Новые терапевтические и диагностические средства

Раскрыт способ лечения заболеваний, связанных с ВИЧ, включающий нацеливание на комплексы между, с одной стороны, доменом С 5 gp120 и, с другой стороны, gp41 или доменом С 2 gp120. Комплексы могут быть стабилизированы путем введения соединений, таких как антитела, способных прямо взаимодействовать с комплексом и стабилизировать его, или путем иммунизации веществами, происходящими от С 5 и gp41/C2,так чтобы индуцировать антитела, которые связываются с комплексом и стабилизируют его. Гренвольд Мая Соммерфельт (NO),Далглейш Ангус (GB), Ланге Эйнар Теннес(71)(73) Заявитель и патентовладелец: БИОНОР ИММУНО АС (NO) Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к новым средствам и способам лечения, диагностики и прогнозирования ВИЧ инфекции и СПИДа, и дополнительно изобретение относится к способам идентификации и предоставления средств, пригодных для лечения и диагностики. В частности, настоящее изобретение относится к новым терапевтическим средствам, которые могут оказывать влияние на стабилизацию комплекса между доменами в некоторых белках ВИЧ, и к диагностическим и прогностическим средствам, пригодным для демонстрации присутствия таких средств. Известный уровень техники В последние годы накоплено большое количество научно-исследовательских доказательств, подтверждающих представление о том, что СПИД является заболеванием иммунной системы, индуцируемым ВИЧ-1, а не просто заболеванием, которое вызывается потерей CD4+ Т-лимфоцитов в результате хронической цитопатической вирусной инфекции. Следовательно, важной является разработка способов вмешательства, которые также нацелены на хроническую иммуностимуляцию, индуцируемую ВИЧ-1. Предшествующее исследование показало, что наличие антител против карбоксиконцевого домена С 5 gp120 ВИЧ-1 связано с более слабой активацией иммунной системы и более медленной прогрессией заболевания (Loomis-Price et al. 1998, J. Inf Dis. 178:1306-1316; Warren R.Q. et al. 1991, J. Clin Immunol 11:13-21; Lifson et al. 1991, J. Inf. Dis 163:959-965). Действительно, прогрессия заболевания, как показано,ускоряется, если гуморальные ответы (т.е. ответы антител) на этот домен были утеряны (Wong et al. 1993, J. Inf. Dis 168: 1523-1527). Более того, больные с долгосрочным отсутствием прогрессии (LTNP),которые составляют 5% ВИЧ-инфицированных индивидуумов, обладают поддерживаемыми гуморальными ответами на карбоксиконцевой домен С 5 gp120 ВИЧ-1 и могут жить в отсутствие антиретровирусной терапии в течение многих лет, несмотря на наличие некоторой степени вирусной нагрузки (Liegler etImmunol 154: 5555-66; Easterbrook et al. 1999, J. Infect 28:71-73). Домен С 5 gp120 имеет 13 аминокислот в длину (аминокислотные остатки 499-511 gp120 и обладает эталонной последовательностью B.FR 83.HXB2 - TKAKRRVVQREKR). Ее консервативность у множественных вирусных клад представлена в табл. 1. Единственные области, которые проявляют какую-то существенную вариабельность, занимают положения 500 и 507 последовательности, в которых могут находиться преимущественно аминокислоты K, R и Е в положении (500) или преимущественно Q, Е в положении (506). Таблица 1 С 5-домен различных множественных клад Представленная таблица основана на 1066 последовательностях, загруженных из базы данных ВИЧLos Alamos 3-го мая 2008 г. Последовательности сгруппированы по следующим кладам вируса: А: 32 последовательности,А 1: 47 последовательностей,А 2: 10 последовательностей,В: 453 последовательности,С: 464 последовательности иD: 60 последовательностей. Эта карбоксиконцевая константная область С 5 gp120 ВИЧ-1 является иммунодоминантной и высоко консервативной среди множества подтипов ВИЧ. Она экспонирована в 3D структуре нативного gp120,на вирионах и на клеточной поверхности, экспрессирующей gp120. В действительности домен С 5 похож на молекулы классов I и II антигенов лейкоцитов человека (HLA) и обладает способностью связывать пептиды, а делеция домена С 5 аннулирует связывание пептидов (Cadogan et al. AIDS Research and HumanRetorviruses (2008); Vol. 24: 845-855). Таким способом домен С 5 может имитировать активность HLA человека. Однако к данному моменту механизмы, возникающие после активации иммунной системы, связанной с С 5, в настоящее время практически неизвестны, что означает невозможность рациональной разработки лекарств и диагностических/прогностических средств на основе этих механизмов. Цель изобретения Целью вариантов осуществления этого изобретения является предоставление средств и способов,которые могут быть использованы для профилактики, и/или диагностики, и/или прогнозирования инфицирования ВИЧ и СПИДа. Краткое изложение сущности изобретения Авторами настоящего изобретения обнаружено, что пептидные конструкции ("сочетания пептидов"), состоящие из аминокислотных последовательностей из домена С 5 gp120 и из аминокислотных последовательностей из трансмембранного домена gp41, узнаются антисыворотками, полученными от большого процента индивидуумов LTNP (больных с долгосрочным отсутствием прогрессии), инфицированных ВИЧ, в то же время, те же самые конструкции, по существу, не узнаются антисыворотками от индивидуумов, не инфицированных ВИЧ, или антисыворотками от индивидуумов, инфицированных ВИЧ, не являющихся LTNP. Сходные результаты наблюдались для пептидных конструкций, состоящих из пептидных гибридов, происходящих от С 5 и С 2. В частности, тестирование на антитела у больных ВИЧ с долгосрочным отсутствием прогрессии(LTNP) с помощью новых антигенов, включающих аминокислотные последовательности домена С 5 в сочетании с различными другими аминокислотными последовательностями, найденными в gp160 вне домена С 5, выявило новые неожиданные свойства. Это сочетание аминокислотных последовательностей пригодно для идентификации набора ответов антител, уникальных для инфицированных ВИЧ индивидуумов, которые, несмотря на инфекцию, не проявляют признаков прогрессии заболевания. Сходные антигены, которые включают перекрестные вариации клад вирусов, могут быть использованы для индукции широкого спектра гуморальных ответов анти-С 5 и анти-С 5:СХ (обозначающего связь между областью С 5 и областью, не относящейся к С 5, в gp41 или gp120), эквивалентных ответам, выявляемым у больных с долгосрочным отсутствием прогрессии/элитного контроля. Следовательно, в настоящем документе сделано заключение, что состояние LTNP, которое характерно для 5% ВИЧ-инфицированных индивидуумов, является, по меньшей мере, частично следствием способности этих инфицированных индивидуумов вырабатывать антитела против конформационных эпитопов, включающих аминокислоты как из С 5, так и из ТМ-gp41 или С 2. Такие антитела должны в результате их связывания как с С 5, так и с ТМ-gp41 или С 2, стабилизировать специфическую конформацию, когда С 5 образует комплекс с tm-gp41 и/или С 2. В последующем это открывает возможность создания и получения новых антител, которые проявляют ту же специфичность, что и антитела, идентифицированные в настоящем документе, но это также открывает возможность разработки иммуногенных средств, которые могут обладать способностью индуцировать антитела, которые могут стабилизировать комплекс, образующийся между С 5 и ТМ-gp41 с одной стороны, или С 5 и С 2, с другой стороны. Пептидные антигены к карбоксиконцевому домену С 5 белка gp120 оболочки ВИЧ-1, конъюгированные или образующие комплекс (СХ) с областями в трансмембранном gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120, могут быть использованы в качестве средств вакцин для выработки антительных иммунных ответов для предотвращения/подавления хронической иммунной стимуляции, связанной с С 5 у инфицированных ВИЧ индивидуумов. Пептидные антигены к этим доменам могут также использоваться в способах диагностики и прогнозирования для идентификации таких антител у инфицированных ВИЧ индивидуумов для определения того, будут ли они являться больными с долгосрочным отсутствием прогрессии или они будут являться кандидатами для вакцинации. Способ может быть также использован для определения того, будет ли вакцинация успешной. Так как в данном изобретении предлагается новый механизм активации иммунной системы, связанный с С 5, это также подчеркивает потенциал других молекул, отличных от антител, в стабилизации взаимодействий С 5 и gp41 и/или С 2 для предотвращения доступности свободного С 5, которая ведет к связанной с С 5 активации иммунной системы. Домен С 5 gp120 ВИЧ-1 может быть связан с активацией иммунной системы различными способами. 1) С 5 может презентироваться в виде пептида на различных молекулах HLA на инфицированных клетках. Вариабельность положений 500 и 507 указывает на пластичность во взаимодействии с множественными молекулами HLA. 2) С 5 может связывать пептид и функционировать как молекула HLA, взаимодействуя с Тклеточными рецепторами. Другие молекулы, вовлеченные во взаимодействие с комплексом TCR, присутствуют на клеточной поверхности или включены в вирусную частицу. Cadogan et al. 2008 AIDS Resand Hum Retroviruses 24:845-55. Как отмечалось, это открывает несколько новых путей, нацеленных на активацию иммунной системы, вызываемую ВИЧ. Если С 5 стабилизирован в результате сохранения связывания/образования комплекса с gp41 и/или С 2, С 5 должен оставаться инертным/инактивированным. С 5, следовательно, очевидно, колеблется между связыванием с gp41 и С 2. С другой стороны, когда С 5 освобождается либо от gp41, либо от С 2, это может приводить к активации иммунной системы. Следовательно, должна существовать возможность блокирования активации иммунной системы,-2 022788 связанной с С 5, различными путями, все они охватываются настоящим изобретением. Сочетания пептидов, включающие пептиды из С 5, взаимодействующие с gp41 и С 2, имитируют комплекс in vivo между С 5 и gp41 или С 2 и должны обладать способностью индуцировать ответы антител против нативного комплекса. Эти антитела могут, в свою очередь, блокировать связанную с С 5 активацию иммунной системы в результате конформационного "блокирования" С 5. Также небольшие молекулы, которые блокируют высвобождение С 5 и поддерживают стабильность его связывания с gp41 или С 2 (способом, сходным с антителами, индуцируемыми сочетаниями пептидов), или небольшие молекулы или антитела, которые связывают свободный С 5, придают ему тем самым инертность и блокируют активацию иммунной системы. Например, небольшие молекулы, соответствующие областям С 2 и gp41, которые взаимодействуют с С 5, могут быть использованы для ингибирования этой связанной с С 5 активации иммунной системы. Вакцины, основанные на домене С 5 ВИЧ-1, образовавшем комплекс/конъюгированном с доменамиgp41 и/или С 2, отличаются от традиционных подходов к вакцинам против ВИЧ на основе антител, так как антитела, индукция которых вызывается, обычно не являются нейтрализующими. В других подходах к вакцинам против ВИЧ вовлечены более крупные антигены, они направлены на полноразмерный gp120,gp41 или нерасщепленный предшественник gp160. Однако они не направлены на области домена С 5,специфически комплексирующегося с gp41 и/или С 2. Таким образом, в первом аспекте настоящего изобретения предлагается способ снижения и/или задержки патологических эффектов вируса I иммунодефицита человека (ВИЧ) у человека, инфицированного ВИЧ, включающий введение эффективного количества одного или нескольких средств, способных стабилизировать ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120. Во втором аспекте предлагается способ снижения и/или задержки патологических эффектов вирусаI иммунодефицита человека (ВИЧ) у человека, инфицированного ВИЧ, включающий введение эффективного количества одного или нескольких иммуногенов, которые индуцируют антитела, стабилизирующие ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120. В третьем аспекте предлагается способ снижения риска развития синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа) или заболевания ВИЧ, включающий введение эффективного количества одного или нескольких иммуногенов, которые индуцируют антитела, стабилизирующие ассоциацию домена С 5gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120. В четвертом аспекте предлагается способ снижения риска развития синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа), включающий введение эффективного количества средства, способного стабилизировать ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120. В пятом аспекте предлагается сочетание пептидов, содержащее первый пептид, включающий аминокислотную последовательность из 13 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности домена С 5 gp120 ВИЧ, включая от 0 до 4 аминокислотных замен,ее подпоследовательность или аминокислотную последовательность, включающую инвертированную,ретро- или ретроинвертированную форму указанной аминокислотной последовательности или подпоследовательности, и по меньшей мере один второй пептид, имеющий аминокислотный участок, присутствующий в трансмембранном домене gp41 или присутствующий в константном домене С 2 gp120, или имеющий аминокислотный участок, присутствующий в любой из SEQ ID NO: 6-13, или имеющий инвертированную, ретро- или ретроинвертированную форму аминокислотного участка, присутствующего в трансмембранном домене gp41 или присутствующего в константном домене С 2 gp120,где указанное сочетание пептидов способно индуцировать антитело, которое может связываться и стабилизировать ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120, и где в указанном сочетании пептидов отсутствуют аминокислоты N-конца С 5 вgp120. В шестом аспекте предлагается иммуногенная композиция, включающая сочетание пептидов по настоящему изобретению в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем и необязательно с иммунологическим адъювантом. В седьмом аспекте предлагается фрагмент нуклеиновой кислоты, кодирующий сочетание пептидов,где указанное сочетание пептидов включает первый пептид, который идентичен первому пептиду сочетания пептидов по настоящему изобретению при условии, что аминокислотные остатки в указанном первом пептиде находятся в L-формах, выбранных из группы, состоящей из Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg,Ser, Thr, Val, Trp и Tyr, и по меньшей мере один второй пептид, который идентичен второму пептиду сочетания пептидов по настоящему изобретению при условии, что аминокислотные остатки в указанном втором пептиде находятся в L-формах,-3 022788 где указанное сочетание пептидов способно индуцировать антитело, которое может связываться и стабилизировать ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120, и где в указанном сочетании пептидов отсутствуют N-концевые аминокислоты С 5 в gp120. В восьмом аспекте предлагается вектор, включающий фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению. В девятом аспекте предлагается иммуногенная композиция, включающая фрагмент нуклеиновой кислоты или вектор по настоящему изобретению в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем и необязательно с иммунологическим адъювантом. В десятом аспекте предлагается способ определения присутствия антител, которые связывают эпитоп, состоящий из аминокислот домена С 5 gp120, а также аминокислот в трансмембранном домене gp41 и/или константном домене С 2 gp120, где способ включает контактирование образца, потенциально включающего указанные антитела по меньшей мере с одним сочетанием пептидов по настоящему изобретению, и количественное или качественное определение связывания между по меньшей мере одним сочетанием пептидов и антителами в указанном образце. В одиннадцатом аспекте предлагается набор для определения присутствия антител, которые связывают эпитоп, состоящий из аминокислот в домене С 5 gp120, а также аминокислот в трансмембранном домене gp41 и/или константном домене С 2 gp120, где набор включает по меньшей мере одно сочетание пептидов по изобретению, средства для взаимодействия жидкого образца с указанным сочетанием пептидов и средства для определения наличия положительной или отрицательной реакции связывания антител с указанным сочетанием пептидов. В двенадцатом аспекте предлагается способ выделения средств, способных стабилизировать ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2gp120, где способ включает тестирование кандидатных средств на их способность вытеснять реперное средство, которое, как установлено ранее, способно стабилизировать указанную ассоциацию, из его стабилизирующей связи с указанным доменом С 5 и с указанным трансмембранным доменом gp41 и/или с указанным константным доменом С 2 или из его связи с заменителем указанного домена С 5 и указанного трансмембранного домена и/или указанного константного домена С 2, и выделение тех кандидатных средств, которые способны вытеснять указанное реперное средство, или тестирование кандидатных средств на их способность связываться с заменителем комплекса между доменом С 5 и трансмембранным доменом gp41 и/или константным доменом С 2 gp120, и выделение тех средств, которые способны проявлять значительное связывание с указанным заменителем. В тринадцатом аспекте предлагается аналог домена С 5 gp120, включающий аминокислотную последовательность, имеющую формулу (II) где Y1 представляет собой Thr;Y13 представляет собой Cit или включает подпоследовательность по меньшей мере из 6 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности формулы (II), или включает инвертированную, ретро- или ретроинвертированную форму указанной аминокислотной последовательности или подпоследовательности. Подписи к фигурам Фиг. 1. Комбинированные гистограмма и линейный график. На линейном графике показаны отношения между величинами измеренной ОП для пептидного раствора А (только SEQ ID NO: 1) и В (SEQID NO: 1 и 6), а на гистограмме показаны средние ответы для каждого интервала отношений для SEQ IDNO: 1. Отрезки ошибки рассчитывали как станд. откл./квадрат корня из n. Подробности см. в примере 4. Фиг. 2. Сравнение ответов на А (только SEQ ID NO: 1) и В (SEQ ID NO: 1 в сочетании с SEQ IDNO: 6) у различных групп индивидуумов (LTNP, ВИЧ-положительные и доноры крови). Боксами указан межквартильный размах. Величина медианы указана горизонтальной линией. Линии, продолжающиеся от каждого конца бокса = 1,5 длин в единицах межквартильного размаха. Кресты = величины за пределами концов линий. Фиг. 3. Ингибирование связывания антител с использованием различных антигенов. Используемые антигены: BI400-B, С 5 (BI400-015), пептид gp41 (BI400-201), пептид С 2 (BI400201d), рекомбинантный gp41. BI301-23 представляет собой нерелевантный пептид, не относящийся к ВИЧ, PBS представляет собой забуференный фосфатом физиологический раствор без какого-либо пептидного антигена. Подробности см. в примере 5. Фиг. 4. Перекрестная конкуренция связывания антитела BI400-B с С 5/gp41 при использовании сыворотки от LTNP. Пул-1 LTNP представляет собой пул, состоящий из сывороток, собранных от пяти больных, определенных как LTNP. Пул-2 LTNP представляет собой пул, состоящий из сывороток, собранных от четырех других больных, определенных как LTNP. Пул BD представляет собой пул, состоящий из 10 сывороток от здоровых доноров крови. Фиг. 5. Преобладание антител против С 5/gp41 у индивидуумов, инфицированных ВИЧ, варьируется в зависимости от вирусной нагрузки. Боксами указан межквартильный размах. Величина медианы указана горизонтальной линией. Линии, продолжающиеся от каждого конца бокса = 1,5 длин в единицах межквартильного размаха. Подробности см. в примере 5. Подробное раскрытие изобретения Определения. Когда в данном раскрытии используются термины "один", "единственное число", они обозначают"по меньшей мере один" или "один или несколько", если не указано иначе. Далее, термин "содержащий" предназначен для обозначения "включающего" и, следовательно, допускает наличие компонентов,свойств, состояний или стадий, отличных от тех, которые цитируются подробно."ВИЧ" обычно обозначает вирус I иммунодефицита человека."Заболевание ВИЧ" имеет несколько стадий, включая острую инфекцию ВИЧ, которая часто манифестируется как похожая на грипп инфекция, и раннюю и среднюю стадию симптоматического заболевания, которая имеет несколько нехарактерных симптомов, таких как кожная сыпь, усталость, ночная потливость, некоторая потеря веса, язвы ротовой полости и грибковые инфекции кожи и ногтей. Большинство инфицированных ВИЧ могут испытывать умеренные симптомы, такие как эти, перед развитием более серьезного заболевания. Обычно считается, что проходит от пяти до семи лет до появления первых умеренных симптомов. По мере прогрессии заболевания ВИЧ некоторые индивидуумы могут становиться совершенно больными, даже если у них еще не диагностирован СПИД (см. ниже), поздняя стадия заболевания ВИЧ. Типичные проблемы включают хроническую оральную или вагинальную молочницу(грибковую сыпь или пятна), рецидивирующие волдыри герпеса на ротовом отверстии (лихорадка) или гениталиях, постоянную лихорадку, упорную диарею и существенную потерю веса. "СПИД" является поздней стадией заболевания ВИЧ и представляет собой состояние, при котором эффективность работы иммунной системы прогрессивно снижается, и индивидуумы становятся восприимчивыми к оппортунистическим инфекциям и опухолям. Когда в настоящем описании используется термин "gp120", он означает 120 кДа N-концевой гликопротеидный продукт ферментативного расщепления gp160, который, в свою очередь, является единственным продуктом экспрессии гена env ВИЧ. gp120 образует "шипики" на инфекционных вирионах ВИЧ и нековалентно связан с gp41."gp41" обозначает 41 кДа С-концевой гликопротеидный продукт ферментативного расщепленияgp160. gp41 локализован внутриклеточно в клетках, инфицированных ВИЧ, или внутри вирусного капсида в инфекционных вирионах ВИЧ. gp41 имеет N-концевой трансмембранный домен, который нековалентно связан с gp120. Этот трансмембранный домен обозначают в настоящем описании "трансмембранным доменом gp41" или "tm-gp41". В объем термина включаются существующие в природе мутантные варианты последовательности, как, например, последовательности, представленные в формуле (III)."С 2" или "домен С 2" обозначает консервативную область gp120. Области в С 2 образуют антипараллельную -складку с С 5 во внутреннем проксимальном домене gp120."Сниженное и/или задержанное (отсроченное) патологическое действие ВИЧ" в контексте настоящего изобретения подразумевает обозначение того, что применение способов по изобретению обеспечи-5 022788 вает статистически достоверное снижение и/или задержку заболеваемости, наблюдаемой у индивидуумов, инфицированных ВИЧ, которых лечат по настоящему изобретению. Это означает, что время возникновения проявляемых симптомов заболевания, характерных для СПИДа, является более поздним по сравнению с контрольными группами, не получавшими лечения, и/или количество признаков патологической манифестации снижено по сравнению с контрольными группами, не получавшими лечения по настоящему изобретению. Выражение "ассоциация домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120" означает, что С 5 может нековалентно взаимодействовать с обоими или с одним из tm-g41 и С 2. Взаимодействие с tm-gp41 является межмолекулярным, тогда как взаимодействие с С 2 является внутримолекулярным."Средство, способное стабилизировать" ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120, является химическим соединением, которое предотвращает или статистически снижает высвобождение С 5 из его межмолекулярной связи с gp41 и/или из его внутримолекулярной связи с С 2. Обычно такое средство представляет собой любое химическое вещество, способное проявлять этот эффект, но важными примерами являются антитела, фрагменты антител и аналоги антител. Однако также и другие молекулы, обладающие подходящим связывающим сродством к комплексу между С 5 с одной стороны и tm-gp41 и/или С 2 с другой, являются средствами по настоящему изобретению - точная молекулярная форма менее важна, чем связывающие характеристики,и по изобретению также возможно, что такое средство может представлять собой рецептор или аналог рецептора, но также и низкомолекулярные стабилизаторы способны функционировать в качестве средства по настоящему изобретению. В настоящем описании термин "антитело" используется в самом широком смысле и конкретно включает полноразмерные моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифичные антитела (например, биспецифичные антитела) и фрагменты антител, до тех пор, пока они проявляют желаемую биологическую активность, т.е. работают как описанное выше средство. Различные способы,относящиеся к продукции антител, предлагаются, например, в Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory"Фрагмент антитела или аналог антитела" включает часть полноразмерного антитела, предпочтительно его антигенсвязывающие или вариабельные области. Примеры фрагментов/аналогов антител включают Fab, Fab', F(ab)2, F(ab')2, F(ab)3, Fv (обычно домены VL и VH одного плеча антитела), одноцепочечный Fv (scFv), dsFv, Fd фрагменты (обычно домен VH и CHI) и dAb (обычно домен VH) фрагменты; домены VH, VL, VhH и V-NAR; мини-тела, диатела, триатела, тетратела и каппа-тела (см., например,Ill et al., Protein Eng 1997; 10: 949-57); IgG верблюда; IgNAR; и мультиспецифичные фрагменты антител,образованные из фрагментов антител, и одну или более выделенных CDR или функционального паратопа, где выделенные CDR или антигенсвязывающие остатки или полипептиды могут быть связаны или соединены вместе так, чтобы образовался функциональный фрагмент антитела. Различные типы фрагментов антител описаны или обсуждены, например, в Holliger and Hudson, Nat Biotechnol 2005; 23, 11261136; патенте WO 2005040219, и в опубликованных патентных заявках США 20050238646 и 20020161201. В настоящем описании термин "производное антитела" включает полноразмерное антитело или фрагмент антитела, предпочтительно включающий, по меньшей мере, его антигенсвязывающие или вариабельные области, где одна или две аминокислоты химически модифицированы, например, с помощью алкилирования, ПЭГилирования, ацилирования, образования сложных эфиров или образования амидов и т.п., например, для соединения антитела со второй молекулой. Термин включает, но не ограничивается этим, ПЭГилированные антитела, цистеин-ПЭГилированные антитела и их варианты. В настоящем описании термин "конъюгат" включает средство по изобретению, такое как производное антитела, связанное или соединенное со вторым средством, таким как цитотоксическое средство,открываемое средство и т.д. Конъюгат может быть составлен из ковалентно связанных пептидов (примером конъюгата является слитый пептид, включающий два пептида, соединенных пептидными связями,так что конъюгат в этом случае может представлять собой продукт экспрессии фрагмента нуклеиновой кислоты), но конъюгат может также представлять собой сочетание пептидов, ковалентно связанных путем химической конъюгации (общепринятым примером является конъюгация с использованием глутаральдегида). Другим примером более сложной конъюгации является пример, в котором средство или сочетание пептидов, или другое химическое вещество по настоящему изобретению соединяют с молекулой носителя, которую в свою очередь соединяют с другими средствами, сочетаниями пептидов или другими химическими веществами по настоящему изобретению (например, когда такие химические вещества связывают с полилизиновым носителем (лизиновым "деревом"."Гуманизированное" антитело представляет собой химерное антитело человека/не от человека, которое содержит минимальную последовательность, полученную от иммуноглобулина, происходящего не от человека. По большей части гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (антитело-реципиент), в котором остатки из гипервариабельной области реципиента заменены остатками из гипервариабельной области видов, не относящихся к человеку (антитело-донор), таких как мышь, крыса, кролик или примат, не являющийся человеком, имеющей желаемые специфичность, аффинность и емкость. В некоторых случаях остатки области каркаса (FR) иммуноглобулина человека заменяют соответствующими остатками не от человека. Более того, гуманизированные антитела могут включать остатки, которые не обнаруживаются в антителе-реципиенте или в антителе-доноре. Эти модификации создаются для дополнительного улучшения характеристики антител. В целом гуманизированное антитело может включать по существу все по меньшей мере из одного и обычно из двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют петлям иммуноглобулина не от человека и все или по существу все остатки FR представляют собой остатки последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело может необязательно включать также по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), обычно от иммуноглобулина человека. Для дополнительных подробностей см., например, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986);Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992), патент WO 92/02190, патентную заявку США 20060073137, и патенты США 6750325, 6632927, 6639055, 6548640,6407213, 6180370, 6054297, 5929212, 5895205, 5886152, 5877293, 5869619, 5821337, 5821123, 5770196,5777085, 5766886, 5714350, 5693762, 5693761, 5530101, 5585089 и 5225539. Антитело, имеющее "биологическую характеристику" реперного антитела, представляет собой антитело, которое обладает одной или более биологическими характеристиками такого антитела, которое отличает его от других антител, которые связываются с тем же самым антигеном. В контексте настоящего изобретения термин "пептид" предназначен для обозначения как коротких пептидов от 2 до 10 аминокислотных остатков, олигопептидов от 11 до 100 аминокислотных остатков,так и полипептидов из более 100 аминокислотных остатков. Когда делается ссылка на аминокислоты в пептидах, подразумевается, что аминокислоты представляют собой L-аминокислоты, если не предоставляется другая информация."Белок" предназначен для обозначения функциональной биомолекулы, включающей по меньшей мере один пептид; при включении по меньшей мере двух пептидов они могут образовывать комплексы,быть ковалентно связанными или могут быть связаны нековалентно. Полипептид(ы) в белке могут быть гликозилированными и/или липидированными и/или включать простетические группы."Сочетание пептидов" обозначает молекулу, которая состоит по меньшей мере из двух пептидов в неприродной конфигурации относительно друг друга. Примерами являются пептиды из одного и того же или из различных белков, которые ковалентно связаны через боковые цепи по меньшей мере одной из их аминокислот, или которые связаны через их концы (например, через пептидные связи), но в конфигурации, которая не встречается в природе. Типичные примеры сочетаний пептидов подробно представлены ниже."Вариант" или "аналог" пептида относится к пептиду, имеющему аминокислотную последовательность, которая по существу идентична реперному пептиду, обычно нативному или "родительскому" полипептиду. Вариант пептида может обладать одной или более аминокислотных замен, делеций и/или вставок в определенных положениях в нативной аминокислотной последовательности."Консервативные" аминокислотные замены представляют собой замены, в которых аминокислотный остаток заменяют аминокислотным остатком, обладающим боковой цепью со сходными физикохимическими свойствами. Семейства аминокислотных остатков, обладающих сходными боковыми цепями, известны в данной области техники и включают аминокислоты с основными боковыми цепями(например, лизин, аргинин, гистидин), кислыми боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота,глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин,глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например,аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин,фенилаланин, триптофан, гистидин). Особая форма консервативных аминокислотных замен включает замены аминокислотами, которых нет среди нормальных 20 аминокислот, кодируемых генетическим кодом. Так как предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения подразумевают использование синтетических пептидов, применение таких "неприродных" аминокислотных остатков в раскрытых в настоящем описании пептидах не является проблемой, и, таким образом, можно заменить природные насыщенные углеродные цепи в боковых цепях аминокислотных остатков более короткими или более длинными насыщенными углеродными цепями - например, лизин может быть заменен на аминокислоту, имеющую боковую цепь -(CH2)nNH3, где n отличается от 4, и аргинин может быть заменен на аминокислоту, имеющую боковую цепь -(СН 2)nNHC(=NH2)NH2, где n отличается от 3, и т.д. Сходно,кислые аминокислоты аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота могут быть заменены аминокислотными остатками, имеющими боковые цепи -(CH2)nCOOH, где n2."Ретроформа" пептида представляет собой форму пептида, в которой порядок аминокислот в направлении от N- к С-концу инвертирован. Например, ретроформа ALDFR представляет собой пептид"Инвертированная" форма характеризуется тем фактом, что каждая аминокислота в инвертированной форме находится в противоположной стереохимической конфигурации по сравнению с соответст-7 022788 вующей аминокислотой в пептиде. Таким образом, что если пептид состоит из L-аминокислот, инвертированная форма состоит из D-аминокислот."Ретроинвертированная" форма пептида представляет собой форму пептида, которая является как инвертированной формой, так и ретроформой. Ретроинвертированная форма L-ala-L-Arg-L-Lys представляет собой D-Lys-D-Arg-D-ala. Термин "по существу идентичная" в контексте двух аминокислотных последовательностей обозначает, что последовательности при оптимальном выравнивании, таком как с помощью программ GAP илиBESTFIT с использованием веса пробелов по умолчанию, имеют по меньшей мере приблизительно 50,по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 80, по меньшей мере приблизительно 90, по меньшей мере приблизительно 95, по меньшей мере приблизительно 98 или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности. В одном варианте осуществления положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами. Идентичность последовательностей обычно измеряется с использованием компьютерных программ анализа последовательностей. Компьютерная программа анализа белков выравнивает сходные последовательности с использованием измерений сходства при заданных различных заменах, делециях и других модификациях, включая консервативные аминокислотные замены. Например,имеющееся в открытом доступе компьютерное обеспечение GCG содержит такие программы, как "Gap" и "BestFit", которые могут быть использованы с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близко родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды от различных видов организмов или между белком дикого типа и его мутантной формой. См., например, GCG Version 6.1. Полипептидные последовательности можно также сравнивать с использованием FASTA или ClustalW, применяя параметры по умолчанию или рекомендуемые параметры. В программе GCG Version 6.1., FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) предлагаются выравнивания и процент идентичности последовательностей областей наилучшего перекрытия между запрашиваемой последовательностью и искомыми последовательностями (Pearson, Methods Enzymol. 1990; 183:63-98; Pearson, Methods Mol. Biol. 2000; 132:185-219). Другим предпочтительным алгоритмом является такой алгоритм, когда последовательность сравнивается с базой данных, содержащей большое количество последовательностей от различных организмов, или когда делается вывод из компьютерной программы BLAST, особенно blastp, с использованием параметров по умолчанию. См.,например, статьи Altschul et al., J. Mol. Biol. 1990; 215:403-410; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 1997; 25:3389-402 (1997); каждая из которых включена в настоящее описание в качестве ссылки. "Соответствующие" положения аминокислот в двух по существу идентичных аминокислотных последовательностях представляют собой положения, выровненные с помощью любой компьютерной программы анализа белков, указанной в настоящем описании, обычно с использованием параметров по умолчанию. Термин "подпоследовательность" в целом обозначает любой последовательный участок из по меньшей мере 3 аминокислот или, когда это уместно из по меньшей мере 3 нуклеотидов, происходящий непосредственно из природной аминокислотной последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты, соответственно. Однако в случае обсуждаемых сочетаний пептидов по настоящему изобретению подпоследовательность может иметь 1 или 2 аминокислоты. Это происходит, потому что сочетания пептидов по изобретению включают аминокислоты из различных пептидных доменов, где аминокислоты совместно, по меньшей мере, образуют конформационный эпитоп для антитела. Следовательно,такой конформационный эпитоп может состоять из 4 аминокислот из С 5, но только из 1 или 2 изtm-gp41 - важным моментом здесь является то, что этот сочетанный эпитоп из 2 доменов способен подвергаться стабилизации, т.е. что связывание антитела с этим же эпитопом in vivo должно стабилизировать конфигурацию связи между С 5 и tm-gp41 и/или С 2. Нуклеиновая кислота является "функционально связанной", когда она находится в функциональном взаимоотношении с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, ДНК препоследовательности или лидирующего пептида для секреции функционально связана с ДНК полипептида, если он экспрессируется как пребелок, который участвует в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности; или рибосомсвязывающий сайт функционально связан с кодирующей последовательностью,если он расположен так, что облегчает трансляцию. Обычно "функционально связанные" обозначает, что последовательности ДНК, подвергаемые связыванию, являются прилегающими и, в случае лидирующего пептида для секреции, прилегающими в фазу считывания. Однако энхансеры не должны быть прилегающими. Связывание достигается лигированием в подходящих сайтах рестрикции. Если таких сайтов не существует, используются синтетические олигонуклеотидные адапторы или линкеры в соответствии с общепринятыми методами."Выделенная" молекула представляет собой молекулу, которая является преобладающим видом в композиции, где она находится, по отношению к классу молекул, к которому она принадлежит (т.е. она составляет по меньшей мере приблизительно 50% типа молекулы в композиции и обычно может составлять по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или более вида молекулы, например, пептида, в композиции). Обычно композиция молекулы антитела может иметь 98-99% гомогенность для молекул антитела в контексте всех видов присутствующих пептидов в композиции или, по меньшей мере, по отношению к видам, по существу, активных пептидов в контексте предполагаемого применения. В контексте настоящего изобретения "лечение" или "терапия" относятся к профилактике, облегчению, управлению или снижению одного или более симптомов или клинически значимых манифестаций заболевания или нарушения, пока в контексте не указано противоположное. Например, "лечение" больного, у которого не идентифицировано симптомов или клинически значимых манифестаций заболевания или нарушения, представляет собой превентивную или профилактическую терапию, тогда как "лечение" больного, у которого идентифицированы симптомы или клинически значимые манифестации заболевания или нарушения, обычно не является превентивной или профилактической терапией. Термин "антиген" обозначает вещество, которое узнается специфическими компонентами узнавания иммунной системы (антителами, Т-клетками). Термин "иммуноген" в контексте настоящего изобретения предназначен для обозначения вещества,которое способно индуцировать адаптивный иммунный ответ у индивидуума, где указанный адаптивный иммунный ответ направлен на иммуноген. По настоящему изобретению иммуноген должен индуцировать антитела, которые взаимодействуют с иммуногеном. Другими словами иммуноген является антигеном, который способен индуцировать иммунитет. Термины "эпитоп", "антигенная детерминанта" и "антигенный сайт" используются в настоящем описании взаимозаменяемо и обозначают область антигена или иммуногена, которая узнается антителами (в случае эпитопов, связывающихся с антителом, они также известны как "В-клеточные эпитопы") или Т-клеточными рецепторами, когда эпитоп образует комплекс с молекулой МНС (в случае эпитопов,связывающихся с Т-клеточными рецепторами, т.е. Т-клеточных эпитопов"). Термин "эффективное количество иммуногена" имеет свое обычное значение в данной области техники, т.е. количество иммуногена, которое способно индуцировать иммунный ответ, который существенно затрагивает патогенные средства, которые по иммунологическим чертам подходят к иммуногену. Термин "вакцина" используется в отношении композиции, включающей иммуноген и способной индуцировать иммунный ответ, который либо способен снижать риск развития патологического состояния, либо способен индуцировать терапевтически эффективный иммунный ответ, который может содействовать лечению (или, по меньшей мере, облегчать симптомы) патологического состояния. Термин "фармацевтически приемлемый" имеет свое обычное значение в данной области техники,т.е. он используется для вещества, которое может быть приемлемым как часть лекарства для использования у человека при лечении данного заболевания, и, таким образом, термин эффективно исключает использование высокотоксичных веществ, которые должны будут ухудшать, а не улучшать состояние индивидуума, подвергаемого лечению."Эпитоп Т-хелперных лимфоцитов" (эпитоп ТН) представляет собой пептид, который связывается с молекулой класса II МНС, и может быть представлен на поверхности антигенпрезентирующей клетки(АРС) связанным с молекулой класса II МНС. "Иммунологический носитель" обычно представляет собой вещество, которое включает один или много эпитопов ТН и которое повышает иммунный ответ против антигена, с которым оно соединено, с помощью обеспечения активации и пролиферации Тхелперных лимфоцитов. Примерами известных иммунологических носителей являются токсоиды столбняка и дифтерии и гемоцианин моллюска фиссурелии (KLH). Термин "адъювант" имеет свое обычное значение в области разработки вакцин, т.е. это вещество или композиция вещества, которое 1) само не способно вызывать специфический иммунный ответ против иммуногена вакцины, но которое 2) тем не менее, способно усиливать иммунный ответ против иммуногена. Или, другими словами, вакцинация одним адъювантом не вызывает иммунного ответа против иммуногена, но сочетанная вакцинация иммуногеном и адъювантом индуцирует иммунный ответ против иммуногена, который является более сильным, чем ответ, индуцируемый одним иммуногеном. Конкретные варианты осуществления изобретения 1-й и 4-й аспекты. Первый аспект изобретения относится к способу снижения и/или задержки патологических эффектов вируса I иммунодефицита человека (ВИЧ) у человека, инфицированного ВИЧ, причем способ включает введение эффективного количества средства, способного стабилизировать связь домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120. Четвертый аспект во многом сходен, но относится к способу снижения риска развития синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа), причем способ включает введение эффективного количества средства, способного стабилизировать связь домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120. Эти аспекты в первую очередь направлены на лечение индивидуумов, инфицированных ВИЧ, средствами, которые могут имитировать антитела, которые по настоящему изобретению характерны для больных, инфицированных ВИЧ, с долгосрочным отсутствием прогрессии, - это является наиболее прямым терапевтическим использованием результатов, лежащих в основе настоящего изобретения. Тогда как целью 1-го аспекта является снижение патологических эффектов ВИЧ или продление времени, занимаемого до развития манифестации СПИДа, целью 4-го аспекта является снижение риска развития СПИДа в целом и, следовательно, его можно использовать у индивидуумов, которые в текущий момент получают антиретровирусное лечение профилактически. В одном варианте осуществления средство в первом аспекте изобретения представляет собой молекулу, включающую по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, независимо выбранную из аминокислотной последовательности, происходящей из трансмембранного домена gp41 и аминокислотной последовательности, происходящей из домена С 2, где по меньшей мере одна аминокислотная последовательность связывается с доменом С 5 и включает по меньшей мере одну D-аминокислоту; в определенных вариантах осуществления все аминокислоты в аминокислотной последовательности являются D-аминокислотами. Молекула предпочтительно представляет собой пептид, и в определенных вариантах осуществления этот пептид состоит по меньшей мере из одной аминокислотной последовательности. Аминокислотные последовательности обычно включают не более 10 аминокислотных остатков, например не более 9, не более 8, не более 7, не более 6 и не более 5 аминокислотных остатков. Предпочтительные молекулы, следовательно, представляют собой пептиды, имеющие 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных остатков. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна молекула является, следовательно, пептидом, имеющим или включающим SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37, 39, 40, 42, 43 и 45, которые все могут частично или полностью состоять из D-аминокислот. Все молекулы, включающие пептиды, имеющие формулу (III), являются интересными вариантами осуществления по меньшей мере одной молекулы. В одном варианте осуществления средство в первом аспекте изобретения выбрано из антитела,фрагмента антитела или аналога антитела. Антитело может представлять собой полностью человеческое антитело, гуманизированное антитело, или химерное антитело, или их производное. Обычно антитело представляет собой IgA, IgD, IgG, IgE или IgM - антитело может быть как моноклональным, так и поликлональным. Фрагмент антитела обычно выбран из Fab-фрагмента, Fab' фрагмента, Fab'-SH фрагмента,F(ab)2 фрагмента, F(ab')2 фрагмента, Fv фрагмента, тяжелой цепи Ig (Ig ламы или верблюда), VHH фрагмента, однодоменного FV и одноцепочечного фрагмента антитела, и аналог антитела обычно выбран изscFV, dsFV, мини-тела, диатела, триатела, каппа-тела, IgNAR, tandAb, BiTE и мультиспецифичного антитела. В одном варианте осуществления первого аспекта изобретения средство связывается и стабилизирует связь между одним или более аминокислотными остатками в аминокислотной цепиTZ1AKRRWZ2REKR, где Z1 представляет собой K, R или Е, и где Z2 представляет собой Q или Е, и одним или более аминокислотными остатками в аминокислотной цепи в трансмембранном домене gp41 и/или в константном домене С 2 gp120. Этот аминокислотный участок из С 5 является крайне консервативной среди известных множественных клад ВИЧ, и эффективное взаимодействие средства с этой цепью, следовательно, как считается, является весьма выгодным. 2-й и 3-й аспекты. 2-й аспект изобретения относится к способу снижения риска или к снижению и/или задержке патологических эффектов вируса I иммунодефицита человека (ВИЧ) у человека, инфицированного ВИЧ,причем способ включает введение эффективного количества иммуногена, который индуцирует антитела,стабилизирующие связь домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120, тогда как 3-й аспект относится к способу профилактики с использованием тех же способов. Другими словами 2-й аспект относится к активной терапевтической иммунотерапии, тогда как 3-й аспект относится к профилактической иммунотерапии заболевания ВИЧ, включая СПИД. Он также охватывает профилактику ВИЧ инфекции. Эти конкретные аспекты основаны на понимании того, что у среднего индивидуума, инфицированного ВИЧ, реально индуцировать тот же репертуар антител, что и найденный у инфицированных ВИЧ индивидуумов с LTNP. С помощью внимательного отбора областей пептидов как в С 5, так и в tm-gp41 и/или С 2, для получения сочетаний пептидов, которые имитируют представленные в ВИЧ эпитопы, состоящие из этих областей и связывающиеся с антителом, становится возможным получать вакцины, которые могут индуцировать желаемый иммунитет, - интересно, что этот подход не направлен на вакцинацию для того, чтобы получить нейтрализующие антитела в классическом смысле. В одном варианте осуществления иммуноген выбран из сочетания пептидов, подробно описанного ниже при обсуждении пятого аспекта изобретения, композиции, подробно описанной ниже в шестом аспекте, фрагмента нуклеиновой кислоты, обсуждаемого в связи с седьмым аспектом, вирусного или плазмидного вектора, обсуждаемых в восьмом аспекте, или плазмиды или вируса, обсуждаемых в девятом аспекте. В целом содержание аспектов 1-4 заключается в том, что все они включают варианты осуществления, в которых целевая связь между доменом С 5 и С 2 и/или трансмембранным доменом gp41 включает в себя по меньшей мере одну аминокислоту в последовательности TZ1AKRRVVZ2REKR, где Z1 представляет собой K, R или Е, и где Z2 представляет собой Q или Е, и включает в себя по меньшей мере одну аминокислоту в трансмембранном домене gp41 или по меньшей мере одну аминокислоту в константном домене С 2 gp120. Как объяснялось выше, эта конкретная последовательность является предельно высоко консервативной между известными кладами ВИЧ и, следовательно, именно область взаимодействия между этой последовательностью и tm-gp41 или С 2 является наиболее подходящей мишенью. 5-й аспект. 5-й аспект относится к сочетанию пептидов, причем указанное сочетание включает первый пептид,включающий аминокислотную последовательность из 13 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности домена С 5 gp120 ВИЧ, включая от 0 до 4 аминокислотных замен, ее подпоследовательность или аминокислотную последовательность, включающую инвертированную, ретро- или ретроинвертированную форму указанной аминокислотной последовательности или подпоследовательности, и по меньшей мере один второй пептид, включающий аминокислотный участок, присутствующий в трансмембранном домене gp41 или присутствующую в константном домене С 2 gp120, или включающий аминокислотный участок, присутствующий в любой из SEQ ID NO: 6-13, или включающий инвертированную, ретро- или ретроинвертированную форму аминокислотного участка, присутствующего в трансмембранном домене gp41 или присутствующей в константном домене С 2 gp120, где указанное сочетание пептидов способно индуцировать образование антитела, которое может связываться и стабилизировать связь домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120,и где в указанном сочетании пептидов отсутствуют аминокислоты N-конца С 5 в gp120. Другими словами 5-й аспект относится к сочетаниям пептидов, которые в трехмерном измерении обладают сходством с эпитопами, которые характеризуют области взаимодействия в С 5 с одной стороны и tm-gp41 и/или С 2 с другой. Эти пептидные сочетания являются по изобретению полезными иммуногенами, которые могут индуцировать антитела, обладающие теми же характеристиками, что и антитела,найденные у индивидуумов, инфицированных ВИЧ, с LTNP, но пептидные сочетания являются также многообещающими в качестве диагностических/прогностических средств. Включение ретро-, инвертированных и ретроинвертированных пептидов i.a. дает возможность продуцировать протеолитически стабильные пептиды, а также пептиды, которые являются действительно чужеродными по сравнению с их аналогами в ВИЧ. В одном варианте осуществления сочетания пептидов указанный первый пептид включает аминокислотную последовательность, имеющую формулу (I) где X1 представляет собой Thr;X13 выбран из Arg, Har и Cit,или включает подпоследовательность аминокислотной последовательности формулы (I), или включает инвертированную, ретро- или ретроинвертированную форму указанной аминокислотной последовательности или подпоследовательности. Первый пептид может дополнительно включать дипептид AlaPro, связанный с N-концом аминокислотной последовательности, имеющей формулу (I), и/или первый пептид может дополнительно включать дипептид X14, X15, связанный с С-концом аминокислотной последовательности, имеющей формулу (I), где X14 выбран из Ala и Val, и где X15 выбран из Val, Leu и Nle. Особенно интересные пептиды, происходящие от С 5, представлены во введении к примерам, и в составляющих вариантах осуществления первого пептида в сочетаниях пептидов по изобретению. Выявлен ряд природных мутантов gp41 и gp120, так что, когда утверждается, что второй пептид включает аминокислотный участок, присутствующий в трансмембранном домене gp41 или присутствующий в константном домене С 2 gp120, это предназначено для обозначения присутствия аминокислотной цепи в любой такой природной форме. Таким образом, по меньшей мере, второй пептид, когда он происходит от gp41, в определенных вариантах осуществления представляет собой пептид, который включает аминокислотную последовательность, имеющую формулу где Z1 представляет собой Asp;Z17 представляет собой Arg,или включает подпоследовательность формулы (III), такую как подпоследовательность, имеющая по меньшей мере 5 аминокислотных остатков (например, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 и по меньшей мере 16 аминокислотных остатков). Далее, этот вариант осуществления второго пептида может содержать аминокислотные замены,которые приводят к последовательности по меньшей мере с 80% идентичностью с соответствующей аминокислотной последовательностью, найденной в gp41. Особенно интересные пептиды, происходящие от С 20 и gp41, представлены во введении к примерам, и в составляющих вариантах осуществления второго пептида в сочетаниях пептидов по изобретению. В определенных вариантах осуществления сочетания пептидов первый пептид и по меньшей мере один второй пептид связаны через линкер; линкер может представлять собой любой пептидный линкер,такой как глициновый, лизиновый или аргининовый линкер, полигистидиниловая метка, протеин G и протеин А, но также возможно использование бис-малеимидного линкера, дисульфидного линкера или полиэтиленгликольного (ПЭГ) линкера. На практике в качестве линкера по настоящему изобретению подходит также любой линкер, признанный пригодным в пептидной химии. Таким образом, изобретение охватывает применение "простых" линейных пептидов, которые конъюгированы или соединены друг с другом, но также и сочетания пептидов, в которых индивидуальные пептиды, происходящие от С 5 и других областей gp120 или gp41, соединены через непептидные линкеры, например комплементарные нуклеиновые кислоты, производные нуклеиновых кислот или аналоги, например PNA, LNA. Использование множественных типов линкеров также входит в объем настоящего изобретения, и частью изобретения является также, например, использование линейных пептидов, которые включают дисульфидные линкеры внутри цепи. Особенно интересные сочетания пептидов по изобретению представлены во введении к примерам. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один из первого и по меньшей мере один из второго пептидов в сочетании пептидов включает N- или С-концевую модификацию, такую как амидирование, ацилирование или ацетилирование. Так как сочетания пептидов охватываются в качестве средств вакцин или диагностических средств,они в определенных вариантах осуществления соединены с молекулой носителя, такой как иммуногенный носитель. Пептиды в сочетаниях пептидов, таким образом, могут быть соединены с другими молекулами либо в виде рекомбинантных гибридов (например, путем метода CLIP), либо через химические связи в ориентированной (например, с использованием гетеробифункциональных кросслинкеров) или неориентированной форме. Все варианты соединения с молекулами носителя, такими как, например,дифтерийный токсин, латексные шарики (пригодные для диагностических и прогностических вариантов осуществления), полилизиновые конструкции и т.д., возможны по изобретению. Иммуногенный носитель удобно выбирать из белков-носителей, таких как белки, традиционно используемые в данной области техники (например, дифтерийный токсоид или токсоид столбняка, KLH и т.д.), но также можно использовать более короткие пептиды (эпитопы Т-хелперов), которые могут индуцировать Т-клеточный иммунитет у более многочисленной части населения. Подробные сведения о таких Т-хелперных эпитопах могут быть найдены, например, в патенте WO 00/20027, который включен в настоящее описание в качестве ссылки, - все обсуждаемые в нем иммуногенные носители и "смешанные"(т.е. универсальные) Т-хелперные эпитопы пригодны в качестве иммуногенных носителей в настоящем изобретении. В определенных вариантах осуществления носитель представляет собой вирусоподобную частицу,т.е. частицу, проявляющую свойства вирионов, не будучи инфекционной. Такие вирусоподобные частицы могут быть получены химически (например, Jennings and Bachmann Ann Rev Pharmacol. Toxicol. 2009. 49:303-26 Immunodrugs: Therapeutic VLP-based vaccines for chronic diseases) или с использованием способов клонирования для создания слитых пептидов (например, Peabody et al. J. Mol. Biol. 2008; 380: 252-63.Immunogenic display of diverse peptides on virus-like particles of RNA phage MS2). Другим примером является "Remune", вакцина против ВИЧ, исходно созданная Immune Response Corporation, которая состоит из инактивированного формалином ВИЧ, который был облучен для разрушения вирусного генома. Компания была начата Jonas Salk, который использовал тот же самый способ для создания убитой вакцины против полиомиелита, широко распространенной в настоящее время. Однако при фиксации ВИЧ gp120 уничтожается и исчезает, на поверхности вириона остается только gp41. Это открывает возможность для прямого смешивания пептидов, происходящих от С 5, раскрытых в настоящем описании, с частицамиRemune, так как все еще может быть возможным достижение связывания между С 5 и gp41 на частицеRemune. Варианты осуществления пятого аспекта также включают варианты, в которых первый пептид выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 и 5, или из их фрагмента, или из инвертированной,ретро- или ретроинвертированной формы пептидов, выбранных из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 и 5, или из их фрагмента, и в которых второй пептид выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13 или 46, или из их фрагмента, или из инвертированной, ретро- или ретроинвертированной формы пептидов, выбранных из SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 46, или из их фрагмента. Как указывалось выше, в таком случае фрагмент может быть очень коротким, до тех пор, пока сочетание пептидов обеспечивает способность индуцировать антитела, которые могут стабилизировать связь между С 5 и gp41 и/или С 2. Ряд интересных сочетаний пептидов по настоящему изобретению перечислен во введении к примерам. В одном варианте осуществления сочетание пептидов по изобретению включает не более 70 аминокислот, например, не более 69, не более 68, не более 67, не более 66, не более 65, не более 64, не более 63, не более 62, не более 61, не более 60, не более 59, не более 58, не более 57, не более 56, не более 55,не более 54, не более 53, не более 52, не более 51, не более 50, не более 49, не более 48, не более 47, не более 46, не более 45, не более 44, не более 43, не более 42, не более 41, не более 40, не более 39, не более 38, не более 37, не более 36, не более 35, не более, 34, не более 33, не более 32, не более 31, не более 30, не более 29, не более 28, не более 27, не более 26, не более 25, не более 24, не более 23, не более 22,не более 21, не более 20, не более 19, не более 18, не более 17, не более 16, не более 15, не более 14, не более 13, не более 12, не более 11, не более 10, не более 9, не более 8 и не более 7 аминокислот. В одном варианте осуществления сочетание пептидов по изобретению включает по меньшей мере 6 аминокислотных остатков, например по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14,по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26, по меньшей мере 27, по меньшей мере 28, по меньшей мере 29, по меньшей мере 30, по меньшей мере 31, по меньшей мере 32, по меньшей мере 33, по меньшей мере 34, по меньшей мере 35, по меньшей мере 36, по меньшей мере 37, по меньшей мере 38, по меньшей мере 39, по меньшей мере 40, по меньшей мере 41, по меньшей мере 42, по меньшей мере 43,по меньшей мере 44, по меньшей мере 45, по меньшей мере 46, по меньшей мере 47, по меньшей мере 48, по меньшей мере 49, по меньшей мере 50, по меньшей мере 51, по меньшей мере 52, по меньшей мере 53, по меньшей мере 54, по меньшей мере 55, по меньшей мере 56, по меньшей мере 57, по меньшей мере 58, по меньшей мере 59, по меньшей мере 60, по меньшей мере 61, по меньшей мере 62, по меньшей мере 63, по меньшей мере 64, по меньшей мере 65, по меньшей мере 66, по меньшей мере 67, по меньшей мере 68 и по меньшей мере 69 аминокислотных остатков. В одном варианте осуществления сочетание пептидов по изобретению состоит из 6 аминокислотных остатков, или 7 аминокислотных остатков, или 8 аминокислотных остатков, или 9 аминокислотных остатков, или 10 аминокислотных остатков, или 11 аминокислотных остатков, или 12 аминокислотных остатков, или 13 аминокислотных остатков, или 14 аминокислотных остатков, или 15 аминокислотных остатков, или 16 аминокислотных остатков, или 17 аминокислотных остатков, или 18 аминокислотных остатков, или 19 аминокислотных остатков, или 20 аминокислотных остатков, или 21 аминокислотных остатков, или 22 аминокислотных остатков, или 23 аминокислотных остатков, или 24 аминокислотных остатков, или 25 аминокислотных остатков, или 26 аминокислотных остатков, или 27 аминокислотных остатков, или 28 аминокислотных остатков, или 29 аминокислотных остатков, или 30 аминокислотных остатков, или 31 аминокислотных остатков, или 32 аминокислотных остатков, или 33 аминокислотных остатков, или 34 аминокислотных остатков, или 35 аминокислотных остатков, или 36 аминокислотных остатков, или 37 аминокислотных остатков, или 38 аминокислотных остатков, или 39 аминокислотных остатков, или 40 аминокислотных остатков, или 41 аминокислотных остатков, или 42 аминокислотных остатков, или 43 аминокислотных остатков, или 44 аминокислотных остатков, или 45 аминокислотных остатков, или 46 аминокислотных остатков, или 47 аминокислотных остатков, или 48 аминокислотных остатков, или 49 аминокислотных остатков, или 50 аминокислотных остатков, или 51 аминокислотных остатков, или 52 аминокислотных остатков, или 53 аминокислотных остатков, или 54 аминокислотных остатков, или 55 аминокислотных остатков, или 56 аминокислотных остатков, или 57 аминокислотных остатков, или 58 аминокислотных остатков, или 59 аминокислотных остатков, или 60 аминокислотных остатков, или 61 аминокислотных остатков, или 62 аминокислотных остатков, или 63 аминокислотных остатков, или 64 аминокислотных остатков, или 65 аминокислотных остатков, или 66 аминокислотных остатков, или 67 аминокислотных остатков, или 68 аминокислотных остатков, или 69 аминокислотных остатков, или 70 аминокислотных остатков. 6-й аспект изобретения. Этот аспект относится к иммуногенной композиции (такой как композиция вакцины), включающей сочетание пептидов, описанное в 5-ом аспекте, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем и необязательно с иммунологическим адъювантом. Получение иммуногенных композиций включает использование современных на данном уровне техники составляющих, таких как иммунологические адъюванты. Не считая этих адъювантов, которые подробно описаны ниже, иммуногенные композиции получают, как обычно указывается в данной области техники: Получение вакцин, которые в качестве активных ингредиентов содержат пептидные последовательности, обычно хорошо известно в данной области техники, что иллюстрируется патентами США 4608251; 4601903; 4599231; 4599230; 4596792 и 4578770, которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Обычно такие вакцины получают как вводимый препарат в виде либо жидких растворов, либо суспензий; в виде твердых форм, подходящих для растворения в растворе, или суспендирования в нем, жидкость может быть также получена перед введением. Препарат может быть также эмульгирован. Активный иммуногенный ингредиент часто смешивают с наполнителями, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом. Подходящие наполнители представляют собой, например, воду, физиологический раствор, декстрозу, глицерин, этанол или т.п. и их сочетания. Кроме того, если это желательно, вакцина может содержать минорные количества вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие средства, средства, забуферивающие рН, или адъюванты, которые повышают эффективность вакцин; подробное обсуждение адъювантов см. ниже. Вакцины обычно вводят парентерально с помощью инъекции, например, либо подкожно, внутрикожно, внутридермально, субдермально, либо внутримышечно. Дополнительные составы, которые подходят для других способов введения, включают суппозитории и в некоторых случаях пероральные, защечные, подъязычные, внутрибрюшинные, внутривагинальные, анальные, эпидуральные, спинальные и внутричерепные составы. Традиционные связующие средства и носители для суппозиториев могут включать, например, полиалкаленгликоли или триглицериды; такие суппозитории могут быть составлены из смесей, содержащих активный ингредиент в диапазоне от 0,5 до 10%, предпочтительно 1-2%. Пероральные составы включают такие обычно применяемые наполнители как, например, манит фармацевтического качества, лактозу, крахмал, стеарат магния, натриевую соль сахарина, целлюлозу, карбонат магния и т.п. Эти композиции имеют форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, составов с поддерживаемым высвобождением или порошков и содержат 10-95% активного ингредиента, предпочтительно 25-70%. Пептиды и сочетания пептидов могут быть составлены в вакцину в виде нейтральных или солевых форм. Фармацевтически приемлемые соли включают аддитивные соли кислоты (образуемые со свободными аминогруппами пептида) и соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как, например, хлористо-водородная или фосфорная кислоты, или с такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и т.п. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, могут также происходить от неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия,калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и т.п. Вакцины вводят способом, совместимым с лекарственной формой, и в таком количестве, которое должно быть терапевтически эффективным и иммуногенным. Количество, предназначенное для введения, зависит от индивидуума, подвергаемого лечению, включая, например, способность иммунной системы индивидуума вызывать иммунный ответ и степень желаемого иммунитета. Дозы порядка нескольких сотен микрограмм активного ингредиента на вакцинацию составляют подходящие диапазоны доз с предпочтительным диапазоном от приблизительно 0,1 до 2000 мкг (охватываются даже более высокие количества в диапазоне 1-10 мг), такие как от приблизительно 0,5 до 1000 мкг, предпочтительно в диапазоне от 1 до 500 мкг и особенно в диапазоне от приблизительно 10 до 100 мкг. Подходящие схемы для первоначального введения и бустерных иммунизации также варьируются, но в типичном варианте представляют собой первоначальное введение, за которым следуют последующие инокуляции или другие введения. Некоторые из пептидов и сочетаний пептидов являются в вакцине достаточно иммуногенными, но для некоторых других иммунный ответ может быть повышен, если вакцина дополнительно включает адъювантное вещество. Иммуногенные молекулы, описанные в настоящем документе, могут быть, следовательно, составлены с адъювантами. Адъюванты, предназначенные для объединения, известны как индуцирующие гуморальные ответы и включают: i) суспензии солей (например, разнообразных солей, содержащих ионы алюминия или ионы кальция), ii) эмульсии масла в воде (например, разнообразные эмульсии на основе сквалана или на основе сквалена), iii) эмульсии воды в масле (например, Montanide ISA51 или ISA720), iv) нейтральные липосомы, v) катионные липосомы, vi) микросферы, vii) иммуностимулирующие комплексы (например, ISCOMs или ISCOMATRIX), viii) агонисты рецепторов, узнающих паттерн (например, агонисты рецепторов лектина типа С (CLRs), NOD-подобных рецепторов (NLRs), RIG-подобных геликаз (RLHs), триггерных рецепторов, экспрессируемых на миелоидных клетках (TREMs), и Toll-подобных рецепторов(TLRs, ix) сапонины (т.е. любой сапонин, происходящий из Quillaja saponaria или Platycodon grandiflorum), x) виросомы/вирусоподобные частицы (например), xi) энтеротоксины (т.е. холерный токсин, CTA1DD или термолабильный энтеротоксин Esherichia coli) и их сочетания. Таким образом, известны различные методы достижения адъювантного эффекта. Общие принципы и методы подробно описаны в "The Theory and Practical Application of Adjuvants", 1995, Duncan E.S. Stewart-Tull (ed.), John WileySons Ltd, ISBN 0-471-95170-6, и также в "Vaccines: New Generation Immunological Adjuvants", 1995, Gregoriadis G. et al. (eds.), Plenum Press, New York, ISBN 0-306-45283-9, обе из которых включены в настоящее описание в качестве ссылки, но в ряде более поздних публикаций также рассматривается метод включения адъювантов: Roestenberg M. et al., PLoS One. 2008; 3(12):e3960. Epub 2008 Dec 18; Relyveld E. and Chermann J.C., Biomed Pharmacother. 1994; 48 (2):79-83; Hsu F.J. et al., Blood. 1997 May 1; 89(9): 3129-35; Galli G. et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2009 May 12; 106(19): 7962-7. Epub 2009 Apr 27; Bojang K.A. et al., Lancet. 2001 Dec 8; 358 (9297): 1927-34; Odunsi K. et al., Proc Natl Acad SciTarget. 2008 May; 16(4): 282-93; Florindo H.F. et al., Vaccine. 2008 Aug 5; 26 (33): 4168-77. Epub 2008 Jun 17; Sun H.X. et al., Vaccine. 2009 May 28; Guy B., Nat Rev Microbiol. 2007 Jul; 5(7):505-17. Review.; Vandepapeliere P. et al., Vaccine. 2008 Mar 4; 26 (10): 1375-86. Epub 2008 Jan 14; Ghochikyan A. et al. Vaccine. 2006 Mar 20; 24(13):2275-82. Epub 2005 Dec 5; Xie Y. et al., Vaccine. 2008 Jun 25; 26 (27-28): 3452-60. Epub 2008 May 1; Chung Y.C. et al., Vaccine. 2008 Mar 28; 26(15):1855-62. Epub 2008 Feb 25; Maier M. et al.,Vaccine. 2005 Oct 25; 23(44):5149-59; Sundling С. et al., J. Gen Virol. 2008 Dec; 89(Pt 12):2954-64. 7-й аспект изобретения. Данный аспект относится к фрагменту нуклеиновой кислоты, кодирующему подгруппу сочетаний пептидов по изобретению, а именно тех, которые могут быть экспрессированы в виде единого экспрессионного продукта или 2 или более экспрессионных продуктов (которые могут соединяться), про- или эукариотной клеткой. Таким образом, согласно данному аспекту предлагается фрагмент нуклеиновой кислоты, кодирующий сочетание пептидов, причем указанное сочетание пептидов включает первый пептид, как подробно описано выше, при том условии, что аминокислотные остатки в указанном первом пептиде представляют собой L-формы, выбранные из группы, состоящей из Ala, Cys, Asp,Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp и Tyr, и по меньшей мере один второй пептид, как обсуждалось выше, при том условии, что аминокислотные остатки в указанном втором пептиде представляют собой L-формы,где указанное сочетание пептидов способно индуцировать антитело, которое может связывать и стабилизировать связь домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или с константным доменом С 2 gp120, и где указанное сочетание пептидов не содержит аминокислотные остатки, присоединенные к N-концу домена С 5 gp120. В варианте осуществления данный фрагмент нуклеиновой кислоты представляет собой такой фрагмент, в котором кодируемый первый пептид и кодируемый, по меньшей мере, второй пептид связаны посредством пептидного линкера и/или дисульфидного мостика. Пептидный линкер обычно выбирают из группы, состоящей из глицинового линкера, лизинового линкера, глицин-лизинового линкера и Argлинкера, но может быть пригоден любой пептидный линкер, известный в данной области техники. Термин "пептидный линкер", таким образом, предназначен также для обозначения связи между первым и вторым пептидом посредством пептидной связи. Кроме того, первый и второй пептиды могут быть соединены посредством пептидного линкера и дисульфидной связи, как это имеет место при образовании внутрицепочечной дисульфидной связи. В одном варианте осуществления фрагмент нуклеиновой кислоты кодирует сочетание пептидов,которое соединено (путем слияния) с молекулой носителя, такого как иммуногенный носитель; пригодные носители обсуждаются выше. В одном варианте осуществления фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению кодирует пептид,который выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 28, 30, 38, 41 и 44, или его фрагмент, и кодирует второй пептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 29, 31,33, 37, 39, 40, 42, 43, 45 и 46, или его фрагмент. В варианте осуществления фрагмент нуклеиновой кислоты кодирует сочетание пептидов, которое включает не более 70 аминокислот. В варианте осуществления фрагмент нуклеиновой кислоты кодирует сочетание пептидов, которое включает по меньшей мере 6 аминокислотных остатков. Еще в одном варианте осуществления фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению кодирует сочетание пептидов, которое состоит из количества аминокислотных остатков, выбранного из группы, состоящей из 6, 7, 8, 9,- 15022788 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39,40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70 аминокислотных остатков. 8-й аспект. Изобретение также относится к вектору, включающему фрагмент нуклеиновой кислоты по 7-му аспекту изобретения. Термин "вектор" в данном контексте понимается как средство, которое способно переносить генетическую информацию и способно доставлять эту генетическую информацию в клетку. Типичные векторы выбирают из группы, состоящей из плазмиды, вируса, фага, космиды и минихромосомы. Векторы могут находиться в форме векторов для клонирования (т.е. векторов, используемых для переноса генетической информации в клетки, которые могут быть размножены и отобраны по наличию или отсутствию генетической информации) и экспрессионных векторов (т.е. векторов, которые включают необходимые генетические элементы, обеспечивающие экспрессию генетической информации вектора в клетке). Поэтому векторы для клонирования обычно должны включать маркер селекции, а также ориджин репликации, соответствующий типу клеток, для которых предназначен вектор для клонирования, тогда как экспрессионные векторы включают регуляторные элементы, необходимые для осуществления экспрессии в предназначенной для этого клетке-мишени. Таким образом, фрагменты нуклеиновой кислоты по изобретению обычно должны быть вставлены в подходящие векторы с образованием клонирующих или экспрессионных векторов, несущих фрагменты нуклеиновой кислоты по изобретению; такие новые векторы также являются частью изобретения. Подробности, касающиеся конструирования этих векторов по изобретению, будут обсуждены ниже в контексте трансформированных клеток и микроорганизмов. В зависимости от цели и типа применения векторы могут находиться в форме плазмид, фагов, космид, мини-хромосом или вирусов, но важным вектором является также голая ДНК, которая экспрессируется лишь временно в определенных клетках. Предпочтительные клонирующие и экспрессионные векторы по изобретению способны к автономной репликации, обеспечивая тем самым большое количество копий для целей экспрессии на высоком уровне или репликации на высоком уровне для последующего клонирования. Общий план экспрессионного вектора по изобретению включает следующие особенности в направлении 5'3' и в функциональных связях: промотор для управления экспрессией фрагмента нуклеиновой кислоты по изобретению, необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сигнальный пептид, обеспечивающий секрецию (во внеклеточную фазу или, когда это применимо, в периплазму) или интегрирование в мембрану пептидного продукта экспрессии, фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению и необязательно последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая терминатор. При работе с экспрессионными векторами в штаммах-продуцентах или клеточных линиях с целью обеспечения генетической стабильности трансформированной клетки предпочтительно, чтобы вектор, введенный в клетку-хозяин, был интегрирован в геном клетки-хозяина. И наоборот, при работе с векторами,предназначенными для использования для экспрессии in vivo у животного (т.е. при использовании вектора в вакцинации ДНК) из соображений безопасности предпочтительно, чтобы вектор был неспособен интегрироваться в геном клетки-хозяина; обычно используют голую ДНК или неинтегрирующиеся вирусные векторы, выбор которых хорошо известен специалисту в данной области техники. Экспрессионные векторы по изобретению используют для трансформации клеток-хозяев для получения сочетаний пептидов по изобретению. Такие трансформированные клетки, которые также представляют собой часть изобретения, могут быть культивируемыми клетками или клеточными линиями,используемыми для размножения фрагментов нуклеиновой кислоты и векторов по изобретению или используемыми для рекомбинантной продукции сочетаний пептидов по изобретению. Альтернативно,трансформированные клетки могут быть подходящими штаммами живой вакцины, в которые фрагмент нуклеиновой кислоты (в виде одной или множества копий) был введен таким образом, чтобы вызывать секрецию или интегрирование сочетания пептидов в бактериальную мембрану или клеточную стенку. Предпочтительными трансформированными клетками по изобретению являются микроорганизмы,такие как бактерии (такие как виды Escherichia [например, E.coli], Bacillus [например, Bacillus subtilis],Salmonella или Mycobacterium [предпочтительно непатогенные, например, М. bovis BCG]), дрожжи (такие как Saccharomyces cerevisiae) и простейшие. Альтернативно, трансформированные клетки происходят из многоклеточного организма, такие как клетки гриба, клетки насекомого, клетки растения или клетки млекопитающего. Наиболее предпочтительными являются клетки, происходящие из организма человека, см. обсуждение линий клеток и векторов ниже. Для целей клонирования и/или оптимизированной экспрессии предпочтительно, чтобы трансформированная клетка была способна реплицировать фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению. Клетки, экспрессирующие фрагмент нуклеиновой кислоты, используются в предпочтительных вариантах осуществления; их можно использовать для получения сочетаний пептидов по изобретению в малом или большом масштабе или, в случае непатогенных бактерий, в качестве компонентов живой вакцины. При рекомбинантном получении сочетаний пептидов по изобретению с использованием трансформированных клеток удобно, но совершенно не обязательно, чтобы продукт экспрессии либо экспортиро- 16022788 вался в культуральную среду, либо переносился на поверхность трансформированной клетки. После выявления эффективной продуцирующей клетки предпочтительно на ее основе получить стабильную клеточную линию, которая несет вектор по изобретению и которая экспрессирует фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению. Предпочтительно, чтобы эта стабильная клеточная линия секретировала или переносила пептидный продукт экспрессии, тем самым облегчая его очистку. В целом в связке с хозяином используют плазмидные векторы, содержащие репликон и контролирующие последовательности, которые берут начало от видов, совместимых с клеткой-хозяином. Обычно вектор несет сайт репликации, а также маркировочные последовательности, которые способны обеспечить фенотипическую селекцию трансформированных клеток. Например, Е. coli обычно трансформируют плазмидой pBR322, берущей начало из вида Е. coli (см., например, Bolivar et al., 1977). ПлазмидаpBR322 содержит гены резистентности к ампициллину и тетрациклину и тем самым обеспечивает простой способ идентификации трансформированных клеток. Плазмида pBR или другая микробная плазмида или фаг должна также содержать или быть модифицирована для того, чтобы содержать промоторы,которые могут быть использованы прокариотным микроорганизмом для экспрессии. Промоторы, наиболее часто используемые в конструкциях рекомбинантной ДНК, включают промоторные системы -лактамазы (пенициллиназы) и лактозы (Chang et al., 1978; Itakura et al., 1977; Goeddelet al., 1979) и промоторную систему триптофана (trp) (Goeddel et al., 1979; EP-A-0036776). Хотя чаще всего используются эти промоторы, были открыты и использованы и другие микробные промоторы, и были опубликованы подробности, касающиеся их нуклеотидных последовательностей. Кроме прокариотных могут быть использованы эукариотные микробы, такие как культуры дрожжей, но и в этом случае промотор должен быть способен управлять экспрессией. Из эукариотных микроорганизмов чаще всего используют Saccharomyces cerevisiase, или обычные пекарские дрожжи, хотя широко доступен и ряд других штаммов. Для экспрессии в Saccharomyces обычно используют, например,плазмиду YRp7 (Stinchcomb et al., 1979; Kingsman et al., 1979; Tschemper et al., 1980). Подходящие промоторные последовательности в дрожжевых векторах включают промоторы 3 фосфоглицераткиназы (Hitzman et al., 1980) или других гликолитических ферментов (Hess et al., 1968;Holland et al., 1978), таких как енолаза, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, гексокиназа, пируватдекарбоксилаза, фосфофруктокиназа, глюкозо-6-фосфатизомераза, 3-фосфоглицератмутаза, пируваткиназа,триозофосфатизомераза, фосфоглюкозоизомераза и глюкокиназа. При конструировании подходящих экспрессионных плазмид в экспрессионный вектор включают также последовательности терминации,связанные с этими генами, с 3'-конца предназначенной для экспрессии последовательности, для обеспечения полиаденилирования мРНК и терминации. Другими промоторами, которые обладают дополнительным преимуществом контроля транскрипции со стороны условий выращивания, являются промоторные области алкогольдегидрогеназы 2, изоцитохрома С, кислой фосфатазы, подверженных деградации ферментов, связанных с азотистым обменом, и ферментов, ответственных за утилизацию мальтозы и галактозы. Пригоден любой плазмидный вектор,содержащий совместимый с дрожжами промотор, ориджин репликации и последовательности терминации. В дополнение к микроорганизмам в качестве хозяев могут быть также использованы культуры клеток из многоклеточных организмов. В принципе любая такая клеточная культура работоспособна, будь то культура из позвоночных или беспозвоночных. Примерами таких пригодных линий клеток-хозяев являются клетки VERO и HeLa, клеточные линии яичника китайского хомячка (СНО) и клетки W138,ВНК, COS-7 293, клетки Spodoptera frugiperda (SF), клеточные линии Drosophila melanogaster (такие какSchneider 2 (S2 и клеточные линии MDCK. Экспрессионные векторы для таких клеток обычно включают (при необходимости) ориджин репликации, промотор, расположенный перед подлежащим экспрессии геном, наряду с любыми необходимыми сайтами связывания с рибосомами, сайтами сплайсинга РНК, сайтом полиаденилирования и последовательностями терминации транскрипции. Для использования в клетках млекопитающих функции контроля за экспрессионными векторами часто обеспечиваются вирусным материалом. Например, часто используемые промоторы происходят из полиомы, аденовируса 2 и чаще всего из обезьяньего вируса 40 (SV40). Особенно пригодны ранний и поздний промоторы вируса SV40, поскольку оба легко получить из вируса в виде фрагмента, который также содержит ориджин репликации вируса SV40 (Fiers et al., 1978). Могут быть также использованы меньшие или большие фрагменты SV40 при том условии, что они включают последовательность из приблизительно 250 п.н., расположенную начиная от сайта HindIII в направлении сайта Bg/I, локализованного в вирусном ориджине репликации. Кроме того, также возможно, и часто желательно, использование промоторных или контролирующих последовательностей, в обычных условиях связанных с последовательностью целевого гена, при том условии, что контролирующие последовательности совместимы с системами клетки-хозяина. Ориджин репликации может быть обеспечен либо путем конструирования вектора, включающего экзогенный ориджин, такой как тот, который может быть получен из SV40 или другого вируса (например, других полиомных вирусов, аденовирусов, VSV, BPV), либо он может быть обеспечен механизмом репликации хромосом клетки-хозяина. Если вектор интегрируется в хромосому клетки-хозяина, последний путь часто является достаточным. 9-й аспект. Как обсуждалось выше, фрагмент нуклеиновой кислоты или вектор по изобретению может быть сам по себе пригоден в качестве иммунизирующего средства (например, средства вакцины), т.е. в форме иммуногенной композиции, включающей фрагмент нуклеиновой кислоты или вектор по настоящему изобретению в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем и необязательно иммунологическим адъювантом. Как альтернатива классическому введению вакцины на основе пептидов методология вакцинации нуклеиновой кислотой (также известная как "иммунизация нуклеиновой кислотой", "генетическая иммунизация" и "генная иммунизация") предоставляет ряд привлекательных особенностей. Во-первых, в отличие от традиционного подхода к вакцине, для вакцинации нуклеиновой кислотой не требуется затратное широкомасштабное получение иммуногенного средства (например, в форме ферментации микроорганизмов в промышленном масштабе или синтеза пептида в большом масштабе). Кроме того, нет необходимости в разработке схем очистки и повторной укладки иммуногена. И, наконец,поскольку вакцинация нуклеиновой кислотой опирается на биохимический аппарат вакцинируемого индивидуума для получения продукта экспрессии вводимой нуклеиновой кислоты, ожидается, что будет иметь место оптимальный посттрансляционный процессинг продукта экспрессии. В данном варианте осуществления вводимая нуклеиновая кислота предпочтительно представляет собой ДНК, которая может находиться в форме голой ДНК, ДНК, составленной с заряженными или незаряженными липидами, ДНК, составленной с липосомами, ДНК, включенной в вирусный вектор, ДНК,составленной с облегчающим трансфекцию белком или полипептидом, ДНК, составленной с направляющим белком или полипептидом, ДНК, составленной с осаждающими кальций средствами, ДНК, соединенной с молекулой инертного носителя, ДНК, заключенной в полимер, например, PLGA (см. методологию микроинкапсулирования, описанную в WO 98/31398) или в хитин или хитозан, и ДНК, составленной с адъювантом. В этом контексте следует отметить, что практически все суждения, относящиеся к использованию адъювантов в традиционном составе вакцины, применимы к составу вакцин ДНК. Таким образом, все раскрытия настоящего описания, которые относятся к использованию адъювантов в контексте вакцин на основе полипептидов, применимы после внесения необходимых изменений к их использованию в методологии вакцинации нуклеиновой кислотой. Что касается путей введения и схем введения, то эти пути и схемы для вакцин на основе полипептидов, которые были подробно рассмотрены выше, применимы и к вакцинам нуклеиновых кислот по изобретению, и все изложенные выше рассуждения относительно путей введения и схем введения полипептидов применимы к нуклеиновым кислотам после внесения необходимых изменений. К этому следует добавить, что вакцины нуклеиновой кислоты можно также вводить внутривенно и внутриартериально. Кроме того, в данной области техники хорошо известно, что вакцины нуклеиновой кислоты можно вводить с помощью так называемой генной пушки и/или с помощью электропорации, и поэтому эти и эквивалентные способы введения также рассматриваются в качестве части настоящего изобретения. В обычных условиях фрагмент нуклеиновой кислоты вводят в форме вектора, экспрессия которого находится под контролем вирусного промотора. Более подробное обсуждение векторов по изобретению см. в обсуждении выше. Кроме того, доступны подробные раскрытия, касающиеся составления и использования вакцин нуклеиновой кислоты, см. Donnelly J.J. et al., 1997, Annu. Rev. Immunol. 15: 617-648 иDonnelly J.J. et al., 1997, Life Sciences 60: 163-172. Обе эти ссылки включены в настоящее описание в качестве ссылки. Альтернативой использованию пептидных иммуногенов или иммуногенов нуклеиновой кислоты служит использование методологии живого иммуногена. Она включает введение непатогенного микроорганизма, который был предварительно трансформирован фрагментом нуклеиновой кислоты или вектором по настоящему изобретению. Непатогенный микроорганизм может быть любым подходящим ослабленным бактериальным штаммом (ослабленным посредством пассирования или посредством удаления патогенных продуктов экспрессии методами рекомбинантной ДНК), например Mycobacterium bovisBCG., непатогенными Streptococcus spp., E. coli, Salmonella spp., Vibrio cholerae, Shigella, и т.д. Обзоры,касающиеся получения живых вакцин на современном уровне техники, можно найти, например, в SaliouP, 1995, Rev. Prat. 45: 1492-1496 и Walker P.D., 1992, Vaccine 10: 977-990, оба из которых включены в настоящее описание в качестве ссылки. Подробности, касающиеся фрагментов нуклеиновой кислоты и векторов, используемых в таких живых вакцинах, см. в обсуждении ниже. В качестве альтернативы бактериальным живым иммуногенам фрагмент нуклеиновой кислоты по изобретению может быть включен в невирулентный вирусный вектор вакцины, такой как штамм коровьей оспы или другой подходящий поксвирус. Обычно непатогенный микроорганизм или вирус вводят индивидууму лишь один раз, но в некоторых случаях может иметься необходимость во введении микроорганизма/вируса более одного раза на протяжении жизни для поддержания защитного иммунитета. Даже предполагается, что схемы иммунизации, такие как подробно описанные выше для вакцинации полипептидами, должны быть пригодны при использовании живых или вирусных вакцин. Альтернативно, иммунизацию живой или вирусной вакциной сочетают с предшествующей или последующей иммунизацией полипептидом и/или нуклеиновой кислотой. Например, можно произвести первую иммунизацию живой или вирусной вакциной с последующими бустерными иммунизациями с использованием подхода на основе полипептида или нуклеиновой кислоты. 10-й аспект. Этот аспект относится к методу определения наличия антител, которые связываются с эпитопом,составленным из аминокислот домена С 5 gp120, а также из аминокислот трансмембранного домена gp41 и/или константного домена С 2 gp120, причем метод включает контактирование образца, потенциально включающего указанные антитела по меньшей мере с одним сочетанием пептидов по настоящему изобретению и количественное или качественное определение связывания между указанным по меньшей мере одним сочетанием пептидов и антителами в указанном образце. Метод может иметь любую удобную форму и может, например, иметь форму теста агглютинации и теста на основе поверхностного плазмонного резонанса, такого как тест Biacore. Этот аспект имеет и диагностическое, и прогностическое значение. Что касается прогноза, становится возможным отличить ВИЧ-инфицированных индивидуумов LTNP от других инфицированных ВИЧ индивидуумов, что обеспечивает знание прогноза для этих индивидуумов, а также обеспечивает предложение по руководству относительно типа лечения (если оно имеет место) этих индивидуумов, т.е. метод является средством диагностики. Кроме того, метод должен обеспечивать отслеживание эффективности лечения средствами настоящего описания, особенно теми, которые относятся к иммунизации иммуногенными средствами, которые должны индуцировать продукцию антител, взаимодействующих с комплексами между С 5 и tm-pg41 и/или С 2. К этому аспекту изобретения близок 11-й аспект, который относится к набору для выявления наличия антител, которые связываются с эпитопом, составленным из аминокислот домена С 5 gp120, а также из аминокислот трансмембранного домена gp41 и/или константного домена С 2 gp120, причем набор включает по меньшей мере одно сочетание пептидов по настоящему изобретению, приспособления для осуществления взаимодействия жидкого образца с указанным сочетанием пептидов и средства для выявления наличия положительной или отрицательной реакции связывания между антителами и указанным сочетанием пептидов. Обычные форматы таких наборов должны включать сосуды для выделения и/или хранения жидкого образца, сосуды и ресредства для осуществления контактирования сочетания пептидов с образцом и средства для установления наличия связывания между сочетаниями пептидов и составляющими образца. Для установления наличия таких антител в наборе могут использоваться, например, вторые меченые антитела против человека, где метка может представлять собой любую подходящую метку, такую как флуоресцентная или радиоактивная метка, ферментативная метка или метка связывания (такая как биотиновая метка для связывания со стрептавидином). В наборе сочетания пептидов могут быть связаны с твердой основой, или набор может, по меньшей мере, включать твердую основу, приспособленную для связывания сочетаний пептидов. 12-й аспект. Этот аспект относится к идентификации и/или выделению средств, способных стабилизировать ассоциацию домена С 5 gp120 ВИЧ с трансмембранным доменом gp41 и/или константным доменом С 2gp120 (т.е. к идентификации и/или выделению средств, пригодных для некоторых способов лечения настоящего описания), причем метод включает тестирование кандидатных средств на их способность вытеснять средство, которое, как было ранее установлено, способно стабилизировать указанное связывание, из его стабилизирующего связывания с указанным доменом С 5 и с указанным трансмембранным доменом gp41 и/или указанным доменом С 2 или из его связывания с заменителем указанного домена С 5 и указанного трансмембранного домена и/или указанного домена С 2 и выделение тех кандидатных средств, которые способны вытеснять указанное реперное средство, или тестирование кандидатных средств на их способность связываться с заменителем комплекса между доменом С 5 и трансмембранным доменом gp41 и/или доменом С 2 gp120 и выделение тех кандидатных средств, которые способны проявлять значительное связывание с указанным заменителем. Первая из этих альтернатив может быть реализована на практике в формате, сходном с конкурентным ELISA, где реперное средство может представлять собой антитело, но может и не быть им, и где измеряемым сигналом является вытеснение этого реперного средства из его связывания. Термин "заменитель" в этом контексте на самом деле обозначает вещество, которое содержит по меньшей мере один эпитоп, подобный С 5, связанному с tm-gp41 и/или С 2, где этот эпитоп проявляет сродство связывания,отличное от сродства изолированных С 2, tm-gp41 или С 2. Таким образом, заменитель может представлять собой, например, сочетание пептидов по настоящему изобретению. Также возможно использование заменителя для тестирования прямого связывания кандидатных средств в соответствии со второй указанной выше альтернативой - в этом случае заменитель должен быть проверен в отношении его способности конкурировать с комплексами С 5, разъясненными в настоящем описании, например, с антителами. Одним из возможных тестов является тест на основе по- 19022788 верхностного плазмонного резонанса, который обладает тем преимуществом, что не требует какого-либо промечивания тестируемого средства или реперного средства. Однако могут быть использованы различные хроматографические тесты на основе захвата. Другие тесты включают ЯМР и круговой дихроизм. Скрининг молекул в этих случаях основан на выявлении смещения температуры, необходимой для разделения С 5 и gp41/С 2, соединенных с небольшой молекулой, поскольку разделение может быть обнаружено обоими методами. 13-й аспект. Этот аспект относится к новым аналогам домена С 5 gp120, включающим аминокислотную последовательность формулы (II) где Y1 представляет собой Т;Y13 представляет собой Cit,или включает подпоследовательность из по меньшей мере 6 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности формулы (II), или включает инвертированную, ретро- или ретроинвертированную форму указанной аминокислотной последовательности или подпоследовательности. Ожидается, что эти аналоги будут пригодны таким же образом, что и обсуждавшиеся выше сочетания пептидов, поскольку они должны быть способны индуцировать антитела против С 5, и поэтому аналоги пригодны в композициях и для фармацевтического, и для диагностического применения. Все представленные выше раскрытия, которые относятся к использованию и составлению сочетаний пептидов по изобретению, таким образом, применимы после внесения необходимых изменений к аналогам по данному изобретению. В отличие от сочетаний пептидов по изобретению, индуцированные антитела могут быть направлены на обе области, имеющие отношение к диссоциации С 5 от gp41 или от С 2, но антитела могут быть также направлены на другие области С 5, которые непосредственно ответственны за активацию иммунитета. По сравнению с природной последовательностью С 5 формула (II) в некоторых вариантах осуществления содержит не больше 5 аминокислотных замен, например, не больше 4, не больше 3 и не больше 2 аминокислотных замен. В других вариантах осуществления последовательность включает точно 5, или точно 4, или точно 3, или точно 2, или точно 1 аминокислотную замену по сравнению с любой природной последовательностью С 5. Сочетанное лечение. Раскрытые в настоящем описании методы лечения или профилактики СПИДа можно сочетать с любой известной используемой в настоящее время схемой лечения ВИЧ-положительных индивидуумов. В особенности методы можно сочетать с предшествующим или последующим противоретровирусным лечением или терапией хемокинами. Предлагаемые в настоящем описании методы могут заменять или дополнять профилактику до экспозиции (PREP) у индивидуумов с высоким риском инфекции. Альтернативно, настоящие методы могут использоваться в сочетании с противоретровирусной терапией в качестве постэкспозиционной профилактики. Предлагаемые в настоящем описании методы могут быть также использованы в сочетании с Remune, ингибиторами циклоксигеназы и помалиномидом и другими адъювантами. Предисловие к примерам Обзор последовательностей и сокращений. С 5-последовательности:(подчеркнутые аминокислотные остатки в SEQ ID NO: 44 соединены посредством дисульфидного линкера; N-концевой W предпочтительно представляет собой D-аминокислоту, а С-концевой А может быть амидирован; пептид называется BI450-AdjBT1 при наличии этих двух модификаций). Образующие С 5-комплекс последовательности:(где аминокислота 4 может представлять собой G и/или где аминокислота 5 может представлять собой R и/или где аминокислота 13 может представлять собой Q и/или где аминокислота 14 может представлять собой G и/или где аминокислота 15 может представлять собой K; SEQ ID(SEQ ID NO: 7, где аминокислота 4 может представлять собой G и/или где аминокислота 5 может представлять собой R и/или где аминокислота 13 может представлять собой Q и/или где аминокислота 14 может представлять собой G и/или где аминокислота 15 может представлять собой K);(где аминокислота 4 может представлять собой G и/или где аминокислота 5 может представлять собой R и/или где аминокислота 13 может представлять собой Q и/или где аминокислота 14 может представлять собой G и/или где аминокислота 15 может представлять собой K и/или где аминокислота 16 может представлять собой G; SEQ ID NO: 46).(SEQ ID NO: 45: подчеркнутые аминокислотные остатки соединены посредством дисульфидного линкера; N-концевой W предпочтительно представляет собой Dаминокислоту, а С-концевой R может быть амидирован; пептид называется BI450-AdjBT2 при наличии этих двух модификаций). Полипептиды I:n=1, 2, 3, 4 Неограничивающими примерами полипептидов I могут служить следующие последовательности: Неограничивающими примерами полипептидов II могут служить следующие последовательности: Неограничивающими примерами конструкций, соединенных дисульфидной связью, могут служить следующие соединенные пептидные последовательности: Указанные выше соединенные дисульфидной связью конструкции могут быть синтезированы, например, путем титрования защищенных 2-пиридинсульфенилом (SPyr) содержащих цистеин пептидов пептидами с незащищенными тиолами. Было доказано, что это является превосходным способом избирательного получения соединенных дисульфидной связью гетеродимеров пептидов с предотвращением образования гомодимеров (Schutz A. et al., Tetrahedron, том 56, выпуск 24, 9 июня 2000 г., с. 3889-3891). В объем настоящего изобретения входят также сходные конструкции, где SEQ ID NO: 28 соединена дисульфидной связью с SEQ ID NO: 31 или 33, или где SEQ ID NO: 30 соединена дисульфидной связью сSEQ ID NO: 29 или 33, или где SEQ ID NO: 32 соединена дисульфидной связью с SEQ ID NO: 29 или 31. Неограничивающими примерами других соединенных конструкций могут служить следующие соединенные пептидные последовательности:(пептиды соединены через подчеркнутые остатки Cys и Lys; целиком конструкция обозначается в настоящем описании как BI400-B).(пептиды соединены через подчеркнутые остатки Cys и Lys; целиком конструкция обозначается в настоящем описании как BI400-Bul).(пептиды соединены через подчеркнутые остатки Cys и Lys; целиком конструкция обозначается в настоящем описании как BI400-Bu2).(пептиды соединены через подчеркнутые остатки Cys и Lys; целиком конструкция обозначается в настоящем описании как BI400-BU3). В целом действительная природа линкера Cys-Lys несущественна до тех пор, пока линкер не вводит нежелательную функциональность в соединенную конструкцию. Линкер Cys-Lys может быть образован с помощью нескольких широко известных методов. 2 пептида, которые предназначены для соединения,синтезируют в соответствии с традиционными твердофазными методами пептидного синтеза по Меррифилду. В качестве одного примера создания подходящего линкера служит в качестве части линейного синтеза получение вместо цистеина соответствующего сульфонилгалоида, который, в свою очередь, может вступать в реакцию замещения с первичным амином боковой цепи лизина; это формирует сульфонамидный мостик между остатками цистеина и лизина. Другие взаимодействия включают получение производных одной из или обеих тиоловой и аминогрупп в двух остатках и последующие реакции замещения/элиминации между двумя молекулами. Линкер, используемый в соединенных Cys-Lys конструкциях примеров, находится в форме амидной связи между (2-оксоэтил)-дериватизированным производным цистеина в одном пептиде и лизином в другом пептиде. Все эти соединенные Cys-Lys пептиды были получены от Bachem UK Ltd. на коммерческой основе. В объем настоящего изобретения также входят сходные конструкции, где SEQ ID NO: 38 соединена посредством Cys-Lys с SEQ ID NO: 42 или 43, или где SEQ ID NO: 41 соединена посредством Cys-Lys сSEQ ID NO 34-36 предпочтительно состоят, частично или полностью, из D-аминокислот. Пример 1. Синтез пептидов с помощью традиционных методов для линейных последовательностей. Получение APTKAKRRVVQREKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза F-moc (Atherton et al. 1978, J. Chem. Soc. Chem Commun 539), который ниже называется "общим описанием синтеза". Получение APTKAKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение APTRAKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение APTEAKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение RVVEREK. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение RVVQREK. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение AKRRVV. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение DRPEGIEEEGGERDR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение VERYLKDQQLLG. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение VERYLKDEELLG. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение VERYLKDNNLLG. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение QLLLNGSLAEEEIVI. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение QLLLNGSLAEEEVVI. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение QLLLNSLAEEEVVI Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение APTKAKRGGGAPTRAKRGGGAPTEAKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение RVVEREKGGGAKRRVVGGGRVVQREK. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GGAKRRVVGGAKRRVVGQREKRAV. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение CGGAKRRVVGGAKRRVVGQREKRAV. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GGAKRRVVGGAKRRVVGGQREKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение CGGAKRRVVGGAKRRVVGGQREKR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GGAKRRVVGGAKRRVV. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GCGAKRRVVGGAKRRVV. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GGGDQQLLGGAEEEIVGGIEEEGGERDRDR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение CGGGDQQLLGGAEEEIVGGIEEEGGERDRDR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GGDQQLLGGAEEEIVGGGERDR. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение CGGGDQQLLGGAEEEIVGGIEEEGG. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение GGAEEEVVGGDQQLL. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Получение CGGAEEEVVGGDQQLL. Пептид синтезировали в форме амида, начиная с соответствующего исходного пункта в соответствии с общим описанием синтеза. Чистота (ВЭЖХ): более 94%. Теоретическая молекулярная масса: 5876,93. Пример 3. Узнавание SEQ ID NO: 1 отдельно и в сочетании с SEQ ID NO: 6, 8 и 9 объединенной сывороткой человека от хронически инфицированных ВИЧ индивидуумов, LTNP и неинфицированных доноров крови. Серологическую реакцию в отношении SEQ ID NO: 1 отдельно и в сочетании с SEQ ID NO: 6 (с последовательностью DRPEGIEEEGGERDR), 8 и 9 определяли в соответствии с общим принципом ELISA с использованием либо магнитных частиц в качестве твердой основы, либо присоединения пептидов к 96-луночному лотку. Методы. В описанной ниже системе пептидом покрывали магнитные частицы с использованием общепринятых методов. На частицы наносили 300 мкг всех пептидов за исключением SEQ ID NO: 1, когда использовали 600 мкг. SEQ ID NO: 1 (из С 5) и SEQ ID NO: 6, 8 и 9 (из gp41) предварительно инкубировали в течение ночи при 4 С для обеспечения взаимодействий между последовательностями С 5 и gp41 в указанном порядке и всех вместе. Затем с покрытыми пептидом шариками инкубировали сыворотки в соответствии с принятыми протоколами. Визуализация связывания антитела с пептидами С 5 обеспечивалась использованием протеина G, соединенным со щелочной фосфатазой, который может связывать иммуноглобулины разных видов. Положительным контролем служила имеющаяся в продаже сыворотка овец,иммунизированных последовательностью APTKAKRRWQREKR (SEQ ID NO: 1) из С 5. Объединенные сыворотки от 25 LTNP тестировали на серологическую активность в отношении только SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 1, сочетанной с SEQ ID NO: 6 (DRPEGIEEEGGERDR), 8 и 9 соответственно и всех вместе. Тестировали также объединенные сыворотки от 12 ВИЧ-положительных, хронически инфицированных индивидуумов и сыворотки от 20 доноров крови. Результаты показаны в табл. А. Таблица А Результаты серологической активности объединенных сывороток в отношении SEQ ID NO: 1 и SEQ IDNO: 1, сочетанной с последовательностями gp41. Положительную реакцию определяли визуально Результаты/пункты обсуждения. Результаты табл. А показывают, что объединенные сыворотки LTNP в целом проявляют сильную реакцию в отношении SEQ ID NO: 1 из ВИЧ-1 по сравнению с объединенными сыворотками от больных,хронически инфицированных ВИЧ, как об этом сообщалось ранее. Однако соединение SEQ ID NO: 1 с другими пептидами из gp41 (например, со всеми вместе или только с SEQ ID NO: 8) снижало фоновый уровень, наблюдавшийся у доноров крови, а также реакции объединенных сывороток от хронически инфицированных индивидуумов. Реакция LTNP остается сильной. Пример 4. Узнавание SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 1 в сочетании с SEQ ID NO: 6 индивидуальными сыворотками от больных, хронически инфицированных ВИЧ, LTNP и доноров крови. Серологическую активность индивидуальных сывороток больных LTNP в отношении SEQ ID NO: 1(16 мкг) отдельно и в сочетании с SEQ ID NO: 6 (16 мкг) определяли с помощью плашки ELISA в качестве твердой основы. В качестве положительного контроля использовали антитела овцы против С 5. В качестве считываемого показателя использовали оптическую плотность (ОП) при 280 нм после ферментативной реакции протеина G, соединенного с щелочной фосфатазой. На фиг. 1 показана доля больныхLTNP и величины их ОП после вычета фона (только среда в отсутствие пептидов). Фиг. 1 показывает, что более значительная часть сывороток LTNP (n=8, 2 самых правых серых столбика) взаимодействует с SEQ ID NO: 1 при ее сочетании (т.е. доля составляет 80%) с SEQ ID NO: 6(DRPEGIEEEGGERDR) по сравнению с их способностью взаимодействовать отдельно с SEQ ID NO: 1(n=6, самый левый заштрихованный столбик, доля 0%). Для сывороток LTNP со слабой реакцией в отношении SEQ ID NO: 1 этот эффект усиливался при объединении SEQ ID NO: 1 и 6. Это показывает, что комплекс С 5:gp41 обладает способностью фиксировать и резко повышать ответ, даже когда ответ на один С 5 является слабым; фиг. 1 показывает, что ОП была высокой в образцах сыворотки, которые проявляли связывание лишь с SEQ ID NO: 1. Однако после объединения с последовательностью gp41 ответы на взятый отдельно С 5 снижались из-за того, что антитела теперь предпочтительно связывали сочетание. На фиг. 2 показаны величины ответов индивидуальных сывороток от LTNP, хронически инфицированных больных и доноров крови на SEQ ID NO: 1 отдельно и на SEQ ID NO: 1 в сочетании с SEQ IDNO: 6 (DRPEGIEEEGGERDR). Среди больных LTNP наблюдалась большая реакция на SEQ ID NO: 1 отдельно и на SEQ ID NO: 1 в сочетании с SEQ ID NO: 6 (DRPEGIEEEGGERDR) по сравнению с больными, хронически инфицированными ВИЧ. Медианное значение ОП для связывания с SEQ ID NO: 1 в сочетании с SEQ ID NO: 6 превышает значение для связывания с одной SEQ ID NO: 1 и для LTNP, и для больных, хронически инфицированных ВИЧ, что указывает на улучшение серологической активности при сочетании с SEQ ID NO: 6. Реакция в группе доноров крови является единообразно слабой, диапазон между квартилями является очень узким, и отсутствует разница в серологической активности в отношении С 5, взятом отдельно, или в сочетании с SEQ ID NO: 6 (DRPEGIEEEGGERDR) в этом отрицательном контроле. Применение рангового теста Вилкоксона в отношении величин ОП для объединенных SEQ ID NO: 1 и 6 при использовании сывороток LTNP и величин ОП для объединенных SEQ ID NO: 1 и 6 при использовании сывороток ВИЧ показывает, что истинные медианы различаются в пределах 25% доверительного интервала. Пример 5. Иммунологические исследования. Иммунизация кроликов. Самок новозеландских белых кроликов (n=3) иммунизировали внутрикожно на 0, 2 и б недели 1 мл вакцины BI400-B, состоящей из 500 мкг BI400-B в 50% об./об. адъюванте Фрейнда (т.е. полном адъюванте Фрейнда, используемом для примирования, с последующими бустерными введениями неполного адъюванта Фрейнда). Сыворотку крови выделяли индивидуально для ELISA. Прямой ELISA для сывороток человека. 50-100 мкл смеси BI400-015 и -201 (предварительно инкубированной на холоде в буфере для покрытия - 0,05 М Na2CO3 рН 9,6; обозначаемом как СВ, по 16 мкг/мл каждого пептида, за 1-3 дня до покрытия) или только СВ (контроль фона) использовали для покрытия лунок планшет для микротитрования при 4 С в течение ночи. Планшеты для микротитрования затем промывали 3 х промывочным буфером (PBS + 1% тритон Х-100; обозначаемым WB) с последующим 2-часовым блокированием при комнатной температуре (RT) 200 мкл/лунку блокирующего буфера (PBS + 1% мас./об. БСА). Планшеты затем промывали 3 WB с последующей 1-часовой инкубацией при 37 С с 50-70 мкл/лунку добавленной сыворотки человека (последовательные разведения от 1:1 до 1:250 в буфере для разведения (PBS + 1% об./об. тритон Х-100 + 1% мас./об. БСА, обозначаемом DB. Планшеты затем промывали 6 WB с последующей 1-часовой инкубацией при RT с 70 мкл/лунку конъюгированного с щелочной фосфатазой протеина G (3 мкг/мл в DB; Calbiochem 539305). Планшеты затем промывали 6 WB с последующей 1060-минутной инкубацией при комнатной температуре с 100 мкл/лунку 0,3% мас./об. фенофталеина монофосфата (Sigma P-5758). Наконец, планшеты гасили добавлением 100 мкл/лунку гасящего раствораELISA (ASYS UVM 340) при 550 нм. Конкурентный ELISA для сывороток кроликов после иммунизации BI400-B. 50-100 мкл смеси BI400-015 и -201 (предварительно инкубированной в буфере для покрытия - 0,05 М Na2CO3 рН 9,6; обозначаемом как СВ, на холоде при концентрации каждого пептида 16 мкг/мл в течение 1-3 дней до покрытия) или только СВ (фоновый контроль) использовали для покрытия лунок планшетов для микротитрования при 4 С в течение ночи. Планшеты затем промывали 3 промывочным буфером (PBS + 1% тритон Х-100; обозначаемым WB) с последующим 2-часовым блокированием при комнатной температуре (RT) 200 мкл/лунку блокирующего буфера (PBS + 1% мас./об. БСА). Планшеты затем промывали 3 WB с последующей 1-часовой инкубацией при 37 С с 60-100 мкл/лунку добавленных образцов сыворотки кролика (разбавленной до конечной концентрации 1:10-1:250), предварительно инкубированных (4 С в течение ночи) с последовательными разведениями (в диапазоне конечных концентраций 10-1000 мкМ) 400-SEQ.B, BI400-015, BI400-201, BI400-204d, рекомбинантного gp41 (Shin-WonScientific, SWO 102 gp41), BI301-23 (неродственный белок, контроль), без пептида (т.е. PBS, контроль),объединенными сыворотками LTNP (разбавленными до конечной концентрации 1:10) или объединенными сыворотками доноров крови (разбавленными до конечной концентрации 1:10; контроль). Планшеты затем промывали 6 WB с последующей 1-часовой инкубацией при RT с 70 мкл/лунку конъюгированного с щелочной фосфатазой Ig козы против кролика (6 мкг/мл; Dako D0487). Планшеты затем промывали 6 WB с последующей 10-60-минутной инкубацией при RT с 100 мкл/лунку 0,3% мас./об. фенофталеина монофосфата (Sigma P-5758). Наконец, планшеты гасили добавлением 100 мкл/лунку гасящего раствора