или композициям могут необязательно добавляться другие добавки, такие как фармацевтически приемлемые солюбилизаторы, подобные Твин 20 (полиоксиэтилен(20) сорбитанмонолаурат), Твин 40 (полиоксиэтилен (20) сорбитанмонопальмитат), Твин 80 (полиоксиэтилен (20) сорбитанмоноолеат), Pluronic F68 (блок-сополимеры полиоксиэтиленполиоксипропилена) и ПЭГ (полиэтиленгликоль) или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат 20 или 80, или полоксамер 184 или 188, Pluronic полилы, другие блок-сополимеры и хелаторы, такие как ЭДТА и EGTA. Данные добавки особенно полезны, когда для введения состава применяют помпу или пластиковый контейнер. Присутствие фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества уменьшает склонность белка к агрегации. Составы настоящего изобретения могут быть получены с помощью способа, который включает смешивание по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина и консерванта, выбранного из группы, состоящей из фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, алкила парааминобензойной кислоты (метила, этила, пропила, бутила и т.п.), хлорида бензалкония, хлорида бензэтония, дегидроацетата натрия и тимерозала или их смесей в водном разбавителе. Смешивание по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина и консерванта в водном разбавителе выполняется с применением общепринятых методик растворения и смешивания. Для получения подходящего состава, например, измеренное количество по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина в буферном растворе объединяют с желаемым консервантом в забуференном растворе в количествах,достаточных для обеспечения желаемых концентраций белка и консерванта. Варианты данного процесса должны быть выбраны специалистом в данной области техники. Например, факторами, которые могут быть оптимизированы в отношении применяемых концентрации и способов введения, являются порядок добавления компонентов, применение или не применение дополнительных добавок, температура и рН,при которых получают состав. Заявленные составы могут предлагаться больным в виде чистых растворов или в виде двух флаконов, включающих флакон с лиофилизованным по меньшей мере одним антителом против двойного интегрина, реконституцию которого проводят с помощью второго флакона, содержащего воду, консервант и/или наполнители, предпочтительно фосфатный буфер и/или физиологический раствор и выбранную соль в водном разбавителе. Либо один флакон с раствором, либо два флакона, при необходимости реконституции, могут быть использованы повторно много раз и их может хватать на один или множество циклов лечения больного и, таким образом, может быть обеспечен более удобный режим лечения, чем имеющийся в настоящее время. Заявленные в настоящем изобретении предметы производства пригодны для введения в течение периода от немедленного до 24 ч или более. Соответственно, заявленные в настоящем изобретении предметы производства создают существенные преимущества для больного. Составы изобретения можно необязательно безопасно хранить при температуре от приблизительно 2 до приблизительно 40 С и в них сохраняется биологическая активность белка в течение продолжительного периода времени, что позволяет, таким образом, указывать на упаковочной этикетке, что раствор можно хранить и/или применять в течение 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 или 96 ч или более. Если применяется разбавитель с консервантом, такая этикетка может включать применение до 1-12 месяцев, полугода, полутора лет и/или двух лет. Растворы по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина в изобретении могут быть получены с помощью способа, который включает смешивание по меньшей мере одного антитела в водном разбавителе. Смешивание выполняют с применением общепринятых методик растворения и смешивания. Для получения подходящего разбавителя, например, отмеренное количество по меньшей мере одного антитела в воде или буфере объединяют в количествах, достаточных для обеспечения желаемых концентраций белка и необязательно консерванта или буфера. Варианты данного процесса должны быть- 22007617 уточнены специалистом в данной области техники. Например, всеми факторами, которые могут быть оптимизированы в отношении применяемых концентрации и способов введения, являются порядок добавления компонентов, применение или не применение дополнительных добавок, температура и рН, при которых получают состав. Пациенты могут получать заявленные продукты в виде прозрачных растворов или двойных пузырьков, состоящих из пузырька с лиофилизированным по меньшей мере одним антителом против двойного интегрина, которое восстанавливают с помощью второго пузырька, содержащего водный разбавитель. Либо единый пузырек с раствором, либо двойной пузырек, требующий восстановления, могут быть многократно использованы и могут быть достаточными для единственного или многократных циклов лечения пациента и, таким образом, обеспечивают более удобную схему лечения, чем известные из уровня техники. Заявленные продукты могут быть доставлены пациентам опосредованно путем поставок в аптеки,клиники или иные подобные учреждения и организации прозрачных растворов или двойных пузырьков,состоящих из пузырька с лиофилизированным по меньшей мере одним антителом против двойного интегрина, которое восстанавливают с помощью второго пузырька, содержащего водный разбавитель. Объем прозрачного раствора может в данном случае составлять один литр или даже больше, что подразумевает большой резервуар, из которого однократно или многократно могут быть получены меньшие порции раствора по меньшей мере одного антитела для переноса в меньшие сосуды и распространения аптекой или клиникой среди своих потребителей и/или пациентов. Известные устройства, содержащие такие однопузырьковые системы включают инъекционные устройства для доставки раствора, такие как BD Pens, BD Autojector, Humaject NovoPen, B-DPen,AutoPen и OptiPen, GenotropinPen, Genotronorm Pen, Humatro Pen, Reco-Pen, Roferon Pen, Biojector, iject, J-tip Needle-Free Injector, Intraject, Medi-Ject, например, изготавливаемые или разработанные Becton Dickensen (Franklin Lakes, N.J., www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Switzerland, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oreg. (www.bioject.com); National Medical Products, WestonMedical (Peterborough, UK, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, Minn.,www.mediject.com). Известные устройства, содержащие двухпузырьковые системы, включают инъекционные системы для восстановления лиофилизированного лекарства в картридже для доставки восстановленного раствора, такие как HumatroPen. Заявляемые здесь продукты включают упаковочный материал. Упаковочный материал несет, помимо информации, требуемой регулирующими учреждениями, условия, при которых можно использовать продукт. Упаковочный материал по настоящему изобретению содержит инструкции для пациента по восстановлению по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина в водном разбавителе для получения раствора и по применению раствора в течение 2-24 ч или более для двухпузырькового,влажно-сухого продукта. Для однопузырькового продукта-раствора, этикетка содержит указание, что такой раствор может быть использован в течение 2-24 ч или более. Заявляемые здесь продукты применимы для использования в качестве фармацевтического продукта для человека. Композиции по настоящему изобретению могут быть приготовлены в соответствии со способом,который предусматривает смешивание по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина и выбранного буфера, предпочтительно фосфатного буфера, содержащего раствор соли или выбранную соль. Смешивание по меньшей мере одного антитела и буфера в водном разбавителе и буфера в водном разбавителе проводят с использованием традиционных методик растворения и смешивания. Для получения подходящей композиции, например, отмеренное количество по меньшей мере одного антитела в воде или буфере объединяют с желаемым буферным агентом в воде в количествах, достаточных для получения желаемых концентраций белка и буфера. Вариации данного способа будут очевидны специалисту в данной области. Например, порядок добавления компонентов, применение дополнительных добавок,температура и рН, при которых готовится композиция, представляют собой факторы, которые могут быть оптимизированы для применяемых концентрации и средства введения. Заявленные стабилизированные или консервированные составы могут предлагаться больным в качестве чистых растворов или в виде двух флаконов, включающих флакон с лиофилизованным по меньшей мере одним антителом против двойного интегрина, реконституцию которого проводят с помощью второго флакона, содержащего консервант или буфер и наполнители в водном разбавителе. Либо один флакон с раствором, либо два флакона при необходимости реконституции, могут быть использованы повторно много раз и их может хватать на один или множество циклов лечения больного и, таким образом, может быть обеспечен более удобный режим лечения, чем имеющийся в настоящее время. По меньшей мере одно антитело против двойного интегрина, либо в составах со стабилизатором или консервантом, либо в описанных здесь растворах, может быть введено больному в соответствии с настоящим изобретением с помощью различных способов доставки, включая п/к или в/м инъекции; чрескожный, легочный, чресслизистый способы, осмотическую помпу, картридж, микропомпу или другие способы, оцененные специалистами, как хорошо известно в данной области техники. Терапевтическое применение. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере од- 23007617 ного связанного с двойным интегрином заболевания в клетке, ткани, органе у животного или больного,как известно в данной области техники или как здесь описано, с применением по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина настоящего изобретения. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере одного связанного с двойным интегрином заболевания в клетке, ткани, органе у животного или больного,включая, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одно из ожирения, заболевания, связанного с иммунной системой, сердечно-сосудистого заболевания, инфекционного заболевания, злокачественного заболевания или неврологического заболевания. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере одного заболевания, связанного с иммунной системой, в клетке, ткани, органе у животного или больного,включая, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одно из ревматоидного артрита, юношеского ревматоидного артрита, юношеского ревматоидного артрита системного характера, псориатического артрита, анкилозного спондилита, язвы желудка, серонегативных артропатий, остеоартрита, воспалительного заболевания кишечника, язвенного колита, системной красной волчанки, антифосфолипидного синдрома, иридоциклита/увеита/ретробульбарного неврита, идиопатического фиброза легких, системного васкулита/грануломатоза Вегенера, саркоидоза, орхита/методик обращения вазэктомии, аллергических/атопических заболеваний, астмы, аллергического ринита, экземы, аллергического контактного дерматита, аллергического конъюнктивита, пульмонита при гиперчувствительности трансплантатов, отторжения трансплантированных органов, болезни "трансплантат против хозяина", синдрома системного воспалительного ответа, септического синдрома, грамположительного сепсиса, грамотрицательного сепсиса, сепсиса с отсутствием роста культуры, грибкового сепсиса, лихорадки с нейтропенией, уросепсиса,менингококкемии, травмы/геморрагии, ожогов, экспозиции с ионизирующей радиацией, острого панкреатита, синдрома респираторного дистресса взрослых, индуцированного алкоголем гепатита, хронических воспалительных патологий, патологии Крона, серповидноклеточной анемии, нефроза, атопических заболеваний, реакций гиперчувствительности, сенной лихорадки, перманентного ринита, конъюнктивита, эндометриоза, крапивницы, системной анафилаксии, дерматита, пернициозной анемии, гемолитического заболевания, тромбоцитопении, отторжения трансплантата любого органа или ткани, отторжения трансплантированной почки, отторжения трансплантата сердца, отторжения трансплантата печени, отторжения трансплантата поджелудочной железы, отторжения трансплантата легкого, отторжения трансплантата костного мозга (ВМТ), отторжения аллотрансплантата кожи, отторжения трансплантата хряща,отторжения трансплантата кости, отторжения трансплантата тонкой кишки, отторжения трансплантата фетального тимуса, отторжения трансплантата паращитовидной железы, отторжения ксенотрансплантата любого органа или ткани, отторжения аллотрансплантата, реакций гиперчувствительности против рецептора, болезни Грейвса, болезни Рейно, инсулиннезависимого диабета типа В, миастении Гравис, опосредуемой антителом цитотоксичности, реакций гиперчувствительности типа III, синдрома POEMS (полинейропатии, органомегалии, эндокринопатии, моноклональной гаммопатии и синдрома изменений кожи), полинейропатии, органомегалии, эндокринопатии, моноклональной гаммопатии, синдрома изменений кожи, пузырчатки, склеродермии, смешанного заболевания соединительной ткани, идиопатической болезни Аддисона, сахарного диабета, хронически активного гепатита, первичного билиарного цирроза,витилиго, васкулита, синдрома постинфарктной кардиотомии, гиперчувствительности типа IV, гранулом,вызываемых внутриклеточными организмами, гиперчувствительности к лекарству, метаболической/идиопатической болезни Вильсона, гемахроматоза, недостаточности альфа-1-антитрипсина, диабетической ретинопатии, тиреоидита Хашимото, остеопороза, оценки гипоталамо-гипофизарнонадпочечниковой оси, тиреоидита, энцефаломиелита, кахексии, кистозного фиброза, неонатального хронического заболевания легкого, хронического обструктивного заболевания легкого (COPD), семейного гематофагоцитарного лимфогистиоцитоза, дерматологических состояний, псориаза, облысения, нефротического синдрома, нефрита, гломерулярного нефрита, острой почечной недостаточности, гемодиализа,уремии, токсичности, преэклампсии, терапии okt3, терапии анти-сd3, цитокиновой терапии, химиотерапии, лучевой терапии (например, включая, но не ограничиваясь этим, тоастению, анемию, кахексию и тому подобное), хронической интоксикации салицилатом и тому подобное. См., например, MerckManual, 12th-17th Editions, MerckCompany, Rahway, NJ, (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., Second Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000), каждое из которых включено полностью в качестве ссылки. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере одного сердечно-сосудистого заболевания в клетке, ткани, органе у животного или больного, включая, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одно из синдрома сердечной потери сознания, инфаркта миокарда, застойной недостаточности сердца, удара, ишемического удара, геморрагии, артериосклероза, атеросклероза, рестеноза, диабетического артериосклеротического заболевания, гипертензии, артериальной гипертензии, реноваскулярной гипертензии, обморока, шока, сифилиса сердечно-сосудистой системы,сердечной недостаточности, легочного сердца, первичной легочной гипертензии, сердечной аритмии,эктопических сокращений предсердий, трепетания предсердий, фибрилляции предсердий (постоянной или пароксизмальной), постперфузионного синдрома, воспалительного ответа на сердечно-легочный- 24007617 шунт, хаотической или многоочаговой предсердной тахикардии, тахикардии с правильными узкимиQRS, специфичных аритмий, желудочковой фибрилляции, аритмий пучка Гиса, атриовентрикулярной блокады, блокады ветки пучка, ишемических нарушений миокарда, заболевания коронарной артерии,загрудинной стенокардии, кардиомиопатии, дилятационной застойной кардиомиопатии, рестрикционной кардиомиопатии, заболеваний клапанов сердца, эндокардита, заболевания перикарда, опухолей сердца,аневризмы аорты и периферических аневризм, иссечения аорты, воспаления аорты, окклюзии брюшной аорты и ее ветвей, заболеваний периферических сосудов, окклюзивных заболеваний артерий, периферического атеросклеротического заболевания, облитерирующего тромбангита, функциональных заболеваний периферических артерий, феномена и заболевания Рейно, акроцианоза, эритромелалгии, заболеваний вен, тромбоза вен, варикоза вен, артериовенозного свища, лимфедермы, липедемы, нестабильной стенокардии, реперфузионной травмы, синдрома отмены насоса, ишемической-реперфузионной травмы и тому подобное. Такой способ может необязательно включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина к клетке, ткани, органу, животному или больному, нуждающемуся в такой модуляции,лечении или терапии. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере одного инфекционного заболевания в клетке, ткани, органе у животного или больного, включая, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одно из острой или хронической бактериальной инфекции, острых и хронических паразитарных или инфекционных процессов, включая бактериальные, вирусные и грибковые инфекции, ВИЧ инфекцию/ВИЧ нейропатию, менингит, гепатит (А, В или С или т.п.), септического артрита, перитонита, пневмонии, эпиглоттита, инфекции E.coli 0157:h7, гемолитического уремического синдрома/тромбоцитопенического акроангиотромбоза, пурпуры, малярии, геморрагической лихорадки денге, лейшманиоза, проказы, синдрома токсического шока, стрептококкового миозита, газовой гангрены, инфекции mycobacterium tuberculosis, mycobacterium avium intracellulare, пневмонии Pneumocystiscarynii, воспалительного заболевания малого таза, орхита/эпидидимита, инфекции legionella, заболевания Лайма, инфекции вируса гриппа А, вируса Эпштейна-Барр, несовместимого с жизнью гемафагоцитарного синдрома, несовместимого с жизнью энцефалита/асептического менингита и т.п. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере одного злокачественного заболевания в клетке, ткани, органе у животного или больного, включая, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одно из лейкоза, острого лейкоза, острого лимфобластного лейкоза (ALL), В-клеточного, Т-клеточного или FAB ALL, острого миелоидного лейкоза (AML), хронического миелоцитарного лейкоза (CML), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), лейкоза волосистых клеток, миелодиспластического синдрома (MDS), лимфомы, болезни Ходжкина, злокачественной лимфомы,лимфомы неходжкинского типа, лимфомы Беркетта, множественной миеломы, саркомы Капоши, колоректальной карциномы, карциномы поджелудочной железы, карциномы носоглотки, злокачественного гистиоцитоза, паранеопластического синдрома/гиперкальцемии при злокачественном заболевании, солидных опухолей, аденокарцином, сарком, злокачественной меланомы, гемангиомы, метастазирующего заболевания, связанной с раком резорбции кости, связанной с раком боли в костях и т.п. В настоящем изобретении также предлагается способ модуляции или лечения по меньшей мере одного нейрологического заболевания в клетке, ткани, органе у животного или больного, включая, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере одно из нейродегенеративных заболеваний, множественного склероза, головной боли по типу мигрени, комплекса деменции, вызываемой СПИДом, заболеваний демиелинизации, таких как множественный склероз и острый поперечный миелит; нарушения экстрапирамидальных путей и мозжечка, таких как повреждения кортикоспинальной системы; заболеваний базального ганглия или заболеваний мозжечка; нарушений с гиперкинезией движений, таких как хорея Гентингтона и сенильная хорея; вызванных лекарством нарушений движений, таких как вызываемые лекарствами,которые блокируют рецепторы дофамина в ЦНС; нарушений с гипокинезией движений, таких как болезнь Паркинсона; прогрессирующего супрануклеарного паралича; структурных повреждений мозжечка; дегенераций, относящихся к спинному мозгу и мозжечку, таких как атаксия, вызванная нарушениями спинного мозга, наследственная атаксия Фридрейха, дегенерации коры мозжечка, дегенерации множественных систем (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager, и Machado-Joseph); системных нарушений (болезни Рефсама, абеталипопротеинэмии, атаксии, телеангиэктазии, и мультисистемного митохондриального нарушения); нарушений димиелинизации остова, таких как множественный склероз, острый поперечный миелит; и заболеваний моторной единицы, таких как нейрогенные атрофии мышц (клеточная дегенерация переднего рога, такая как амиотрофический латеральной склероз, детская спинальная атрофия мышц и подростковая спинальная атрофия мышц); болезни Альцгеймера; синдрома Дауна в среднем возрасте; диффузного заболевания тельца Леви; сенильной деменции типа тельца Леви; синдрома ВерникаКорсакова; хронического алкоголизма; болезни Крейтцфельдта-Джакоба; подострого склерозирующего панэнцефалита, болезни Халлеррордена-Спартза и деменции с синдромом драчливости и т.п. Такой способ может необязательно включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере одно антитело против TNF или конкретную часть или вариант к клетке, ткани, органу, животному или больному, нуждающемуся в такой модуляции, лечении- 25007617 или терапии. См., например, Merck Manual, 16th Edition, MerckCompany, Rahway, NJ (1992). Любой способ настоящего изобретения может включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина к клетке, ткани, органу, животному или больному, нуждающемуся в такой модуляции, лечении или терапии. Такой способ может необязательно дополнительно включать совместное введение или сочетанную терапию для лечения таких иммунных заболеваний, при которых введение указанного по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина, конкретной части или его варианта дополнительно включает введение до, одновременно и/или после по меньшей мере одного, выбранного из по меньшей мере одного антагониста TNF (например, но не ограничиваясь этим, антитела против TNF или фрагмента, растворимого рецептора TNF или фрагмента, их гибридных белков или низкомолекулярного антагониста TNF), антиревматоидного агента (например, метотрексата, ауранофина, ауротиоглюкозы, азатиоприна, этанерцепта, золото(3)-тиомалата натрия, сульфата гидроксихлорохина, лефлуномида,сульфазалцина), релаксанта мышц, наркотика, нестероидного противовоспалительного лекарства(NSAID), анальгетика, анестетика, седативного агента, местного анестетика, блокатора нервномышечной передачи, антимикробного агента (например, аминогликозида, противогрибкового, антипаразитарного, противовирусного агентов, карбапенема, цефалоспорина, флурорхинолона, макролида, пенициллина, сульфонамида, тетрациклина, других антимикробных средств), антипсориазного агента, кортикостероида, анаболического стероида, агента, связанного с лечением диабета, минеральных, питательных добавок, тиреоидного агента, витамина, гормона, регулирующего кальциевый обмен, противодиарейного агента, откашливающего агента, противорвотного агента, противоязвенного агента, слабительного, антикоагулянта, эритропоэтина (например, эпоэтина альфа), филграстима (например, G-CSF, Neupogen), сарграмостима (GM-CSF, Leukine), иммунизации, иммуноглобулина, иммуносупрессивного агента (например, базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба), гормона роста, лекарства гормонозаместительной терапии, модулятора эстрогенных рецепторов, мидриатического агента, циклоплегического агента, алкилирующего агента, антиметаболитного агента, ингибитора митозов, радиофармацевтического агента,антидепрессанта, противоманиакального агента, противопсихотического агента, анксиолитика, гипнотического агента, симпатомиметика, возбуждающего средства, донепезила, такрина, лекарства против астмы, агониста бета-адренорецепторов, вдыхаемого стероида, ингибитора лейкотриенов, метилксантина,кромолина, адреналина или его аналога, дорназы альфа (Pulmozyme), цитокина или антагониста цитокина. Подходящие дозировки хорошо известны в данной области техники. См., например, Wells et al., eds.,Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), каждая из ссылок полностью включена здесь в качестве ссылки. Антагонисты TNF, пригодные для композиций, сочетанной терапии, совместного введения, устройств и/или способов настоящего изобретения (дополнительно включающих по меньшей мере одно антитело, его конкретную часть или вариант настоящего изобретения), включают, но не ограничиваются этим, антитела против TNF, их антигенсвязывающие фрагменты и рецепторные молекулы, которые специфически связываются с TNF; соединения, которые предотвращают и/или ингибируют синтез TNF, высвобождение TNF или его действие на клетки-мишени, такие как талидомид, тенидап, ингибиторы фосфодиэстеразы (например, пентоксифиллин и ролипрам), агонисты рецептора А 2b аденозина и энхансеры рецептора А 2b аденозина; соединения, которые предотвращают и/или ингибируют проведение сигнала с рецептора TNF, такие как ингибиторы активируемой митогеном протеинкиназы (MAP); соединения, которые блокируют и/или ингибируют расщепление TNF на мембране, такие как ингибиторы металлопротеиназы; соединения, которые блокируют и/или ингибируют активность TNF, такие как ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ) (например, каптоприл) и соединения, которые блокируют и/или ингибируют продукцию и/или синтез TNF, такие как ингибиторы МАР-киназы. Применяемое здесь "антитело против фактора некроза опухолей", "антитело против TNF", "антитело против TNF" или фрагмент и т.п. снижает, блокирует, ингибирует, аннулирует или взаимодействует с активностью TNF in vitro, in situ и/или предпочтительно in vivo. Например, подходящее антитело человека против TNF настоящего изобретения может связывать TNF и включает антитела против TNF, их антигенсвязывающие фрагменты и их конкретные мутанты или домены, которые специфически связываются с TNF. Подходящее антитело против TNF или фрагмент могут также снижать, блокировать, аннулировать, взаимодействовать, предотвращать и/или ингибировать синтез РНК, ДНК или белка TNF,высвобождение TNF, проведение сигнала рецептором TNF, расщепление TNF на мембране, активностьTNF, продукцию и/или синтез TNF. Химерное антитело сА 2 состоит из антигенсвязывающей вариабельной области высокоаффинного нейтрализующего антитела IgG1 мыши против TNF человека, обозначаемой как А 2, и константных областей иммуноглобулина IgG1 каппа человека. Область Fc IgG1 человека улучшает эффекторную функцию аллогенного антитела, повышает период полужизни при циркуляции в сыворотке крови и снижает иммуногенность антитела. Авидность и эпитопная специфичность химерного антитела сА 2 образуются на основе вариабельной области мышиного антитела А 2. В конкретном осуществлении предпочти- 26007617 тельным источником нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельную область мышиного антитела А 2,служит гибридомная линия клеток А 2. Химерное антитело А 2 (сА 2) дозозависимо нейтрализует цитотоксичное действие как природного,так и рекомбинантного TNF. На основе анализа связывания химерного антитела сА 2 и рекомбинантного TNF человека была вычислена константа сродства химерного антитела сА 2, равная 1,041010 М-1. Предпочтительные способы определения специфичности и сродства моноклонального антитела с помощью конкурентного ингибирования можно найти в Harlow, et al., antibodies: A Laboratory Manual, ColdImmunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, New York, (1992-2000); Kozbor et al.,Immunol. Today, 4:72-79 (1983); Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, (1987-2000) и Muller, Meth. Enzymol., 92:589-601 (1983), которые включены здесь полностью в качестве ссылки. В конкретном осуществлении моноклональное антитело А 2 продуцируется клеточной линией, обозначенной с 134 А. Химерное антитело сА 2 продуцируется клеточной линией, обозначаемой с 168 А. Дополнительные примеры моноклональных антител против TNF, которые могут быть применены в настоящем изобретении, описываются в данной области техники (см., например, патент США 5231024; Mller, A. et al., Cytokine 2(3):162-169 (1990); патентная заявка США 07/943852 (зарегистрированная 11 сентября 1992 г.); Rathjen et al., международная публикацияWO 91/02078 (опубликованная 21 февраля 1991 г.); Rubin et al., патентная публикация ЕРО 0218868 (опубликованная 22 апреля 1987 г.); Yone et al., патентная публикация ЕРО 0288088 (26 октября 1988 г.); Liang, et al., Biochem.Biophys. Res. Comm. 137:847-854 (1986); Meager, et al., Hybridoma 6:305-311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6:359-369 (1987); Bringman, et al., Hybridoma 6:489-507 (1987) и Hirai, et al., J. Immunol. Meth. 96:5762 (1987), которые включены здесь полностью в качестве ссылки). Молекулы рецептора TNF. Предпочтительными рецепторными молекулами TNF, пригодными в настоящем изобретении, являются те, которые связывают TNF с высоким сродством (см., например, Feldmann et al., международная публикацияWO 92/07076 (опубликованная 30 апреля, 1992 г.); Schall et al., Cell 61:361-370 (1990) и Loetscher et al., Cell 61:351-359 (1990), которые включены здесь полностью в качестве ссылки) и необязательно обладают низкой иммуногенностью. В частности, рецепторы TNF клеточной поверхности 55 кДа (р 55 TNF-R) и 75 кДа (р 75 TNF-R) пригодны в настоящем изобретении. Укороченные формы данных рецепторов, включая внеклеточные домены (ECD) рецепторов или их функциональные части (см., например, Corcoran et al., Eur. J. Biochem. 223:831-840 (1994, также пригодны в настоящем изобретении. Укороченные формы рецепторов TNF, включая ECD, были выявлены в моче и сыворотке в виде ингибирующих TNF связывающих белков 30 и 40 кДа (Engelmann, H. et al., J. Biol. Chem. 265:1531-1536(1990. Мультимерные молекулы рецептора TNF и гибридные иммунорецепторные молекулы для TNF и их производные, и фрагменты или части являются дополнительными примерами рецепторных молекулTNF, которые могут быть применены в изобретении, характеризуются их способностью лечить больных на протяжении продолжительных периодов времени с хорошим или прекрасным смягчением симптомов и низкой токсичностью. Низкая иммуногенность и/или высокое сродство, а также другие неопределенные свойства могут вносить вклад в достигаемые результаты терапии. Мультимерные молекулы рецептора TNF, пригодные в настоящем изобретении, включают весь или функциональную часть ECD двух или более рецепторов TNF, связанных посредством одного или более полипептидных линкеров или других непетидных линкеров, таких как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Мультимерные молекулы могут дополнительно включать сигнальный пептид секретируемого белка для управления экспрессией мультимерной молекулы. Данные мультимерные молекулы и способы их получения были описаны в патентной заявке США 08/437533 (зарегистрированной 9 мая 1995 г.), содержание которой полностью включено здесь в качестве ссылки. Гибридные молекулы иммунорецептора TNF, пригодные в способах и композициях настоящего изобретения, включают по меньшей мере одну часть одной или более молекул иммуноглобулина и весь или функциональную часть одного или более рецепторов TNF. Данные иммунорецепторные гибридные молекулы могут быть собраны в виде мономеров или гетеро- или гомомультимеров. Иммунорецепторные гибридные молекулы могут быть также одновалентными или мультивалентными. Примером такой иммунорецепторной гибридной молекулы для TNF является гибридный белок рецептор TNF/IgG. Иммунорецепторные гибридные молекулы для TNF и способы их получения были описаны в данной области техники (Lesslauer et al., Eur. J. Immunol. 21:2883-2886 (1991); Ashkenazy et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535-10539 (1991); Peppel et al., J. Exp. Med. 174:1483-1489 (1991); Kolls etJ. Immunol. 24:2040-2048 (1994); Beutler et al., патент США 5447851 и патентная заявка США 08/442133 (зарегистрированная 16 мая 1995 г.), каждая из которых включена здесь полностью в качестве ссылки). Способы получения иммунорецепторных гибридных молекул можно также найти в Capon et al.,- 27007617 патент США 5116964; Capon et al., патент США 5225538 и Capon et al., Nature 337:525-531 (1989),которые включены здесь полностью в качестве ссылки. Функциональный эквивалент, производное, фрагмент или область рецепторной молекулы TNF относятся к части рецепторной молекулы TNF или к части последовательности рецепторной молекулыTNF, которая кодирует рецепторную молекулу TNF, которая имеет достаточный размер и последовательности для функционального сходства с рецепторными молекулами TNF, которые могут быть применены в настоящем изобретении (например, связывают TNF с высоким сродством и обладают низкой иммуногенностью). Функциональный эквивалент рецепторной молекулы TNF также включает модифицированные рецепторные молекулы TNF, которые функционально сходны с рецепторными молекуламиTNF, которые могут быть применены в настоящем изобретении (например, связывают TNF с высоким сродством и обладают низкой иммуногенностью). Например, функциональный эквивалент рецепторной молекулы TNF может содержать "молчащий" кодон или одну или более аминокислотных замен, делеций или добавок (например, замена одной кислой аминокислоты на другую кислую аминокислоту; или замена одного кодона, кодирующего ту же самую или другую гидрофобную аминокислоту, на другой кодон,кодирующий гидрофобную аминокислоту). См. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Assoc, and Wiley-Interscience, New York (1987-2000). Цитокины включают любой известный цитокин. См., например, CopewithCytokines.com. Антагонисты цитокинов включают, но не ограничиваются этим, любое антитело, фрагмент или миметик, любой растворимый рецептор, фрагмент или миметик, любой низкомолекулярный антагонист или их любое сочетание. Терапевтические применения. Любой способ настоящего изобретения может включать способ лечения заболевания, опосредуемого двойным интегрином, включающий введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина для клетки, ткани, органа, животного или больного, нуждающихся в такой модуляции, обработке или терапии. Такой способ может необязательно дополнительно включать совместное введение или сочетанную терапию для лечения таких иммунных заболеваний, при которых введение указанного по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина, конкретной его части или варианта дополнительно включает введение до, одновременно и/или после по меньшей мере одного, выбранного по меньшей мере из одного, по меньшей мере одного, выбранного по меньшей мере из одного антагониста TNF (например,но не ограничиваясь этим, антитела против TNF или его фрагмента, растворимого рецептора TNF или его фрагмента, их гибридных белков или низкомолекулярного антагониста TNF), антиревматического агента (например, метотрексата, ауранофина, ауротиоглюкозы, азатиоприна, этанерсепта, золото(3)тиомалата натрия, сульфата гидроксихлорохина, лефлуномида, сульфазалцина), релаксанта мышц, наркотика, нестероидного противовоспалительного лекарства (NSAID), анальгетика, анестетика, седативного агента, местного анестетика, блокатора нервно-мышечной передачи, антимикробного агента (например, аминогликозида, противогрибкового, антипаразитарного, противовирусного агентов, карбапенема,цефалоспорина, флурорхинолона, макролида, пенициллина, сульфонамида, тетрациклина, других антимикробных средств), антипсориазного агента, кортикостероида, анаболического стероида, агента, связанного с лечением диабета, минеральных, питательных добавок, тиреоидного агента, витамина, гормона, регулирующего кальциевый обмен, противодиарейного агента, откашливающего агента, противорвотного агента, противоязвенного агента, слабительного, антикоагулянта, эритропоэтина (например,эпоэтина альфа), филграстима (например, G-CSF, Neupogen), сарграмостима (GM-CSF, Leukine), иммунизации, иммуноглобулина, иммуносупрессивного агента (например, базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба), гормона роста, лекарства гормонозаместительной терапии, модулятора эстрогенных рецепторов, мидриатического агента, циклоплегического агента, алкилирующего агента, антиметаболитного агента, ингибитора митозов, радиофармацевтического агента, антидепрессанта, противоманиакального агента, противопсихотического агента, анксиолитика, гипнотического агента, симпатомиметика, возбуждающего средства, донепезила, такрина, лекарства против астмы, агониста бета-адренорецепторов, вдыхаемого стероида, ингибитора лейкотриенов, метилксантина, кромолина, адреналина или его аналога,дорназы альфа (Pulmozyme), цитокина или антагониста цитокина. Обычно лечение патологических состояний достигается введением эффективного количества или дозы композиции по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина, которая в среднем варьируется от приблизительно по меньшей мере 0,01 до 500 мг, по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина на килограмм массы больного на дозу и предпочтительно от приблизительно по меньшей мере 0,1 до 100 мг антитела/килограмм массы больного на однократное или множественное введение в зависимости от специфической активности, содержащейся в композиции. В другом варианте эффективная концентрация в сыворотке может включать 0,1-5000 мкг/мл сывороточной концентрации на однократное или множественное введение. Подходящие дозировки известны практикующим врачам и должны, конечно, зависеть от конкретной стадии заболевания, специфической активности подлежащей введению композиции и конкретного больного, подвергающегося лечению. В некоторых случаях для- 28007617 достижения желаемого терапевтического количества может иметься необходимость в обеспечении повторного введения, т.е. повторных отдельных введений, конкретной отслеживаемой или отмеряемой дозы, когда отдельные введения повторяют до достижения желаемой суточной дозы или эффекта. Предпочтительные дозы могут необязательно включать 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35,36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66,67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96,97, 98, 99 и/или 100-500 мг/кг/введение или любой диапазон, величину или их часть, или для достижения сывороточной концентрации 0,1, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5, 2,9, 3,0, 3,5, 3,9, 4,0, 4,5, 4,9, 5,0,5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 20, 12,5, 12,9, 13,0,13,5, 13,9, 14,0, 14,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11,11,5, 11,9, 12, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14, 14,5, 15, 15,5, 15,9, 16, 16,5, 16,9, 17, 17,5, 17,9, 18, 18,5, 18,9,19, 19,5, 19,9, 20, 20,5, 20,9, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90,96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500 и/или 5000 мкг/мл сывороточной концентрации на однократное или множественное введение или любой диапазон,величину или их часть в данных пределах. В другом варианте вводимая доза может варьироваться в зависимости от известных таких факторов, как фармакодинамические характеристики конкретного агента, способ и путь его введения; возраст,состояние здоровья и масса реципиента; природа и степень выраженности симптомов, тип одновременного лечения, частота лечения и желаемый эффект. Обычно дозировка активного ингредиента может составлять приблизительно от 0,1 до 100 мг на 1 кг массы тела. Обычно для получения желаемых результатов эффективно от 0,1 до 50 и предпочтительно от 0,1 до 10 мг на килограмм на введение или в форме постоянного высвобождения. В качестве неограничивающего примера лечения человека или животных может быть предложена одноразовая или периодическая дозировка по меньшей мере одного антитела настоящего изобретения от 0,1 до 100 мг/кг, как, например, 0,5, 0,9, 1,0, 1.1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19,20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг/кг в день на по меньшей мере один из дней 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29,30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40, или в другом варианте, или дополнительно по меньшей мере одну из недель 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 или 52, или в другом варианте, или дополнительно по меньшей мере один из годов 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,17, 18, 19 или 20, или любое их сочетание с применением однократной, инфузионной или повторных доз. Формы дозировки (композиции), подходящие для внутреннего введения, обычно содержат от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 мг активного ингредиента на единицу или контейнер. В данных фармацевтических композициях активный ингредиент должен обычно находиться в количестве приблизительно 0,5-99,999 мас.% на основе общей массы композиции. Для парентерального введения антитело может быть составлено в виде раствора, суспензии, эмульсии или лиофилизованного порошка в связи с фармацевтически приемлемым парентеральным носителем или может предлагаться отдельно. Примерами таких носителей являются вода, физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и 1-10% человеческий сывороточный альбумин. Также могут быть применены липосомы и неводные носители, такие как фиксированные масла. Носитель или лиофилизованный порошок может содержать добавки, которые поддерживают изотоничность (например, хлорид натрия, маннит) и химическую устойчивость (например, буферы и консерванты). Состав стерилизуют с помощью известных или подходящих способов. Подходящие фармацевтические носители описываются в самом последнем издании Remington'sPharmaceutical Sciences, A. Osol, текст, на который обычно ссылаются в данной области. Альтернативное введение. Многие известные и разработанные способы могут быть применены согласно настоящему изобретению для введения фармацевтически эффективных количеств по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина согласно настоящему изобретению. Хотя легочное введение используют в последующем описании, другие способы введения могут быть применены в соответствии с настоящим изобретением с приемлемыми результатами. Антитела против двойного интегрина настоящего изобретения могут быть доставлены в носителе,таком как раствор, эмульсия, коллоид или суспензия, или в виде сухого порошка с применением любого из множества устройств и способов, подходящих для введения путем ингаляции или других способов,описанных здесь или известных в данной области техники. Парентеральные составы и введение. Составы для парентерального введения могут содержать в качестве обычных наполнителей стерильную воду или физиологический раствор, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения, гидрированные нафталины и т.п. Водные или масляные суспензии для инъекции могут быть получены с помощью подходящего эмульгатора или увлажнителя и суспендирую- 29007617 щего агента в соответствии с известными способами. Агенты для инъекции могут быть нетоксичным вводимым не перорально, разбавляющим агентом, таким как водный раствор или стерильный раствор для инъекций, или суспензия в растворителе. В качестве приемлемого носителя или растворителя допустимы вода, раствор Рингера, изотонический солевой раствор и т.д.; в качестве обычного растворителя или суспендирующего растворителя может быть применено стерильное нелетучее масло. Для данных целей может быть применен любой тип нелетучего масла и жирной кислоты, включая природные или синтетические, или полусинтетические жирные масла или жирные кислоты; природные или синтетические, или полусинтетические моно- или ди-, или триглицериды. Парентеральное введение известно в данной области техники и включает, но не ограничивается этим, общепринятые способы инъекций, безигольное устройство для инъекций под давлением газа, как описано в патенте США 5851198, и лазерное перфорирующее устройство, как описано в патенте США 5839446, включенных здесь полностью в качестве ссылки. Альтернативная доставка. Изобретение дополнительно относится к введению по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина с помощью парентерального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрисуставного, внутрибронхиального, внутриабдоминального, внутрисумочного, внутрихрящевого, внутриполостного, внутрибрюшного, внутримозжечкового, внутрь желудочка мозга, внутриколитического,внутрицервикального, внутрижелудочного, внутрипеченочного, внутримиокардиального, внутрикостного, внутрь малого таза, внутриперикардиального, внутрибрюшинного, внутриплеврального, внутрипростатного, внутрилегочного, внутриректального, внутрипочечного, внутрисетчаточного, внутриспинального, внутрисиновиального, внутригрудинного, внутриматочного, внутрипузырного, болюсного, влагалищного, ректального, защечного, подъязычного, интраназального или чрескожного путей. Композиция по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина может быть получена для применения для парентерального (подкожного, внутримышечного или внутривенного) или любого другого введения, в особенности в форме жидких растворов или суспензий; для применения для влагалищного или ректального введения в особенности в полутвердых формах, таких как, но не ограничиваясь этим, кремы и суппозитории; для защечного или подъязычного введения в такой, но не ограничивающей форме, как таблетки или капсулы; или для интраназального введения в такой, но не ограничивающей форме, как порошки, капли для носа или аэрозоли, или определенные агенты; или чрескожного введения в такой, но не ограничивающей форме, как желе, мазь, лосьон, суспензия или система доставки с помощью пластыря, с химическими усилителями, такими как диметилсульфоксид, для того, чтобы либо модифицировать структуру кожи, либо повысить концентрацию лекарства в пластыре для чрескожного введения (Junginger, et al. In "Drug Permeation Enhancement"; Hsieh, D. S., Eds., pp. 59-90 (Marcel Dekker, Inc. New York 1994, включенная здесь полностью в качестве ссылки), или с окисляющими агентами, которые делают возможным нанесение составов, содержащих белки и пептиды, на кожу (патентная заявка WO 98/53847),или нанесения электрических полей для создания временных транспортных потоков, таких как электропорация, или для повышения перемещения заряженных лекарств через кожу, таких как ионофорез, или применение ультразвука, такого как сонофорез (патенты США 4309989 и 4767402) (указанные выше публикации и патенты включены здесь полностью в качестве ссылки). Легочное/интраназальное введение. Для легочного введения предпочтительно, чтобы композиция по меньшей мере одного антитела против двойного интегрина доставлялась с размером частиц, эффективным для достижения нижних дыхательных путей легкого или синусов. В соответствии с изобретением по меньшей мере одно антитело против двойного интегрина может быть доставлено с помощью любого из множества устройств для ингаляции или для доставки через нос, известных в данной области техники для введения терапевтического агента путем ингаляции. Данные устройства, способные вносить составы в виде аэрозолей в синусную полость или в альвеолы больного, включают ингаляторы с отмеряемыми дозами, распылители, генераторы сухого порошка, пульверизаторы и тому подобное. Другие устройства, пригодные для легочной доставки или интраназального введения антител, также известны в данной области техники. Во всех таких устройствах могут применяться составы, пригодные для введения распределением антитела в аэрозоле. Такие аэрозоли могут состоять либо из растворов (либо водных, либо неводных), либо из твердых частиц. В ингаляторах с отмеряемой дозой, подобных ингалятору с отмеряемой дозой Ventolin, обычно применяют движущий газ, и для них требуется активация во время вдыхания (см., например, патентыWO 94/16970, WO 98/35888). В ингаляторах для сухого порошка, подобных Turbuhaler (Astra), Rotahaler (Glaxo), Diskus (Glaxo), ингалятору Spiros (Dura), устройствам, продаваемым Inhale Therapeutics, и ингалятору для порошка Spinhaler (Fisons), применяют активацию смешанного порошка дыханием (патенты США 4668218 Astra, ЕР 237507 Astra, WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, США 5458135 Inhale, WO 94/06498 Fisons, включенные здесь полностью в качестве ссылки). Распылители типа AERx Aradigm, распылитель Ultravent (Mallinckrodt) и распылитель Acorn II (Marquest MedicalProducts) (патент США 5404871 Aradigm, WO 97/22376), причем указанные выше ссылки приведены здесь полностью в качестве ссылки, образуют аэрозоли из растворов, в то время как ингаляторы с отмеряемой дозой, ингаляторы для сухого порошка и т.д. образуют аэрозоли с мелкими частицами. Данные