Пептиды, используемые для лечения и диагностики аутоиммунных заболеваний

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента ПЕПТИДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ДИАГНОСТИКИ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Настоящее изобретение относится к пептидам, происходящим от антител, реагирующих с эпитопом, содержащим GPI-якорь, и к их функционально эквивалентным лигандам. Эти пептиды могут быть использованы для лечения и диагностики различных заболеваний, которые, как предполагается, вызываются нежелательным присутствием в организме аутоантител, реагирующих с эпитопами, содержащими GPI-якорь. В настоящем изобретении также описан механизм действия аутоантител, нарушающих функцию организма и вызывающих заболевание, а также способ предупреждения данного заболевания и детектирования указанного аутоантитела. 015629 Настоящее изобретение относится к пептидам, происходящим от антител, направленных противGPI-заякоренного эпитопа и функционально-эквивалентных лигандов. Эти пептиды могут быть использованы в целях терапии и диагностики ряда заболеваний, этиологическим фактором которых, как считается, является нерелевантное присутствие в организме аутоантител, реагирующих с GPI-заякоренными эпитопами. В настоящем изобретении также описан механизм действия указанных аутоантител, которые нарушают функции организма и, тем самым, вызывают развитие заболеваний; и кроме того, описан способ предупреждения заболевания и обнаружения таких аутоантител. Все цитируемые здесь публикации, патенты и патентные заявки во всей своей полноте включены в настоящее описание посредством ссылки. Предшествующий уровень техники Настоящее изобретение относится к новой концепции этиологии аутоиммунных заболеваний, а также других заболеваний, которые в настоящее время не считаются аутоиммунными. Эта концепция была впервые высказана в Международной патентной заявке WO 99/05175, в которой указывалось, что вырабатывание природных аутоантител со специфической активностью ассоциируется с развитием различных аутоиммунных заболеваний, таких как диабет. Указанная концепция заключалась в том, что манифестации или обострения большинства наследственных или ненаследственных, инфекционных или неинфекционных заболеваний, или состояний, ассоциированных с процессом старения, связано с продуцированием мультиспецифических аутоантител. Эти аутоантитела продуцируются у большого числа людей, и вызывают нарушение работы всех систем и органов, функция которых зависит от уровней глюкозы в крови, уровней инсулина, уровней других гормонов, регулируемых инсулином и/или GPIзаякоренными молекулами, а также другими регуляторными молекулами, распознаваемыми указанным аутоантителом, и фосфолипидами. Эти аутоантитела могут ускорять процесс старения и вызывать развитие заболеваний, ассоциированных со старением, стимулировать развитие рака, опосредовать манифестацию наследственных или ненаследственных заболеваний и препятствовать защитному действию лекарственных средств первого ряда, направленных против инфекционных патогенов. То есть в основе патогенеза указанных заболеваний лежит продуцирование аутоантитела, которое зависит от восприимчивости индивидуума и приводит к развитию одного или нескольких состояний или заболеваний неясной этиологии. Аналогичным образом любое из указанных лекарственных средств может продуцировать один или несколько побочных эффектов, которые обычно не возникают в отсутствии данного лекарственного средства. Таким образом, считается, что указанные антитела являются этиологическим фактором множества различных расстройств, манифестация которых происходит по одному и тому же механизму. Патогенное аутоантитело представляет собой моноклональное антитело, которое распознает антиTCR-V-антитела, молекулы, способные передавать сигнал; фосфолипиды, включая фосфатидилинозит,вторичный посредник действия инсулина, одноцепочечные и двухцепочечные ДНК и элементы путиGPI-заякоривания. Хотя существуют некоторые методы лечения обсуждаемых здесь заболеваний и состояний, однако большинство из этих заболеваний пока не поддается лечению и являются главной причиной высокой заболеваемости и смертности. Таким образом, необходимость разработки новых способов терапии, которые были бы эффективными для предупреждения, лечения и диагностики указанных состояний, пока остается актуальной. Поэтому, если принять во внимание широкий спектр обсуждаемых здесь заболеваний, то необходимость в разработке способа монотерапии, который был бы эффективен для лечения всех указанных заболеваний, является крайне актуальной. Заявителями было установлено, что для предупреждения, лечения и диагностики заболеваний и состояний широкого ряда могут быть использованы некоторые пептиды или антитела, называемые пептиднейтрализующими антителами. Краткое описание сущности изобретения Настоящее изобретение относится к пептиду, происходящему от антитела, направленного противGPI-заякоренного эпитопа или его функционально эквивалентного лиганда. Концепция, выдвинутая авторами настоящего изобретения в ходе исследований, заключается в том,что многие заболевания проявляются или обостряются в результате продуцирования определенного аутоантитела. Это антитело реагирует с эпитопом, содержащим GPI-якорь, но является мультиспецифическим, то есть оно также реагирует с эпитопами анти-TCR-V-антител, молекулами, способными передавать сигнал, фосфолипидами, включая фосфатидилинозит, фосфатидилсерин и кардиолипин (диацилглицерин), фосфолипид-гликанами, вторичными посредниками действия инсулина, одноцепочечными и двухцепочечными ДНК и элементами пути GPI-заякоривания. Элементы этого изобретения были впервые описаны в Международной патентной заявке WO99/05175 (A. Matossian-Rogers), содержание которой во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Одним из заболеваний, ассоциированных с присутствием указанных аутоантител, является диабет. В настоящее время существует мнение, что причиной развития диабета не является какая-либо механистическая взаимосвязь между инфекциями и теоретически предполагаемой аутоиммунной T-клеточной-1 015629 деструкцией -клеток (которая затем приводит к продуцированию многих известных аутоантител). Ключевые наблюдения начального повышения уровня продуцирования инсулина и нарушение секреции глюкагона при диабете также не могут быть объяснены существующими теориями. Опираясь на концепцию, положенную в основу настоящего изобретения и проиллюстрированную на конкретных случаях заболеваемости диабетом, можно утверждать, что инфекции приводят к пролиферации T-клеток с вырабатыванием моноклональных и поликлональных антител, и к увеличению числаT-клеток с последующей их гомеостатической регуляцией. Это приводит к гибели T-клеток, высвобождающих фрагменты T-клеточных рецепторов (TCR), генерирующие антитела (против TCR V), с помощью которых могут быть идентифицированы различные T-клетки(1). Эти антитела могут, в свою очередь,стимулировать вырабатывание антител против анти-TCR-V-антител. Такие моноклональные антитела против анти-TCR-V-антител связываются не только с анти-TCR-V-антителами, а также с человеческими панкреатическими -клетками, как показали in vitro исследования (см. WO99/05175). Эти антитела против анти-TCR-V-антител также реагируют с фосфолипидами, такими как кардиолипин, фосфатидилсерин и фосфатидилинозит. Считается, что антитела против анти-TCR-V-антител распознают GPI-заякоренные молекулы на клетках, благодаря их перекрестному распознаванию фосфатидининозита, то есть, одного из элементовGPI-заякоренной молекулы. Выло продемонстрировано, что фосфатидилинозит в высокой степени ингибирует связывание анти-GPI антитела с GPI-заякоренной молекулой-мишенью(2). GPI-якори восприимчивы к действию инсулина, опосредуемому инсулин-активированными фосфолипазами(3,4). Было показано,что GPI-заякоренные молекулы, которые быстро гидролизуются фосфолипазами, продуцируют вторичные мессенджеры в культивированных лактотрофах гипофиза(5). Таким образом, можно провести исследования механизма, посредством которого антитела, связывающиеся с GPI-заякоренными молекулами на-клетках, могут нарушать нормальную отрицательную обратную связь между секрецией инсулина и глюкагона этими клетками, и, тем самым, повышать уровень глюкагона. Глюкагон участвует в секреции инсулина, индуцированного питательным веществом, посредством стимуляции продуциования cAMP в -клетках панкреатических островков; при этом, продуцирование инсулина очищенными -клетками заметно возрастает после добавления глюкагона или -клеток(6). Было также показано, что глюкагон увеличивает амплитуду периодического высвобождения инсулина в ответ на продуцирование глюкозы(7). Поэтому действие таких антител на панкреотические островковые клетки должно приводить к сверхпродуцированию инсулина. Этот факт был подтвержден научным описанием и данными, представленными в WO99/05175. При обработке клеток человеческих панкреатических островков, выделенных при аутопсии, моноклональными антителами против анти-TCR-V-антител было обнаружено, что в этих клетках, по сравнению с контрольными клетками, наблюдается нарушение секреции инсулина. Таким образом, связывание антител против анти-TCR-V-антител с панкреатическими -клетками in vitro приводит к нарушению секреции инсулина. Кроме того было обнаружено, что у детей с недавно диагностированным диабетом, аутоантитела связываются с моноклональными анти-TCR-V-антителами (см. табл. 2). Эти аутоантитела аналогичны антителам против анти-TCR-V-антител. У диабетиков, такие аутоантитела могут быть ответственны за отвутствие восприимчивости -клеток к нормальным физиологическим раздражителями, что может приводить к развитию гипергликемии и синдрому нарушения регуляции. Было высказано предположение, что определенную роль для этих молекул может играть тот факт, что у индивидуумов с диабетом типа I, указанные моноклональные антитела против анти-TCR-V-антител не связываются с островковыми клетками, вероятно, потому, что молекулы-мишени либо были блокированы, либо уже были насыщены этими аутоантителами. Пептиды В настоящее время были получены пептиды, созданные на основе структуры моноклональных антител, которые представляют собой полиспецифические аутоантитела, описанные выше. Было показано,что такие пептиды являются иммуногенными у кроликов и стимулируют продуцирование антител, реагирующих с человеческими сыворотками широкого спектра. Было также показано, что такие пептиды оказывают ценное терапевтическое действие на человека. Поэтому было высказано предположение, что поликлональные или моноклональные антитела, вырабатываемые против этих пептидов или эквивалентных лигандов, и сами пептиды и эквивалентные лиганды могут быть использованы в терапевтических и в аналитических методах качественного или количественного детектирования присутствия аутоантител или нейтрализующих антител, вырабатываемых против этих аутоантител. Используемый здесь термин "пептид" включает в себя любую молекулу, содержащую аминокислоты, присоединенные друг к другу пептидными связями или модифицированными пептидными связями,то есть пептидными изостерами. Этот термин включает в себя олигопептиды с короткой цепью (5-20 аминокислот) и с более длинной цепью (20-500 аминокислот). Предпочтительный пептид включает в себя по меньшей мере 5, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, или по меньшей мере 45 амино-2 015629 кислот, связанных друг с другом пептидными связями или модифицированными пептидными связями. Предпочтительный пептид согласно изобретению содержит аминокислотную последовательность антитела, реагирующего с эпитопом, содержащим GPI-якорь, и с одной или несколькими из следующих молекул, такими как анти-TCR-V-антитело; молекула, способная передавать сигнал; фосфолипид(включая фосфатидилинозит, фосфатидилсерин, кардиолипин (диацилглицерин) или фосфолипидгликан), вторичный посредник действия инсулина; и одноцепочечная или двухцепочечная ДНК. Указанное антитело может также реагировать с клетками одного или нескольких типов, включая человеческие панкреатические -клетки, фолликулярные клетки щитовидной железы, клетки мозгового вещества надпочечника, клетки желудочно-кишечного тракта, клетки слюнных желез, клетки яичника, клетки поперечно-полосатой мышцы и клетки соединительных тканей, и этот список не является исчерпывающим. Термин "реактивность" означает, что указанные антитела обладают, по существу, более высокой аффинностью к перечисленным антигенам, чем к другим антигенам, с которыми данные антитела не связываются специфически. Такая, по существу, более высокая аффинность по меньшей мере в 1,5 раза, более предпочтительно по меньшей мере в 2 раза, еще более предпочтительно в 5, 10, 100, 1000, 10000, 100000,106 раз или более превышает аффинность к указанным другим антигенам. При этом следует отметить,что хотя указанные антитела являются в высокой степени специфическими, однако конкретные антитела могут обладать высокой специфичностью к более, чем одному антигену. При описании такого феномена используются различные термины, включая термин "перекрестная реактивность". Антигены, с которыми перекрестно реагирует данное антитело, могут иметь структурное сходство или различие. Примерами таких "перекрестно реагирующих антител" могут служить антитела, реагирующие с GPI-якорьсодержащим эпитопом и с одной или несколькими молекулами или клетками вышеуказанных типов. Таким образом, пептидом согласно изобретению может быть фрагмент антитела, обладающий вышеуказанными свойствами. Так, например, такие фрагменты могут происходить от различных областей соответствующих антител, и примерами таких фрагментов антител могут служить Fab-, F(ab')2-, Fv- иscFv-фрагменты, обладающие предпочтительными свойствами. Методы конструирования таких фрагментов антител хорошо описаны в литературе (Molecular Immunology, Harnes, B.D.Glover D. M. eds. ,IRL Press, New York, 1996; Practical Immunology, Hay, F.Westwood, O. Blackwell Science Ltd., 2002). Предпочтительные антитела, от которых происходят указанные фрагменты, описаны в Международной патентной заявке WO99/05175. В частности, в некоторых вариантах изобретения, антитела, эквивалентные лиганды и их применение, описанные в WO99/05175, не входят в объем настоящего изобретения. Особенно предпочтительными вариабельными областями, от которых могут происходить пептиды согласно изобретению, являются области, последовательности которых представлены в данном описании как SEQ ID NN: 2 (тяжелая цепь) и 4 (легкая цепь). Гены, кодирующие эти вариабельные области, были выделены из мышиных моноклональных клеток, секретирующих антитело, распознающее анти-TCR-Vантитела. Соответствующие последовательности ДНК представлены в SEQ ID NN:1 и 3. Другими предпочтительными вариабельными областями, от которых могут происходить пептиды согласно изобретению, являются области, последовательности которых представлены в данном описании как SEQ ID NN:18, 20, 34, 36, 50, 52, 66, 68, 82 и 84. Гены, кодирующие эти вариабельные области, были выделены из мышиных моноклональных клеток, секретирующих антитело, распознающее анти-TCR-Vантитела. Соответствующие последовательности ДНК представлены в SEQ ID NN:17, 19, 33, 35, 49, 51,65, 67, 81 и 83. Предпочтительным пептидом согласно изобретению может быть фрагмент гипервариабельной области антитела, обладающего вышеописанными свойствами. Гипервариабельные области антитела представляют собой области, которые непосредственно контактируют с частью поверхности антигена. По этой причине, гипервариабельные области также иногда называют комплементарность-определяющими областями или CDR. Каждая из тяжелых и легких цепей имеет три CDR, обозначаемых здесь CDR-H1,CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3. Особенно предпочтительными гипервариабельными областями, от которых могут происходить пептиды согласно изобретению, являются области, последовательности которых представлены в данном описании как SEQ ID NN:6, 8, 10, 12, 14 и 16. Были сконструированы некоторые пептиды, структура которых соответствует структуре последовательностей указанных гипервариабельных областей, и эти пептиды были протестированы на эффективность в качестве антигенов, способных связываться с анти-TCR-V-антителами. Эти пептиды имеют аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NN: 8, 10 и 16, и представляют собой особенно предпочтительные пептиды согласно изобретению. Другими предпочтительными гипервариабельными областями, от которых могут происходить пептиды согласно изобретению, являются области, последовательности которых представлены в данном описании как SEQ ID NN:22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76,78, 80, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. Настоящее изобретение также относится к пептидам, которые могут быть связаны друг с другом с-3 015629 образованием димеров или мультимеров. Указанными димерами или мультимерами могут быть гомодимеры или гомомультимеры, либо ими могут быть гетеродимеры или гетеромультимеры. Такие связанные молекулы могут быть более эффективными, чем отдельные пептиды, поскольку их эффективность связывания может повышаться благодаря большей доступности сайтов связывания и/или находящихся на них различных эпитопов. Указанные пептиды могут быть присоединены непосредственно друг к другу,либо они могут быть связаны друг с другом посредством линкерных молекул, таких как аминокислоты (а в частности глицин), пептиды или химические линкерные группы. Предпочтительными мультимерами являются гомодимеры, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:16. Было показано, что гомодимеры, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:8, SEQ IDNO:10 или SEQ ID NO:16, и дополнительный N-концевой цистеиновый остаток, оказывают эффективное терапевтическое действие на пациентов (см. примеры 6 и 7). Такими пептидами могут быть также комбинации пептидов, аминокислотные последовательности которых представлены в SEQ ID NN:6, 8, 10, 12,14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92,94 и 96. Предпочтительными комбинациями пептидов являются комбинации, включающие пептиды,аминокислотные последовательности которых представлены в SEQ ID NN:8, 10 и 16 (например, SEQ IDNN:8 и 10, SEQ ID NN:8 и 16, SEQ ID NN:10 и 16 и SEQ ID NN:8, 10 и 16). В соответствии с вышеописанными аспектами настоящего изобретения такие пептиды могут содержать аминокислоты, отличающиеся от 20 кодируемых генами незаменимых аминокислот и модифицированные либо под действием природных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, либо химическими методами модификации, хорошо известными специалистам. Известными обычно применяемыми модификациями, которым могут быть подвергнуты полипептиды согласно изобретению, являются: гликозилирование, присоединение липида, сульфирование, гамма-карбоксилирование, например,остатков глутаминовой кислоты; гидроксилирование и АДФ-рибозилирование. Другими возможными модификациями являются ацетилирование, ацилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение молекулы тема, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липидного производного, ковалентное присоединение фосфатидилинозита, перекрестное связывание (например, между цистеиновыми остатками), циклизация, образование дисульфидных связей, деметилирование, образование ковалентных поперечных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, образование GPI-якоря,иодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизация, селеноилирование, присоединение аминокислот к белкам,опосредуемое переносом РНК, такое как аргинилирование, и убихитинизация. Модификации могут присутствовать в любом участке пептида, включая пептидный остов, аминокислотные боковые цепи и амино- или карбоксиконцы. Пептиды согласно изобретению могут быть гомологичны пептидам, точно идентифицированным выше в SEQ ID NN:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52,54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. Два полипептида могут быть определены используемым здесь термином "гомологичные", если последовательность одного из этих полипептидов имеет достаточно высокую степень идентичности или сходства с последовательностью другого полипептида. Термин "идентичность" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей, эти две последовательности имеют идентичные аминокислотные остатки. Термин "сходство" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей, эти две последовательности имеют аминокислотные остатки аналогичного типа. Степень идентичности и сходства может быть легко вычислена (Computational Molecular Biology, Lesk A. M. ed., Oxfordand Sequence Analysis Primer, Gribskov M.Devereux J. eds, M. Stockton Press, New York, 1991). Обычно считается, что два пептида, имеющие идентичность более чем 25% (предпочтительно, в какой-либо определенной области, такой как гипервариабельная область), являются функционально эквивалентными. Предпочтительно функционально эквивалентные полипептиды согласно первому аспекту изобретения имеют степень идентичности последовательностей с пептидами, представленными любой изSEQ ID NN:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44,46, 48, 50, 52, 54, 56,58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96, или с их активными фрагментами,составляющую более, чем 25%. Более предпочтительные полипептиды имеют степень идентичности с указанными пептидами или с их активными фрагментами, составляющую более чем 30, 40, 50, 60, 70, 80,90, 95, 98 или 99%, соответственно. Указанные здесь проценты идентичности определяют с помощью компьютерной программыBLAST, version 2.1.3, с использованием параметров по умолчанию, установленных в NCBI (Национальный Центр Биотехнологической информации; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)[матрица Blosum 62; штраф за пробел-пропуск =11 и штраф за пробел-вставку =1].-4 015629 Поэтому гомологичными пептидами являются природные биологические варианты (например, аллельные варианты или варианты пептидов, образованные в результате географического изменения видов,от которых эти пептиды происходят) и мутанты (такие как мутанты, содержащие аминокислотные замены, инсерции, модификации или делеции) пептидов, которые точно идентифицированы выше в SEQ IDNN:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60,62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. Такими мутантами могут быть пептиды,в которых один или несколько аминокислотных остатков заменены консервативным или неконсервативным аминокислотным остатком (предпочтительно, консервативным аминокислотным остатком), и такой замененный аминокислотный остаток может быть, а может и не быть, остатком, кодируемым генетическим кодом. Обычно такие замены осуществляются между Ala, Val, Leu и He; между Ser и Thr; между кислотными остатками Asp и Glu; между Asn и Gln; между основными остатками Lys и Arg; или между ароматическими остатками Phe и Tyr. Особенно предпочтительными являются варианты, в которых несколько аминокислот, то есть от 1 до 5 аминокислот, от 1 до 3 аминокислот, и 1 или 2 аминокислоты или только 1 аминокислота являются замененными, делетированными или добавленными в любой комбинации. Особенно предпочтительными являются "молчащие" замены, добавления и делеции, которые не влияют на свойства и активность указанного белка. Такими мутантами также являются пептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков имеют группу-заместитель, описанную выше. Такими вариантами являются удлиненные или усеченные варианты пептидов, точно идентифицированных в данном описании как SEQ ID NN: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36,38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. Что касается удлиненных вариантов, то, по всей вероятности, антигенная область этих пептидов будет иметь правильную укладку и обладать антигенной активностью в том случае, если в C- и/или N-концы последовательностей пептидного фрагмента будут включены дополнительные остатки. Так, например, вC-концевые и/или N-концевые граничные области пептидов могут быть введены дополнительные 5, 10,20, 30, 40, 50, 100 или даже 200 аминокислотных остатков, происходящих от пептидов, точно идентифицированных здесь как SEQ ID NN: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42,44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96, или происходящих от гомологичных последовательностей, так, чтобы такое введение не оказывало негативного влияния на способность полипептидных фрагментов к "правильной" укладке. Что касается усеченных вариантов этих пептидов, то в C-конце и/или N-конце этих пептидов или в обоих этих концах могут быть делетированы, в основном, один или несколько аминокислотных остатков,так, чтобы это не оказывало негативного влияния на способность этих пептидов к "правильной" укладке. Следовательно, модифицированные, мутированные или замененные пептиды могут быть, например, использованы для продуцирования пептидов, обладающих терапевтическими и/или фармакокинетическими свойствами, аналогичными указанным свойствам пептидов дикого типа, или даже лучшими свойствами. Такие пептиды должны сохранять эффективность пептида дикого типа, например, в отношении его связывания с биологической мишенью. Так, например, если восприимчивость данного пептида к расщеплению пептидазой после его инъекции индивидууму является нарушенной, то замена особенно чувствительной пептидной связи неотщепляемым пептидомиметиком может придавать пептиду большую стабильность, и таким образом, повышать его эффективность в качестве терапевтического средства. Аналогичным образом, замена L-аминокислотного остатка представляет собой стандартный метод сообщения данному пептиду меньшей чувствительности к протеолизу и, в конечном счете, большего сходства с органическими соединениями, не являющимися пептидами. Подходящими также являются аминоконцевые блокирующие группы, такие как трет-бутилоксикарбонил, ацетил, теил, сукцинил,метоксисукцинил, суберил, адипил, азелаил, данзил, бензилоксикарбонил, флуоренилметоксикарбонил,метоксиазелаил, метоксиадипил, метоксисуберил и 2,4-динитрофенил. Блокирование заряженных N- и Cконцов данных пептидов имеет дополнительное преимущество, заключающееся в улучшении прохождения пептида через гидрофобную клеточную мембрану и проникновения в клетку. Методы синтеза и получения пептидомиметиков и других соединений, не являющихся пептидомиметиками, хорошо известны специалистам (см., например, Hruby V. J.Balse PM, Curr Med Chem 2000, 7:945-70; Golebiowski A et al,Curr Opin Drug Discov Devel 2001, 4: 428-34; Kim HOKahn M, Comb Chem High Throughput Screen 2000; 3: 167-8). Так, например, были описаны минибелки и синтетические миметики, обладающие способностью блокировать взаимодействие "белок-белок" и ингибировать образование белковых комплексов (Cochran AG, Curr Opin Chem Biol 2001, 5(6):654-659). Различные методы включения неприродных аминокислот в белки с использованием систем in vitro и in vivo-трансляции для зондирования и/или улучшения структуры и функции белков также описаны в литературе (см., например, Dougherty DA, CurrOpin Chem Biol 2000, 4:645-52). В литературе описано множество моделей, с помощью которых может быть осуществлен выбор консервативных аминокислотных замен, исходя из статистических и физико-химических исследований последовательности и/или структуры природных белков (см., например, BordoArgos, J. Mol. Biol. 1991,217:721-9; RogovNekrasov, Protein Eng 2001,14:459-463). Эксперименты по конструированию белков показали, что использование конкретных наборов аминокислот позволяет продуцировать белки с-5 015629 соответствующей укладкой и активные белки и облегчать классификацию аминокислотных замен, при которых аминокислоты могут более легко встраиваться в белковую структуру, и могут быть использованы для детектирования функциональных и структурных гомологов и паралогов (Murphy LR et al., ProteinEng. 2000, 13:149-52). Пептиды согласно изобретению могут образовывать часть гибридных белков. Так, например, в процессе рекомбинантного продуцирования, в большинстве случаев, может оказаться предпочтительным введение одной или нескольких дополнительных аминокислотных последовательностей, которые могут содержать секреторные или лидерные последовательности, про-последовательности, последовательности, облегчающие очистку, или последовательности, повышающие стабильность белка. Альтернативно или дополнительно, зрелый пептид может быть присоединен к другому соединению, такому как соединение, увеличивающее время полужизни полипептида (например, полиэтиленгликоль). Эти пептиды могут быть также присоединены к биологическому или синтетическому веществу и могут быть конъюгированы с такими молекулами, как ферменты, соединения-индикаторы, лекарственные средства, токсины или метки (радиоактивные, флуоресцентные или другие метки). Пептиды согласно изобретению могут быть получены любым подходящим методом. В частности,такими методами получения пептидов являются рекомбинантный метод, метод синтеза или комбинация этих методов. Методы твердофазного пептидного синтеза могут быть осуществлены с использованием химических групп t-Boc или FMOC (см. "Solid Phase Peptide Synthesis", eds. StewartYoung, PierceChem. Co). Альтернативно, синтез пептидов может быть осуществлен в жидкой фазе (см. "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins", Lloyd-Williams, P., Albericio, F. and Giralt, E., CRC Press,1997). Пептиды согласно изобретению могут иметь значительную структурную гомологию с пептидами,точно идентифицированными в SEQ ID NN:6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42, 44, 46, 48,54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. В частности, пептиды согласно изобретению могут иметь некоторые играющие важную роль остатки гипервариабельных областей, аналогичные остаткам гипервариабельных последовательностей, идентифицированных в SEQ ID NN:6, 8, 10, 12,14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92,94 и 96. Такие важные остатки гипервариабельных областей, присутствующие в SEQ ID NN:6, 8, 10, 12,14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92,94 и 96, были идентифицированы путем сравнения последовательностей гипервариабельных областей. Были клонированы и секвенированы гипервариабельные области шести перекрестно реагирующих мышиных моноклональных антител против анти-TCR-V-антител IgM и IgG (см. примеры 1 и 5). Анализ последовательностей гипервариабельной области этих антител позволил получить важную информацию об остатках, необходимых для перекрестного связывания с анти-TCR-V-антителом (то есть о мультиспецифической реактивности с GPI-якорь-содержащим эпитопом, описанным в настоящей заявке). Во-первых, результаты анализа данных последовательностей позволяют предположить, что конкретные аминокислоты могут играть важную роль в некоторых положениях в каждой CDR (см. пример 5). В соответствии с этим пептиды согласно изобретению могут содержать одну из нижеследующих последовательностей или состоять из этой последовательности, где "x" означает любой аминокислотный остаток, "-" означает пептидную связь, и где указанные пептиды представлены в ориентации от N-конца к C-концу: Во-вторых, анализ этих последовательностей позволяет получить "общую формулу" для каждойCDR, исходя из клонированных последовательностей (см. пример 5). В соответствии с этим, пептиды согласно изобретению могут содержать аминокислотную последовательность или состоять из аминокислотной последовательности, соответствующей одной из нижеследующих "общих формул", где в каждом из положений, представленных в скобках, выбрана одна из наиболее подходящих аминокислот, и где "-" означает пептидную связь, а указанные пептиды представлены в ориентации от N-конца к C-концу: Вышеуказанная "общая формула" включает в себя все последовательности CDR перекрестнореагирующих антител, которые были клонированы и секвенированы авторами настоящего изобретения. В третьих, анализ последовательностей позволяет получить аминокислотную формулу для каждойCDR, которая включает в себя не только полностью консервативные аминокислоты, но также и наиболее распространенные (преобладающие) аминокислоты для каждого положения CDR (см. пример 5). В соответствии с этим пептиды согласно изобретению могут содержать аминокислотную последовательность или состоять из аминокислотной последовательности, соответствующей одной из нижеследующих "общих формул", где в каждом из положений, представленных в скобках, выбрана одна из наиболее подходящих аминокислот, и где "-" означает пептидную связь, а указанные пептиды представлены в ориентации от N-конца к C-концу: Очевидно, что пептиды, содержащие аминокислотную последовательность или состоящие из аминокислотной последовательности, соответствующей одной или нескольких вышеуказанных консенсусных последовательностей и формул, будут иметь биологическую активность, эквивалентную биологической активности пептидов, протестированных in vivo, как описано в примерах 6 и 7, и могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением. Последовательности гипервариабельных областей, идентифицированные в примерах 1 и 5, были также использованы для идентификации известных последовательностей гипервариабельных областей,которые имеют высокий уровень идентичности с последовательностями, идентифицированными авторами настоящего изобретения, и обладают соответствующими связывающими свойствами (см. пример 8 и фиг. 12A-12E). Известные последовательности гипервариабельных областей сравнивали с последовательностями гипервариабельных областей, идентифицированных в примерах 1 и 5, для проведения дополнительного анализа остатков гипервариабельных областей, играющих важную роль в перекрестном связывании с анти-TCR-V-антителом (т.е., в мультиспецифической реактивности с GPI-якорьсодержащим эпитопом, описанным в настоящей заявке). С помощью анализа аналогичного типа были идентифицированы дополнительные серии консенсусных последовательностей и формул (см. фиг. 12A12E). В соответствии с этим пептиды согласно изобретению могут содержать нижеследующие последовательности или состоять из этих последовательностей, где "x" означает любой аминокислотный остаток,"-" означает пептидную связь, а указанные пептиды представлены в ориентации от N-конца к C-концу: Пептиды согласно изобретению могут содержать аминокислотную последовательность или состоять из аминокислотной последовательности, соответствующей одной из нижеследующих "общих формул", где в каждом из положений, представленных в скобках, выбрана одна из наиболее подходящих аминокислот, "-" означает пептидную связь, а указанные пептиды представлены в ориентации от Nконца к C-концу: Пептиды согласно изобретению могут содержать аминокислотную последовательность или состоять из аминокислотной последовательности, соответствующей одной из нижеследующих "общих формул", где в каждом из положений, представленных в скобках, выбрана одна из наиболее подходящих аминокислот, "-" означает пептидную связь, а указанные пептиды представлены в ориентации от Nконца к C-концу: Пептиды согласно изобретению могут содержать аминокислотную последовательность или состоять из аминокислотной последовательности, соответствующей одной из нижеследующих "общих формул", где в каждом из положений, представленных в скобках, выбрана одна из наиболее важных аминокислот, "x" означает любой аминокислотный остаток, "-" означает пептидную связь, и где указанные пептиды представлены в ориентации от N-конца к C-концу: Очевидно, что пептиды, содержащие аминокислотную последовательность или состоящие из аминокислотной последовательности, соответствующей одной или нескольким вышеуказанным консенсусным последовательностям и формулам, будут также иметь биологическую активность, эквивалентную биологической активности пептидов, протестированных in vivo, как описано в примерах 6 и 7, и могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением. Как указано в настоящем описании, пептиды согласно изобретению могут быть связаны друг с другом с образованием димеров или мультимеров. Так, например, настоящее изобретение также относится к димерам или мультимерам пептидов, содержащим аминокислотные последовательности или состоящим из аминокислотных последовательностей, соответствующих одной или нескольких из вышеуказанных консенсусных последовательностей и формул. Так, например, настоящее изобретение относится к гетеродимерам, состоящим из двух пептидов, которые включают аминокислотные последовательности, соответствующие двум различным описанным здесь консенсусным последовательностям или формулам. Так, например, настоящее изобретение относится к гомодимерам, состоящим из двух пептидов, которые включают аминокислотные последовательности, соответствующие одинаковым консенсусным последовательностям или формулам. Настоящее изобретение также относится к пептидам, которые содержат аминокислотную последовательность или состоят из аминокислотной последовательности, соответствующей описанной здесь консенсусной последовательности или формуле, и которые имеют степень идентичности с любой одной из SEQ ID NN:6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 5 64, 70, 72,74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92, 94 и 96, составляющую более чем 25%. Предпочтительно, такие пептиды имеют степень идентичности с любой одной из SEQ ID NN:6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38,40, 42,44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92, 94 и 96, составляющую более,чем 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98 или 99%, соответственно. Пептидами согласно изобретению также являются пептиды, которые содержат аминокислотную последовательность или состоят из аминокислотной последовательности, соответствующей одной из вышеуказанных консенсусных последовательностей, и которые в одном или нескольких различных положениях (то есть, положениях "x", которые не являются полностью консервативными) включают любую одну из аминокислот, присутствующих в данном положении в соответствующей указанной здесь формуле (то есть, в формуле, соответствующей той же самой CDR). Так, например, консенсусными последовательностями и "общей формулой", идентифицированными здесь исходя из клонированных последовательностей CDR-H2 (см. пример 5), являются: Таким образом, пептиды согласно изобретению включают комбинации этих последовательностей; так, например, такие пептиды включают нижеследующие последовательности или состоят из этих последовательностей: Пептиды согласно изобретению также включают более сложные комбинации описанных здесь консенсусных последовательностей и формул. Таким образом, настоящее изобретение также относится к пептидам, которые содержат нижеследующие последовательности или состоят из указанных последовательностей, например: В нижеприведенных примерах 8 и 9 описан анализ известных последовательностей гипервариабельной области, обладающих соответствующей специфичностью связывания. Этот анализ был разработан на основе последовательностей вариабельной области тяжелой и легкой цепей, имеющихся в общедоступных базах данных. В частности, в некоторых вариантах изобретения, одна или несколько последовательностей, депонированных под регистрационными номерами 1921302A, 1921302B, A39276, B39276,AAA20444.1, AAA20447.1, AAB32203.1, AAB32202.1, AAB46758.1, AAB46763.1, AAB46759.1,AAB46764.1, AAB46760.1, AAB46765.1, AAB46761.1, AAB46766.1, AAB46762.1, AAB46767.1,AAB58061.1, AAB58062.1, AAC53642.1, AAC53642.1, AAD00604.1, AAD00605.1, AAD00606.1,AAD00607.1, AAE72083.1, AAE72082.1, AAG30427.1, AAG30432.1, AAG30428.1, AAG30433.1,AAG30429.1, AAG30434.1, AAG30430.1, AAG30435.1, AAG33839.1, AAG40815.1, AAK11244.1,AAL59364.1, AAL59381.1, AAL59365.1, AAL59380.1, AAL59366.1, AAL59379.1, AAL59367.1,AAL59378.1, AAL59368.1, AAL59377.1, AAL59369.1, AAL59376.1, AAL59370.1, AAL59375.1,AAL59371.1, AAL59374.1, AAL59372.1, AAL59373.1, AAL67507.1, AAL67508.1, AAL67509.1,AAL67510.1, AAL67511.1, AAP19642.1, AAP19641.1, AAR90997.1, AAS01840.1, AAR90998.1,AAS01841.1, AAR90999.1, AAR91002.1, AAS01843.1, AAR91003.1, AAS01844.1, AAR91004.1,AAR91005.1, AAR91007.1, AAS01847.1, AAT68292.1, AAT76236.1, AAT76271.1, AAT76245.1,AAT76280.1, AAT76246.1, AAT76281.1, B30502, C30502, CAA46142.1, CAA51998.1, CAA52929.1,CAA56180.1, CAA52930.1, CAA56181.1, CAA52931.1, CAA56178.1, CAA52932.1, CAA56179.1,CAA63586.1, CAA63587.1, CAA63589.1, CAA63590.1, CAA84376.1, CAA84375.1, CAB45250.1,CAB45251.1, CAB45252.1, CAB45253.1, CAB46481.1, CAB46447.1, CAB46482.1, CAB46448.1,CAC22102.1, CAC22102.1, F30502, G30502, PC4280, PC4283, PC4281, PC4282, S67941, S67940, S69897 иS69898 не входят в объем настоящего изобретения. Первый аспект настоящего изобретения также включает в себя лиганды, которые и функционально эквивалентные пептиды, точно идентифицированные в настоящей заявке. Функционально эквивалент- 10015629 ными лигандами могут быть структуры, которые являются биологическими производными или которые могут быть синтезированы или выбраны из библиотек (таких как рандомизированные или комбинаторные библиотеки химических соединений), и которые могут обладать такими же функциями или связываться с такими же структурами-мишенями, как и аутоантитело или его репрезентативные моноклональные антитела и их производные. Так, например, такие соединения могут иметь значительную структурную гомологию с пептидными последовательностями, точно идентифицированными в SEQ ID NN:2, 4, 6,8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 25, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64,66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. Эти соединения могут быть идентифицированы такими методами, как метод потокового прогона (см., например, Jones, D. T. (1997). Progress in proteinstructure prediction. Curr. Opin. Struct. Biol. 7(3), 377-387). Указанные соединения могут быть также идентифицированы методами скрининга с использованием реагирующих с пептидами антител или их функционально эквивалентных лигандов в соответствии с первым аспектом изобретения. При этом считается, что любая каркасная молекула, способная сохранять аминокислотные боковые цепи этих пептидов в положениях, необходимых для связывания с антигеном, является подходящей для использования в соответствии с настоящим изобретением. В этом отношении, наиболее подходящими могут быть циклические пептиды, структура которых полностью сохраняется благодаря их линкерным группам и связям. Боковые цепи аминокислот могут присутствовать в положении, по существу, идентичном их положению в пептидах дикого типа. Указанные циклические пептиды предпочтительно содержат от 5 до 30 аминокислот, а более предпочтительно от 7 до 20 аминокислот. Биологически активные пептиды с антигенсвязывающими сайтами, имитирующими сайты согласно изобретению, могут быть получены с использованием фаговых библиотек. Нуклеиновые кислоты, кодирующие аминокислотные остатки, идентифицированные как остатки, находящиеся в антигенном сайте, и нуклеиновая кислота, кодирующая окружающие каркасные остатки, могут быть присоединены друг к другу с получением молекулы, кодирующей полипептидную цепь, состоящую из 10-1000 остатков, а предпочтительно из 25-100 остатков. Гибридная молекула, полученная путем присоединения этого фрагмента нуклеиновой кислоты к фрагменту, кодирующему фаговый белок, например pIII бактериофагаfd, может быть представлена на поверхности фага. Скрининг фаговой библиотеки с использованием антигена позволяет идентифицировать представляющие интерес клоны. Эти клоны могут быть затем подвергнуты повторным раундам мутагенеза и скрининга в целях повышения аффинности полученных молекул по отношению к антигену. Помимо пептидных соединений, функционально эквивалентными пептидами, точно идентифицированными в настоящей заявке, могут быть синтетические или органические молекулы. За последние годы наблюдается значительный прогресс в области комбинаторной химии и создания комбинаторных библиотек, что облегчает рациональное конструирование и получение молекул с нужными свойствами. Эти методы могут быть использованы для генерирования молекул, имеющий сайты связывания, которые идентичны или аналогичны сайтам связывания идентифицированных здесь пептидов. Такие соединения могут быть получены посредством рационального конструирования, например,стандартными методами синтеза в комбинации с методами молекулярного моделирования и с использованием программ компьютерной визуализации. В этих методах "ключевое" соединение со структурой,аналогичной структуре основного пептида, оптимизируют путем объединения различных каркасных структур и соединений-компонентов. Альтернативно или в качестве одной стадии структурного конструирования молекулярной частицы для построения или уточнения структуры соединений, которые имитируют антигенный сайт указанных пептидов, может быть использован комбинаторный химический синтез, осуществляемый путем создания однородных комбинаторных массивов на каркасной основе. Такие стадии могут включать стандартный синтез пептида или органической молекулы в комбинации с методами твердофазного разделения и рекомбинации или параллельный комбинированный синтез в сочетании с твердофазным методом разделения или методами разделения в жидкой фазе (см., например, Hogan, 1997 и цитируемые там публикации). Пептидсодержащие антитела В соответствии с другим вариантом своего первого аспекта, настоящее изобретение относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью,представленной в SEQ ID NN:2, 18, 34, 50, 66 или 82. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NN:4, 20, 36, 52, 68 или 84. Таким образом, настоящее изобретение относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:2, и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:4. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:18, и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:20. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:34, и вариабельную область легкой цепи с аминокис- 11015629 лотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:36, Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью,представленной в SEQ ID NO:52, и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:54. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной вSEQ ID NO:66, и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:68. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:82, и вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ IDNO:84. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей CDR, представленных в SEQ ID NN:6, 8, 10, 12, 14 и 16. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей CDR, представленных в SEQ ID NN:22,24, 26, 28, 30 и 32. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей CDR, представленных в SEQ ID NO:38, 40, 42, 44, 46 и 48. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей CDR, представленных в SEQ ID NN:54, 56, 58, 60, 62 и 64. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1,2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей CDR, представленных в SEQ ID NN:70, 72, 74, 76, 78 и 80. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 последовательностей CDR,представленных в SEQ ID NN:86, 88, 90, 92, 94 и 96. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая более чем на 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NN:2, 18, 34, 50, 66 или 82. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему последовательность вариабельной области легкой цепи, которая более чем на 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NN:4, 20, 36, 52, 68 или 84. Настоящее изобретение также относится к антителам, содержащим 1, 2, 3, 4, 5 или 6 CDR, последовательности которых более, чем на 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98 или 99% идентичны аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NN:6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 38, 40, 42,44, 46, 48, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 86, 88, 90, 92, 94 и 96. Настоящее изобретение также относится к антителу, содержащему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотных последовательностей, которые соответствуют описанным здесь консенсусным последовательностям и формулам. Настоящее изобретение также относится к фрагментам этих антител, таким как Fab-, F(ab')2-, Fv- иscFv-фрагменты, упомянутые в настоящем описании. Пептиднейтрализующие антитела В соответствии с другим вариантом своего первого аспекта настоящее изобретение относится к антителу или в функционально эквивалентному лиганду, которые реагируют с пептидом согласно первому аспекту изобретения. Такие антитела или функционально эквивалентные лиганды могут быть использованы для лечения и диагностики заболевания, а в частности, они могут оказывать терапевтическое действие посредством пассивного переноса. Если предпочтительными являются поликлональные антитела, то выбранное млекопитающее, такое как мышь, кролик, коза или лошадь, может быть иммунизовано пептидом согласно первому аспекту изобретения. Пептид, используемый для иммунизации животного, может быть получен методами рекомбинантных ДНК, либо он может быть синтезирован методом химического синтеза. Если это необходимо, то данный пептид может быть конъюгирован с белком-носителем. Обычно используемыми носителями, к которым могут быть химически присоединены данные пептиды, являются альбумин бычьей сыворотки,тироглобулин и гемоцианин лимфы улитки. Такой связанный пептид может быть затем использован для иммунизации животного. Сыворотку, взятую у иммунизованного животного, собирают и обрабатывают известными методами, например, иммуноаффинной хроматографией. Моноклональные антитела против пептидов согласно первому аспекту изобретения могут быть также легко получены специалистом в данной области. Общая методика получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии хорошо известна специалистам (см. например, Kohler G.Milstein, C. Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4:72(1983); Cole et al., 7796, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985). Панели моноклональных антител, продуцированных против пептидов согласно первому аспекту изобретения, могут быть скринированы на различные свойства, то есть на изотип, эпитоп, аффинность и т.п. Моноклональные антитела являются особенно подходящими для очистки отдельных пептидов, против которых они направлены. Альтернативно, гены, кодирующие представляющие интерес моноклональные антитела, могут быть выделены из гибридом, например методами ПЦР, известными специалистам, а также они могут быть клонированы и экспрессированы в соответствующих векторах. Могут быть также использованы и химерные антитела, в которых нечеловеческие вариабельные- 12015629 области были объединены или лигированы с человеческими константными областями (см. например, Liuet al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 3439 (1987. Эти антитела могут быть модифицированы так, чтобы они были менее иммуногенными для индивидуума, например, путем их "гуманизации" (см., Jones et al., Nature, 321, 522 (1986); Verhoeyen et al.,Science, 239, 1534 (1988); Kabat et al., J. Immunol., 147, 1709 (1991); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,USA, 86, 10029 (1989); Gorman et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 88, 34181 (1991) and Hodgson et al.,Bio/Technology, 9,421 (1991. Используемый здесь термин "гуманизованное антитело" означает молекулы антитела, в которых аминокислоты CDR и другие выбранные аминокислоты в вариабельных доменах тяжелой и/или легкой цепей нечеловеческого донорного антитела были заменены эквивалентными аминокислотами человеческого антитела. Таким образом, гуманизованное антитело имеет близкое сходство с человеческим антителом, но при этом оно обладает способностью связываться с донорным антителом. В другом альтернативном варианте изобретения таким антителом может быть "биспецифическое" антитело, то есть антитело, имеющее два различных антигенсвязывающих домена, каждый из которых обладает специфичностью к различным эпитопам. Для отбора генов, кодирующих антитела, обладающие способностью связываться с пептидами согласно изобретению, из набора ПЦР-амплифицированных V-генов лимфоцитов человека, скринированных на способность вырабатывать соответствующие антитела, или из библиотеки "необученных" лимфоцитов, может быть использована техника фагового представления (McCafferty J. et al. (1990), Nature 348, 552-554; Marks J. et al., (1992) Biotechnology 10, 779-783). Аффинность этих антител может быть также повышена путем перестановки цепей (Clackson T. et al. (1991) Nature 352, 624-628). Антитела, генерированные вышеописанными методами, независимо от того, являются ли они поликлональными или моноклональными, обладают и другими ценными свойствами, а поэтому они могут быть использованы в качестве реагентов в иммуноанализах, радиоиммуноанализах (РИА) или твердофазных иммуноферментных анализах (ELISA). Для использования в этих целях такие антитела могут быть помечены аналитически детектируемым реагентом, таким как радиоизотоп, флуоресцентная молекула или фермент. Молекулы нуклеиновой кислоты В соответствии со вторым своим аспектом настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид, антитело или функционально эквивалентный лиганд согласно одному из вышеописанных вариантов изобретения. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая такие пептиды, может быть идентична кодирующей последовательности молекул нуклеиновой кислоты, представленных в одной из SEQ ID NN: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45,47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93 или 95. Эти молекулы могут также иметь различные последовательности, которые, в результате вырожденности генетического кода, кодируют пептид, представленный в SEQ ID NN:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32,34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92,94 или 96, соответственно. Предпочтительно, очищенная молекула нуклеиновой кислоты имеет последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в одной из SEQ ID NN:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19,21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79,81, 83, 85, 87, 89, 91, 93 или 95, или представляет собой избыточный эквивалент или фрагмент любой из этих последовательностей. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут присутствовать в форме РНК, такой как мРНК, или в форме ДНК, включая, например, кДНК, синтетическую ДНК или геномную ДНК. Такие молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены методами клонирования, химического синтеза или их комбинацией. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены, например, методом химического синтеза, например, путем твердофазного фосфорамидитного химического синтеза, путем выделения из геномных или кДНК-библиотек, или путем выделения из соответствующего организма. РНКмолекулы могут быть, в основном, генерированы путем in vitro- или in vivo-транскрипции ДНКпоследовательностей. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть двухцепочечными или одноцепочечными. Одноцепочечной ДНК может быть кодирующая цепь, также известная как смысловая цепь, либо некодирующая цепь, также называемая антисмысловой цепью. Термин "молекула нуклеиновой кислоты" также включает в себя аналоги ДНК и РНК, такие как аналоги, содержащие модифицированные остовы и связанные с пептидом нуклеиновые кислоты (PNA). Используемый здесь термин "PNA" означает антисмысловую молекулу или антиген, который содержит олигонуклеотид, состоящий по меньшей мере из пяти нуклеотидов и присоединенный к пептидному остову, состоящему из аминокислотных остатков, которые предпочтительно заканчиваются лизином. Этот концевой лизин сообщает данной композиции растворимость. PNA могут быть ПЭГилированы для продления их времени жизни в клетке, где они предпочтительно, связываются с комплементарной одноцепочечной ДНК и РНК и прекращают элонгацию транскрипта (Nielsen P.E. et al. (1993) Anticancer DrugDes. 8:53-63). Молекулами нуклеиновой кислоты могут быть, но не ограничиваются ими, последовательность, кодирующая только зрелый пептид; последовательность, кодирующая зрелый пептид или само антитело;- 13015629 последовательность, кодирующая зрелый пептид или антитело и дополнительные кодирующие последовательности, такие как последовательности, кодирующие лидерную или секреторную последовательность, такую как про-, пре- или препропептидную последовательность полипептида; последовательность,кодирующая зрелый пептид или антитело вместе с вышеупомянутыми дополнительными кодирующими последовательностями или без них, либо вместе с другими дополнительными некодирующими последовательностями, включая некодирующие 5'- и 3'-последовательности, такие как транскрибируемые нетранслируемые последовательности, которые играют определенную роль в транскрипции (включая сигналы терминации), в связывании с рибосомой и в обеспечении стабильности мРНК. Молекулами нуклеиновой кислоты могут быть также вспомогательные последовательности, кодирующие дополнительные аминокислоты, такие как аминокислоты, обладающие дополнительными функциональными свойствами. В объем настоящего изобретения входят варианты молекул нуклеиновых кислот, кодирующие описанные выше варианты пептидов. Среди рассматриваемых вариантов имеются варианты, которые отличаются от точно идентифицированных здесь молекул нуклеиновой кислоты тем, что они имеют нуклеотидные замены, делеции или инсерции. Такие замены, делеции или инсерции могут быть сделаны в одном или нескольких нуклеотидах. Указанные варианты могут быть модифицированы в кодирующей или в некодирующей области или в той и другой области. Альтерации в кодирующих областях могут приводить к консервативным или неконсервативным аминокислотным заменам, делециям или инсерциям. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также сконструированы методами, в основном, известными специалистам, включая, в зависимости от целей применения, модификацию клонирования, процессинг и/или экспрессию генного продукта (полипептида). Реаранжировка ДНК путем рандомизированной фрагментации и повторной сборки генных фрагментов и синтетических олигонуклеотидов с помощью ПЦР представляет собой технологию, которая может быть использована для конструирования нуклеотидных последовательностей. Сайт-направленный мутагенез может быть использован для введения новых рестрикционных сайтов, изменения характера гликозилирования, изменения предпочтительности кодонов, продуцирования вариантов сплайсинга, введения мутаций и т.п. Предпочтительными вариантами этого аспекта согласно изобретению являются молекулы нуклеиновой кислоты, которые по всей своей длине по меньшей мере на 25% идентичны молекуле нуклеиновой кислоты, представленной в одной из SEQ ID NN:1,3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35,37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93 или 95. Предпочтительно молекула нуклеиновой кислоты согласно этому аспекту изобретения содержит область, которая по всей своей длине по меньшей мере на 30%, а более предпочтительно по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98, 99% или более идентична молекуле нуклеиновой кислоты, имеющей одну из этих последовательностей. В соответствии со своим третьим аспектом настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты согласно второму аспекту изобретения. Такие молекулы, которые частично или полностью комплементарны молекулам нуклеиновой кислоты согласно второму аспекту изобретения, могут быть использованы для получения антисмысловых последовательностей или для зондирования. В соответствии с методами, известными среднему специалисту в данной области, могут быть сконструированы такие антисмысловые молекулы, например олигонуклеотиды, которые распознают нужную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид согласно изобретению, специфически связываются с этой нуклеиновой кислотой и, тем самым, предотвращают ее транскрипцию (см. например, Cohen J.S., Trends in Pharm.(1991. Используемый здесь термин "гибридизация" означает присоединение двух молекул нуклеиновой кислоты друг к другу посредством водородных связей. Обычно одна молекула может быть фиксирована на твердом носителе, а другая молекула может находиться в растворе в свободном состоянии. Затем эти две молекулы могут быть подвергнуты контактированию друг с другом в условиях, благоприятствующих образованию водородной связи. Ингибирование гибридизации молекулы, полностью комплементарной молекуле-мишени, может быть проанализировано с использованием гибридизационного анализа, известного специалистам (см., например, Sambrook et al. [см. выше]). В высокой степени гомологичная молекула будет затем конкурировать с полностью гомологичной молекулой за связывание с молекулоймишенью и ингибировать это связывание в различных условиях жесткости, как описано у Wahl G.M. иS.L. Berger (1987; Methods Enzymol. 152:399-407) и Kimmel A.R. (1987; Methods Enzymol. 152:507-511). Термин "жесткость" означает условия реакции гибридизации, которые благоприятствуют связыванию молекул, обладающих высокой степенью сходства, но не способствуют связыванию отличающихся молекул. Условия гибридизации высокой жесткости определяют как условия инкубирования в течение ночи при 42C в растворе, содержащем 50% формамид, 5 SSC (150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрийцитрат),50 мМ фосфат натрия (pH 7,6), 5 раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатуриро- 14015629 ванной фрагментированной ДНК спермы лосося, с последующей промывкой фильтров в 0,1 SSC приблизительно при 65C. Условия низкой жесткости предусматривают реакцию гибридизации, осуществляемую при 35C (Sambrook et al. [см.выше]). Предпочтительными условиями гибридизации являются условия гибридизации высокой жесткости. Векторы В своем четвертом аспекте настоящее изобретение относится к вектору, такому как экспрессионный вектор, который включает в себя молекулу нуклеиновой кислоты согласно второму и третьему аспектам изобретения. Векторы согласно изобретению включают молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению и могут представлять собой клонирующие или экспрессирующие векторы. Таким образом,пептиды согласно изобретению могут быть получены в рекомбинантной форме посредством экспрессии кодирующих эти пептиды молекул нуклеиновой кислоты в векторах, содержащихся в клетке-хозяине. Такие методы экспрессии хорошо известны специалистам, и многие их них подробно описаны в руководстве Sambrook et al. (см.выше) и FernandezHoeffler (1998, eds. "Gene expression systems. Using naturefor the art of expression". Academic Press, San Diego, London, Boston, New York, Sydney, Tokyo, Toronto). Для продуцирования полипептида в нужном хозяине могут быть использованы, в основном, любые системы или любые векторы, подходящие для поддержания, амплификации или экспрессии молекул нуклеиновой кислоты. Подходящая нуклеотидная последовательность может быть встроена в экспрессионную систему любым из хорошо известных и рутинных методов, таких как методы, описанные у Sambrook et al. (см. выше). В общих чертах, кодирующий ген может быть помещен под контроль регуляторного элемента, такого как промотор, сайт связывания с рибосомой (для экспрессии в бактериях), и необязательно, оператор, так, чтобы ДНК-последовательность, кодирующая нужный полипептид, транскрибировалась в РНК в трансформированной клетке-хозяине. Особенно подходящими экспрессионными системами являются микроорганизмы, такие как бактерии, трансформированные рекомбинантным бактериофагом, плазмидными или космидными ДНКэкспрессионными векторами; дрожжи, трансформированные векторами для экспрессии в дрожжах; клеточные системы насекомых, инфицированные вирусными экспрессионными векторами (например, бакуловирусом); клеточные системы растений, трансформированные вирусными экспрессионными векторами (например, вирусом мозаики цветной капусты, CaMV; вирусом мозаики табака, TMV) или векторами для экспрессии в бактериях (например, плазмидами T1 или pBR322); или клеточные системы животных. Для продуцирования пептидов согласно изобретению могут быть также использованы бесклеточные системы трансляции. Введение молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих пептид согласно изобретению, в клеткихозяева может быть осуществлено методами, описанными во многих известных лабораторных руководствах, таких как руководство Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology (1986) и Sambrook et al. [см. выше]. В эукариотических клетках экспрессионные системы, в зависимости от целей их использования,могут быть либо временными (например, эписомными), либо перманентными (хромосомная интеграция). Кодирующий вектор может включать последовательность, кодирующую регуляторную последовательность, такую как сигнальный пептид или лидерная последовательность, если это необходимо, например, для секреции транслируемого пептида в просвет эндоплазматического ретикулума, в периплазматическое пространство или во внеклеточное пространство. Эти сигналы могут быть эндогенными по отношению к пептиду, либо они могут быть гетерологичными. Лидерные последовательности могут быть удалены бактериальным хозяином при посттрансляционном процессинге. Помимо регуляторных последовательностей может оказаться желательным введение регуляторных последовательностей, которые обеспечивают регуляцию экспрессии пептида в зависимости от роста клетки-хозяина. Регуляторными последовательностями являются нетранслируемые области вектора, такие как энхансеры, промоторы и 5'- и 3'-нетранслируемые области. Они взаимодействуют с клеточными белками хозяина, в результате чего осуществляется транскрипция и трансляция. Примерами регуляторных последовательностей являются последовательности, которые вызывают увеличение или снижение уровня экспрессии гена в ответ на химическую или физическую стимуляцию, включая присутствие регуляторного соединения, или в ответ на различные температурные или метаболические условия. Эти регуляторные последовательности и другие регуляторные последовательности, перед их встраиванием в вектор, могут быть лигированы с кодирующей последовательностью нуклеиновой кислоты. Альтернативно, такая кодирующая последовательность может быть клонирована непосредственно в экспрессионный вектор, который уже содержит регуляторные последовательности и соответствующий рестрикционный сайт. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также использованы для создания трансгенных животных, а в частности грызунов. Такие трансгенные животные входят в дополнительный аспект настоящего изобретения. Такие животные могут быть получены путем локальной модификации соматических клеток, либо посредством терапии с использованием клеток зародышевой линии для введения наследуемых модификаций. Указанные трансгенные животные могут быть, в частности,использованы в целях создания животных-моделей для анализа на эффективность молекул лекарствен- 15015629 ного средства в качестве модуляторов пептидов согласно изобретению. Клетки-хозяева В своем пятом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, трансформированной вектором согласно четвертому аспекту изобретения. Клетки-хозяева согласно изобретению, которые могут быть траснформированы, трансфецированы или трансдуцированы векторами согласно изобретению,могут быть прокариотическими или эукариотическими. Для продолжительного, высокоэффективного продуцирования рекомбинантного пептида может оказаться предпочтительной стабильная экспрессия. Примеры клеточных млекопитающих, подходящих в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны специалистам, и такими клеточными линиями являются многие иммортализованные клеточные линии, имеющиеся в Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая, но не ограничиваясь ими, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клеткиHeLa, клетки почек детенышей хомячка (ВНК), клетки почек обезьяны (COS), клетки C127, клетки 3T3,клетки ВНК, клетки НЕК 293, клетки меланомы Боуэса и клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2). Другой предпочтительной системой является бакуловирусная система (коммерчески доступная система, поставляемая в наборе, inter alia, от Invitrogen, San Diego CA). Эти методы, по существу, известны специалистам и подробно описаны в публикации SummersSmith, Texas Agricultural Experiment StationBulletin1555 (1987). Клетками-хозяевами, особенно подходящими для использования в данной системе, являются клетки насекомых, такие как клетки Drosophila S2 и клетки Spodoptera Sf9. Специалистам известно множество систем экспрессии генов в клеточных культурах растений и в целых растениях. Примерами подходящих систем экспрессии генов в клетках растений являются системы, описанные в патентах США 5693506, 5659122 и 5608143. Другие примеры экспрессии генов в клеточных культурах растений описаны в работе Zenk, Phytochemistry 30, 3861-3863 (1991). Примерами особенно предпочтительных бактериальных клеток-хозяев являются стрептококки,стафилококки, E.coli, Streptomyces и Bacillus subtilis. Примерами клеток-хозяев, особенно подходящих для экспрессии в грибках, являются дрожжевые клетки (например, S. cerevisiae) и клетки Aspergillus. Способы экспрессии В соответствии со своим шестым аспектом настоящее изобретение относится к способу экспрессии пептида, антитела или эквивалентного лиганда согласно одному из вариантов первого аспекта изобретения, к способу, включающему экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспектам изобретения или вектора согласно четвертому аспекту изобретения в клетке-хозяине. Лечение заболевания В своем седьмом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания у пациента, включающему введение указанному пациенту пептида, антитела или эквивалентного лиганда согласно первому аспекту изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспектам изобретения, вектора согласно четвертому аспекту изобретения, или клетки-хозяина согласно пятому аспекту изобретения. Этот аспект настоящего изобретения также относится к применению пептида, антитела или эквивалентного лиганда согласно первому аспекту изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспектам изобретения, вектора согласно четвертому аспекту изобретения, или клетки-хозяина согласно пятому аспекту изобретения в целях терапии или диагностики заболевания. Заболевания, которые поддаются лечению или диагностике указанным способом, характеризуются присутствием аутоантител, которые реагируют с эпитопом, содержащим GPI-якорь, где указанные антитела также предпочтительно, реагирует с эпитопами анти-TCR-V-антител, с молекулами, способными передавать сигнал, с фосфолипидами, включая фосфатидилинозит, фосфатидилсерин и кардиолипин(диацилглицерин), с фосфолипид-гликанами, с вторичными посредниками действия инсулина, с одноцепочечными и двухцепочечными ДНК и элементами пути GPI-заякоривания. Эти аутоантитела были идентифицированы авторами настоящего изобретения, которые считают, что присутствие таких антител в организме пациента ускоряет старение и связанное с ним развитие заболеваний, а также стимулирует развитие рака, опосредует манифестации наследственных или ненаследственных заболеваний и препятствует защитному действию лекарственных средств первого ряда, направленных против инфекционных патогенов. Таким образом, присутствие таких антител является общим признаком всех заболеваний, которые являются восприимчивыми к лечению или диагностике способами согласно изобретению. Многие из этих состояний подпадают под общие определения таких заболеваний, как инсулинзависимый сахарный диабет (ИЗСД), инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНЗСД), орган-специфическое или органнеспецифическое аутоиммунное заболевание, сердечно-сосудистое заболевание, кахексия при раке и рак,либо любых других заболеваний, которые ассоциируются с присутствием антител против фосфолипидов и/или с гиперинсулинемией и/или с гиперглюкагонемией, и/или с интолерантностью к глюкозе и/или с инсулинорезистентностью. Некоторые из этих состояний описаны ниже; однако при этом следует отметить, что указанные заболевания приводятся лишь в целях иллюстрации, и их список не является исчерпывающим. Заболеваниями, которые поддаются лечению или диагностике указанным способом, являются, но- 16015629 не ограничиваются ими, сахарный диабет типа I, сахарный диабет типа II, псориаз, экзема, витилиго,черный акантоз, гнездная алопеция, болезнь Альцгеймера, шизофрения, депрессия, болезнь Паркинсона,мигрень, рассеянный склероз, тяжелая миастения, амиотрофический боковой склероз и другие поражения двигательных нейронов, прогрессирующий надъядерный паралич, болезнь Пика и другие нейродегенеративные заболевания, заболевания щитовидной железы, множественная эндокринная неоплазия типа 2A и B, синдром Кушинга, болезнь Адиссона, поликистоз яичника, гипогонадизм, преждевременное облысение у мужчин, ожирение, синдром X, привычная внутриутробная гибель плода, привычный самопроизвольный выкидыш, рецидивирующий тромбоз, системная красная волчанка, глютеновая болезнь,аутоиммунный гастрит, воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилит, астма, кистозный фиброз, остеопороз и остеопения, плоский лишай, лейкоплакия, апластическая анемия и другие анемии, ночная пароксизмальная гемоглобинурия, апноэ во сне, бессонница,рак, заболевания, вызываемые вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), инфекции и заболевания, вызываемые нарушением иммунорегуляции. Эксперименты с участием человека показали, что пептиды согласно изобретению могут быть успешно использованы для повышения толерантности к перорально вводимой глюкозе (см. пример 6), и для ауторегуляции гликемии у пациентов с диабетом (см. пример 7). В соответствии с этим заболеваниями, которые поддаются лечению или диагностике согласно изобретению, являются, но не ограничиваются ими, заболевания, ассоциированные с чувствительностью к глюкозе (то есть заболевания, ассоциированные с неадекватным ответом в пероральном тесте на толерантность к глюкозе) и заболевания, ассоциированные с отсутствием или нарушением ауторегуляции уровней глюкозы в крови. Подходящий способ лечения может включать использование описанных выше пептидов или функционально эквивалентных лигандов с аналогичной конфигурацией или трехмерной структурой, где механизм, лежащий в основе указанного способа лечения, может приводить к активному или пассивному удалению нежелательных аутоантител или к деструкции клеток-мишеней, продуцирующих аутоантитело. В соответствии с этим аспектом изобретения пептиды могут быть использованы отдельно или в комбинации с агентами, стимулирующими их эффективность, в виде одной, двух или нескольких цепей, содержащих или не содержащих линкерные элементы, и в комбинации с носителями. Один из способов лечения заключается в продуцировании нейтрализующих антител против указанных аутоантител, где такие генерированные антитела связываются с указанными аутоантителами и, тем самым, предотвращают распознавание их клеток-мишеней, молекул или комплексов аутоантителами, что приводит к удалению этих аутоантител или прекращению продуцирования этих аутоантител. Альтернативно, нейтрализующие антитела или эквивалентные лиганды могут быть использованы для пассивного лечения и могут быть получены путем иммунизации животных, приводящей к продуцированию поликлональных антител или к образованию моноклональных антител, либо они могут быть получены посредством иммортализации человеческих B-клеток, генерирующих человеческие моноклональные антитела или посредством скрининга библиотек. Продуцирование таких антител и их эквивалентных лигандов описано выше. Другие методы лечения могут быть основаны на принципах индуцирования толерантности, таких как клональная делеция, анергия, супрессия или прекращение генерирования клеток для предотвращения их образования и/или секреции с использованием пептидов согласно изобретению или минимальных реактивных элементов таких пептидов или пептиднейтрализующих антител, которые реагируют с аутоантителами по механизму, приводящему к генерированию клеток-супрессоров, "вето"-клеток, клональной делеции, клональной анергии, или других механизмов, приводящих к предотвращению, образованию или высвобождению релевантных аутоантител. Эти способы могут включать использование пептидов согласно изобретению, распознаваемых этими аутоантителами, и их фрагментов, которые представляют эти аутоантитела и их последовательности. Связывание аутоантител с их мишенями может быть предотвращено конкурентыми или не-конкурентными ингибиторами, включая пептиды согласно изобретению. Кроме того, для селективного удаления релевантных аутоантител методом плазмафереза, молекулымишени или минимальные реактивные элементы таких молекул могут быть связаны с матрицей. Связывание аутоантител с их мишенями может быть также предотвращено конкурентными или неконкурентными ингибиторами, сконструированными в целях предотвращения связывания пептидов согласно изобретению или их эквивалентных лигандов с соответствующими сайтами на клетках или молекулах. Пептиды или их РНК- и кДНК-производные или варианты, сохраняющие свою активность, или другие последовательности, продукты которых действуют по аналогичному механизму, описанному выше, могут быть использованы в описанных выше целях, и могут быть упакованы в подходящие векторы,используемые в качестве вакцин. Заболевания, которые поддаются лечению и диагностике способами настоящего изобретения, подробно описаны ниже. Сахарный диабет типа I и II Диабет типа I в высокой степени ассоциирован с генетически наследуемым присутствием локуса- 17015629 генетически унаследованные аллели DQ8 и/или DQ2(8,9), однако лишь у небольшой части восприимчивых индивидуумов наблюдается развитие заболевания с клиническими проявлениями. Даже у монозиготных близнецов степень конкордантности составляет лишь 50%(10). В патогенезе диабета типа I важную роль играют факторы окружающей среды.(11) Разрушение -клеток в панкреатических островках в преклинической стадии заболевания характеризуется вырабатыванием аутоантител, ассоциированных с диабетом. Наиболее изученными антителами являются антитела против инсулина (IAA)(12), антитела против глутамат-декарбоксилазы (GADA)(13), антитела против молекулы IA-2, связанной с протеинтирозин-фосфатазой(14) и антитела против цитоплазматических островковых клеток (15). Исследования, недавно проведенные финскими учеными по выявлению описанных выше ассоциированных с диабетом антител у детей в возрасте от 3 месяцев до 2 лет с наследственной восприимчивостью к диабету, показали, что у этих детей серологическая конверсия постоянно усиливается, начиная с 6-месячного возраста, а в осенние и зимние месяцы наблюдается значительно более высокий показатель сероконверсии, чем в весенние и летние месяцы. Считается, что такую сезонную вариабельность в продуцировании аутоантител и установление диагноза диабета можно отнести за счет более высокой вероятности инфицирования в эти месяцы(9). В этом исследовании первое обнаруженное у детей аутоантитело было направлено против инсулина (IAA), на основании чего авторами был сделан вывод, что инсулин может быть главным аутоантигеном у большинства пациентов с аутоиммунным диабетом типа I. В пользу этой гипотезы свидетельствует ряд наблюдений, а именно то, что, во-первых, инсулин является лишь одним антигеном, о котором достоверно известно, что он представляет собой специфический клеточный аутоантиген; во-вторых, IAA наиболее часто встречается у детей с недавно диагностированным диабетом типа I, и в-третьих, диабет типа I может экспериментально передаваться инсулинреактивными T-клетками(16,17). Было высказано предположение, что развитие антиинсулиновой реактивности обусловлено антигенной мимикрией, однако в настоящее время не существует каких-либо экспериментальных данных,подтверждающих взаимосвязь инфекционных агентов и антигенной инсулинореактивности. При формулировании концепции относительно этиологии диабета типа I, пока еще отсутствовали ключевые наблюдения, проводимые до установления диагноза или во время установления диагноза этого заболевания. Перед диагностикой этого заболевания наблюдается увеличение отношения проинсулина к иммунореактивному инсулину, что указывает на то, что недавно диагностированный диабет типа I ассоциируется с разрушением -клеток, с периферической инсулинорезистентностью и с нарушением функции секреции контррегуляторных гормонов, таких как глюкагон(18-20). Эти наблюдения показали, что в начале заболевания диабетом типа I достигается наибольший уровень гибели -клеток. Аналогичные патологии, связанные с возрастанием отношения проинсулина к инсулину, инсулинорезистентностью и нарушением профиля секреции глюкагона, также наблюдаются и при диабете типа II(21,22). Кроме того, оба эти заболевания имеют аналогичный профиль осложнений. Общая гипотеза относительно индуцирования диабета обоих типов I и II, которая охватывает преддиабетические и постдиабетические состояния, была выдвинута исходя из недавней идентификации аутоантител, которые обладают перекресной специфичностью широкого спектра. Ключевая специфичность этого аутоантитела, которая является показателем его происхождения, заключается в реактивности этого аутоантитела, направленной на антитело против TCR V-цепей. Такие моноклональные антитела, продуцированные против анти-TCR-V-антител, были использованы в качестве индикатора возможных эффектов аутоантител аналогичной специфичности. Такие моноклональные антитела, вырабатываемые против анти-TCR-V-реагентов, обладают способностью подавлять регуляцию секреции инсулина из человеческих панкреатических островков in vitro, что приводит к осуществлению циклов гиперсекреции с последующей гипосекрецией вплоть до полного прекращения секреции инсулина островковыми клетками. Указанные моноклональные антитела, вырабатываемые против анти-TCR-V-антител, были использованы для скрининга библиотеки кДНК человеческого gt11 и были идентифицированы клоны,кодирующие белок GP-2 (молекулу, связанную с гликозилфосфатидилинозитом (GPI, секретогранин I(адгезивный белок, фосфорилированный по серину и сульфированный по тирозину, Oгликозилированный дуплекс, который связывается с мембраной посредством пептида петли с Nконцевым дисульфидными связями), ламинин-связывающий белок (ассоциированный с метастазами 67kD, адгезивный белок, ацилированный жирными кислотами), ESRPI (новая идентифицированная молекула с N-концевыми дисульфидными связями) и др. Эти молекулы обладают способностью к передаче сигнала. Моноклональные антитела интенсивно окрашивают человеческие -клетки панкреатических островков, клетки многих других эндокринных органов, включая щитовидную железу, надпочечник, желудок, кишку и другие ткани, такие как мышца и соединительная ткань. Клоны, продуцирующие моноклональное антитело, были отобраны путем скрининга на моноклональные антитела против анти-TCR-Vантител и карбиолипин, используемый в качестве индикатора фосфолипидов. Было показано, что супер- 18015629 натанты от клонов с перекрестной специфичностью реагируют с другими анионными фосфолипидами,такими как фосфатидилинозит и фосфатидилсерин; причем они также реагируют с одноцепочечной и двухцепочечной ДНК. Было высказано предположение, что аутоантитела, реагирующие с анти-TCR-V-реагентами, также обладают аналогичной перекрестной реактиностью, описанной выше, а поэтому они вызывают нарушение регуляции секреции инсулина, как было продемонстрировано для моноклонального антитела с аналогичной специфичностью. Было высказано предположение, что механизм, посредством которого эти антитела нарушают секрецию инсулина, обусловлен повышением давления на инсулинсекретирующие-клетки, вызываемым нарушением регуляции -клеток, которое приводит к увеличению уровня секреции глюкагона. Потенцирующее действие глюкагона на секрецию инсулина является хорошо известным фактом. При добавлении глюкагона, -клеток или cAMP, секреция инсулина отдельными -клетками усиливается(6). Аутоантитела, благодаря их связыванию с инозит-фосфогликановыми молекулами GPIякорей, могут предотвращать расщепление активированных инсулином фосфолипаз и, тем самым, влиять на передачу сигнала. Способность таких молекул передавать сигнал хорошо описана в литературе(5, 23). Благодаря аналогичной способности связываться с фосфоинозитгликанами, указанные аутоантитела могут блокировать медиаторы действия инсулина, и тем самым вызывать инсулинорезистентность или подавлять действие инсулина. Неадекватное генерирование/высвобождение инозитфосфогликанов наблюдалось у людей с инсулинорезистентностью(24). Псориаз Псориаз представляет собой заболевание, ассоциированное с диабетом(25,26); при этом у пациентов с псориазом, имеющих нормальный или избыточный вес и не имеющих наследственной предрасположенности к диабету, наблюдается инсулинорезистентность(27). При проведении 2-часового перорального теста на толерантность к глюкозе у индивидуумов с псориазом, имеющих нормальный уровень глюкозы в плазме, наблюдались значительно более высокие уровни инсулина по сравнению с уровнями инсулина у индивидуумов контрольной группы. В том же самом исследовании скорость исчезновения глюкозы в 15 минутном внутривенном тесте на толерантность к инсулину указывала на наличие инсулинорезистентности у индивидуумов с псориазом по сравнению с индивидуумами контрольной группы. Было продемонстрировано, что при псориазе наблюдаются высокие уровни холестерина и триглицеридов, и пониженные уровни ЛВП-холестерина, что соответствует дислипидемии, ассоциированной с гиперинсулинемией и инсулинорезистентностью(29). Также сообщалось, что при псориазе, гиперактивация системы передачи сигнала фосфолипазы С/протеинкиназы приводит к ожидаемому снижению уровней GPIзаякоренных молекул в коже пациента с псориазом и к фактическому исчезновению этих молекул в псориатических бляшках(30). Экзема У пациентов с экземой наблюдается пониженная толерантность к глюкозе. Тридцать девять пациентов были подвергнуты внутривенному тесту на толерантность к глюкозе, который указывал на значительный уровень интолерантности к глюкозе у этих пациентов(31). Витилиго Витилиго представляет собой приобретенный гипомеланоз, который, в большинстве случаев, ассоциируется с потерей меланоцитов. Хотя меланоциты, локализованные в базальном слое эпидермиса,продуцируют меланин-содержащие органеллы, называемые меланосомами, однако в поступлении антиоксидантных молекул в меланоциты, а также в образовании кофакторов, участвующих в синтезе меланина, определенную роль также играют кератиноциты(32). Витилиго встречается у 1% населения и у 9% пациентов с ИЗСД(33). Витилиго также ассоциируется с другими аутоиммунными заболеваниями, такими как аутоиммунный тиреоидит, пернициозная анемия,тромбоцитопения и т.п. Одним из факторов, влияющих на пигментацию кожи, является гормон, стимулирующий альфамеланоциты (-MSH). Связывание -MSH с его рецептором приводит к повышению тирозиназной активности и к продуцированию эумеланина(34). Продуцирование -MSH зависит от уровней инсулина и непосредственно коррелирует с инсулинорезистентностью, с уровнями инсулина натощак и с индексом массы тела(35). Меланосомы, под действием -MSH, подвергаются экзоцитозу из меланоцитов и посредством филоподий переносятся в кератиноциты(36,37). Однако было показано, что у выживших меланоцитов в пораженной витилиго коже, пре-меланосомы эктопически слущиваются с их поверхности, что указывает на то, что при витилиго нарушается регуляция созревания меланосом и экзоцитоз. У пациентов с пре-ИЗСД(18) и ИНЗСД(21), слущивание пре-меланосомов происходит параллельно с гиперпроинсулинемией и аналогично поражению -клеток при диабете. Трансформирующий фактор роста 1 (TGF-1) также играет определенную роль в меланогенезе посредством ингибирования действия тирозиназы, что приводит к гипопигментации(39). TGF также блокирует увеличение числа мелоносом под действием -MSH. TGF стимулируется при состояниях гипергликемии(40), которые часто наблюдаются при диабете. TGF1 также оказывает сильное влияние на кератиноциты, которые обеспечивают доставку кофакторов в меланоциты. Кератиноциты имеют рецеп- 19015629 торы связывания с TGF на своей поверхности, и TGF-связывающий белок представляет собой GPIзаякоренную молекулу размером 150 кДа. Было показано, что антитело против этой молекулы представляет собой комплекс всех TGF-связывающих белков, что свидетельствует о том, что GPI-заякоренный рецептор размером 150 кДа образует гетеромерные комплексы с другими TGF-рецепторами. Кератиноциты отвечают на TGF-бета посредством ингибирования их рецепторов и ингибирования синтеза ДНК(41). Поэтому аутоантитела против GPI-якоря таких передающих сигнал молекул могут блокировать передачу сигнала, необходимую для нормального функционирования кератиноцитов. В эпидермисе пораженной витилиго коже, как в самих участках поражения, так и вокруг этих участков, уровни экспрессии мембранного белка-кофактора и фактора ускорения лизиса клеток, CD59, ниже, чем в непораженной коже. CD59 представляет собой GPI-заякоренную молекулу, которая обеспечивает защиту от аутологичного лизиса клеток комплементом, а ее отсутствие или ингибирование (вызываемое описанными здесь аутоантителами) может быть ассоциировано с действием антимеланоцитов и комплемент-опосредуемой деструкцией меланоцитов при витилиго(42). Черный акантоз Витилиго и черный акантоз подобны ИЗСД и ИНЗСД, а именно черный акантоз характеризуется гиперпигментацией кожи (аналогично гиперинсулинемии при ИНЗСД), а витилиго характеризуется гипопигментацией кожи (аналогично гипоинсулинемии при ИЗСД). Причиной возникновения вышеуказанных состояний являются генетические факторы, которые также являются основными факторами, вызывающими гиперинсулинемию и инсулинорезистентность. Меланоциты, генетически восприимчивые к факторам стресса, таким как увеличение уровней -MSH, обусловленное повышением уровня инсулина,могут предотвращать меланогенез или снижать его уровни, а врожденное отсутствие такой восприимчивости может вызывать гиперпигментацию. У пациентов с черным акантозом часто наблюдается нарушение толерантности к глюкозе и гиперинсулинемия(43). Черный акантоз у подростков с ожирением также часто ассоциируется с гиперинсулинемией и инсулинорезистентностью(44-46). Данные, полученные при обследовании 102733 детей в возрасте от 8 до 15 лет, показали, что 14,4% из них страдают черным акантозом. Считается, что важными факторами, стимулирующими положительную динамику такого состояния, является снижение уровня инсулинорезистентности и гиперинсулинемии(47). Кожа Старение кожи коррелирует с повышенной эластазной активностью, повышенным уровнем экспрессии металлопротеиназ матрикса и нарушением синтеза холестеразы(48-50). GPI-заякоренный протеогликан, глипикан присутствует в околоклеточном пространстве кератиноцитов, регулирует присутствие факторов роста и действует как матриксный рецептор(51). GPI-заякоренный рецептор урокиназного активатора плазминогена, uPAR, также присутствует на кератиноцитах и связывается с uPA, секретируемым кератиноцитами. Активация урокиназной системы наблюдается при заживлении ран и при аутоиммунном буллезном заболевании кожи, пузырчатке. Ультрафиолет В активирует эту систему и его действие продолжается до 36 ч(52). Поражение, которое может возникать в случае нарушения функции uPAR под действием антител против элементов GPI-якоря, описано в разделе "Артрит и родственные заболевания". Влияние инсулина на экспрессию эластазы и металлопротеиназы матрикса хорошо известно специалистам(53-54). Считается, что антитела согласно изобретению играют определенную роль в стимуляции развития патологических состояний кожи, ассоциированных со старением, УФ-облучением и аутоиммунным заболеванием, а также в замедлении заживления ран. Гнездная алопеция Существует мнение, что это аутоиммунное состояние возникает приблизительно у 1% населения в возрасте 50 лет. Пик заболеваемости наблюдается у детей и юношей(55). Гнездная алопеция ассоциируется с различными атопическими и аутоиммунными состояниями. У таких пациентов сахарный диабет встречается не чаще, чем у других пациентов, но гораздо чаще он возникает у родственников(56-58). Обследование мужчин с ранним развитием алопеции выявило взаимосвязь этого заболевания с инсулинорезистентностью(59). Было высказано предположение, что алопеция в ее различных формах представляет собой другое проявление инсулинорезистентности у генетически восприимчивых индивидуумов и является частью всего спектра заболеваний, рассматриваемых в настоящем изобретении. Болезнь Альцгеймера Болезнь Альцгеймера ассоциируется с признаками инсулинорезистентности и нарушением толерантности к глюкозе. Среди 532 индивидуумов, не страдающих диабетом и не имеющих аллеля аполипопротеина E4, заболеваемость болезнью Альцгеймера у индивидуумов с гиперинсулиномией составляет 7,5%, а у индивидуумов с нормоинсулинемией, она составляет 1,4% (60). В процессе старения и при ускоренном прогрессировании сахарного диабета происходит образование конечных продуктов глубокого гликозилирования (advanced glycation endproducts) (AGE), обусловленное неферментативным ковалентным связыванием нередуцирующих сахаров со свободными амино- 20015629 группами. AGE изменяют физико-химические свойства молекул, подвергнутых их воздействию, а также индуцируют передачу клеточного сигнала и экспрессию гена, что приводит к осложнению диабета и развитию болезни Альцгеймера(61). Болезнь Альцгеймера и диабет типа II ассоциируются с отложением амилоидных белков, а именно островкового амилоидного полипептида (амилина) в панкреатических островках, и амилоидного бетабелка в головном мозге индивидуума с болезнью Альцгеймера. Как амилин, так и амилоидный бетабелок обычно разлагаются под действием инсулин-разлагающего фермента (IDE). Нарушение разложения обоих указанных амилоидных белков под действием IDE указывает на общий патогенетический механизм(62,63). Белки, связанные посредством GPI-якорей, могут также вносить определенный вклад в нейродегенерацию при болезни Альцгеймера. В коре лобной доли головного мозга и в гиппокампе пациентов с болезнью Альцгеймера, уровни белка, защищающие клетки от лизиса комплементом, CD59, значительно ниже, чем уровни этого белка у пациентов пожилого возраста, не страдающих деменцией. Анализ срезов коры головного мозга у пациентов с болезнью Альцгеймера показал, что у этих пациентов, уровень CD59, высвобождаемого под действием PIPLC, значительно ниже, чем у пациентов, не страдающих деменцией. Было обнаружено, что амилоидный бета-белок ингибирует CD59(64). Аутоантитела противGPI-якоря могут вызывать негативную регуляцию и повышение восприимчивости нейронов к лизису комплементом. Другим GPI-заякоренным белком является ассоциированный с лимбической структурой мембранный белок (LAMP), экспрессируемый в соме и в дендритах субпопуляций зрелых нейронов головного мозга, которые ассоциируются с лимбическими структурами. В коре головного мозга LAMP-транскрипт наиболее распространен в областях, ответственных за познавательную способность и память, при этом они слабо экспрессируется в областях переднего мозга и промежуточного мозга, которые считаются классическими лимбическими системами, и почти не экспрессируются в нелимбических областях, в областях среднего мозга и в областях ромбовидного мозга. Было показано, что этот транскрипт присутствует в головном мозге взрослого индивидуума, как было установлено методами гибридиазции in situ(65). Ингибирование или нарушение регуляции этих LAMP-молекул, вызываемое аутоантителами против GPI,может ассоциироваться с утратой познавательных способностей у пациентов с болезнью Альцгеймера или с другими возрастными психическими нарушениями, включая нарушения познавательной способности и памяти. Катепсин D, GPI-заякоренный лизосомный фермент (аспартат-протеиназа)(66), может также играть определенную роль в развитии болезни Альцгеймера. Очевидно, что у пациентов с болезнью Альцгеймера, по сравнению с индивидуумами контрольной группы, не страдающими болезнью Альцгеймера, катепсин D ингибируется в коре лобной доли головного мозга(67). Некоторыми последствиями дефицита катепсина D у мышей, дефицитных по этому ферменту, являются высокая степень аккумуляции липофусцина нервных клеток восковой железы и атрофия слизистой тонкого кишечника и лимфоидных органов, что позволяет предположить, что катепсин D играет важную роль в гомеостазе ткани(68). Гепарансульфатные протеогликаны (HSPG), которые представляют собой GPI-заякоренные молекулы, присутствуют повсюду в базальных мембранах и клеточных мембранах, и было показано, что они участвуют в развитии болезни Альцгеймера. Один из таких HSPG, глипикан-1, в избытке экспрессируется у пациентов с церебральной амилоидной ангиопатией и болезнью Альцгеймера(69). HSPG локализуются в амилоидных фибриллах, присутствующих в нейритных бляшках, и в сосудистой бляшке при конгофильной ангиопатии в головном мозге пациентов с болезнью Альцгеймера. Было продемонстрировано,что HSPG также присутствуют в примитивных бляшках, что позволяет предположить, что они играют определенную роль на ранних стадиях образования бляшек(70). HSPG взаимодействуют с HDL и Apo E с удалением избытка холестерина из головного мозга(71), что способствует формированию целостности сосудов головного мозга. Старческие бляшки часто наблюдаются поблизости от капилляров, что позволяет предположить, что необходимым условием для образования бляшек может быть нарушение гематоэнцефалического барьера(72). Разрушение сосудов является важным фактором патогенеза болезни Альцгеймера и соответствует роли патогенных антител, описанных в настоящем изобретении. И наконец, изменение метаболизма глюкозы/энергетического метаболизма в стареющем мозге и снижение чувствительности рецепторов инсулина на нервных клетках (инсулинорезистентность), наблюдаемое при диабете типа II, а также одновременное нарушение регуляции передачи сигнала и нейротропных молекул способствуют запуску каскада амилоидогенных реакций и образованию гиперфосфорилированного белка tau, а также формированию нейрофибриллярных клубков в пораженных нейронах у пациентов с болезнью Альцгеймера. Шизофрения и депрессия Шизофрения описана в литературе как "церебральный диабет" вследствии происходящих при этом заболевании нарушений метаболизма глюкозы в головном мозге в сочетании с инсулинорезистентностью(73,74). У пациентов этой группы, в отличие от нормальных индивидуумов, более часто наблюдается интолерантность к глюкозе и диабет типа II (The British Journal of Psychiatry (2004) 184: S112-S114) (Diabetes Care 28:1063-1067, 2005). Мании и позитивные симптомы шизофрении ассоциируются с гипергликемией, гипердопаминергией и гиперсеротонергией, а депрессия и негативные симптомы шизофрении- 21015629 ассоциируются с гипогликемией, гиподопаминергией и гипосеротонергией. Эти два состояния находятся на противоположных сторонах спектра заболеваний этого типа(74). Приблизительно у 50% пациентов с эндогенной депрессией наблюдается прямая корреляция между инсулинорезистентностью и продолжительностью заболевания. У таких пациентов также наблюдается гиперсекреция кортизола(75). Болезнь Паркинсона Болезнь Паркинсона (БП) характеризуется прогрессирующей потерей 70-80% допаминергических нейронов в черном веществе(76). Считается, что дегенерация нейронов обусловлена окислительным стрессом из-за высоких уровней допамина (76). Паталогоанатомические исследования тканей головного мозга пациентов с БП, выявили повышение уровня окислительного стресса и нарушение поглощения глюкозы в популяции нейронов(77). Сообщалось, что у 50-80% пациентов с БП наблюдается нарушение толерантности к глюкозе(78). Результатом такого нарушения является гипергликемия, а следовательно гиперинсулинемия. Известно, что инсулин играет важную роль в регуляции метаболизма в нейронах и в передаче сигнала. Было показано,что инъекция возрастающих количеств инсулина крысам приводит к повышению уровня секреции допамина(79). Кроме того, было продемонстрировано, что инсулин регулирует синтез и активность переносчика допамина(80) и было обнаружено, что нонапептид, находящийся у C-конца -цепи инсулина, в высокой степени ингибирует поглощение допамина переносчиком допамина у крыс(81). Такие молекулыпереносчики прекращают передачу допаминергического сигнала путем выведения нейромедиаторов из синаптического пространства. Известно, что сам допамин вызывает гипергликемию в результате непосредственного высвобождения глюкозы из гепатоцитов(82). Это может способствовать нарушению толерантности к глюкозе у пациентов с БП. Было показано, что нейротрофический фактор, происходящий от головного мозга и глиальных клеточных линий, представляет собой сильнодействующий фактор выживания допаминергических нейронов, которые разрушаются при БП, и других нейронов симпатической, сенсорной и центральной нервной системы, которые разрушаются при других нервных расстройствах, включая амиотрофический боковой склероз, расстройство сна, шизофрению и болезнь Альцгеймера. В in vitro системе, нейротрофический фактор глиальных клеток (GDNF) снижает индуцированную допамином клеточную гибель на 60-70%(83). Было также показано, что структурно родственный полипептид, называемый нейтурином (NTN),представляет собой сильнодействующий фактор выживания допаминергических, двигательных, симпатических и сенсорных нейронов. Оба рецептора для GDNF (GDNFR-) и NTN (NTNR-) представляют собой GPI-заякоренные белки, которые являются частью трансмембранного тирозинкиназного рецептораRet(84). Антитела против элементов GPI-якоря этих рецепторных белков могут блокировать их активность в передаче сигнала и, тем самым, нейтрализовать их нейротропную функцию. Мигрень Сообщалось, что антифосфолипидные антитела и нарушение регуляции глюкозы наблюдаются при мигрени (85,86). Рассеянный склероз При параллельном обследовании 357 пациентов с PC в клинических отделениях для больных с PC,проводимом в целях определения взаимосвязи PC с другими аутоиммунными заболеваниями, было обнаружено, что 15,4% пациентов имели родственников первой степени, страдающих PC и другими аутоиммунными заболеваниями. Наиболее часто встречающимися аутоиммунными заболеваниями, которые обычно ассоциируются с PC, являются болезнь Грейвса, ревматоидный артрит, инсулинзависимый сахарный диабет типа I и увеит(87). Аутореактивные T-клетки пациентов с диабетом и PC отвечали на классические аутоантигены панкреатических островков, а также аутоантигены ЦНС. В анализах на пролиферацию T-клеток приблизительно 90% из 38 пациентов с PC оказались восприимчивыми к базальному белку миелину (МРВ). Восприимчивость к проинсулину и аутоантигенам островковых клеток IA-2 была почти такой же,как при диабете, имела такие же показатели, как ответы на MPB(88). Такие ответы редко наблюдались у индивидуумов контрольной группы. Исследования T-клеточных ответов у 54 детей с недавно диагностированным диабетом показали, что у 53% детей наблюдалась восприимчивость к MPB(88). Хотя эти перекрывающиеся T-клеточные ответы не являются показателем вторичного клинического заболевания, однако они в значительной степени позволяют предположить о наличии общего механизма развития обоих заболеваний. У пациентов с PC наблюдалась повышенная восприимчивость к гипергликемии натощак, что указывает на снижение контррегуляторного ответа, в котором участвуют глюкагон и кортизол(89). Механизм гиперпроинсулинемии был уже описан в литературе, и тот факт, что пациенты с PC обнаруживают T-клеточные ответы на проинсулин, указывает на то, что у пациентов с PC, разрушение -клеток, в основном, происходит на субклиническом уровне. Те же самые аутоантитела, которые распознают анти-TCR-V-антитела и GPIзаякоренные молекулы, могут вызывать разрушение -клеток посредством нарушения регуляции панкреатических -клеток и разрушение миелиновой оболочки под действием GPI-заякоренных белков, которые распределяются по миелиновой оболочке в процессе созревания олигодендроцитов(90).- 22015629 Тяжелая миастения Сообщалось, что тяжелая миастения (ТМ) является компонентом полигландулярных синдромов типа I и типа II(91,92). Считается, что в патогенезе TM определенную роль играют антитела против ацетилходинового рецептора (ACHR) и ацетилхолинэстеразы(93,94). Однако были выявлены пациенты с генерализованной TM, которые обнаруживали серонегативную реакцию на эти антитела, что указывает на то,что в индуцировании заболевания участвуют и другие аутоантитела или факторы. Сообщалось, что при генерализованной TM, у пациентов с TM наблюдались повышенные уровни аутоантител против ДНК(95) и высокие уровни волчаночных антикоагулянтных антител(96).TM представляет собой заболевание нервномышечного соединения, характеризующееся связыванием ацетилхолина (ACH) с ACHR. Ацетилхолинэстераза гидролизует ацетилхолин, освобождая, тем самым, рецепторы для связывания с новыми молекулами и передачи сигнала. ACH и ацетилхолинэстераза восприимчивы к регуляции уровнями инсулина и глюкозы. Сообщалось, что инсулин индуцирует гипогликемию, что приводит к значительному снижению ацетихолинэстеразной активности в головном мозге крыс(97). В головном мозге крыс с гипергликемией уровень ацетилхолина обычно снижен, а инсулин повышает эти уровни(98). У крыс с диабетом также наблюдается снижение чувствительности ацетилхолинового рецептора(99). С точки зрения настоящего изобретения аутоантитела, которые распознают сигнальные молекулы,ДНК и фосфолипиды, ответственны за нейромышечные патологии при ТМ, вызываемые нарушением регуляции метаболизма глюкозы и функций передачи сигнала молекулами. Ацетилхолинэстераза представляет собой GPI-заякоренную молекулу(100), и ее функция может быть нарушена под действием молекул, повышающих уровни ACH, и тем самым разрушающих ACH-рецептор. Было показано, что экспрессия рецептора для цилиарного нейротрофного фактора (который также является GPI-заякоренным) способствует развитию диабетической ретинопатии(101). Уровни этого рецептора в мышцах у серопозитивных пациентов с TM(102) являются показателем этиологической взаимосвязи между TM и диабетической невропатией. Амиотрофический боковой склероз, заболевания двигательных нейронов и родственные заболевания Большое число пациентов с амиотрофическим боковым склерозом (АБС) являются интолерантными к глюкозе. Однако существуют разногласия относительно того, является ли нарушение метаболизма первичной патологией, либо оно возникает вследствие мышечной атрофии. Исследования эугликемической аглютинации инсулина, проводимые с участием пациентов с АБС и с участием двух контрольных групп индивидуумов, имеющих соответствующее заболевание и соответствующую массу тела, выявили,что чувствительность к инсулину у пациентов с АБС, по сравнению с контрольными группами, снижалась(103). Было продемонстрировано, что у пациентов с АБС, по сравнению с индивидуумами контрольных групп, наблюдались аномальные уровни глюкагона в плазме. Было показано, что у пациентов, которые два раза принимали экспериментальную пищу с перерывом в 1 неделю, обнаруживалась гиперглюкагонемия натощак через 1/2 и 2 ч после приема пищи, по сравнению с индивидуумами контрольных групп(104). Сообщалось, что у многих пациентов с АБС наблюдались признаки сахарного диабета типаII(105). Также сообщалось, что конечные продукты глубокого гликозилирования (advanced glycation endproducts) (AGE), которые вызывают хронические осложнения диабета, играют определенную роль в патогенезе нейродегенеративных заболеваний, таких как прогрессирующий надъядерный паралич, болезнь Пика, гуамский комплекс "амиотрофический боковой склероз/парксинсонизм-деменция"(106). Известно,что выживание и рост двигательный нейронов зависит от нейротрофических факторов. Сильнодействующими нейротрофическими факторами/факторами выживания двигательных нейронов являются инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-I) и глиальный нейротрофический фактор (GDNF) (107). Очевидно,что отсутствие трофических факторов приводит к дегенерации зрелых нейронов. Хотя у пациентов с АБС было обнаружено повышение уровня некоторых IGF-связывающих белков, однако у таких пациентов сывороточные уровни IGF-I и инсулина были значительно снижены(108). Поэтому усиление метаболизма глюкозы/инсулина/глюкагона должно иметь важное значение для выживания и роста двигательных нейронов. Помимо инсулина и IGF-I важную роль в выживании нейронов также играют GDNF и нейтурин.GDNF стимулирует выживание двигательных нейронов in vivo и in vitro и "спасает" их от гибели. Наивысший уровень экспрессии GDNF наблюдается в человеческой скелетной мышце, а в частности в нервно-мышечных соединениях. GDNF был также обнаружен в аксонах и в окружающих их швановских клетках периферических нервов(109). Иммуногистологический анализ показал, что GDNF-рецептор, GFR-1, локализуется в миелинизированных периферических нервах и в нервно-мышечных соединениях. Анализ, проводимый с помощьюOT-ПЦР, также показал, что мРНК GFR-1 присутствует в переднем роге спинного мозга, но отсутствует в скелетных мышцах, что позволяет предположить, что такая молекула играет главную роль в поглощении и интернализации GDNF в нервно-мышечном соединении(110). Нейтурин, нейротрофический фактор, родственный фактору GDNF, связывается с его рецептором GFR-2, а также способствует выжива- 23015629 нию нейронов(111). Все идентифицированные таким образом GFR1-4-рецепторы, с которыми связываются лиганды семейства GDNF, являются GPI-заякоренными и передают сигнал посредством взаимодействия Ret с членами киназ семейства Src, а поэтому являются необходимым для роста и выживания нейритов(112). В процессе нейродегенерации участвуют генетические факторы, и в этот процесс также вовлечены гены не-МНС(113). Поэтому предполагается, что у индивидуумов с генетическими нарушениями антитела против элементов GPI-якоря могут значительно влиять на передачу сигнала GPI-заякоренных молекул, и тем самым препятствовать выживанию нервных клеток. Заболевания щитовидной железы Заболевания щитовидной железы охватывают спектр состояний от гиперсекреции, наблюдаемой при болезни Грейвса, до гипосекреции, наблюдаемой при тиреоидите Хашимото. Риск развития заболеваний щитовидной железы значительно возрастает у пациентов с диабетом. Произвольно отобранную группу, состоящую из 1310 взрослых индивидуумов с диабетом, обследовали на наличие заболеваний щитовидной железы путем определения концентраций свободного тироксина и тиреотропного гормона(TSH). Общая заболеваемость составляла 13,4%, а самый высокий уровень заболеваемости, а именно 31,4% наблюдался у женщин с диабетом типа I(114). Стадии синтеза и секреции гормонов щитовидной железы регулируются TSH. Его регуляторная функция заключается в передаче сигнала посредством вторичных мессенджеров инозитфосфогликана(IPG). TSH стимулирует высвобождение полярной головной группы IPG. Было показано, что такой растворимый IPG модулирует метаболизм иода в тироцитах(115). IPG, выделенный из свиных тироцитов, индуцировал пролиферацию фибробластов и свиных тироцитов(116). Тироциты богаты GPI-заякоренными молекулами, которые имеют апикальное и базолатеральное распределение(117). Некоторые GPI-заякоренные молекулы, такие как HSPG, участвуют в транспорте тироглобулина (Tg) из фолликулярного просвета в базолатеральную мембрану тироцитов, из которых Tg высвобождается в кровоток. Тироглобулин взаимодействует с поверхностными HSPG посредством сайта, функционально связанного с мегалинсвязывающим сайтом. Мегалин представляет собой эндоцитный рецептор липопротеина низкой плотности, который переносит HSPG-связанный Tg через эпителиальные клетки (118,119). Иммуногистохимические исследования функций HSPG и других компонентов базальных мембран выявили патологические изменения в базальных мембранах при тиреоидите Хашимото, при гиалинизирующих трабекулярных аденомах, папиллярных карциномах, анапластических карциномах и других гистопаталогических вариантах заболеваний щитовидной железы(120). Семейство GPI-заякоренных молекул(GFR1-4) представляет собой рецепторы для глиального нейротрофического фактора (GDNF). Эти молекулы присутствуют в нормальных тканях и в опухолях щитовидной железы, в медуллярных карциномах щитовидной железы (GFR4), в феохромоцитомах, в области паратиреоидной гиперплазии, в ганглионевромах кишечника, в пораженных участках скелета, и в невромах слизистой, которые известны под общим названием множественная эндокринная неоплазия типа 2A и B(21). Синдром Кушинга и болезнь Аддисона Болезнь Кушинга обычно ассоциируется с интолерантностью к глюкозе, диабетом, центральным ожирением, волосатостью и повышенным артериальным давлением. Главным диагностическим признаком этого заболевания является гиперкортицизм, который может возникать в результате длительной гиперсекреции ACTH у 20-40% пациентов(122); причем он может возникать и в отсутствие аденомы гипофиза, а повышенная секреция кортизола может быть обусловлена односторонней или двусторонней гиперплазией надпочечника в присутствии или в отсутствии автономно секретирующихся микро- или макроузелков(123). В недавно проведенном одновременном перекрестном обследовании 90 пациентов с ожирением и диабетом сообщалось, что заболеваемость синдромом Кушинга составляет 3,3%(124). К этому числу следует добавить множество преклинических и субклинических случаев заболевания синдромом Кушинга,которые были представлены как сахарный диабет в фазе декомпенсации. Аналогичным образом сообщалось, что хронический гиперкортицизм в легкой степени при диабете типа I характеризуется увеличением уровня кортизола натощак и свободного кортизола в моче, а также повышением восприимчивости к овечьему кортикотропин-релизинг гормону(125). Гиперсекреция АСТН может происходить и в отсутствии адономы гипофиза, но при наличии гиперкортизолинемии(126), что дает основание предположить о нарушении нормальной негативной регуляции с обратной связью. В некоторых работах была показана роль GPI-заякоренных молекул и инозитфосфогликанов, высвобождаемых посредством активации фосфолипазы C, в регуляции секреции гормонов гипофиза и секреции гормонов, стимулируемых этими гормонами из надпочечников, щитовидной железы, гонад и т.п. (127-129). Поскольку было также показано, что антитела против GPI-заякоренных молекул индуцируют пролиферацию клеток посредством индуцирования потери активности, ингибирующей активацию сигналов, то было высказано предположение, что описанные здесь аутоантитела обладают патогенным действием, варьирующимся от нарушения периодической секреции гормонов до ингиби- 24015629 рования или усиления секреции, и даже образования опухолей (130,131). Болезнь Аддисона также является компонентом аутоиммунного полигландулярного синдрома типаII с повышенным риском развития инсулинзависимого сахарного диабета, витилиго, алопеции, пернициозной анемии, глютеновой болезни, тяжелой миастении и первичного гипогонадизма(91). Как и синдром Кушинга, болезнь Аддисона представляет собой другой пример последствий эндокринной стимуляции,вызываемой аутоантителами. При этом здоровая эндокринная железа будет постоянно осуществлять сверхсекрецию гормонов, а железа с генетическими нарушениями утратит эту способность, в результате чего будет наблюдаться гипосекреция гормонов. СПКЯ, гипогонадизм и преждевременное облысение у мужчин Синдром поликистоза яичника (СПКЯ) является причиной гиперадрогении у 95% женщин и обычно проявляется волосатостью, акне, центральным ожирением, облысением по мужскому типу и другими физическими изменениями по типу маскулинизации. Дифференциальный диагноз СПКЯ направлен на исключение синдрома Кушинга и опухолей андроген-продуцирующего яичника и надпочечника. Андрогенными расстройствами являются наиболее распространенные эндокринопатии, встречающиеся у 1020% женщин(132). Гиперандрогения развивается в результате генерализованного нарушения регуляции стероидогенеза, которое может происходить в яичниках или надпочечниках. Такое нарушение регуляции, очевидно,является следствием модуляции центральных и периферических факторов, регулирующих действие гормонов. Повышенные уровни GnRH и LH и недостаточные уровни FSH являются провоцирующими факторами, вызывающими хроническую ановуляцию при СПКЯ(133). Однако, очевидно, что гиперинсулинемия играет важную роль в стимуляции скрытых нарушений регуляции стероидогенеза у индивидуумов с генетическими отклонениями. При облысении по мужскому типу как у женщин, так и у мужчин с генетическими нарушениями инсулин взаимодействует с андрогенами, что приводит к регуляции образования волосяных фолликулов и ассоциированных с ними сальных желез(134). При обследовании 5 семей в целях выявления нарушений секреции инсулина у мужчин и женщин с СПКЯ, являющихся членами семейств, к которым принадлежали индивидуумы с СПКЯ, было обнаружено, что 69% из 24 женщин, членов этих семейств, имели гиперинсулинемию, а 79% из них имели СПКЯ. Среди восьми мужчин, членов этих семейств, у 88% наблюдалось преждевременное облысение(135). Гиперинсулинемия при СПКЯ ассоциируется с интолерантностью к глюкозе, с повышенными уровнями инсулина натощак и инсулинорезистентностью. При этом может также наблюдаться атерогенный липидный профиль. Пациенты с СПКЯ обнаруживают повышенную заболеваемость диабетом типаII и сердечно-сосудистыми заболеваниями(136). Считается, что гиперандрогения у инсулинорезистентных женщин обусловлена стимулирующим действием инсулина на продуцирование стероидных гормонов яичника. Инсулин и инсулиноподобный фактор роста I (IGF-I) могут усиливать стимулируемый гонадотропином стероидогенез посредством увеличения уровня экспрессии ключевых стеролрегулирующих генов в клетках яичника(137). Инсулин и IGF1 также обнаруживают синергическое действие с лютеинизирующим гормоном, что приводит к увеличению активности цитохрома P4 50c17 в надпочечниках. Инсулин индуцирует ингибирование продуцирования IGF-1-связывающего белка (IGFBP-I) из культивируемых человеческих гранулезных клеток(138). Снижение уровней IGF-I и рецепторов IGF-I на гранулезных клетках приводит к снижению уровня ароматизации стероидов(139). Недостаточная ароматизация андростендиона и тестостерона с образованием эстрона и эстрадиола, помимо других факторов, включая повышенный уровень стероидогенеза в клетках оболочки, вызываемый гиперинсулинемией, приводит к избыточному образованию свободных андрогенных гормонов в кровотоке. Кроме того, в клетках яичника, культивированных в присутствии инсулина, концентрация прогестерона, по сравнению с контролем, резко повышалась от 2,50,2 нг/мл до 5,40,3 мг/мл(138). Этот гормон взаимодействует с генераторами импульсов гонадотропин-рилизинг-гормонов(GnRH) в гипоталамусе по типу обратной связи, что приводит к стимуляции секреции LH и FSH из передней доли гипофиза. В противоположность этому, пациенты с гипогонадотропным гипогонадизмом имели пониженную чувствительность к инсулину Помимо множества механизмов, в которых инсулин играет свою регуляторную роль, в процессе овуляции также участвуют GPI-заякоренные молекулы. Гранулезные клетки богаты протеогликанами,содержащими сульфат гепарана (HSPG), которые являются GPI-заякоренными. Эксперименты по мечению продемонстрировали, что 20-30% протеогликанов, содержащих сульфат гепарана на клеточной поверхности, являются GPI-заякоренными и удаляются под действием фосфатидилинозит-специфической фосфорилазы C(141). Фолликулостимулирующий гормон (FSH) и человеческий хорионический гонадотропин индуцирует изменения концентрации GPI, что указывает на то, что эти молекулы являются восприимчивыми к действию гормонов(142). Было показано, что сигнал-трансдуцирующее действие рецепторов пролактина на гранулезные клетки в присутствии пролактина опосредуется генерированием растворимых молекул гликозилфосфатидилинозита. В FSH-примированных гранулезных клетках, пролактин и GPI-молекулы блокируют стимулируемую гонадотропином 3-HSD-активность(143). 3-HSD осуществляет поступление холе- 25015629 стерина на тестостероновый путь, а следовательно, механизм отрицательной обратной связи регулируется GPI-молекулами.HSPG также обладают антикоагулирующим действием и экспрессируются в фолликулах перед овуляцией, после чего их уровень в фолликулах временно снижается. Они взаимодействуют с ингибиторами протеазы, что позволяет предположить, что они участвуют в регуляции отложения фибрина в фолликулах(144). Поскольку для овуляции требуется ремоделирование ткани и протеолиз, то дизрупция HSPG может приводить к ановуляции.HSPG могут также играть определенную роль в развитии фолликулов. Исследования, проводимые на клеточных линях гепатомы, продемонстрировали, что экзогенно добавленные HSPG были интернализованы, и их свободные цепи наблюдались в ядре. Это приводило к прекращению развития клеток на фазе Gl(145). Аналогичное нарушение регуляции роста может наблюдаться в фолликулярных клетках, и такое нарушение вызывается антителами против таких GPI-заякоренных молекул. Ожирение Инсулин и лептин сообщают координированные сигналы гипоталамусу, который регулирует энергетический баланс и массу тела. Было показано, что повышение уровней инсулина стимулирует продуцирование лептина(146). Рецепторы лептина присутствуют на нейронах гипоталамуса, которые также экспрессируют нейропептид-Y (NPY) и проопиомеланокортин (РОМС). Было показано, что повышение уровня лептина в плазме ингибирует продуцирование NPY, что приводит к снижению потребления пищи(147). Лептин также повышает уровень экспрессии РОМС, предшественника -меланоцитстимулирующего гормона (MSH) (148). -MSH действует в гипоталамусе, где он способствует снижению потребления пищи и сообщает чувство сытости(149). При ожирении гиперинсулинемия и гиперлептинемия сочетаются с инсулинорезистентностью и резистентностью к лептину(150). С увеличением инсулинорезистентности снижается влияние инсулина на продуцирование лептина(151). Исследования на животных также продемонстрировали, что предварительная обработка инсулином в течение 3 дней приводит к блокированию индуцированных лептином ответов(150). Очевидно, что гиперинсулинемия и инсулинорезистентность играют решающую роль в регуляции индуцированного лептином потребления пищи и массы тела. Кроме того, во время физиологической гиперинсулинемии подавляются уровни свободных жирных кислот в плазме(152). Поэтому лечение такого состояния в соответствии с настоящим изобретением позволит решить проблемы ожирения, ассоциированного с инсулинорезистентностью. Синдром X Синдром X представляет собой метаболическое расстройство, характеризующееся гиперинсулинемией, гиперхолестеринемией, гипертензией и ишемической болезнью сердца(153). В атеросклеротических повреждениях участвуют GPI-заякоренные молекулы, такие как T-кадгерин(154), Считается, что первичной патологией является гиперинсулинемия, которая приводит к инсулинорезистентности, являющейся причиной родственных патологий(155). С того времени, когда впервые появилось описание этого синдрома, стало очевидным, что спектр заболеваний, охватываемых таким синдромом, гораздо шире, чем это предполагалось сначала. Было обнаружено, что у пациентов мужчин со стенокардией, которые не страдали ожирением и ишемической болезнью сердца, наблюдалась инсулинорезистентность, гиперинсулинемия и более высокие уровни триглицеридов и липопротеинов менее высокой плотности, чем у здоровых индивидуумов контрольной группы, а поэтому был сделан вывод, что ишемия миокарда также является компонентом синдрома X(156). Очевидно, что гиперурикемия и первичный неалкогольный стеатогепатит(158) коррелируют с гиперинсулинемией и инсулинорезистентностью, а поэтому их можно рассматривать как компоненты метаболического синдрома. Инсулинорезистентность и гиперинсулинемия наблюдается у 70% индивидуумов, не страдающих ожирением и диабетом, но страдающих наследственной гипертензией. Кровяное давление коррелирует с инсулинорезистентностью, которая также коррелирует с чувствительностью к соли и с концентрацией ангиотензина II(159). Было показано, что изменение концентрации инсулина в in vitro-экспериментах и изменение чувствительности к инсулину в in vivo экспериментах влияет на транспорт противоионовLi+/Na+ и Na+/H+ (CT). При гипертензии, ИЗСД и при гипертрофической кардиомиопатии, высокий уровень CT ассоциируется с ремоделированием сердечной мышцы и сосудов(160). Обычно гипертрофическая кардиомиопатия в легкой форме и преходящая гипертрофическая кардиомиопатия наблюдаются у детей,рожденных от матерей, страдающих диабетом. Имеются также сообщения о смерти плода, вызванной таким состоянием(161). Хотя обычно события, ассоциированные с синдромом X, наблюдаются в пожилом возрасте, однако имеются данные, свидетельствующие о том, что такое состояние может возникать в детстве и в юности(162,164). Заболевания, ассоциированные с вырабатыванием антител против фосфолипидов и волчаночными антикоагулянтами Антитела против фосфолипидов и волчаночные антикоагулянты ассоциируются с привычной внутриутробной гибелью плода, самопроизвольными выкидышами и тромбозом. Описанные ниже исследования были проведены с участием 51 пациента, у которых были обнаружены антитела против фосфоли- 26015629 пидов, и 53 беременных женщин. У 90,0% из 33 беременных женщин, агрессивная терапия, давала благоприятный эффект, однако из всех случаев с благоприятным исходом у 48,6% наблюдалось развитие сахарного диабета беременных(165). Это указывает на то, что антитела против фосфолипидов могут быть провоцирующими факторами восприимчивости к развитию диабета, которые были обнаружены при стрессах, возникающих во время беременности. При исследовании 1698 произвольно выбранных беременных женщин детородного возраста, то есть от 16 до 37 лет, уровни антител против кардиолипина,превышающие нормальные уровни, были обнаружены у пациенток с гипертензией, преэклампсией, диабетом беременных, сахарным диабетом типа I, венозным тромбозом, тромбоцитопенией и ревматическими заболеваниями(166). При обследовании 29 детей и подростков с диабетом было обнаружено, что антитела против антикардиолипина чаще всего встречаются у пациентов с ИЗСД, чем у здоровых пациентов. Эти антитела чаще обнаруживались у пациентов, которым был поставлен диагноз диабета в последние менее, чем 6 месяцев, чем у пациентов, которым был поставлен диагноз диабета более, чем 5 лет назад. Этот факт объясняется аномальным иммунологическим ответом на ранних стадиях сахарного диабета(167). В других исследованиях диабета, уровень антител против кардиолипина у пациентов с осложнениями диабета был выше, чем у группы индивидуумов без осложнений(168), что дает основание предполагать, что такие антитела могут играть определенную роль в развитии осложнений диабета. Известно, что на ранней стадии развития осложнений диабета возникает дисфункция сосудистого эндотелия. При обследовании 45 пациентов с ИЗСД без видимых клинических признаков сосудистых осложнений, у одной трети пациентов, по сравнению с индивидуумами контрольной группы, наблюдались более высокие уровни антител против кардиолипина, положительно коррелирующие с уровнями эндотелина-1(169). Кардиолипин обычно используется в качестве индикатора присутствия различных родственных фосфолипидов, таких как фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозит, фосфатидиновая кислота и фосфатидилхолин. Исследование 70 образцов показало, что реактивность кардиолипина носит индивидуальный характер. Уровни антител против кардиолипинов или антикоагулянтов не коррелировали с уровнями антител против других фосфолипидов(170). Анализ большого числа сывороток, взятых у беременных с токсикозами, показал, что среди пациенток с положительным результатом анализа на антитело против кардиолипина, 28,6% имели также положительный результат анализа на антитело против фосфатидилсерина и антитело против фосфатидилинозита; 23,8% из этих пациенток имели положительный результат анализа на антитело против фосфатидилинозита, а 19% имели положительный результат анализа на антитело против фосфатидилэтаноламина. При этом наибольший процент приходился на женщин, у которых обнаруживались антитела IgM против кардиолипина (171). В аналогичных исследованиях с участием пациентов с СКВ, наиболее высокий % реактивности пациентов наблюдался у пациентов с антителами против кардиолипина, а после них следовали пациенты с антителами против фосфатидилсерина, против фосфатидиновой кислоты и против фосфатидилинозита(172). Было обнаружено, что реактивность по отношению к последнему фосфолипиду преобладала в группе из 77 пациентов в возрасте 51 год, страдающих сердечно-сосудистым заболеванием неясной этиологии, но не страдающих СКВ(173). Проводимые в течение 10 лет наблюдения 39 пациентов, страдающих первичным антифосфолипидным синдромом, и не страдающих СКВ или другими заболеваниями соединительных тканей, выявили, что у 15 из этих пациентов, через 10 лет наблюдалось поражение органов. У восьми из этих пациентов развивался гемипарез, а у 3 пациентов наблюдалась деменция; причем у каждого из этих пациентов наблюдалось одно из таких нарушений, как квадриплегия, застойная кардиомиопатия, инфаркт миокарда, инфаркт легких и почечное заболевание на конечной стадии(174). Глютеновая болезнь Глютеновая болезнь без симптомов или с клиническими симптомами обычно ассоциируется с диабетом типа I. В надавно проведенных исследованиях было обнаружено, что глютеновая болезнь встречается у 5,7% больных с диабетом, и у 1,9% среди их родственников(175). Высокий уровень заболеваемости глютеновой болезнью в субклинической или бессимптомной форме также наблюдался у пациентов с желудочно-кишечными расстройствами неясной этиологии или не поддающимися лечению; при этом было показано, что из 108 таких пациентов, 42,8% имели субклиническую или бессимптомную форму глютеновой болезни(176). Экстраинтестинальными признаками субклинической формы глютеновой болезни является железодефицитная анемия (27%), алопеция и герпетиформный дерматит (11,3%) и ИЗСД (20%). При этом сообщалось, что у больных с диабетом и у их родственников первой степени родства часто наблюдаются повышенные уровни антитела, ассоциированные с глютеновой болезнью(177). В отсутствии глютеновой болезни, преобладание антител против трансглутаминазы наблюдалось у 13,4% пациентов с диабетом и у 7% их родственников, не страдающих диабетом; причем у 3,5% из 913 родственников были обнаружены антитела IgG против трансглутаминазы, а у 44% из них обнаруживались эндомизиальные антителаIgA(177). Аналогичным образом, у пациентов с глютеновой болезнью наблюдался повышенный уровень антител, ассоциированных с диабетом. Из обследованных 15 детей с глютеновой болезнью, у 27% были- 27015629 обнаружены антитела против инсулина, и у 20% из них глютеновое заболевание развивалось после приема пищи, не содержащей глютен(178). У 23% пациентов с глютеновой болезнью также присутствовали антитела против фермента (глутаминовая кислота)декарбоксилаза(179). Малабсорбция является главным признаком глютеновой болезни. Молекулой, которая может быть ответственна за дефицит железа при глютеновой болезни, является меланотрансферрин (p97), который представляет собой железосвязывающий мембранный гликопротеин, имеющий 40%-ную гомологию с трансферрином. Эта молекула является GPI-заякоренной и имеет апикальное распределение в эпителиальных клетках тонкого кишечника(180). Муцинсвязывающий белок, являющийся другой GPI-заякоренной молекулой, представляет собой общий компонент апикального желудочно-кишечного эндотелия слизистой, образующего защитный барьер(181). За нарушение регуляции этой молекулы и подобных ей молекул ответственны антитела, которые распознают эпитопы с GPI-якорем и которые могут влиять на связывание с муцином и разрушать указанный защитный барьер, что приводит к разрушению слизистой желудочно-кишечного тракта и к интолерантности к глиадиновым пептидам у генетически восприимчивых индивидуумов. Гастрит При диабете типа I, который может сопровождаться аутоиммунным желудочным заболеванием, наблюдается высокий уровень антител против париетальных клеток желудка (PCA)(182,183). Париетальные клетки имеют на своей поверхности GPI-заякоренные молекулы(184), а поэтому в развитии такого состояния могут участвовать антитела, распознающие эпитопы с GPI-якорем. Воспалительное заболевание кишечника Хроническое воспалительное заболевание кишечника представляет собой парадоксальное состояние, при котором у пациента в течение нескольких лет наблюдается замедление роста в присутствии избыточного количества гормонов роста, после чего происходит нарушение секреции, что приводит к развитию симптомов заболевания брюшной полости(185). Окисление липидов натощак и после приема пищи наблюдается гораздо чаще у пациентов с активной формой болезни Крона, чем у пациентов с неактивным заболеванием(186). У таких пациентов также наблюдается значительно более высокий уровень продуцирования кетоновых телец(187). В исследованиях по эугликемической агглютинации при гиперинсулинемии было также показано, что у пациентов с болезнью Крона общий уровень утилизации глюкозы в организме выше, чем у нормальных индивидуумов контрольной группы(188). Однако по мере окисления глюкозы у этих пациентов артериальные концентрации были на 10% ниже, чем у индивидуумов контрольной группы (186,187). Метаболический профиль повышенного уровня окисления жиров и продуцирования кетоновых телец, очевидно, регулируется глюкагоном. Дислипидемия, характеризующаяся низкими уровнями холестерина ЛНП и высокими уровнями триглицеридов в плазме, также хорошо описана в литературе(189) и по своему характеру аналогична состояниям гиперинсулинемии и инсулинорезистентности. У животных,а именно у крыс BB с моделью диабета и у собак с моделью глютеновой болезни, перед началом развития заболевания также наблюдалась повышенная проницаемость тонкого кишечника(190). Повышенная проницаемость тонкого кишечника также наблюдалась у пациентов с болезнью Крона и их родственников, не страдающих этим заболеванием(191). Кроме того, у пациентов с высоким риском развития болезни Крона наблюдается повышенная фоновая проницаемость или увеличение проницаемости кишечника в ответ на воздействие вредных факторов(192).GPI-заякоренные молекулы с функциями, направленными на сохранение целостности тканей и структуры, в избытке присутствуют в ткани желудочно-кишечного тракта. Это было продемонстрировано высокой степенью окрашивания кишечных срезов моноклональным антителом против анти-TCR-Vантител. GPI-заякоренной молекулой в эпителии тонкого кишечника(193) и в клетках гладких мышц является T-кадгерин, который представляет собой адгезивную молекулу, связывающуюся с ЛНП(194). Tкадгерин также является негативным регулятором роста клеток гладкой мышцы(195). Потеря хромосомного сегмента, содержащего ген T-кадгерина коррелирует с развитием рака, а трансфекция опухолевых клеток к ДНК T-кадгерина приводит к снижению пролиферативной активности и к потере восприимчивости клеток к действию факторов роста(196). Другой GPI-заякоренной молекулой OCI-5 является гепарансульфатный протеогликан, родственный глипикану и цереброгликану(197). Гепарансульфатные протеогликаны связываются с ламинином. Частичный протеолиз цереброгликана приводит к более, чем 400 кратному снижению аффинности связывания с ламинином(198). Связывание аутоантител с GPIэлементами таких молекул, может, как предполагается, разрушать эпителиальный барьер и повышать проницаемость тонкой кишки, что, вероятно, является необходимым условием для развития данного заболевания. Утолщение кишечной стенки, а в частности слизистой оболочки мышцы кишечника, является признаком активной формы болезни Крона(199). Нарушение регуляции вышеупомянутых GPI-заякоренных молекул, помимо прочих молекул, которые экспрессируются в кишечнике, можно объяснить повышенной проницаемостью, пролиферацией гладких мышц, утолщением стенок кишечника и усилением синтеза коллагена клетками гладких мышц(200). Воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит и болезнь Крона ассоциируются с повы- 28015629 шенным риском венозного и артериального тромбоза. При обследовании 83 пациентов с язвенным колитом и 45 пациентов с болезнью Крона по сравнению с 100 индивидуумами контрольной группы было обнаружено, что у данных пациентов по сравнению со здоровыми индивидуумами контрольной группы наблюдался более высокий уровень антител против кардиолипина(201). В аналогичных исследованиях, в которых участвовали 137 пациентов и 137 индивидуумов контрольной группы, у обследуемых пациентов с болезнью Крона и с язвенным колитом, по сравнению с индивидуумами контрольной группы, наблюдалось значительное увеличение титров антител против кардиолинина(202). Артриты и родственные заболевания Ревматоидный артрит (PA) представляет собой прогрессирующее хроническое воспалительное заболевание, поражающее синовиальные соединения и приводящее к разрушению сустава. Синовиальная оболочка, состоящая обычно только из 2-3 клеточных слоев макрофагов и фибробласт-подобных клеток,подвергается гиперплазии с одновременным развитием ангиогенеза и увеличением локальной инвазивной активности в синовиальной оболочке на границе между хрящем и костью. Повышенная смертность пациентов с PA ассоциируется с ускоренным развитием атеросклероза и сердечно-сосудистым заболеванием. Этиологическими факторами, осложняющими течение PA, также являются многие инфекционные агенты(54). У пациентов с PA и родственными заболеваниями, такими как системная красная волчанка, системный склероз и подагра, наблюдается инсулинорезистентность и нарушение толераности к глюкозе(203,204). В исследованиях по эугликемической аглютинации у пациентов с артритом, имеющих нормальный вес и ранее не подвергавшихся лечению, наблюдались усиление инсулинового ответа и снижение скорости утилизации глюкозы по сравнению с индивидуумами контрольной группы(205). Поэтому гиперинсулинемия и инсулинорезистентность являются патогенными признаками заболеваний этой группы. При проведении внутривенного теста на толерантность к глюкозе, в котором участвовали 45 пациентов с активной формой PA, ранее не подвергавшихся лечению, было обнаружено, что у этих пациентов, по сравнению с индивидуумами контрольной группы, уровни глюкагона в плазме значительно снижались, что указывает на нарушение функций регуляторных гормонов протитивоположного действия(206). В пероральных тестах на толерантность к глюкозе (OGTT), проводимых с участием 14 пациентов с активной формой анкилозирующего спондилита (АС), было обнаружено, что у этих пациентов, по сравнению с индивидуумами контрольной группы, наблюдались значительно более высокие уровни инсулина, измеренные по площади под кривой, построенной по результатам тестаOGTT(207). Как при PA, так и при спондилоартропатиях инсулинорезистентность коррелировала с дислипидемией(208). О существовании общего этиологического фактора, ответственного за развитие PA и других аутоиммунных расстройств, также свидетельствует присутствие антител против антигена островковых клеток 69 (ICA69) у 31% пациентов с PA, тогда как эти антитела были обнаружены лишь у 6% здоровых доноров(209), а антитела против тироглобулина присутствовали у большинства детей с ювенильным хроническим артритом и СКВ(210). Пролиферация клеток синовиальной оболочки, сопровождаемая ангиогенезом, является ключевым фактором в образовании паннуса и эрозии кости при артрите. Урокиназный активатор плазминогена(uPA) и связанный с uPA поверхностный рецептор uPAR играет важную роль в деградации матрикса и ремоделировании ткани. uPA, связанный со своим рецептором uPAR, катализирует образование протеолитического фермента плазмина из плазминогена и направляет его на клеточную поверхность(211). Плазминоген опосредует протеолиз белков внеклеточного матрикса, что облегчает клеточную инвазию. Рецептор урокиназного активатора плазминогена представляет собой GPI-заякоренную молекулу и является лигандом для интегринов. Взаимодействие uPAR с интегрином обеспечивает передачу сигналов пролиферации или миграции клеток после связывания с uPA(212). Урокиназа обладает способностью отщеплять его рецептор и, тем самым, инактивировать его способность связываться с uPA и с витронектином. Однако такое отщепление происходит только в том случае, когда GPI-якорь uPAR является интактным,даже если сайт расщепления находится между 1 и 2 доменами данной молекулы, а GPI-якорь находится в 3 домене (213). Интактный рецептор урокиназы также необходим для эффективного связывания с интегрином витронектином(214). V3 и другие рецепторы витронектина участвуют в ангиогенезе, в клеточной адгезии и в миграции клеток, а следовательно, и в образовании паннуса(215). В нормальных условиях расщепление uPAR под действием uPA должно приводить к нарушению регуляции связывания uPA с его рецептором и связывания uPAR с витронектином и PAI-1, и, тем самым, к снижению уровня продуцирования плазмина под действием uPA и передачи сигналов пролиферации и ангиогенеза посредством рецепторов витронектина и PAI-1. Такое изменение аффинности связывания uPA с uPAR может приводить к делипидизации GPI-якоря. Антитела против пептидов uPAR в линкерной области GPI-якоря распознают только GPI-заякоренный, но не растворимый uPAR. Эти и аналогичные изменения антигенных свойств других GPI-заякоренных молекул, таких как Thy-1, Ly-6 и карциноэмбриональный антиген, также были отнесены за счет конформационных изменений(213). В настоящем изобретении было высказано предположение, что антитела против GPI-заякоренных элементов могут значительно изменять конфор- 29