Способ предотвращения или лечения артрита и применение антитела, специфически реактивного к цитруллинированному эпитопу в этом способе

ИСПРАВЛЕННОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ 2009.06.04 СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ АРТРИТА И ПРИМЕНЕНИЕ АНТИТЕЛА, СПЕЦИФИЧЕСКИ РЕАКТИВНОГО К ЦИТРУЛЛИНИРОВАННОМУ ЭПИТОПУ В ЭТОМ СПОСОБЕ Ратс Йозеф Мария Хендрик, Хириви Ренато Герард Силвано (NL) Агуреев А.П. (RU) Примечание: библиография отражает состояние при переиздании Изобретение относится к области лечения или предотвращения воспаления у человека и животных и относится к фармацевтическим композициям и способам лечения или предотвращения различных воспалительных состояний. Конкретно, изобретение относится к композициям и способам для лечения или предотвращения воспалительных состояний, таких как связанные с цитруллином воспалительные заболевания. Изобретение предоставляет специфичные связывающие молекулы,направленные против содержащих цитруллин эпитопов, для применения в терапии и для предотвращении воспалительных состояний. Примечание: библиография отражает состояние при переиздании Область техники, к которой относится изобретение Изобретение относится к области лечения или предотвращения воспаления у человека и животных и к фармацевтическим композициям и способам лечения или предотвращения различных воспалительных состояний. Конкретно, изобретение относится к композициям и способам лечения или предотвращения таких воспалительных состояний, как заболевания, связанные с цитруллином, предпочтительно воспалительные заболевания. Изобретение предоставляет специфичные связывающие молекулы, направленные против содержащих цитруллин эпитопов, для применения в терапии и для предотвращения воспалительных состояний. Уровень техники Воспалительные состояния, как хронической, так и острой природы, представляют значительную проблему для здравоохранения. Вкратце, хроническим воспалением считается воспаление значительной продолжительности (недели или месяцы), при котором активное воспаление, разрушение тканей и попытки излечения происходят одновременно (Robbins Pathological Basis of Disease by R.S. Cotran, V. Kumar, and S.L. Robbins, W.B. Saunders Co., p. 75, 1989). Хотя хроническое воспаление может следовать за эпизодом острого воспаления, оно может также начаться как подспудный процесс, прогрессирующий со временем, например в результате стойкой инфекции (такой как туберкулез, сифилис, грибковая инфекция), приводящей к отложенной реакции гиперчувствительности, продолжительного воздействия эндогенных (например, повышенного уровня липидов плазмы) или экзогенных (например, окиси кремния,асбеста, сигаретной смолы, хирургического шовного материала) токсинов или аутоиммунных реакций против собственных тканей организма (например, ревматоидный артрит, системная красная волчанка,рассеянный склероз, псориаз). Воспалительный артрит представляет серьезную угрозу здоровью людей в развитых странах, отличающихся возрастанием числа стареющих индивидуумов. Например, одна из форм воспалительного артрита, ревматоидный артрит (RA), представляет собой мультисистемное хроническое рецидивирующее заболевание, поражающее от 1 до 2% мировой популяции. Хотя многие органы могут быть поражены этой болезнью, RA обычно является тяжелой формой хронического синовита, который иногда приводит к разрушению и анкилозу пораженных суставов (Robbins Pathological Basis of Disease, by R.S. Cotran, V. Kumar and S.L. Robbins, W.B. Saunders Co., 1989). С точки зрения патологии болезнь характеризуется заметным утолщением синовиальной мембраны, которая образует ворсинчатые выступы, простирающиеся в суставную щель, многослойностью синовиоцитарной выстилки (синовиоцитарная пролиферация), инфильтрацией синовиальной мембраны белыми кровяными клетками (макрофагами, лимфоцитами, плазмацитами и лимофоидными фолликулами, называемая "воспалительным синовитом") и отложением фибрина с клеточным некрозом внутри синовиальной оболочки. Ткань, образующаяся в результате этого процесса, называется паннусом и в конце концов паннус разрастается и заполняет всю суставную щель. В паннусе развивается обширная сеть новых кровеносных сосудов в процессе ангиогенеза, что является существенным в развитии синовита. Высвобождение пищеварительных ферментов (матриксных металлопротеиназ (например, коллагеназы, стромелизина и других медиаторов воспалительного процесса (например, перекиси водорода, супероксидов, лизосомальных ферментов и продуктов метаболизма арахидоновой кислоты) из клеток ткани паннуса приводит к прогрессивному разрушению хрящевой ткани. Паннус захватывает суставный хрящ, приводя к эрозиям и фрагментации хрящевойткани. В конце концов происходит эрозия субхондральной кости с развитием фиброзного анкилоза и в конечном счете костного анкилоза в пораженном суставе. Принято считать, что RA является аутоиммуным заболеванием и что много различных артрогенных стимулов активирует иммунный ответ у иммуногенетически восприимчивого хозяина. Как экзогенные инфекционные агенты (вирус Эпштейн-Барра, вирус краснухи, цитомегаловирус, вирус герпеса, человеческий Т-клеточный лимфотрофный вирус, микоплазма и другие), так и эндогенные белки, такие как коллаген, протеогликаны, измененные иммуноглобулины и посттрансляционно модифицированные белки, такие как цитруллинированные белки, рассматриваются в качестве причинных агентов, запускающих неправильный иммунный ответ хозяина. Независимо от инициирующего агента аутоиммунная реакция играет роль в развитии заболевания. Конкретно, релевантный антиген поглощается антигенпредставляющими клетками (макрофагами или дендровидными клетками в синовиальной мембране),процессируется и представляется Т-лимфоцитам. Т-клетки инициируют клеточный иммунный ответ и стимулируют пролиферацию и дифференциацию В лимфоцитов в плазмациты. Конечным результатом является развитие избыточного неправильного иммунного ответа, направленного против тканей хозяина(например, антитела против коллагена типа II, антитела против Fc части собственного IgG (называемые"ревматоидным фактором") и антител против различных содержащих цитруллин (цитруллинированных) эпитопов (анти-ССР). Это дополнительно усиливает иммунный ответ и ускоряет разрушение хрящевой ткани. Когда этот каскад запущен, многочисленные медиаторы разрушения хряща ответственны за развитие ревматоидного артрита. Показано, что вышеупомянутые анти-ССР антитела являются высокоспецифичными для RA. Недавние исследования показывают, что каждый индивидуум, являющийся серопозитивным по этим антителам, либо уже болеет RA, либо разовьет эту болезнь в будущем. Присутствие анти-ССР антител (осо-1 023302 бенно в случае их высоких титров) является предсказательным в отношении наступления этой разрушительной болезни (Nijenhuis et al., Clin. Chim. Acta, vol 350, 17-34, 2004). Дополнительно показано, что анти-ССР антитела продуцируются локально на участке воспаления. Вклад анти-ССР антител в общийIgG, обнаруживаемый в синовиальном материале больных RA, оказывается значительно выше, чем в сыворотке тех же больных (Masson-Bessire et al., Clin Exp Immunol, vol 119, 544-552, 2000) (ReparonSchuijt et al., Arthritis Rheum, vol 44, 41-47, 2001). Присутствие продуцирующих анти-ССР плазмацитов в синовиальной оболочке указывает на запущенное антигеном созревание В-клеток, специфичных к ССР, на участке воспаления. Когда анти-ССР антитела наработаны, образование иммунных комплексов с цитруллинированными белками в синовиальной оболочке может запустить развитие воспалительного процесса. Эти и другие данные поддерживают гипотезу о том, что анти-ССР антитела действительно вызывают по меньшей мере часть болезненных симптомов RA. Роль анти-ССР антител в патогенезе RA подтверждается результатами опытов по истощению В-лимфоцитов у больных RA (Cambridge et al., Arthritis Rheum, vol 48, 2146-2154, 2003). Среди людей с продвинутым ревматоидным артритом процент смертности выше, чем в случае ряда видов рака, и из-за этого режимы лечения сдвинуты в сторону наступательной ранней лекарственной терапии, подобранной для уменьшения вероятности развития необратимого повреждения суставов. Недавние рекомендации американской коллегии ревматологии (American College of Rheumatology) (Arthritisand Rheumatism 39(5):713-722, 1996) включают раннее начало терапии с помощью модифицирующего болезнь антиревматического лекарства (DMARD) для любого пациента с установленным диагнозом и с имеющимися симптомами. Противораковые лекарства стали средствами первоначальной терапии для большого числа пациентов, причем у 60-70% ревматологов выбор падает на химиотерапевтическое средство метотрексат. Тяжесть заболевания часто служит основанием для неограниченного еженедельного лечения этим лекарством и для тех пациентов, у которых болезнь прогрессирует несмотря на терапию метотрексатом (более 50% больных), часто применяют химиотерапевтические лекарства вторичной терапии, такие как циклоспорин и азатиоприн (по отдельности или в комбинации). Остается потребность в соединениях для лечения или предотвращения воспалительных заболеваний, способных ингибировать патогенез воспалительных заболеваний, конкретно, заболеваний, в которые вовлечена синовиальная оболочка и воспалительных заболеваний, связанных с цитруллином. Раскрытие изобретения Изобретение предоставляет связывающие молекулы, обладающие специфической реактивностью в отношении содержащего цитруллин эпитопа на р 15 и/или р 17 для применения при лечении или предотвращении воспалительных заболеваний. Изобретение также предоставляет способ лечения или предотвращения воспалительных заболеваний, включающий этап введения пациенту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества противовоспалительной композиции, включающей связывающие молекулы, обладающие специфической реактивностью в отношении содержащего цитруллин эпитопа на р 15 и/или р 17. Композиции и способы согласно настоящему изобретению включают фармацевтически приемлемые составы со специфичными связывающими молекулами, реактивными по отношению к остаткам цитруллина. Конкретно, связывающие молекулы являются специфически реактивными в отношении цитруллинированных эпитопов на двух полипептидах, как определено выше, обозначаемых р 15 и р 17. Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут очевидными из нижеследующего детального описания фигур и примеров. Дополнительно, здесь приведены различные ссылки на работы, описывающие более детально отдельные процедуры, устройства/приспособления или композиции и поэтому включенные сюда посредством ссылки во всей полноте. Осуществление изобретения Изобретение предоставляет связывающие молекулы, обладающие специфичной реактивностью в отношении цитруллинированного эпитопа на р 15 и/или р 17 для применения при лечении или предотвращения воспалительных заболеваний. Термин "специфичная связывающая молекула" применяется здесь для обозначения молекулы,предпочтительно небольшой молекулы, способной к специфичному связыванию. Специфичное связывание в этом контексте означает, что молекула способна связываться с избранной молекулой-мишенью,при этом не связываясь с другой не относящейся к мишени молекулой в тех же условиях. Например, говорится, что связывающая молекула специфически связывается с сывороточным альбумином, когда она связывается с сывороточным альбумином и в меньшей степени или вовсе не связывается с другим белком или предпочтительно не связывается ни с каким другим белком сыворотки. Термин "специфически реагирует с цитруллином", "реактивный по отношению к цитруллинированному эпитопу" или "реактивный в отношении содержащего цитруллин эпитопа" в данном контексте означает, что антитело реагирует со структурой, такой как пептид или пептидоподобная молекула, содержащей остаток цитруллина, тогда как антитело реагирует в меньшей степени или предпочтительно совсем не реагирует с такой же структурой, содержащей остаток аргинина вместо остатка цитруллина. Термин "пептид" или "пептидоподобная молекула" следует понимать как такие структуры, которые способны представлять остаток цитруллина в правильном контексте/окружении для проявления иммуноре-2 023302 активности со специфичными связывающими молекулами, как описано здесь, предпочтительно в том же окружении, какое имеет место в организме человека или животного, предпочтительно в окружении природного полипептида."Специфичная связывающая молекула" может быть молекулой, предпочтительно небольшой молекулой, состоящей из ДНК, РНК, пептида, белкового домена, целого белка или их комбинации или их частей, которые способны специфически связываться с соединением-мишенью. Предпочтительными примерами специфичных связывающих молекул являются пептиды или антитела или их части, такие как одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFvs), фрагменты антигенсвязывающих районов (Fabs), однодоменные антитела (sdabs), также известные как VHH антитела, нанотела (однодоменные антитела,полученные из верблюжьих) или фрагменты однодоменного антитела, полученные из IgNAR акул, называемые VNAR, или другие их активные фрагменты, антикалины или аптамеры (ДНК или РНК). В предпочтительном осуществлении специфичная связывающая молекула представляет собой слитый белок,включающий антигенсвязывающий домен антитела или аптамера, такой как аптамер в форме ДНК или РНК. В еще более предпочтительном осуществлении специфичная связывающая молекула включает антитела или их производные, такие как фрагменты антител, нанотела, однодоменные антитела или их активные части. Поэтому изобретение конкретно относится к специфичным связывающим молекулам, как описано выше, которые являются пептидами или антителами. Термин "антитела" или "антитело" относится к белку или полипептиду, способному специфически связываться с молекулой-мишенью, часто называемой антигеном. Антитела (также известные как иммуноглобулины) представляют собой белковые гамма глобулины, обнаруживаемые в крови или других жидкостях организма позвоночных, и применяются иммунной системой для идентификации и обезвреживания посторонних объектов, таких как бактерии и вирусы. Антитела обычно состоят из основных структурных единиц, каждая из которых состоит из двух больших тяжелых цепей и двух небольших легких цепей, образующих, например, мономеры из одной единицы, димеры из двух единиц или пентамеры из пяти единиц. Антитела продуцируются одним из видов белых кровяных клеток, называемых В-клетками. Имеется несколько различных типов тяжелой цепи антитела и несколько различных типов антител, которые сгруппированы в различные изотипы соответственно типу тяжелой цепи, которую они включают. У млекопитающих известны пять различных изотипов антител, которые играют разные роли и помогают направлять правильный иммунный ответ на каждый из числа разных видов чужеродных объектов, с которыми они встречаются. Отдельные виды животных, такие как верблюжьи (например, ламы) и акулы, могут иметь антитела с аберрантными структурами. Хотя основная структура всех антител является очень похожей, небольшой район на конце белка является чрезвычайно вариабельным, что позволяет существовать миллионам антител со слегка различающимися структурами на конце. Этот район известен как гипервариабельный район. Каждый их таких вариантов может связывать свою мишень, известную как антиген. Такое огромное разнообразие антител позволяет иммунной системе узнавать большое разнообразие антигенов. Уникальная часть антигена,узнаваемая антителом, называется эпитопом. Эпитопы связываются со своими антителами путем высоко специфичного взаимодействия, что позволяет антителам идентифицировать и связывать только свои уникальные антигены среди миллионов различных молекул, составляющих организм. Узнавание антигена антителом обеспечивает его захват для атаки другими компонентами иммунной системы. Антитела могут также обезвреживать мишень самостоятельно, например путем связывания с частью патогена, необходимой для развития инфекции. Большая и разнообразная популяция антител генерируется путем случайных комбинаций набора сегментов гена, кодирующих различные антигенсвязывающие участки (или паратопы) с последующими случайными мутациями в этой области гена антитела, которые создают дополнительное разнообразие. Гены антитела также претерпевают реорганизации в ходе процесса, называемого переключением классов, который изменяет основу тяжелой цепи на другую, создавая другой изотип антитела, сохраняющий антигенную специфичность вариабельного района. Это позволяет одному антителу функционировать в виде нескольких разных изотипов и участвовать в работе иммунной системы по нескольким разным путям. Термин "антитело", как применяется здесь, включает одноцепочечные антитела, районы антигенсвязывающих фрагментов, антитела, полученные рекомбинантным путем, моноклональные антитела и т.п. Термин "или его часть" в контексте антитела или другой специфичной связывающей молекулы относится к части антитела или специфичной связывающей молекулы, которая представляет собой специфичный участок связывания в структуре антитела или специфичной связывающей молекулы и может интерпретироваться как часть антитела, или специфичной связывающей молекулы, которая все еще способна реагировать с тем же эпитопом, что и целое антитело или специфичная связывающая молекула. Все виды специфичных связывающих молекул и их производные, такие как антитела, составные белки, включающие специфичный связывающий домен антитела, аптамеры, фрагменты антител, фрагменты однодоменных антител, другие белковые связывающие домены, такие как антикалины, и неболь-3 023302 шие молекулы, которые специфически связывают цитруллинированные эпитопы, могут применяться в настоящем изобретении. Однако, человеческие антитела или их фрагменты являются предпочтительным осуществлением изобретения. Предпочтительно применяются IgG1 (e.g., IgG1) антитела, имеющие тяжелую цепь IgG1 и -легкую цепь. Однако, другие изотипы человеческих антител также охвачены изобретением, включая IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD и IgE в комбинации с - или -легкой цепью. Также согласно изобретению можно применять все антитела различных изотипов, полученные из животных. Антитела могут быть полноразмерными антителами или антигенсвязывающими фрагментами антител, включая Fab, F(ab')2, одноцепочечные Fv фрагменты или однодоменные VHH, VH или VL. Специфичные связывающие молекулы, реактивные по отношению к "цитруллинированным эпитопам", следует понимать как специфичные связывающие молекулы, которые специфически реагируют с остатками цитруллина в составе больших структур, таких как пептид или пептид-нуклеиновая кислота,или аптамер, или пептидомиметик. Цитруллин представляет собой аминокислоту, которая не включается в состав белков во время трансляции, однако, может образовываться в ходе посттрансляционной модификации остатка аргинина с помощью пептидиларгининдеиминазы (PAD). Цитруллинирование представляет собой посттрансляционное превращение остатков аргинина в остатки цитруллина, катализируемое пептидиларгининдеиминазой (PAD). Фермент пептидиларгининдеиминаза (PAD; EC 3.5.3.15) катализирует превращение остатков аргинина в остатки цитруллина в белке. Для цитруллина не существует тРНК, присутствие остатков цитруллина в белке является исключительно результатом посттрансляционной модификации. У млекопитающих (человека, мышей и крыс) идентифицированы пять изотипов PAD (PAD1- PAD6; PAD4 и PAD5 применяются для одного и того же изотипа), каждый кодируется отдельным геном (Vossenaar et al., Bioessays 25,1106-1118, 2003). Все эти ферменты строго зависят от присутствия ионов кальция для своей активности и неспособны превращать свободный L-аргинин в свободный L-цитруллин. Свободный L-аргинин может превращаться в свободный L-цитруллин с помощью синтазы окиси азота (ЕС 1.14.13.39) у эукариотов или с помощью аргининдеиминазы (ЕС 3.5.3.6) у бактерий. Эти ферменты не являются зависимыми от ионов кальция. Наиболее значительным различием между высоко гомологичными ферментами PAD является тканеспецифичность их экспрессии. В эпидермисе PAD1 (синонимы: PAD I, PAD типа I) участвует в цитруллинировании филаментов кератина во время конечных стадий дифференциации кератиноцита, что является важным для реорганизации ороговевшей оболочки. Другой участок цитруллинирования в эпидермисе представляет собой волосяной фолликул, содержащий PAD3 (синонимы PAD III, PAD типа III) и его природный субстрат трихохиалин (ТНН). ТНН является основным структурным белком клеток внутренней оболочки корня и медуллярного слоя волосяного фолликула, в меньшей степени другого специализированного эпителия. Совсем недавно идентифицированный изотип PAD, a именно PAD6 (синоним ePAD), обнаружен в цитоплазматических оболочках мышиных ооцитов, что играет важную роль в раннем эмбриогенезе. Обнаружено, что экспрессия его человеческих ортологов ограничена яичниками,яичком и лейкоцитами периферической крови (Chavanas et al., Gene vol 330; 19-27, 2004). Исходно этот изотип PAD был назван ePAD, но с учетом систематической нумерации других PAD этот изотип был переименован в PAD6 (Vossenaar et al., Bioessays vol 25, 1106-1118, 2003). Наиболее широко экспессируемый изотип PAD2 (синонимы PAD II, PAD типа II, PAD-H19) присутствует во многих различных тканях, таких как скелетные мышцы, мозг, селезенка, выделительные железы и макрофаги. Несмотря на его широкую экспрессию только основной миелиновый белок (МВАР) и виментин идентифицированы в качестве его субстратов. У больных рассеянным склерозом (MS) развивается аутоиммунный ответ против МВР. МВР является широко распространенным белком миелиновой оболочки и его цитруллинирование происходит во время развития центральной нервной системы. Цитруллинирование виментина наблюдается во время индуцированного кальциевым ионофором апоптоза в макрофагах человека и мыши и, как описано выше, показано, что цитруллинированный виментин является мишенью для RA-специфичных анти-Sa аутоантител. В противоположность ферментам PAD, рассмотренным выше, которые локализованы в основном в цитоплазме клеток, изотип PAD4 (синонимы PAD IV, PAD типа IV, HL-60 PAD, PADV, PAD типа V, PADI4) локализован в ядре. Сигнал ядерной локализация PAD4 обнаружен в N-концевом районе белка. PAD4 в основном экспрессируется в гранулоцитах и моноцитах периферической крови. Субстратами PAD4 в ядре являются сердцевинные белки гистонов (Н 2 А, Н 3 и Н 4) и нуклеофосмин/В 23,ядерный белок, который функционирует при сборке рибосом, ядерно-цитоплазмическом переносе и при дупликации центросом. Специфичные связывающие молекулы согласно изобретению направлены против цитруллинированного эпитопа на р 15 и/или р 17, двух полипептидах, характеризующихся молекулярным весом 15 и 17 кДа соответственно. Обнаружено, что такие специфичные связывающие молекулы особенно подходят для лечения или предотвращения воспалительных заболеваний. Термин "воспалительные состояния" или "воспалительные заболевания", как применяется здесь,относится к любому из числа состояний или заболеваний, которые характеризуются сосудистыми изме-4 023302 нениями: отеком и инфильтрацией нейтрофилами (например, острые воспалительные реакции); инфильтрацией ткани моноцитами; разрушением тканей воспалительными клетками, клетками соединительной ткани и их продуктами и попытками репарации путем замещения соединительной тканью (например, хронические воспалительные реакции). Представительные примеры таких состояний включают связанные с цитруллином воспалительные заболевания и аутоиммунные заболевания. Связанные с цитруллином воспалительные заболевания определяются здесь как такие заболевания, при которых цитруллинирование играет роль в патогенезе болезни. Специалист в данной области может легко определить, играет или нет цитруллинирование роль в патогенезе болезни, с помощью рутинных тестов, известных в данной области техники. Например, эти болезни могут характеризоваться присутствием абнормального уровня цитруллинированных белков в пораженных или связанных с ними тканях. Это можно выяснить с помощью иммунологического теста,такого как вестерн-блот или ELISA, при котором больная ткань применяется в качестве антигена и цитруллинирование этого антигена можно детектировать с помощью антител против цитруллина, как описано здесь. Альтернативно, специалист в данной области техники может применять подходы протеомики, такие как масс-спектрометрический анализ, для сравнения уровней и типов цитруллинирования в пораженных тканях по сравнению со здоровыми тканями тех же больных. Заболевание может характеризоваться присутствием иммунного ответа на содержащие цитруллин пептиды или белки. Это может быть гуморальный или клеточный иммунный ответ, такой как ответ, опосредованный Т-клетками или В-клетками. Тесты для определения антицитруллиновых антител описаны в данной области техники и их компоненты являются доступными в продаже. Изобретение поэтому относится к специфичной связывающей молекуле для применения с целью лечения или предотвращения связанных с цитруллином воспалительных заболеваний. Такие заболевания представляют собой, например, воспалительный артрит, включая ревматоидный артрит и остеоартрит, рассеянный склероз, псориатический артрит, псориаз, болезнь Альцгеймера, аутоиммунный гепатит, ювенильный идиопатический артрит, спондилоартропатию, синдром Дауна, множественную системную атрофию, болезнь Паркинсона и деменцию с тельцами Леви. Поэтому изобретение относится к специфичной связывающей молекуле для применения с целью лечения или предотвращения заболеваний, выбранных из группы, включающей артрит, ревматоидный артрит, остеоартрит, рассеянный склероз, псориатический артрит, псориаз, болезнь Альцгеймера, аутоиммунный гепатит, ювенильный идиопатический артрит, спондилоартропатию, синдром Дауна, множественную системную атрофию, болезнь Паркинсона и деменцию с тельцами Леви. Изобретение конкретно относится к специфичным связывающим молекулам для лечения или предотвращения аутоиммунных заболеваний, более конкретно, ревматоидного артрита или остеоартрита. Рассеянный склероз, или MS, является хроническим воспалительным нарушением ЦНС, характеризующимся разрушением миелиновой оболочки, опосредованной аутоиммунной реакцией. Клетки миелиновой оболочки образуют структуру из многих бислоев вокруг аксонов, состоящую из липиднобелковых комплексов в соотношении примерно 3:1. Два основных белка, МВР и протеолипид, составляют 85% общей белковой фракции. МВР является сильно положительно заряженным белком, способным образовывать сильные взаимодействия с отрицательно заряженными фосфолипидами, такими как фосфатидилсерин. Примерно в 18% молекул МВР у здоровых взрослых людей 6 (из 19) остатков аргинина цитруллинированы (Wood et al., J Biol Chem, vol 264, 5121-5127, 1989, Wood et al., Ann Neurol, vol 40, 1824, 1996). Остальные молекулы МВР не содержат цитруллина. У больных MS пропорция MBP-cyt6 увеличена до 45% от всего МВР. Увеличенный общий положительный заряд MBP-cyt6 обусловливает частичное развертывание молекул МВР и ослабляет их взаимодействие с фосфолипидами (Boggs et al., JNeurosci Res, vol 57, 529-535, 1999, Pritzker et al., Biochemistry, vol 39, 5374-5381, 2000). Хотя MBP-cyt6 способен образовывать комплексы с липидами быстрее, чем нецитруллинированные МВР, образованные комплексы не так плотно упакованы, как комплексы, образованные с нецитруллинированным МВР(Boggs et al., J Neurosci Res, vol 57, 529-535, 1999, Beniac et al., J Struct Biol, vol 129, 80-95, 2000). MBPcyt6 деградирует в 4 раза быстрее с участием катепсина D, чем не содержащий цитруллина МВР (Cao etal., Biochemistry, vol 38, 6157-6163, 1999). В редком случае острого взрывного MS (типа Марбурга) 80% молекул МВР сильно цитруллинированы (MBP-cyt18) (Wood et al., Ann Neurol, vol 40, 18-24, 1996). Сильно развернутый белок MBP-cyt18 деградирует в 45 раз быстрее с участием катепсина D, чем нормальный МВР (Cao et al., Biochemistry, vol 38, 6157-6163, 1999). Проводятся клинические испытания с применением паклитакселя, активного компонента противоракового средства таксола (O'Connor et al.,Ann Neurol, vol 46, 470, 1999). Низкие дозы паклитакселя могут ингибировать цитруллинирование МВР с участием PAD2 in vitro (Pritzker et al., Biochim Biophys Acta, vol 1388, 154-160, 1998). Лечение паклитакселем облегчает клинические симптомы и индуцирует ре-миелинизацию поврежденных оболочек (Moscarello et al., Mult Scler, vol 8, 130-138, 2002), подчеркивая возможную важность PAD в качестве кандидата на роль фактора при заболевании, связанном с демиелинизацией (Moscarello et al., J Neurochem, vol 81, 335-343, 2002). При псориазе кератиноциты пролиферируют очень быстро и перемещаются из базального слоя на поверхность всего примерно за 4 дня. Кожа не может сбрасывать эти клетки достаточно быстро, так что они собираются в толстые сухие образования неправильной формы или пятна. В нормальных кератоцитах кератин К 1 подвергается цитруллинированию с участием PAD1 во время окончательной дифференциации. Этот процесс приводит к большей компактности филаментов кератина, что существенно для нормального процесса ороговения эпидермиса. Кератиноциты в псориатических гиперпролиферативных пятнах не содержат цитруллинированного кератина К 1 (Ishida-Yamamoto et al., J Invest Dermatol, vol 114,701-705, 2000). Неясно, предотвращает ли повышенная пролиферация клеток адекватное цитруллинирование с участием PAD или низкая активность PAD вызывает гиперпролиферацию и накопление кератиноцитов. Хотя механизм неизвестен, аберрантное цитруллинирование в пораженном псориазом эпидермисе с очевидностью связано с PAD1. В предпочтительном осуществлении композиция согласно изобретению находится в форме, выбранной из группы, включающей водный раствор, гель, гидрогель, пленку, пасту, крем, спрей, мазь или обертку (накладку). В дополнительных осуществлениях вышеуказанные способы применяют для введения композиции, описанной здесь, по пути, выбранному из внутрисуставного, внутрибрюшного, топикального, ректального, внутривенного, орального, окулярного или путем резекции края опухоли. В отдельных осуществлениях фармацевтически приемлемый носитель включает по меньшей мере один носитель, выбранный из группы, включающей раствор со-растворителя, липосомы, мицеллы, жидкие кристаллы, нанокристаллы, наночастицы, эмульсии, микрочастицы, микросферы, наносферы, нанокапсулы, полимеры или полимерные носители, поверхностно-активные вещества, супендирующие агенты, комплектующие агенты, такие как циклодекстрины, или адсорбирующие молекулы, такие как альбумин, поверхностно-активные частицы и хелатирующие агенты. В дополнительных осуществлениях полисахариды включают гиалуроновую кислоту и ее производные, декстран и его производные, целлюлозу и ее производные (например, метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, ацетат-фталат целлюлозы, ацетат-сукцинат целлюлозы, ацетат-бутират целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозу), хитозан и его производные, -глюкан, арабиноксиланы, карраген, пектин, гликоген, фукоидан, хондротин, дерматан, гепаран, гепарин, пентозан, кератан, алгинат, циклодекстрины и их соли и производные, включая сложные эфиры и сульфаты. В дополнительном аспекте способ согласно изобретению включает доставку композиции согласно изобретению к участку-мишени, в особенности в синовиальное соединение. В одном конкретном осуществлении настоящего изобретения специфичная связывающая молекула конкурирует с моноклональными антителами RhmAb2.102, RmmAb1.102, RhmAb2.103, RmmAb1.103,RhmAb2.104, RmmAb1.104, RhmAb2.105 и RhmAb2.107 за связывание с р 15 и/или р 17. Первичные последовательности мРНК вариабельных районов моноклональных антителRhmAb2.101, RhmAb2.103, RhmAb2.104, RmmAb1.101, RmmAb1.103 и RmmAb1.104 опубликованы и помещены в базу данных EMBL с инвентарными номерами, приведенными в табл. 1. Первичные последовательности вариабельных районов моноклональных антител RhmAb2.102, RmmAb1.102, RhmAb2.105 и RhmAb2.107 раскрыты здесь согласно SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 и SEQ ID NO: 42. Изобретение, таким образом, относится к полипептидам, включающим вариабельную легкую или тяжелую цепь согласно SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 39,SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 и SEQ ID NO: 42. Изобретение также относится к нуклеиновой кислоте,кодирующей полипептид, согласно SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 и SEQ ID NO: 42. В другом предпочтительном осуществлении специфичная связывающая молекула представляет собой антитело, выбранное из группы, включающей моноклональные антитела RhmAb2.102, RmmAb1.102,RhmAb2.103, RmmAb1.103, RhmAb2.104, RmmAb1.104, RhmAb2.105 и RhmAb2.107. В другом предпочтительном осуществлении специфичная связывающая молекула включает VH и/или VL домены, полученные из антител, выбранных из группы, включающей моноклональные антитела RhmAb2.102, RmmAb1.102, RhmAb2.103, RmmAb1.103, RhmAb2.104, RmmAb1.104, RhmAb2.105 иRhmAb2.107. Специфичные связывающие молекулы согласно изобретению можно получать в основном двумя путями. Во-первых, их можно получать из антител и их последовательностей, представленных здесь. Реактивность антител можно дополнительно улучшить с помощью сайт-направленного мутагенеза, перестановки участков цепей (chain shuffling), полового ПЦР (sexual PCR) или другими способами, применяемыми для получения антител и их оптимизации, известными специалисту в данной области техники. Альтернативно, специфичные связывающие молекулы, конкретно, антитела, можно получать путем пэннинга ("просеивания") с применением любого из специфичных реактивных эпитопов, как описано здесь,конкретно, с обработанными PAD4 гистоном 2 А, пептидом 1 (SEQ ID NO: 21) и другими особенно реактивными пептидами. Термин "полученный из" в данном контексте означает, что важные остатки, ответственные за свойства специфичного связывания VH и/или VL доменов конкретного антитела, идентифицированы и что эти важные остатки затем перенесены в окружение/контекст другого пептида. Специалист в данной области техники может применять последовательности, описанные здесь, для клонирования или получения кДНК или геномных последовательностей, например, таких, как описано в нижеприведенных примерах. Клонирование этих последовательностей в соответствующие эукариотические экспессирующие векторы, такие как pcDNA3 (In Vitrogen) или их производные, и последующая двойная трансфекция клеток млекопитающих (таких как клетки СНО) в сочетании с векторами, содержащими соответствующие легкую и тяжелую цепи, приведет к экспрессии и секреции перечисленных антител RhmAb2.101, 2.102, 2.103, 2.104, 2.105 и/или 2.107 и RmmAb1.101, 1.102, 1.103, 1.104. Специалист может также получать аналоги специфичных связывающих молекул, как описано здесь,путем применения специфичных связывающих доменов последовательностей антител и экспрессировать их в другом окружении, таком как полипептид, например слитый белок. Это хорошо известно в данной области техники. Рекомбинантные человеческие и мышиные моноклональные антицитруллиновые антитела получают, как описано в примерах 1 и 15. Моноклональные антитела получают с Fc районом человеческогоIgG1 (RhmAb2.101, RhmAb2.102, RhmAb2.103, RhmAb2.104, RhmAb2.105 и RhmAb2.107) и Fc районом мышиного IgG2a (RmmAb1.101, RmmAb1.102, RmmAb1.103 и RmmAb1.104). Пары человеческих и мышиных рекомбинантных антител (RhmAb2.101 и RmmAb1.102, RhmAb2.102 и RmmAb1.102,RhmAb2.103 и RmmAb1.103 и RhmAb2.104 и RmmAb1.104) содержат идентичные VH и VL домены, но содержат Fc домены человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 14) или мышиного IgG2a (SEQ ID NO:20) соответственно. Три пары человеческих и мышиных моноклональных антител проанализированы с помощью вестерн-блоттинга и обнаружено, что каждая пара обладает одинаковой специфичностью относительно соответствующих антигенов. Мышиные моноклональные антицитруллиновае антитела RmmAb13.101, RmmAb13.102 иRmmAb13.103 получают из коммерческого источника (ModiQuest Research BV Nijmegen, TheNetherlands; Cat no, MQ13.101, MQ13.102 and MQ13.103). Антитела против цитруллина тестируют в экспериментальной модели, в которой воспаление индуцируют путем инъекции антител против коллагена мышам. Эта модель известна как индуцированный антителами против коллагена артрит CAIA (Nandakumar and Holmdahl, J Immunol Methods, vol 304, 126136, 2005). Антитела против коллагена получают из коммерческого источника (ModiQuest Research BVNijmegen, The Netherlands; Cat no, MQ18.101). Подтверждено, что мышиные моноклональные антитела против цитруллина RmmAb13.101,RmmAb13.102 и RmmAb13.103 усиливают тяжесть индуцированного антителами против коллагена артрита, как было описано также Kuhn et al. (J. Clin. Invest, vol 116, 961-871, 2006); и Hill et al. (J Exp Med,vol 205, 967-979, 2008). Это показано на фиг. 1 а и 1 б. Дополнительно, ряд обследований больных людей указывает на то, что антитела против цитруллинированных эпитопов усиливают патогенез RA (Masson-Bessire et al., J. Immunol, vol 166, 4177-4184,2001; Vossenaar and van Venrooij, Arthritis Res Ther, vol 6, 107-11:1, 2004). Это показано на фиг. 1 а и 1b,где приведены "средний балл артрита" и "встречаемость артрита" соответственно в одном и том же эксперименте. Неожиданно, однако, человеческие моноклональные антитела RhmAb2.104 и RhmAb2.105 уменьшают клинические проявления артрита в экспериментальной модели CAIA, тогда как RhmAb2.103,RhmAb2.102 и RhmAb2.107 даже устраняют клинические проявления артрита в экспериментальной модели CAIA.RhmAb2.103 и RhmAb2.102 ведут себя одинаково, только результаты, полученные с RhmAb2.102,приведены на фиг. 1C и 1D. Результаты, полученные с RhmAb2.105 и RhmAb2.107, приведены на фиг. 10. Человеческое моноклональное антитело RhmAb2.101 не оказывает никакого действия на клинические проявления артрита в примененных дозах. Доступное в продаже антитело RhmAb2.201 применяется в качестве нерелевантного контрольного антитела в данном эксперименте (ModiQuest Research B.V., catno: MQR2.201). Это антитело не узнает цитруллинированные эпитопы. Такие же эксперименты проведены с эквивалентными мышиными Fc IgG2a моноклональными антителами RmmAb1.101, RmmAb1.102, RmmAb1.103 и RmmAb1.104, содержащими идентичные VH и VL домены по сравнению с соответствующими человеческими антителами, и также узнают те же эпитопы,как и соответствующие им человеческие антитела. Получены такие же результаты, как и в случае соответствующих им человеческих антител. RmmAb1.102, RmmAb1.103 и RmmAb1.104 снимаютRmmAb1.101 не оказывает никакого действия. На фиг. 1E и 1F показаны независимые CAIA эксперименты, в которых оценивают клиническую дозу RhmAb2.102. Наименьшая доза, дающая максимальное ингибирование, составляет 0,5 мг антитела/мышь, что соответствует 28 мг/кг при i.p. инъекции. На основании этих экспериментов сделано заключение, что специфичные эпитопы, узнаваемые моноклональными антителами, выбранными из группы, включающей RhmAb2.102, RhmAb2.103,RhmAb2.104, RmmAb1.102, RmmAb1.103, RmmAb1.104, RhmAb2.105 и RhmAb2.107, играют важную роль в лечении или предотвращении воспалительных заболеваний. Для того чтобы дополнительно анализировать антиген или антигены, узнаваемые этими моноклональными антителами, их тестируют на реактивность по отношению к клеточным экстрактам, которые деиминированы с помощью пептидиларгининдеиминазы (фермента PAD), как описано в примере 3. Вестерн-блоты, содержащие hPAD2 или hPAD4 трансфицированные COS-1 лизаты, которые деиминированы после лизиса, инкубируют с моноклональными антителами RhmAb2.101, RhmAb2.102, RhmAb2.103 иRhmAb2.104 демонстрируют реактивность дублета белков с молекулярным весом примерно 15 и 17 кДа.WO 2004/078098 раскрывает тот факт, что антитела, специфичные для цитруллинированных комплексов пептид/МНС класса II, ингибирует активацию Т-клеток. Эти антитела не связываются с отдельными молекулами пептида или МНС класса II, но только с комплексом пептида и МНС класса II молекул. Раскрытые в данном описании антитела отличаются от антител, раскрытых в WO 2004/078098, поскольку они узнают индивидуальные пептиды и белки, как раскрыто здесь. Дополнительно, антитела узнают полипептид на вестерн-блоте, где не может быть комплекса между пептидом и МНС класса II молекулой, поскольку комплекс МНС молекулы с цитруллинированным пептидом не способен существовать в восстановительных условиях электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН(SDS-PAGE), применяемых в процедуре иммуноблоттинга. Эпитопы, узнаваемые связывающими молекулами, как раскрыто здесь, являются поэтому отличными от таковых, узнаваемых антителами, раскрытыми в WO 2004/078098. Более того, антитела, как раскрыто здесь, не являются специфически реактивными по отношению к комплексу пептида и МНС класса II молекул. Вышеописанные опыты и соображения привели нас к заключению, что имеется четкая корреляция между способностью предотвращать клинические признаки воспалительных заболеваний и реактивностью по отношению к цитруллинированным эпитопам на р 15 и р 17. Сходные данные получены, когда человеческие моноклональные антитела RhmAb2.101,RhmAb2.102, RhmAb2.103 и RhmAb2.104 и мышиные моноклональные антитела RmmAb1.101,RmmAb1.102, RmmAb1.103 и RmmAb1.104 применяют в опытах по иммунопреципитации, как детально описано в примере 5. Реакция иммунопреципитации с антителами RhmAb2.102, RmmAb1.102, RhmAb2.103 иRmmAb1.103 COS-1 лизатов, деиминированных с помощью обеих человеческих PAD2 и PAD4, выявляет интенсивные полосы белков р 15 и р 17. Эти полосы несколько менее заметны, когда иммунопреципитацию проводят с RhmAb2.104 и RmmAb1.104. Поэтому степень узнавания белков р 15 и р 17 представляется хорошо коррелирующей с терапевтическими свойствами этих антител (фиг. 1A-D). Является или нет антитело реактивным по отношению к р 15 и р 17, можно легко установить путем проведения иммунопреципитации или анализа вестерн-блотов, как детально описано в примерах 4 и 5. Альтернативно, можно проводить эксперименты по конкуренции с RhmAb2.102, RhmAb2.103 илиRhmAb2.104 с применением вестерн-блотов, содержащих деиминированые COS-1 лизаты, как описано в примере 6, или очищенные деиминированные белки р 15 и/или р 17 при вестерн-блоттинге или с помощью ELISA. Белки р 15 и р 17 дополнительно характеризуются с помощью масс-спектрометрии с ассистируемой матриксом лазерной десорбции/ионизации с регистрацией времени полета (Matrix-assisted laserdesorption/ionisation-time of flight mass spectrometry) (MALDI-TOF MS), как детально описано в примере 7. Поскольку геном африканской зеленой обезьяны секвенирован не полностью, мы провели скрининг всех баз данных геномов млекопитающих на предмет гомологии с пептидами, обнаруженными с помощью MALDI-TOF MS. Обнаруженные белки с высокой степенью гомологии оказались гистонами. Это показано в табл. 3 (пример 7). Поэтому изобретение также относится к связывающим молекулам со специфичной реактивностью по отношению к цитруллинированным эпитопам на гистонах с целью применения для лечения или предотвращения воспалительных заболеваний. Цитруллинирование гистонов с помощью ферментов PAD хорошо документировано и поэтому цитруллинированные гистоны можно успешно получать in vitro. Эти цитруллинированные гистоны можно затем применять в качестве субстратов в ферментативном анализе связывания для скрининга и отбора специфичных связывающих молекул, таких как пептиды и антитела, реактивных в отношении эпитопов на цитруллинированных р 15 и р 17, т.е. гистонах. Предпочтительно отбирают специфичные связывающие молекулы, которые конкурируют с антителами RhmAb2.102, RmmAb1.102, RhmAb2.103,RmmAb1.103, RhmAb2.104, RmmAb1.104 и RhmAb2.105 и RhmAb2.107 за связывание с p15 и/или p17. В настоящем документе и в формуле изобретения глагол "включать" и его грамматические формы применяется в своем неограничивающем значении, так что следующие за ним наименования включены,но не упомянутые наименования не считаются исключенными. Дополнительно, ссылка на элемент не исключает возможности того, что присутствует более одного элемента, если контекст не требует присутствия одного и только одного элемента. Таким образом один элемент обычно означают "по меньшей мере один". Для дальнейшего анализа того, какой из деиминированных гистонов участвует в терапевтическом действии RhmAb2.102 и RhmAb2.104, доступные в продаже гистоны (H1, Н 2 А, Н 2 В, Н 3 и Н 4) подвергают деиминированию с помощью человеческих пептидиларгининдеиминаз (PAD, EC 3.5.3.15) (huPAD2 или huPAD4). Деиминированные, а также не-деиминированные гистоны наносят на 96-луночные планшеты ELISA и инкубируют с серийными разведениями RhmAb2.101, RhmAb2.102 и RhmAb2.104. Результаты приведены в табл. 6 и на фиг. 2. Из результатов, показанных на фиг. 2, очевидно, что деиминированный с помощью huPAD4 гистон 2 А (Н 2 А/р 4) лучше всего узнается терапевтическими антителами RhmAb2.102 и RhmAb2.104, но неRhmAb2.101 (фиг. 2A, 2B и 2C). Дополнительно, RhmAb2.102 обладает более высоким сродством к Н 2 А/р 4 по сравнению с RhmAb2.104 (фиг. 2B и 2C). Эти данные коррелируют с действием этих антител на клинические признаки артрита в экспериментальной модели CAIA, в которой RhmAb2.102 снимает,RhmAb2.104 уменьшает и RhmAb2.101 не оказывает действия на клинические проявления артрита (фиг. 1C и 1D). Таким образом мы показали, что деиминированный эпитоп на Н 2 А/р 4 или его структурные миметики играют ведущую роль в воспалительном каскаде при RA. То же верно для деиминированных эпитопов на Н 3/р 2, Н 4/р 2 и Н 4/р 4, поскольку RhmAb2.102 проявляет большее сродство к этим гистонам, чемRhmAb2.104 и RhmAb2.101 (фиг. 2A, 2B и 2C). Миметиком является, например, молекула с приемлемым уровнем эквивалентной активности, в данном случае это включало бы узнавание антителами RhmAb2.102 с более высоком сродством, чем антителами RhmAb2.104 и RhmAb2.101. Поэтому изобретение относится к специфичной связывающей молекуле, как описано выше, реактивной по отношению к цитруллинированным эпитопам на деиминированным с помощью PAD4 человека человеческом гистоне на А или гистоне 4, или на деиминированным с помощью PAD2 человека человеческом гистоне Н 4 или гистоне Н 3. Для дальнейшего выявления точного нахождения цитруллинированного эпитопа на Н 2 А, узнаваемого RhmAb2.102 и RhmAb2.104, синтезированы меченные биотином пептиды, содержащие все 13 потенциальных участков деиминирования гистона 2 А (табл. 4). Эти пептиды наносят на 96-луночный планшет ELISA с нейтравидином и инкубируют с серийными разведениями RhmAb2.101, RhmAb2.102 иRhmAb2.104. Результаты показаны на фиг. 3. Таблица 6A Реактивность деимированных гистонов с RhmAb2.101, показанная на фиг. 2A Таблица 6 В Реактивность деимированных гистонов с RhmAb2.102, показанная на фиг. 2B Таблица 6 С Реактивность деимированных гистонов с RhmAb2.104, показанная на фиг. 2C Таблица 7 Реактивность отобранных пептидов с mAbs RhmAb2.102, RhmAb2.104 и RhmAb2.101, как указано Таблица 8 Реактивность отобранных пептидов с mAbs RhmAb2.102, RhmAb2.104 и RhmAb2.101, как указаноRhmAb2.102 и RhmAb2.104, но не RhmAb2.101 (табл. 4 и фиг. 3A, 3B и 3C). Опять RhmAb2.102 показывает более высокое сродство по сравнению с RhmA.b2.104 (фиг. 3B и 3C). То же остается в силе для деиминированных эпитопов на пептидах 4 и 6 (табл. 4), поскольку RhmAb2.102 проявляет более высокое сродство к этим пептидам, чем RhmAb2.104 и RhmAb2.101 (фиг. 2A, 2B и 2C). Таким образом мы показали, что деиминированный эпитоп или его структурные эквиваленты или миметики на пептидах 1, 4 и 6 играют ключевую роль в воспалительном каскаде RA. Этот образец узнавания антителами очень сходен с образцом узнавания Н 2 А/р 4. Поэтому мы делаем вывод, что специфичные связывающие молекулы согласно изобретению можно также определять по их реактивности относительно пептидов 1, 4 и 6; SEQID NO: 21, SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 26 соответственно. Каждый из этих пептидов индивидуально может применяться для получения специфичных связывающих молекул, таких как антитела, согласно изобретению. Такие антитела можно затем отбирать для любого из других антигенов, как раскрыто здесь, для оптимизации реактивности. Таблица 4 Содержащие цитруллин пептиды гистона 2 А Меченные биотином и содержащие цитруллин пептиды фибриногена и виментина (табл. 5) также тестируют на реактивность с терапевтическими антителами. Пептиды наносят на 96-луночные планшеты для ELISA. Затем на такие планшеты помещают серийные разведения RhmAb2.101, RhmAb2.102 иRhmAb2.101, RhmAb2.102 и RhmAb2.104 (фиг. 4A, 4B и 4C). Опять RhmAb2.102 демонстрирует наиболее высокое сродство по сравнению с RhmAb2.104 и RhmAb2.104 проявляет себя немного лучше, чемRhmAb2.101 (фиг. 4A, 4B и 4C). Этот образец узнавания антителами сходен с образцом, наблюдаемым на вестерн-блотах, с нанесенным деиминированным с помощью huPAD2 и HuPAD4 фибриногеном человека. Дополнительно, только RhmAb2.102 узнает пептид мышиного виментина (пример 10). Вероятно, помимо вышеуказанных пептидов, деиминированные эпитопы на пептидах msFib (SEQ ID NO: 37) иmsVim (SEQ ID NO: 38) также играют ключевую роль в воспалительном каскаде RA. Однако, в этой связи также не исключается, что другие эпитопы на фибриногене и виментине играют роль в противовоспалительных эффектах рассматриваемых терапевтических антител. Поэтому изобретение также относится к специфичным связывающим молекулам, как описано выше, которые обладают специфичной реактивностью по отношению к эпитопу на пептидах msFib илиmsVim (SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 38) и к их применению. Дополнительно мы показали, что цитруллинированные эпитопы появляются de novo в воспаленных тканях. В экспериментальной модели ревматоидного артрита у мышей нам удалось показать, что цитруллинированные пептиды из воспаленных передних лап пораженных мышей вступают в реакцию иммунопреципитации с человеческим моноклональным антителом 102 (RhmAb2.102). Таким образом проводят типичный эксперимент CAIA, в котором мышам (три мыши в группе) инъецируют i.p. смесь из восьми антител против коллагена (2,8 мг/мышь) на день 0. Через три дня мыши получают i.p. инъекцию, содержащую 25 мкг LPS. Оценку проводят, как описано выше. Во время этого эксперимента каждый день забивают группу мышей и анализируют присутствие цитруллина в лапах с помощью вестерн-блоттинга и иммуногистохимических подходов. В каждой группе мышей передние лапы объединяют и получают экстракт. Иммунопреципитацию (ИП) проводят с этими экстрактами, применяя 20 мкг RhmAb2.102 на реакцию. Преципитаты подвергают электрофорезу SDS-PAGE и переносят на нитроцеллюлозные мембраны с помощью техники вестерн-блоттинга. Блоты вначале окрашивают с помощью Понсо-С (Ponceau S) для общего определения белка. Окрашивание Ponceau S проводят, чтобы проверить, что для каждой реакции ИП применяется одинаковое количество антитела. Тяжелые и легкие цепи антител наблюдаются в одинаковых количествах. Затем остатки цитруллина, присутствующие на блоте, подвергают химической модификации поSenshu et al. (Senshu et al., Anal Biochem, vol 203, 94-100, 1992). Далее эту химическую модификацию можно визуализовать с помощью антитела, которое узнает химическую модификацию остатков цитруллина (Senshu et al., Anal Biochem, vol 203, 94-100, 1992). Деиминированный фибриноген применяют в качестве положительного контроля в этих экспериментах. Иммунопреципитацию без экстрактов применяют в качестве отрицательного контроля в этих экспериментах. Начиная со дня 4, появляются заметные полосы на блоте в положениях, соответствующих белкам с молекулярным весом 50, 15 и 17 кДа. Эти полосы становятся более интенсивными на день 5 и еще интенсивнее на день 6. Встречаемость артрита в эксперименте составляет 100%, причем обычный балл артрита у мышей достигает 5+ на день 6 (фиг. 5 А и 5 В). Количество преципитированного белка возрастает со временем,- 11023302 что видно на образцах за дни от 4 до 6. Принимая во внимание специфичность RhmAb2.102 к цитруллину и присутствие сигналов на блоте, полученном с антителами к химически модифицированному цитруллину, можно заключить, что у мышей, подвергнутых CAIA, имеются различимые уровни цитруллина в воспаленных суставах. Иммунохимический анализ проводят также для задних лап тех же мышей. Срезы инкубируют сRhmAb2.104. Результаты получают с помощью анализа вестерн-блота. Модифицированный цитруллин можно детектировать в белках с кажущимся молекулярным весом примерно 50, 15 и 17 кДа в образцах,полученных на день 4-6, что позволяет заключить, что цитруллинированные эпитопы, реактивные и способные к иммунопреципитации с RhmAb2.102, появляются de novo в воспаленных суставах, в данном случае в задних лапах мышей с экспериментально индуцированным артритом. В описанных выше экспериментах с CAIA антитела против цитруллина инъецируют на 3 день после инъекции антител против коллагена, когда воспаление в лапах мышей отсутствует или очень небольшое. Это предотвращает появление клинических симптомов и поэтому является полезным в качестве лечения воспаления, конкретно, профилактической обработки. Поэтому мы хотели исследовать, может ли RhmAb2.102 также излечивать клинические симптомы,когда они уже появились. Это делается путем обработки животных на день 7 после инъекции антител против коллагена, когда средний балл артрита по всем четырем лапам у всех мышей достигает условного балла примерно 4. Как показано на фиг. 6 А и 6 В, RhmAb2.102 не вызывает исчезновения наблюдаемого отека/опухания, а скорее стабилизирует имеющееся воспаление/опухание. За животными наблюдают в течение 35 дней, после чего степень воспаления среди мышей, получавших плацебо и RhmAb2.102, оказывается одинаковой (фиг. 6 В и пример 12). На фиг. 6 А показан средний балл артрита для всех лап в каждой группе, а на фиг. 6 В показан средний балл артрита задних лап животных, которые применяют для гистологического анализа на день 35. Гистологический анализ правых задних лап всех животных проводят, чтобы выяснить, может лиRhmAb2.102 на день 7 защитить мышей от необратимого повреждения суставов (фиг. 7). На фиг. 7 А показано, что макроскопическая картина воспаления в правой задней лапе экспериментальных групп на день 35 эксперимента оказывается сходной. Наиболее неожиданно, однако, то, что все известные параметры эрозии сустава оказываются уменьшенными. При оценке входа воспалительных клеток (D), эрозии хряща (В), утраты хрящом PG (Е), гибели хондроцитов (F) и эрозии кости (С) наблюдается их драматическое уменьшение в экспериментальной группе, которая получила RhmAb2.102 на день 7, указывая на то, что RhmAb2.102 обладает большим терапевтическим потенциалом с точки зрения предотвращения повреждения суставов во время воспаления (пример 12). Поэтому изобретение относится к способу предотвращения или лечения разрушения суставов путем введения связывающей молекулы, как описано здесь, пациенту, который в этом нуждается. Проведены дополнительные эксперименты CAIA для исследования терапевтического действия введения RhmAb2.102 на день 5, 6 и 7 соответственно (фиг. 8). В этом эксперименте RhmAb2.102 инъецируют i.v. с целью быстрой доставки антител к участкам воспаления. В этот эксперимент включена группа, получившая профилактическую инъекцию на день 3, и группа контроля, не получившая лечения. Экспериментальные процедуры проводят, как в примере 12, с той только разницей, что инъекции 1 мгRhmAb2.102 на мышь делают на день 3, 5 и 6. Как ожидалось, RhmAb2.102 на день 3 ингибирует воспалительный ответ. Введение мышам i.v. инъекций RhmAb2.102 на день 5, 6 или 7 стабилизирует воспаление (фиг. 8), что также видно на фиг. 6. Важно заметить, что признаки воспаления не уменьшаются, хотя все параметры эрозии сустава уменьшены. Это показывает, что эрозия сустава и воспаление представляют собой разные явления, которые можно лечить по отдельности. В следующей серии экспериментов CAIA мы исследовали возможность уменьшения уровней воспаления с помощью дексаметазона и предотвращения рецидива воспаления после прекращения лечения дексаметазоном путем одновременной с дексаметазоном инъекции RhmAb2.102 на день 5, 6 или 7 (фиг. 9). Дексаметазон является основным ингибитором воспаления, который надо вводить ежедневно. Как только лечение прерывается, воспаление возобновляется. Проведены экспериментальные процедуры, как описано в примере 12, с тем отличием, что i.v. инъецируют 1 мг RhmAb2.102 на день 5 (фиг. 9 А), день 6(фиг. 9 В) и день 7 (фиг. 9G) после инъекции антител против коллагена одновременно с i.p. инъекциями дексаметазона (2 мг/кг). Дексаметазон вводят последовательно в течение 2 или 3 дней до тех пор, пока не исчезнет распухание лап. Дополнительные группы животных получают только i.p. инъекции дексаметазона. Как показано на фиг. 9, воспаление возобновляется у мышей, не получавших RhmAb2.102. Однако,в полной противоположности этому, когда дексаметазон комбинируют с RhmAb2.102, рецидив воспаления гораздо слабее и наступает позже по сравнению с мышами, получавшими только дексаметазон. Это становится наиболее очевидным, когда начинают комбинированное лечение RhmAb2.102 и дексаметазоном на день 6 или 7 (фиг. 9 В и 9 С). Эксперименты, приведенные на фиг. 9, показывают, что новый способ лечения воспалительных заболеваний, при котором ингибитор воспаления, такой как дексаметазон,можно применять для лечения вспышек воспаления, и RhmAb2.102 можно применять для предотвращения рецидивов воспаления, предотвращает разрушение ткани/сустава. Поэтому изобретение относится к способу лечения воспаления и повреждения сустава путем одновременного введения ингибитора воспаления вместе со связывающей молекулой, описанной здесь. В другом эксперименте CAIA два новых антитела против цитруллина (RhmAb2.105 и RhmAb2.107),которые демонстрируют перекрестную реактивность с RhmAb2.102 в отношении их антигенов, отличающихся от RhmAb2.101, тестируют на наличие противовоспалительного действия. RhmAb2.105,RhmAb2.107 и RhmAb2.102 (положительный контроль) инъецируют i.v. на день 3 (1 мг/мышь) после инъекции антител против коллагена в отдельных экспериментальных группах (фиг. 10). Экспериментальные процедуры проводят, как описано в примере 12. На фиг. 10 показан средний балл артрита для всех лап в каждой группе. Представляется, что RhmAb2.102 проявляет наивысшее противовоспалительное действие.RhmAb2.107 проявляет себя почти так же хорошо, как RhmAb2.102, и RhmAb2.105 проявляет промежуточное действие, сходное с наблюдаемым ранее для RhmAb2.104 (фиг. 1C). Дополнительные деиминированные белки, которые потенциально связываются с RhmAb2.102,идентифицированы с помощью масс-спектрометрического анализа. Дополнительно, деиминированные белки, которые предпочтительно связываются с RhmAb2.102 и не связываются или связываются в меньшей степени с RhmAb2.101, также идентифицированы с помощью масс-спектрометрического анализа. Деиминированные с помощью PAD4 человека лизаты почечных клеток эмбрионов человека (HEK293) подвергают иммунопреципитации с RhmAb2.101 или RhmAb2.102 (пример 13) и подвергают хроматографии с применением системы высокого пропускания nano-LC, соединенной с масс-спектрометром усовершенствованным высокого разрешения, применяющим ионный циклотронный резонанс с преобразованием Фурье (LTQ Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass spectrometer) (nLC LTQ FTMS ULTRA) (пример 14). Его сверхвысокое разрешение по массам, точность определения масс и чувствительность в сочетании с расчетами экспоненциально модифицированного индекса распространенности белка(Exponentially Modified Protein Abundace Index) (emPAI) позволяют идентифицировать деиминированные белки, которые (предпочтительно) связываются с RhmAb2.102. Результаты показаны в табл. 7 (примеры 13 и 14). Таким образом, изобретение также относится к связывающей молекуле, специфически реактивной по отношению к любому белку или полипептиду, приведенному в табл. 7, для применения с целью предотвращения или лечения воспалительного заболевания. В итоге, мы показали, что связывающая молекула, специфически реактивная по отношению к эпитопу на молекуле, выбранной из группы, включающей р 15, р 17, более конкретно, цитруллинированный эпитоп на деиминированном с помощью PAD4 человека человеческом гистоне 2 А, цитруллинированный эпитоп на деиминированном с помощью PAD4 человека человеческом гистоне 4, цитруллинированный эпитоп на деиминированном с помощью PAD2 человека человеческом гистоне Н 4, цитруллинированный эпитоп на деиминированном с помощью PAD2 человека человеческом гистоне Н 3 или белок, выбранный из группы, включающей белки из табл. 7, и еще более конкретно пептиды согласно SEQ ID NO: 21, SEQID NO: 24, SEQ ID NO 26, SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 38, можно применять для лечения или предотвращения воспалительных заболеваний, указанных здесь. Является ли данная связывающая молекула специфически реактивной в отношении вышеуказанных молекул, модно легко определить путем анализа способности связывающей молекулы конкурировать с антителом, выбранным из группы, состоящей изRhmAb2.107, за связывание с эпитопом на р 15 или р 17 или с любым другим цитруллинированным эпитопом, указанным выше. Теперь, когда эффективность связывающей композиции согласно изобретению показана, специалисту в данной области техники очевидно, что воспалительные заболевания можно также лечить или предотвращать путем индукции иммунного ответа, при котором специфичные связывающие молекулы согласно изобретению генерируются в собственном организме больного (in vivo). Такой иммунный ответ можно генерировать для предотвращения возникновения воспалительного заболевания (профилактика,профилактические вакцины) или для облегчения или уменьшения последствий воспалительного заболевания, т.е. терапии. Таким образом, изобретение также относится к способу предотвращения или лечения воспалительных заболеваний путем индукции иммунного ответа in vivo, при котором генерируются специфичные связывающие молекулы, реактивные относительно эпитопа, выбранного из группы, включающей р 15,р 17, цитруллинированный эпитоп на деиминированном с помощью PAD4 человека человеческом гистоне 2 А, на деиминированном с помощью PAD4 человека человеческом гистоне 4, на деиминированном с помощью PAD2 человека человеческом гистоне Н 4, на деиминированном с помощью PAD2 человека человеческом гистоне Н 3 и пептиды согласно SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO 26, SEQ IDNO: 37 и SEQ ID NO: 38. Вакцины или терапевтические средства согласно изобретению могут эффективно включать цитруллинированный эпитоп, специфически реактивный со связывающей молекулой согласно изобретению. Более конкретно, цитруллинированный эпитоп может быть цитруллинированным эпитопом на деиминированном с помощью PAD4 человека человеческом гистоне 2 А, или на гистоне 4, или на человеческом гистоне Н 4, или на человеческом гистоне Н 3, или на пептиде, выбранном из группы, состоящей из SEQID NO: 21, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO 26, SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 38. Соответственно можно лечить или предотвращать большое число связанных с цитруллином воспалительных заболеваний. Так, изобретение также относится к способу, как описано выше, при котором воспалительное заболевание выбирают из группы, включающей аутоиммунные заболевания, артрит,ревматоидный артрит, остеоартрит, рассеянный склероз, псориатический артрит, псориаз, болезнь Альцгеймера, аутоиммунный гепатит, ювенильный идиопатический артрит, спондилоартропатию, синдром Дауна, множественную системную атрофию, болезнь Паркинсона и деменцию с тельцами Леви. Конкретно предпочтительным является предотвращение или лечение аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит. Поскольку осуществление изобретения относится к иммунному ответу in vivo, предпочтительной связывающей молекулой является антитело. Краткое описание фигур Фиг. 1. - модель артрита, индуцированного антителами против коллагена (CAIA), применяют для тестирования действия восьми моноклональных антител на тяжесть симптомов артрита. Показан средний балл артрита (фиг. 1A, 1C и 1E) и встречаемость артрита (фиг. 1B, 1D и 1F). Группам из 5-6 мышей на день 0 делают i.p. инъекции антител против коллагена. Мыши, применяемые в опытах, показанных на фиг. 1A и 1B, получают 1,6 мг смеси антител против коллагена, тогда как мышам для опытов, показанных на фиг. 1C-F, вводят 2,4 мг LPS (25 мкг/мышь) вместе с антителами против цитруллина или с контрольными антителами (RhmAb2.201) на день 3 путем i.p. инъекции. Все антитела вводят в количестве 1 мг/мышь, если на фиг. не указано другое. Состояние животных оценивают ежедневно до дня 13. Антитела RhmAb2.102 и RhmAb2.103 проявляют себя одинаково хорошо, данные приведены только для антитела RhmAb2.102. To же верно для антител RmmAb1.102 и RmmAb1.103; они проявляют себя одинаково хорошо, данные приведены только для RmmAb1.102. Фиг. 2. - анализ с помощью связанного с ферментом иммуносорбента (ELISA) применяют для тестирования сродства a) RhmAb2.101, б) RhmAb2.102 и в) RhmAb2.104 в отношении человеческих рекомбинантных гистонов (H1, Н 2 А, Н 2 В, Н 3 и Н 4), деиминированных с помощью huPAD2 или huPAD4. Деиминированные, а также недеиминированные гистоны иммобилизуют на 96-луночных планшетах ELISA(0,3 мкг/лунку). CFC-1 и CFC-0 наносят в той же концентрации и они служат в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно для специфичной антицитруллиновой реактивности и в качестве контроля для нанесения. Лунки без нанесения применяют для тестирования неспецифичного связывания антител. Лунки с нанесением инкубируют с серийными разведениями антител от 10 мкг/лунку с понижением до 0,0001288 мкг/лунку в течение 1 ч при КТ (ось z). Определение связанных антител против цитруллина проводят путем инкубации лунок с кроличьим антителом против человеческого иммуноглобулина, конъюгированным с HRP, (1:2000) в течение 1 ч при КТ с последующей инкубацией с субстратом ТМВ. Полученная оптическая плотность (OD) (ось у) является мерой связывания антител. Н 1 рекомбинантный гистон 1; Н 1/р 2 - обработанный huPAD2 рекомбинантный гистон 1; Н 1/р 4 - обработанный huPAD4 рекомбинантный гистон 1 и так далее (ось х). Фиг. 3. - анализ с помощью связанного с ферментом иммуносорбента (ELISA) применяют для тестирования сродства a) RhmAb2.101, б) RhmAb2.102 и в) RhmAb2.104 к содержащим цитруллин пептидам, полученным из человеческих гистонов Н 2 А. Пептиды, содержащие биотин и цитруллин, полученные из гистона 2 А, иммобилизуют на покрытых нейтравидином 96-луночных планшетах ELISA (0,3 мкг/лунку). CFC-1 и CFC-0 наносят в той же концентрации и они служат в качестве положительного и отрицательного контроля, соответственно для специфичной антицитруллиновой реактивности и в качестве контроля нанесения. Лунки без нанесения применяют для тестирования неспецифичного связывания антител. Лунки с нанесением инкубируют с серийными разведениями антител от 10 до 0,0001288 мкг/лунку в течение 1 ч при КТ (ось z). Определение связанных антител против цитруллина проводят путем инкубации лунок с кроличьим антителом против человеческого иммуноглобулина, конъюгированным с HRP, (1:2000) в течение 1 ч при КТ с последующей инкубацией с субстратом ТМВ. Полученная оптическая плотность (OD) (ось у) является мерой связывания антител. Фиг. 4. - анализ с помощью связанного с ферментом иммуносорбента (ELISA) применяют для тестирования сродства a) RhmAb2.101, б) RhmAb2.102 и в) RhmAb2.104 к содержащим цитруллин пептидам, полученным из фибриногена и виментина. Пептиды, содержащие биотин и цитруллин, полученные из фибриногена и виментина, иммобилизуют на покрытых нейтравидином 96-луночных планшетах ELISA (0,3 мкг/лунку). CFC-1 и CFC-0 наносят в той же концентрации и они служат в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно для специфичной антицитруллиновой активности и в качестве контроля нанесения. Лунки без нанесения применяют для тестирования неспецифичного связывания антител. Лунки с нанесением инкубируют с серийными разведениями антител от 10 до 0,0001288 мкг/лунку в течение 1 ч при КТ (ось z). Определение связанных антител против цитруллина проводят путем инкубации лунок с кроличьим антителом против человеческого иммуноглобулина, конъюгированным с HRP, (1:2000) в течение 1 ч при КТ с последующей инкубацией с субстратом ТМВ. Полученная оптическая плотность (OD) (ось у) является мерой связывания антител. Фиг. 5. - модель артрита, индуцированного антителами против коллагена, (CAIA) применяют для исследования появления цитруллина в лапах. Группы из 3 мышей получают на день 0 по 2,8 мг антител против коллагена путем i.p. инъекций с последующими дополнительными i.p. инъекциями LPS (25 мкг/мышь) на день 3. Средняя степень артрита и встречаемость артрита показаны на фиг. 5A и 5B соответственно. Фиг. 6. - модель артрита, индуцированного антителами против коллагена, (CAIA) применяют для тестирования терапевтического действия RhmAb2.102, которое вводят на день 7 после инъекции антител против коллагена. Показаны средний балл артрита во всех лапах (фиг. 6A) и средний балл артрита в правой задней лапе (фиг. 6A). Группы из 5 мышей получают на день 0 по 2,8 мг антител против коллагена путем i.p. инъекций. LPS(25 мкг/мышь) вводят на день 3 путем i.p. инъекций и RhmAb2.102 (1 мг/мышь) или плацебо вводят тем же путем на день 7. Состояние животных оценивают ежедневно до дня 35. Обнаружено, что RhmAb2.102, по меньшей мере, стабилизирует имеющееся воспаление. Фиг. 7. - гистологический анализ проводят на срезах ткани, окрашенных гематоксилином/эозином и сафранином О, полученных из правых задних лап всех животных с CAIA, которым на день 7 вводятRhmAb2.102 или плацебо (фиг. 7). На окрашенных срезах ткани оценивают следующие параметры (условная шкала от 0 до 3): эрозию хряща (В), эрозию кости (С), вход воспалительных клеток (D), утрату хрящом PG (Е), гибель хондроцитов (F). На фиг. 7A показана макроскопическая картина воспаления в правых задних лапах в экспериментальных группах в последний день эксперимента (день 35). Каждая точка означает одно животное. Горизонтальные линии показывают средний балл внутри экспериментальной группы. Можно заключить, что инъекция RhmAb2.102 защищает мышей от необратимого повреждения суставов. Фиг. 8. - модель артрита, индуцированного антителами против коллагена, (CAIA) применяют для тестирования терапевтического действия RhmAb2.102 при введении на день 3, 5, 6 и 7 после инъекции антител против коллагена. Группы из 5 мышей получают на день 0 по 2,8 мг антител против коллагена путем i.p. инъекций. LPS (25 мкг/мышь) вводят путем i.p. инъекции на день 3. RhmAb2.102 (1 мг/мышь) инъецируют i.v. на день 3, 5, 6 или 7. Состояние животных оценивают ежедневно до дня 19. График показывает средний балл артрита для каждой экспериментальной группы. Опять можно заключить, чтоRhmAb2.102 по меньшей степени стабилизирует воспаление на уровне, сравнимом с уровнем начала терапии. Ромбики - контроль, кружочки - день 7, пустые кружочки - день 6, квадратики -день 5, треугольники-день 3. Фиг. 9. - модель артрита, индуцированного антителами против коллагена, (CAIA) применяют для исследования терапевтического действия RhmAb2.102 при введении на день 3, 5, 6 и 7 (панели А, В и С соответственно) после инъекции антител против коллагена одновременно с лечением дексаметазоном. Группы из 5 мышей получают на день 0 по 2,8 мг антител против коллагена путем i.p. инъекций. LPS (25 мкг/мышь) вводят путем i.p. инъекции на день 3. RhmAb2.102 (1 мг/мышь) инъецируют i.v. на день 3, 5, 6 или 7 одновременно с первой дозой дексаметазона, причем дексаметазон (2 мг/кг) вводят последовательно (i.p.) в течение 2 или 3 дней подряд до исчезновения макроскопического опухания. Дополнительные группы животных получают только i.p. инъекции дексаметазона. Состояние животных оценивают ежедневно до дня 21. График показывает средний балл артрита для каждой экспериментальной группы. Обнаружено, что введение RhmAb2.102 в сочетании с дексаметазоном приводит к драматическому уменьшению опухания и к очень медленному и слабому рецидиву воспаления по сравнению с мышами,не получавшими RhmAb2.102. В противоположность этому, если животные получают только дексаметазон, рецидив воспаления гораздо сильнее и наступает скорее по сравнению с животными, получавшими комбинацию дексаметазона и RhmAb2.102. Ромбики - контроль, треугольники - только дексаметазон ежедневно начиная со дня 5, квадратики дексаметазон ежедневно начиная со дня 5 плюс RhmAb2.102. Фиг. 10. - модель артрита, индуцированного антителами против коллагена, (CAIA) применяют для исследования противовоспалительного действия RhmAb2.102, RhmAb2.105 и RhmAb2.107 при введении на день 3 после инъекции антител против коллагена. Показаны средний балл артрита для всех лап (фиг. 10 А) и средний балл артрита для задних лап только (фиг. 10 В). Группы из 5 мышей получают на день 0 по 2,8 мг антител против коллагена путем i.p. инъекций. LPS (25 мкг/мышь) вводят путем i.p. инъекций на день 3 и RhmAb2.102, RhmAb2.105 и RhmAb2.107 (1 мг/мышь) или плацебо инъецируют i.v. в тот же день. Состояние животных оценивают ежедневно до дня 14. Введение RhmAb2.102 приводит к наибольшему противовоспалительному эффекту. Как показывает рассмотрение среднего балла артрита задних лап, RhmAb2.102, RhmAb2.105 и RhmAb2.107 проявляют себя сходным образом в плане противовоспалительного действия. Ромбики - контроль, треугольники RhmAb2.102, квадратики - RhmAb2.105 и кружочки - RhmAb2.107. Примеры Пример 1. Рекомбинантные человеческие и мышиные моноклональные антитела. Моноклональные антитела против цитруллинированных антигенов больных RA исходно отбирают с помощью техники фагового дисплея, как описано в Raats et al., J Reumatology, vol 30, 1696-711, 2003). Вкратце, наборы собственных антител от трех пациентов с RA выделяют из наборов их В-клеток и применяют для получения библиотек фрагментов антител. Эти библиотеки подвергают четырем циклам отбора по сродству к цитруллинированному циклическому пептиду CFCl-cyc, как описано в WO 98/22503. Клоны антител отбирают на основе их сильной реактивности с CFC1-cyc и отсутствия реактивности с нецитруллинированным CFC0-cyc (WO 98/22503). Кодирующие антитела последовательности, описанные Raats et al. (J Reumatology, vol 30, 1696-711,2003), синтезируют по Stemmer et al. (Gene, vol 164, 49-53, 1995) и далее клонируют в экспрессирующие векторы для млекопитающих, кодирующие человеческий и мышиный изотипы антител. Человеческие антитела относятся к изотипу IgG1- и называются RhmAb2.101, RhmAb2.102, RhmAb2.103 иRhmAb2.104. Мышиные антитела относятся к изотипу IgG2a- и называются RmmAb1.101,RmmAb1.102, RmmAb1.103 и RmmAb1.104.RhmAb2.101 синтезируют по протоколу Stemmer et al. (Gene, vol 164, 49-53, 1995) на основе последовательности клона Ra3 (Raats et al., J Reumatology, vol 30, 1696-711, 2003) и оно состоит из VH, полученной из семейства зародышевых клеток 3-21, в сочетании с VL, полученной из семейства зародышевых клеток 1b. RhmAb2.103 синтезируют по Stemmer et al. (Gene, vol 164, 49-53, 1995) на основе последовательности клона А 2-2 (Raats et al., J Reumatology, vol 30, 1696-711, 2003) и оно включает VH, полученную из семейства зародышевых клеток 3-23, в сочетании с VL, полученной из семейства зародышевых клеток 1a. RhmAb2.104 синтезируют по Stemmer et al. (Gene, vol 164, 49-53, 1995) и оно включаетVH, полученную из семейства зародышевых клеток 4-b, в сочетании с VL, полученной из семейства зародышевых клеток 1 с.RhmAb2.102 синтезируют по Stemmer et al. (Gene, vol 164, 49-53, 1995) и оно включает тяжелую цепь иммуноглобулина, кодируемую SEQ ID NO: 8, в сочетании с легкой цепью иммуноглобулина, кодируемой SEQ ID NO: 9. Тяжелая цепь иммуноглобулина, кодируемая SEQ ID NO: 8, включает лидерную последовательность мышиного глобулина SEQ ID NO: 12, за которой следует вариабельный район тяжелой цепи антитела согласно SEQ ID NO: 13, за которым следует константный район иммуноглобулина человека IgG1 с SEQ ID NO: 14. Легкая цепь иммуноглобулина, кодируемая SEQ ID NO: 9, включает лидерную последовательность мышиного глобулина с SEQ ID NO: 12, за которой следует вариабельный район легкой цепи антитела с SEQ ID NO: 15, за которым следует константный домен человеческого иммуноглобулинасогласно SEQ ID NO: 16.RmmAb1.102 синтезируют Stemmer et al. (Gene, vol 164, 49-53, 1995) и оно включает тяжелую цепь иммуноглобулина, кодируемую SEQ ID NO: 10, в сочетании с легкой цепью иммуноглобулина, кодируемой SEQ ID NO: 11. Тяжелая цепь иммуноглобулина, кодируемая SEQ ID NO: 10, включает лидерную последовательность мышиного глобулина согласно SEQ ID NO: 12, за которой следует вариабельный район тяжелой цепи антитела согласно SEQ ID NO: 19, за которым следует константный домен мышиного иммуноглобулина IgG2a согласно SEQ ID NO: 20. Легкая цепь иммуноглобулина, кодируемая SEQ IDNO: 11, включает лидерную последовательность мышиного глобулина согласно SEQ ID NO: 12, за которой следует вариабельный район легкой цепи антитела согласно SEQ ID NO: 17, за которым следует константный домен мышиного иммуноглобулинасогласно SEQ ID NO: 18. Первичные последовательности мРНК вариабельных доменов (VH и VL) моноклональных антителRhmAb2.101, RhmAb2.103 и RhmAb2.104, RmmAb1.101, RmmAb1.103 и RmmAb1.104 опубликованы и помещены в базу данных EMBL под инвентарными номерами, приведенными в табл. 1. Полноцепочечные последовательности человеческих и мышиных антител получены с применением идентичных лидерных и константных доменов человека или мыши, как описано для антител RhmA.b2.102 и Контрольные антитела RmmAb13.101, RmmAb13.102 и RmmAb13.103 против цитруллинированного фибриногена и RhmAb2.201 против апоптозного 40 kD продукта расщепления человеческого белкаNetherlands (Cat no, MQ13.101, MQ13.102, MQ13.103 and MQR2.201). Пример 2. Экспериментальная модель воспаления. Для индукции артрита у мышей применяют доступную в продаже модель индуцированного антителами против коллагена артрита у мышей (CAIA) ModiQuest Research B.V. (cat no: MQ18.101) согласно спецификации производителя(http://www.modiquestresearch.nl/shop/files/18.10150MG%202007.08.22.pdf). С этой целью на день 0 самцам мышей DBA/J1 (5-6 мышей/группу) в возрасте 8 недель i.p. инъецируют смесь из восьми антител против коллагена (мыши, показанные на фиг. 1A и 1B, получают 1,6 мг смеси антител против коллагена, а мыши, показанные на 1C-F, получают 2,4 мг). На день 3 мыши получает другую i.p. инъекцию, содержащую 25 мкг LPS, смешанного с 1 мг антител против цитруллина (если не указано противное). LPS запускает воспаление. До дня 13 состояние экспериментальных животных ежедневно оценивают на наличие признаков воспаления в лапах. Оценку проводят согласно табл. 2. Наибольший балл артрита для животного составляет 8. Подтверждено, что мышиные моноклональные антитела против цитруллина RmmAb13.101,RmmAb13.102 и RmmAb13.103 способны усиливать тяжесть артрита, индуцированного антителами против коллагена. Смесь этих антител обладает еще более сильным действием. Это в основном подтверждает полученные ранее результаты, что антитела против цитруллина способны усиливать/индуцировать артрит (Kuhn et al., J. Clin. Invest, vol 116, 961-871, 2006; Hill et al., J Exp Med, vol 205, 967-979, 2008). Эти результаты приведены на фиг. 1A и 1B, на которых показаны средние баллы артрита и средние значения встречаемости артрита соответственно в одном и том же эксперименте. Человеческие моноклональные антитела RhmAb2.102, RhmAb2.103 и RhmAb2.104, однако, неожиданно уменьшают или даже устраняют клинические признаки артрита в экспериментальной моделиCAIA (фиг. 1C и 1D). RhmAb2.102 и RhmAb2.103 уменьшают признаки артрита наилучшим образом,тогда как RhmAb2.104 уменьшает воспаление примерно на 50%. RhmAb2.101 не оказывает никакого эффекта в примененной дозе. Таблица 2 Решение вводить антитела против цитруллина на день 3 после инъекции антител против коллагена основано на данных эксперимента, описанных выше, которые показывают, что цитруллинированные эпитопы появляются в лапах мышей при экспериментально индуцированном артрите примерно на день 4. Пример 3. Получение деиминированного клеточного экстракта. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (SDS-PAGE) и вестерн-блоттинг. Клетки COS-1 (8105) кратковременно трансфицируют 2 мкг huPAD2 или huPAD4 экспрессирующим вектором с применением установки для нуклеофекции АМАХА (программа D-005) вместе с набором V-kit и клетки рассеивают в 20 мл среды в Т 75. Через 72 ч клетки дважды промывают PBS, обрабатывают трипсином, осаждают с помощью центрифугирования и ресуспендируют в 15 мкл ледяного буфера для лизиса (20 мМ Tris pH 7,4,10 мМ меркаптоэтанол, 100 мМ NaCl, 10% глицерин, ингибиторы протеаз). Образцы клеток озвучивают 4 раза в течение 15 с на льду. Лизаты центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин и супернатанты переносят в чистые пробирки. Клеточные лизаты деиминируют в течение от 30 мин до 2 ч при 37 С путем добавления CaCl2 и DTE в конечной концентрации 10 и 5 мМ соответственно. Деиминированные клеточные лизаты хранят при -20 С. Буфер для образца 10(0,25 М Tris pH 6,8, 8% ДСН, 35% глицерин, 2,5% -меркаптоэтанол, бромфеноловый синий) добавляют к деиминированным клеточным лизатам и кипятят в течение 5 мин. Лизаты, соответствующие примерно 5105 клеток, наносят на каждую дорожку полиакриламидного геля с ДСН (15% гель) и разделяют, вслед за чем производят электроблоттинг с переносом на нитроцеллюлозные мембраны Hybond С (Amersham Biosciences). Блоттинг и нанесение проверяют с помощью окрашивания Ponceau S. Пример 4. Терапевтические антитела против цитруллина узнают р 15 и р 17. Блоты, как получено в примере 3, разрезают на полоски и блокируют в течение 2 ч при КТ с 5% вес./об. сухим молоком низкой жирности в PBS-Tween (буфер для промывки), чтобы заблокировать все неспецифичные участки связывания. Блоты затем промывают 5 раз по 5 мин буфером для промывки, и полоски инкубируют в течение дополнительного 1 ч при КТ с 4 мл буфера для промывки, содержащего 20 мкг антител против цитруллина. Затем полоски промывают 5 раз по 10 мин буфером для промывки и инкубируют с конъюгированными с пероксидазой кроличьими антителами против человеческого IgG(Dako) (1 ч при КТ) в буфере для промывки (1:2000). Затем полоски промывают 3 раза по 10 мин буфе- 17023302 ром для промывки с последующей промывкой 2 раза PBS для удаления несвязанных антител. Иммунореактивные участки визуализуют с помощью хемилюминесцентного субстрата (PIERCE) и экспонируют с пленками для авторадиографии Kodak BioMax XAR (Eastman Kodak Company, Rochester,NY, USA). Обнаружено, что полоски, инкубированные с RhmAb2.102, RhmAb2.103 и RhmAb2.104, демонстрируют реактивность с дублетом белков с молекулярным весом примерно 15 и 17 кДа. Пример 5. Реакция иммунопреципитации антигена. Для проведения иммунопреципитации 20 мкл антител против цитруллина вместе с 30 мкл белка А на сефарозе для быстрого тока (protein A-Sepharose fast flow) (Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden) добавляют к 330 мкл клеточного лизата и инкубируют в течение 2 ч при 4 С при ротации. Частицы сефарозы с иммуносвязанными белками последовательно промывают 4 раза в IPP150 (10 мМ Tris/HCl pH 8,150 мМ NaCl, 0,1% NP40, 0,1% Tween-20). К частицам сефарозы добавляют буфер для образца 2 Х (100 мМ Tris-HCl, рН 6,8, 200 мМ дитиотрейтол, 4% ДСН, 0,2% бромфеноловый синий, 20% глицерин), и белки подвергают электрофорезу (SDS-PAGE) в 15% геле. Гель окрашивают в течение ночи при КТ в растворе для окрашивания (10% вес./об. сульфат аммония, 2% вес./об. фосфорная кислота (85%), 0,1% вес/об. СВВ G-250, 20% об./об. метанол) при осторожном покачивании. Все поддоны для окрашивания герметизированы парафильмом для предотвращения испарения метанола. На следующий день проводят удаление фонового окрашивания путем инкубации гелей в воде milli-Q до проявления требуемого окрашивания. Раствор для отмывки (вода milli-Q) замещают 2-3 раза, после чего регистрируют изображение на гелях. Иммунопреципитация с RhmAb2.102, RhmAb2.103, RmmAb1.102 и RmmAb1.103 лизатов, деиминированных с помощью обеих человеческих PAD2 и PAD4, выявляет яркие полосы белков р 15 и р 17. Эти полосы несколько менее интенсивны, когда иммунопреципитацию проводят с RhmAb2.104 иRmmAb1.104. Способность узнавать белки р 15 и р 17, таким образом, хорошо коррелирует с терапевтическими свойствами этих антител (фиг. 1A-D). Пример 6. Анализ конкуренции антител за р 15 и р 17. Анализ конкуренции за связывание с р 15 и р 17 проводят на иммуноблотах, как описано в примере 3. Мышиные моноклональные антитела RmmAb1.102 и RmmAb1.103 оставляют связываться с полосками иммуноблотов, содержащими р 15 и р 17, в присутствии и в отсутствие RhmAb2.102 и RhmAb2.103 соответственно. Связывание определяют с помощью конъюгированных антител против белков мыши. Соответствующие контрольные эксперименты проводят, чтобы удостовериться, что конъюгаты не реагируют с человеческими антителами. Оказывается, что связывание RmmAb1.102 и RmmAb1.103 с р 15 и р 17 может уменьшаться, когда в качестве конкурентных антител применяют RhmAb2.102 и RhmAb2.103 соответственно. Контрольные антитела RmmAb13.101, RmmAb13.102 и RmmAb13.103 не конкурируют за связывание р 15 или р 17 с антителами RmmAb1.102 или RmmAb1.103. Эти результаты делают такой анализ отличным тестом для отбора антител, которые способны подавлять клинические признаки воспалительных заболеваний. Пример 7. Масс-спектрометрический анализ р 15 и р 17. Полоски р 15 и р 17 на гелях после SDS-PAGE согласно примеру 3 вырезают из геля и анализируют с помощью MALDI-TOF MS. Вкратце, вырезанные кусочки геля промывают дважды с помощью 50 мкл 25 мМ бикарбоната аммония и инкубируют в течение 30 мин на каждом этапе промывки. Повторяют промывку в течение 15 мин, как описано выше, с добавлением 30% об./об. ацетонитрила. Всю жидкость удаляют и добавляют 25 мкл 25 мМ бикарбоната аммония+25 мкл ацетонитрила и инкубируют в течение 15 мин. Снова удаляют всю жидкость и гели инкубируют в течение 30 мин с 50 мкл ацетонитрила. Всю жидкость удаляют и кусочки дегидрируют путем инкубации в течение 2 ч при 37 С. После дегидрирования кусочки геля оставляют набухать снова путем добавления 5 мкл раствора трипсина (15 нг трипсин/мкл в 25 мМ бикарбонате аммония, 5 мМ н-октилD-глюкопиранозиде) и инкубируют на льду в течение 1 ч. Избыток раствора трипсина удаляют и кусочки геля инкубируют в течение 14 ч при 37 С с 5 мкл 25 мМ бикарбоната аммония, 5 мМ н-октилD-глюкопиранозида. Пептиды экстрагируют путем инкубации с 4 мкл 50% ацетонитрила, 0,5% трифторуксусной кислоты (ТФУ), 5 мМ н-октилDглюкопиранозида в течение 1 ч при КТ. Образцы озвучивают в течение 2 мин на водяной бане для озвучивания, жидкость переносят в новую пробирку и этап экстракции повторяют. Образцы сушат в вакуумной центрифуге и подвергают анализу с помощью MALDI-TOF MS. Все фрагменты, идентифицированные с помощью MALDI-TOF MS, относятся к белкам гистонов Пример 8. Терапевтические антитела против цитруллина узнают Н 2 А/р 4. Человеческие рекомбинантные гистоны H1, Н 2 А, Н 2 В, Н 3 и Н 4 (100 мкг) инкубируют в течение 3 ч в присутствии и в отсутствие 53,4 мЕд huPAD2 или huPAD4 при 37 С. Деиминированные, а также недеиминированные гистоны наносят на 96-луночные планшеты ELISA (0,3 мкг/лунку) путем инкубации в течение ночи при 4 С. Лунки промывают 5 раз PBS-Tween20 (PBS-T) и блокируют в течение 1 ч путем инкубации с PBS-T+1% бычий сывороточный альбумин (БСА) при КТ. После пяти дополнительных промывок с помощью PBS-T лунки инкубируют в течение 1 ч при КТ с серийными разведениямиRhmAb2.101, RhmAb2.102 или RhmAb2.104 в PBS-T+1% БСА, начиная с концентрации 10 мкг/лунку. Лунки промывают 5 раз PBS-T и инкубируют с кроличьими конъюгированными с HRP антителами против антител человека (1:2000) в течение 1 ч при КТ и затем промывают 5 раз раствором PBS-T и 3 раза PBS. Лунки, инкубированные с RhmAb2.101 и RhmAb 2.104, инкубируют в течение 15 мин и лунки,инкубированные с RhmAb2.102, инкубируют с в течение 10 мин с субстратом ТМВ до остановки реакции с помощью 2 М H2SO4. Оптическую плотность измеряют при 450 нм и она является мерой сродства примененных антител. Пример 9. Терапевтические антитела против цитруллина узнают пептид 1. Планшеты ELISA на 96 лунок покрывают нейтравидином (0,1 мкг/лунку) путем инкубации в течение ночи при 4 С. Лунки промывают 5 раз PBS-Tween20 (PBS-T) и блокируют в течение 1 ч путем инкубации с PBS-T+1% бычий сывороточный альбумин (БСА) при КТ. После пяти дополнительных промывок PBS-T лунки инкубируют в течение 1 ч при КТ с полученными из гистона пептидами, содержащими цитруллин и биотин (0,3 мкг/лунку). После пяти дополнительных промывок с помощью PBS-T лунки инкубируют в течение 1 ч при КТ с серийными разведениями RhmAb2.101, RhmAb2.102 илиRhmAb2.104 в PBS-T+1% БСА, начиная с концентрации 10 мкг/лунку. Лунки промывают 5 раз PBS-T и инкубируют с кроличьими конъюгированными с HRP антителами против антител человека (1:2000) в течение 1 ч при КТ, затем промывают 5 раз PBS-T и 3 раза PBS. Лунки инкубируют в течение 5 мин с субстратом ТМВ до остановки реакции с помощью 2 М H2SO4. Оптическую плотность измеряют при 450 нм и она является мерой сродства примененных антител. Пример 10. Получение деиминированного фибриногена плазмы человека, электрофорез SDS-PAGE и вестерн-блоттинг и определение с помощью антител против цитруллина. 100 мкг фибриногена плазмы человека растворяют в 100 мкл буфера для деиминирования (PBS рН 7,6, 10 мМ CaCl2, 5 мМ дитиотрейтол) и деиминируют в течение 3 ч при 37 С с 53,4 мЕд huPAD2 или huPAD4. добавляют 10 буфер для образца (0,25 М Tris рН 6,8, 8% ДСН, 35% глицерин, 2,5% меркаптоэтанол, бромфеноловый синий), 7,5 мкг деиминированного или недеиминированного фибриногена наносят на каждую дорожку SDS-PAGE (12,5%) и разделяют, вслед за чем проводят электроблоттинг с переносом на нитроцеллюлозные мембраны Hybond С (Amersham Biosciences). Блоттинг и нанесение проверяют с помощью окраски Ponceau S. Блоты блокируют в течение 2 ч при КТ с помощью 5% вес./об. сухого молока низкой жирности вPBS-Tween (буфер для промывки) для блокирования всех неспецифичных участков связывания. Блоты затем промывают 5 раз по 5 мин буфером для промывки, и полоски инкубируют дополнительно в течение 1 ч при КТ с 4 мл буфера для промывки, содержащего 20 мкг антител против цитруллина. Затем полоски промывают 5 раз по 10 мин буфером для промывки и инкубируют с конъюгированными с пероксидазой кроличьими антителами против IgG человека (Dako) (1 ч при КТ) в буфере для промывки(1:2000). Полоски затем промывают 3 раза в течение 10 мин буфером для промывки с последующими 2 промывками PBS для удаления несвязанных антител. Иммунореактивные участки визуализуют с помощью хемилюминесцентного субстрата (PIERCE) и экспонируют с пленкой для авторадиографии BioMax XAR (Eastman Kodak Company, Rochester, NY,USA). Обнаружено, что блоты, инкубированные с RhmAb2.102 и RhmAb2.104, демонстрируют более высокую реактивность с деиминированным фибриногеном плазмы человека, чем в случае RhmAb2.101. Снова RhmAb2.102 демонстрирует более высокое сродство по сравнению с RhmAb2.104. Пример 11. Терапевтические антитела против цитруллина узнают цитруллинированные пептиды,полученные из фибриногена и виментина. 96-луночные планшеты ELISA покрывают нейтравидином (0,1 мкг/лунку) путем инкубации в течение ночи при 4 С. Лунки промывают 5 раз PBS-Tween20 (PBS-T) и блокируют путем инкубации в течение 1 ч с PBS-T+1% бычьим сывороточным альбумином (БСА) при КТ. После 5 дополнительных промы- 19023302 вок PBS-T лунки инкубируют в течение 1 ч при КТ полученными из фибриногена и виментина пептидами, содержащими биотин и цитруллин (0,3 мкг/лунку). После дополнительных 5 промывок PBS-T лунки инкубируют в течение 1 ч при КТ с серийными разведениями RhmAb2.101, RhmAb2.102 илиRhmAb2.104 в PBS-T+1% БСА, начиная с концентрации 10 мкг/лунку. Лунки промывают 5 раз PBS-T и инкубируют с конъюгированным с пероксидазой кроличьими антителами против IgG человека (1:2000) в течение 1 ч при КТ с последующими 5 промывками PBS-T и 3 промывками PBS. Лунки инкубируют 5 мин с субстратом ТМВ до остановки реакции с помощью 2 М H2SO4. Оптическую плотность измеряют при 450 нм и это служит мерой сродства применяемых антител. Пример 12. Терапевтический потенциал RhmAb2.102. Для индукции артрита у мышей применяют доступную в продаже модель артрита у мышей, индуцированного антителами против коллагена, (CAIA) ModiQuest Research B.V. (cat no: MQ18.101) согласно инструкциям производителя (http://www.modiquestresearch.nl/shop/files/18.101-50MG%202007.08.22.pdf). С этой целью на день 0 самцы мышей DBA/J1 (5 мышей/группу) в возрасте 8 недель получают инъекцииi.p. смесью их восьми антител против коллагена (2,8 мг/мышь). На день 3 мыши получают другую i.p. инъекцию, содержащую 25 мкг LPS. LPS запускает воспаление. На день 7, когда средний балл артрита достигает примерно 4 (фиг. 6A), одна группа получает i.v. инъекцию, содержащую 1 мг RhmAb2.102,тогда как другая группа получает i.v. инъекцию, содержащую плацебо. Состояние животных оценивают ежедневно на признаки воспаления в лапах. Оценку проводят согласно табл. 2. Максимальный балл артрита для животного составляет 8. RhmAb2.102 стабилизируют воспаление (фиг. 6A). Все правые задние лапы применяют для гистологического анализа. Ткани фиксируют в течение 4 дней в 4% формальдегиде, декальцифицируют в 5% муравьиной кислоте и далее дегидрируют и заплавляют в парафин. Стандартные фронтальные срезы толщиной 7 мкм помещают на покровные стекла SuperFrost (Menzel-Glser, Braunschweig, Germany). Для исследования воспаления суставов проводят окрашивание гематоксилином и эозином (НЕ) (вход клеток, фиг. 7D). Тяжесть воспаления суставов оценивают по шкале от 0 до 3 (0 - нет клеток, 1 - низкое содержание клеток, 2 - умеренное содержание клеток и 3 - максимальное содержание клеток). На фиг. 7A показана макроскопическая картина воспаления на день 35. Для исследования утраты протеогликана (PG) хрящевым матриксом (фиг. 7E) срезы окрашивают сафранином О (SO) с последующим окрашиванием быстрым зеленым (fast green). Утрату PG определяют по относительной шкале 0-3, начиная с нормальной полностью окрашенной хрящевой ткани до неокрашенной хрящевой ткани, полностью утратившей PG. Гибель хондроцитов (фиг. 7F) оценивают по шкале 0-3, начиная с отсутствия потери ядер хондроцитов до совершенно пустой поверхности хряща. Эрозию хряща и кости (фиг. 7B и 7C) градуируют по шкале 0-3, начиная с отсутствия повреждения до полной утраты хрящевой или костной структуры. Гистопатологические изменения в суставах оценивают по пяти полусерийным срезам сустава, расположенным на расстоянии 70 мкм друг от друга Оценку поводят вслепую без предварительного знания условий эксперимента. Хотя макроскопическая картина воспаления в правых задних лапах во всех группах на день 35 была идентичной (фиг. 6A и 7A), в экспериментальной группе, получившей RhmAb2.102, наблюдается драматическое уменьшение по сравнению с контрольной группой любого из следующих параметров эрозии сустава: входа воспалительных клеток (фиг. 7D), эрозии хряща (фиг. 7B), утраты хрящом PG (фиг. 7E),гибели хондроцитов (фиг. 7F) и эрозии кости (фиг. 7C). Этот результат значительно поддерживает терапевтический потенциал RhmAb2.102. Пример 13. Получение деиминированных с помощью huPAD4 экстрактов HEK293 и реакция иммунопреципитации с RhmAb2.101 или RhmAb2.102. Клетки HEK293 собирают, промывают один раз PBS, осаждают центрифугированием и 5105 клеток ресуспендируют в 15 мкл ледяного буфера для лизиса (20 мМ Tris pH 7,4, 10 мМ -меркаптоэтанол, 100 мМ NaCl, 10% глицерин, ингибиторы протеаз). Образцы клеток озвучивают 4 раза в течение 15 с на льду. Лизаты центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, и супернатанты переносят в чистые пробирки. Клеточные лизаты подвергают деиминированию в течение 2 ч при 37 С путем добавления 1 Ед человеческой PAD4 на 2 мг белка(ModiQuest Research B.V.; cat no: MQ 16.203), 10 мМ CaCl2 и 5 мМ ДТТ. Деиминирование лизатов подтверждают путем электрофореза деиминированных лизатов HEK293(SDS-PAGE) (12,5% гели) с последующим вестерн-блоттингом. Вестерн-блоты подвергают иммуноокрашиванию с помощью антител RhmAb2.101 или RhmAb2.102 и обнаруживают положительные полосы. На блотах, обработанных иррелевантным антителом, окрашивание не проявляется. Далее проводят реакцию иммунопреципитации (ИП) деиминированных лизатов HEK293 с антителами RhmAb2.101 или RhmAb2.102. Вкратце, 30 мкл белка А на сефарозе (Protein A Sepharose Fast Flow) промывают 5 раз 1 мл IPP500 (10 мМ Tris-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 0,1% NP40 и 0,1% Tween-20) и обрабатывают 20 мкг RhmAb2.101, 20 мкг RhmAb2.102 или не обрабатывают антителами (отрицательный контроль). Смеси частиц сефарозы с белком А и антитела инкубируют в течение 1 ч при КТ при постоянном вращении. Частицы сефарозы промывают 3 раза с помощью 1 мл IPP500, один раз с помощью 1 мл IPP150 (10 мМ Tris/HCl pH 8,0, 150 мМ NaCl, 0,1% NP40 и 0,1% Tween-20) и далее инкубируют при КТ с 300 мкл деиминированных лизатов HEK293 в течение 2 ч при постоянной ротации. Частицы промывают 3 раза 1 мл IPP150, после чего небольшую порцию отбирают для электрофореза SDS-PAGE с целью определения того, была ли процедура с клетками HEK293 успешной. Белки, вступившие в реакцию иммунопреципитации, с RhmAb2.101, RhmAb2.102 и контрольные частицы сефарозы элюируют с помощью 50 мкл буфера для элюции (100 мМ цитрат натрия рН 3,0), нейтрализуют с помощью 10 мкл 1 М Tris-HCl pH 9,04 и хранят при -20 С до проведения анализа с помощью nLC LTQ FTMS ULTRA масс-спектрометрии (пример 14). Пример 14. Масс-спектрометрический анализ белков HEK293, деиминированных с помощью huPAD4 и вступивших в реакцию иммунопреципитации с RhmAb2.101 и RhmAb2.102. Для удаления PEG из белков, вступивших в реакцию иммунопреципитации, их наносят на 15% гели и проводят электрофорез SDS-PAGE в 15% геле в течение короткого времени. Участки с белками вырезают из геля и внутри полученных кусочков геля проводят обработку трипсином, как описано в примере 7. Образцы разводят в 50 раз перед анализами с помощью nLC LTQ FTMS ULTRA. Идентификацию пептидов и белков проводят с помощью поисковой программы Mascot с применением базы данных NCBInr20081022, включающей таксономию Homo sapiens. При проведении поиска допущены следующие модификации: карбамидометилирование цистеинов (С) (фиксировано), окисление метионина (М) (переменная) и деамидирование аспарагина (N), аргинина (R) и глутамина (Q) (переменная). Деиминирование не может применяться в качестве инструмента поиска. Эту проблему можно устранить, поскольку как деамидирование, так и деиминирование приводят к разнице масс в 1 Да по сравнению с немодифицированным аргинином. Идентификацию белков проводят с помощью самодельной программы. Вкратце, эта программа классифицирует белки на основе числа уникальных идентифицированных пептидных последовательностей, кластеров белков с одинаковыми наборами пептидов и подтверждает правильность идентификации белков по следующим критериям: белки с одним пептидом должны иметь пептидную оценку 49,белки, включающие более 1 пептида, должны иметь пептидную оценку 29. С применением данных критериев проверки идентифицированы пептиды во всех трех образцахHEK293 преципитат с пустой сефарозой). Для всех идентифицированных белков рассчитывают экспоненциально-модифицированный индекс распространенности белков EMPAI (Exponentially Modified Protein Abundance Index). EMPAI предоставляет приблизительную свободную от метки относительную количественную оценку белков в смеси, основанную на перекрывании совпадающих пептидов в белках с результатами поиска по базе данных. Эта техника позволяет нам идентифицировать деиминированные белки, которые (предпочтительно) связываются с RhmAb2.102. Это показано в табл. 7. Таблица 7 Данные nLC LTQ FTMS ULTRA Пример 15. Получение/отбор семейства противовоспалительных антител. Библиотеки полученных из человеческих антител scFv пэннингуют против деиминированных с помощью PAD2 или PAD4 форм человеческого гистона 2 А гистона 4, пептида 1 (AAASGXGKQGGK, SEQID NO: 21) и против CFC-1 пептида по способу, сходному с описанным Raats et al., 2003 (Raats J.M.H.,Wijnen E.W, Pruijn G.J.M., Van den Hoogen F.H.M. and W.J. van Venrooij. 2003. J. Rheum. 30, 1696-1711). Отобранные антитела, демонстрирующие зависимую от цитруллина реактивность по отношению кCFC-1 и/или пептиду 1 (AAASGXGKQGGK, SEQ ID 21) и/или деиминированным с помощью PAD гистону 2 А и/или гистону 4, подвергают скринингу на реактивность против матрицы (array) циртуллинированных белков и/или пептидов, полученных из них (пример 14, табл. 7), против деиминированных с помощью PAD2 и PAD4 изоформ человеческих гистонов и против пептидов, полученных из деиминированных человеческих гистонов. Одновременно проводят реакцию иммунопреципитации с деиминированными с помощью PAD2 и PAD4 экстрактами клеток человека и синовиальной жидкостью больныхRA. Антитела, которые вступают в реакцию иммунопреципитации с полосками р 15 и/или р 17 и/или антитела, характеризующиеся профилями реактивности согласно ELISA по отношению к цитруллинированным эпитопам (деиминированных с помощью PAD2 и PAD4 изоформ человеческих гистонов и/илиCFC-1, и/или пептида 1 (AAASGXGKQGGK, SEQ ID 21, и/или цитруллинированных эпитопов, полученных из белков, перечисленных в табл. 7), сравнимыми с RhmAb2.102, далее клонируют в формат человеческого IgG1. Полноразмерные антитела человеческого IgG тестируют на профилактический и/или терапевтический противовоспалительный потенциал с помощью модели CAIA у мышей, как описано здесь. Такая процедура скрининга с высокой частотой приводит к получению антител с профилактическим и/или терапевтическим противовоспалительным потенциалом в модели CAIA у мышей. Примерами новых антител, отобранных согласно вышеописанному способу, являются RhmAb2.105 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение антитела, специфически реактивного по отношению к цитруллинированному эпитопу пептида, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ IDNO: 37 и SEQ ID NO: 38, в качестве средства для предотвращения или лечения артрита.