Улучшенные полипептиды, вариабельные домены антител и антагонисты против tnfr1

УЛУЧШЕННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, ВАРИАБЕЛЬНЫЕ ДОМЕНЫ АНТИТЕЛ И АНТАГОНИСТЫ ПРОТИВ TNFR1 Изобретение относится к полипептидам, единичным вариабельным доменам антител (dAbs),антагонистам и полиспецифическим лигандам против TNFR1, а также способам и их применению. Полипептиды, единичные вариабельные домены антител (dAbs), антагонисты и полиспецифические лиганды против TNFR1 полезны для лечения и/или предупреждения воспалительного заболевания, такого как артрит или ХОЗЛ (хроническое обструктивное заболевание легких), а также для легочного введения, перорального введения, доставки в легкие и доставки в желудочно-кишечный тракт пациента. Даффилд Стивен, Инивер Кэролин,Лю Хайцюнь, Шон Оливер, Сепп Армин, Стоп Алларт Адриан (GB) Поликарпов А.В. (RU)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ГЛАКСО ГРУП ЛИМИТЕД (GB) 022925 Изобретение относится к полипептидам против фактора некроза опухоли 1 (TNFR1, р 55, CD120a,P60, член суперсемейства рецепторов TNF1 А, TNFRSF1A, рецептор TNF типа 1), единичным вариабельным доменам иммуноглобулина (антитела) и антагонистам, содержащим их. Изобретение также относится к способам, применениям, препаратам, композициям и устройствам, в которые включены или использованы такие лиганды против TNFR1. Предшествующий уровень техникиTNFR1 представляет собой трансмембранный рецептор, содержащий внеклеточную область, которая связывается с лигандом, и внутриклеточный домен, который лишен свойственной ему активности трансдукции сигналов, но может ассоциироваться с молекулами сигнальной трансдукции. Комплекс(1993).) TNF лиганд представлен в виде тримера, который связан тремя TNFR1 цепями (выше.) ТриTNFR1 цепи тесно сгруппированы вместе в рецептор-лигандном комплексе, и эта кластеризация является необходимым условием для TNFR1-опосредованной трансдукции сигнала. В действительности поливалентные агенты, которые связываются с TNFR1, такие как антитела против TNFR1, могут индуцировать кластеризацию TNFR1 и сигнальную трансдукцию в отсутствие TNF и обычно используются в качестве агонистов TNFR1. (См., например, Belka et al., EMBO, 14(6): 1156-1165 (1995); Mandik-Nayak etTNFR1, как правило, не являются эффективными антагонистами TNFR1, даже если они блокируют связывание TNF c TNFR1. Номера SEQ ID в этом параграфе относятся к нумерации, используемой в WO 2006038027. Внеклеточная область TNFR1 содержит аминоконцевой сегмент из тринадцати аминокислот (аминокислоты 113 из SEQ ID NO: 603 (человек); аминокислоты 1-13 из SEQ ID NO: 604 (мышь, Домен 1 (аминокислоты 14-53 из SEQ ID NO: 603 (человек); аминокислоты 14-53 из SEQ ID NO: 604 (мышь, Домен 2 (аминокислоты 54-97 из SEQ ID NO: 603 (человек); аминокислоты 54-97 из SEQ ID NO: 604 (мышь, Домен 3(мышь, за которой следует ближайшая к мембране область (аминокислоты 168-182 из SEQ ID NO: 603Loetscher et al., Cell 61(2) 351-359 (1990. Домены 2 и 3 образуют контакт со связанным лигандом (TNF,TNF). (Banner et al., Cell, 73(3) 431-445 (1993. Внеклеточная область TNFR1 также содержит область,называемую предшественник лигандсвязывающего домена или PLAD-доменом (аминокислоты 1-53 изSEQ ID NO: 603 (человек); аминокислоты 1-53 из SEQ ID NO: 604 (мышь (Правительство США, WO 01/58953; Deng et al., Nature Medicine, doi: 10.1038/nml304 (2005. TNFR1 слущивается с поверхности клеток in vivo в результате процесса, который включает протеолиз TNFR1 в Домене 4 или в ближайшей к мембране области (аминокислоты 168-182 из SEQ ID NO: 603; аминокислоты 168-183 из SEQ ID NO: 604), с получением растворимой формы TNFR1. Растворимый TNFR1 сохраняет способность связываться с TNF и, таким образом, функционирует в качестве эндогенного ингибитора активности TNF. В WO 2006038027, WO 2008149144 и WO 2008149148 описаны единичные вариабельные домены иммуноглобулина против TNFR1 и антагонисты, содержащие их. В этих документах также описано применение таких доменов и антагонистов для лечения и/или предупреждения TNF-опосредованных состояний. В WO 2006038027 описан единичный вариабельный домен иммуноглобулина (dAb), названныйTAR2h-205 (SEQ ID NO: 627 в WO 2006038027), который обладает незначительной активностью против человеческого TNFR1. Желательно обеспечить улучшенные единичные вариабельные домены иммуноглобулина, антагонисты, лиганды против человеческого TNFR1 и продукты, содержащих их. Их цель заключается в обеспечении улучшенных диагностических реагентов для определения человеческогоTNFR1 в образцах, а также, или в качестве альтернативы, в обеспечении улучшенных терапевтических средств для лечения и/или предупреждения TNFR1-опосредованных состояний и заболеваний у людей или других млекопитающих. Особенно желательно создать единичные вариабельные домены иммуноглобулина, антагонисты, лиганды против TNFR1 и продукты, содержащие их, которые являются эффективными нейтрализаторами TNFR1 (больше, чем TAR2h-205), особенно человеческого TNFR1; перекрестно реагируют с TNFR1 человека и TNFR1 по меньшей мере одного другого вида (такого как виды,обычно используемые в качестве модели для разработки и тестирования лекарственных средств, например, мышь, крыса, собака, свинья или примат, не являющийся человеком); устойчивы к протеазе (например, протеазе, которая может встречаться у пациента, такой как трипсин, химотрипсин, пепсин или лейкозим); имеют хорошую фармакокинетику (например, подходящий период полувыведения); и/или демонстрируют высокоаффинное связывание с TNFR1, например TNFR1 человека. TAR2h-205 называетсяDOM1h-574 (SEQ ID NO: 11) в настоящем тексте (см. также фиг. 5). Различные аспекты настоящего изобретения удовлетворяют этим желаемым характеристикам. Краткое изложение сущности изобретения В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF типа 1 (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-72, DOM1h-574-109,DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), где единичный вариабельный домен представляет собой мутант DOM1h-574-14, содержащий одну или более из следующих мутаций (нумерация в соответствии сKabat): положение 30 представляет собой L или F,положение 52 представляет собой А или Т,положение 52 а представляет собой D или Е,положение 54 представляет собой А или R,положение 57 представляет собой R, K или А,положение 60 представляет собой D, S, T или K,положение 61 представляет собой Е, H или G,положение 62 представляет собой А или Т,положение 100 представляет собой R, G, N, K, Q, V, A, D, S или V и положение 101 представляет собой A, Q, N, Е, V, H или K. Возможно, единичный вариабельный домен представляет собой мутант DOM1h-574-14, содержащий одну или более из следующих мутаций (нумерация в соответствии с Kabat): положение 30 представляет собой L или F,положение 52 представляет собой А или Т,положение 52 а представляет собой D,положение 54 представляет собой А,положение 57 представляет собой R,положение 60 представляет собой D, S или Т,положение 61 представляет собой Н,положение 62 представляет собой А,положение 100 представляет собой V, A, R, G, N или K и положение 101 представляет собой Е, V, К, A Q или N. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий валин в положении 101 (нумерация в соответствии с Kabat). В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий один или более из 30G, 44D, 45 Р, 55D, 56R, 941 и 98R, где нумерация соответствует Kabat, где аминокислотная последовательность единичного вариабельного домена в ином случае идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574. В одном воплощении вариабельный домен предложен для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака (Cynomologus monkey). В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-72, DOM1h574-156, DOM1h-574-109, DOM1h-574-132, DOM1h-574-135, DOM1h-574-138, DOM1h-574-162 илиDOM1h-574-180. В этом аспекте предложены вариабельные домены, которые являются эффективными нейтрализаторами TNFR1 (например, по меньшей мере человеческого TNFR1) в клеточном анализе. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 94% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-109,DOM1h-574-93, DOM1h-574-123, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126, DOM1h-574-129, DOM1h-574-133,DOM1h-574-137 или DOM1h-574-160. В этом аспекте предложены вариабельные домены, которые являются протеолитически стабильными. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-72, DOM1h574-109, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126, DOM1h-574-133, DOM1h-574-135, DOM1h-574-138, DOM1h574-139, DOM1h-574-155, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В этом аспекте предложены вариабельные домены, которые связываются с человеческим TNFR1 с высокой аффинностью и возможно также демонстрируют желаемую аффинность в отношении мышиного TNFR1. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского мака-2 022925 ка, где единичный вариабельный домен кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности любой из последовательностей DOM1h, представленных ниже в табл. 12, за исключением DOM1h-574. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNER1 человека, мыши или яванского макака, где единичный вариабельный домен кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности DOM1h574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая идентична аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательностиDOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180,или отличается от выбранной аминокислотной последовательности не более чем 25 аминокислотными положениями и имеет последовательность CDR1 (область, определяющая комплементарность; гипервариабельный участок), которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR1 выбранной аминокислотной последовательности. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR2, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR2 выбранной аминокислотной последовательности. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR3, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR3 выбранной аминокислотной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая идентична аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательностиDOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180,или отличается от выбранной аминокислотной последовательности не более чем 25 аминокислотными положениями и имеет последовательность CDR2, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR2 выбранной аминокислотной последовательности. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR3, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR3 выбранной аминокислотной последовательности. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR1,которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR1 DOM1h-574-72. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая идентична аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательностиDOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180,или отличается от выбранной аминокислотной последовательности не более чем 25 аминокислотными положениями и имеет последовательность CDR3, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR3 выбранной аминокислотной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен протеазоустойчивый единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), где указанный единичный вариабельный домен устойчив к протеазе при инкубации с(1) концентрацией (с) по меньшей мере 10 мкг/мл протеазы при 37 С в течение периода времени (t) по меньшей мере одного часа; или(2) концентрацией (с') по меньшей мере 40 мкг/мл протеазы при 30 С в течение периода времени (t) по меньшей мере одного часа,где вариабельный домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 94% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-126 или DOM1h-574-133 и возможно содержит валин в положении 101 (нумерация по Kabat). В одном аспекте изобретение относится к полипептиду, содержащему единичный вариабельный домен иммуноглобулина по настоящему изобретению и константный домен антитела, возможно Fcобласти антитела, возможно, где N-конец Fc связан (возможно, непосредственно связан) с С-концом вариабельного домена. В одном аспекте изобретение относится к полиспецифическому лиганду, содержащему единичный вариабельный домен иммуноглобулина по настоящему изобретению и возможно по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается с сывороточным альбумином (SA). Неожиданно авторы изобретения обнаружили, что слияние единичного вариабельного домена против TNFR1 в соответствии с изобретением с единичным вариабельным доменом против SA обеспечивает преимущество увеличенного периода полувыведения (по сравнению с одним анти-TNFRIdAb мономером), а также с дополнительным преимуществом улучшения аффинности (KD) в отношении связывания TNFR1. Это наблюдение не было описано ранее в уровне техники. В одном воплощении полиспецифический лиганд представляет собой или содержит аминокислотную последовательность, вы-3 022925 бранную из аминокислотной последовательности любой конструкции, обозначенной "DMS" и раскрытой в данной заявке, например, любой конструкции из DMS0111, 0112, 0113, 0114, 0115, 0116, 0117, 0118,0121, 0122, 0123, 0124, 0132, 0133, 0134, 0135, 0136, 0162, 0163, 0168, 0169, 0176, 0177, 0182, 0184, 0186,0188, 0189, 0190, 0191, 0192, 5519, 5520, 5521, 5522, 5525 и 5527 (SEQ ID NO: 45-92). В одном воплощении полиспецифический лиганд представляет собой или содержит аминокислотную последовательность,кодируемую нуклеотидной последовательностью любого DMS, раскрытого в данной заявке, например,любой из нуклеотидных последовательностей DMS0111, 0112, 0113, 0114, 0115, 0116, 0117, 0118, 0121,0122, 0123, 0124, 0132, 0133, 0134, 0135, 0136, 0162, 0163, 0168, 0169, 0176, 0177, 0182, 0184, 0186, 0188,0189, 0190, 0191, 0192, 5519, 5520, 5521, 5522, 5525 и 5527. В одном воплощении в изобретении предложена нуклеиновая кислота, кодирующая полиспецифический лиганд, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина против TNFR1 и единичный вариабельный домен против SA, где нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность любого DMS, раскрытого в данной заявке, например, любую из нуклеотидных последовательностей DMS0111, 0112, 0113, 0114, 0115, 0116,0117, 0118, 0121, 0122, 0123, 0124, 0132, 0133, 0134, 0135, 0136, 0162, 0163, 0168, 0169, 0176, 0177, 0182,0184, 0186, 0188, 0189, 0190, 0191, 0192, 5519, 5520, 5521, 5522, 5525 и 5527. Предложен вектор, содержащий такую нуклеиновую кислоту, а также клетка-хозяин (например, нечеловеческая клетка-хозяин),содержащая такой вектор. В одном аспекте в изобретении предложен полиспецифический лиганд, содержащий (1) единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 93% идентична (возможно, по меньшей мере на 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или на 100% идентична) аминокислотной последовательности DOM1h-574-156, (2) по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина против сывороточного альбумина (SA), который специфически связывается с SA, где единичный вариабельный домен против SA содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% (возможно, по меньшей мере на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или на 100%) идентична последовательности DOM7h-11-3 и (3) возможно, если линкер находится между единичным вариабельным доменом против TNFR1 и единичным вариабельным доменом против SA, указанный линкер содержит аминокислотную последовательность AST, возможно ASTSGPS. Альтернативно, линкер представляет собой AS(G4S)n, где п равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например AS(G4S)3. В одном аспекте в изобретении предложен полиспецифический лиганд, содержащий (1) единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 93% идентична (возможно по меньшей мере на 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или на 100%) идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-156, (2) по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина против сывороточного альбумина (SA), который специфически связывает SA, где единичный вариабельный домен против SA содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% (возможно, по меньшей мере на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или на 100%) идентична последовательности DOM7h-14-10 и (3) возможно, если линкер находится между единичным вариабельным доменом против TNFR1 и единичным вариабельным доменом против SA, указанный линкер содержит аминокислотную последовательность AST, возможно ASTSGPS. Альтернативно, линкер представляет собой AS(G4S)n, где п равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например AS(G4S)3. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист TNFR1, содержащий единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд из любого предшествующего аспекта изобретения. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) по изобретению для пероральной доставки, доставки в ЖКТ (желудочно-кишечный тракт) пациента, легочной доставки, доставки в легкое пациента или системной доставки. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, антагонист, имеющий последовательностьCDR1, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR1 из DOM1h-574-72,DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, антагонист, имеющий последовательностьCDR2, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR2 из DOM1h-574-72,DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, антагонист, имеющий последовательностьCDR3, которая по меньшей мере на 50% идентична последовательности CDR3 из DOM1h-574-72,DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, антагонист, содержащий единичный вариа-4 022925 бельный домен иммуноглобулина, включающий последовательность CDR1, CDR2 и/или CDR3 из единичного вариабельного домена, выбранного из DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138,DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист TNFR1 по изобретению для лечения и/или профилактики воспалительного состояния. В одном аспекте в изобретении предложено применение антагониста TNFR1 по изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения и/или профилактики воспалительного состояния. В одном аспекте антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 из любого аспекта изобретения предложен для нацеливания на одну или более эпитопных последовательностей TNFR1, выбранных из группы, состоящей из NSICCTKCHKGTYLY,NSICCTKCHKGTYL, CRKNQYRHYWSENLF и NQYRHYWSENLFQCF. В одном аспекте единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 антагонист из любого аспекта изобретения предложен для нацеливания на одну или более эпитопных последовательностей, выбранных их группы, состоящей из NSICCTKCHKGTYLY, NSICCTKCHKGTYL, CRKNQYRHYWSENLF и NQYRHYWSENLFQCF, для лечения и/или предупреждения любого состояния или заболевания, описанного выше. В одном аспекте в изобретении предложен способ лечения и/или предупреждения любого состояния или заболевания, описанного выше у пациента, включающий введение пациенту антагониста, единичного вариабельного домена, полипептида или полиспецифического лиганда против TNFR1 по изобретению для нацеливания на одну или более эпитопных последовательностей TNFR1, выбранных из группы, состоящей из NSICCTKCHKGTYLY, NSICCTKCHKGTYL, CRKNQYRHYWSENLF иNQYRHYWSENLFQCF, у пациента. В одном из аспектов изобретения предложен полиспецифический лиганд, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается с сывороточным альбумином (SA), где(а) единичный вариабельный домен против TNFR1 содержит аминокислотную последовательность,которая по меньшей мере на 80% (возможно, по меньшей мере на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или 100%) идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-156, DOM1m-15-12 или(б) единичный вариабельный домен против SA содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% (возможно, по меньшей мере на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или 100%) идентична аминокислотной последовательности DOM7h-11-12 или DOM7h-11-12dh; и(в) лиганд содержит линкер между указанными вариабельными доменами, содержащий аминокислотную последовательность AS или AST. В другом аспекте изобретения предложен полиспецифический лиганд, содержащий или состоящий из DMS5537, DMS5538, DMS5539 или DMS5540. В одном из аспектов изобретения предложена нуклеиновая кислота, кодирующая тот или другой полиспецифический лиганд. В другом аспекте изобретения предложена нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% (возможно, по меньшей мере на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична или 100%) идентична нуклеотидной последовательности DMS5537, DMS5538,DMS5539 или DMS5540. В изобретении также предложены вектор, содержащий такую нуклеиновую кислоту, а также клетка-хозяин, возможно нечеловеческая эмбриональная клетка, содержащая вектор. Краткое описание графических материалов Фиг. 1. BIAcore связывание dAbs из "наивных" выборок (naive selections) с человеческим TNFR1. Биотинилированный человеческий TNFR1 наносили на чип SA BIAcore. Четыре очищенных dAbs(DOM1h-509, DOM1h-510, DOM1h-549 и DOM1h-574) из наивных выборок вводили поверх человеческого TNFR1 и определяли связывание. Кривые, соответствующие каждому dAb, показаны стрелками. Фиг. 2. Анализ клеток MRC5 в отношении dAbs из наивных выборок к человеческому TNFR1. Четыре очищенных dAbs (DOM1h-509, DOM1h-510, DOM1h-549 и DOM1h-574) из наивных выборок и контрольное dAb (DOM1h-131-511) анализировали в анализе клеток MRC5 в отношении функционального ингибирования TNF-опосредованного высвобождения IL-8. Анализ проводили, как описано, и кривая,соответствующая каждому dAb, показана стрелкой. На графике концентрация dAb нанесена (с использованием Graphpad Prism) относительно процента наблюдаемой нейтрализации. Фиг. 3. Анализ связывания рецепторов для dAbs из наивных выборок с человеческим TNFR1. Четыре очищенных dAbs (DOM1h-509, DOM1h-510, DOM1h-549 и DOM1h-574) из наивных выборок и положительное контрольное dAb (DOM1h-131-511) анализировали в анализе связывания рецепторов для определения конкуренции с TNF. Известно, что положительное контрольное dAb конкурирует с TNF и демонстрирует кривую полного ингибирования. Выбранные dAbs против TNFR1 не ингибируют связывание TNF с рецептором. Анализ проводили, как описано, и кривая (с использованием Graphpad Prism),соответствующая каждому dAb, показана стрелкой, % нейтрализации" на оси ординат показывает ингибирование связывания TNF-альфа.-5 022925 Фиг. 4. Анализ клеток MRC5 в отношении dAbs к человеческому TNFR1 на основании склонного к ошибкам теста созревания. Три очищенных dAbs (DOM1h-574-7, DOM1h-574-8 и DOM1h-574-10) из наивных выборок и котрольное dAb (DOM1h-131-511) анализировали в анализе клеток MRC5 в отношении функционального ингибирования TNF-опосредованного высвобождения IL-8. Анализ проводили, как описано, и кривая, соответствующая каждому dAb, показана стрелкой. На графике концентрация dAb нанесена (с использованием Graphpad Prism) относительно процента наблюдаемой нейтрализации. По сравнению с родительским DOM1h-574, представленным на фиг. 2, эти dAbs демонстрируют повышенную эффективность в анализе клеток MRC5. Фиг. 5. Выравнивание аминокислотных последовательностей dAbs, идентифицированных из склонных к ошибкам библиотек DOM1h-574 и их последующие рекомбинации. Селекции из склонного к ошибкам теста созревания для улучшенных DOM1h-574 dAbs идентифицировали положения, ответственные за улучшение аффинности в DOM1h-574-7, DOM1h-574-8, DOM1h-574-10, DOM1h-574-11,DOM1h-574-12 и DOM1h-574-13. Рекомбинации этих мутаций (V30G, G44D, L45P, G55D, H56R и K94I) дали с DOM1h-574-14 по DOM1h-574-19, "." в конкретном положении показывает такую же аминокислоту, как обнаружено в DOM1h-574 в этом положении. CDRs обозначены подчеркиванием и жирным шрифтом (первая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR1, вторая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR2, и третья подчеркнутая последовательность представляет собой CDR3). Фиг. 6. Выравнивание аминокислотных последовательностей внеклеточного домена TNFR1 человека, яванского макака, собаки и мыши. Выравнивание выявляет ограниченную консервативность последовательности между TNFR1 человека и мыши, "." в конкретном положении показывает такую же аминокислоту, как обнаружено в человеческом ECD (внеклеточный домен) TNFR1 в этом положении. Фиг. 7. Мониторинг связывания DOM1h-574-16 и DOM1h-131-206 с TNFR1 собаки, как определено с помощью BIAcore. Чип BIAcore SA покрывали биотинилированным TNFR1 собаки. Затем очищенныеdAbs DOM1h-574-16 и DOM1h-131-206, каждое по 100 нМ, вводили поверх TNFR1 собаки. Из кривых ясно, что в то время как DOM1h-574-16 демонстрирует значительное связывание, в случае DOM1h-131206 наблюдается только ограниченное связывание. Фиг. 8. Мониторинг связывания очищенного DOM1h-574-16 с мышиным TNFR1, как определено с помощью BIAcore. Чип BIAcore SA покрывали биотинилированным TNFR1 мыши. Затем 1 мкМ очищенного dAb DOM1 h-574-16 вводили поверх TNFR1 мыши. Кривая ясно демонстрируют связываниеDOM1h-574-16 с TNFR1 мыши. Фиг. 9. Функциональная активность DOM1h-574-16 в анализе мышиных клеток L929. ОчищенныйDOM1h-574-16 (черная линия, треугольники) анализировали в отношении функциональной перекрестной реактивности с TNFR1 мыши путем тестирования способности защищать мышиные клетки L929 от цитотоксического эффекта TNF в присутствии актиномицина. В качестве положительного контроля включали связывание dAb DOM1m-21-23 с TNFR1 мыши (серая линия, квадраты) и продемонстрировали, что оно является активным. На графике концентрация dAb нанесена (с использованием GraphpadPrism) относительно процента нейтрализации активности TNF. Анализ проводили, как описано в примерах. Фиг. 10. Функциональная активность DOM1h-574-16 в анализе клеток CYNOM-K1 яванского макака. Очищенный DOM1h-574-16 (серая пунктирная линия, треугольники) анализировали в отношении функциональной перекрестной реактивности с TNFR1 яванского макака путем тестирования его способности ингибировать высвобождение IL-8 из клеток CYNOM-K1 в ответ на TNF. Анализ проводили, как описано в примерах. В качестве положительного контроля включили DOM1h-131-511 (черная сплошная линия, квадраты). Оба dAbs показали полную нейтрализацию. На графике концентрация dAb нанесена (с использованием Graphpad Prism) относительно процента нейтрализации активности TNF. Фиг. 11 А-С. Выравнивание аминокислотных последовательностей для наиболее эффективных dAbs из линии DOM1h-574, идентифицированных во время созревания аффинности. Аминокислотные последовательности dAbs с самой высокой эффективностью в анализе клеток MRC5 представлены вместе с родительским DOM1h-574, матрицей, используемой для начала созревания аффинности (DOM1h-57414), и более ранним dAb, идентифицированным с повышенной эффективностью (DOM1h-574-72), "." в конкретном положении показывает такую же аминокислоту, как обнаружено в DOM1h-574 в этом положении. CDRs обозначены подчеркиванием и жирным шрифтом (первая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR1, вторая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR2, и третья подчеркнутая последовательность представляет собой CDR3). Фиг. 12 А-С. Выравнивание аминокислотных последовательностей для наиболее устойчивых к протеазе dAbs из линии DOM1h-574, идентифицированных во время созревания аффинности. Аминокислотные последовательности этих dAbs, идентифицированных после созревания аффинности, которые, как было показано, являются наиболее устойчивыми к перевариванию трипсином. Для выравнивания также включено родительское dAb DOM1h-574, "." в конкретном положении показывает такую же аминокислоту, как обнаружено в DOM1h-574 в этом положении. CDRs обозначены подчеркиванием и жирным-6 022925 шрифтом (первая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR1, вторая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR2, и третья подчеркнутая последовательность представляет собой CDR3). Фиг. 13 А-С. Выравнивание аминокислотных последовательностей dAbs, выбранных для подробной характеристики. Выравнивание содержит двенадцать dAbs, выбранных для подробной характеристики, а также DOM1h-574 (родительское dAb) и DOM1h-574-16, которое использовали ранее для характеристики данной линии, "." в конкретном положении показывает такую же аминокислоту, как обнаружено в DOM1h-574 в том же положении. CDRs обозначены подчеркиванием и жирным шрифтом (первая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR1, вторая подчеркнутая последовательность представляет собой CDR2, и третья подчеркнутая последовательность представляет собой CDR3). Фиг. 14. Эпитопное картирование с помощью BIAcore для DOM1h-574-16 и DOM1h-131-511. ЧипBIAcore SA покрывали биотинилированным человеческим TNFR1. Через эту поверхность осуществляли инъекции DOM1h-131-511 и DOM1h-574-16 (каждое в концентрации 200 нМ с последующей регенерационной инъекцией (не показано. Определяли число RU (единицы ответа), связанных для каждого изdAbs. Затем вводили такую же концентрацию DOM1h-131-511 с последующей немедленной инъекциейDOM1h-574-16. Как можно ясно видеть, число единиц связывания для вторых инъекций DOM1h-574-16 равно первой инъекции, что указывает на то, что dAbs связывают неконкурирующие эпитопы. Фиг. 15. Эпитопное картирование с помощью BIAcore для DOM1h-574-16 и МАВ 225 (RDSystems). Чип BIAcore SA покрывали биотинилированным человеческим TNFR1. Через эту поверхность инъецировали DOM1h-574-16 и количественно определяли связывание. После регенерации (не показано) вводили МАВ 225 с последующим введением DOM1h-574-16. Уровень связывания для DOM1h-574-16 в значительной степени сравним с таковым в отсутствие МАВ 225, указывая на эпитоп связывания, не конкурирующий с МАВ 225. Фиг. 16. Эпитопное картирование с помощью BIAcore для DOM1h-574-16 и mAb клона 4.12. ЧипBIAcore SA покрывали биотинилированным человеческим TNFR1. Через эту поверхность вводили клон 4.12 (Invitrogen, Zymed) и количественно определяли связывание. После регенерации (не показано) вводили DOM1h-574-16 с последующим введением клона 4.12. Уровень связывания, наблюдаемый для второго введения клона 4.12, был примерно на 20% меньше, чем уровень, наблюдаемый в отсутствиеDOM1h-574-16. Этот результат показывает ограниченную конкуренцию для связывающего эпитопа на человеческом TNFR1. DOM1h-574-16 и клон 4.12, по-видимому, имеют слегка перекрывающиеся эпитопы. Резкие скачки RU сигнала непосредственно до и после инъекций представляет собой обусловленные буфером резкие скачки, которые не были вычтены. Фиг. 17. Эпитопное картирование с помощью BIAcore для DOM1h-574-16 и DOM1h-510. ЧипBIAcore SA покрывали биотинилированным человеческим TNFR1. Через поверхность осуществляли введение DOM1h-510 и определяли связывание. Затем вводили DOM1h-574-16 с последующим введением DOM1h-510. Очевидно, что второе введение DOM1h-510 показало значительно более слабое связывание, что указывает на то, что конкурирующий эпитоп связывается с DOM1h-510. Фиг. 18. Эпитопное картирование с помощью BIAcore для DOM1h-574-16 и DOM1m-21-23. ЧипBIAcore SA покрывали биотинилированным мышиным TNFR1. Через поверхность осуществляли введение DOM1h-574-16 и количественно определяли связывание. Затем вводили DOM1m-21-23 с последующим введением DOM1h-574-16. Число связанных RUs для DOM1h-574-16 после второй инъекции очень сходно с числом, наблюдаемым в отсутствие DOM1m-12-23. Это означает, что DOM1m-21-23 и DOM1h574-16 имеют различные эпитопы связывания на мышином TNFR1. Фиг. 19. Эпитопное картирование с помощью BIAcore DOM1h-574-16 для линейных пептидных фрагментов TNFR1. Каждый из четырех каналов чипа BIAcore SA покрывали одним из четырех биотинилированных пептидов. Пептиды представляли собой: 1) пептидный фрагмент человеческого TNFR1,который не демонстрировал связывания на ForteBio и служил в качестве отрицательного контроля, A3(SGSGNDCPGPGQDTDCREC), 2) домен-1 пептида D2 (SGSGNSICCTKCHKGTYLY), 3) домен-3 пептида D5 (SGSGCRKNQYRHYWSENLF) и 4) перекрывающийся домен-3 пептида Е 5 (SGSGNQYRHYWSENLFQCF). DOM1h-574-16 (2,5 мкМ; наливали на все четыре пептида и определяли уровень связывания. Никакого связывания DOM1h-574-16 не наблюдали на контрольном пептиде A3, в то время какdAb связывало три других пептида. На фиг. следы, соответствующие различным пептидам, определяли с помощью пептида-идентификатора. Фиг. 20. Оценка связывания DOM1m-21-23 с четырьмя линейными пептидными фрагментамиTNFR1 с помощью BIAcore. Каждый из четырех каналов чипа BIAcore SAa покрывали одним из четырех биотинилированных пептидов. Пептиды представляли собой: 1) пептидный фрагмент человеческогоTNFR1, который не демонстрировал связывания с DOM1h-574-16 на ForteBio и служил в качестве отрицательного контроля, A3 (SGSGNDCPGPGQDTDCREC), 2) домен-1 пептида D2 (SGSGNSICCTKCHKGTYLY), 3) домен-3 пептида D5 (SGSGCRKNQYRHYWSENLF) и 4) перекрывающийся домен-3 пептида Е 5 (SGSGNQYRHYWSENLFQCF). Чтобы установить, связывается ли DOM1m-21-23 также с этими пептидами, DOM1m-21-23 (2,5 MKMJ инъецировали поверх всех четырех пептидов. Как видно из фигуоы, DOM1m-21-23 не демонстрировал связывания ни с одним из четырех пептидов. Кривые накла-7 022925 дываются друг на друга. Фиг. 21. Эпитопное картирование DOM1h-131-511 для линейных пептидных фрагментов TNFR1 с помощью BIAcore. Каждый из четырех каналов чипа BIAcore SA покрывали одним из четырех биотинилированных пептидов. Пептиды представляли собой: 1) пептидный фрагмент человеческого TNFR1, который не демонстрировал связывания cDOM1h-574-16 на ForteBio и служил в качестве отрицательного контроля, A3 (SGSGNDCPGPGQDTDCREC), 2) домен-1 пептида D2 (SGSGNSICCTKCHKGTYLY), 3) домен-3 пептида D5 (SGSGCRKNQYRHYWSENLF) и 4) перекрывающийся домен-3 пептида Е 5(SGSGNQYRHYWSENLFQCF). DOM1h-131-511 (2,5 MKMJ наливали на все четыре пептида и определяли уровень связывания. Как видно из фигуры, DOM1h-131-511 не демонстрировал связывания ни с одним из четырех пептидов. Кривые близки к перекрыванию и обозначены стрелками с соответствующим номером пептида. Фиг. 22. BIAcore анализ связывания линейных слияний DOM0100-AlbudAb с мышиным сывороточным альбумином (MSA). MSA (Sigma-Aldrich) наносили на чип BIAcore CM5 с использованиемEDC/NHS химии в соответствии с инструкциями производителя. Затем DMS конструкции, каждая из которых состоит из идущего от N-конца к С-концу анти-TNFRI dAb - Линкер - AlbudAb и идентифицирована в таб. 6, вводили в концентрации 1 мкМ поверх MSA поверхности и измеряли связывание. Как видно из BIAcore кривых, DMS0192 и DMS0188 имели лучшую общую кинетику, в то время какDMS0182 и DMS0184 были наиболее слабыми связующими агентами с MSA. Соответствующая BIAcore кривая для каждого DMS клона показана стрелкой. Фиг. 23. BIAcore анализ связывания линейных слияний DOM0100-AlbudAb с человеческим сывороточным альбумином (HSA). HSA (Sigma-Aldrich) наносили на чип BIAcore CM5 с использованиемEDC/NHS химии в соответствии с инструкциями производителя. Затем DMS конструкции, каждая из которых состоит из идущего от N-конца с С-концу анти-TNFRI dAb - Линкер -AlbudAb и идентифицирована в табл.6, вводили в концентрации 1 мкМ поверх HSA поверхности и измеряли связывание. Как видно из BIAcore кривых, DMS0189 и DMS0190 имели лучшую общую кинетику, в то время как другиеDMS клоны, показанные на фигуре (DMS0182, DMS0184, DMS0186 и DMS0188), были очень похожи и значительно слабее в отношении их аффинности к HSA. Соответствующая BIAcore кривая для каждого(2,5 мг/кг, внутривенно), DMS0169 (2,5 мг/кг, внутривенно) или DMS0182 (10 мг/кг, внутрибрюшинно). В каждый момент времени (0,17, 1, 4, 12, 24, 48 и 96 ч) трех мышей умерщвляли и их сыворотку анализировали в отношении уровней соответствующего слияния DOM0100-AlbudAb. Среднее количество каждого слияния DOM0100-AlbudAb определяли для каждой временной точки и наносили на график относительно времени, DMS0168 (серая пунктирная линия), DMS0182 (черная пунктирная линия) и DMS0169(черная сплошная линия) (соответствующие линии также показаны стрелками). Используя некомпартментный анализ (NCA) в пакете аналитических программ WinNonLin (например, версия 5.1 (доступен от Pharsight Corp., Mountain View, CA94040, США), определяли конечный период полувыведения для каждой из молекул. DMS0182 имело конечный период полувыведения 5,9 ч, DMS0168 15,4 ч, DMS0169 17,8 ч. После внутрибрюшинного введения доз кривая для DMS0182 имеет форму, отличную от наблюдаемой для DMS0168 и DMS0169 (кривая показана с помощью Biacore). Фиг. 25. Артритный индекс у Tg197/hp55 K1 мышей во время обработки физиологическим раствором и DMS0169. Линия трансгенных мышей, используемая в данном исследовании, представляет собой гибрид Tg197 (сверхэкспрессирующий человеческий TNF) и hp55 (активирующий (knock-in) человеческий TNFR1, также известный как р 55), у которого спонтанно развивается артрит. С шестой до 15 недели двенадцать мышей в каждой группе обрабатывали два раза в неделю либо 10 мг/кг DMS0169, либо физиологическим раствором. Каждую неделю определяли артритный индекс для двух задних суставов на мышь и средний артритный индекс и стандартную ошибку среднего для 12 мышей наносили на график относительно времени. Очевидно, что у ОМ 80169-обработанных животных меньше развивается артрит. Фиг. 26. Масса тела мышей Tg197/hp55 K1 во время обработки физиологическим раствором иTg197 (сверхэкспрессирующий человеческий TNF) и hp55 (активирующий человеческий TNFR1, также известный как р 55), у которого спонтанно развивается артрит. С шестой до 15 недели двенадцать мышей в каждой группе обрабатывали два раза в неделю либо 10 мг/кг DMS0169, либо физиологическим раствором. Каждую неделю мышей взвешивали, и средние данные наносили на график с "усами", показывающими стандартную ошибку среднего. Из фигуры очевидна, хотя и не является статистически значимой, тенденция к увеличению для DMS0169 по сравнению с животными, обработанными физиологическим раствором. Фиг. 27. Гистология и артритные индексы для мышей Tg197/hp55 K1 на 15 неделю после обработки физиологическим раствором и DMS0169. Линия трансгенных мышей, используемая в данном исследовании, представляет собой гибрид Tg197 (сверхэкспрессирующий человеческий TNF) и hp55 (активирующий человеческий TNFR1, также известный как р 55), у которого спонтанно развивается артрит. С-8 022925 шестой недели до 15-й недели двенадцать мышей в каждой группе обрабатывали два раза в неделю либо 10 мг/кг DMS0169, либо физиологическим раствором. На 15 неделю мышей умерщвляли и оценивали как артритный индекс (черные прямоугольники), так и гистологию (светлые прямоугольники) в суставе(Keffer et al. EMBO. J. 10, p4025 (1991. Рассчитывали данные и стандартные ошибки в каждой группе,состоящей из двенадцати животных. Показано, что различие между группами обработки является статистически значимым (р менее 0,001). Подробное описание изобретения В пределах данного описания изобретение было описано со ссылкой на воплощения таким образом,чтобы обеспечить ясное и точное описание. Предполагается и должно быть понятно, что воплощения могут быть по-разному скомбинированы или разделены без отклонения от изобретения. Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данной заявке,имеют такое же значение, как это обычно понимается специалистом в данной области (например, в культивировании клеток, молекулярной генетике, химии нуклеиновых кислот, методах гибридизации и биохимии). Стандартные методы используются для молекулярных, генетических и биохимических методов(см. обычно Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. и Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4th Ed,John WileySons, Inc., которые включены в данную заявку посредством ссылки) и химических методов. Единичные вариабельные домены иммуноглобулина (dAbs), описанные в данной заявке, содержат области, определяющие комплементарность (CDR1, CDR2 и CDR3). Положения CDRs и каркасных областей (FR), а также система нумерации были определены Kabat с соавт. (Kabat, E.A. et al, Sequences ofVL (VK) dAbs, описанные в данной заявке, очевидны специалисту в данной области на основании хорошо известной системы нумерации аминокислот по Kabat и определении CDRs. Согласно системе нумерацииKabat CDR-H3 тяжелой цепи имеют разную длину, инсерции пронумерованы между остатком Н 100 и Н 101 буквами вплоть до K (т.е. Н 100, Н 100 АН 100K, Н 101). Альтернативно, CDRs можно определить с использованием системы Chothia (Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariableregions; Nature 342, p877-883), согласно AbM или согласно конктному методу (Contact method) следующим образом. См. http://www.bioinf.org.uk/abs/ для подходящих способов определения CDRs. Как только каждый остаток был пронумерован, можно затем применять следующие определенияCDR ("-" означают такие же номера остатков, как показано для Kabat):Kabat - наиболее широко используемый метод, основанный на вариабильности поеледовательностиChothia - основан на положении областей структурных петель (с использованием нумерации Chothia): Контакт - основан на кристаллических структурах и прогнозировании остатков, контактирующих с антигеном (с использованием нумерации Kabat): (с использованием нумерации Chothia):(TNFR1)", или "антагонист против TNFR1" или тому подобное относится к агенту (например, молекуле,соединению), который связывает TNFR1 и может ингибировать (т.е. одну или более) функцию TNFR1. Например, антагонист TNFR1 может ингибировать связывание TNF с TNFR1 и/или ингибировать сигнальную трансдукцию, опосредованную TNFR1. Соответственно, TNFR1-опосредованные процессы и клеточные ответы (например, TNF-индуцированная гибель клеток в стандартном анализе цитотоксичности L929) можно ингибировать с помощью антагониста TNFR1. Как использовано в данной заявке, "пептид" относится к примерно 2-50 аминокислотам, которые соединены вместе посредством пептидных связей. Как использовано в данной заявке, "полипептид" относится к по меньшей мере примерно 50 аминокислотам, которые соединены вместе посредством пептидных связей. Полипептиды, как правило, включают третичную структуру и сворачиваются в функциональные домены. Как использовано в данной заявке, пептид или полипептид (например, доменное антитело (dAb,который является "устойчивым к протеазному расщеплению", по существу не расщепляется протеазой при инкубации с указанной протеазой в условиях, подходящих для протеазной активности. Полипептид(например, dAb), по существу, не расщепляется, когда не более чем примерно 25%, не более чем примерно 20%, не более чем примерно 15%, не более чем примерно 14%, не более чем примерно 13%, не более чем примерно 12%, не более чем примерно 11%, не более чем примерно 10%, не более чем примерно 9%, не более чем примерно 8%, не более чем примерно 7%, не более чем примерно 6%, не более чем примерно 5%, не более чем примерно 4%, не более чем примерно 3%, не более чем примерно 2%, не более чем примерно 1% или, по существу, ни один из белков не расщепляется протеазой после инкубации с указанной протеазой в течение примерно одного часа при температуре, подходящей для протеазной активности, например, при 37 или 50 С. Деградацию белка можно оценить с использованием любого подходящего метода, например, с помощью ПААГ-ДСН (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия) или с помощью функционального анализа (например, связывание лиганда), как описано в данной заявке. Как использовано в данной заявке, термин "дисплейная система" относится к системе, в которой группа полипептидов или пептидов доступна для селекции на основе желаемой характеристики, такой как физическая, химическая или функциональная характеристика. Дисплейная система может представлять собой подходящий репертуар полипептидов или пептидов (например, в растворе, иммобилизованном на подходящем носителе). Дисплейная система также может представлять собой систему, которая использует клеточную систему экспрессии (например, экспрессию библиотеки нуклеиновых кислот, например, в трансформированных, инфицированных, трансфицированных или трансдуцированных клетках, и дисплей кодируемых поли пептидов на поверхности клеток) или бесклеточную систему экспрессии (например, компартментализацию и дисплей с использованием эмульсии). Примерные дисплейные системы связывают кодирующую функцию нуклеиновой кислоты и физические, химические и/или функциональные характеристики полипептида или пептида, кодируемого данной нуклеиновой кислотой. Используя такую дисплейную систему, можно выбрать поли пептиды или пептиды, которые имеют желаемую физическую, химическую и/или функциональную характеристику, и нуклеиновую кислоту, кодирующую выбранный полипептид или пептид, можно легко изолировать или извлечь. Целый ряд дисплейных систем, которые связывают кодирующую функцию нуклеиновой кислоты и физические, химические и/или функциональные характеристики полипептида или пептида, известны в данной области,например, бактериофаговый дисплей (фаговый дисплей, например, фагмидный дисплей), рибосомный дисплей, компартментализация и дисплей с использованием эмульсии, дрожжевой дисплей, пуромициновый дисплей, бактериальный дисплей, дисплей на плазмиде, ковалентный дисплей и тому подобное.(Griffiths et al Как использовано в данной заявке, "репертуар" относится к группе полипептидов или пептидов, которые характеризуются разнообразием аминокислотных последовательностей. Отдельные члены репертуара могут иметь общие признаки, такие как общие структурные признаки (например, общую коровую структуру) и/или общие функциональные признаки (например, способность связываться с общим лигандом (например, типичным лигандом или целевым лигандом, TNFR1. Как использовано в данной заявке, термин "функциональный" описывает полипептид или пептид,который имеет биологическую активность, такую как специфическая связывающая активность. Напри- 10022925 мер, термин "функциональный полипептид" включает антитело или его антиген-связывающий фрагмент,который связывается с целевым антигеном посредством его антиген-связывающего сайта. Как использовано в данной заявке, "типичный лиганд" относится к лиганду, который связывается со значительной частью (например, по существу, со всеми) функциональных членов заданного репертуара. Типичный лиганд (например, обычный типичный лиганд) может связываться со многими членами заданного репертуара, даже если члены не обладают специфичностью связывания с общим целевым лигандом. В целом, наличие функционального типичного лигандсвязывающего сайта на полипептиде (о чем свидетельствует способность связываться с типичным лигандом) указывает на то, что полипептид правильно свернут и функционален. Подходящие примеры типичных лигандов включают суперантигены, антитела, которые связываются с эпитопом, экспрессирующимся на значительной части функциональных членов репертуара, и тому подобное."Суперантиген" представляет собой термин в данной области техники, который относится к типичным лигандам, которые взаимодействуют с членами суперсемейства иммуноглобулинов в сайте, который отличается от целевых лигандсвязывающих сайтов этих белков. Стафилококковые энтеротоксины представляют собой примеры суперантигенов, которые взаимодействуют с Т-клеточными рецепторами. Суперантигены, которые связывают антитела, включают белок G, который связывается с константной областью IgG (Bjorck and Kronvall, J. Immunol., 133:969 (1984; белок А, который связывается с константной областью IgG и VH-доменами (Forsgren and Sjoquist, J. Immunol, 97:822 (1966; и белок L, который связывается с VL-доменами (Bjorck, J. Immunol, 740:1194 (1988. Как использовано в данной заявке, "целевой лиганд" относится к лиганду, который специфически или избирательно связывается полипептидом или пептидом. Например, когда полипептид представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, целевой лиганд может быть любым желаемым антигеном или эпитопом. Связывание с целевым антигеном зависит от функциональности полипептида или пептида. Как использовано в данной заявке, антитело относится к IgG, IgM, IgA, IgD или IgE или фрагменту(такому как Fab, F(ab')2, Fv, дисульфидсвязанный Fv, scFv, полиспецифическое антитело в закрытой конформации, дисульфидсвязанный scFv, диатело), независимо от того, происходит ли оно из любого вида, естественно продуцирующего антитело, или создано посредством технологии рекомбинантных ДНК; или выделено из сыворотки, В-клеток, гибридом, трансфектом, дрожжей или бактерий. Как использовано в данной заявке, "антительный формат", "форматированный" или сходные термины относятся к любой подходящей полипептидной структуре, в которой один или более вариабельных доменов антитела могут быть встроены для того, чтобы придать специфичность связывания с антигеном на уровне структуры. В данной области техники известны различные подходящие антительные форматы,такие как химерные антитела, гуманизированные антитела, человеческие антитела, одноцепочечные антитела, биспецифические антитела, тяжелые цепи антител, легкие цепи антител, гомодимеры и гетеродимеры тяжелых цепей и/или легких цепей антитела, антиген-связывающие фрагменты любого из вышеизложенного (например, Fv-фрагмент (например, одноцепочечный Fv(scFv), дисульфидсвязанный Fv),Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, F(ab')2-фрагмент), единичный вариабельный домен антитела (например,dAb, VH, VHH, VL) и модифицированные варианты любого из вышеизложенных (например, модифицированные посредством ковалентного присоединения полиэтиленгликоля или другого подходящего полимера, или гуманизированный VНН). Фраза "единичный вариабельный домен иммуноглобулина" относится к вариабельному домену антитела (VH, VHH. VL), который специфически связывается с антигеном или эпитопом независимо от других V-областей или доменов. Единичный вариабельный домен иммуноглобулина может присутствовать в формате (например, гомо- или гетеро-мультимера) с другими вариабельными областями или вариабельными доменами, где другие области или домены не требуются для связывания антигена посредством единичного вариабельного домена иммуноглобулина (т.е. где единичный вариабельный домен иммуноглобулина связывает антиген независимо от дополнительных вариабельных доменов). "Доменное антитело" или "dAb" представляет собой то же, что и "единичный вариабельный домен иммуноглобулина", как термин, используемый в данной заявке. "Единичный вариабельный домен иммуноглобулина" представляет собой то же, что и "иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен", как термин, используемый в данной заявке. "Единичный вариабельный домен антитела" или "антительный единичный вариабельный домен" представляет собой то же, что и "единичный вариабельный домен иммуноглобулина", как термин, используемый в данной заявке. Единичный вариабельный домен иммуноглобулина представляет собой в одном воплощении человеческий вариабельный домен антитела, но также включает единичные вариабельные домены из другого вида, такие как VHH dAbs грызунов (например, как описано в WO 00/29004, содержание которой включено в данную заявку посредством ссылки во всей своей полноте), акулы-няньки и верблюдовых (Camelid). VHH верблюдовых представляют собой полипептиды единичного вариабельного домена иммуноглобулина, которые происходят из вида, включающего верблюда, ламу, альпака, дромедара и гуанако, которые продуцируют антитела, состоящие из тяжелых цепей,естественно лишенные легких цепей. VHH могут быть гуманизированными."Домен" представляет собой свернутую белковую структуру, которая имеет третичную структуру,- 11022925 не зависящую от остального белка. Как правило, домены отвечают за отдельные функциональные свойства белков и во многих случаях могут быть добавлены, удалены или перенесены на другие белки без потери функции остальной части белка и/или домена. "Единичный вариабельный домен антитела" представляет собой свернутый полипептидный домена, содержащий последовательности, характерные для вариабельных доменов антитела. Поэтому он включает вариабельные домены полного антитела и модифицированные вариабельные домены, например, в которых одна или более петель были заменены последовательностями, которые не характерны для вариабельных доменов антитела, или вариабельные домены антитела, которые были укорочены или содержат N- или С-концевые удлинения, а также свернутые фрагменты вариабельных доменов, которые сохраняют по меньшей мере связывающую активность и специфичность полноразмерного домена. Термин "библиотека" относится к смеси гетерогенных полипептидов или нуклеиновых кислот. Библиотека состоит из членов, каждый из которых имеет последовательность единичного полипептида или нуклеиновой кислоты. В этом смысле "библиотека" является синонимом "репертуара". Различия в последовательности между членами библиотеки отвечают за разнообразие, присутствующее в библиотеке. Библиотека может принимать форму простой смеси поли пептидов или нуклеиновых кислот или может быть в форме организмов или клеток, например бактерий, вирусов, животных или растительных клеток и тому подобного, трансформированных библиотекой нуклеиновых кислот. В одном воплощении каждый отдельный организм или клетка содержит только один или ограниченное число членов библиотеки. В одном воплощении нуклеиновые кислоты включены в экспрессирующие векторы для того, чтобы обеспечить экспрессию полипептидов, кодируемых нуклеиновыми кислотами. Поэтому в одном аспекте библиотека может принимать форму популяции организмов-хозяев, где каждый организм содержит одну или более копий экспрессирующего вектора, содержащего один член библиотеки в форме нуклеиновой кислоты, которая может быть экспрессирована для получения соответствующего поли пептидного члена. Таким образом, популяция организмов-хозяев имеет потенциал для кодирования большого репертуара разнообразных полипептидов."Универсальный каркас" представляет собой последовательность каркаса единичного антитела, соответствующую областям антитела, консервативным по последовательности, как определено Kabat ("Sequences of Proteins of Immunological Interest", US Department of Health and Human Services) или соответствующую репертуару или структуре человеческого иммуноглобулина зародышевого пути, как определеноChothia и Lesk, (1987) J. Mol. Biol. 196:910-917. В библиотеках и репертуарах можно использовать единичный каркас или набор таких каркасов, которые, как было обнаружено, обеспечивают получение практически любой связывающей специфичности посредством изменения только гипервариабельных областей. Используемый в данной заявке термин "доза" относится к количеству лиганда, вводимого субъекту полностью в одно время (однократная доза) или в виде двух или более введений в течение определенного промежутка времени. Например, доза может относиться к количеству лиганда (например, лиганда,содержащего единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который связывается с целевым антигеном), вводимого субъекту в течение одних суток (24 ч) (суточная доза), двух суток, одной недели, двух недель, трех недель или одного или более месяцев (например, посредством единичного введения или посредством двух или более введений). Интервал между дозами может представлять собой любое желаемое количество времени. Как использовано в данной заявке, "гидродинамический размер" относится к кажущемуся размеру молекулы (например, белковой молекулы, лиганда) на основании диффузии молекулы через водный раствор. Диффузия или движение белка через раствор могут осуществляться для получения кажущегося размера белка, где размер задается "радиусом Стокса" или "гидродинамическим радиусом" белковой частицы. "Гидродинамический размер" белка зависит как от массы, так и от формы (конформации), так что два белка, имеющие одинаковую молекулярную массу, могут иметь разные гидродинамические размеры на основании общей конформации белка. Как указано в настоящей заявке, термин "конкурирует" означает, что связывание первой мишени с ее когнатным целевым связывающим доменом ингибируется в присутствии второго связывающего домена, который является специфическим для когнатной мишени. Например, связывание может ингибироваться стерически, например, посредством физического блокирования связывающего домена или путем изменения структуры или окружения связывающего домена так бразом, чтобы его аффинность или авидность к мишени уменьшалась. См. WO 2006038027 для деталей того, как выполнять ELISA и конкурентные BiaCore эксперименты для определения конкуренции между первым и вторым связывающими доменами. Расчеты "гомологии" или "идентичности" или "сходства" между двумя последовательностями (данные термины используются взаимозаменяемо в данной заявке) осуществляются следующим образом. Последовательности выравнивают для оптимального сравнения (например, бреши можно вводить в одну или обе первую или вторую аминокислотную или нуклеиновокислотную последовательность для оптимального выравнивания, и негомологичные последовательности можно не учитывать для сравнения). В воплощении длина эталонной последовательности, выровненной для целей сравнения, составляет по- 12022925 меньшей мере 30%, или по меньшей мере 40%, или по меньшей мере 50%, или по меньшей мере 60%,или по меньшей мере 70, 80, 90, 100% от длины эталонной последовательности. Аминокислотные остатки или нуклеотиды в соответствующих аминокислотных положениях или нуклеотидных положениях затем сравнивают. Если положение в первой последовательности занято тем же аминокислотным остатком или нуклеотидом, что и соответствующее положение во второй последовательности, то молекулы являются идентичными по этому положению (используемая в данной заявке "гомология" аминокислот или нуклеиновых кислот эквивалентна "идентичности" аминокислот или нуклеиновых кислот). Процент идентичности между двумя последовательностями зависит от числа идентичных положений, разделенных последовательностями, с учетом числа брешей и длины каждой бреши, которые необходимо вводить для оптимального выравнивания этих двух последовательностей. Выравнивания и гомологию, сходство или идентичность аминокислотных и нуклеотидных последовательностей, как определено в данной заявке, можно получить или определить с использованием алгоритма BLAST 2 Sequences, используя параметры по умолчанию (Tatusova, T. A. et al., FEMS Microbiol Lett, 174:187-188 (1999. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-72,DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном воплощении единичный вариабельный домен представляет собой DOM1 h-574-72, DOM1h-574-109,DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162, DOM1h-574-180, DOM1h-574-7, DOM1h-574-8,DOM1h-574-10, DOM1h-574-12, DOM1h-574-13, DOM1h-574-14, DOM1h-574-15, DOM1h-574-16,DOM1h-574-17, DOM1h-574-18 или DOM1h-574-19. В одном воплощении вариабельный домен согласно этому аспекту может иметь один или более признаков любого из других аспектов изобретения, и описание настоящего текста следует интерпретировать для обеспечения возможности комбинирования таких признаков, например, для включения в формулу изобретения в данной заявке. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-510,DOM1h-543 или DOM1h-549. В одном воплощении единичный вариабельный домен представляет собойDOM1h-510, DOM1h-543 или DOM1h-549. В одном воплощении вариабельный домен согласно этому аспекту может иметь один или более признаков любого из других аспектов изобретения, и описание настоящего текста следует интерпретировать для обеспечения возможности комбинирования таких признаков, например, для включения в формулу изобретения в данной заявке. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), где единичный вариабельный домен представляет собой мутант DOM1h-574-14, содержащий одну или более следующих мутаций (нумерация в соответствии с Kabat): положение 30 соответствует L или F,положение 52 соответствует А или Т,положение 52 а соответствует D или Е,положение 54 соответствует А или R,положение 57 соответствует R, K или А,положение 60 соответствует D, S, T или K,положение 61 соответствует Е, H или G,положение 62 соответствует А или Т,положение 100 соответствует R, G, N, К, Q, V, A, D, S или V и положение 101 соответствует A, Q, N, Е, V, H или K. В одном воплощении этого аспекта мутантная аминокислотная последовательность по меньшей мере на 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574. В одном воплощении мутантная аминокислотная последовательность идентична или по меньшей мере на 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-14. В одном воплощении вариабельный домен согласно этому аспекту может иметь один или более признаков любого из других аспектов изобретения и описание настоящего текста следует интерпретировать для обеспечения возможности комбинирования таких признаков, например, для включения в формулу изобретения в данной заявке. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий валин в положении 101 (нумерация в соответствии с Kabat). Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что V101 часто ассоциирован с высокой KD (константа диссоциации) для связывания TNFR1 (например, TNFR1 человека). В одном воплощении вариабельный домен согласно этому аспекту может иметь один или более признаков любого из других аспектов изобретения, и описание настоящего текста следует интерпретировать для обеспечения возможности комбинирования таких признаков, например, для включения в формулу изобретения в данной заявке.- 13022925 В одном аспекте в изобретении предложен иммуноглобулин тяжелой цепи против рецептора TNF 1 типа 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий валин в положении единичного вариабельного домена 101 (нумерация в соответствии с Kabat). Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что V101 часто ассоциирован с протеолитической стабильностью. Более подробную информацию о протеолитической стабильности и протеолитически стабильных единичных вариабельных доменах иммуноглобулинов можно найти в WO 2008149144 и WO 2008149148, описания которых включены в данную заявку посредством ссылки во всей свой полноте, в частности, для обеспечения тестов для определения устойчивости к протеазе вариабельных доменов и других лигандов, антагонистов и связывающих доменов против TNFR1. В одном воплощении вариабельный домен согласно этому аспекту может иметь один или более признаков любого из других аспектов изобретения и описание настоящего текста следует интерпретировать для обеспечения возможности комбинирования таких признаков, например, для включения в формулу изобретения в данной заявке. В одном воплощении единичный вариабельный домен согласно любому аспекту содержит один или более из 30G, 44D, 45 Р, 55D, 56R, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 45 Р, 55D, 56R, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 55D, 56R, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 55D, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 45 Р, 55D, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 30G, 44D, 55D, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит один или более из 30G, 44D, 45 Р, 55D, 56R,941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat, где аминокислотная последовательность единичного вариабельного домена иным образом идентична аминокислотной последовательностиDOM1h-574. В одном воплощении вариабельный домен предложен для связывания TNFR1 человека,мыши или яванского макака. В одном воплощении вариабельный домен содержит 45 Р, 55D, 56R, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 55D, 56R, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 55D, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 45 Р, 55D, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии сKabat. В одном воплощении вариабельный домен содержит 30G, 44D, 55D, 941 и 98R, где нумерация находится в соответствии с Kabat. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1 h-574-72, DOM1h-574-156, DOM1h-574-109, DOM1h-574-132, DOM1h-574-135,DOM1h-574-138, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В этом аспекте предложены вариабельные домены, которые являются эффективными нейтрализаторами TNFR1 (например, по меньшей мере человеческого TNFR1) в клеточном анализе, например, в стандартном анализе MRC5, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной секреции IL-8; или в стандартном анализе L929, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной цитотоксичности; в стандартном анализе KI яванского макака, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной секреции IL-8. Детали стандартных анализов антагонистов TNFR1 известны в данной области, например,в WO 2006038027, WO 2008149144 и WO 2008149148. Подробная информация представлена также в экспериментальном разделе ниже. В одном воплощении в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности любого из вариабельных доменов DOM1h, приведенных в табл. 11 ниже, за исключением DOM1h-574. В одном воплощении в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности любого из DOM1h-574-89 - DOM1h-574-179. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-109, DOM1h-574-93, DOM1h-574-123, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126 илиDOM1h-574-129, DOM1h-574-133, DOM1h-574-137 или DOM1h-574-160. В этом аспекте предложены вариабельные домены, которые протеолитически стабильны. Ссылка сделана на сказанное выше о протеазной стабильности. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, ко- 14022925 торая идентична или по меньшей мере на 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1 h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126, DOM1h-574-133,DOM1h-574-135 или DOM1h-574-138, DOM1h-574-139, DOM1h-574-155, DOM1h-574-156, DOM1h-574162 или DOM1h-574-180. В этом аспекте предложены вариабельные домены, которые связывают человеческий TNFR1 с высокой аффинностью и возможно также демонстрируют желаемую аффинность в отношении мышиного TNFR1. Единичный вариабельный домен представляет собой, например, неконкурентный ингибиторTNFR1. В одном воплощении единичный вариабельный домен против TNFR1 из любого аспекта изобретения связывает TNFR1 (например, человеческий TNFR1), но не (или по существу не) конкурирует или ингибирует связывание TNF-альфа с TNFR1 (например, в стандартном анализе связывания рецептора). В этом воплощении в одном примере вариабельный домен специфически связывается с доменом 1 TNFR1,например человеческого TNFR1. В этом воплощении в одном примере вариабельный домен специфически связывается с PLAD TNFR1, например человеческого TNFR1. В одном воплощении единичный вариабельный домен против TNFR1 из любого аспекта изобретения содержит сайт связывания, который специфически связывает:(1) человеческий TNFR1 с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса; или(2) TNFR1 примата, не являющегося человеком (например, TNFR1 яванского макака, макака-резуса или бабуина), с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса; или(3) мышиный TNFR1 с константой диссоциации (KD) (или примерно) 7 нМ или менее, 6 нМ или менее, 5 нМ или менее, 4 нМ или менее, 3 нМ или менее, 2 нМ или менее или 1 нМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса. В одном примере вариабельный домен специфически связывает согласно (1) и (2); (1) и (3); (1), (2) и (3) или (2) и (3). В одном воплощении единичный вариабельный домен из любого аспекта изобретения содержит сайт связывания, который специфически связывает:(а) человеческий TNFR1 с константой скорости диссоциации (Koff) (или примерно) 210-4c-1 или менее, или 110-4c-1 или менее, или 110-5 с-1 или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса.(б) TNFR1 примата, не являющегося человеком (например, TNFR1 яванского макака, макака-резуса или бабуина), с константой скорости диссоциации (Koff) (или примерно) 210-4c-1 или менее, 110-4c-1 или менее, или 110-5 с-1 или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса; или(в) мышиный TNFR1 с константой скорости диссоциации (Koff) (или примерно) 110-3 с-1 или менее, или 110-4c-1 или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса. В одном примере вариабельный домен специфически связывает согласно (а) и (б); (а) и (в); (а), (б) и (в) или (б) и(в). В одном воплощении единичный вариабельный домен из любого аспекта изобретения содержит сайт связывания, который специфически связывает:(а) человеческий TNFR1 с константой скорости ассоциации (Коп) (или примерно) 5104 М-1 с-1 или более, 1105 М-1 с-1 или более, 2105 М-1 с-1 или более, 3105 M-1 с-1 или более, 4105 М-1 с-1 или более, или 5105 М-1 с-1 или более, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса;(б) TNFR1 примата, не являющегося человеком (например, TNFR1 яванского макака, макака-резуса или бабуина), с константой скорости ассоциации (Коп) (или примерно) 5104 М-1 с-1 или более, 1105 М-1 с-1 или более, 2105 М-1 с-1 или более, 3105 М-1 с-1 или более, 4105 M-1 с-1 или более, или 510 M-1 с-1 или более, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса; или(в) мышиный TNFR1 с константой скорости ассоциации (Коп) (или примерно) 0,5105 M-1 с-1 или более, 1105 M-1 с-1 или более, или 210 M-1 с-1 или более, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса. В одном примере вариабельный домен специфически связывает согласно (а) и (б); (а) и (в); (а), (б) и (в) или (б) и (в). В одном воплощении единичный вариабельный домен из любого аспекта изобретения специфически связывает TNFR1 человека, яванского макака и возможно собаки. Специфическое связывание характеризуется константой диссоциацией KD 10 мкмоль или менее, возможно 1 мкмоль или менее. Специфическое связывание антигенсвязывающего белка с антигеном или эпитопом можно определить с помощью подходящего анализа, включая, например, анализ Скэтчарда и/или анализы конкурентного связывания,такие как радиоиммунологические анализы (RIA), иммуноферментные анализы, такие как ELISA, и конкурентные "сэндвич"-анализы и его различные варианты. В одном примере вариабельный домен также специфически связывается с мышиным TNFR1. В одном воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный домен ингибирует связывание TNFR1 человека, яванского макака и возможно собаки с DOM1h-574-72, DOM1h-574-109,- 15022925DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180, например, в стандартном клеточном анализе (например, как описано в данной заявке или в WO 2006038027, WO 2008149144 или WO 2008149148). В воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный домен ингибирует связывание TNFR1 человека, мыши, яванского макака и возможно собаки с DOM1 h-574-72, DOM1h574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180, например, в стандартном анализе связывания рецептора (например, как описано в данной заявке или в WO 2006038027, WO 2008149144 или WO 2008149148). В примере "ингибирует" в этих воплощениях означает, что ингибирование может быть полным (100%-ное ингибирование) или значительным (по меньшей мере 90, 95, 98 или 99%). В одном воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный, антагонист, лиганд или полипептид против TNFR1 нейтрализует TNFR1 (например, человеческий TNFR1) с ND50 (средняя нейтрализующая доза) (или примерно) 5, 4, 3, 2 или 1 нМ или менее в стандартном анализе MRC5, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной секреции IL-8. В одном воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный, антагонист, лиганд или полипептид против TNFR1 нейтрализует TNFR1 (например, мышиный TNFR1) с ND50 150, 100, 50,40, 30 или 20 нМ или менее; или от (примерно) 150 до 10 нМ; или от (примерно) 150 до 20 нМ; или от(примерно) 110 до 10 нМ; или от (примерно) 110 до 20 нМ в стандартном анализе L929, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной цитотоксичности. В одном воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный, антагонист, лиганд или полипептид против TNFR1 нейтрализует TNFR1 (например, TNFR1 яванского макака) с ND50 5, 4,3, 2 или 1 нМ или менее; или (примерно) от 5 до (примерно) 1 нМ в стандартном анализе KI яванского макака, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной секреции IL-8. В одном воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный домен содержит концевой, возможно С-концевой остаток цистеина. Например, остаток цистеина можно использовать для присоединения ПЭГ к вариабельному домену, например, с использованием малеимидной связи (см., например, WO 04081026). В воплощении любого аспекта изобретения единичный вариабельный домен связан с полиалкиленгликолевой группировкой, возможно полиэтиленгликолевой группировкой. См., например, WO 04081026 для подходящих ПЭГ группировок и методов и тестов конъюгации. Эти описания включены в данную заявку с целью обеспечения описания, например, конкретных полиэтиленгликолей,подлежащих включению в формулу изобретения ниже. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая идентична аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательностиDOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180,или отличается от выбранной аминокислотной последовательности не более чем 25, 20, 15, 10 или 5 аминокислотными положениями и имеет последовательность CDR1 (область, определяющая комплементарность), которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR1 из выбранной аминокислотной последовательности. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR3, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR3 из выбранной ами нокислотной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая идентична аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательности DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574180, или отличается от выбранной аминокислотной последовательности не более чем 25, 20, 15, 10 или 5 аминокислотными положениями и имеет последовательность CDR2, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR2 из выбранной аминокислотной последовательности. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR2, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR2 из выбранной аминокислотной последовательности. Дополнительно или альтернативно, в одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR3, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR3 из выбранной аминокислотной последовательности. Дополнительно или альтернативно, в одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина содержит последовательность CDR1, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR1 из выбранной аминокислотной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий аминокислотную последовательность, которая идентична аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательностиDOM1 h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180,- 16022925 или отличается от выбранной аминокислотной последовательности не более чем 25, 20, 15, 10 или 5 аминокислотными положениями и имеет последовательность CDR3, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR3 из выбранной аминокислотной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен протеазоустойчивый единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), где единичный вариабельный домен устойчив к протеазе при инкубации с(1) концентрацией (с) по меньшей мере 10 мкг/мл протеазы при 37 С в течение периода времени (t) по меньшей мере один час; или(2) концентрацией (с') по меньшей мере 40 мкг/мл протеазы при 30 С в течение периода времени (t) по меньшей мере один час,где вариабельный домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-126 илиDOM1h-574-133 и возможно содержит валин в положении 101 (нумерация Kabat). В другом аспекте в изобретении предложен протеазоустойчивый единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), где единичный вариабельный домен устойчив к протеазе при инкубации с:(1) концентрацией (с) по меньшей мере 10 мкг/мл протеазы при 37 С в течение периода времени (t) по меньшей мере один час; или(2) концентрацией (с') по меньшей мере 40 мкг/мл протеазы при 30 С в течение периода времени (t) по меньшей мере один час,где вариабельный домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательностиDOM1h-574, DOM1h-574-93, DOM1h-574-123, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126, DOM1h-574-129,DOM1h-574-133, DOM1h-574-137 или DOM1h-574-160 и возможно содержит валин в положении 101(нумерация Kabat). В одном воплощении этих аспектов протеазоустойчивый вариабельный домен против TNFR1 представляет собой неконкурентный вариабельный домен (т.е. он (по существу) не ингибирует связываниеTNF-альфа с TNFR1). См. обсуждение неконкурентных вариабельных доменов выше, которое также распространяется на эти воплощения. В одном воплощении этих аспектов концентрация (с или с') составляет по меньшей мере 100 или 1000 мкг/мл протеазы. В одном воплощении время (t) составляет один, три или 24 ч или всю ночь. В одном примере вариабельный домен устойчив при условиях (1), и концентрация (с) составляет 10 или 100 мкг/мл протеазы и время (t) составляет 1 ч. В одном примере вариабельный домен устойчив при условиях (2), и концентрация (с') составляет 40 мкг/мл протеазы и время (t) составляет 3 ч. В одном воплощении протеаза выбрана из трипсина, эластазы, лейкозима и панкреатина. В одном воплощении протеаза представляет собой трипсин. В одном воплощении вариабельный домен устойчив к трипсину и по меньшей мере одной другой протеазе, выбранной из эластазы, лейкозима и панкреатина. В одном воплощении вариабельный домен специфически связывается с TNFR1 после инкубации при условиях (1) или (2). В одном воплощении вариабельный домен имеет OD450, считываемую в ELISA, по меньшей мере 0,404 после инкубации при условии (1) или (2). В одном воплощении вариабельный домен специфически связывается с белком А или белком L после инкубации при условии (1) или (2). В одном воплощении вариабельный домен демонстрирует по существу одну полосу в гель-электрофорезе после инкубации при условии (1) или (2). В одном воплощении единичный вариабельный домен имеет Т.пл. (температура плавления) по меньшей мере 50 С. Подробную информацию, связанную с устойчивостью к протеазам, можно найти в WO 2008149144 и WO 2008149148. В одном аспекте изобретение относится к полипептиду, содержащему единичный вариабельный домен иммуноглобулина по настоящему изобретению и эффекторную группу или константный домен антитела, возможно Fc-область антитела, где возможно N-конец Fc связан (возможно непосредственно связан) с С-концом вариабельного домена. Любую "эффекторную группу", как описано в WO 04058820,можно использовать в этом аспекте настоящего изобретения, и описание эффекторных групп в WO 04058820 и способы их связывания с вариабельными доменами, описанными в этой публикации, непосредственно включены в данное описание посредством ссылки для обеспечения описания, которое можно использовать, например, в пунктах формулы изобретения данной заявки. В одном воплощении полипептид содержит Fc слияние с DOM1h-574-16 или DOM1h-574-72. В одном аспекте изобретение относится к полиспецифическому лиганду, содержащему единичный вариабельный домен иммуноглобулина по настоящему изобретению и возможно по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается с сывороточным альбумином (SA). Неожиданно авторы изобретения обнаружили, что слияние единичного вариабельного домена против TNFR1 согласно изобретению с единичным вариабельным доменом против SA обеспечивает преимущество в увеличенном периоде полувыведения (больше, чем для только одного мономераdAb против TNFR1), а также дополнительное преимущество улучшения аффинности (KD) в отношении- 17022925 связывания TNFR1. Это наблюдение не было описано раньше в уровне техники. В связи с этим в изобретении предложен полиспецифический лиганд, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина против TNFR1 по изобретению и единичный вариабельный домен иммуноглобулина против SA(например, против человеческого SA) для создания лиганда, имеющего более продолжительный период полувыведения и более низкую KD для связывания TNFR1 (например, связывания человеческогоTNFR1), чем единичный вариабельный домен иммуноглобулина против TNFR1, когда он предложен в виде мономера вариабельного домена (т.е. когда вариабельный домен против TNFR1 не форматирован,например, не ПЭГилирован или слит с константной областью антитела, такой как Fc-область, и не слит с любым другим доменом). В одном воплощении полиспецифический лиганд связывает TNFR1 (например,человеческий TNFR1) с KD, которая по меньшей мере в два раза ниже, чем KD мономера TNFR1. Дополнительно или альтернативно, в одном воплощении полиспецифический лиганд имеет период полувыведения, который по меньшей мере в 5, 10, 20, 30, 40, 50 или 100 раз больше, чем для мономера. Дополнительно или альтернативно, в одном воплощении полиспецифический лиганд имеет конечный период полувыведения по меньшей мере 15, 16, 17,18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 суток у человека (например,как определено эмпирически у людей-добровольцев или как рассчитано с использованием стандартных способов, знакомых специалисту, путем экстраполяции периода полувыведения лиганда в животной системе, например у мыши, собаки и/или примата, не являющегося человеком (например, яванский макак,бабуин, макак-резус, например, когда домен против SA перекрестно реагируюет с человеческим SA иSA животного. В одном воплощении полиспецифических лигандов по изобретению лиганд представляет собой антагонист TNFR1 (например человеческого TNFR1), возможно TNFR1-опосредованной трансдукции сигнала. В одном воплощении в настоящем изобретении предложены вариабельный домен, полиспецифический лиганд или антагонист в соответствии с изобретением, который имеет период полувыведения t в диапазоне (или примерно) 2,5 ч или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет(или составляет примерно) 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11 или 12 ч. Дополнительно или альтернативно, период полувыведения t составляет (или составляет примерно) вплоть до и включая 21 или 25 суток. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет (или составляет примерно)12, 24 ч, 2, 3, 5, 10, 15, 19, 20,21 или 22 сут. Например, вариабельный домен или антагонист в соответствии с изобретением имеет период полувыведения t в диапазоне от 12 до 60 ч (или от примерно 12 до примерно 60 ч). В другом воплощении он будет находиться в диапазоне от 12 до 48 ч (или от примерно 12 до примерно 48 ч). Еще в другом воплощении он будет находиться в диапазоне от 12 до 26 ч (или от примерно 12 до примерно 26 ч). В качестве альтернативы использованию двухкомпартментного моделирования, специалист обычно знаком с использованием некомпартментного моделирования, которое можно использовать для определения конечных периодов полувыведения (в этой связи термин "конечный период полувыведения", используемый в данной заявке, означает конечный период полувыведения, определенный с использованием некомпартментного моделирования). Пакет аналитических программ WinNonlin, например версию 5.1(доступную от Pharsight Corp., Mountain View, CA94040, США), можно использовать, например, для моделирования кривой таким образом. В этом случае в одном воплощении единичный вариабельный домен, полиспецифический лиганд или антагонист имеет конечный период полувыведения по меньшей мере (или по меньшей мере примерно) 8, 10, 12, 15, 28, 20 ч, 1, 2, 3, 7, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23,24 или 25 сут. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет (или составляет примерно) 24,48, 60 или 72 или 120 ч. Например, конечный период полувыведения составляет (или составляет примерно) от 8 до 60 ч или от 8 до 48 ч или от 12 до 120 ч, например у человека. Дополнительно или альтернативно к вышеупомянутому критерию вариабельный домен или антагонист в соответствии с изобретением имеет значение AUC (площадь под кривой) в диапазоне (или примерно) 1 мгмин/мл или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет (или составляет примерно) 5, 10, 15, 20, 30, 100, 200 или 300 мгмин/мл. Дополнительно или альтернативно, вариабельный домен, полиспецифический лиганд или антагонист в соответствии с изобретением имеет AUC в диапазоне (или примерно) вплоть до 600 мгмин/мл. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет (или составляет примерно) 500, 400, 300, 200, 150, 100, 75 или 50 мгмин/мл. Преимущественно вариабельный домен или антагонист будет иметь AUC в (или примерно в) диапазоне, выбранном из группы, состоящей из следующих значений: от 15 до 150 мгмин/мл, от 15 до 100 мгмин/мл, от 15 до 75 мгмин/мл и от 15 до 50 мгмин/мл. Один или более из t-альфа, t-бета и конечных периодов полувыведения, а также значения AUC,приведенные в данной заявке, можно получить у человека и/или животного (например, мыши или примата, не являющегося человеком, например, бабуина, резуса, яванского макака) путем предложения одного или более единичных вариабельных доменов против TNFR1 (или других связывающих группировок, определенных в данной заявке), связанных либо с ПЭГ, либо с единичным вариабельным доменом(или связывающей группировкой), который специфически связан с сывороточным альбумином, напри- 18022925 мер, мышиным и/или человеческим сывороточным альбумином (SA). Размер ПЭГ может составлять (или может составлять примерно) по меньшей мере 20 кДа, например 30, 40, 50, 60, 70 или 80 кДа. В одном воплощении ПЭГ представляет собой 40 кДа, например, 220 кДа ПЭГ. В одном воплощении для получения t-альфа, t-бета и конечных периодов полувыведения или AUC, упомянутых в данной заявке, предложен антагонист, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина против TNFR1, связанный с единичным вариабельным доменом иммуноглобулина против SA. В одном воплощении ПЭГ представляет собой 40 кДа, например, 220 кДа ПЭГ. Например, антагонист содержит только один такой вариабельный домен против TNFR1, например один такой домен, связанный только с одним вариабельным доменом против SA. В одном воплощении для получения t-альфа, t-бета и конечных периодов полувыведения или AUC, упомянутых в данной заявке, предложен антагонист, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина против TNFR1, связанный с ПЭГ, например, 40-80 кДа ПЭГ, например, 40 кДа ПЭГ. Например, антагонист содержит только один такой вариабельный домен противTNFR1, например один такой домен, связанный с 40 кДа ПЭГ. В одном воплощении полиспецифического лиганда по изобретению лиганд содержит единичный вариабельный домен против SA (например, HSA), который содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентича последовательности DOM7h-11, DOM7h-11-3, DOM7h-11-12, DOM7h-11-15, DOM7h-14, DOM7h14-10, DOM7h-14-18 или DOM7m-16. Альтернативно или дополнительно, в воплощении полиспецифический лиганд содержит линкер, предложенный между единичным вариабельным доменом противTNFR1 и единичным вариабельным доменом против SA и содержащий аминокислотную последовательность AST, возможно ASTSGPS. Альтернативно линкер представляет собой AS(G4S)n, где n равно 1, 2, 3,4, 5, 6, 7 или 8, например AS(G4S)3. Например, лиганд содержит (с N- к С-концу) DOM1h-574-16-ASTDOM7h-11; или DOM1h-574-72-ASTSGPS-DOM7m-16; или DOM1h-574-72-ASTSGPS-DOM7h-11-12. В одном аспекте в изобретении предложен полиспецифический лиганд, содержащий (1) единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574-156, (2) по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина против сывороточного альбумина (SA), который специфически связывает SA, где единичный вариабельный домен против SA содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности DOM7h-11-3, и (3) возможно, где линкер предложен между единичным вариабельным доменом против TNFR1 и единичным вариабельным доменом против SA, содержащий аминокислотную последовательность AST, возможно ASTSGPS. Альтернативно, линкер представляет собой AS(G4S)n, где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например AS(G4S)3. Например, лиганд содержит DOM1h-574-156 и DOM7h-11-3, возможно связанные с помощью AST или ASTSGPS. Альтернативно, линкер представляет собой AS(G4S)n, где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например AS(G4S)3. В этом примере или аспекте лиганд возможно адаптирован для введения пациенту внутрисосудисто, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно или посредством ингаляции. В одном примере лиганд предложен в виде сухой порошковой или лиофилизированной композиции (которую возможно смешивают с растворителем перед введением). В одном аспекте в изобретении предложен полиспецифический лиганд,содержащий (1) единичный вариабельный домен иммуноглобулина против рецептора TNF 1 типа(TNFR1; р 55), который содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности DOM1h-574156, (2) по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина против сывороточного альбумина (SA), который специфически связывает SA, где единичный вариабельный домен против SA содержит аминокислотную последовательность, которая идентична или по меньшей мере на 80, 85, 90,91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности DOM7h-14-10, и (3) возможно, где линкер предложен между единичным вариабельным доменом против TNFR1 и единичным вариабельным доменом против SA, содержащий аминокислотную последовательность AST, возможно ASTSGPS. Альтернативно, линкер представляет собой AS(G4S)n, где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например AS(G4S)3. Например, лиганд содержит DOM1h-574-156 и DOM7h-14-10, возможно, соединенный с помощью AST или ASTSGPS. Альтернативно, линкер представляет собой AS(G4S)n, где n равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8,например AS(G4S)3. В этом примере или аспекте лиганд возможно адаптирован для введения пациенту внутрисосудисто, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно или посредством ингаляции. В одном примере лиганд предложен в виде сухой порошковой или лиофилизированной композиции (которую возможно смешивают с растворителем перед введением). В изобретении предложен антагонист TNFR1, содержащий единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд из любого аспекта или воплощения изобретения. Например, антагонист или вариабельный домен по изобретению является моновалентным для связывания TNFR1. Например, антагонист или вариабельный домен по изобретению является моновалентным или по существу моновалентным, как определено с помощью стандартного SEC-MALLS (эксклюзионная хроматогра- 19022925 фия/многоугловое лазерное светорассеяние). На существенную моновалентность указывает не более чем 5, 4, 3, 2 или 1% вариабельного домена или антагониста, присутствующего не в моновалентной форме,как определено с помощью стандартного SEC-MALLS. В одном воплощении антагонист по изобретению содержит первый и второй единичные вариабельные домены иммуноглобулина против TNFR1, где каждый вариабельный домен соответствует любому аспекту или воплощению изобретения. Первый и второй единичные вариабельные домены иммуноглобулина в одном примере идентичны. В другом примере они различаются. В одном примере аминокислотная последовательность каждого единичного вариабельного домена против TNFR1 в антагонисте по изобретению идентична аминокислотной последовательности DOM1h574-16 или DOM1h-574-72. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55), содержащий вариабельный домен против TNFR1 согласно любому аспекту изобретения для пероральной доставки, доставки в ЖК (желудочно-кишечный) тракт пациента, легочной доставки, доставки в легкое пациента или системной доставки. В другом аспекте в изобретении предложено применение антагонистаTNFR1 из любого аспекта изобретения в изготовлении лекарственного средства для пероральной доставки. В другом аспекте в изобретении предложено применение антагониста TNFR1 из любого аспекта изобретения в изготовлении лекарственного средства для доставки в ЖК тракт пациента. В одном примере антагонист или вариабельный домен устойчив к трипсину, эластазе и/или панкреатину. В одном аспекте в изобретении предложено применение антагониста TNFR1 из любого аспекта изобретения в изготовлении лекарственного средства для легочной доставки. В другом аспекте в изобретении предложено применение антагониста TNFR1 из любого аспекта изобретения в изготовлении лекарственного средства для доставки в легкое пациента. В одном примере антагонист или вариабельный домен устойчив к лейкозиму. В одном аспекте в изобретении предложен способ пероральной доставки или доставки лекарственного средства в ЖК тракт пациента, или легкое, или легочную ткань пациента, где способ включает введение пациенту фармацевтически эффективного количества антагониста TNFR1 по изобретению. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, имеющий последовательность CDR1, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательностиCDR1 DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h574-180. Возможно, антагонист также имеет последовательность CDR2, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR2 из выбранной последовательности. Возможно, дополнительно или альтернативно, антагонист также имеет последовательностьCDR3, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR3 из выбранной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, имеющий последовательность CDR2, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательностиCDR2 DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h574-180. Возможно, антагонист также имеет последовательность CDR3, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательности CDR3 из выбранной последовательности. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, имеющий последовательность CDR3, которая идентична или по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 98% идентична последовательностиCDR3 DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h574-180. В одном аспекте в изобретении предложен антагонист рецептора TNF 1 типа (TNFR1; р 55) для связывания с TNFR1 человека, мыши или яванского макака, где антагонист содержит единичный вариабельный домен иммуноглобулина, содержащий последовательность CDR1, CDR2 и/или CDR3 из единичного вариабельного домена, выбранного из DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138,DOM1h-574-156, DOM1h-574-162 и DOM1h-574-180. В изобретении предложен антагонист TNFR1 из любого аспекта для лечения и/или профилактики воспалительного состояния. В изобретении предложено применение антагониста TNFR1 из любого аспекта в изготовлении лекарственного средства для лечения и/или профилактики воспалительного состояния. В одном воплощении антагониста или применения состояние выбрано из группы, состоящей из артрита, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника и хронического обструктивного заболевания легких. В одном примере артрит представляет собой ревматоидный артрит или ювенильный ревматоидный артрит. В одном примере воспалительное заболевание кишечника выбрано из группы,состоящей из болезни Крона и неспецифического язвенного колита. В одном примере хроническое обструктивное заболевание легких выбрано из группы, состоящей из хронического бронхита, хронического- 20022925 обструктивного бронхита и эмфиземы. В одном примере пневмония является бактериальной пневмонией. В одном примере бактериальная пневмония является стафилококковой пневмонией. В изобретении предложен антагонист TNFR1 из любого аспекта для лечения и/или профилактики респираторного заболевания. В изобретении предложено применение антагониста TNFR1 из любого аспекта в изготовлении лекарственного средства для лечения и/или профилактики респираторного заболевания. В одном примере респираторное заболевание выбрано из группы, состоящей из воспаления легких, хронического обструктивного заболевания легких, астмы, пневмонии, гиперчувствительного пневмонита, легочного инфильтрата с эозинофилией, заболевания легких, вызванного факторами окружающей среды, пневмонии, бронхоэктаза, муковисцидоза, интерстициального заболевания легких, первичной легочной гипертензии, легочной тромбоэмболии, расстройств плевры, расстройств средостения, расстройств диафрагмы, гиповентиляции, гипервентиляции, апноэ во сне, острого респираторного дистресссиндрома, мезотелиомы, саркомы, отторжения трансплантата, реакции "трансплантат против хозяина",рака легких, аллергического ринита, аллергии, асбестоза, аспергиллемы, аспергиллеза, бронхоэктаза,хронического бронхита, эмфиземы, эозинофильной пневмонии, идиопатического фиброза легких, инвазивного пневмококкового заболевания, гриппа, нетуберкулезных микобактерий, плеврального выпота,пневмокониоза, пневмоцистоза, пневмонии, актиномикоза легких, легочного альвеолярного протеиноза,легочной формы сибирской язвы, отека легких, легочной эмболии, легочного воспаления, легочного гистиоцитоза X, легочной гипертензии, легочного нокардиоза, туберкулеза легких, легочной веноокклюзионной болезни, ревматоидного заболевания легких, саркоидоза и гранулематоза Вегенера. В одном аспекте антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 из любого аспекта изобретения предложен для нацеливания на одну или более эпитопных последовательностей TNFR1, выбранных из группы, состоящей из NSICCTKCHKGTYLY,NSICCTKCHKGTYL, CRKNQYRHYWSENLF и NQYRHYWSENLFQCF. В одном примере антагонист,единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 предложен для нацеливания на NSICCTKCHKGTYLY. В одном примере антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 предложен для нацеливания на NSICCTKCHKGTYL. В одном примере антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 предложен для нацеливания на CRKNQYRHYWSENLF. В одном примере антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 предложен для нацеливания на NQYRHYWSENLFQCF. В одном примере антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 предложен для нацеливания на CRKNQYRHYWSENLF и NQYRHYWSENLFQCF. В одном примере антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд против TNFR1 предложен для нацеливания на NSICCTKCHKGTYLY, CRKNQYRHYWSENLF и NQYRHYWSENLFQCF. В одном примере антагонист, единичный вариабельный домен, полипептид или полиспецифический лиганд противTNFR1 предложен для нацеливания на NSICCTKCHKGTYL, CRKNQYRHYWSENLF и NQYRHYWSENLFQCF. В одном примере такое нацеливание заключается в лечении и/или профилактике любого состояния или заболевания, описанного выше. В одном аспекте в изобретении предложен способ лечения и/или предупреждения любого описанного выше состояния или заболевания у пациента, включающий введение пациенту антагониста, единичного вариабельного домена, полипептида или полиспецифического лиганда против TNFR1 по изобретению для нацеливания на одну или более эпитопных последовательностей TNFR1, как описано в любом из предшествующих воплощений. Полипептиды, dabs и антагонисты Полипептид, лиганд, dAb, лиганд или антагонист может экспрессироваться в Е. coli или в виде Pichia (например, P. pastoris). В одном воплощении лиганд или мономер dAb секретируется в количестве по меньшей мере примерно 0,5 мг/л при экспрессии в Е. coli или в виде Pichia (например, Р. pastoris). Хотя лиганды и мономеры dAb, описанные в данной заявке, могут секретироваться при экспрессии в Е. coli или в виде Pichia (например, Р. pastoris), их можно продуцировать с использованием подходящего способа, такого как синтетические химические способы или способы биологического производства, в которых не используют Е. coli или вид Pichia. В некоторых воплощениях полипептид, лиганд, dAb, лиганд или антагонист не содержат вариабельный домен иммуноглобулина верблюдовых (Camelid) или одну или более каркасных аминокислот,которые являются уникальными для вариабельных доменов иммуноглобулина, кодируемых сегментами гена антитела зародышевой линии верблюдовых, например, в положении 108, 37, 44, 45 и/или 47. В одном воплощении вариабельный домен против TNFR1 по изобретению содержит остаток G в положении 44 согласно Kabat и возможно содержит одну или более аминокислот, специфических для верблюдовых,в других положениях, например, в положении 37 или 103. Антагонисты TNFR1 в соответствии с изобретением могут быть моновалентными или поливалентными. В некоторых воплощениях антагонист является моновалентным и содержит один связывающий сайт, который взаимодействует с TNFR1, где связывающий сайт представлен полипептидом или dAb по изобретению. Моновалентные антагонисты связывают один TNFR1 и не могут индуцировать сшивания или кластеризации TNFR1 на поверхности клеток, что может приводить к активации рецептора и сиг- 21022925 нальной трансдукции. В других воплощениях антагонист TNFR1 является поливалентным. Поливалентные антагонистыTNFR1 могут содержать две или более копий конкретного связывающего сайта для TNFR1 или содержать два или более различных связывающих сайтов, которые связывают TNFR1, где по меньшей мере один из связывающих сайтов представлен полипептидом или dAb по изобретению. Например, как описано в данной заявке, антагонист TNFR1 может быть димером, тримером или мультимером, содержащим две или более копий конкретного полипептида или dAb по изобретению, которые связывают TNFR1 или два или более различных полипептидов или dAbs по изобретению, которые связывают TNFR1. В одном воплощении поливалентный антагонист TNFR1, по существу, не оказывает агонистического влияния наTNFR1 (действует в качестве агониста TNFR1) в стандартном клеточном анализе (т.е. когда присутствует в концентрации 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1 мкМ, 10 пМ, 100 мкМ, 1000 мкМ и 5000 мкМ, приводит к не более чем примерно 5% TNFR1-опосредованной активности, индуцируемой с помощью TNF (100 пг/мл) в анализе). В некоторых воплощениях поливалентный антагонист TNFR1 содержит два или более связывающих сайтов для необходимого эпитопа или домена TNFR1. Например, поливалентный антагонист TNFR1 может включать два или более связывающих сайтов, которые связываются с тем же эпитопом в домене 1TNFR1. В других воплощениях поливалентный антагонист TNFR1 содержит два или более связывающих сайтов, представленных полипептидами или dAbs по изобретению, которые связывают различные эпитопы или домены TNFR1. В одном воплощении такие поливалентные антагонисты не обладают агонистической активностью в отношении TNFR1, когда присутствуют в концентрации примерно 1 нМ, или примерно 10 нМ, или примерно 100 нМ, или примерно 1 мкМ, или примерно 10 мкМ в стандартном анализе цитотоксичности L929 или в стандартном анализе HeLa IL-8, как описано в WO 2006038027. Другие антагонисты TNFR1 не ингибируют связывание TNF с TNFR1. Такие лиганды (и антагонисты) могут быть полезны в качестве диагностических агентов, поскольку они могут быть использованы для связывания или обнаружения, количественного определения или измерения TNFR1 в образце и не будут конкурировать с TNF в образце за связывание с TNFR1. Таким образом, можно осуществить точное определение того, имеется или как много TNFR1 находится в образце. В других воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист связывает TNFR1 и антагонизирует активность TNFR1 в стандартном клеточном анализе при ND50 не более 100 нМ, и при концентрации не более 10 мкМ dAb подавляет активность TNFR1 не более чем на 5% в анализе. В конкретных воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист по существу не оказывает агонистического влияния на TNFR1 (действует в качестве агониста TNFR1) в стандартном клеточном анализе (т.е. когда присутствует в концентрации 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1 мкМ, 10 мкМ, 100 мкМ, 1000 мкМ или 5000 мкМ, приводит не более чем к примерно 5% TNFR1-опосредованной активности, индуцированной с помощью TNF (100 пг/мл) в анализе). В некоторых воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист по изобретению являются эффективными в моделях хронических воспалительных заболеваний при введении эффективного количества. Как правило, эффективное количество составляет от примерно 1 мг/кг до примерно 10 мг/кг (например, примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг или примерно 10 мг/кг). Модели хронического воспалительного заболевания (см. модели, описанные в WO 2006038027) признаются специалистами в данной области в качестве прогнозирующих терапевтическую эффективность у людей. В конкретных воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист является эффективным в стандартной мышиной модели коллаген-индуцированного артрита (см. WO 2006038027 для подробной информации о модели). Например, введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может уменьшать средний артритный индекс при суммировании четырех конечностей в стандартной мышиной модели коллаген-индуцированного артрита, например, на от примерно 1 до примерно 16, от примерно 3 до примерно 16, от примерно 6 до примерно 16, от примерно 9 до примерно 16 или от примерно 12 до примерно 16 по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может замедлять появление симптомов артрита в стандартной мышиной модели коллаген-индуцированного артрита, например, на примерно 1 сутки, примерно 2 суток, примерно 3 суток, примерно 4 суток, примерно 5 суток, примерно 6 суток, примерно 7 суток, примерно 10 суток, примерно 14 суток, примерно 21 сутки или примерно 28 суток по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может приводить к среднему артритному индексу при суммировании четырех конечностей в стандартной мышиной модели коллаген-индуцированного артрита от 0 до примерно 3, от примерно 3 до примерно 5, от примерно 5 до примерно 7, от примерно 7 до примерно 15, от примерно 9 до примерно 15, от примерно 10 до примерно 15, от примерно 12 до примерно 15 или от примерно 14 до примерно 15. В других воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист являются эффективными в модели- 22022925 артрита у мышей ARE (см. WO 2006038027 для подробной информации о модели). Например, введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может уменьшать средний артритный индекс в модели артрита у мышей ARE, например, на от примерно 0,1 до примерно 2,5, от примерно 0,5 до примерно 2,5, от примерно 1 до примерно 2,5, от примерно 1,5 до примерно 2,5 или от примерно 2 до примерно 2,5 по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может замедлять появление симптомов артрита в модели артрита у мышей ARE, например, на примерно 1 сутки, примерно 2 суток, примерно 3 суток, примерно 4 суток, примерно 5 суток, примерно 6 суток, примерно 7 суток, примерно 10 суток,примерно 14 суток, примерно 21 сутки или примерно 28 суток по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может приводить к среднему артритному индексу в модели артрита у мышей ARE от 0 до примерно 0,5, примерно 0,5 до примерно 1, от примерно 1 до примерно 1,5, от примерно 1,5 до примерно 2 или от примерно 2 до примерно 2,5. В других воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист является эффективным в модели воспалительного заболевания кишечника (IBD) у мышей ARE (см. WO 2006038027 для подробной информации о модели). Например, введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может уменьшать средний индекс острого и/или хронического воспаления в модели IBD у мышей ARE, например, на примерно 0,1 до примерно 2,5, от примерно 0,5 до примерно 2,5, от примерно 1 до примерно 2,5, от примерно 1,5 до примерно 2,5 или от примерно 2 до примерно 2,5 по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда,dAb или антагониста может замедлять появление симптомов IBD в модели IBD у мышей ARE, например, на примерно 1 сутки, примерно 2 суток, примерно 3 суток, примерно 4 суток, примерно 5 суток,примерно 6 суток, примерно 7 суток, примерно 10 суток, примерно 14 суток, примерно 21 сутки или примерно 28 суток по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может приводить к среднему индексу острого и/или хронического воспаления в модели IBD у мышей ARE от 0 до примерно 0,5, от примерно 0,5 до примерно 1, от примерно 1 до примерно 1,5, от примерно 1,5 до примерно 2 или от примерно 2 до примерно 2,5. В других воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист является эффективным в мышиной модели декстран сульфата натрия (DSS)-индуцированного IBD (см. WO 2006038027 для подробной информации о модели). Например, введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может уменьшать индекс средней тяжести в мышиной DSS модели IBD, например, от примерно 0,1 до примерно 2,5, от примерно 0,5 до примерно 2,5, от примерно 1 до примерно 2,5, от примерно 1,5 до примерно 2,5 или от примерно 2 до примерно 2,5 по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста может замедлять появление симптомов IBD в мышиной DSS IBD, например, на примерно 1 сутки, примерно 2 суток, примерно 3 суток, примерно 4 суток, примерно 5 суток, примерно 6 суток, примерно 7 суток, примерно 10 суток, примерно 14 суток, примерно 21 сутки или примерно 28 суток по сравнению с подходящим контролем. В другом примере введение эффективного количества полипептида, лиганда,dAb или антагониста может приводить к среднему индексу тяжести в мышиной DSS модели IBD от 0 до примерно 0,5, от примерно 0,5 до примерно 1, от примерно 1 до примерно 1,5, от примерно 1,5 до примерно 2 или от примерно 2 до примерно 2,5. В конкретных воплощениях полипептид, лиганд, dAb или антагонист является эффективным в мышиной модели хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), вызванного табачным дымом(см. WO 2006038027 и WO 2007049017 для подробной информации о модели). Например, введение эффективного количества лиганда может уменьшать или замедлять появление симптомов ХОЗЛ по сравнению с подходящим контролем. Имеются животные модельные системы, которые можно использовать для скрининга эффективности антагонистов TNFR1 (например, лиганды, антитела или их связывающие белки) в защите против или лечении заболевания. Способы тестирования системной красной волчанки (SLE) у восприимчивых мышей известны в данной области (Knight et al. (1978) J. Exp. Med., 147: 1653; Reinersten et al. (1978) NewEng. J. Med., 299: 515). Астенический бульбарный паралич (MG, myasthenia gravis) тестируют на самках мышей SJL/J посредством индукции заболевания растворимым белком AchR (рецептор ацетилхолина) из других видов (Lindstrom et al. (1988) Adv. Immunol., 42: 233). Артрит индуцируют у восприимчивого штамма мышей посредством инъекции коллагена II типа (Stuart et al. (1984) Ann. Rev. Immunol., 42: 233). Была описана модель, где адъювантный артрит индуцируют у восприимчивых крыс посредством инъекции микобактериального белка теплового шока (Van Eden et al. (1988) Nature, 331: 171). Тиреоидит индуцируют у мышей посредством введения тиреоглобулина, как описано (Maron et al. (1980) J. Exp. Med.,152: 1115). Инсулинозависимый сахарный диабет (IDDM) возникает естественным путем или может быть индуцирован в некоторых линиях мышей, таких как описанные в Kanasawa et al. (1984)- 23022925 моделью MS (рассеянный склероз) у человека. В этой модели демиелинизирующее заболевание индуцируют путем введения основного миелинового белка (см. Paterson (1986) Textbook of Immunopathology,Mischer et al., eds., Grune and Stratton, New York, pp. 179-213; McFarlin et al. (1973) Science, 179: 478: иSatoh etal. (1987) J. Immunol, 138:179). Как правило, лиганды (например, антагонисты) по настоящему изобретению будут использовать в очищенной форме вместе с фармакологически приемлемыми носителями. В общем эти носители включают водный или спиртовой/водный растворы, эмульсии или суспензии, в том числе физиологический раствор и/или буферную среду. Парентеральные носители включают раствор хлорида натрия, декстрозу в растворе Рингера, декстрозу и хлорид натрия и раствор Рингера с лактатом. Подходящие физиологически приемлемые адъюванты, если необходимо сохранить полипептидный комплекс в суспензии, можно выбрать из загустителей, таких как карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, желатин и альгинаты. Внутривенные носители включают жидкости и питательные вещества и электролиты на основе, например, декстрозы Рингера. Также могут присутствовать консерванты и другие добавки, такие как противомикробные препараты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition). Можно использовать различные подходящие препараты,включая препараты с пролонгированным высвобождением. Лиганды (например, антагонисты) по настоящему изобретению можно использовать в виде отдельно вводимых композиций или в сочетании с другими агентами. Они могут включать различные иммунотерапевтические лекарственные средства, такие как циклоспорин, метотрексат, адриамицин или цисплатин и иммунотоксины. Фармацевтические композиции могут включать "коктейли" различных цитотоксических или других агентов в сочетании с лигандами по настоящему изобретению или даже комбинации лигандов в соответствии с настоящим изобретением, имеющих различные специфичности, такие как лиганды, выбранные с использованием различных целевых антигенов или эпитопов, независимо от того,объединяются ли они перед введением. Путь введения фармацевтических композиций в соответствии с изобретением может представлять собой любой из обычно известных специалистам в данной области. Для терапии, включая без ограничения иммунотерапию, выбранные лиганды по изобретению можно вводить пациенту в соответствии со стандартными методами. Введение можно осуществлять любым подходящим способом, включая парентеральное, внутривенное, внутримышечное, внутрибрюшинное, подкожное, трансдермальное введение, посредством легочного пути или также, соответственно, посредством прямой инфузии с использованием катетера. Дозировка и частота введения будут зависеть от возраста, пола и состояния пациента, одновременного введения других лекарственных средств, противопоказаний и других параметров, которые должны быть приняты во внимание врачом. Введение может быть локальным (например, локальная доставка в легкие посредством легочного введения, например, интраназального введения) или системным, как указано. Лиганды по изобретению могут быть лиофилизированы для хранения и восстановлены в подходящем носителе перед применением. Этот метод, как было показано, является эффективным с обычными иммуноглобулинами, и можно использовать известные в данной области методы лиофилизации и восстановления. Специалисту в данной области понятно, что лиофилизация и восстановление могут приводить к различной степени потери активности антител (например, что касается обычных иммуноглобулинов, то антитела IgM в большей степени теряют активность, чем антитела IgG) и что используемые уровни можно увеличивать для компенсации. Композиции, содержащие лиганды (например, антагонисты) по настоящему изобретению или их коктейль, можно вводить для профилактического и/или терапевтического лечения. При некоторых терапевтических применениях количество, достаточное для достижения по меньшей мере частичного ингибирования, подавления, модулирования, уничтожения или какого-либо другого измеряемого параметра популяции выбранных клеток определяют как "терапевтически эффективную дозу". Количества, необходимые для достижения этой дозировки, зависят от тяжести заболевания, общего состояния собственной иммунной системы пациента, но обычно варьируют от 0,005 до 10,0 мг лиганда, например dAb или антагониста, на килограмм массы тела при дозах от 0,05 до 2,0 мг/кг/доза, являющихся наиболее часто используемыми. Что касается профилактических применений, то композиции, содержащие лиганды по настоящему изобретению или коктейли из них, также можно вводить в аналогичных или чуть более низких дозировках для предупреждения, ингибирования или замедления наступления заболевания (например,для поддержания ремиссии или состояния покоя или для предупреждения острой фазы). Квалифицированный врач сможет определить подходящий интервал между дозами для лечения, подавления или предупреждения заболевания. Когда лиганд TNFR1 (например, антагонист) вводят для лечения, подавления или предупреждения хронического воспалительного заболевания, тогда его можно вводить вплоть до четырех раз в сутки, два раза в неделю, один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз в месяц или один раз каждые два месяца, в дозе, например, от примерно 10 мкг/кг до примерно 80 мг/кг, от примерно 100 мкг/кг до примерно 80 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 80 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 70 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 60 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 50- 24022925 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 40 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 30 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 20 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 5 мг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 2.5 мг/кг,примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг или примерно 10 мг/кг. В конкретных воплощениях лиганд TNFR1 (например, антагонист) вводят для лечения, подавления или предупреждения хронического воспалительного заболевания один раз каждые две недели или раз в месяц в дозе от примерно 10 мкг/кг до примерно 10 мг/кг (например, примерно 10 мкг/кг, примерно 100 мкг/кг, примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг или примерно 10 мг/кг.) Лечение или терапия, выполняемые с использованием композиций, описанных в данной заявке,считаются "эффективными", если один или более симптомов уменьшаются (например, по меньшей мере на 10% или по меньшей мере на один пункт в клинической шкале оценки) по сравнению с такими симптомами, присутствующими до лечения, или по сравнению с такими симптомами у индивидуума (в человеческой или животной модели), не подвергутого лечению такой композицией, или другого подходящего контроля. Очевидно, что симптомы будут меняться в зависимости от целевого заболевания или расстройства, но могут быть измерены обычным квалифицированным врачом или специалистом. Такие симптомы можно измерить, например, посредством мониторинга уровня одного или более биохимических показателей заболевания или расстройства (например, уровней фермента или метаболита, коррелирующих с заболеванием, влияющих на число клеток и т.д.), посредством мониторинга физических проявлений (например воспаления, размера опухоли и т.д.) или с помощью принятой шкалы клинической оценки, например расширенной шкалы инвалидизации (для рассеянного склероза), опросника Ирвина относительно воспалительного заболевания кишечника (32 пункта оценивают качество жизни относительно функции кишечника, системных симптомов, социальных функций и эмоционального статуса показатель колеблется от 32 до 224, высокие показатели указывают на лучшее качество жизни), шкалы оценки качества жизни при ревматоидном артрите или другой принятой шкалы клинической оценки,известной в данной области. Устойчивое (например, одни сутки или больше, или дольше) снижение симптомов заболевания или расстройства по меньшей мере на 10% или на один или более пунктов по заданной клинической шкале является показателем "эффективного" лечения. Аналогично, профилактика,осуществляемая с использованием композиции, как описано в данной заявке, является "эффективной",если появление или тяжесть одного или более симптомов замедляется, уменьшается или отменяется относительно таких симптомов у подобного индивидуума (человеческая или животная модель), не подвергнутого воздействию композиции. Композицию, содержащую лиганд (например, антагонист) или их коктейль, в соответствии с настоящим изобретением можно использовать в профилактических или терапевтических применениях для обеспечения изменения, инактивации, уничтожения или удаления выбранной целевой популяции клеток у млекопитающего. Кроме того, выбранные репертуары полипептидов, описанных в данной заявке, можно использовать экстракорпорально или in vitro, выборочно уничтожая, истощая или иным образом эффективно удаляя целевую клеточную популяцию из гетерогенной совокупности клеток. Кровь млекопитающего можно объединять экстракорпорально с лигандами, посредством чего нежелательные клетки уничтожаются или иным образом удаляются из крови для возвращения млекопитающему в соответствии со стандартными методами. Композицию, содержащую лиганд (например, антагонист), в соответствии с настоящим изобретением можно использовать в профилактических или терапевтических применениях для обеспечения изменения, инактивации, уничтожения или удаления выбранной целевой популяции клеток у млекопитающего. Лиганды (например, анти-TNFR1 антагонисты, dAb мономеры) можно вводить или готовить в виде препаратов вместе с одним или более дополнительными терапевтическими или активными агентами. Когда лиганд (например, dAb) вводят с дополнительным терапевтическим агентом, тогда лиганд можно вводить до, одновременно или после введения дополнительного агента. Как правило, лиганд и дополнительный агент вводят способом, который обеспечивает перекрывание терапевтического эффекта. В одном воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения хронического воспалительного заболевания, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагонистаTNFR1 в соответствии с изобретением. В одном воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения артрита (например, ревматоидного артрита, ювенильного ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита), включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом,терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В другом воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения псориаза, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной- 25022925 дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В другом воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения воспалительного заболевания кишечника (например, болезни Крона, неспецифического язвенного колита), включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В другом воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения хронического обструктивного заболевания легких (например, хронического бронхита, хронического обструктивного бронхита, эмфиземы), включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом,терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В другом воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения пневмонии (например, бактериальной пневмонии, такой как стафилококковая пневмония), включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения других легочных заболеваний, в дополнение к хроническому обструктивному заболеванию легких и пневмонии. Другие легочные заболевания, которые можно лечить, подавлять или предупреждать в соответствии с изобретением, включают, например, муковисцидоз и астму (например, стероид-устойчивую астму). Таким образом,в другом воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения легочного заболевания (например, муковисцидоза, астмы), включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В конкретных воплощениях антагонист TNFR1 вводят посредством легочной доставки, например,посредством ингаляции (например, внутрибронхиальной, интраназальной или пероральной ингаляции,интраназальных капель) или посредством системной доставки (например, парентеральной, внутривенной, внутримышечной, внутрибрюшинной, подкожной). В другом воплощении в изобретении предложен способ лечения, подавления или предупреждения септического шока, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективной дозы или количества полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 в соответствии с изобретением. В другом аспекте изобретения представлена композиция, содержащая полипептид, лиганд, dAb или антагонист TNFR1 в соответствии с изобретением и фармацевтически приемлемый носитель, растворитель или эксципиент. Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ лечения заболевания с использованием полипептида, лиганда, dAb или антагониста TNFR1 или композиции в соответствии с настоящим изобретением. В воплощении заболевание представляет способ рак или воспалительное заболевание, например ревматоидный артрит, астму или болезнь Крона. В другом аспекте изобретения предложена композиция, содержащая полипептид, единичный вариабельный домен, лиганд или антагонист в соответствии с изобретением и фармацевтически приемлемый носитель, растворитель или эксципиент. В конкретных воплощениях полипептид, лиганд, единичный вариабельный домен, антагонист или композицию вводят посредством легочной доставки, например, посредством ингаляции (например, внутрибронхиальной, интраназальной или пероральной ингаляции, интраназальных капель) или посредством системной доставки (например, парентеральной, внутривенной, внутримышечной, внутрибрюшинной, подкожной). В одном аспекте изобретения предложено устройство для легочной доставки, содержащее полипептид, единичный вариабельный домен, лиганд, композицию или антагонист в соответствии с изобретением. Устройство может представлять собой ингалятор или устройство для интраназального введения. В других воплощениях любой из лигандов, описанных в данной заявке (например, антагонист или единичный вариабельный домен), дополнительно содержит группировку, увеличивающую период полувыведения, такую как полиалкиленгликолевая группировка, сывороточный альбумин или его фрагмент,рецептор трансферрина или его трансферринсвязывающий участок или группировка, содержащая связывающий сайт для полипептида, который увеличивает период полувыведения in vivo. В некоторых воплощениях группировка, увеличивающая период полувыведения, представляет собой группировку, содержащую связывающий сайт для полипептида, который увеличивает период полувыведения in vivo,выбранного из группы, состоящей из антитела, домена SpA, домена рецептора LDL класса А, доменаEGF и авимера. В других воплощениях группировка, увеличивающая период полувыведения, представляет собой полиэтиленгликолевую группировку. В одном воплощении антагонист содержит (возможно состоит из) единичный вариабельный домен по изобретению, связанный с полиэтиленгликолевой группировкой(возможно, где группировка имеет размер от примерно 20 до примерно 50 кДа, возможно примерно 40 кДа линейного или разветвленного ПЭГ). Ссылка сделана на WO 04081026 для более подробной инфор- 26022925 мации о ПЭГилировании dAbs и связывающих группировок. В одном воплощении антагонист состоит из мономера dAb, связанного с ПЭГ, где мономер dAb представляет собой единичный вариабельный домен в соответствии с изобретением. Этот антагонист может быть предложен для лечения воспалительного заболевания, состояния легких (например, астмы, гриппа или ХОЗЛ) или рака и возможно подходит для внутривенного введения. В других воплощениях группировка, увеличивающая период полувыведения, представляет собой антитело или фрагмент антитела (например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина), содержащий связывающий сайт для сывороточного альбумина или неонатального Fc-рецептора. Изобретение также относится к композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей лиганд по изобретению (например, антагонист или единичный вариабельный домен) и физиологически приемлемый носитель. В некоторых воплощениях композиция содержит носитель для внутривенного, внутримышечного, внутрибрюшинного, внутриартериального, интратекального, внутрисуставного,подкожного введения, легочного, интраназального, вагинального или ректального введения. Изобретение также относится к устройству для доставки лекарственного средства, содержащему композицию (например, фармацевтическую композицию) по изобретению. В некоторых воплощениях устройство для доставки лекарственного средства содержит множество терапевтически эффективных доз лиганда. В других воплощениях устройство для доставки лекарственного средства выбрано из группы,состоящей из устройства для парентеральной доставки, устройства для внутривенной доставки, устройства для внутримышечной доставки, устройства для внутрибрюшинной доставки, устройства для трансдермальной доставки, устройства для легочной доставки, устройства для внутриартериальной доставки,устройства для интратекальной доставки, устройства для внутрисуставной доставки, устройства для подкожной доставки, устройства для интраназальной доставки, устройства для вагинальной доставки, устройства для ректальной доставки, шприца, устройства для трансдермальной доставки, капсулы, таблетки,небулайзера, ингалятора, атомайзера, генератора аэрозоля, генератора тумана, сухого порошкового ингалятора, дозирующего ингалятора, дозирующего распылителя, дозирующего генератора тумана, дозирующего атомайзера и катетера. Лиганд (например, единичный вариабельный домен, антагонист или полиспецифический лиганд) по изобретению может быть отформатирован, как описано в данной заявке. Например, лиганд по изобретению можно отформатировать с целью изменения периода полувыведения из сыворотки in vivo. При необходимости, лиганд может дополнительно включать токсин или токсиновую группировку, как описано в данной заявке. В некоторых воплощениях лиганд содержит поверхностно-активный токсин, такой как генератор свободных радикалов (например, селенсодержащий токсин) или радионуклид. В других воплощениях токсин или токсиновая группировка представляет собой полипептидный домен (например,dAb), имеющий связывающий сайт со специфичностью связывания в отношении внутриклеточной мишени. В конкретных воплощениях лиганд представляет собой lgG-подобный формат, который обладает специфичностью связывания в отношении TNFR1 (например, человеческого TNFR1). В одном аспекте в изобретении предложен слитый белок, содержащий единичный вариабельный домен по изобретению. Вариабельный домен может быть слит, например, с пептидом или полипептидом или белком. В одном воплощении вариабельный домен слит с антителом или фрагментом антитела, например, моноклонального антитела. Как правило, слияния можно достичь путем экспрессии слитого продукта с последовательностью единичной нуклеиновой кислоты или путем экспрессии полипептида,содержащего единичный вариабельный домен, и последующего объединения этого полипептида в больший белок или антительный формат с использованием методов, которые являются общепринятыми. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина, антагонист или слитый белок содержит константный домен антитела. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина, антагонист или слитый белок содержит Fc антитела, возможно, где N-конец Fc связан(возможно, непосредственно связан) с С-концом вариабельного домена. В одном воплощении единичный вариабельный домен иммуноглобулина, антагонист или слитый белок содержит группировку, увеличивающую период полувыведения. Группировка, увеличивающая период полувыведения, может представлять собой полиэтиленгликолевую группировку, сывороточный альбумин или его фрагмент, рецептор трансферрина или его трансферринсвязывающий участок, или антитело или фрагмент антитела, содержащие связывающий сайт для полипептида, который увеличивает период полувыведения in vivo. Группировка, увеличивающая период полувыведения, может представлять собой антитело или фрагмент антитела, содержащие связывающий сайт для сывороточного альбумина или неонатального Fc-рецептора. Группировка, увеличивающая период полувыведения, может представлять собой dAb, антитело или фрагмент антитела. В одном воплощении предложен единичный вариабельный домен иммуноглобулина,или антагонист, или слитый белок, такой что вариабельный домен (или вариабельный домен, представленный антагонистом или слитым белком) дополнительно содержит полиалкиленгликолевую группировку. Полиалкиленгликолевая группировка может представлять собой полиэтиленгликолевую группировку. Дополнительное обсуждение представлено ниже. В одном аспекте в настоящем изобретении предложены единичный вариабельный домен, белок,- 27022925 полипептид, антагонист, композиция или устройство согласно любому аспекту или воплощению изобретения для обесченения одного или более из следующего (определенная комбинация двух или более из следующих целей описана в данной заявке и может быть предметом пункта формулы изобретения):(1) эффективное связывание человеческого TNFR1 (например, с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса;(2) эффективное связывание TNFR1 примата, не являющегося человеком (например, TNFR1 яванского макака, макака-резуса или бабуина) (например, с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса;(3) эффективное связывание человеческого TNFR1 (например, с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса), и эффективное связывание TNFR1 примата, не являющегося человеком (например, TNFR1 яванского макака, макака-резуса или бабуина) (например, с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса);(4) эффективное связывание TNFR1 человека, яванского макака и мыши (например, связывание человеческого TNFR1 с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее, 300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее,как определено методом поверхностного плазмонного резонанса; связывание TNFR1 яванского макака с константой диссоциации (KD) (или примерно) 500 пМ или менее, 400 пМ или менее, 350 пМ или менее,300 пМ или менее, 250 пМ или менее, 200 пМ или менее, или 150 пМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса; и связывание мышиного TNFR1 с константой диссоциации (KD)(или примерно) 7 нМ или менее, 6 нМ или менее, 5 нМ или менее, 4 нМ или менее, 3 нМ или менее, 2 нМ или менее, или 1 нМ или менее, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса);(5) эффективная нейтрализация человеческого TNFR1 у пациента, например, нейтрализация с использованием единичного вариабельного домена, белка, полипептида, антагониста, лиганда или композиции по изобретению, которые нейтрализуют человеческий TNFR1 с ND50 (или примерно) 5, 4, 3, 2 или 1 нМ или менее в стандартном анализе MRC5, как определено посредством ингибирования TNF-альфаиндуцированной секреции IL-8;(6) эффективная нейтрализация человеческого TNFR1 у пациента, например, нейтрализация с использованием единичного вариабельного домена, белка, полипептида, антагониста или композиции по изобретению, которые нейтрализуют TNFR1 яванского макака с ND50 5, 4, 3, 2 или 1 нМ или менее; или от (примерно) 5 до (примерно) 1 нМ в стандартном анализе KI яванского макака, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной секреции IL-8;(7) эффективная нейтрализация человеческого TNFR1 у пациента, например, нейтрализация с использованием единичного вариабельного домена, белка, полипептида, антагониста или композиции по изобретению, которые нейтрализуют мышиный TNFR1 с ND50 150, 100, 50, 40, 30 или 20 нМ или менее; или от (примерно) 150 до 10 нМ; или от (примерно) 150 до 20 нМ; или от (примерно) 110 до 10 нМ; или от (примерно) 110 до 20 нМ в стандартном анализе L929, как определено посредством ингибирования(8) эффективная нейтрализация человеческого TNFR1 у пациента, например, нейтрализация с использованием единичного вариабельного домена, белка, полипептида, антагониста или композиции по изобретению, которые нейтрализуют TNFR1 яванского макака с ND50 5, 4, 3, 2 или 1 нМ или менее; или от (примерно) 5 до (примерно) 1 нМ в стандартном анализе KI яванского макака, как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной секреции IL-8; и нейтрализуют мышиный TNFR1 сND50 150, 100, 50, 40, 30 или 20 нМ или менее; или от (примерно) 150 до 10 нМ; или от (примерно) 150 до 20 нМ; или от (примерно) 110 до 10 нМ; или от (примерно) 110 до 20 нМ в стандартном анализе L929,как определено посредством ингибирования TNF-альфа-индуцированной цитотоксичности;(9) обеспечение перекрестной реактивности между более чем одним видом TNFR1 примата (возможно, TNFR1 человека и яванского макака и/или макака-резуса TNFR1 и/или бабуина, например,TNFR1 человека и яванского макака) и возможно мышиным TNFR1; и(10) обеспечение устойчивости к протеазе (возможно, устойчивости к трипсину). В одном аспекте в настоящем изобретении предложено применение единичного вариабельного домена, белка, полипептида, антагониста, лиганда, композиции или устройства из любого аспекта или воплощения изобретения для обеспечения одного или более из (1) до (10) в непосредственно предшествующем параграфе. В изобретении также предложены соответствующие методы. Делается ссылка на WO 2006038027, в которой описаны иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены против TNFR1. Описание этого документа включено в данную заявку во всей полноте, в частности, для обеспечения применений, форматов, способов отбора, способов производства, способов- 28022925 приготовления фармацевтических препаратов и анализов единичных вариабельных доменов, лигандов,антагонистов против TNFR1 и тому подобного таким образом, чтобы эти описания можно было применить специально и точно в контексте настоящего изобретения, в том чмсле для обеспечения точного описания для введения в формулу изобретения настоящего описания. Анти-TNFRI по изобретению представляет собой единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который возможно представляет собой человеческий вариабельный домен или вариабельный домен,который содержит или происходит из человеческих каркасных областей (например, каркасные областиDP47 или DPK9). В некоторых воплощениях вариабельный домен основан на универсальной каркасной области, как описано в данной заявке. В некоторых воплощениях полипептидный домен (например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина), который имеет связывающий сайт со специфичностью связывания в отношении TNFR1,устойчив к агрегации, обратимому разворачиванию (см. WO 04101790, идеи которой включены в данную заявку посредством ссылки). Молекулы нуклеиновой кислоты, векторы и клетки-хозяева В изобретении также предложены выделенные и/или рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие лиганды (единичные вариабельные домены, слитые белки, полипептиды, лиганды с двойной специфичностью и полиспецифические лиганды), как описано в данной заявке. В одном аспекте в изобретении предложена выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота,кодирующая полипептид, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина в соответствии с изобретением. В одном воплощении нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность DOM1h-574-156, DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-138, DOM1h-574-162 или DOM1h574-180. В одном воплощении нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательностьDOM1h-574-156, DOM1h-574-72, DOM1h-574-109, DOM1h-574-132, DOM1h-574-135, DOM1h-574-138,DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном воплощении нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность DOM1h-574-109, DOM1h-574-93, DOM1h-574-123, DOM1h-574-125, DOM1h574-126 или DOM1h-574-129, DOM1h-574-133, DOM1h-574-137 или DOM1h-574-160. В одном воплощении нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность DOM1h-574-156, DOM1h-574-72,DOM1h-574-109, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126, DOM1h-574-133, DOM1h-574-135 или DOM1h-574138, DOM1h-574-139, DOM1h-574-155, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180. В одном воплощении нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность DOM1h-574-126 или DOM1h-574-133. В одном аспекте в изобретении предложена выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота,которая содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности DOM1h-574-156, DOM1h-574-72, DOM1h-574-109,DOM1h-574-138, DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180, и где нуклеиновая кислота кодирует полипептид,содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается сTNFR1. В одном аспекте в изобретении предложена выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95,98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности DOM1h-574-156, DOM1 h-574-72, DOM1h-574109, DOM1h-574-132, DOM1h-574-135, DOM1h-574-138, D0M1h-574-162 или DOM1h-574-180, и где нуклеиновая кислота кодирует полипептид, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина,который специфически связывается с TNFR1. В одном аспекте в изобретении предложена выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности DOM1h574-109, DOM1h-574-93, DOM1h-574-123, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126 или DOM1h-574-129,DOM1h-574-133, DOM1h-574-137 или DOM1h-574-160, и где нуклеиновая кислота кодирует полипептид,содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается сTNFR1. В одном аспекте в изобретении предложена выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95,98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности DOM1h-574-156, DOM1h-574-72, DOM1h-574109, DOM1h-574-125, DOM1h-574-126, DOM1h-574-133, DOM1h-574-135 или DOM1h-574-138, DOM1h574-139, DOM1h-574-155,DOM1h-574-162 или DOM1h-574-180, и где нуклеиновая кислота кодирует полипептид, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается с TNFR1. В одном аспекте в изобретении предложена выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85,90, 95, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности DOM1h-574-126 или DOM1h-574-133, и где нуклеиновая кислота кодирует полипептид, содержащий единичный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывается с TNFR1. В одном аспекте в изобретении предложен вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по изобретению. В одном аспекте в изобретении предложена клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по изобретению или вектор. Предложен способ получения полипептида, содержащего единичный вариабельный домен иммуноглобулина, включающий поддержание клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии нуклеиновой кислоты или вектора, посредством чего продуцируется полипептид, содер- 29