Композиции и способы, ингибирующие грипп

Изобретение относится к пептидам, аналогам пептидов, производным пептидов и к фармацевтическим композициям, пригодным для лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа или профилактики передачи от лица к лицу инфекции вирусом гриппа. Пептид по изобретению содержит часть, ингибирующую слияние вирус гриппа-клетка, области инициации слияния (FIR) белка гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа или ее вариант. В предпочтительном варианте изобретения пептид по изобретению состоит из 8-40 последовательно расположенных аминокислотных остатков части белка гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа или его варианта, причем часть белка содержит FIR белка и вплоть до пяти аминокислотных остатков на амино- и карбоксиконцевой сторонах FIR.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ДЗЕ АДМИНИСТРЕЙТОРС ОФ ДЗЕ ТЬЮЛЕЙН ЭДЬЮКЕЙШНЛ ФАНД; АУТОИММЬЮН ТЕКНОЛОДЖИЗ,ЭлЭлСи (US) Перекрестная ссылка на родственные заявки Для заявки на данное изобретение испрашивается приоритет по предварительной заявке США с регистрационным 60/937120, поданной 25 июня 2007 г., и она представляет собой заявку, поданную в частичное продолжение заявки США с регистрационным 10/578013, поданной 3 ноября 2004 г., для которой испрашивается приоритет по предварительной заявке США с регистрационным 60/517181,поданной 4 ноября 2003 г., все из которых включены в настоящий документ в качестве ссылок в полном объеме. Область изобретения Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим пептиды, эффективные для профилактики или ингибирования вирусной инфекции клеток вирусом гриппа, и к способам лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа с их помощью. Предпосылки изобретения Все вирусы должны связываться с клетками-хозяевами и проникать в них для репликации. Для оболочечных вирусов, включающих РНК-вирусы, имеющие мембранные белки слияния класса I, процесс вовлекает (а) связывание вириона с клеткой-мишенью, (b) слияние оболочки вируса с плазматической мембраной или внутренней клеточной мембраной, (с) дестабилизацию вирусной оболочки и клеточной мембраны в области слияния с образованием поры слияния, (d) перенос вирусной РНК через пору и (е) модификацию клеточной функции посредством вирусной РНК. Стадии (b) и (с), указанные выше, которые вовлекают слияние вирусной мембраны и клеточной оболочки, опосредуются взаимодействием вирусного трансмембранного гликопротеина (белка слияния) с поверхностными белками и мембранами клетки-мишени. Эти взаимодействия вызывают конформационные изменения белка слияния, которые приводят к встраиванию вирусного пептида слияния в мембрану клетки-мишени. После этого встраивания следуют дальнейшие конформационные изменения белка слияния, которые тесно сближают вирусную оболочку и клеточные мембраны и приводят к слиянию двух бислоев мембраны. Вирус не способен распространяться и размножаться в его хозяине, если процесс слияния нарушается. Намеренного нарушения этого процесса слияния можно достигать направлением пептидов и пептидных миметиков, гомологичных последовательностям белка слияния, антител, которые распознают белок слияния, и других факторов, которые могут действовать против белка слияния. Гемагглютинин 2 (HA2), белок оболочки вируса гриппа, являющегося ортомиксовирусом, представляет собой прототипный белок слияния класса I РНК-вирусов. HA2 содержит N-концевой гидрофобный домен, обозначаемый как пептид слияния, который экспонируется при расщеплении белкапредшественника гемагглютинина. Ретровирусные трансмембранные белки содержат несколько структурных признаков, являющихся общими с известной структурой HA2, в дополнение к пептиду слияния,включая удлиненную N-концевую спираль (N-спираль, обычно "семикратный повтор" или "лейциновую молнию"), C-концевую спираль (С-спираль) и ароматический мотив вблизи трансмембранного домена. Наличие по меньшей мере четырех из этих пяти доменов определяет белок оболочки вируса как белок слияния класса I. На фиг. 1 представлены пять описанных ранее доменов белков слияния шести семейств вирусов класса I. Белки слияния начинаются гидрофобным пептидом слияния, оканчиваются якорным пептидом и включают удлиненную N-концевую альфа-спираль (N-спираль, обычно "семикратный повтор" или"лейциновую молнию"), C-концевую альфа-спираль (С-спираль) и иногда ароматический мотив вблизи оболочки вириона. Также для каждого из семейств вирусов показан шестой домен, обозначаемый в настоящем документе как область инициации слияния (FIR), который был выявлен авторами настоящего изобретения и описан в патентной заявке США 10/578013. Каждый год приблизительно от 10 до 20% популяции США страдают сезонным гриппом. Хотя большинство индивидов выздоравливают от гриппа в течение от одной до двух недель, у очень молодых,пожилых лиц и лиц с хроническими медицинскими состояниями может развиться постгриппозная пневмония и другие летальные осложнения. Этиологическим фактором гриппа является вирус гриппа, ортомиксовирус, который легко образует новые штаммы посредством процесса смешивания и мутации сегментированного вирусного генома. Высоковирулентные штаммы вируса гриппа типа А могут вызывать эпидемии и пандемии. В последние годы появился высокопатогенный штамм вируса птичьего гриппа A подтипа H5N1, способного вызывать высокий уровень смертности. Вследствие угрозы вируса гриппа как здоровью населения, так и в качестве потенциального агента для биотерроризма разработка лекарственных средств для борьбы с сезонным гриппом и возрастающей угрозой пандемического гриппа имеет высокий приоритет. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к пептидам, аналогам пептидов, производным пептидов и фармацевтическим композициям, пригодным для лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа и/или профилактики передачи от лица к лицу инфекции вирусом гриппа. Пептид по изобретению содержит ингибирующую слияние вирус гриппа-клетка часть области инициации слияния (FIR) белка гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа или его варианта. Вариант отличается от белка дикого типа определенными заменами в последовательности аминокислотных остатков белка гемагглютинина 2 дикого типа. В первом варианте осуществления выделенный пептид по изобретению состоит из 8-40 последовательно расположенных аминокислотных остатков части выбранного белка гемагглютинина 2 дикого типа или его варианта. Часть белка гемагглютинина 2 содержит область инициации слияния (FIR) белка и вплоть до пяти аминокислотных остатков на N-концевой и C-концевой сторонах FIR. Также часть включает, по меньшей мере, последовательность YNAELL (SEQ ID NO: 1) или ее вариант, который отличается от SEQ ID NO: 1 одной или несколькими аминокислотными заменами, выбранными из группы, состоящей из Y1S, Y1T, Y1W, Y1A, N2Q, A3L, A3I, A3V, E4D, E4K, E4R, E4H, L5I, L5V, L5A, L6I, L6V иL6A. В этом первом варианте осуществления вариант отличается от выбранной последовательности дикого типа одной или несколькими аминокислотными заменами в аминокислотной последовательности части выбранного белка дикого типа, указанной выше. Замены могут быть выбраны из соответствующих аминокислотных остатков других белков гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа или консервативных замен остатков дикого типа, и предпочтительно они выбраны так, чтобы сохранялся профиль поверхностной гидропатии Wimley-White для варианта, имеющий локальные максимумы и локальные минимумы в профиле в пределах приблизительно 5 аминокислотных остатков от локальных максимумов и локальных минимумов профиля поверхностной гидропатии Wimley-White соответствующей области по меньшей мере одной аминокислотной последовательности гемагглютинина 2 дикого типа. Предпочтительно вариант выбранной последовательности дикого типа обладает по меньшей мере 50%-ной идентичностью последовательности с последовательностью дикого типа. Во втором варианте осуществления пептид по изобретению содержит часть из 8-40 аминокислотных остатков FIR белка гемагглютинина 2 вируса гриппа A или вируса гриппа B дикого типа из области белка в диапазоне остатков с 72 по 113 или ее варианта, который отличается от остатков с 72 по 113 последовательности дикого типа на одну или несколько замен аминокислотных остатков в последовательности дикого типа. Замены в варианте выбирают из соответствующих аминокислотных остатков других белков гемагглютинина 2 дикого типа или их консервативных замен, и предпочтительно их выбирают для сохранения, в целом, формы профиля гидропатии Wimley-White пептидов, т.е. для сохранения профиля гидропатии Wimley-White варианта, имеющего локальные максимумы и локальные минимумы в пределах приблизительно 5 аминокислотных остатков от локальных максимумов и локальных минимумов профиля гидропатии Wimley-White соответствующей аминокислотной последовательности гемагглютинина 2 дикого типа. Предпочтительно варианты в этом варианте осуществления отличаются от последовательности дикого типа консервативной заменой. В третьем варианте осуществления пептид по изобретению состоит из 8-40 последовательно расположенных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2(EVEGRIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDS) или ее варианта. SEQ ID NO: 2 включает аминокислотные остатки с 72 по 113 белка гемагглютинина 2 вируса гриппа A подтипа Н 3 дикого типа (SEQ ID NO: 19). Пептид из 8-40 аминокислот содержит, по меньшей мере, аминокислотные остатки с 23 по 28 SEQ ID NO: 2 или ее варианта. В этом варианте осуществления вариант отличается отSEQ ID NO: 2 одной или несколькими аминокислотными заменами, выбранными из группы, состоящей из: В определенных предпочтительных вариантах осуществления пептид по изобретению представляет собой пептид, состоящий по меньшей мере из 8 последовательно расположенных аминокислотных остатков любой из последовательностей SEQ ID NO: 3-13, которые соответствуют областям FIR белка гемагглютинина 2 вируса гриппа A (HA2) или гемагглютинина вируса гриппа B (HB) дикого типа. В других предпочтительных вариантах осуществления пептид состоит по меньшей мере из 8 последовательно расположенных аминокислотных остатков варианта с любой из SEQ ID NO: 3-13. В этом альтернативном варианте осуществления вариант отличается от выбранной последовательности одной или несколькими аминокислотными заменами, предпочтительно консервативными заменами, аналогичными заменам, описанным для третьего варианта осуществления, рассмотренного выше. При введении в носовую полость хорьков пептид по изобретению, обозначаемый в настоящем документе как ингибитор-3 гриппа (F3), эффективно блокировал развитие гриппа у животных и передачу гриппа от животного к животному. Аминокислотная последовательность F3 идентична остаткам 84-99HA2 большинства вирусов гриппа A подтипа Н 3, включая штаммы A/H3N2, в настоящее время распространяющиеся у человека. Также F3 является активным против рекомбинантного вируса гриппа H5N1 и против двух штаммов вируса гриппа B (B/Shanghai/361/2002 и B/Shanghai/10/2003), in vitro, в иммунном анализе бляшкообразования с IC50 в низком нМ-диапазоне (5 нМ). Учитывая разнообразие этих различных штаммов вируса гриппа A и В, F3, вероятно, является эффективным против большинства вирусов гриппа. В других аспектах настоящее изобретение относится к аналогам пептида по изобретению (например, циклическим пептидам или пептидам, содержащим неприродную аминокислоту), производным пептида или аналога по изобретению, в которых пептид или аналог включает группу не из HA2, связанную с остатком пептида (например, липид или пептидная последовательность не-HA2 вируса гриппа), и к выделенному антителу, которое является специфичным к пептиду, аналогу или производному (т.е. способным специфично и селективно связываться с ними) по изобретению. Другой аспект изобретения представляет собой применение пептида, аналога, производного или антитела по изобретению в терапевтическом способе для лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа. Это применение может включать применение пептида, аналога, производного или антитела по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения гриппа. Пептиды, аналоги, производные и антитела по изобретению могут быть включены в фармацевтическую композицию в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Краткое описание чертежей На фиг. 1 представлены пять указанных выше доменов белков слияния из шести семейств вирусов типа I, а также шестой домен, известный как область инициации слияния (FIR). На фиг. 2 показано выравнивание последовательности вариантов HA2: H1 (SEQ ID NO: 17), Н 2(SEQ ID NO: 23), H9 (SEQ ID NO: 24), H10 (SEQ ID NO: 25), H13 (SEQ ID NO: 26), H14 (SEQ ID NO: 27),H15 (SEQ ID NO: 28) и Н 16 (SEQ ID NO: 29). На фиг. 3 показана последовательность аминокислотных остатков гемагглютинина 2 вируса гриппаB, B/Yamagata/16/1988 (SEQ ID NO: 30). На фиг. 4 показано сравнение остатков 72-113 белков гемагглютинина 2 вируса гриппа A и вируса гриппа B, конкретно остатков 72-113 вируса гриппа A подтипов H1 (SEQ ID NO: 17),H2 (SEQ ID NO: 18), H3 (SEQ ID NO: 19), H4 (SEQ ID NO: 20), H5 (SEQ ID NO: 21), H6 (SEQ ID NO: 22),H7 (SEQ ID NO: 23), H9 (SEQ ID NO: 24), H10 (SEQ ID NO: 25), H13 (SEQ ID NO: 26),H14 (SEQ ID NO: 27), H15 (SEQ ID NO: 28), H16 (SEQ ID NO: 29), и гемагглютинина 2 вируса гриппаB/Xamagata/16/1988 (SEQ ID NO: 30). На фиг. 5 представлен возможный механизм слияния вирус-клетка. На фиг. 6 представлены патологические ответы, наблюдаемые для двух групп хорьков, которых заражали вирусом гриппа A/Cal/07/04 и которым вводили пептид по изобретению или контрольный пептид. На фиг. 7 представлены анализы титров вируса в образцах от хорьков, которым вводили пептид по изобретению или контрольный пептид и которых инфицировали вирусом гриппа A/Cal/07/04. На фиг. 8 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 1. На фиг. 9 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 2. На фиг. 10 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 3. На фиг. 11 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 4. На фиг. 12 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A H5. На фиг. 13 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 6. На фиг. 14 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 7. На фиг. 15 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 9. На фиг. 16 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 10. На фиг. 17 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 13. На фиг. 18 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 14. На фиг. 19 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 15. На фиг. 20 представлен график поверхностной гидропатии Wimley-White для гемагглютинина 2 вируса гриппа A Н 16. Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления Настоящее изобретение относится к пептидам, аналогам пептидов, производным пептидов, антителам и фармацевтическим композициям, пригодным для лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа или профилактики передачи от лица к лицу инфекции вирусом гриппа. В настоящем изобретении использованы пептиды, имеющие сходство аминокислотной последовательности с частями области инициации слияния (FIR) белков гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа. Пептиды по изобретению могут ингибировать слияние вирус гриппа-клетка, и тем самым они могут осуществлять лечение и/или профилактику инфекции вирусом гриппа. Пептиды по изобретению могут содержать выбранные части белков гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа в области FIR или варианты выбранных частей. Варианты отличаются от белка дикого типа выбранными заменами в последовательности аминокислотных остатков белка гемагглютинина 2 дикого типа. Без связи с теорией полагают, что пептид по изобретению осуществляет профилактику и лечение инфекций вирусом гриппа, препятствуя нормальному взаимодействию домена FIR пептида слияния вируса с поверхностью клетки-мишени, например препятствуя агрегации белков или конформационным изменениям, требуемым для активации или слияния. В первом варианте осуществления выделенный пептид по изобретению состоит из 8-40 последовательно расположенных аминокислотных остатков, предпочтительно от 9 до 16 последовательно расположенных аминокислотных остатков, части выбранного белка гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа, содержащей область инициации слияния (FIR) белка и вплоть до пяти аминокислотных остатков наSEQ ID NO: 1 одной или несколькими аминокислотными заменами, выбранными из группы, состоящей из Y1S, Y1T, Y1W, Y1A, N2Q, A3L, A3I, A3V, E4D, E4K, E4R, E4H, L5I, L5V, L5A, L6I, L6V и L6A.SEQ ID NO: 1 представляет собой одну из наиболее высококонсервативных частей FIR всех из охарактеризованных белков гемагглютинина 2 вируса гриппа A (т.е. остатки с 94 по 99 последовательности гемагглютинина 2 вируса гриппа A). Аминокислотная последовательность FIR включает эту часть выбранного белка гемагглютинина 2 дикого типа, начинающуюся приблизительно в остатке 77 в N-спирали белка и кончающуюся в остатке в диапазоне от остатка 110 до остатка 119 выбранного белка гемагглютинина 2 дикого типа. С-конец FIR вируса гриппа, как описано в настоящем документе, представляет собой остаток, непосредственно предшествующий первому остатку после остатка 104 (С-конецN-спирали), который начинается в области повышенной поверхностной гидрофобности Wimley-White. Иным образом, FIR характеризуется последовательностью аминокислотных остатков, которая обладает пиком профиля поверхностной гидропатии Wimley-White белка гемагглютинина 2 дикого типа, начинающимся в N-спирали (в остатке 77) и кончающимся в пределах приблизительно 15 остатков послеC-конца N-спирали. С-конец области пика (т.е. FIR) характеризуется локальным минимумом в профиле гидропатии. Остаток, непосредственно следующий за локальным минимумом на C-конце FIR, начинает другой пик профиля гидропатии (т.е. область повышения поверхностной гидрофобности). В этом первом варианте осуществления вариант отличается от выбранной последовательности дикого типа одной или несколькими аминокислотными заменами в аминокислотной последовательности части выбранного белка дикого типа, указанного выше. Замены выбирают из соответствующих аминокислотных остатков других белков гемагглютинина 2 вируса гриппа дикого типа или консервативных замен соответствующих остатков, и предпочтительно их выбирают так, чтобы сохранялся профиль поверхностной гидропатии Wimley-White для варианта, имеющий локальные максимумы и локальные минимумы в профиле в пределах приблизительно 5 аминокислотных остатков от локальных максимумов и локальных минимумов профиля поверхностной гидропатии Wimley-White соответствующей области по меньшей мере одной аминокислотной последовательности FIR гемагглютинина 2 дикого типа. Например, источником гемагглютинина 2 дикого типа может быть подтип, выбранный из группы, состоящей из вариантов H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H9, H10, H11, H12, H13, H15 и H16 гемагглютинина 2 вируса гриппа A (SEQ ID NO: 17-29), или белок гемагглютинина 2 вируса гриппа B (SEQ ID NO: 30). Аминокислотные последовательности гемагглютинина 2 вируса гриппа A подтипов H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7,H9, H10, H11, H12, H13, H15 и H16 представлены на фиг. 2, причем области FIR заключены в черную рамку. Аминокислотная последовательность гемагглютинина 2 вируса гриппа B (SEQ ID NO: 30) представлена на фиг. 3. Предпочтительно варианты выбранной последовательности дикого типа обладают по меньшей мере 50%-ной идентичностью последовательности (например, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70% или по меньшей мере 80%-ной идентичностью последовательности) с последовательностью дикого типа. Во втором варианте осуществления пептид по изобретению содержит от 8 до 40, предпочтительно от 9 до 16 последовательно расположенных аминокислотных остатков из остатков с 72 по 113 FIR белка гемагглютинина 2 вируса гриппа A или вируса гриппа B дикого типа или ее варианта, который отличается от остатков с 72 по 113 последовательности дикого типа одной или несколькими заменами аминокислотных остатков. Замены в варианте выбирают из соответствующих аминокислотных остатков других белков гемагглютинина 2 дикого типа или их консервативных замен, и предпочтительно их выбирают,чтобы сохранялась общая форма профиля гидропатии Wimley-White пептида дикого типа, т.е. чтобы сохранялся гидропатический профиль Wimley-White для варианта, имеющий локальные максимумы и локальные минимумы в профиле в пределах приблизительно 5 аминокислотных остатков от локальных максимумов и локальных минимумов профиля поверхностной гидропатии Wimley-White соответствующей области по меньшей мере одной аминокислотной последовательности FIR гемагглютинина 2 дикого типа. Например, предпочтительно варианты в этом варианте осуществления содержат консервативные замены определенных аминокислотных остатков дикого типа. Как используют в настоящем, документе, термин "консервативные замены" и его грамматические варианты относится к наличию аминокислотного остатка в последовательности пептида, который отличается от остатка дикого типа, но относится к тому же классу аминокислот (т.е. неполярный остаток заменяет неполярный остаток, ароматический остаток заменяет ароматический остаток, полярный незаряженный остаток заменяет полярный незаряженный остаток, заряженный остаток заменяет заряженный остаток). Кроме того, консервативные замены могут включать остаток, имеющий значение поверхностной гидропатии того же знака и, как правило, сходной величины, что и остаток дикого типа, который он заменяет. Как используют в настоящем документе, термин "неполярный остаток" относится к глицину,-5 017957 аланину, валину, лейцину, изолейцину и пролину; термин "ароматический остаток" относится к фенилаланину, тирозину и триптофану; термин "полярный незаряженный остаток" относится к серину,треонину, цистеину, метионину, аспарагину и глутамину; термин "заряженный остаток" относится к отрицательно заряженным аминокислотам: аспарагиновой кислоте и глутаминовой кислоте, а также к положительно заряженным аминокислотам: лизину, аргинину и гистидину. На фиг. 4 представлено сравнение остатков 72-113 каждого из подтипов гемагглютинина 2 вируса гриппа A, представленных на фиг. 2, вместе с соответствующей областью гемагглютинина 2 вируса гриппа B (т.е. остатками 72-113 SEQ ID NO: 30). Как очевидно из фиг. 4, существует значительное сходство последовательностей между различными подтипами гемагглютинина. Область из остатков 72-113 каждого из подтипов гемагглютинина 2 вируса гриппа A обладает 50%-ной или более идентичностью последовательности с соответствующей областью подтипа Н 3 (т.е. SEQ ID NO: 2). Процентная идентичность последовательностей между SEQ ID NO: 2 и остатками 72-113 различных других подтипов является следующей: Н 4 и Н 14 обладают приблизительно 95,2% идентичностью последовательностей сSEQ ID NO: 2. Остатки 72-113 гемагглютинина 2 вируса гриппа B обладают приблизительно 30,9% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2; однако различия между SEQ ID NO: 2 и остатками 72113 белка вируса гриппа B, главным образом, представляют собой консервативные замены. Как очевидно из фиг. 2-4, известные белки гемагглютинина 2 дикого типа в совокупности имеют аминокислотные остатки в положениях в диапазоне остатков 72-113, которые относятся более чем к одному классу аминокислот. Таким образом, в этом случае варианты пептидов по изобретению также могут включать аминокислотные замены более чем из одного класса аминокислот в таких положениях. Предпочтительно вариант выбранной последовательности дикого типа обладает по меньшей мере 50%ной идентичностью последовательности (например, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70% или по меньшей мере 80% идентичностью последовательности) с последовательностью дикого типа. В третьем варианте осуществления пептид по изобретению состоит из 8-40 последовательно расположенных аминокислотных остатков,предпочтительно из 9-16 последовательно расположенных аминокислотных остатков, аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2(EVEGRIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDS) или ее варианта. SEQ ID NO: 2 представляет собой часть белка гемагглютинина 2 вируса гриппа A подтипа Н 3 дикого типа, включающую его аминокислотные остатки с 72 по 113. В этом варианте осуществления пептид содержит, по меньшей мере, аминокислотные остатки с 23 по 28 SEQ ID NO: 2 или ее варианта, и вариант отличается отSEQ ID NO: 2 одной или несколькими аминокислотными заменами. Одна или несколько замен аминокислотных остатков в последовательности варианта выбраны из группы замен, представленных в табл. 1. Предпочтительно вариант обладает по меньшей мере 50%-ной идентичностью последовательности (например, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70% или по меньшей мере 80% идентичностью последовательности) с SEQ ID NO: 2. В табл. 1 первый столбец замен является предпочтительным, второй столбец замен является более предпочтительным, и они являются более консервативными, чем в первом столбце, а в третьем столбце замен представлены альтернативы, которые могут быть включены в пептиды по изобретению. В определенных предпочтительных вариантах осуществления пептид по изобретению представляет собой пептид, состоящий по меньшей мере из 8 последовательно расположенных аминокислотных остатков любой из последовательностей, представленных в табл. 2 (SEQ ID NO: 3-13), которые представляют собой части FIR белка гемагглютинина 2 (HA2) вируса гриппа A или гемагглютинина (НВ) вируса гриппа B дикого типа. В других предпочтительных вариантах осуществления пептид состоит по меньшей мере из 8 последовательно расположенных аминокислотных остатков варианта любой изSEQ ID NO: 3-13. В этом альтернативном варианте осуществления вариант отличается от выбранной последовательности одной или несколькими аминокислотными заменами, предпочтительно консервативными заменами, и предпочтительно они выбраны из соответствующих остатков для замены в каждом положении пептида, как представлено в табл. 1. Кроме того, последовательности, представленные на фиг. 2 и 4, указывают на количество остатков,выделенных жирным шрифтом, которые представляют собой консенсусные остатки в указанных положениях выровненных аминокислотных последовательностях гемагглютинина 2. Как используют в настоящем документе, термин "консенсусный", при применении в отношении аминокислотного остатка при сравнении путем выравнивания аминокислотных последовательностей, относится к аминокислоте,которая представлена в большинстве из выровненных последовательностей в данном положении. На фиг. 2 консенсусные остатки представляют собой аминокислоты, которые находятся в данном положении по меньшей мере в 7 из 13 последовательностей, представленных на фигуре. На фиг. 4 консенсусные остатки представляют собой аминокислоты, которые находятся в данном положении по меньшей мере в 8 из 14 последовательностей, представленных на фигуре. В области остатков с 72 по 113 последовательностей гемагглютинина 2, сравниваемых на фиг. 4, консенсусные остатки представляют собой: V73, Е 74,R76, 177, L80, D86, D90, W92, S93, Y94, N95, А 96, Е 97, L98, L99, V100, L101, L102, Е 103, N104, Т 107,D109, D112 и S113. Предпочтительно пептиды по изобретению, включая любой из вариантов осуществления, описанных в настоящем документе, включают один или несколько из этих консенсусных остатков, вплоть до всех и включая все из консенсусных остатков в области белка HA2 или его варианта, охватываемых пептидом. Все из последовательностей в табл. 2, за исключением пептида гемагглютинина 2 вируса гриппа(SEQ ID NO: 8), обладают более чем 50%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3, т.е.SEQ ID NO: 4, 5, 9 и 13 на 62,5% идентичны SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 6, 7, 9, 10, 11 и 12 на 56,2% идентичны SEQ ID NO: 3. Гемагглютинин 2 вируса гриппа B обладает приблизительно 31%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3, однако различия между SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 3,главным образом, представляют собой консервативные замены. Кроме того, каждый из пептидов, представленных в SEQ ID NO: 3-13, включает один или несколько из консенсусных остатков D86, D90, W92,S93, Y94, N95, А 96, Е 97, L98, L99, V100, L101 и L102. В другом аспекте настоящее изобретение относится к аналогам пептида по изобретению. В одном варианте осуществления аналог включает циклический пептид, содержащий по меньшей мере два остатка цистеина, имеющих дисульфидную связь (т.е. цистеиновый мостик), с образованием циклической структуры. Каждый остаток цистеина независимо представляет собой остаток пептида, остаток, связанный с N-концом пептида, либо прямо, либо через линкерную пептидную последовательность, или остаток, связанный с C-концом пептида, либо прямо, либо через линкерную пептидную последовательность. Известно, что структуры циклических пептидов повышают биологическую стабильность in vivo множества пептидов. В другом варианте осуществления аналог содержит по меньшей мере один неприродный аминокислотный остаток (например, остаток D-аминокислоты, N-метилированный остаток, такой как Nметилвалин, гидроксипролин, аминомасляную кислоту и т.п.). Известно, что некоторые из таких замен в виде неприродных аминокислот обеспечивают устойчивость к расщеплению пептидазами во многих пептидных соединениях (например, D-аминокислоты, гидроксипролин) или повышают содержание альфа-спиралей в пептиде (например, аминомасляная кислота). В другом варианте осуществления аналог может включать одну или несколько природных аминокислотных замен аминокислотных остатков пептида на один или несколько остатков пролина, глицина или глутаминовой кислоты. Остатки пролина и глицина могут снижать содержание альфа-спиралей пептида, если необходимо или желательно, а остатки глутаминовой кислоты могут повышать содержание альфа-спиралей пептида. В другом аспекте настоящее изобретение относится к производному пептида или аналогу по изобретению, в котором пептид или аналог включает присоединенную группу. В одном варианте осуществления присоединенная группа представляет собой липид, такой как C8-C20-алкильная группа или алкилкарбоксилатная группа, связанная с пептидом сложноэфирной, амидной, простой эфирной, сложной тиоэфирной или простой тиоэфирной связью. Например, производное может включать группу сложного эфира жирного алкила, такую как миристатная группа, связанная с остатком пептида. Липидные заместители, например, могут повышать биологическую стабильность пептида. В другом варианте осуществления производное содержит группу полиэтиленгликоля (PEG), присоединенную к амино, гидроксильному или тиольному заместителю на боковой цепи одного или нескольких аминокислотных остатков пептида. Такие производные PEG часто могут улучшать фармакокинетику белков, например, путем ингибирования захвата в органы, такие как печень, которые включают значительные уровни пептидаз. В другом варианте осуществления производного, пептид включает полипептидную последовательность не-HA2, связанную с N-концом пептида из 8-40 аминокислот, C-концом пептида или с обоими концами. Последовательность не-HA2 может представлять собой белок не-HA2 (например, сывороточный альбумин) или часть белка не-HA2 или она может содержать, например, последовательность для облегчения солюбилизации пептида, такую как ASKSKSK (SEQ ID NO: 15) или ее вариант, предпочтительно добавляемую к C-концу пептида. Другое предпочтительное производное по изобретению представляет собой выделенный полипептид, содержащий первый сегмент пептида, состоящий из пептида по изобретению (например, от 8 до 40 последовательно расположенных аминокислотных остатков части белка HA2 вируса гриппа дикого типа из области остатков с 72 по 113 последовательности дикого типа или ее варианта), и по меньшей мере один дополнительный пептидный сегмент, содержащий последовательность пептида не-HA2, связаннуюN-концом, C-концом, или как с N-, так и с C-концами первого пептидного сегмента. В другом аспекте настоящее изобретение относится к выделенному антителу, которое является специфичным к пептиду, аналогу или производному по изобретению (т.е. способным специфично и селективно связываться с ними). Такие антитела пригодны в качестве реагентов для определения наличия концентрации пептида, аналога или производного по изобретению в биологическом образце от субъекта,которого лечат композицией по изобретению. Кроме того, антитела, которые нацеливают пептиды по изобретению, которые содержат части подтипов гемагглютинина 2 дикого типа, также могут связывать природные белки гемагглютинина 2. Такое связывание также может обеспечить некоторый уровень ингибирования процесса слияния вирус гриппа-клетка. Предпочтительно антитело представляет собой моноклональное антитело, которое может быть химерным или гуманизированным антителом, образованным из антитела не относящегося к человеку животного, такого как мышь. Способы получения моноклональных антител из данного белка или пептида хорошо известны в данной области. Способы получения химерных или гуманизированных антител также хорошо известны специалисту в данной области. Другой аспект изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей пептид, аналог, производное или антитело по изобретению, которые можно использовать в способе лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа. В определенных предпочтительных вариантах осуществления эта композиция включает пептид, аналог, производное или антитело по изобретению в фармацевтически приемлемой среде или носителе, пригодных для доставки пептида, аналога, производного или антитела субъекту, например, в носовой ход или дыхательные пути. Среды и носители, пригодные для доставки активного ингредиента в носовой ход или дыхательные пути, хорошо известны в данной области и включают солевые растворы, буферные солевые растворы, ингалируемые порошки и т.п. Также носитель может включать другие эксципиентные ингредиенты, такие как поверхностно-активные вещества, консерванты, диспергирующие вещества и т.п. Композиции можно доставлять в качестве аэрозоля, в качестве неаэрозольной жидкости, мази или крема (например, для применения в нос) и т.п. Фармацевтическую композицию по изобретению можно использовать в качестве части способа лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа путем введения субъекту, страдающему вирусом гриппа, ингибирующего вирус гриппа количества фармацевтической композиции по изобретению. Другой аспект изобретения представляет собой применение пептида, аналога, производного, антитела или фармацевтической композиции по изобретению для лечения или профилактики инфекции вирусом гриппа. Оно может включать применение пептида, аналога, производного или антитела по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения вируса гриппа. Вирусы гриппа. Существует множество подтипов вируса гриппа A. Каждый подтип вируса содержит одно конкретное сочетание вариантов двух гликопротеинов, которые погружены в липидные мембранные оболочки вирусов. Двумя определяющими подтип гликопротеинами являются гемагглютинин 2 (HA2) и нейраминидаза. Существует 16 известных вариантов HA2, которые обозначают с H1 по Н 16 соответственно и 9 известных вариантов нейраминидазы, которые обозначают с N1 по N9 соответственно. Каждый указанный подтип вируса характеризуется его номерами вариантов гемагглютинина 2 и нейраминидазы. Например, подтип H3N2 вируса гриппа A представляет собой вирус свиного гриппа, и подтип H5N1 представляет собой вирус птичьего гриппа.HA2 представляет собой белок слияния всех вирусов семейства ортомиксовирусов, которое включает вирусы гриппа. FIR каждого вируса гриппа находится в его гликопротеине HA2. Аминокислотные последовательности 13 из 16 известных вариантов HA2, H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11,H12, H13, H14, H15 и H16 представлены на фиг. 2 (SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 и 29 соответственно). Последовательности подтипов Н 8, Н 11 и Н 12 не были описаны. Области инициации слияния гемагглютинина 2 Н 3 в данной работе идентифицированы как остатки с 77 по 119 аминокислотной последовательности Н 3 (SEQ ID NO: 19), как показано на фиг. 2. Было выявлено, что выделенный пептид, обозначаемый в настоящем документе как ингибитор-3 гриппа (F3), который включает аминокислотную последовательность VEDTKIDLWSYNAELL,SEQ ID NO: 3 (остатки 84-99 SEQ ID NO: 19; Н 3 HA2), обладает сильными противовирусными свойствами. Выделенный пептид, содержащий указанные 16 аминокислот в переставленной случайным образом последовательности SWLVNKIYLTDDEVEL (SEQ ID NO: 14), не проявляет заметных противовирусных свойств. Противовирусные свойства F3 включают ингибирование связывания вируса, как показано анализами гемагглютинации. Также F3 ингибирует связывание вируса, слияние и инфицирование, как показано в анализах бляшкообразования. Активность против вируса гриппа.F3 обладает сильной активностью ингибирования инфекции широким диапазоном вирусов гриппаH1, Н 3, H5 и вирусов гриппа B, которые проявляют значительное разнообразие как в общей последовательности, так и в структуре их соответствующих белков HA2. Широкий спектр активности F3 может быть связан, по меньшей мере частично, с тем фактом, что FIR и, в частности, часть FIR, соответствующая остаткам 84-99 всех известных подтипов вируса гриппа A и вируса гриппа B, является одной из наиболее консервативных областей в белке HA2. Без связи с теорией, полагают, что сходство последовательностей между F3 и соответствующей областью (остатки 84-99) подтипов HA2 дикого типа позволяет пептидам эффективно связываться или иным образом взаимодействовать с соответствующей частью FIR в подтипах HA. Это взаимодействие препятствует нормальному действию белка HA в ходе процесса слияния (например, путем препятствования агрегации белков или конформационным изменениям, необходимым для протекания процесса слияния).F3 синтезирован в граммовых количествах на смоле PEG-PS-PAL с использованием стандартной химии FMOC. Сыпучий пептидный продукт очищали с использованием ВЭЖХ до 95% с остаточным материалом, представляющим более короткие родственные пептиды. Очищенный пептид лиофилизировали для удаления растворителя. Лиофилизированный порошок можно подвергать дальнейшей обработке, например путем растворения его в гексафторизопропаноле и выпаривания растворителя с помощью потока сверхчистого азота (Praxair UHP, 99,999%). Затем полученный порошок можно позднее перерастворять растворением порошка в водном буфере, таком как 10 мМ фосфат калия или фосфатно-солевой буфер (PBS). Концентрацию F3 в растворе можно определять с использованием формулы: мг/мл=(A280mw)/е, где е представляет собой сумму коэффициентов молекулярной экстинкции двух хромогенных аминокислот в аминокислотной последовательности пептида при 280 нм, т.е. сумму 5560F3 обладает сильной и широкой активностью ингибирования вируса гриппа A, и он проявляет пикомолярное ингибирование в анализах снижения бляшкообразования. С использованием иммунного анализа бляшкообразования с микрокристаллической целлюлозой AVICEL в качестве верхнего слоя(Matrosovich et al., 2006) детекцию бляшек проводят фиксированием монослоев специфичным антителом к нуклеопротеину вируса гриппа. В анализе ингибирования пептидом пептид предварительно инкубируют приблизительно с 100 бляшкообразующих единиц (б.о.е.) вируса в течение приблизительно 1 ч, затем используют для инфицирования монослоев. Для инкубации использовали два типа условий: (1) стандартные условия, при которых пептид включают в верхний слой в той же концентрации, которую использовали на стадии предварительной инкубации, или (2) условия, при которых пептид не включают в верхний слой.F3 оценивали в отношении ингибирования множества подтипов вирусов гриппа A с использованием анализа бляшкообразования на клетках почки собаки Madin-Darby ("MDCK"), проводимого с использованием подтипов A/WSN/33 (H1N1) и A/Udorn/72 (H3N2) вируса гриппа A. Разведения от 50 до 2,5 мкМ F3 и контрольного пептида со случайной перестановкой (SEQ ID NO:14) использовали для оценки эффектов этих пептидов на инфекционность вируса. Шесть разведений F3 и контрольного пептида тестировали против подтипа вируса H1N1; и другие шесть разведений каждого пептида тестировали против подтипа вируса H3N2. В условиях (1) F3 ингибировал образование бляшек нормального размера несколькими штаммамиIC50 для ингибирования бляшек нормального размера находилась в диапазоне приблизительно от 10 до 100 нмоль (нМ) для F3. При низких нМ-концентрациях (10 нМ) для условий (1) или низких мкМ-концентрациях (10 мкМ) для условий (2) было заметным наличие "мини-бляшек". Контрольный пептид с перестановкой не ингибировал образование бляшек вируса гриппа A в любых условиях, указывая на то, что аминокислотная последовательность пептида важна и что неспецифические эффекты не могут объяснить ингибирование. Также F3 является активным против рекомбинантного вируса гриппа H5N1 и против двух штаммов вируса гриппа B (B/Shanghai/361/2002 и B/Shanghai/10/2003), in vitro, в иммунных анализах бляшкообразования с IC50 в низком нМ-диапазоне (5 нМ). С учетом разнообразия этих различных штаммов вируса гриппа A и В, F3, вероятно, является эффективным против большинства вирусов гриппа. С использованием способов, описанных в патентной заявке США с серийным 10/578013, FIR подтипа H1 вирусов гриппа A в данной работе идентифицирована как остатки с 77 по 110 последовательности H1 HA2 (SEQ ID NO: 17). Выделенный пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, обозначаемый в настоящем документе как ингибитор-1 гриппа (F1), также обладает сильной (пикомолярной) противовирусной активностью как против подтипа H1, так и против подтипа Н 3, вируса гриппа A в анализах бляшкообразования. Аминокислотная последовательность F1 соответствует остаткам 84-102 последовательности FIR H1, SEQ ID NO: 17. Исследования проводили на различных штаммах вируса гриппа для лучшего понимания механизма действия пептидов по изобретению, например, для определения того, какая стадия в репликационном цикле вируса ингибируется F3, F1 и родственными ингибирующими вирус гриппа пептидами. При оптимальных количествах эритроцитов и концентрациях вируса гриппа A/PR/8/34 (H1N1) как F3, так и F1 ингибировали индуцируемую вирусом гриппа гемагглютинацию при концентрации приблизительно 10 мкМ. При оптимальных разведениях клеток и вируса (1:8 в обоих случаях) F3 ингибировал гемагглютинацию при концентрациях между 12,5 и 6,25 мкМ. Сходные результаты получали для других штаммов Н 3 и H1, т.е. штаммов A/New Caledonia/20/99 и A/WSN/33 H1N1; и штаммов A/California/07/2004, A/NewYork/55/04 и A/Udorn/72 H3N2. Напротив, контрольный пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, представляющий собой вариант F3 с перестановкой, не ингибировал гемагглютинацию при любой концентрации. Более высокие концентрации вируса могут преодолеть ингибирование гемагглютинации, указывая на стохастический механизм. Результат этого традиционного анализа связывания вируса с клеткой позволяет предположить, что пептиды по изобретению взаимодействуют непосредственно с вирионами,ингибируя связывание с клетками. Напротив, лекарственное средство против ВИЧ FUZEON взаимодействует с короткоживущим промежуточным соединением для слияния, но не со структурой вириона(Debnath, 2006; Platt, Durnin, and Rabat, 2005). Прямое взаимодействие с нативными структурами вириона может объяснить, по меньшей мере частично, очень высокую эффективность F3 и F1 (приблизительно 200 пМ для бляшек нормального размера) относительно лекарственного средства против ВИЧFUZEON (от 4 до 280 нМ, в зависимости от штамма ВИЧ-I) в анализах инфекционности вируса. Минибляшки, описанные выше, могут быть следствием повторного сворачивания HA на вирионе. Ранее предполагали, что повторное сворачивание HA происходит после воздействия низкомолекулярного ингибитора вируса гриппа A, который, как известно, взаимодействует с HA (Cianci et al., 1999;Luo, Colonno, and Krystal, 1996; Luo et al., 1997). Этот и другие ингибиторы проникновения (Hoffman etal., 1997) были довольно существенными достижениями в поздние 1990-е гг., поскольку они идентифицировали HA в качестве важной терапевтической мишени. Однако такие низкомолекулярные ингибиторы до настоящего времени не были разработаны в качестве лекарственных средств против гриппа, наиболее вероятно, вследствие их относительно низкой эффективности, с IC50 в диапазоне от низкой до средней мкМ-концентрации. Развивающаяся согласованность в растущей области ингибиторов проникновения вирусов сходится на том, что низкомолекулярные лекарственные средства могут быть не способны эффективно препятствовать обширным структурным переходам белков и множеству внутримолекулярных взаимодействий, которым HA и другие белки слияния вируса подвергаются в ходе процесса проникновения вируса. Рабочую модель для процесса слияния вирус гриппа-клетка можно экстраполировать из интенсивной работы по вирусу гриппа и другим РНК-вирусам в течение многих десятилетий. Схематичное изображение такой модели представлено на фиг. 5. Хотя все еще гипотетическая в некоторых аспектах, эта модель может осветить важность структурных/функциональных мотивов гликопротеинов вируса гриппаA, которые могут служить в качестве мишеней для разработки лекарственных средств. На фиг. 5, на панели А представлено связывание белка гемагглютинина 1 (HA1) вируса гриппа с клеточным рецептором,который состоит из сиалолипидов или сиалобелков. На панели В представлено вхождение вириона вируса гриппа в эндоцитарную везикулу. Белок вируса гриппа, известный как виропорин, М 2 снижает рН для запуска перестройки спиральных доменов белка HA2. Последовательность белка HA2, соответствующая аминокислотной последовательности F3 (SEQ ID NO:3) расположена рядом с метастабильной последовательностью "spring". Перестройка позволяет части пептида слияния белка HA2 взаимодействовать с мембраной везикулы. На панели С и D проиллюстрировано "раскручивание" HA2 посредством механизма "шнурок в желобке", приводящего вирусные и клеточные мембраны в близкое расположение. Для ясности, HA1 и сиалорецепторы не показаны на панелях С-Е. На панели С представлен альтернативный механизм, посредством которого последовательности HA2, которые образуют участок со способностью связываться с бислойными мембранами, могут способствовать объединению клеточных и вирусных мембран. На панели Е представлено образование "поры слияния" и проникновение сегментов рибонуклеопротеина из вируса в клетку. Исследования на живых животных. Хорька, главным образом, считают наилучшей моделью инфицирования вирусом гриппа человека(Govorkova et al., 2005; Hampson, 2006; Maher and DeStefano, 2004; van Riel et al., 2007). Действительно, в руководстве Европейского союза по эффективности вакцин против гриппа конкретно требуется тестирование в модели на хомяках. Мышей и других небольших млекопитающих можно инфицировать штаммами вируса гриппа A человека, однако это, как правило, требует, в случае сезонных штаммов, адаптации вируса к новому хозяину. Напротив, хорьков можно инфицировать большинством штаммов вирусов гриппа A человека без адаптации. Распределение в тканях и патогенез адаптированных вирусов гриппа A у мышей отличается от распределения в тканях и патогенеза, которые происходят при заболевании человека (Lu et al., 1999). Патогенез инфекции вирусом А у хорьков высоко сходен с патогенезом, наблюдае- 13017957 мым у человека. Когда хорькам экспериментально проводят интраназальную инокуляцию, происходит локальная репликация вируса в верхних дыхательных путях. Распределение рецепторов сиаловых кислот в дыхательных путях хорьков сходно с распределением у человека (van Riel et al., 2006; Yen et al., 2007). Путем, удивительно сходным с путем у людей с гриппом, у хорьков развивается сниженная активность, лихорадка, отсутствие аппетита, выделения из носа, чихание, диспноэ, диарея, конъюнктивальные выделения и неврологические признаки. Основным патологическим показателем как у хорьков, так и у человека является десквамация реснитчатого дыхательного эпителия и инфильтрация подслизистой оболочки носовой полости инфильтрирующими воспалительными клетками. В пределах 48 ч после инфицирования хорька вирусом гриппа происходит практически полное разрушение дыхательного эпителия носовой полости и остается только базальная мембрана. Основным отличием между гриппом у хорьков и человека является длительность проявления симптомов заболевания. У хорьков начинается развитие симптомов гриппа скорее чем через одни сутки после инфицирования, однако через 4 суток инфекция разрешается по большинству из хорошо известных признаков (сниженная активность, лихорадка, снижение аппетита, выделения из носа, чихание и т.д.). Следует отметить, что многие штаммы вируса гриппа A человека способны инфицировать нижние дыхательные пути хорьков в различной степени. Как и у человека, высокопатогенные штаммы вируса гриппаA способны распространяться у хорьков либо из верхних дыхательных путей в головной мозг, либо из нижних дыхательных путей в кровоток и другие органы. Современные штаммы H5N1 вируса птичьего гриппа A могут вызывать летальные инфекции у хорьков (Govorkova et al., 2005; Thiry et al., 2007;Vahlenkamp and Harder, 2006). Первоначальные исследования in vitro были сфокусированы на хорошо охарактеризованных лабораторных штаммах вируса гриппа A, соответствующих подтипам, в настоящее время циркулирующим у человека, включая A/WSN/33 (H1N1), A/PR/8/34 (H1N1) и A/Udorn/72 (H3N2). Пептиды F3 и F1 продемонстрировали сходную эффективность в анализах снижения бляшкообразования против нескольких других штаммов вируса гриппа A, включая клинические изоляты штаммов H1N1 (A/NewCaledonia/20/99) и H3N2 (A/NY/55/04; A/Cal/07/04), которые не оценивали обширно в лаборатории. Исследования последних клинических изолятов, таких как эти, являются важными для определения эффективности лекарственных средств с вирусами, в текущее время вызывающими грипп у человека. Важно,что эти штаммы также вызывали грипп у хорьков, вырастая до высоких титров в носовых раковинах и легких этого вида после интраназальной инокуляции. Для всех исследований изоляты вирусов размножали в куриных яйцах с зародышем (полученных отCharles River Laboratories или Louisiana State University Poultry Sciences Department) с использованием стандартных способов. Аллантоисную жидкость собирали из 11-дневных яиц через одни сутки после инокуляции и пулы вирусов исследовали в отношении активности гемагглютинации против эритроцитов индейки (tRBC) (Lampire Laboratories, USA) с использованием стандартных способов. Пулы с положительной гемагглютинацией (256 единиц HA) титровали анализом бляшкообразования вирусом, как описано выше, и хранили в жидком азоте до применения для исследований иммунизации. Пептиды изготавливали в фосфатном буфере и буферные растворы наносили прямо в носовые ходы хорьков под анестезией с использованием пипетки (интраназальный способ введения). Исследование заражения 1. Хорькам предварительно вводили F3 или контрольный вариант пептида с перестановкой(SEQ ID NO: 14) в течение 2 суток до воздействия вируса (сутки -2 и сутки -1) в дозе приблизительно 0,3 мг/кг интраназальным путем либо один раз в сутки, либо два раза в сутки. Через 12 ч после последнего введения животных инфицировали путем интраназальной инокуляции приблизительно 105 б.о.е. штамма A/Cal/07/04 вируса гриппа H3N2, что по меньшей мере в 100 раз превышает минимальную инфекционную дозу, как определено в исследованиях выявления инфекционной дозы. Пептиды повторно вводили хорькам в дозе 0,3 мг/кг приблизительно через 12 ч на 0 сутки, а также на 1- и 2-е сутки после воздействия вируса. На 2 сутки у всех хорьков, которым вводили контрольный пептид с перестановкой,развивалось выраженное затруднение дыхания (быстрое неглубокое дыхание), высокая лихорадка и чихание. Напротив, ни у одного из животных, которым вводили F3, не было тяжелого затруднения дыхания, хотя подгруппа (2/5 в группе с предварительным введением два раза в сутки, 1/6 в группе с предварительным введением один раз в сутки) показала некоторые очень мягкие дыхательные признаки с небольшой лихорадкой. На 3 сутки у всех хорьков, которым вводили F3, не было выявлено клинических признаков гриппа, хотя у 50% хорьков, которым вводили контрольный пептид с перестановкой, все еще имелась сонливость, и у 100% хорьков, которым вводили контрольный пептид с перестановкой, были показаны выраженные выделения из носа. Очевидно, F3 обеспечивал выраженную и удивительно эффективную пользу при лечении в этом исходном эксперименте с заражением. Исследование заражения 2. Во втором исследовании заражения 12 хорьков были включены в группу введения F3 и 12 хорьков были включены в группу контрольного пептида. Животных инфицировали приблизительно 105 б.о.е. вируса гриппа A/Cal/07/04; однако в этом исследовании хорькам вводили 0,3 мг/кг F3 или контрольного пептида через 4 ч после воздействия вируса на 0 сутки, без введений до воздействия вируса. На 2 сутки у всех 12 хорьков, которым вводили контрольный пептид с перестановкой, развивалось выраженное затруднение дыхания, высокая лихорадка и чихание. Напротив, ни одного из животных, которым вводилиF3, к этому времени не было каких-либо признаков затруднения дыхания или других признаков гриппа. На фиг. 6 показаны патологические ответы, наблюдаемые у хорьков в ходе исследования, полученные мониторингом затрудненного дыхания (панель А), выделений из носа (панель В) и активности (панель С) для обеих групп введения в ходе прижизненного периода исследования. Как указано на фиг. 6, у мышей, которым вводили F3, были показаны значительно сниженные патологические ответы относительно контрольной группы. Только у двух животных в группе, в которой вводили F3, развивались мягкие признаки гриппа, и это происходило на 4 сутки эксперимента, через 2 суток после прекращения введения пептида. В дополнение к клиническим параметрам, на протяжении периода исследования собирали носовые аспираты и легочные и внелегочные ткани с суточными интервалами для анализа титра вируса, макроскопической патологии и гистопатологического анализа. У животных, которым вводили F3, были показаны нормальные легочные показатели. Напротив, у хорьков,которым вводили контрольный пептид, были показаны признаки воспаления. В тканях хорьков, которым вводили F3, была показана значительно более низкая патология по сравнению с животными, которым вводили контрольный пептид, причем у хорьков, которым вводили контрольный пептид была показана инфильтрация, воспаление бронхов с экссудатами бронхов, характерными для инфекции гриппом. Количественный анализ посредством RT-PCR и консервативные праймеры для гена нуклеопротеина, вируса гриппа обеспечивают надежные анализы уровней геномной РНК вируса в гомогенатах тканей хорьков, которым проводили введение и инфицирование. Образцы носовых аспиратов собирали от животных в ходе периода исследования. Титры вирусов из этих образцов представлены на фиг. 7, панель А. Результаты анализов гомогенатов тканей хорьков, взятых из головного мозга, трахеи, печени, селезенки и крови на 1 сутки исследования, представлены на панели В фиг. 7. Данные на панели А демонстрируют,что пиковые титры вируса гриппа в носовых смывах хорьков снижались более чем на 2,0 log10 и в легких более чем на 6,0 log10. Эти результаты указывают на то, что F3 значительно снижал репликацию вируса гриппа в верхних дыхательных путях хорьков. Данные на панели В указывают на то, что F3 эффективно блокировал распространение вируса в нижние дыхательные пути, а также в другие органы. Идентификация FIR вируса гриппа. С-конец FIR вируса гриппа можно определить как остаток, непосредственно предшествующий первой пептидной последовательности, которая проявляется положительно возрастающей поверхностной гидрофобностью на кривой поверхностной гидропатии Wimley-White, которая находится после C-концаN-спирали (остаток 104). В табл. 3 представлена шкала поверхностной гидрофобности Wimley-White для белков на мембранных поверхностях, как описано Wimley и White в 1996. Эта шакала гидрофобности или гидропатии основана на заряде свободной энергии, требуемом для переноса остатка пептида с гидрофобной поверхности бислойной мембраны в водную фазу. На этой шкале положительная свободная энергия (G), в килокалориях на моль, указывает на более гидрофобный остаток (т.е. энергию необходимо добавлять для переноса гидрофобного остатка из гидрофобной мембраны в воду). Аналогично, отрицательная свободная энергия указывает на более гидрофильный остаток. На кривой поверхностной гидрофобности Wimley-White FIR характеризуется пиковой областью гидропатии (т.е. областью относительно более высокой гидрофобности, включая локальный максимум гидрофобности, расположенный между двумя локальными минимумами гидрофобности). Эта пиковая область начинается в N-спирали белка HA2 и кончается в пределах приблизительно 15 остатков после N-спирали. Таблица 3 Шкала поверхностной гидрофобности Wimley-White Для вычисления профиля поверхностной гидропатии белка или полипептида можно использовать компьютерные программы, такие как Membrane Protein Explorer (MPEx), доступные на web-сайте:blanco.biomol.uci.edu/mpex. Программа MPEx включает шкалы гидропатии Wimley-White, и она представляет собой предпочтительный способ установления степени поверхностной гидрофобности этих пептидных последовательностей. Компьютерную программу MPEx использовали для облегчения охарактеризации C-конца FIR в каждом из 13 отсеквенированных вариантов HA2, представленных на фиг. 2. Компьютерная программа MPEx строит графики показателя поверхностной гидропатии Wimley-White для представляющего интерес белка или пептида путем усреднения значений общей гидропатии остатка для всех остатков в окне, состоящем из фиксированного количества последовательно расположенных аминокислотных остатков (предпочтительно приблизительно 19 остатков), и нанесения на график среднего значения гидропатии в окне в качестве показателя гидропатии для среднего остатка в окне. Затем окно сдвигают на один остаток, перемещаясь в направлении от N-конца к C-концу, и процесс повторяют до тех пор, пока не определят показатель гидропатии для каждого остатка в представляющей интерес области. Поверхностные профили гидропатии Wimley-White для всех из 13 подтипов HA2, представленных на фиг. 2, получали, применяя программу MPEx, с использованием окна из 19 аминокислотных остатков.N-конец FIR выявлен в точке в N-спирали белка, в которой поверхностная гидропатия начинает устойчиво возрастать после локального минимума (т.е. в остатке 77 для всех из исследованных к настоящему времени белков HA2). С-конец FIR представляет собой остаток, непосредственно предшествующий первому локальному минимуму в гидрофобности после N-спирали, т.е. остаток, непосредственно предшествующий первой пептидной последовательности с положительно возрастающей поверхностной гидрофобностью, которая находится после C-конца N-спирали. В каждом подтипе HA2 вируса гриппа A, представленном на фиг. 2, N-спираль оканчивается в остатке 104. График показателей гидропатии WimleyWhite не обязательно должен пересекать ноль на оси, чтобы он был пригодным для установления положения C-конца FIR, в нем только должно быть повышение показателя гидропатии относительно предыдущих остатков пептида. На фиг. 8-20 представлены профили гидропатии Wimley-White, полученные с помощью MPEx, для 13 отсеквенированных вариантов белка слияния HA2 вируса гриппа A (на этих фигурах "A" указывает наFIR пептида, характеризующийся пиком на графике гидропатии). С-конец FIR указан на каждой из фиг. 8-20 как "В". Из анализов было показано, что N-конец FIR начинается в остатке 77 последовательности HA2, в каждом подтипе вируса HA2. С-конец FIR варьирует между остатками 110 и 119 для каждого из подтипов HA2. Область FIR выделена на фиг. 2 с помощью затемненной рамки вокруг остатков с 77 по 110 или 119. Пептиды по изобретению, обладающие повышенной активностью, можно идентифицировать получением гнездовых наборов пептидов, которые являются либо более длинными (соответствующими фланкирующим последовательностям HA), либо укороченными по сравнению с активной частью ингибиторного белка-мишени FIR (например, SEQ ID NO: 2). Пептиды, которые удлиняют аминокислотную последовательность HA-мишень на 3-6 аминокислот на N- или C-концах пептидов, тестируют систематически против ряда вирусов гриппа для определения того, приводят ли аминокислотные сегменты на каждой стороне последовательности к повышенному ингибированию инфекционности. Если пептид,более длинный, чем последовательность-мишень, ингибирует инфекционность вируса гриппа A с меньшей IC50, чем у мишени, тогда пептиды, имеющие меньшее количество дополнительных аминокислот,чем мишень, можно систематически тестировать для определения минимального пептида с активностью ингибирования инфекционности. Активные пептиды, специфичные к конкретному типу/или подтипу,также можно тестировать против нескольких дополнительных штаммов того же типа или подтипа вируса гриппа для определения широты ингибиторной активности. Например, пептид-мишень на основеSEQ ID NO: 5 должен ингибировать множество вирусов подтипа H5 с IC50100 нМ. Другие варианты пептидов, пригодные для тестирования, можно определять, систематически заменяя остатки в последовательности-мишени на остатки аланина (что обозначают в настоящем документе как "сканирование аланином"). Сравнение модифицированных аланином пептидов с пептидами дикого типа идентифицирует остатки, важные для ингибирования слияния/инфекционности. Если более одной аминокислоты влияют на ингибирование, можно синтезировать дополнительные пептиды с заменами в каждом имеющем значение остатке. Функциональные домены, на которые предположительно нацелены пептиды по изобретению (например, с SEQ ID NO: 3 по SEQ ID NO: 13), имеют конфигурацию альфа-спирали. Варианты пептидов,которые повышают или снижают спиральность, могут изменять активность пептидов в качестве ингибиторов слияния/инфекционности вируса гриппа A. Таким образом, варианты или аналоги активных пептидов можно получать заменой аминокислот, которые способствуют содержанию спиралей, таких как аминобутират (AIB) или глутаминовая кислота, другими аминокислотами. Аналогично, добавление остатков пролина или остатков глицина в пептид может снизить содержание альфа-спиралей, что информативно либо повысит, либо снизит ингибиторную активность. Дополнительные аналоги пептидов с повышенным связыванием с HA2, идентифицированные скринингом комбинаторных библиотек, также можно тестировать в отношении ингибирования инфекционности вируса гриппа. Пептидазы в носовой полости или в легком могут потенциально ограничить применимость основных лекарственных средств in vivo. Если вариант пептида, который является активным в анализах снижения бляшкообразования, деградируется или быстро выводится из дыхательных тканей, можно проводить дополнительные модификации для повышения стабильности и удержания пептидов. Сухой порошок или изменения/добавления в состав могут повысить стабильность пептидов. Циклические аналоги пептидов с двумя дополнительными остатками цистеина, добавленными для получения циклизованного дисульфидом пептида, могут стабилизировать вторичные структуры и делать пептид более устойчивым к деградации. Замена двух или более остатков пролином также может значительно повысить стабильность синтетических пептидов. Различные N- или C-концевые модификации или конъюгация с белками (например, сывороточным альбумином) или липидами (например, миристиновой кислотой) также могут повысить стабильность активности вирусных ингибиторных пептидов (Qureshi et al., 1990), так же как и введение неприродных аминокислот (гидроксипролина или D-аминокислот) в участки расщепления пептидазой. В случае, когда ингибиторные пептиды демонстрируют низкую растворимость в водных растворах,варианты пептидов можно синтезировать с вариацией в последовательности ASKSKSK (SEQ ID NO: 15),добавленной на C-конце для повышения растворимости пептида. Было показано, что эта последовательность повышает растворимость модельных пептидов при сохранении вторичной структуры. Повышенная растворимость также может снижать концентрацию, требуемую для ингибирования опосредуемого оболочкой вируса гриппа слияния. Последовательности консервативных остатков. Было выявлено, что высококонсервативная последовательность YNAELL (SEQ ID NO: 1) находится в FIR 11 из 13 отсеквенированных подтипов HA2 и что соответствующая последовательность YNAKLL(SEQ ID NO: 16), которая обладает одной аминокислотной заменой в SEQ ID NO: 1, встречается в других двух подтипах. Только одна другая последовательность в 13 отсеквенированных вариантах HA2 является более высококонсервативной, чем YNAELL (SEQ ID NO: 1). Эта последовательность, AIAGFIE(SEQ ID NO: 31, остатки 5-11 полноразмерного белка), находится в пептиде слияния, или FP, белка HA2. Домен FP представляет собой 1 из 5 ранее известных доменов вирусных белков слияния класса I, и, как было известно ранее, домен FP играет важную роль в процессе слияния вируса и клетки. Использование форм единственного числа и сходных обозначений в контексте описания изобретения (конкретно, в контексте представленной ниже формулы изобретения) следует истолковывать как охватывающее форму как единственного, так и множественного числа, если в настоящем документе нет иных указаний или если этому не противоречит контекст. Термины "содержащий", "имеющий", "включающий" и "охватывающий" следует истолковывать как открытые термины (т.е. означающие "включающий, но не ограничивающийся ими"), если нет иных указаний. Перечисление диапазонов величин в настоящем документе предназначено только для сокращенного обозначения индивидуально каждого отдельного значения, находящегося в диапазоне, если в настоящем документе нет иных указаний, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было конкретно приведено в настоящем документе. Все способы, описанные в настоящем документе, можно выполнять в любом пригодном порядке, если в настоящем документе нет иных указаний, или в ином случае, если этому явно не противоречит контекст. Применение любых и всех примеров или иллюстративных формулировок (например,"такой как"), представленных в настоящем документе, предназначено только для лучшего освещения изобретения и не налагает ограничения на объем изобретения, если не заявлено иное. Никакие формулировки в описании не следует истолковывать, как указывающие на какой-либо незаявленный элемент, как необходимый для осуществления на практике изобретения. Предпочтительные варианты осуществления этого изобретения описаны в настоящем документе,включая наилучший способ осуществления изобретения, известный авторам изобретения. Варианты этих предпочтительных вариантов осуществления могут стать очевидными специалисту в данной области при прочтении представленного выше описания. Авторы изобретения ожидают, что квалифицированные специалисты будут использовать такие варианты соответствующим образом, и авторы изобретения предполагают применение на практике изобретения иным образом, чем конкретно описано в настоящем документе. Таким образом, это изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта, приведенного в формуле изобретения, прилагаемой к настоящему документу, как допустимые действующим законом. Более того, любое сочетание описанных выше элементов во всех возможных их вариантах охватывается изобретением, если в настоящем документе нет иных указаний или если в ином случае этому явно не противоречит контекст. Ссылки Все из следующих ссылок включены в настоящий документ в качестве ссылок в полном объеме.inhibitors targeting Newcastle disease virus fusion. J. Mol. Biol. 354, 601-13. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Выделенный пептид, способный ингибировать слияние вируса гриппа с мембраной клетки хозяина, где пептид состоит из 8-40 последовательно расположенных аминокислотных остатков SEQ IDNO: 2 (EVEGRIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDS) или ее варианта, причем вариант отличается от SEQ ID NO: 2 одной или несколькими аминокислотными заменами, где пептид содержит,по меньшей мере, аминокислотные остатки с 23 по 28 SEQ ID NO: 2 или ее варианта и где одна или несколько замен аминокислотных остатков выбраны из группы, состоящей из: 2. Выделенный пептид по п.1, где вариант обладает по меньшей мере 50%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2. 3. Выделенный пептид по п.1, где вариант обладает по меньшей мере 60%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2. 4. Выделенный пептид по п.1, где вариант обладает по меньшей мере 70%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2. 5. Выделенный пептид по п.1, где вариант обладает по меньшей мере 80%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2. 6. Выделенный пептид по любому из пп.1-5, где вариант SEQ ID NO: 2 включает замену E26K. 7. Выделенный пептид по п.1, где пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7,SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, и вариантSEQ ID NO:3, включающий одну или несколько аминокислотных замен в указанной аминокислотной последовательности, выбранных из группы, состоящей из: где вариант содержит последовательность YNAELL (SEQ ID NO: 1) и обладает по меньшей мере 50%-ной идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3. 8. Производное пептида по любому из пп.1-7, где пептид включает группу, образованную из неHA2, связанную с пептидом. 9. Производное по п.8, где группа, образованная из не-HA2, включает по меньшей мере одну из следующих групп:(c) пептидная последовательность не-HA2, связанная с аминоконцом, карбоксиконцом или обоими концами пептида. 10. Фармацевтическая композиция, содержащая пептид по любому из пп.1-7 в фармацевтически приемлемом носителе. 11. Применение пептида по любому из пп.1-7 для лечения инфекции, вызванной вирусом гриппа. 12. Применение пептида по любому из пп.1-7 для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа. 13. Применение пептида по любому из пп.1-7 для изготовления лекарственного средства для лечения гриппа. 14. Способ лечения инфекции, вызванной вирусом гриппа, включающий введение субъекту, страдающему гриппом, ингибирующего количества фармацевтической композиции по п.10. 15. Способ по п.14, где субъект страдает от инфекции, вызванной вирусом гриппа A подтипа H1, Н 3 или H5. 16. Способ по п.14, где субъект страдает от инфекции, вызванной вирусом гриппа B. 17. Способ профилактики передачи инфекции, вызванной вирусом гриппа, от инфицированного субъекта к неинфицированному субъекту, причем способ включает введение субъекту, страдающему гриппом, ингибирующего количества фармацевтической композиции по п.10. 18. Способ по п.17, где субъект, инфицированный вирусом гриппа, страдает от инфекции вирусом гриппа A подтипа H1, Н 3 или H5. 19. Способ по п.17, где субъект, инфицированный вирусом гриппа, страдает от инфекции вирусом гриппа B. 20. Способ профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа, у субъекта, причем способ включает введение субъекту ингибирующего грипп количества фармацевтической композиции по п.10. 21. Способ по п.20, где инфекция, вызванная вирусом гриппа, представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа A подтипа H1, Н 3 или H5. 22. Способ по п.20, где инфекция, вызванная вирусом гриппа, представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа B. 23. Способ по любому из пп.14-22, где введение включает интраназальное введение фармацевтической композиции. 24. Выделенный пептид по п.1, имеющий длину от 9 до 16 аминокислотных остатков. 25. Композиция по п.10, в которой фармацевтически приемлемый носитель содержит буферный солевой раствор. 26. Композиция по п.10, в которой фармацевтически приемлемый носитель содержит фосфатный буфер. 27. Композиция по п.10, где фармацевтическая композиция находится в форме ингалируемого порошка.