Агенты, специфически связывающие фактор роста гепатоцитов, и их применение

Формула / Реферат | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Код ссылки

Номер патента: 15363

Опубликовано: 30.06.2011

Авторы: Бюргесс Тереза Л., Грин Лэрри Л., Жанг Ке, Коксон Анджела

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Выделенная легкая цепь антитела к фактору роста гепатоцитов (ФРГ), включающая по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1a, CDR2a и CDR3a, при этом CDR1a включает аминокислотную последовательность a b c d e f g h i j k l m n o p q, где аминокислота a выбрана из лизина, аргинина или глутамина; аминокислота b выбрана из серина или аланина; аминокислота c является серином; аминокислота d является глутамином; аминокислота e выбрана из серина, глицина или аспарагиновой кислоты; аминокислота f выбрана из валина или изолейцина или не присутствует; аминокислота g выбрана из лейцина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота h выбрана из фенилаланина или тирозина или не присутствует; аминокислота i является серином или не присутствует; аминокислота j является серином или не присутствует; аминокислота k выбрана из аспарагина, треонина или не присутствует; аминокислота l выбрана из аспарагина, изолейцина или валина; аминокислота m выбрана из лизина, аргинина, серина, аспарагина или аспарагиновой кислоты; аминокислота n выбрана из аспарагина или серина; аминокислота o выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, триптофана или аспарагина; аминокислота p является лейцином и аминокислота q выбрана из аланина, глицина или аспарагина;

при этом CDR2a включает аминокислотную последовательность r s t u v w x, где аминокислота r выбрана из триптофана, аланина, валина, глутаминовой кислоты или глицина; аминокислота s является аланином; аминокислота t является серином; аминокислота u выбрана из треонина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота v выбрана из аргинина или лейцина; аминокислота w выбрана из глутаминовой кислоты, глутамина или аланина; и аминокислота x выбрана из серина, аспарагина или треонина;

при этом CDR3a включает аминокислотную последовательность y z a' b' c' d' e' f' g' h', где аминокислота y выбрана из глутамина или лейцина; аминокислота z выбрана из глутамина, аспарагина или аргинина; аминокислота a' выбрана из тирозина, гистидина, аланина или серина; аминокислота b' выбрана из фенилаланина, тирозина, аспарагиновой кислоты, аспарагина или изолейцина; аминокислота c' выбрана из серина, глицина или аспарагина; аминокислота d' выбрана из пролина, тирозина, треонина, фенилаланина, аспарагиновой кислоты, лейцина или триптофана; аминокислота e' является пролином; аминокислота f' является пролином или не присутствует; аминокислота g' является триптофаном, лейцином, пролином, тирозином или изолейцином и аминокислота h' является треонином или аспарагином;

причем указанная легкая цепь в соединении с тяжелой цепью антитела к ФРГ способна связывать ФРГ и нейтрализовать связывание ФРГ с рецептором c-Met.

2. Легкая цепь по п.1, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 24 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 26 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 28 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 30 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 32 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 34 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 36 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 38 от остатка 21 до остатка 128;

последовательности №: 40 от остатка 23 до остатка 129 и

последовательности №: 42 от остатка 21 до остатка 128.

3. Легкая цепь по п.1, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68 и 69.

4. Легкая цепь по п.1, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78 и 79.

5. Легкая цепь по п.1, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88 и 89.

6. Выделенная тяжелая цепь антитела к ФРГ, включающая по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1b, CDR2b и CDR3b, при этом CDR1b включает аминокислотную последовательность a b c d e f g, где аминокислота a является серином или не присутствует; аминокислота b выбрана из аспарагиновой кислоты или глицина, или не присутствует; аминокислота c выбрана из аспарагиновой кислоты, глицина, серина, валина, треонина или изолейцина; аминокислота d является тирозином; аминокислота e выбрана из тирозина или глицина; аминокислота f выбрана из изолейцина, метионина или триптофана и аминокислота g выбрана из гистидина, аспарагина или серина;

при этом CDR2b включает аминокислотную последовательность h i j k l m n o p q r s t u v w x, где аминокислота h выбрана из триптофана, тирозина, валина, аспарагина или глутаминовой кислоты; аминокислота i выбрана из изолейцина, фенилаланина или валина; аминокислота j выбрана из аспарагина, серина, триптофана или тирозина; аминокислота k выбрана из пролина, серина, тирозина, или гистидина, аминокислота l выбрана из аспарагина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота m выбрана из серина или глицина; аминокислота n выбрана из глицина или серина или не присутствует; аминокислота o выбрана из глицина, треонина, аспарагиновой кислоты, серина, изолейцина или аспарагина; аминокислота p выбрана из треонина, изолейцина или лизина; аминокислота q выбрана из аспарагина или тирозина; аминокислота r выбрана из тирозина или гистидина; аминокислота s выбрана из аланина или аспарагина; аминокислота t выбрана из глутамина, аспарагиновой кислоты или пролина; аминокислота u выбрана из лизина или серина; аминокислота v выбрана из фенилаланина, валина или лейцина; аминокислота w выбрана из глутамина или лизина и аминокислота x выбрана из глицина или серина;

при этом CDR3b включает аминокислотную последовательность y z a' b' c' d' e' f' g' h' i' j' k' l' m' n' o' p' q' r', где аминокислота y выбрана из глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, серина или глицина или не присутствует; аминокислота z выбрана из лейцина, глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, гистидина, пролина или глицина или не присутствует; аминокислота a' выбрана из глутаминовой кислоты, тирозина, лейцина или не присутствует; аминокислота b' выбрана из лейцина, аспарагина, глицина, гистидина, тирозина или триптофана или не присутствует; аминокислота c' выбрана из аргинина, серина, глутаминовой кислоты, тирозина, глицина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота d' является глицином или не присутствует; аминокислота e' выбрана из триптофана или тирозина или не присутствует; аминокислота f' является аспарагиновой кислотой или не присутствует; аминокислота g' выбрана из серина или аргинина или не присутствует; аминокислота h' является серином или не присутствует; аминокислота i' выбрана из глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота j' выбрана из тирозина, глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота k' выбрана из тирозина, фенилаланина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота l' выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, гистидина или триптофана или не присутствует; аминокислота m' выбрана из тирозина, глицина, аспарагиновой кислоты, пролина или серина или не присутствует; аминокислота n' выбрана из глицина, валина, тирозина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота o' выбрана из лейцина, аланина, глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота p' выбрана из метионина, фенилаланина или тирозина; аминокислота q' является аспарагиновой кислотой и аминокислота r' выбрана из валина, тирозина, изолейцина или пролина; причем указанная тяжелая цепь в соединении с легкой цепью антитела к ФРГ способна связывать ФРГ и нейтрализовать связывание ФРГ с рецептором c-Met.

7. Тяжелая цепь по п.6, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

последовательности №: 27 от остатка 20 до остатка 137;

последовательности №: 29 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 31 от остатка 20 до остатка 148;

последовательности №: 33 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 35 от остатка 20 до остатка 144;

последовательности №: 37 от остатка 20 до остатка 142;

последовательности №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 41 от остатка 20 до остатка 140 и

последовательности №: 43 от остатка 20 до остатка 139.

8. Тяжелая цепь по п.6, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 и 99.

9. Тяжелая цепь по п.6, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108 и 109.

10. Тяжелая цепь по п.6, включающая по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118 и 119.

11. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающие:

(i) легкую цепь, включающую по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1a, CDR2a и CDR3a, при этом CDR1a включает аминокислотную последовательность a b c d e f g h i j k l m n o p q, где аминокислота a выбрана из лизина, аргинина или глутамина; аминокислота b выбрана из серина или аланина; аминокислота c является серином; аминокислота d является глутамином; аминокислота e выбрана из серина, глицина или аспарагиновой кислоты; аминокислота f выбрана из валина или изолейцина или не присутствует; аминокислота g выбрана из лейцина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота h выбрана из фенилаланина или тирозина или не присутствует; аминокислота i является серином или не присутствует; аминокислота j является серином или не присутствует; аминокислота k выбрана из аспарагина, треонина или не присутствует; аминокислота l выбрана из аспарагина, изолейцина или валина; аминокислота m выбрана из лизина, аргинина, серина, аспарагина или аспарагиновой кислоты; аминокислота n выбрана из аспарагина или серина; аминокислота o выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, триптофана или аспарагина; аминокислота p является лейцином и аминокислота q выбрана из аланина, глицина или аспарагина;

при этом CDR2a включает аминокислотную последовательность r s t u v w x, где аминокислота r выбрана из триптофана, аланина, валина, глутаминовой кислоты или глицина; аминокислота s является аланином; аминокислота t является серином; аминокислота u выбрана из треонина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота v выбрана из аргинина или лейцина; аминокислота w выбрана из глутаминовой кислоты, глутамина или аланина и аминокислота x выбрана из серина, аспарагина или треонина;

(ii) тяжелую цепь, включающую по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1b, CDR2b и CDR3b, при этом CDR1b включает аминокислотную последовательность a b c d e f g, где аминокислота a является серином или не присутствует; аминокислота b выбрана из аспарагиновой кислоты или глицина или не присутствует; аминокислота c выбрана из аспарагиновой кислоты, глицина, серина, валина, треонина или изолейцина; аминокислота d является тирозином; аминокислота e выбрана из тирозина или глицина; аминокислота f выбрана из изолейцина, метионина или триптофана и аминокислота g выбрана из гистидина, аспарагина или серина;

при этом CDR2b включает аминокислотную последовательность h i j k l m n o p q r s t u v w х, где аминокислота h выбрана из триптофана, тирозина, валина, аспарагина или глутаминовой кислоты; аминокислота i выбрана из изолейцина, фенилаланина или валина; аминокислота j выбрана из аспарагина, серина, триптофана или тирозина; аминокислота k выбрана из пролина, серина, тирозина или гистидина, аминокислота l выбрана из аспарагина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота m выбрана из серина или глицина; аминокислота n выбрана из глицина или серина или не присутствует; аминокислота o выбрана из глицина, треонина, аспарагиновой кислоты, серина, изолейцина или аспарагина; аминокислота p выбрана из треонина, изолейцина или лизина; аминокислота q выбрана из аспарагина или тирозина; аминокислота r выбрана из тирозина или гистидина; аминокислота s выбрана из аланина или аспарагина; аминокислота t выбрана из глутамина, аспарагиновой кислоты или пролина; аминокислота u выбрана из лизина или серина; аминокислота v выбрана из фенилаланина, валина или лейцина; аминокислота w выбрана из глутамина или лизина и аминокислота x выбрана из глицина или серина;

при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент способны связывать ФРГ и нейтрализовать связывание ФРГ с рецептором c-Met.

12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 24 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 26 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 28 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 30 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 32 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 34 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 36 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 38 от остатка 21 до остатка 128;

последовательности №: 40 от остатка 23 до остатка 129 и

последовательности №: 42 от остатка 21 до остатка 128.

13. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

последовательности №: 27 от остатка 20 до остатка 137;

последовательности №: 29 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 31 от остатка 20 до остатка 148;

последовательности №: 33 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 35 от остатка 20 до остатка 144;

последовательности №: 37 от остатка 20 до остатка 142;

последовательности №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 41 от остатка 20 до остатка 140 и

последовательности №: 43 от остатка 20 до остатка 139.

14. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141.

15. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 26 от остатка 21 до остатка 133, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 27 от остатка 20 до остатка 137.

16. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 28 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 29 от остатка 20 до остатка 139.

17. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 30 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 31 от остатка 20 до остатка 148.

18. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 32 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 33 от остатка 20 до остатка 139.

19. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 34 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 35 от остатка 20 до остатка 144.

20. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 36 от остатка 21 до остатка 133, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 37 от остатка 20 до остатка 142.

21. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 38 от остатка 21 до остатка 128, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 39 от остатка 20 до остатка 139.

22. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 40 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 41 от остатка 20 до остатка 140.

23. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 42 от остатка 21 до остатка 128, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 43 от остатка 20 до остатка 139.

24. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68 и 69.

25. Антитело по п.11, включающее по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78 и 79.

26. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88 и 89.

27. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 и 99.

28. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108 и 109.

29. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей №: 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118 и 119.

30. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие тяжелую цепь, включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

последовательности №: 27 от остатка 20 до остатка 137;

последовательности №: 29 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 31 от остатка 20 до остатка 148;

последовательности №: 33 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 35 от остатка 20 до остатка 144;

последовательности №: 37 от остатка 20 до остатка 142;

последовательности №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 41 от остатка 20 до остатка 140; и

последовательности №: 43 от остатка 20 до остатка 139 и

легкую цепь, включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 24 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 26 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 28 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 30 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 32 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 34 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 36 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 38 от остатка 21 до остатка 128;

последовательности №: 40 от остатка 23 до остатка 129 и

последовательности №: 42 от остатка 21 до остатка 128.

31. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.30, которые имеют по крайней мере одно свойство, выбранное из следующих:

а) конкурируют за связывание с ФРГ по крайней мере с одним антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, выбранными из

антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №:24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 26 от остатка 21 до остатка 133, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 27 от остатка 20 до остатка 137;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 28 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 29 от остатка 20 до остатка 139;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 30 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 31 от остатка 20 до остатка 148;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 32 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 33 от остатка 20 до остатка 139;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 34 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 35 от остатка 20 до остатка 144;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 36 от остатка 21 до остатка 133, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 37 от остатка 20 до остатка 142;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 38 от остатка 21 до остатка 128, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 40 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 41 от остатка 20 до остатка 140; и

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 42 от остатка 21 до остатка 128, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 43 от остатка 20 до остатка 139;

б) связывается с тем же антигеном, что и по крайней мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранные из

антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

в) связывается с тем же эпитопом ФРГ, что и по крайней мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбранные из

антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

32. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, включающие тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность на по крайней мере 90, 95 или 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из

последовательности №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

последовательности №: 27 от остатка 20 до остатка 137;

последовательности №: 29 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 31 от остатка 20 до остатка 148;

последовательности №: 33 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 35 от остатка 20 до остатка 144;

последовательности №: 37 от остатка 20 до остатка 142;

последовательности №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 41 от остатка 20 до остатка 140 и

последовательности №: 43 от остатка 20 до остатка 139 и

легкую цепь, содержащую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность на по крайней мере 90, 95 или 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из

последовательности №: 24 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 26 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 28 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 30 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 32 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 34 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 36 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 38 от остатка 21 до остатка 128;

последовательности №: 40 от остатка 23 до остатка 129 и

последовательности №: 42 от остатка 21 до остатка 128.

33. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.32, которые имеют по крайней мере одно свойство, выбранное из следующих:

а) конкурирует за связывание с ФРГ по крайней мере с одним антителом, выбранным из антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 38 от остатка 21 до остатка 128 и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

в) связывается с тем же эпитопом ФРГ, что и по крайней мере одно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранные из

антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

34. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.11-33, отличающиеся тем, что тяжелая цепь и легкая цепь соединены линкером (связкой).

35. Фрагмент по любому из пп.11-33 представляющий собой Fv-фрагмент антитела.

36. Фрагмент по любому из пп.11-33, представляющий собой иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина.

37. Фрагмент по любому из пп.11-33, представляющий собой Fab-фрагмент.

38. Фрагмент по любому из пп.11-33, представялющйи собой Fab'-фрагмент.

39. Фрагмент по любому из пп.11-33, представляющий собой (Fab')₂-фрагмент.

40. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.11-33, являющиеся полностью человеческим антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.

41. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.11-33, являющиеся гуманизированным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.

42. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.11-33, являющиеся химерным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.

43. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.11-33, которые ингибируют связывание ФРГ с рецептором c-Met.

44. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь по любому из пп.1-5, включающую по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1a, CDR2a и CDR3a,

при этом CDR1a включает аминокислотную последовательность a b c d e f g h i j k l m n o p q, где аминокислота a выбрана из лизина, аргинина или глутамина; аминокислота b выбрана из серина или аланина; аминокислота c является серином; аминокислота d является глутамином; аминокислота e выбрана из серина, глицина или аспарагиновой кислоты; аминокислота f выбрана из валина или изолейцина или не присутствует; аминокислота g выбрана из лейцина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота h выбрана из фенилаланина или тирозина или не присутствует; аминокислота i является серином или не присутствует; аминокислота j является серином или не присутствует; аминокислота k выбрана из аспарагина, треонина или не присутствует; аминокислота l выбрана из аспарагина, изолейцина или валина; аминокислота m выбрана из лизина, аргинина, серина, аспарагина или аспарагиновой кислоты; аминокислота n выбрана из аспарагина или серина; аминокислота o выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, триптофана или аспарагина; аминокислота p является лейцином и аминокислота q выбрана из аланина, глицина или аспарагина;

при этом CDR2a включает аминокислотную последовательность r s t u v w x, где аминокислота r выбрана из триптофана, аланина, валина, глутаминовой кислоты или глицина; аминокислота s является аланином; аминокислота t является серином; аминокислота u выбрана из треонина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота v выбрана из аргинина или лейцина; аминокислота w выбрана из глутаминовой кислоты, глутамина или аланина и аминокислота x выбрана из серина, аспарагина или треонина;

45. Молекула нуклеиновой кислоты по п.44, включающая нуклеотидную последовательность, выбранную из последовательностей №: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 и 19.

46. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь по любому из пп.6-9, включающую по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1b, CDR2b и CDR3b, при этом CDR1b включает аминокислотную последовательность a b с d e f g, где аминокислота a является серином или не присутствует; аминокислота b выбрана из аспарагиновой кислоты или глицина или не присутствует; аминокислота c выбрана из аспарагиновой кислоты, глицина, серина, валина, треонина или изолейцина; аминокислота d является тирозином; аминокислота e выбрана из тирозина или глицина; аминокислота f выбрана из изолейцина, метионина или триптофана и аминокислота g выбрана из гистидина, аспарагина или серина;

при этом CDR2b включает аминокислотную последовательность h i j k l m n o p q r s t u v w x, где аминокислота h выбрана из триптофана, тирозина, валина, аспарагина или глутаминовой кислоты; аминокислота i выбрана из изолейцина, фенилаланина или валина; аминокислота j выбрана из аспарагина, серина, триптофана или тирозина; аминокислота k выбрана из пролина, серина, тирозина или гистидина; аминокислота l выбрана из аспарагина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота m выбрана из серина или глицина; аминокислота n выбрана из глицина или серина или не присутствует; аминокислота o выбрана из глицина, треонина, аспарагиновой кислоты, серина, изолейцина или аспарагина; аминокислота p выбрана из треонина, изолейцина или лизина; аминокислота q выбрана из аспарагина или тирозина; аминокислота r выбрана из тирозина или гистидина; аминокислота s выбрана из аланина или аспарагина; аминокислота t выбрана из глутамина, аспарагиновой кислоты или пролина; аминокислота u выбрана из лизина или серина; аминокислота v выбрана из фенилаланина, валина или лейцина; аминокислота w выбрана из глутамина или лизина и аминокислота x выбрана из глицина или серина;

47. Молекула нуклеиновой кислоты по п.46, включающая нуклеотидную последовательность, выбранную из последовательности №: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 и 20.

48. Клетка-хозяин, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по п.44 или 45.

49. Клетка-хозяин, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по п.46 или 47.

50. Выделенная клеточная линия, продуцирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.30 или 32.

51. Выделенная клеточная линия по п.50, отличающаяся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из

антитела, включающего легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 24 от остатка 23 до остатка 129, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

52. Композиция, включающая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.30 или 32 и фармацевтически приемлемый носитель.

53. Композиция, включающая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.30 или 32 и по крайней мере один агент, выбранный из следующих: члена семейства гелданамицинов анизамициновых антибиотиков; антагониста гомологии 2 Grb2 Src; модулятора Gab1; доминантного отрицательного Scr; ингибитора фон Хиппеля-Ландау; нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (NSAID); ингибитора COX-2; CelebrexÔ (целекоксиб); VioxxÔ (рофекоксиб); васкулярного эндотелиального фактора роста (VEGF); модулятора VEGF; модулятора фактора роста фибробластов (FGF); модулятора эпидермального фактора роста (EGF); фактора роста кератиноцитов (KGF); связанной с KGF молекулы; модулятора KGF; модулятора матричной металлопротеиназы (ММР); IL-2; Пролейкина; Герцептина; Ритуксана; Зевалина; Эрбитукса; Эпратузумаба; антитела к OPGL; ингибитора Ang-2; антитела к VEGF-2; авастина; антинеопластического агента; антимитотического агента; антиметаболита и алкил сульфоната.

54. Способ лечения рака у пациента, включающий использование композиции по п.52.

55. Способ лечения рака у пациента, включающий использование композиции по п.53.

56. Способ лечения твердой опухоли у пациента, включаюший использование композиции по п.52.

57. Способ лечения твердой опухоли у пациента, включающий использование композиции по п.53.

58. Способ лечения рака у пациента, включающий использование антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п.30 или 32 и проведение по крайней мере одного химиотерапевтического лечения.

59. Способ по п.58, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент используются перед химиотерапией.

60. Способ по п.58, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент используются одновременно с химиотерапией.

61. Способ по п.58, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент назначаются после назначения лечения химиотерапией.

62. Способ лечения рака у пациента, включающий использование антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п.30 или 32 и проведение лучевой терапии.

63. Способ по п.62, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент используются перед лучевой терапией.

64. Способ по п.62, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент используются одновременно с лучевой терапией.

65. Способ по п.62, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент используются после лучевой терапии.

66. Способ детектирования уровня фактора роста гепатоцитов (ФРГ) в образце, включающий обеспечение контакта образца с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по п.30 или 32.

67. Полипептид, включающий по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 164 и №165, отличающийся тем, что полипептид способен связываться антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп.11-33.

68. Полипептид, состоящий главным образом из по крайней мере одной аминокислотной последовательности, выбранной из последовательности №: 164 и 165, отличающийся тем, что полипептид способен связываться антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп.11-33.

69. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.11-43, способные связывать по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 164 и 165.

70. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.11-43, включающий введение по крайней мере одного полипептида ФРГ, выбранного из полипептидов с последовательностями №: 164 и 165, животному и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, способных связывать ФРГ из организма животных.

71. Способ снижения или предотвращения связывания любого из антител или одного из его антигенсвязывающих фрагментов по пп.14-23 с фактором роста гепатоцита (ФРГ) путем использования полипептида, включающего по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 164 и 165.

72. Способ снижения или предотвращения связывания любого из антител или одного из его антигенсвязывающих фрагментов по пп.14-23 с фактором роста гепатоцитов (ФРГ) путем использования полипептида, состоящего из по крайней мере одной аминокислотной последовательности, выбранной из последовательности №: 164 и 165.

73. Способ снижения или предотвращения связывания любого из антител или одного из его антигенсвязывающих фрагментов с фактором роста гепатоцитов (ФРГ) по любому из пп.11-43 путем использования полипептида, включающего по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательности №: 164 и 165.

74. Способ снижения или предотвращения связывания любого из антител или одного из его антигенсвязывающих фрагментов с фактором роста гепатоцитов (ФРГ) по любому из пп.11-43 путем использования полипептида, состоящего из по крайней мере одной аминокислотной последовательности, выбранной из последовательности №: 164 и 165.

75. Легкая цепь по п.1, которая выбрана из

легкой цепи, включающей последовательности №: 60, 70 и 80; легкой цепи, включающей последовательности №: 61, 71 и 81;

легкой цепи, включающей последовательности №; 62, 72 и 82; легкой цепи, включающей последовательности №: 63, 73 и 83;

легкой цепи, включающей последовательности №; 64, 74 и 84; легкой цепи, включающей последовательности №: 65, 75 и 85;

легкой цепи, включающей последовательности №; 66, 76 и 86; легкой цепи, включающей последовательности №: 67, 77 и 87;

легкой цепи, включающей последовательности №; 68, 78 и 88, и

легкой цепи, включающей последовательности №; 69, 79 и 89.

76. Тяжелая цепь по п.8, которая выбрана из: тяжелой цепи, включающей последовательности №:90, 100 и 110; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 91, 101 и 111; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 92, 102 и 112; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 93,103 и 113; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 94, 104 и 114; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 95, 105 и 115; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 96, 106 и 116; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 97, 107 и 117; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 98, 108 и 118; и тяжелой цепи, включающей последовательности №: 99, 109 и 119.

77. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, которые включают:

(i) легкую цепь, выбранную из легкой цепи, включающей последовательности №: 60, 70 и 80; легкой цепи, включающей последовательности №: 61, 71 и 81; легкой цепи, включающей последовательности №: 62, 72 и 82; легкой цепи, включающей последовательности №:63, 73 и 83; легкой цепи, включающей последовательности №: 64, 74 и 84; легкой цепи, включающей последовательности №: 65,75 и 85; легкой цепи, включающей последовательности №:66, 76 и 86; легкой цепи, включающей последовательности №: 67, 77 и 87; легкой цепи, включающей последовательности №:68, 78 и 88, и легкой цепи, включающей последовательности №: 69, 79 и 89; и

(ii) тяжелую цепь, выбранную из тяжелой цепи, включающей последовательности №:90, 100 и 110; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 91, 101 и 111; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 92, 102 и 112; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 93, 103 и 113; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 94, 104 и 114; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 95, 105 и 115; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 96, 106 и 116; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 97, 107 и 117; тяжелой цепи, включающей последовательности №: 98, 108 и 118, и тяжелой цепи, включающей последовательности №: 99, 109 и 119.

78. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, которые выбраны из

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 60, 70 и 80, и тяжелую цепь, включающую последовательности 90, 91 и 92;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 61, 71 и 81, и тяжелую цепь, включающую последовательности 91, 101 и 111;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 62, 72 и 82, и тяжелую цепь, включающую последовательности 92, 102 и 112;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 63, 73 и 83, и тяжелую цепь, включающую последовательности 93, 103 и 113;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 64, 74 и 84, и тяжелую цепь, включающую последовательности 94, 104 и 114;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 65, 75 и 85, и тяжелую цепь, включающую последовательности 95, 105 и 115;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 66, 76 и 86, и тяжелую цепь, включающую последовательности 96, 106 и 116;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 67, 77 и 87, и тяжелую цепь, включающую последовательности 97, 107 и 117;

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 68, 78 и 88, и тяжелую цепь, включающую последовательности 98, 108 и 118; и

антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающих легкую цепь, включающую последовательности №: 69, 79 и 89, и тяжелую цепь, включающую последовательности 99, 109 и 119.

79. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, отличающиеся тем, что антитело включает

легкую цепь, включающую по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 24 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №:: 26 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 28 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 30 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 32 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 34 от остатка 23 до остатка 129;

последовательности №: 36 от остатка 21 до остатка 133;

последовательности №: 38 от остатка 21 до остатка 128;

последовательности №: 40 от остатка 23 до остатка 129 и

последовательности №: 42 от остатка 21 до остатка 128; и

тяжелую цепь, включающую по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из

последовательности №: 25 от остатка 20 до остатка 141;

последовательности №: 27 от остатка 20 до остатка 137;

последовательности №: 29 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 31 от остатка 20 до остатка 148;

последовательности №: 33 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 35 от остатка 20 до остатка 144;

последовательности №: 37 от остатка 20 до остатка 142;

последовательности №: 39 от остатка 20 до остатка 139;

последовательности №: 41 от остатка 20 до остатка 140 и

последовательности №: 43 от остатка 20 до остатка 139.

80. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, отличающиеся тем, что антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 38 от остатка 21 до остатка 128 и аминокислотную последовательность №: 44, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность №: 39 от остатка 20 до остатка 139 и последовательность №: 46.

81. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.11, отличающиеся тем, что антитело способно связывать бета-ФРГ подгруппы ФРГ.

Текст

Смотреть все

АГЕНТЫ, СПЕЦИФИЧЕСКИ СВЯЗЫВАЮЩИЕ ФАКТОР РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Описываются специфические связывающие агенты, взаимодействующие с фактором роста гепатоцитов (ФРГ). Описываются способы лечения рака путем назначения фармацевтически эффективного количества специфического связывающего вещества, взаимодействующего с ФРГ. Описываются способы детектирования количества ФРГ (фактора роста гепатоцитов) в образце, используя специфический связывающий с ФРГ агент. 015363 В данной заявке утверждается преимущество предварительной заявки на патент США 60/488681,поданной 18 июля 2003 года, которая включена в данное изобретение для всех целей путем ссылки. Область изобретения Настоящее изобретение относится к специфическим связывающим агентам, взаимодействующим с фактором роста гепатоцитов ФРГ (HGF Hepatocyte Growth Factor). Также описываются композиции, способы производства указанных композиций и способы лечения различных заболеваний, подобных определенным типам рака, включая твердые опухоли и гематологические злокачественные заболевания, но не ограничиваясь ими. Предпосылки создания изобретения Было установлено, что фактор роста гепатоцитов (ФРГ) является сильнодействующим митогеном для гепатоцитов. Было также установлено, что ФРГ является секреторным белком фибробластов и гладкой мышцы, вызывающим подвижность эпителиальных клеток. В литературе ФРГ также называют фактором рассеяния (ФР). ФРГ является мультифункциональным гетеродимерным полипетидом, производимым в основном мезенхимными клетками, действующими в качестве лиганда для киназы тирозина рецептора Мет (Met). Рецептор Мет человека также известен как "c-met". Было показано, что активация через каскад реакций киназы тирозина рецептора Мет-ФРГ (Мет-ФРГ) приводит к ряду клеточных реакций, включая пролиферацию (митоз), рассеяние (подвижность), стимуляцию движения клетки через матрицу (инвазию) и разветвленный морфогенез, но не ограничиваются ими. Активация in vivo через каскад реакций Мет-ФРГ(Мет-ФРГ) играет роль, например, в нервном возбуждении, регенерации печени, заживлении ран, развитии кровеносных сосудов, росте, инвазии, морфологической дифференциации и нормальном эмбриологическом развитии. В дополнении к этим функциям пара Мет-ФРГ может также играть роль при раке у человека. Было показано, что отклоняющаяся от нормы (аберрантная) активация Мет-ФРГ вызывает онкогенез, в частности, при развитии инвазивных и метастатических фенотипов. Было также обнаружено,что некоторые болезнетворные организмы (патогены), такие как малярия, также используют аберрантную активацию Мет-ФРГ. См. Карроло и др. (Carrolo et al.), "Природная медицина" (Nat. Med.), 2003,9(11):1363-9 (12 октября 2003 года), содержание которого включено в данный материал путем ссылки для любой цели. Далее, в некоторых группах отмечалось, что ФРГ может играть роль в развитии кровеносных сосудов и заболеваниях, вызванных им, подобных пролиферативной диабетической ретинопатии (поражении сетчатки) или дегенерации желтого пятна. См., например, Грант Д.С. и др. (Grant, D.S. et al.), Труды Академии естественных наук США (Proc. Nat. Acad. Sci. USA): 90(5) 1937-41 (1993); Буссолино и др. (Bussolino et al.), Журнал биологии клетки (J. Cell. Biol.), 119 (3):629-641 (1992); Монтесано и др. (Montesano etal.), Клетка (Cell.), 67:901-908 (1991); Кенон и др. (Canon et al.), Британский журнал офтальмологии (Br.J. Ophthalmol.) 84(7): 732-5 (2000). ФРГ может также играть роль в апоптозе или программируемой смерти клетки. Опухоли могут возникать тогда, когда нормальные регуляторные механизмы не могут поддерживать баланс между пролиферацией и апоптозом (утратой клеток), так что клетки накапливаются в избыточном количестве. ФРГ может влиять как на пролиферацию, так и на апоптоз, в зависимости от биологического контекста. Из-за того, что ФРГ задействован во многих физиологических процессах, в некоторых случаях может быть полезным иметь молекулы, способные регулировать его активность. Например, в некоторых случаях подобные молекулы могут быть полезны при лечении различных типов рака. Краткое содержание изобретения В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает выделенный полипептид, включающий по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1a,CDR2a и CDR3a,при этом CDR1a включает аминокислотную последовательность a b c d e f g h i j k l m n o p q, где аминокислота a выбирается из лизина, аргинина или глютамина; аминокислота b выбирается из серина или аланина; аминокислота c является серином, аминокислота d является глютамином; аминокислота e выбирается из серина, глицина или аспарагиновой кислоты; аминокислота f выбирается из валина или изолейцина или не присутствует; аминокислота g выбирается из лейцина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота h выбирается из фенилаланина или тирозина или не присутствует; аминокислота i является серином или не присутствует; аминокислота j является серином или не присутствует; аминокислота k выбирается из аспарагина, треонина или не присутствует; аминокислота l выбирается из аспарагина, изолейцина или валина; аминокислота m выбирается из лизина, аргинина, серина, аспарагина или аспарагиновой кислоты; аминокислота n выбирается из аспарагина или серина; аминокислота o выбирается из тирозина, аспарагиновой кислоты, триптофана или аспарагина; аминокислота p является лейцином и аминокислота q выбирается из аланина, глицина или аспарагина; при этом CDR2a включает аминокислотную последовательность r s t u v w x, где аминокислота r выбрана из триптофана, аланина, валина, глютаминовой кислоты или глицина; аминокислота s является аланином, аминокислота t является серином, аминокислота u выбрана из треонина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота v выбрана из аргинина или лейцина; аминокислота w выбрана из глюта-1 015363 миновой кислоты, глютамина или аланина и аминокислота x выбрана из серина, аспарагина или треонина; при этом CDR3a включает аминокислотную последовательность у z a' b' с' d' e' f' g' h', где аминокислота y выбрана из глютамина или лейцина; аминокислота z выбрана из глютамина, аспарагина или аргинина; аминокислота a' выбрана из тирозина, гистидина, аланина или серина; аминокислота b' выбрана из фенилаланина, тирозина, аспарагиновой кислоты, аспарагина или изолейцина; аминокислота c' выбрана из серина, глицина или аспарагина; аминокислота d' выбрана из пролина, тирозина, треонина, фенилаланина, аспарагиновой кислоты, лейцина или триптофана; аминокислота e' является пролином; аминокислота f' является пролином или не присутствует; аминокислота g' является триптофаном, лейцином, пролином, тирозином или изолейцином и аминокислота h' является треонином или аспарагином; и при этом полипептид в соединении с тяжелой цепью антитела способен связывать фактор роста гепатоцитов (ФРГ). В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает выделенный полипептид, включающий по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1b,CDR2b и CDR3b,при этом CDR1b включает аминокислотную последовательность a b c d e f g, где аминокислота a является серином или не присутствует; аминокислота b выбрана из аспарагиновой кислоты или глицина или не присутствует; аминокислота c выбирается из аспарагиновой кислоты, глицина, серина, валина,треонина или изолейцина; аминокислота d является тирозином; аминокислота e выбирается из тирозина или глицина; аминокислота f выбирается из изолейцина, метионина или триптофана и аминокислота g выбрана из гистидина, аспарагина или серина; при этом CDR2b включает аминокислотную последовательность h i j k l m n o p q r s t u v w x, где аминокислота h выбрана из триптофана, тирозина, валина, аспарагина или глютаминовой кислоты; аминокислота i выбрана из изолейцина, фенилаланина или валина; аминокислота j выбрана из аспарагина,серина, триптофана или тирозина; аминокислота k выбрана из пролина, серина, тирозина или гистидина; аминокислота l выбрана из аспарагина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота m выбрана из серина или глицина; аминокислота n выбрана из глицина или серина или не присутствует; аминокислотаo выбрана из глицина, треонина, аспарагиновой кислоты, серина, изолейцина или аспарагина; аминокислота p выбрана из треонина, изолейцина или лизина; аминокислота q выбрана из аспарагина или тирозина; аминокислота r выбрана из тирозина или гистидина; аминокислота s выбрана из аланина или аспарагина; аминокислота t выбрана из глютамина, аспарагиновой кислоты или пролина; аминокислота u выбрана из лизина или серина; аминокислота v выбрана из фенилаланина, валина или лейцина; аминокислота w выбрана из глютамина или лизина и аминокислота x выбрана из глицина или серина; при этом CDR3b включает аминокислотную последовательность у z a' b' с' d' e' f' g' h' i' j ' k' l' m' n' o'p' q' r', где аминокислота у выбрана из глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, серина или глицина или не присутствует; аминокислота z выбрана из лейцина, глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, гистидина, пролина или глицина или не присутствует; аминокислота a' выбрана из глютаминовой кислоты, тирозина или лейцина или не присутствует; аминокислота b' выбрана из лейцина, аспарагина, глицина, гистидина, тирозина или триптофана или не присутствует; аминокислота c' выбрана из аргинина, серина, глютаминовой кислоты, тирозина, глицина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота d' является глицином или не присутствует; аминокислота e' выбрана из триптофана или тирозина или не присутствует; аминокислота f' является аспарагиновой кислотой или не присутствует; аминокислота g' выбрана из серина или аргинина или не присутствует; аминокислота h' является серином или не присутствует; аминокислота i' выбрана из глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота j' выбрана из тирозина, глютаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота k' выбрана из тирозина, фенилаланина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота l' выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, гистидина или триптофана или не присутствует; аминокислота m' выбрана из тирозина, глицина, аспарагиновой кислоты, пролина или серина или не присутствует; аминокислота n' выбрана из глицина, валина, тирозина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота o' выбрана из лейцина, аланина, глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота p' выбрана из метионина, фенилаланина или тирозина; аминокислота q' является аспарагиновой кислотой и аминокислота r' выбрана из валина, тирозина, изолейцина, или пролина; и где полипептид в соединении с легкой цепью антитела способен связывать фактор роста гепатоцитов (ФРГ). В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает изолированный специфический связывающий агент, при этом специфический связывающий агент включает:(i) первый полипептид, включающий по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1a, CDR2a и CDR3a, при этом CDR1a включает аминокислотную последовательность ab c d e f g h i j k l m n o p q, где аминокислота a выбрана из лизина, аргинина или глютамина; аминокислота b выбрана из серина или аланина; аминокислота c является серином, аминокислота d является глютамином; аминокислота e выбрана из серина, глицина или аспарагиновой кислоты; аминокислота f выбрана из валина или изолейцина или не присутствует; аминокислота g выбрана из лейцина или фенилаланина-2 015363 или не присутствует; аминокислота h выбрана из фенилаланина или тирозина или не присутствует; аминокислота i является серином или не присутствует; аминокислота j является серином или не присутствует; аминокислота k выбрана из аспарагина, треонина или не присутствует; аминокислота l выбрана из аспарагина, изолейцина или валина; аминокислота m выбрала из лизина, аргинина, серина, аспарагина или аспарагиновой кислоты; аминокислота n выбрана из аспарагина или серина; аминокислота o выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, триптофана или аспарагина; аминокислота p является лейцином и аминокислота q выбрана из аланина, глицина или аспарагина; при этом CDR2 включает аминокислотную последовательность r s t u v w x, где аминокислота r выбрана из триптофана, аланина, валина, глютаминовой кислоты или глицина; аминокислота s является аланином, аминокислота t является серином, аминокислота u выбрана из треонина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота v выбрана из аргинина или лейцина; аминокислота w выбрана из глютаминовой кислоты, глютамина или аланина и аминокислота x выбрана из серина, аспарагина или треонина; при этом CDR3a включает аминокислотную последовательность y z a' b' c' d' e' f' g' h', где аминокислота y выбрана из глютамина или лейцина; аминокислота z выбрана из глютамина, аспарагина или аргинина; аминокислота a' выбрана из тирозина, гистидина, аланина или серина; аминокислота b' выбрана из фенилаланина, тирозина, аспарагиновой кислоты, аспарагина или изолейцина; аминокислота c' выбрана из серина, глицина или аспарагина; аминокислота d' выбрана из пролина, тирозина, треонина, фенилаланина, аспарагиновой кислоты, лейцина или триптофана; аминокислота e' является пролином; аминокислота f' является пролином или не присутствует; аминокислота g' является триптофаном, лейцином, пролином, тирозином или изолейцином и аминокислота b' является треонином или аспарагином; и при этом первый полипептид в соединении с тяжелой цепью антитела способен связывать фактор роста гепатоцитов (ФРГ);(ii) второй полипептид, включающий по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1b, CDR2b или CDR3b, при этом CDR1b включает аминокислотную последовательностьa b c d e f g, где аминокислота a является серином или не присутствует; аминокислота b выбрана из аспарагиновой кислоты или глицина или не присутствует; аминокислота c выбрана из аспарагиновой кислоты, глицина, серина, валина, треонина или изолейцина; аминокислота d является тирозином; аминокислота e выбрана из тирозина или глицина; аминокислота f выбрана из изолейцина, метионина или триптофана и аминокислота g выбрана из гистидина, аспарагина или серина; при этом CDR2b включает аминокислотную последовательность h i j k l m n o p q r s t u v w x, где аминокислота h выбрана из триптофана, тирозина, валина, аспарагина или глютаминовой кислоты; аминокислота i выбрана из изолейцина, фенилаланина или валина; аминокислота j выбрана из аспарагина,серина, триптофана или тирозина; аминокислота k выбрана из пролина, серина, тирозина или гистидина; аминокислота l выбрана из аспарагина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота m выбрана из серина или глицина; аминокислота n выбрана из глицина или серина или не присутствует; аминокислотаo выбрана из глицина, треонина, аспарагиновой кислоты, серина, изолейцина или аспарагина; аминокислота p выбрана из треонина, изолейцина или лизина; аминокислота q выбрана из аспарагина или тирозина; аминокислота r выбрана из тирозина или гистидина; аминокислота s выбрана из аланина или аспарагина; аминокислота t выбрана из глютамина, аспарагиновой кислоты или пролина; аминокислота u выбрана из лизина или серина; аминокислота v выбрана из фенилаланина, валина или лейцина; аминокислота w выбрана из глютамина или лизина и аминокислота x выбрана из глицина или серина; при этом CDR3b включает аминокислотную последовательность y z a' b' c' d' e' f' g' h' i' j' k' l' m' n' o'p' q' r', где аминокислота y выбрана из глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, серина или глицина или не присутствует; аминокислота z выбрана из лейцина, глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, гистидина, пролина или глицина или не присутствует; аминокислота a' выбрана из глютаминовой кислоты, тирозина или лейцина или не присутствует; аминокислота b' выбрана из лейцина, аспарагина, глицина, гистидина, тирозина или триптофана или не присутствует; аминокислота c' выбрана из аргинина, серина, глютаминовой кислоты, тирозина, глицина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота d' выбрана из глицина или не присутствует; аминокислота e' выбрана из триптофана или тирозина или не присутствует; аминокислота f' является аспарагиновой кислотой или не присутствует; аминокислота g' выбрана из серина или аргинина или не присутствует; аминокислота h' является серином или не присутствует; аминокислота i' выбрана из глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота j' выбрана из тирозина, глютаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота k' выбрана из тирозина, фенилаланина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота l' выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, гистидина или триптофана или не присутствует; аминокислота m' выбрана из тирозина, глицина, аспарагиновой кислоты, пролина или серина или не присутствует; аминокислота n' выбрана из глицина, валина, тирозина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота o' выбрана из лейцина, аланина, глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота p' выбрана из метионина, фенилаланина или тирозина; аминокислота q' является аспарагиновой кислотой и аминокислота r' выбрана из валина, тирозина, изолейцина или пролина; и где второй полипептид в соединении с легкой цепью антитела способен связывать ФРГ.-3 015363 В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает выделенный полипептид, включающий по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей : 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 и 42. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает выделенный полипептид, включающий по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей : 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 и 43. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, включающую по крайней мере одну нуклеотидную последовательность,выбранную из последовательностей : 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 и 19. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, включающую по крайней мере одну нуклеотидную последовательность,выбранную из последовательностей : 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 и 20. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, включающий по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1a, CDR2a и CDR3a, при этом CDR1a включает аминокислотную последовательность a b c e f g h i j k l m n o p q, где аминокислота a выбрана из лизина,аргинина или глютамина; аминокислота b выбрана из серина или аланина; аминокислота c является серином, аминокислота d является глютамином; аминокислота e выбрана из серина, глицина или аспарагиновой кислоты; аминокислота f выбрана из валина или изолейцина или не присутствует; аминокислота g выбрана из лейцина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота h выбрана из фенилаланина или тирозина или не присутствует; аминокислота i является серином или не присутствует; аминокислотаj является серином или не присутствует; аминокислота k выбрана из аспарагина, треонина или не присутствует; аминокислота l выбрана из аспарагина, изолейцина или валина; аминокислота m выбрана из лизина, аргинина, серина, аспарагина или аспарагиновой кислоты; аминокислота n выбрана из аспарагина или серина; аминокислота o выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, триптофана или аспарагина; аминокислота p является лейцином и аминокислота q выбрана из аланина, глицина или аспарагина; при этом CDR2a включает аминокислотную последовательность r s t u v w x, где аминокислота r выбрана из триптофана, аланина, валина, глютаминовой кислоты или глицина; аминокислота s является аланином, аминокислота t является серином, аминокислота u выбрана из треонина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота v выбрана из аргинина или лейцина; аминокислота w выбрана из глютаминовой кислоты, глютамина или аланина и аминокислота x выбрана из серина, аспарагина или треонина; при этом CDR3a включает последовательность аминокислот у z a' b' c' d' e' f' g' h', где аминокислотаy выбрана из глютамина или лейцина; аминокислота z выбрана из глютамина, аспарагина или аргинина; аминокислота a' выбрана из тирозина, гистидина, аланина или серина; аминокислота b' выбрана из фенилаланина, тирозина, аспарагиновой кислоты, аспарагина или изолейцина; аминокислота c' выбрана из серина, глицина или аспарагина; аминокислота d' выбрана из пролина, тирозина, треонина, фенилаланина, аспарагиновой кислоты, лейцина или триптофана; аминокислота e' является пролином; аминокислотаf' является пролином или не присутствует; аминокислота g' является триптофаном, лейцином, пролином,тирозином или изолейцином; и аминокислота h' является треонином или аспарагином; и где полипептид в соединении с тяжелой цепью антитела способен связывать фактор роста гепатоцитов (ФРГ). В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, включающий по крайней мере один гипервариабельный участок (CDR), выбранный из CDR1b, CDR2b и CDR3b, при этом CDR1b включает аминокислотную последовательность a b c d e f g, где аминокислота a является серином или не присутствует; аминокислота b выбрана из аспарагиновой кислоты или глицина или не присутствует; аминокислота c выбрана из аспарагиновой кислоты, глицина, серина, валина, треонина или изолейцина; аминокислота d является тирозином; аминокислота e выбрана из тирозина или глицина; аминокислота f выбрана из изолейцина, метионина или триптофана и аминокислота g выбрана из гистидина, аспарагина или серина; при этом CDR2b включает аминокислотную последовательность h i j k l m n o p q r s t u v w x, где аминокислота h выбрана из триптофана, тирозина, валина, аспарагина или глютаминовой кислоты; аминокислота i выбрана из изолейцина, фенилаланина или валина; аминокислота j выбрана из аспарагина,серина, триптофана или тирозина; аминокислота k выбрана из пролина, серина, тирозина или гистидина; аминокислота l выбрана из аспарагина, серина или аспарагиновой кислоты; аминокислота m выбрана из серина или глицина; аминокислота n выбрана из глицина или серина или не присутствует; аминокислотаo выбрана из глицина, треонина, аспарагиновой кислоты, серина, изолейцина или аспарагина; аминокислота p выбрана из треонина, изолейцина или лизина; аминокислота q выбрана из аспарагина или тирозина; аминокислота r выбрана из тирозина или гистидина; аминокислота s выбрана из аланина или аспарагина; аминокислота t выбрана из глютамина, аспарагиновой кислоты или пролина; аминокислота u выбрана из лизина или серина; аминокислота v выбрана из фенилаланина, валина или лейцина; аминокислота w выбрана из глютамина или лизина и аминокислота x выбрана из глицина или серина;-4 015363 при этом CDR3b включает аминокислотную последовательность y z a' b' c' d' e' f' g' h' i' j' k' l' m' n' o'p' q' r', где аминокислота y выбрана из глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, серина или глицина или не присутствует; аминокислота z выбрана из лейцина, глютаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, гистидина, пролина или глицина или не присутствует; аминокислота a' выбрана из глютаминовой кислоты, тирозина или лейцина или не присутствует; аминокислота b' выбрана из лейцина, аспарагина, глицина, гистидина, тирозина или триптофана или не присутствует; аминокислота c' выбрана из аргинина, серина, глютаминовой кислоты, тирозина, глицина или фенилаланина или не присутствует; аминокислота d' является глицином или не присутствует; аминокислота e' выбрана из триптофана или тирозина или не присутствует; аминокислота f' является аспарагиновой кислотой или не присутствует; аминокислота g' выбрана из серина или аргинина или не присутствует; аминокислота h' является серином или не присутствует; аминокислота i' выбрана из глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота j' выбрана из тирозина, глютаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота k' выбрана из тирозина, фенилаланина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота l' выбрана из тирозина, аспарагиновой кислоты, гистидина или триптофана или не присутствует; аминокислота m' выбрана из тирозина, глицина, аспарагиновой кислоты, пролина или серина или не присутствует; аминокислота n' выбрана из глицина, валина, тирозина или аспарагиновой кислоты или не присутствует; аминокислота o' выбрана из лейцина, аланина, глицина или тирозина или не присутствует; аминокислота p' выбрана из метионина, фенилаланина или тирозина; аминокислота q' является аспарагиновой кислотой и аминокислота r' выбрана из валина, тирозина, изолейцина или пролина; и где полипептид в соединении с легкой цепью антитела способен связывать ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает изолированную клеточную линию, производящую антитело, выбранное из 1.24.1, 1.29.1, 1.60.1, 1.61.3, 1.74.3, 1.75.1,2.4.4, 2.12.1, 2.40.1 и 3.10.1. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает способ ингибирования связывания ФРГ с метионином (Met), включающий назначение специфического связующего агента с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает полипептид,включающий по крайне мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей : 164 и 165. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает полипептид, фактически включающий по крайне мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей : 164 и 165. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает специфический связывающий агент, способный связывать по крайней мере одну аминокислотную последовательность,выбранную из последовательностей : 164 и 165. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает домен связывания антитела или антигена, способный связывать по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей : 164 и 165. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает способ получения антитела, способного связывать фактор роста гепатоцита (ФРГ), включающий введение животному по крайней мере одного полипептида, выбранного из последовательностей : 164 и 165, и получение антитела, способного связывать ФРГ от животного. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает способ снижения или предотвращения связывания специфического связывающего агента с фактором роста гепатоцита(ФРГ) путем введения полипептида, включающего по крайней мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей : 164 и 165. В некоторых примерах осуществления изобретения изобретение предусматривает способ снижения или предотвращения связывания специфического связывающего агента с фактором роста гепатоцита(ФРГ) путем введения полипептида, состоящего по крайней мере из одной аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей : 164 и 165. Другие примеры осуществления изобретения будут очевидны из приводимого здесь раскрытия сущности изобретения. Краткое описание чертежей На фиг. 1A показана дендрограмма легких каппа-цепей некоторых антител к ФРГ (HGF HepatocyteGrowth Factor), показывающая их отношения зародышевой линии. Обозначения гена зародышевой линии указаны справа от обозначения антитела. На фиг. 1B показано выстраивание различных областей легкой каппа-цепи аминокислотной последовательности некоторых антител к ФРГ. Обозначения гена зародышевой линии указаны слева. Участки CDR указаны жирными линиями над выстроенными последовательностями. На фиг. 2A показана дендрограмма тяжелых гамма цепей некоторых антител к ФРГ (HGF Hepatocyte Growth Factor), показывающая их отношения зародышевой линии Обозначения гена зародышевой линии указаны справа от обозначения антитела. На фиг. 2B показано выстраивание вариабельных облас-5 015363 тей тяжелой гамма цепи аминокислотных последовательностей некоторых антител к ФРГ. Обозначения гена зародышевой линии указаны слева. Участки CDR указаны жирными линиями над выстроенными последовательностями. На фиг. 3 показаны последовательности ДНК, кодирующие вариабельные области как из легких(Light chain V region), так и тяжелых (Heavy chain V region) цепей некоторых антител к ФРГ. Для каждой последовательности приводится название антитела, обозначение зародышевой линии и идентификационный номер последовательности (SEQ ID No:). Подчеркнута природная последовательность сигнального пептида. Также показаны последовательности ДНК постоянных областей каппа (Human Kappa ConstantRegion), IgG1 и IgG2 (Human Constant Region) человека. На фиг. 4 показаны аминокислотные последовательности вариабельных областей легких (Lightchain V region) и тяжелых (Heavy chain V region) цепей некоторых антител к ФРГ. Для каждой последовательности указывается название антитела, обозначение зародышевой линии и идентификационный номер последовательности (SEQ ID No:). Подчеркнута природная последовательность сигнального пептида. Также показаны последовательности постоянных областей каппа (Human Kappa Constant Region),IgG1 и IgG2 (Human Constant Region) человека. На фиг. 5 показаны последовательности гипервариабельных участков (CDRs) легких (Light chain) и тяжелых (Heavy chain) цепей некоторых антител к ФРГ. Для каждой последовательности указаны название антитела и идентификационный номер последовательности (SEQ ID No). На фиг. 5A показаны аминокислотные последовательности гипервариабельных участков (CDRs) легкой цепи некоторых антител к ФРГ. На фиг. 5B показаны аминокислотные последовательности гипервариабельных участков (CDRs) тяжелой цепи некоторых антител к ФРГ. На фиг. 6 показаны результаты определения KD некоторых антител к ФРГ, рассмотренные в примере 8. На фиг. 6A показаны данные кинетического способа. На фиг. 6B показаны данные из способа равновесного раствора. На фиг. 7 показаны авторадиограммы от вестерн-блотов, рассмотренные в примере 8, тестирующих способность некоторых антител связываться с ФРГ человека и с ФРГ мыши. Полоски слева (линии 1-4) показывают авторадиограммы из экспериментов, выполненных при нередуцирующих условиях. Полоски справа (линии 5-8) показывают авторадиограммы из экспериментов, выполненных при редуцирующих условиях. На фиг. 8 показаны данные флуоресцентного активированного сортировщика клеток (FACS), рассмотренные в примере 8, оценивающие связывание некоторых антител с определенными мишенями. Верхняя часть фиг. 8 показывает данные FACS из контрольных образцов, в которых отсутствовали специфические связывающие агенты. Полоски 1 и 2 (слева) показывают данные контрольных образцов, в которых отсутствуют мишени, инкубированные, соответственно, флуоресцинизотиоцианатом ФИТЦ(FITC) и пентаэритритом (PE). Полоски 3 и 4 показывают данные из контрольных образцов, содержащих ФИТЦ и PE, промаркированные, соответственно, d5 ФРГ, но в которых отсутствует специфический связывающий агент. Полоски под жирной линией показывают данные флуоресцентного активированного сортировщика клеток (FACS) из экспериментов с тестированием пяти антител к ФРГ. Для каждого антитела первая полоска слева показывает данные из контрольных образцов (control) с отсутствующей мишенью, а полоски со второй по четвертую показывают данные из экспериментов, в которых мишенью были: ФРГ человека (huHGF), ФРГ мыши (muHGF) и, соответственно, ФРГ d5 (huHGFd5) человека. На фиг. 9A показана схема плазмида, кодирующего авидин, примыкающего к множественному сайту клонирования, использовавшемуся для генерации слитых белков, включающих авидин и белокмишень, как рассмотрено в примере 8. На фиг. 9B показана последовательность авидина цыпленка. На фиг. 10A и 10B даны схематические представления некоторых слитых белков и результаты анализов связывания, рассмотренных в примерах 8C и 8D, с использованием данных слитых белков. На фиг. 10C показано схематическое представление некоторых слитых белков, имеющих точковую мутацию, вставки или делеции. На фиг. 10D представлены аминокислотные последовательности ФРГ человека (human HGF) и мыши (mouse HGF) в области аминокислот 451-731 (последовательности : 120 и 121 соответственно, (SEQ ID No, с указанием соответствующей согласованной (Consensus) последовательности (последовательность : 122). На фиг. 11A и 11B показаны анализы HPLC (жидкостной хроматографии высокого разрешения) экспериментов по защите протеазы на ФРГ человека, как рассмотрено в примере 8E. На фиг. 11C показаны аминокислотные последовательности пептидов, защищенных от протеолитического переваривания путем связывания с антителом 2.12.1 в данной работе. На фиг. 12A-12D показаны результаты конкурирующих связывающих анализов, рассмотренных в примере 8. На фиг. 13 показаны данные IC50 от нейтрализационных анализов, рассмотренных в примере 9. На фиг. 14 показаны данные из нейтрализационных анализов в клетках PC3, рассмотренные в примере 10. На фиг. 15 показаны данные из ингибирующих анализов в клетках U-87, рассмотренные в примере 10.-6 015363 На фиг. 16 показаны результаты экспериментов, рассмотренных в примере 11, оценивающие влияние некоторых антител к ФРГ на опухоли ксенотрансплантата U-87 MG у мышей. На фиг. 16A показаны данные отклика дозы для антитела 2.4.4. на рост опухоли ксенотрансплантата U-87 MG в модели минимальной остаточной болезни. На фиг. 16B показаны данные отклика дозы для антитела 2.4.4. на рост опухоли ксенотрансплантата U-87 MG в модели установившейся болезни. На фиг. 16C, 16D, 16E и 16F показаны данные экспериментов тестирующих антитела к ФРГ в модели минимальной остаточной болезни U-87 (16C и 16D) или в модели установившейся болезни U-87 (16E и 16F). Детальное описание некоторых показательных примеров осуществления изобретения Следует понимать, что как предшествующее общее описание, так и последующее описание являются иллюстративными и поясняющими и не ограничивают заявленное изобретение. В данной заявке использование единственного числа включает множественное число, за исключением случаев, когда конкретно указано противоположное. В данной заявке использование "или" означает "и/или", за исключением случаев, когда конкретно указано противоположное. Далее, использование термина "включающий", а также других форм, таких как "включает" и "включенный", не имеет ограничительного характера. Также,такие термины как "элемент" или "компонент" включают как элементы и компоненты, входящие в один блок, так и элементы и компоненты, включающие более одного подблока, за исключением случаев, когда конкретно указано противоположное. Также использование термина "часть" может включать часть элемента или весь элемент. Используемые в данной заявке заглавия предназначены исключительно для организационной цели и не должны толковаться как ограничивающие описываемый предмет. Все документы или части документов, приводимые в данной заявке, включая патенты, патентные заявки, статьи, книги и академические трактаты, но не ограничиваясь ими, полностью включены в данную заявку путем ссылки для любой цели. Определения Стандартные методики могут использоваться для рекомбинантной ДНК; синтеза олигонуклеотидов и культуры и трансформации тканей (например, электрошоковое открытие клеточных пор (электропорация), липофекция). Ферментные реакции и методики очистки могут выполняться в соответствии со спецификациями производителя или как это обычно используется в данной области или описывается в данной заявке. Вышеупомянутые методики и процедуры, в общем, могут выполняться в соответствии с обычными способами, хорошо известными в данной области и описанными в различных общих и более специфических ссылках, которые приводятся и рассматриваются по всему описанию настоящей заявки. См., например, Сембрук и др. (Sambrook et al.), Молекулярное клонирование: лабораторное руководство(2-е изд., Колд Спринг Харбор Лаборитори Пресс, Колд Спринг Харбор, Нью-Йорк (1989, (Molecular(1989, включенное в данную заявку в качестве ссылки для любых целей. За исключением случаев, когда даны конкретные определения, лабораторные процедуры и методики аналитической химии, синтетической органической химии и медико-фармацевтической химии и номенклатуры, используемые в связи с ними, описанные в данной заявке, хорошо известны и обычно используются в данной отрасли. Стандартные методики могут использоваться для химического синтеза, химических анализов, приготовления фармацевтических препаратов, составления и доставки составов и лечения пациентов. При использовании в соответствии с настоящим раскрытием сущности изобретения следующие термины, за исключением по иному указанных случаев, будут иметь следующее значение. Термин "фактор роста гепатоцита" или "ФРГ" относится к полипептиду, описанному Накамура и др. (Nakamura et al.), Природа (Nature), 342:440-443 (1989) или к его фрагментам, а также связанным полипептидам, которые включают аллельные варианты, сплайсовые варианты, производные варианты, замещающие варианты, делеционные варианты и/или инсерционные варианты, слитые полипептиды и межвидовые гомологи, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид ФРГ включает концевые остатки, такие как остатки последовательности лидера, остатки при конъюгировании лекарственного препарата с антителом, обеспечивающим направленную доставку препарата к ткани или органу-мишени, аминоконцевые остатки метионина, остатки лизина, остатки метки и/или остатки слитого белка, но не ограничиваются ими. Термин "специфический связывающий агент" относится к природной или не природной молекуле,которая специфически связывается с мишенью. Примеры специфических связывающих агентов включают белки, пептиды, нуклеиновые кислоты, карбогидраты, липиды и небольшие молекулярные соединения, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент является антителом. В некоторых примерах осуществления изобретения специфически связывающий агент является областью связывания антигена. Термин "специфический связывающий агент с ФРГ" относится к специфическому связывающему агенту, специфически связывающему любую часть ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент с ФРГ является антителом к ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент является областью связывания антигена. Термин "поликлональное антитело" относится к гетерогенной смеси антител, связывающихся с раз-7 015363 личными эпитопами того же антигена. Термин "моноклональные антитела" относится к коллекции антител, закодированных той же молекулой нуклеиновой кислоты. В некоторых примерах осуществления изобретения моноклональные антитела производятся отдельной гибридомой, или другой клеточной линией, или трансгенным млекопитающим. Моноклональные антитела обычно распознают тот же эпитоп. Термин "моноклональный" не ограничивается каким-либо определенным способом производства антитела. Термин "химерное антитело" относится к антителу, в котором часть антитела является гомологичной к последовательности определенных видов или определенных классов антител, в то время как другая часть антитела является гомологичной к последовательности различных видов или классов антитела. См., например, патент США 4816567 и Моррисон и др. (Morrison et al.), Труды академии естественных наук (Proc. Natl. Acad. Sci) США, 81:6851-6855 (1985). Термин "антитело с трансплантированным гипервариабельным участком (CDR)" относится к антителу, в котором CDR от одного антитела вставлено в каркас другого антитела. В некоторых примерах осуществления изобретения антитело, из которого получено CDR и антитело, из которого производится каркас, происходят от различных видов. В некоторых примерах осуществления изобретения антитело, из которого выводится CDR и антитело, из которого производится каркас, происходят от различных изотипов. Термин "мультиспецифическое антитело" относится к антителу, в котором две или более вариабельных областей связываются с различными эпитопами. Эпитопы могут быть на одной и той же или на различных мишенях. В некоторых примерах осуществления изобретения мультиспецифическое антитело является "двуспецифическим антителом", распознающим два различных эпитопа на одном и том же или на различных антигенах. Термин "каталитическое антитело" относится к антителу, к которому присоединяются одна или более каталитических составляющих. В некоторых примерах осуществления изобретения каталитическое антитело является цитотоксическим антителом, включающим цитотоксическую составляющую. Термин "гуманизированное антитело" относится к антителу, в котором вся или часть каркасной области антитела получена от человека, но все или часть одного или более участков CDR получены от других видов, например от мыши. Термин "полностью человеческое антитело" относится к антителу, в котором как CDR, так и каркас включают в основном человеческие последовательности. В некоторых примерах осуществления изобретения полностью человеческие антитела производятся в млекопитающих, не являющихся человеком,включая мышей, крыс и зайцеобразных, но не ограничиваясь ими. В некоторых примерах осуществления изобретения полностью человеческие антитела производятся в гибридомных клетках. В некоторых примерах осуществления изобретения полностью человеческие антитела производятся рекомбинантно. Термин "антиидиотипное антитело" относится к антителу, которое специфически связывается с другим антителом. Термин "специфически связывает" относится к способности специфического связывающего агента связываться с мишенью с большим аффинитетом, чем при связывании с не мишенью. В некоторых примерах осуществления изобретения специфическое связывание относится к связыванию для мишени с аффинитетом, по крайней мере в 10, 50, 100, 250, 500 или 1000 раз превышающим аффинитет к не мишени. В некоторых примерах осуществления изобретения аффинитет определяется твердофазным иммуноферментным анализом аффинитета (ELISA). В некоторых примерах осуществления изобретения аффинитет определяется анализом последствий BIAcore. В некоторых примерах осуществления изобретения аффинитет определяется кинетическим способом. В некоторых примерах осуществления изобретения аффинитет определяется способом равновесного раствора. Термин "эпитоп" относится к части молекулы, способной связываться специфическим связывающим агентом. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп обычно включает химически активные поверхностные группировки молекул, такие как, например, боковые цепи аминокислот или карбогидратов, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Эпитопы могут быть смежными или несмежными. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитопы могут быть мимикрическими потому, что они включают трехмерную структуру, которая подобна эпитопу, используемому для генерации антитела, но, тем не менее, они совсем не содержат или содержат только некоторые остатки аминокислот, обнаруживаемых в том эпитопе, который использовался для генерации антитела. Термин "ингибирующий и/или нейтрализующий эпитоп" относится к эпитопу, который, будучи связанным специфическим связывающим агентом, приводит к снижению биологической активности invivo, in vitro и/или in situ. В некоторых примерах осуществления изобретения нейтрализующий эпитоп расположен на или связан с биологически активной областью мишени. Термин "активирующий эпитоп" относится к эпитопу, который, будучи связанным специфическим связывающим агентом, вызывает активацию или поддержание биологической активности in vivo, in vitro и/или in situ. В некоторых примерах осуществления изобретения активирующий эпитоп расположен на или связан с биологически активной областью мишени.-8 015363 Термин "изолированный полинуклеотид" при использовании в данной заявке означает полинуклеотид геномной комплементарной ДНК (кДНК) или синтетического происхождения или их некоторую комбинацию, который в силу своего происхождения как "изолированного полинуклеотида" (1) не связан со всей или частью полинуклеотида, в которой "изолированный полинуклеотид" находится в природе, (2) связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе, или (3) не встречается в природе как часть более крупной последовательности. Термин "выделенный белок", упомянутый в данной заявке, означает белок, кодируемый кДНК, рекомбинантной РНК или имеющий синтетическое происхождение или их некоторую комбинацию, который (1) свободен, по крайней мере, от некоторых белков, с которыми он обычно обнаруживается, (2) и практически свободен от других белков из того же источника, например от тех же видов, (3) экспрессируется клеткой от различных видов или (4) не встречается в природе. Термин "полипептид" используется в данной заявке в качестве родового термина по отношению к природным белкам или модификациям подобных белков, имеющих делеции, добавления и/или замещения одной или более аминокислот природной последовательности. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид имеет делеции, добавления и/или замещения по крайней мере одной, но не более чем 50, 30, 20, 15, 10, 8, 5 или 3 аминокислот природной последовательности. Термин "встречающийся в природе" при использовании в данной заявке в применении к объекту относится к тому факту, что объект может быть обнаружен в природе. Например, полипептид или полинуклеотидная последовательность, присутствующие в организме (включая вирусы), которые могут быть выделены из некоторого источника в природе и которые намеренно не модифицировались человеком в лаборатории или по иному, являются встречающимися в природе. Термин "функционально связанный" при использовании в данной заявке относится к компонентам,которые имеют связь, позволяющую им функционировать предназначенным образом. Например, контрольная последовательность, "функционально связанная" с кодирующей последовательностью, лигируется таким образом, что экспрессия кодирующей последовательности достигается при условиях, совместимых с контрольными последовательностями. Термин "контрольная последовательность" при использовании в данной заявке относится к полинуклеотидным последовательностям, которые могут производить экспрессию и обработку кодирующих последовательностей, с которой они лигируются. Природа подобных контрольных последовательностей может различаться в зависимости от организма хозяина. В соответствии с некоторыми примерами осуществлении изобретения контрольные последовательности для прокариотов могут включать промотор,области связывания рибосом и последовательность завершения транскрипции. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения контрольные последовательности для эукариотов могут включать промоторы, один или более генов-усилителей (энхансеров) и последовательность завершения транскрипции. В некоторых примерах осуществления изобретения "контрольные последовательности" могут включать последовательности лидера и/последовательности слитого партнера. Термин "полинуклеотид" при использовании в данной заявке означает полимерную форму нуклеотидов, имеющих длину по крайней мере 10 оснований. В некоторых примерах осуществления данного изобретения основания могут быть рибонуклеотидами или деоксирибонуклеотидами или модифицированной формой любого типа нуклеотидов. Термин включает однонитевые и двухнитевые формы ДНК. Термин "олигонуклеотид", используемый в данной заявке, включает встречающиеся в природе и модифицированные нуклеотиды, соединенные вместе встречающимися в природе и/или не встречающимися в природе связками олигонуклеотидов. Олигонуклеотиды являются подгруппой полинуклеотидов, обычно включающей длину в 200 или менее оснований. В некоторых примерах осуществления изобретения олигонуклеотиды имеют длину от 10 до 60 оснований. В некоторых примерах осуществления изобретения олигонуклеотиды имеют длину 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или от 20 до 40 оснований. Олигонуклеотиды могут быть однонитевыми или двухнитиевыми, например, при использовании для конструирования мутанта гена. Олигонуклеотиды могут быть сенсорными или антисенсорными олигонуклеотидами. Термин "встречающиеся в природе нуклеотиды" включает диоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Термин "модифицированные нуклеотиды" включают нуклеотиды с модифицированными или замещенными сахарными группами и тому подобное. Термин "олигонуклеотидные связи" включает такие олигонуклеотидные связи как фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат,фосфороанилотиоат, фосфороаниладат, фосфороамидат и тому подобное. См., например, Ла Планш и др.(LaPlanche et al.), Остатки нуклеиновых кислот (Nucl. Acids. Res.), 14:9081 (1986); Стек и др. (Stec et al.),Журнал американского химического общества (J. Am. Chem. Soc.), 106:6077 (1984); Штейн и др. (Stein etal.), Остатки нуклеиновых кислот (Nucl. Aids. Res.), 16:3209 (1988); Зон и др. (Zon et al.), Создание противораковых лекарственных средств (Anti-Cancer Drug Design), 6:539 (1991); Зон и др. (Zon et al.), Олигонуклеотиды и аналоги: практический подход (Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach),с. 87-108, издание Ф. Экштейн, Окфсорд Юниверсити Пресс, Оксфорд, Англия (F. Eckstein. Ed., OxfordUniversity Press, Oxford England (1991; Стек и др. (Stec et al.), патент США 5151510; Улманн и Пейман Кемикал Ревьюз (Uhlmann and Peyman Chemical Reviews), 90:543 (1990), раскрытие сущности кото-9 015363 рых включено в данную заявку путем ссылки для любой цели. В некоторых примерах осуществления изобретения олигонуклеотид может включать метку для детектирования. Идентичность и сходство связанных полипептидов могут быть легко рассчитаны известными способами. Эти способы включают те, которые описаны в Вычислительной молекулярной биологии (Computational Molecular Biology), Леск A.M. (Lesk, A.M.), издание Оксфорд Юниверсити Пресс, Нью-Йорк(1988); Биорасчеты: Информатика и геномные проекты (Biocomputing: Informatics and Genome Projects),Смит Д.В. (Smith, D.W.), издание Академик Пресс, (Academic Press), Нью-Йорк (1993); Компьютерный анализ данных последовательностей, ч. 1 (Computer Analysis of Sequence Data, Part 1), Гриффин A.M. и Гриффин Х.Г. (Griffin, A.M., and Griffin, H.G.), издание Хумана Пресс, (Humana Press), Нью-Джерси(1994); Анализ последовательностей в молекулярной биологии (Sequence Analysis in Molecular Biology),фон Хайндже Г. (von Heinje, G.), Академик Пресс (Academic Press) (1987); Учебник для начинающих по анализу последовательностей (Sequence Analysis Primer), Грибсков М. и Деверо Дж. (Gribskov, M. andDevereux, J.), издание М. Stockton Press, Нью-Йорк (1991); Карильо и др. (Carillo et al.), Журнал прикладной математики СИАМ (SIAM J. Applied Math.), 48:1073 (1988), но не ограничиваются ими. Некоторые способы определения идентичности предназначены для получения наибольшего согласования между тестируемыми последовательностями. Способы определения идентичности описаны в общедоступных компьютерных программах. Способы компьютерных программ для определения идентичности между двумя последовательностями включают, без ограничения, пакет программ компьютерной группы по генетике (GCG), включая алгоритм программ по генетике (GAP) (Деверо и др. (Devereuxet al.), Остатки нуклеиновых кислот (Nucl. Acid. Res.), 12:387 (1984); Компьютерная группа по генетике(Genetics Computer Group), Висконсин, Мэдисон, WI, BLASTP, BLADTN and FASTA (Алтшул и др. (Altschul et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 215:403-410 (1990. Программу BLASTX можно получить в Национальном Центре Биотехнологической Информации (NCBI) и других источниках(Altschul et al.), там же (1990. Хорошо известный алгоритм Смита Вотермена может также использоваться для определения идентичности. Некоторые схемы сравнительного анализа первичной структуры для сравнения первичной структуры двух аминокислотных последовательностей могут привести к совпадению только короткой области двух последовательностей, и эта маленькая согласованная область может иметь очень высокую идентичность последовательности, даже несмотря на то, что нет значительной связи между двумя полномерными последовательностями. Соответственно, в некоторых примерах осуществления изобретения выбранные способы сравнения первичной структуры (программа GAP) приведут к сравнению первичных структур,которое охватывает по крайней мере 50 смежных аминокислот полипептида мишени. Например, используя компьютерный алгоритм GAP, (Компьютерная группа по генетике (GeneticsComputer Group), Университет Висконсина, Мэдисон, Висконсин), два полипептида, для которых должен быть определен процент идентичности последовательности, сравниваются для оптимального согласования их соответствующих аминокислот ("согласованный охват", как определяется алгоритмом). В некоторых примерах осуществления изобретения сокращение отверстия бреши (которое вычисляется как 3X средней диагонали; "средняя диагональ" является средней диагональю используемой матрицы сравнения; "диагональ" - это счет или номер, приписываемый каждому превосходному согласованию аминокислоты определенной матрицей сравнения) и сокращение расширения бреши (которое обычно составляет 1/10 раз от сокращения отверстия бреши), а также матрица сравнения, подобная PAM 250 илиBLOSUM 62, используются вместе с алгоритмом. В некоторых примерах осуществления изобретения алгоритм также использует стандартную матрицу сравнения (см. Дейхофф и др. (Dayhoff et al.), Атлас белковых последовательностей и структуры (Atlas of Protein Sequence and Structure), 5(3) (1978) для матрицы сравнения РАМ 250; Хейнкофф и др. (Henikoff et al.), Труды академии естественных наук (Proc.Natl. Acad. Sci), США, 89:10915-10919 (1992) для матрицы сравнения BLOSUM 62). В некоторых примерах осуществления изобретения параметры для сравнения последовательности полипептида включают следующие; алгоритм: Нидлмен и др. (Needleman et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 48-443453 (1970); матрица сравнения: BLOSUM 62 из Хейнкофф и др. (Henikoff et al.), там же (1992); сокращение бреши: 12; сокращение длины бреши: 4; порог сходства: 0. Программа GAP может быть полезна с вышеупомянутыми параметрами. В некоторых примерах осуществления изобретения вышеупомянутые параметры являются параметрами по умолчанию для сравнения полипептидов (вместе с отсутствием сокращения для концевых брешей), при использовании алгоритма GAP. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент включает тяжелую цепь, включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность,по крайней мере на 90% идентичную последовательности аминокислот, выбранной из последовательно- 10015363 стей : 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 и 43. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент включает тяжелую цепь, включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность, по крайней мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей : 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 и 43. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент включает тяжелую цепь,включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность, по крайней мере на 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей: 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 и 43. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент включает легкую цепь, включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность,по крайней мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей : 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 и 42. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент включает легкую цепь, включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность, по крайней мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей : 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 и 42. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент включает легкую цепь,включающую вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность, по крайней мере на 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из последовательностей : 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 и 42. При использовании в данной заявке двадцать обычных аминокислот и их сокращения соответствуют обычному использованию. См. Иммунология - Синтез (2-е изд.), Е.С. Голуб и Д.Р. Грен (E.S. Golub иD.R. Gren), издание Sinauer Associates, Сандерленд, Массачусетс (1991), включенную в данную заявку путем ссылки для любой цели. Стереоизомеры (например, D-аминокислоты) двадцати обычных аминокислот, неприродные аминокислоты, подобные -, -дизамещенным аминокислотам, N-алкильные аминокислоты, молочная кислота и другие неординарные аминокислоты могут также быть приемлемыми компонентами для полипептидов по настоящему изобретению. Примеры неординарных аминокислот включают 4-гидроксипролин, -карбоксиглютамат, -N,N,N-триметиллизин, -N-ацетиллизин, O-фосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин, -N-метиларгинин и другие подобные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В используемом здесь обозначении аминокислот левостороннее направление является аминоконцевым направлением и правостороннее направление является карбоксиконцевым направлением в соответствии со стандартным использованием и употреблением. Подобным же образом, за исключением по иному определенных случаев, левосторонний конец однонитевых полинуклеотидных последовательностей является концом 5'; левостороннее направление двухнитевых полинуклеотидных последовательностей называется направлением 5'. Направление с 5' по 3' добавления зарождающихся транскриптов РНК называется направлением транскриптов; области последовательности на нити ДНК, имеющие ту же последовательность, что и РНК, и расположенные с 5' по 5' конец транскрипта РНК, называются "обратной последовательностью"; области последовательности на нити ДНК, имеющие ту же последовательность, что и РНК и расположенные с 3' по 3' конец транскрипта ДНК, называются "прямыми последовательностями". Консервативные замещения аминокислот могут включать не встречающиеся в природе остатки аминокислот, обычно включенные химическим синтезом пептидов, а не синтезом в биологических системах. Они включают пептидомиметики и другие реверсированные или инвертированные формы элементов аминокислот. Естественно, встречающиеся остатки могут быть разделены на классы, основываясь на общих свойствах боковой цепи: 1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile; 2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) кислотные: Asp, Glu; 4) базовые: His, Lys, Arg; 5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro; и 6) ароматические: Trp, Tyr, Phe. Например, неконсервативные замещения могут включать обмен члена одного из этих классов на член другого класса. Подобные замещенные остатки могут быть введены в области антитела человека,являющиеся гомологичным с нечеловеческими антителами, или в негомологичные области молекулы. При производстве подобных изменений в соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения может быть рассмотрен гидротерапевтический показатель аминокислот. Каждой аминокислоте приписывается гидротерапевтический показатель на основе ее гидрофобности и характеристик заряда. Это изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин (+3,8); фенилаланин (+2,8); цистеин/цистин (+2,5); метионин (+1,9); аланин (+1,8); глицин (-0,4); треонин (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глютамат (-3,5); глютамин (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин(-3,9) и аргинин (-4,5). Важность гидротерапевтического показателя аминокислоты при наделении белка интерактивной биологической функцией известна в данной области, Кайт и др. (Kyte et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 157:105-131 (1982). Известно, что некоторые аминокислоты могут быть замещены другими аминокислотами, имеющими сходный гидротерапевтический индекс или показатель, и все равно сохранять сходную биологическую активность. В некоторых примерах осуществления изобретения включено замещение аминокислот, гидротерапевтические показатели которых находятся в пределах+/-2, путем осуществления изменений на базе гидротерапевтического показателя. В некоторых примерах осуществления изобретения включаются замещения в пределах +/-1 и в некоторых примерах осуществления изобретения включаются замещения в пределах +/-0,5. В данной области также известно, что замещение подобных аминокислот может эффективно производиться на основании гидрофильности, особенно там, где биологически функциональный белок или пептид, созданный подобным образом, предполагается для использования в иммунологических применениях, как и в настоящем случае. В некоторых примерах осуществления изобретения наибольшая локальная средняя гидрофильность белка, регулируемая гидрофильностью смежных аминокислот, корелируется с иммуногенетичностью и антигенетичностью, т.е. с биологическим свойством белка. Следующие значения гидрофильности были предписаны этим остаткам аминокислот: аргинин(-3,4). При производстве изменений, основываясь на сходных значениях гидрофильности, в некоторых примерах осуществления изобретения включено замещение аминокислот, чьи значения гидрофильности находятся в пределах +/-2 и в некоторых примерах осуществления изобретения включены значения, находящиеся в пределах +/-0,5. Можно также идентифицировать эпитопы из первичных аминокислотных последовательностей на основании гидрофильности. Эти области называются "эпитопными сердцевинными областями". Показательные замещения аминокислот показаны в таблице. Замещения аминокислот- 12015363 Опытный специалист сможет определить варианты показанных здесь полипептидов, используя известные методики. В некоторых примерах осуществления изобретения специалист в данной области может определить приемлемые области молекулы, которые могут быть заменены без нарушения активности путем конъюгирования областей мишени, считающихся не имеющими значения для активности. В некоторых примерах осуществления изобретения можно идентифицировать остатки и части молекулы,которые сохраняются среди подобных полипептидов. В некоторых примерах осуществления изобретения даже области, которые могут быть важными для биологической активности или для структуры, могут подвергаться консервативным замещениям аминокислот без нарушения биологической активности или без неблагоприятного воздействия на структуру полипептида. В дополнении к этому, специалист в данной области может рассмотреть структурально функциональные исследования идентификации остатков в подобных полипептидах, имеющих значение для активности или структуры. С учетом подобного сравнения можно предсказать важность остатков аминокислот в белке, соответствующих остаткам аминокислот, имеющим значение для активности или структуры в сходных белках. Специалист в данной области может выбрать химически подобные замещения аминокислот для прогнозирования подобных важных остатков аминокислот. Специалист в данной области может также проанализировать трехмерную структуру и аминокислотную последовательность в сопоставлении с данной структурой в сходных полипептидах. С учетом подобной информации специалист в данной области может прогнозировать выстраивание остатков аминокислот антитела по отношению к его трехмерной структуре. В некоторых примерах осуществления изобретения специалист в данной области может решить не производить радикальных изменений в остатках аминокислот, прогнозируемых на поверхности белка, так как подобные остатки могут участвовать в важных взаимосвязях с другими молекулами. Более того, специалист в данной области может сгенерировать тестовые варианты, содержащие отдельное замещение аминокислоты в каждом желаемом остатке аминокислоты. Варианты затем могут быть отсеяны с использованием анализов активности, известных специалистам в данной области. Подобные варианты могли бы использоваться для сбора информации о приемлемых вариантах. Например, если было обнаружено, что изменение определенного остатка аминокислоты приводило к нарушенной, нежелательно сниженной или неустойчивой активности, можно было бы избегать вариантов с подобным изменением. Другими словами, основываясь на информации, собранной от подобных рутинных экспериментов, специалисты в данной области могут с готовностью определить аминокислоты, в которых следует избегать дальнейших замен, либо по отдельности, либо в комбинации с другими мутациями. Ряд научных публикаций был посвящен прогнозированию вторичной структуры. См. Моулт Дж.,(Moult J.), Программная работа по биотехнологии (Curr. Op. in Biotech.), 7(4):422-427 (1996), Чоу и др.(Chou et al.), Биохимия (Biochemistry), 13(2):222-245 (1974); Чоу и др. (Chou et al.), Биохимия (Biochemistry), 113(2):211-222 (1974); Чоу и др. (Chou et al.), Современная энзимология. Связанные области молекулярной биологии (Adv. Enzymol. Relat. Area Mol. Biol.), 47:45-148 (1978); Чоу и др. (Chou et al.), Годовой обзор по биохимии (Ann. Rev. Biochem.), 47:251- 276 и Чоу и др. (Chou et al.), Журнал биофизики (Biophys. J.), 26:367-384 (1979). Более того, в настоящее время имеются компьютерные программы, оказывающие помощь в прогнозировании вторичной структуры. Один способ прогнозирования вторичной структуры основан на моделировании гомологии. Например, два полипептида или белка, имеющие идентичность последовательности более 30% или сходство более 40%, часто имеют сходные структуральные топологии. Недавний рост базы данных структуры белка (PDB) обеспечил увеличение прогнозируемости вторичной структуры, включая потенциальное число складок внутри структуры полипептида или белка. См. Холм и др. (Holm et al.), Остатки нуклеиновых кислот (Nucl. Acid. Res.), 279(1):244-247 (1999). Было предположено (Бреннер и др. (Brenner et al.), Текущие проблемы структуральной биологии (Curr. Op.Struc. Biol.), 7(3):369-376 (1997, что в данном полипептиде или белке имеется ограниченное количество складок и что как только было бы разрешено критическое число структур, структуральное прогнозирование стало бы значительно более аккуратным. Дополнительные способы прогнозирования вторичной структуры включают "продевание" (Джоунз Д.) (Jones, D.), Текущие проблемы структуральной биологии (Curr. Opin. Struct. Biol.), 7(3):377-87 (1997); Сипл и др. (Sippl et al.), Структура (Structure), 4(1): 15-19 (1996, "профильный анализ" (Боуи и др.)(Bowie et al.), Наука (Science), 253:164-170 (1991); Грибсков и др. (Gribskov et al.), Meth. Enzym., 183:146159 (1990); Грибсков и др. (Gribskov et al.), Труды академии естественных наук (Proc. Nat. Acad. Sci.),84(13): 4355-4358 (1987 и "эволюционное связывание" (см. Холм (Holm), там же (supra) и Бреннер(Brenner), там же (supra) (1997. В некоторых примерах осуществления изобретения варианты специфического связывающего агента включают гликозилированные варианты, в которых число и/или тип участков гликозилирования было изменено по сравнению с аминокислотными последовательностями полипептида родителя. В некоторых примерах осуществления изобретения варианты белка включают большее или меньшее числоN-связанных участков гликозилирования, чем у нативного белка. N-связанный участок гликозилирования характеризуется последовательностью: Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где остаток аминокислоты, обозначенный как X, может быть любым остатком аминокислоты, кроме пролина. Замещение остатков ами- 13015363 нокислот для создания этой последовательности обеспечивает потенциально новый участок для добавления N-связанной цепи карбогидратов. Альтернативно, замещения, которые устраняют эту последовательность, удалят существующую N-связанную цепь карбогидратов. Также предусмотрена реорганизация N-связанных цепей карбогидратов, в которых один или более участков гликозилирования (обычно встречающихся в природе) удаляются и создаются один или более новых N-связанных участков. Дополнительные предпочтительные варианты антитела включают цистеиновые варианты, в которых один или более остатков цистеина удаляются или замещаются другой аминокислотой (например, серином) по сравнению с аминокислотной последовательностью родителя. Варианты цистеина могут быть полезны,когда антитела должны быть повторно сложены в биологически активную конформацию, подобную существующей после изоляции нерастворимых тел включения. Варианты цистеина обычно имеют меньше цистеиновых остатков, чем нативный белок, и обычно имеют четное число для минимизации взаимодействий, происходящих от непарных цистеинов. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения замещения аминокислот - это такие замещения, которые (1) снижают подверженность протеолизу, (2) снижают подверженность окислению, (3) изменяют связывающее сродство для формирования протеиновых комплексов, (4) изменяют связывающие сродства и/или (4) обеспечивают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства на подобных полипептидах. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения отдельные или множественные замещения аминокислот (в некоторых примерах осуществления изобретения консервативные замещения аминокислот) могут выполняться во встречающейся в природе последовательности (в некоторых примерах осуществления изобретения в части полипептида за переделами домена(-ов), формирующего межмолекулярные контакты). В некоторых примерах осуществления изобретения консервативное замещение аминокислот обычно не может значительно изменить структурные характеристики родительской последовательности (например, замена аминокислоты не должна иметь тенденцию ломать спираль, встречающуюся в родительской последовательности или нарушать другие типы вторичной структуры, характеризующие родительскую последовательность). Примеры признанных в данной области вторичных и третичных структур полипептидов описаны в работе "Протеины, структуры и молекулярные принципы" (Proteins, Structures and Molecular Principles), издательство Крейтон (Creighton, Ed.), B.X. Фриман и компания (W.H. Freeman and Company), Нью-Йоркand J. Tooze), издание Гарланд Паблишинг (Garland Publishing), Нью-Йорк, штат Нью-Йорк (1991) и Торнтон и др. (Thornton et al.), Природа 354:105 (1991), которые включены в данный материал путем ссылки. Термин "производная" относится к молекуле, включающей химическую модификацию, отличную от вставки, делеции или замещения аминокислот. В некоторых примерах осуществления изобретения производные включают ковалентные модификации, включая химическое связывание с полимерами, липидами и другими органическими или неорганическими частицами, но не ограничиваясь данным. В некоторых примерах осуществления изобретения химически модифицированный специфический связывающий агент может иметь больший циркулирующий период полураспада, чем специфический связывающий агент, не подвергавшийся химической модификации. В некоторых примерах осуществления изобретения химически модифицированный специфический связывающий агент может иметь улучшенную емкость мишени для желаемых клеток, тканей и/или органов. В некоторых примерах осуществления изобретения производный специфический связывающий агент ковалентно модифицирован и включает одну или более растворимых в воде полимерных приставок, включая полиметиленгликоль, полиоксиэтиленгликоль или полипропиленгликоль, но не ограничиваясь ими. См., например, патенты США 4640835; 4496689; 4301144; 4670417; 4791192 и 4179337. В некоторых примерах осуществления изобретения производный специфический связывающий агент включает один или более полимер, включая монометоксиполиэтиленгликоль, декстран, целлюлозу или другие полимеры с основой на карбогидратах, поли-(N-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, пропиленоксидный/этиленоксидный сополимер, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерол) и поливиниловый спирт, но не ограничиваясь ими, а также смеси подобных полимеров. В некоторых примерах осуществления изобретения производный ковалентно модифицирован с подблоками полиэтиленгликоля (PEG). В некоторых примерах осуществления изобретения один или более растворимых в воде полимеров прикреплен к одной или более специфических позиций, например, у аминоконца продукта замещения (производного). В некоторых примерах осуществления изобретения один или более растворимых в воде полимеров произвольно присоединен к одной или более стороне цепи производного. В некоторых примерах осуществления изобретения PEG используется для улучшения терапевтической способности специфического связывающего агента. В некоторых примерах осуществления изобретения PEG используется для улучшения терапевтической способности гуманизированного антитела. Некоторые подобные способы рассмотрены, например, в патенте США 6133426, включенном в данный материал путем ссылки для любой цели. Термин "фрагмент полипептида" при использовании в данной заявке означает полипептид, который имеет аминоконцевую и/или карбоксиконцевую делецию. В некоторых примерах осуществления изобре- 14015363 тения фрагменты имеют длину по крайней мере от 5 до 478 аминокислот. Будет понятно, что в некоторых примерах осуществления изобретения фрагменты имеют длину по крайней мере 5, 6, 8, 10, 14, 20,50, 70, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 или 450 аминокислот. Аналоги пептидов обычно используются в фармацевтической промышленности как непептидные лекарства со свойствами, аналогичными свойствам матричному пептиду. Эти типы непептидных соединений называются "пептидными миметиками" или "пептидомиметиками". Фаучер (Fauchere), Журнал современных лекарственных средств (J. Adv. Drug. Res.), 15:29 (1986); Вебер и Фрейдингер (Veber andFreidinger), TINS с. 392 (1985) и Эванс и др. (Evans et al.), Журнал медицинской химии (J. Med. Chem.) 30:1229 (1987), включенные в данную заявку путем ссылки для любых целей. Подобные соединения часто разрабатываются с помощью компьютеризированного молекулярного моделирования. Пептидные миметики, структурально подобные терапевтически полезным пептидам, могут использоваться для производства подобного же терапевтического или профилактического эффекта. Обычно пептидомиметики структурально подобны парадигмальному полипептиду (т.е. полипептиду, который имеет биохимические свойства или фармацевтическую активность), подобному антителу человека, но имеют одну или более пептидных связей, по возможности замещенные связью, выбранной из CH2NH, CH2S, CH2CH2, CH=CH- (цис и транс), COCH2, CH(OH)CH2 и CH2SO-, способами, хорошо известными в данной области. Систематическое замещение одной или более аминокислот согласованной последовательности D-аминокислотой того же типа (например, D-лизин вместо L-лизина) может использоваться в некоторых примерах осуществления изобретения для генерации более стабильных пептидов. В дополнении к этому могут быть сгенерированы ограниченные пептиды, содержащие согласованную последовательность или практически идентичный вариант согласованной последовательности, способами, известными в данной области (Ризо и Гиераш) (Rizo and Gierasch), Ежегодный обзор по биохимии (Ann. Rev.Biochem.), 61:387 (1992), включенный в данную заявку путем ссылки для любой цели; например, путем добавления внутренних цистеиновых остатков, способных образовывать внутримолекулярные дисульфидные мостики, циклизирующие пептид. Термины "антитело" или "пептид(-ы) антитела" относятся к неповрежденному антителу или его связывающему фрагменту, конкурирующему с неповрежденным антителом за специфическое связывание. В некоторых примерах осуществления изобретения связывающие фрагменты производятся методиками рекомбинантной ДНК. В некоторых примерах осуществления изобретения связывающие фрагменты производятся ферментным или химическим дроблением неповрежденных антител. Связывающие фрагменты включают, без ограничения, Fab, Fab', F(ab'), Fv и одноцепьевые антитела. Термин "тяжелая цепь" включает любой полипептид, имеющий достаточную последовательность вариабельной области, чтобы придать специфичность мишени. Термин "легкая цепь" включает любой полипептид, имеющий достаточную последовательность вариабельной области, чтобы придать специфичность мишени. Тяжелая цепь полной длины включает домен вариабельной области, VH и три домена постоянной области, CH1, CH2, и CH3. Домен VH представляет собой аминоконец полипептида и доменCH3 представляет собой карбоксильный конец. Термин "тяжелая цепь" при использовании в данной заявке включает тяжелую цепь полной длины и ее фрагменты. Легкая цепь полной длины включает вариабельную область, VL и домен постоянной области CL. Подобно тяжелой цепи домен вариабельной области легкой цепи является аминоконцом полипептида. Термин "легкая цепь" при использовании в данной заявке включает легкую цепь полной дины и ее фрагменты. Фрагмент Fab состоит из одной легкой цепи и CH1 и вариабельных областей одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовывать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи. Фрагмент Fab' включает одну легкую цепь и одну тяжелую цепь, включающую большую часть постоянной области, между доменами CH1 и CH2, так что может быть образована межцепочечная дисульфидная связь между двумя тяжелыми цепями для образования молекулы F(ab')2. Область Fv включает вариабельные области как тяжелой, так и легкой цепей, но в ней отсутствуют постоянные области. Одноцепочечные антитела - это молекулы Fv, в которых вариабельные области тяжелой и легкой цепи были соединены гибким соединителем для образования отдельной цепи полипептида, формирующего область связывания антигена. Антитела с отдельной цепью детально рассматриваются, например, в WO 88/01649 и патентах США 4946778 и 5260203. Термин "вариабельная область" или "вариабельный домен" относится к части легкой и/или тяжелых цепей антитела, обычно включающей приблизительно аминоконец из 120 по 130 аминокислот в тяжелой цепи и от около 100 по 110 аминокислот аминоконца в легкой цепи. В некоторых примерах осуществления изобретения вариабельные области различных антител сильно различаются в аминокислотной последовательности, даже среди антител одного и того же вида. Вариабельная область антитела обычно определяет специфичность определенного антитела к его мишени. Термин "иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина" относится к фрагменту полипептида, включающему, по крайней мере, вариабельные домены тяжелой цепи иммуноглобулина и легкой цепи иммуноглобулина. В некоторых примерах осуществления изобретения иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина способен связывать лиганд, предотвращая связывание лиганда с его рецептором, и тем самым, прерывая биологический отклик, получаемый в результате связывания лиганда с рецептором. В некоторых примерах осуществления изобретения иммунологически- 15015363 функциональный фрагмент иммуноглобулина способен связываться с рецептором, предотвращая связывание лиганда с его рецептором и, тем самым, прерывая биологический отклик, получаемый в результате связывания лиганда с рецептором. В некоторых примерах осуществления изобретения иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина способен связывать рецептор и активировать или инактивировать данный рецептор. Бивалентное антитело, отличное от "мультиспецифического" или "мультифункционального" антитела, в некоторых примерах осуществления изобретения обычно понимается как имеющее идентичные участки связывания. Специфический связывающий агент фактически ингибирует прикрепление лиганда к рецептору,когда избыток специфического связующего агента снижает количество рецептора, связанного с контррецептором по крайней мере на 20, 40, 60, 80, 85% или более (при измерении in vitro конкурентным анализом связывания). Термин "мишень" относится к молекуле или части молекулы, способной связываться специфическим связывающим агентом. В некоторых примерах осуществления изобретения мишень может иметь один или более эпитопов. В некоторых примерах осуществления изобретения мишень является антигеном. Термин "эпитоп" включает любую детерминанту полипептида, способную специфически связываться с иммуноглобулином или рецептором T-клетки. В некоторых примерах осуществления изобретения детерминанты эпитопа включают химически активные поверхностные группировки молекул, такие как аминокислоты, боковые цепи сахара, фосфорил, или сульфонил, и в некоторых примерах осуществления изобретения могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики и/или специфические характеристики заряда. Эпитоп является областью антигена, связываемой антителом. В некоторых примерах осуществления изобретения антитело специфически связывает антиген, когда он предпочтительно распознает свой антиген мишени в сложной смеси белков и/или макромолекул. В некоторых примерах осуществления изобретения говорится, что антитело специфически связывает антиген,когда константа диссоциации составляет 1 мкмоль. В некоторых примерах осуществления изобретения,когда константа диссоциации составляет 100 нмоль и в некоторых примерах осуществления изобретения, когда константа диссоциации составляет 10 нмоль. Термин "агент" при использовании в данной заявке означает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, изготовленный из биологических материалов. При использовании в данной заявке термины "метка" или "меченый" относятся к включению детектируемого маркера, например, путем включения меченой радиоактивным изотопом аминокислоты или присоединения к полипептиду частиц биотина, поддающихся детектированию маркированным авидином(например, стрептавидином, содержащим флуоресцентный маркер или обладающим ферментной активностью, поддающейся детектированию оптическими или калориметрическими способами). В некоторых примерах осуществления изобретения метка или маркер могут также быть терапевтическими. Различные способы мечения полипептидов и глюкопротеинов известны в данной области и могут быть использованы. Примеры меток для полипептидов включают следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3H, 14C, 15N, 35 S, 90Y, 99 Tc, 111 In, 125 I, 131 I), флуоресцентные метки (например, ФИТЦ, родамин, лантанид, фосфор), ферментные метки (например, пероксидаза хрена, -галоктозидаза, люцефираза,алкалин фосфотаза), химиолюминисцентные, биотинилиновые группы, заданные эпитопы полипетида,распознаваемые вторичным репортером (например, последовательности зиппер пары лейцина, связывающие участки для вторичных антител, связывающие домены металла, метки эпитопа), но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения метки присоединяются спейсерными ножками различной длины для снижения потенциального стерического препятствия. Термин "биологический образец" при использовании в данной заявке включает любое количество вещества от живой массы или прежде живого существа, но не ограничивается им. Подобные живые существа включают людей, мышей, обезьян, крыс, кроликов и других животных, но не ограничиваются ими. Подобные вещества включают кровь, сыворотку, мочу, клетки, органы, ткани, кость, костный мозг,узлы лимфы и кожу, но не ограничиваются ими. Термин "рак" включает твердые опухоли и гематологические злокачественные образования, но не ограничиваются ими. Примеры рака включают рак молочной железы, рак прямой кишки, желудочную карциному, глиому, карциному сквамозных клеток головы и шеи, наследственную и спорадическую папиллярную почечную карциному, лейкемию, лимфому, синдром Ли-Фраумени, злокачественную плевральную мезотелиому, меланому, множественная миелому, карциному не-малых клеток легких, остеосаркому, рак яичников, рак надпочечников, рак простаты, рак малых клеток легких, синовиальную саркому, карциному щитовидной железы и переходную клеточную саркому мочевого пузыря, но не ограничиваются ими. Термин "активность ФРГ" включает любое биологическое воздействие ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения активность ФРГ является активностью Met-HGF (Мет ФРГ). В некоторых- 16015363 примерах осуществления изобретения активность ФРГ является независимой от Мет активностью ФРГ. Термин "активация Мет-ФРГ" включает взаимодействие ФРГ с рецептором Мет. Термин "активность Мет-ФРГ" включает любую биологическую активность, возникающую в результате активации Мет-ФРГ. Показательная активность включает невральную индукцию, регенерацию печени, заживление ран, рост, инвазию, морфологическую дифференциацию, эмбриологическое развитие, рассеяние, пролиферацию, апоптоз, подвижность клеток, метастазы, миграцию, прикрепление клеток, образование групп интегрина, фосфорилирование паксиллина, формирование фокальных прикреплений, и рак, возникающий в результате аберрантной активации Мет-ФРГ, но не ограничивается данным. Термин "аберрантная активация Мет-ФРГ" включает любое обстоятельство, при котором активация Мет-ФРГ не приводит к стимуляции любой активности Мет-ФРГ тогда, когда обычно активация приводит к подобной активности. Аберрантая активация Мет-ФРГ также включает любое обстоятельство, при котором активация Мет-ФРГ приводит к меньшей активности Мет-ФРГ, чем это произошло бы при нормальной активации. Аберрантная активация также включает любое обстоятельство, при котором активация Мет-ФРГ приводит к большей активности, чем это произошло бы при нормальной активации. Аберрантная активация Мет-ФРГ может привести, например, к некоторым видам рака. Термин "независимая от Мет активность ФРГ" относится к любой биологической активности под воздействием ФРГ, не зависящей от связывания ФРГ с рецептором Мет. Подобная активность включает биологическую активность, вызванную взаимодействием ФРГ с другими рецептором и биологическую активность, вызванную ФРГ по другим каналам, например Рон или мет/рон гетеродимерами, но не ограничивается ею. Термин "аберрантная активность ФРГ" относится к любому обстоятельству, при котором активность ФРГ либо выше, либо ниже, чем следует. При некоторых обстоятельствах аберрантная активность ФРГ происходит от аберрантной активации ФРГ. При некоторых обстоятельствах аберрантная активность ФРГ происходит от превышающей норму концентрации ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения аберрантная активность ФРГ происходит от концентрации ФРГ, которая ниже, чем следует. Термин "фармацевтический агент или лекарство" при использовании в данной заявке означают химическое соединение или композицию, способную вызвать желаемый терапевтический эффект при соответствующем введении пациенту. Термин "модулятор" при использовании в данной заявке является соединением, изменяющим или видоизменяющим активность или функцию молекулы. Например, модулятор может вызвать увеличение или уменьшение величины некоторой активности или функции молекулы по сравнению с величиной активности или функции наблюдаемой при отсутствии модулятора. В некоторых примерах осуществления изобретения модулятор является ингибитором, снижающим величину, по крайней мере одной активности или функции молекулы. Некоторые показательные активности и функции молекулы включают связывающее сродство, ферментную активность и трансдукцию сигнала, но не ограничиваются ими. Некоторые показательные ингибиторы включают протеины, пептиды, антитела, пептитела, карбогидраты или небольшие органические молекулы, но не ограничиваются ими. Пептитела описаны, например, в патенте США 6660843 (соответствующим заявке PCT No. WO 01/83525). При использовании в данной заявке термин "практически чистый" означает, что вид объекта является преобладающим присутствующим видом (т.е. на молярной основе он является более преобладающим, чем любые другие индивидуальные виды в композиции). В некоторых примерах осуществления изобретения практически очищенная фракция является композицией, отличающейся тем, что объектные виды включают по крайней мере около 50% (на молярной основе) всех видов макромолекулы. В некоторых примерах осуществления изобретения практически чистая композиция будет включать около 80, 85,90, 95 или 99% всех видов макромолекул, присутствующих в композиции. В некоторых примерах осуществления изобретения объектные виды очищены до фактической однородности (виды загрязнителей не могут быть обнаружены в композиции с помощью обычных способов детектирования), отличающейся тем, что композиция состоит из фактически одного вида макромолекулы. Термин "пациент" включает людей и животные субъекты. Некоторые показательные специфические связывающие агенты. В некоторых случаях ФРГ связывает рецептор Мет и индуцирует фосфорилирование Мет. В некоторых случаях обычное индуцируемое ФРГ фосфорилирование Мет регулирует разнообразные клеточные процессы. В некоторых примерах осуществления изобретения аберрантная активность Мет-ФРГ связана с рядом состояний болезни человека. Например, в некоторых случаях чрезмерная активность ФРГ связана с рядом видов рака. Следовательно, в некоторых случаях модуляция активности ФРГ может быть полезной терапевтически. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты с ФРГ используются для уменьшения величины активности ФРГ с аномально высокого уровня. В некоторых примерах осуществления изобретения уменьшение активности ФРГ с аномально высокого уровня уменьшает онкогенную активность и снижает степень тяжести рака. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения специфические связывающие агенты с ФРГ используются для лечения рака. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связываю- 17015363 щие агенты с ФРГ используются для профилактики рака. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты с ФРГ используются для лечения рака, в котором активность ФРГ является нормальной. При таких видах рака,например, снижение активности ФРГ до уровня ниже нормального способно обеспечить терапевтический эффект. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент с ФРГ используется для модуляции по крайней мере одной активности Мет-ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент с ФРГ используется для модуляции по крайней мере одной независящей от Мет-ФРГ активности. В некоторых примерах осуществления изобретения более одного специфического связывающего агента с ФРГ используется для модуляции активности ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты с ФРГ представляют собой полностью моноклональные антитела человека. В некоторых примерах осуществления изобретения обеспечивается кодирование нуклеотидных и аминокислотных последовательностей,включающих тяжелую и легкую цепи молекул иммуноглобулина, в частности последовательностей, соответствующих вариабельным областям. В некоторых примерах осуществления изобретения обеспечиваются последовательности, соответствующие гипервариабельным участкам (CDRs), а именно с CDR1 по CDR 3. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения обеспечивается гибридомная клеточная линия, экспрессирующая подобную молекулу иммуноглобулина. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения обеспечивается гибридомная клеточная линия, экспрессирующая моноклональное антитело. В некоторых примерах осуществления изобретения гибридомная клеточная линия выбрана по крайней мере из 1.24.1, 1.29.1, 1.60.1, 1.61.3, 1.74.3, 1.75.1, 2.4.4, 2.12.1,2.40.1 и 3.10.1. В некоторых примерах осуществления изобретения обеспечивается очищенное моноклональное антитело человека к ФРГ человека. Способность клонировать и реконструировать локусы человека, имеющие размер мегаоснования, в дрожжевых искусственных хромосомах (YACs) и вводить их в зародышевую линию мыши обеспечивает подход, проливающий свет на функциональные компоненты очень больших или неразработанно картированных локусов, а также генерировать приемлемые модели человеческой болезни. Далее, использование подобной технологии для замещения локусов мыши их человеческими эквивалентами может обеспечить понимание экспрессии и регулирования генной продукции человека во время развития, их связь с другими системами и их участие в вызывании и прогрессировании болезни. Важным практическим применением данной стратегии является "гуманизация" гуморальной иммунной системы мыши. Введение локусов иммуноглобулина человека (Ig) в мышь, у которой были инактивированы эндогенные гены Ig, предлагает возможность изучить механизмы, стоящие за программируемой экспрессией и сбором антител, а также за их ролью в развитии В клеток. Далее, подобная стратегия может обеспечить источник для производства полностью человеческих моноклональных антител(Mabs). В некоторых примерах осуществления изобретения ожидается, что полностью человеческие антитела сведут к минимуму иммуногенные и аллергические отклики, присущие мышиным или производным от мыши Mabs, и, таким образом, в некоторых примерах осуществления изобретения увеличат эффективность и безопасность принимаемых антител. В некоторых примерах осуществления изобретения полностью человеческие антитела могут использоваться для лечения хронических или рецидивирующих болезней человека, таких как рак, малярия или пролиферативная диабетическая ретинопатия, которые могут приводить к повторным назначениям антител. Можно вывести штаммы мыши, отсутствующие при мышином производстве антител, с большими фрагментами локусов иммуноглобулина (Ig) человека, предположив, что подобная мышь будет производить антитела человека при отсутствии мышиных антител. Большие фрагменты Ig человека могут сохранить большое разнообразие вариабельного гена, а также соответствующее регулирование производства антител и экспрессии. С помощью использования мышиных механизмов для диверсификации антитела и выбора и при отсутствии иммунологической толерантности к протеинам человека репродуцированный репертуар антитела человека в этих мышиных штаммах может дать высокоаффинитетные полностью человеческие антитела против любого представляющего интерес антигена, включая антигены человека. Используя гибридомную технологию, могут быть произведены и выбраны специфические к антигенамMabs человека с желаемой специфичностью. Некоторые показательные способы описаны в WO 98/24893, патенте США 5545807, EP 546073B1 и 546073A1. В некоторых примерах осуществления изобретения можно использовать постоянные области от видов, отличных от человека, вместе с вариабельными областями человека. Встречающаяся в природе структура антитела. Встречающиеся в природе структурные единицы антитела обычно включают тетрамер. Каждый подобный тетрамер обычно состоит из двух идентичных пар цепей полипептидов, при этом каждая пара имеет одну полную "легкую" (в некоторых примерах осуществления изобретения около 25 кДа) и одну полную "тяжелую" цепь (в некоторых примерах осуществления изобретения около 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи обычно включает вариабельную область с приблизительно от 100 до 110- 18015363 или более аминокислот, обычно отвечающую за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи обычно определяет постоянную область, которая может отвечать за эффекторную функцию. Легкие цепи человека обычно классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда. Тяжелые цепи обычно классифицируются как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела как IgM,IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. IgG имеет ряд подклассов, включающих IgG1, IgG2, Ig G3 и IgG4, но не ограничиваются ими. IgM имеет подклассы, включающие IgM1 и IgM2, но не ограничиваются ими.IgA подобным же образом подразделен на подклассы, включающие IgA1 и IgA2, но не ограничиваются ими. Внутри полной легкой и тяжелой цепей вариабельные и постоянные области соединены областью"J" из около 12 или более аминокислот, при этом тяжелая цепь также включает область "D" из еще около 10 аминокислот. См., например, "Фундаментальная иммунология", глава 7 (Fundamental Immunology ch. 7), Поль В. (Paul, W.), 2-е изд., издательство Raven Press, Нью-Йорк (1989) (включенную полностью в данную заявку путем ссылки для всех целей). Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепи обычно образуют участок связывания антигена. Вариабельные области обычно демонстрируют такую же общую структуру, как сохранившиеся каркасные области (FR), соединенные тремя гипервариабельными участками, также называемыми областями определения комплементарности или CDRs. CDRs от двух цепей каждой пары обычно выравниваются каркасными областями, которые могут позволить связываться со специфичным эпитопом. От N-конца до C-конца вариабельные области как легкой, так и тяжелой цепи обычно включают домены FR1, CDR1,FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Назначение аминокислот каждому домену обычно происходит в соответствии с определениями последовательности КАБАТ (Kabat) протеинов, представляющих иммунологический интерес (Национальный институт здравоохранении, Бетесда, Мериленд (1987 и 1991 или Хотия и Леск Дж. (ChothiaLesk J.), Молекулярная биология (Mol. Biol.) 196:901-917 (1987); Хотия и др.(Chothia et al.), Природа (Nature), 342:878-883 (1989). В некоторых примерах осуществления изобретения тяжелая цепь антитела связывается с антигеном в отсутствие легкой цепи антитела. В некоторых примерах осуществления изобретения легкая цепь антитела связывается с антигеном в отсутствие тяжелой цепи антитела. В некоторых примерах осуществления изобретения область связывания антигена связывает с антигеном в отсутствие легкой цепи антигена. В некоторых примерах осуществления изобретения область связывания антигена связывает с антигеном в отсутствие тяжелой цепи антигена. В некоторых примерах осуществления изобретения индивидуальная вариабельная область специфически связывается с антигеном в отсутствие других вариабельных областей. В некоторых примерах осуществления изобретения определяющая делиниация CDR и идентификация остатков, включающих участок связывания антитела, получается путем определения структуры антитела и/или определения структуры комплекса антитело-лиганд. В некоторых примерах осуществления изобретения это может быть выполнено с помощью любых различных методик, известных специалистам в данной области, подобных рентгеновской кристаллографии. В некоторых примерах осуществления изобретения различные способы анализа могут использоваться для идентификации и аппроксимации участков CDR. Примеры подобных способов включают определение Кабат (Kabat), определение Хотия(Chothia), определение AbM и контактное определение, но не ограничиваются ими. Определение Кабат является стандартным для нумерации остатков и обычно используется для идентификации участков CDR. См., например, Джонсон и By (Johnson and Wu), Остатки нуклеиновых кислот (Nucleic Acids Res), 28:214-8 (2000). Определение Хотия подобно определению Кабат, но определение Хотия учитывает позицию некоторых структурных замкнутых областей. См., например, Хотия и др. (Chotia et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 196:901-17 (1986); Хотия и др. (Chotia etal.), Природа (Nature), 342:877-83 (1989). Определение AbM использует интегрированный ряд компьютерных программ, производимых Оксфордской молекулярной группой (Oxford Molecular Group), моделирующих структуру антитела. См., например, Мартин и др. (Martin et al.), Труды академии естественных наук (Proc. Natl. Acad. Sci) (США), 86:9268-9272 (1989); AbM, компьютерная программа для моделирования вариабельных областей антител, Оксфорд. Великобритания; Oxford Molecular Ltd. Определение AbM моделирует третичную структуру антитела от первичной последовательности, используя комбинацию баз данных знаний и способов ab initio, описанных в Самудрала и др. (Samudrala et al.), Прогнозирование изначальной белковой структуры, используя комбинированный иерархический подход (AbInitio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchiai Approach), Дополнительные материалы по белкам, структуре, функции и генетике (PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl.), 3:194:198(1999). Контактное определение основывается на анализе имеющихся сложных структур кристалла. См.,например, МакКаллум и др. (MacCallum et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 5:732-45(1996). По принятому соглашению участки CDR в тяжелой цепи обычно называются H1, H2 и H3 и нумеруются последовательно в направлении от аминоконца к карбоксиконцу. Участки CDR в легкой цепи обычно называются L1, L2 и L3 и нумеруются последовательно в направлении от аминоконца к карбоксиконцу.- 19015363 Биспецифические или бифункциональные антитела. Биспецифическое или бифункциональное антитело обычно является искусственным гибридным антителом, имеющим две различные пары тяжелой/легкой цепи и два различных участка связывания. Биспецифические антитела могут производиться разнообразными способами, включая гибридомы или связывание фрагментов Fab', но не ограничиваются ими. См., например, Сонгсивилей и др. (Songsivilai etal.), Клиническая экспериментальная иммунология (Clin. Exp. Immunol.), 79:315-321 (1990); Костелни и др. (Kostelny et al), Журнал иммунологии (J. Immunol.), 148:1547-1553, 91992. Приготовление антител. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения изобретение включает некоторые антитела, специфически связывающие с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела производятся иммунизацией антигеном. Термин "антиген" относится к молекуле, используемой в животном для производства антител, способных связываться с данным антигеном и/или иной мишенью. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела могут производиться иммунизацией полным ФРГ, растворимой формой ФРГ, сплайс вариантной формой ФРГ или его фрагментом. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела по данному изобретению могут быть поликлональными или моноклональными и/или могут быть рекомбинантными антителами. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела по данному изобретению являются антителами человека, приготовленными, например, с помощью иммунизации трансгенных животных, способных производить антитела человека (см., например, опубликованную заявку PCTWO 93/12227). В некоторых примерах осуществления изобретения могут использоваться некоторые стратегии для манипулирования присущими антителам свойствами, такими как аффинитет антитела к его мишени. Подобные стратегии включают использование специфического к участку или произвольного мутагенеза молекулы полинуклеотида, кодирующего антитела для генерации варианта антитела, но не ограничиваются данным. В некоторых примерах осуществления изобретения за подобной генерацией происходит скрининг для вариантов антитела, демонстрирующих желаемое изменение, например увеличенный или уменьшенный аффинитет. В некоторых примерах осуществления изобретения остатки аминокислот, конъюгированные в мутагенных стратегиях, являются ими и в CDR. В некоторых примерах осуществления изобретения конъюгируются аминокислоты в каркасных областях вариабельных доменов. В некоторых примерах осуществления изобретения было показано, что подобные каркасные области вносят вклад в свойства связывания мишени некоторых антител. См., например, Хадсон (Hudson), Текущее мнение по биотехнологии (Curr.Opin. Biotech.), 9:395-402 (1999) и имеющиеся в данной работе ссылки. В некоторых примерах осуществления изобретения более маленькие и более эффективно отсеянные библиотеки вариантов антител производятся ограничением произвольного или направленного на участок мутагенеза участками гипермутации в CDR, которые являются участками, соответствующими областям,способным к мутации во время процесса вызревания соматического аффинитета. См., например, Чоудхури и Пастан (Chowdhury and Pastan), Природа биотехнологии (Nature Biotech), 17:568-572 (1999) и имеющиеся в ней ссылки. В некоторых примерах осуществления изобретения некоторые типы элементов ДНК могут быть использованы для идентификации участков гипермутации, включая некоторые прямые и инвертированные повторы, некоторые согласованные последовательности, некоторые вторичные структуры и некоторые палиндромы, но не ограничиваясь ими. Например, подобные элементы ДНК, которые могут быть использованы для идентификации участков гипермутации, включают тетрабазовую последовательность, включающую пурин (A или G), за которым следует гуанин (G), за которым следует пиримидин (C или T), за которым следует либо аденозин либо тирозин (A или T) (т.е. A/G-G-C/T-A/T),но не ограничиваются ими. Другой пример элемента ДНК, который может быть использован для идентификации участков гипермутации, является кодоном серина; A-G-C/T. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела гуманизированы. В некоторых примерах осуществления изобретения гуманизированное антитело является практически не иммуногенным в людях. В некоторых примерах осуществления изобретения гуманизированное антитело имеет практически такой же аффинитет для мишени, как и антитело от других видов, из которых выведено гуманизированное антитело. См., например, патент США 5530101; 5693761; 5693762; 5585089. В некоторых примерах осуществления изобретения обнаруживаются аминокислоты вариабельного домена антитела, которые могут быть модифицированы без снижения природного аффинитета области связывания антигена и в то же время снижая его иммуногенность. См., например, патенты США 5766886 и 5869619. В некоторых примерах осуществления изобретения модификация антитела способами, известными в данной области, обычно приводит к достижению увеличенного связывающего сродства для мишени и/или снижению иммуногенности антитела у реципиента. В некоторых примерах осуществления изобретения гуманизированные антитела модифицируются для устранения участков гликолизации для того,чтобы увеличить аффинитет антитела к его родственному антигену. См., например, Ко и др. (Co et al.),Молекулярная иммунология (Mol. Immunol.), 30:1361-1367 (1993). В некоторых примерах осуществления изобретения для производства гуманизированных антител используются такие методики, как "реконст- 20015363 руирование", "гиперхимеризацию" или "облицовку/перекладку". См., например, Васвами и др. (Vaswamiet al.), Анналы аллергии, астмы и иммунологии (Annals of Allergy, Asthma,Immunol.), 81:105 (1998); Рогуска и др. (Roguska et al.), Prot Engineer 9:895-904 (1996) и патент США 6072035. В некоторых примерах осуществления изобретения подобные методики обычно снижают иммуногенность путем снижения числа чужеродных остатков, но не предотвращают антиидиотипичные и антиаллотипичные отклики вслед за повторным приемом антител. Некоторые другие способы для снижения иммуногенности описаны, например, в Гиллианд и др. (Gilliland et al.), Журнал иммунологии (J. Immunol.), 62(6):3663-71(1999). В некоторых случаях гуманизация антител приводит к потере способности связывания антигена. В некоторых примерах осуществления изобретения гуманизированные антитела являются "обратно мутированными". В некоторых примерах осуществления изобретения гуманизированное антитело мутируется и включает один или более остатков аминокислот, обнаруживаемых в донорском антителе. См., например, Салданха и др. (Saldanha et al.), Молекулярная иммунология (Mol. Immunol.), 36:709-19 (1999). В некоторых примерах осуществления изобретения гипервариабельные участки (CDRs) вариабельных областей легкой и тяжелой цепи антитела к ФРГ могут быть трансплантированы в каркасные области (FRs) от тех же или других видов. В некоторых примерах осуществления изобретения CDRs вариабельных областей легкой и тяжелой цепи антитела к ФРГ могут быть трансплантированы в согласованные человеческие FRs. Для создания согласованных человеческих FRs в некоторых примерах осуществления изобретения каркасные области (FRs) от нескольких человеческих тяжелых или легких цепей аминокислотных последовательностей выстраиваются для идентификации согласованной последовательности аминокислот. В некоторых примерах осуществления изобретения FRs антитела к тяжелой или легкой цепи ФРГ заменяются на FRs от другой тяжелой или легкой цепи. В некоторых примерах осуществления изобретения редкие аминокислоты в FRs тяжелой или легкой цепей антитела к ФРГ не заменяются, в то время как остальные аминокислоты каркасной области (FR) заменяются. Редкие аминокислоты являются специфическими аминокислотами, находящимися в позициях, в которых они обычно не находятся в FRs. В некоторых примерах осуществления изобретения трансплантированные вариабельные области от антитела к ФРГ могут использоваться с постоянной областью, отличающейся от постоянной области антитела к ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения трансплантированные вариабельные области являются частью отдельной цепи антитела Fv. Трансплантация CDR описана, например, в патентах США 6180370; 6054297; 5693762; 5859205; 5693761, 5565332; 5585089 и 5530101 и в Джоунз и др.(Winter), FEBS Letts, 430:92-94 (1998), включенные в данную заявку путем ссылки для любой цели. В некоторых примерах осуществления изобретения для генерации моноклональных антител используется метод отображения фага. В некоторых примерах осуществления изобретения подобные методики производят полностью человеческие моноклональные антитела. В некоторых примерах осуществления изобретения полинуклеотид, кодирующий отдельный фрагмент антитела Fab или Fv, осуществляет экспрессию на поверхности частицы фага. См., например, Хугенбум и др. (Hoogenboom et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 227:381 (1991); Маркс и др. (Marks et al.), Журнал молекулярной биологии (J. Mol. Biol.), 222:587 (1991); патент США 5885793. В некоторых примерах осуществления изобретения фаги "просеваются" для идентификации тех фрагментов антитела, которые имеют аффинитет к мишени. Таким образом, происходят некоторые подобные процессы искусственной иммунной селекции путем отображения репертуара фрагмента антитела на поверхности нитевидного бактериофага и последующий выбор фагов путем их связывания с мишенью. В некоторых подобных процедурах изолируются высоко аффинитетные функциональные агонистические фрагменты антитела. В некоторых подобных примерах осуществления изобретения полный репертуар генов антитела человека создается клонированием природно реорганизованных V генов человека из лимфоцитов периферийной крови. См.,например, Муллинекс и др. (Mullinax et al.), Труды академии естественных наук (Proc. Natl. Acad. Sci)(США), 87:8095-8099 (1990). В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения антитела по изобретению приготавливаются путем использования тренсгенной мыши, имеющей значительную вставленную часть антитела человека, производящего геном, но обладающую дефицитом производства эндогенных мышиных антител. Подобные мыши затем способны производить молекулы иммуноглобулина человека и антитела и имеют дефицит производства мышиного иммуноглобулина и антител. Методики, используемые для достижения данного результата, раскрыты в патентах, заявках и ссылках, раскрытых в описании изобретения. В некоторых примерах осуществления изобретения можно использовать способы, такие как описанные в опубликованной заявке PCTWO 98/24893 или в Мендез и др. (Mendez et al.), Природа Генетики (Nature Genetics), 15:146-156 (1997), включенных в данную заявку путем ссылки для любой цели. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения полностью человеческие моноклональные антитела, специфические к ФРГ, производятся следующим образом. Трансгенные мыши,содержащие гены иммуноглобулина человека, иммунизируются представляющим интерес антигеном,- 21015363 например ФРГ; от данных мышей получаются лимфатические клетки (подобные B-клеткам), производящие экспрессию антител. Подобные восстановленные клетки сливаются с клеточной линией миелоидного типа для приготовления бессмертных клеточных линий гибридомы, и подобные клеточные линии гибридомы отсеиваются и отбираются для идентификации клеточных линий гибридомы, производящих антитела, специфические к представляющему интерес антигену. В некоторых примерах осуществления изобретения осуществляется производство гибридомной клеточной линии, производящей антитела, специфические к ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения полностью человеческие антитела производятся путем экспрессии рекомбинантной ДНК в клетках хозяина или путем экспрессии в гибридомных клетках. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела производятся, используя описанную выше методику отображения фага. В некоторых примерах осуществления изобретения полностью человеческие антитела производятся, подвергая антиген влиянию спленоцитов человека (B или T клеток) in vitro, а затем реконструируя подвергнутые влиянию клетки в иммунокомпромиссных мышах, например SCID или nod/SCID. См., например, Брамс и др. (Brams et al.), Журнал иммунологии (J. Immunol.), 160:2051-2058 (1998); Карбаллидо и др. (Carballido et al.), Nat. Med., 6:103-106 (2000). При некоторых подобных подходах трансплантация эмбриональной ткани человека в мышей SCID (SCID-hu) приводит к долгосрочному кроветворению и развитию T-клеток человека. См., например, Мак Кун и др. (McCune et al.), Наука (Science), 241:15321639 91988); Ифверсен и др. (Ifversen et al.), Sem Immunol., 8:243-248 (1996). В некоторых случаях гуморальный иммунный отклик в подобных химерных мышах зависит от совместного развития T-клеток человека у животных. См., например, Мартенссон и др. (Martensson et al.), Иммунология (Immunol),83:1271-179 (1994). При некоторых подходах лимфоциты периферийной крови человека трансплантируются в мышь SCID. См., например, Мозиер и др. (Mosier et al.), Природа (Nature), 335:256-259 (1988). В некоторых подобных примерах осуществления изобретения, когда подобные трансплантированные клетки обрабатываются либо примирующим агентом, подобным стафилококковому энтеротоксину A (SEA) или не-человеческими моноклональными антителами CD40, детектируются более высокие уровни производства B клеток. См., например, Мартенссон и др. (Martensson et al.), Иммунология (Immunol.),83:224-230 (1995); Мерфи и др. (Murphy et al.), Кровь (Blood), 86:1946-1953 (1995). В некоторых примерах осуществления изобретения антитела по данному изобретению производятся по крайней мере одной из следующих гибридом: 1.24.1, 1.29.1, 1.60.1, 1.61.1, 1.74.1, 1.75.1, 2.4.4,2.12.1, 2.40.1 и 3.10.1. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты связывают с ФРГ при константе диссоциации (KD), составляющей 10-8, 10-9 или 10-10 М. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты связываются с ФРГ при константе диссоциации (KD) между приблизительно 0,099 и 0,79 нМ при измерении кинетическим способом (фиг. 6A). В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты связывают с ФРГ при KD, составляющей от менее чем 10 pM до приблизительно 54 pM, при измерении способом равновесного раствора (фиг. 6B). В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают молекулу иммуноглобулина, представляющую по крайней мере один изотип из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4,IgE, IgA, IgD и IgM. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают легкую цепь каппа человека и/или тяжелую цепь человека. В некоторых примерах осуществления изобретения тяжелая цепь представляет собой изотип IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, IgA,IgD или IgM. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты были клонированы для экспрессии в клетках млекопитающих. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают постоянную область, отличную от любых постоянных областей изотипов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, IgA, IgD и IgM. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают легкую цепь каппа человека и тяжелую цепь IgG1 человека. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают легкую цепь каппа человека и тяжелую цепьIgG2 человека. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают легкую цепь каппа человека и тяжелую цепь IgG3, IgG4, IgE, IgA, IgD или IgM человека. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают вариабельные области антител, легированные с постоянной областью, не являющейся постоянной областью для изотипа IgG1 и не являющейся постоянной областью для изотипа IgG2. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты были клонированы для экспрессии в клетках млекопитающих. В некоторых примерах осуществления изобретения консервативные модификации тяжелых и легких цепей антител по крайней мере от одной гибридомной линии: 1.24.1, 1.29.1, 1.60.1, 1.61.1, 1.74.1,1.75.1, 2.4.4, 2.12.1, 2.40.1 и 3.10.1 (и соответствующие модификации кодирующих нуклеотидов) произведут антитела к ФРГ, имеющие функциональные и химические характеристики, подобные характеристикам антител из гибридомных линий: 1.24.1, 1.29.1, 1.60.1, 1.61.1, 1.74.1, 1.75.1, 2.4.4, 2.12.1, 2.40.1 и 3.10.1. В отличие от этого, в некоторых примерах осуществления изобретения значительные модифика- 22015363 ции функциональных и/или химических характеристик антител к ФРГ могут быть выполнены путем выбора замещений в последовательности аминокислот тяжелой и легкой цепей, значительно отличающихся в их воздействии на поддержание (а) структуры молекулярного каркаса в области замещения, например,в качестве пластинчатой или спиральной конформации, (б) зарядом или гидрофобностью молекулы на участке мишени или (в) объемом боковой цепи. Например, "консервативное замещение аминокислоты" может включать замещение природного остатка аминокислоты неприродным остатком таким образом, что имеется небольшое или совсем отсутствует воздействие на полярность или заряд остатка аминокислоты в данной позиции. Далее, природный остаток в полипептиде может быть также замещен аланином, как это было описано ранее для "мутагенеза со сканированием аланина". Желательные замещения аминокислот (консервативные или неконсервативные) могут быть определены специалистами в данной области в момент, когда желательны подобные замещения. В некоторых примерах осуществления изобретения замещения аминокислот могут использоваться для идентификации важных остатков антител к ФРГ или для увеличения или уменьшения аффинитета антител к ФРГ, описанного в данной заявке. В некоторых примерах осуществления изобретения антитела по настоящему изобретению могут быть выражены в клеточных линиях, отличных от гибридомных клеточных линий. В некоторых примерах осуществления изобретения последовательности, кодирующие определенные антитела, могут использоваться для трансформации приемлемой клетки хозяина млекопитающего. В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения трансформация может производиться любым известным способом для введения полинуклеотидов в клетку хозяина, включая пример упаковки полинуклеотида в вирусе (или в вирусном векторе) и трансдукцию клетки хозяина вирусом (или вектором) или процедуры трансфекции, известные в данной области, как это пояснено патентами США 4399216; 4912040; 4740461 и 4959455 (при этом патенты включены в данную заявку путем ссылки для любой цели). В некоторых примерах осуществления изобретения используемые процедуры трансформации могут зависеть от трансформируемого хозяина. Способы введения гетерологовых полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области и включают регулируемую декстраном трансфекцию, осаждение фосфата кальция, регулируемую полибреном трансфекцию, слияние протопласта, электропорез, заключение полинуклеотида(-ов) в капсулы в липосомах и прямое микроинжектирование ДНК в ядро, но не ограничиваются ими. Клеточные линии млекопитающих, имеющиеся в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны специалистам в данной области и включают многие бессмертные клеточные линии, которые можно получить из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection - АТСС), включая овариальные клетки китайского хомяка (CHO), клетки HeLa, клетки почки детеныша хомяка (ВНК),клетки почки обезьяны (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) и ряд других клеточных линий, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения клеточные линии могут быть выбраны через определение того, какие клеточные линии имеют высокий уровень экспрессии и производят антитела с соответствующими свойствами связывания ФРГ. Хорошо известны соответствующие векторы экспрессии для клеток хозяина млекопитающих. В некоторых примерах осуществления изобретения специфические связывающие агенты включают один или более полипептид. В некоторых примерах осуществления изобретения любой из разнообразия векторов экспрессии/систем хозяина может использоваться для экспрессии молекул полинуклеотида,кодирующих полипептиды. Подобные системы включают такие микроорганизмы, как бактерии, трансформированные рекомбинантным бактериофагом, плазмидом или козмидом вектора экспрессии ДНК; дрожжи, трансформированные векторами экспрессии дрожжей; клеточные системы насекомых, инфицированных векторами экспрессии вируса (например, бациловирусом); системы клеток растений, трансфицированные векторами экспрессии вируса (например, мозаичным вирусом цветной капусты, CaMV, мозаичным вирусом табака) или трансформированные векторами экспрессии бактерий (например, плазмидами Ti или pBR322) или клеточными системами животных, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид рекомбинантно экспрессируется в дрожжах. Некоторые подобные примеры осуществления изобретения используют коммерчески имеющиеся системы экспрессии, например система экспрессии Пичия (Pichia Expression System), Инвитроген,Сан-Диего, Калифорния (Invitrogen, San Diego, CA), следуя инструкциям изготовителя. В некоторых примерах осуществления изобретения подобная система полагается на последовательность pre-pro-alpha для регулирования секреции. В некоторых примерах осуществления изобретения транскрипция вставки приводится промотером оксидазы спирта (AOX1) при индукции метанолом. В некоторых примерах осуществления изобретения выделенный полипептид очищается от среды роста дрожжей. В некоторых примерах осуществления изобретения способы, используемые для очистки полипептида от среды роста дрожжей такие же, как способы, используемые для очистки полипептида от супернатантов бактериальных клеток и клеток млекопитающих. В некоторых примерах осуществления изобретения нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид,клонируется в палочко-вирусный вектор экспрессии, подобный pVL1393 (ФарМинген (PharMingen), Сан- 23015363 Диего, Калифорния). В некоторых примерах осуществления изобретения подобный вектор может использоваться в соответствии с рекомендациями изготовителя (PharMingen) для инфицирования клетокSpodoptera Frugiperda в свободной от протеина среде sF9 и для производства рекомбинантного полипептида. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид очищается и концентрируется от подобной среды, используя гепарин - Сефарозовую колонку (Фармация - Pharmacia). В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид экспрессируется в системе насекомого. Некоторые системы насекомых для экспрессии полпептида хорошо известны специалистами в данной области. В одной подобной системе вирус нуклеарного гипергидроза (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus - AcNPV) используется в качестве вектора для экспрессии чужеродных генов в клетках Spodoptera frugiperda или в личинках Trichoplusia. В некоторых примерах осуществления изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, может быть вставлена в несущественный ген вируса, например внутрь гена полигедрина, и помещено под контроль промотера для данного гена. В некоторых примерах осуществления изобретения успешная вставка молекулы нуклеиновой кислоты сделает второстепенный ген неактивным. В некоторых примерах осуществления изобретения эта инактивация приводит к детектируемым характеристикам. Например, инактивация гена полигедрина приводит к производству вируса, в котором отсутствует белок покрытия. В некоторых примерах осуществления изобретения рекомбинантные вирусы могут быть использованы для инфицирования клеток S. Frugiperda или личинок Trichoplusia. См., например, Смит и др. (Smithet al.), Журнал вирусологии (J. Virol.), 46:584 (1983); Энгельхард и др. (Engelhard et al.), Труды академии естественных наук (Proc. Nat. Acad. Sci) (США), 91:3224-7 (1994). В некоторых примерах осуществления изобретения полипептиды, изготовленные в бактериальных клетках, производятся как нерастворимые тела вставки в бактериях. В некоторых примерах осуществления изобретения клетки хозяина, включающие подобные тела вставки, собираются центрифугированием; промываются в 0,15 М NaCl, 10 мМ Tris, pH 8, 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) и обрабатываются 0,1 мг/мл лисозима (Сигма (Sigma), Сент-Луис, Миссури) в течение 15 мин при комнатной температуре. В некоторых примерах осуществления изобретения лизат очищается ультразвуком и остатки клеток гранулируются центрифугированием в течение 10 мин при 12,000g. В некоторых примерах осуществления изобретения содержащая полипептид гранула повторно погружается в 50 мМ Tris, pH 8 и 10 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA); наносится поверх 50% глицерола и центрифугируется в течение 30 мин при 6000g. В некоторых примерах осуществления изобретения эта гранула может быть повторно погружена в стандартный забуференный фосфатом физиологический раствор (ЗФР),свободный от Mg и Ca. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид далее очищается путем фракционирования повторно погруженной гранулы в денатурирующем полиакриламидном геле додецилсульфата натрия (SDS) (см., например, Сембрук и др. (Sambrook et al.), там же). В некоторых примерах осуществления изобретения подобный гель может быть погружен в 0,4 М KCl для визуализации протеина, который может быть эксцизионирован и электроэлюирован в гелиевый буфер, в котором отсутствует додецилсульфат натрия (SDS). В соответствии с некоторыми примерами осуществления изобретения слитый белок Glutathione-S-Transferase (GST) производится в бактериях в качестве растворимого белка. В некоторых примерах осуществления изобретения подобный слитый белок GST очищается, используя модуль очистки GST (Фармация - Pharmacia). В некоторых примерах осуществления изобретения желательно "свернуть" некоторые полипептиды. В некоторых примерах осуществления изобретения подобные полипептиды производятся, используя некоторые обсуждаемые здесь рекомбинантные системы. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептиды "свертываются" и/или окисляются для образования желаемой третичной структуры и/или генерации дисульфидных связей. В некоторых примерах осуществления изобретения подобная структура и/или связи связаны с определенной биологической активностью полипептида. В некоторых примерах осуществления изобретения свертывание выполняется, используя ряд процедур, известных в данной области. Показательные способы включают подвергание солюбилизированного полипептидного агента воздействию pH, обычно выше 7, в присутствии хаотропного агента, но не ограничиваются данным. Показательным хаотропным агентом является гуанидин. В некоторых примерах осуществления изобретения свертывающий/окисляющий раствор также включает редуцирующий агент и окисленную форму этого редуцирующего агента. В некоторых примерах осуществления изобретения редуцирующий агент и его оксидированная форма присутствуют в соотношении, которое генерирует определенный окислительно-восстановительный потенциал, который позволяет произойти перетасовке дисульфидов. В некоторых примерах осуществления изобретения подобная перетасовка позволяет образовать цистеиновые мостики. Показательные окислительно-восстановительные пары включают цистеин/цистамин, глютатион/дитиобис GSH, хлорид, включающий двухвалентную медь, дитиотреитол DTT/дитиан DTT, и 2-меркаптоэтанол (bME)/дитио-bME, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения используется сорастворитель для увеличения эффективности свертывания. Показательные сорастворители включают глицерол, полиэтиленгликоль различных молекулярных весов и аргинин, но не ограничиваются ими.- 24015363 В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид практически очищается. Некоторые методики очистки протеина известны специалистам в данной области. В некоторых примерах осуществления изобретения очистка протеина включает сырую фракционную перегонку полипептидных фракций из неполипептидных фракций. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептиды очищаются, используя методики хроматографии и/или электрофореза. Показательные способы очистки включают осаждение сульфатом аммония; осаждение с полиэтиленгликолем (PEG); иммуноосаждение; тепловую денатурацию с последующим центрифугированием; хроматографию, включая аффинитетную хроматографию (например, Protein-A-Sepharose), ионообменную хроматографию, вытеснительную хроматографию и обратно фазовую хроматографию; гелиевую фильтрацию; гидроксилапатитную хроматографию; изоэлектрическое фокусирование; электрофорез гелем полиакриламида, но не ограничиваются ими, и комбинацию подобной и других методик. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид очищается быстрой белковой жидкостной хроматографией или жидкостной хроматографией высокого разрешения (HPLC - high pressure liquid chromotography). В некоторых примерах осуществления изобретения этапы очистки могут быть изменены или некоторые этапы могут быть опущены, и все равно это приводит к приемлемому способу приготовления практически очищенного полипептида. В некоторых примерах осуществления изобретения можно количественно определить степень очистки полипептидного препарата. Некоторые способы количественной оценки степени очистки известны специалистам в данной области. Некоторые показательные способы включают определение специфической связывающей активности препарата и оценку величины полипептида внутри препарата анализом с помощью додецилсульфата натрия/электрофореза в полиакриламидном геле (SDS/PAGE), но не ограничиваются ими. Некоторые показательные способы оценки величины очистки препарата полипептида включают расчет связывающей активности препарата и сравнение его со связывающей активностью первоначального экстракта. В некоторых примерах осуществления изобретения результаты подобного расчета выражаются как "очистка складки". Единицы, используемые для представления величины связывающей активности, зависят от выполняемого анализа. В некоторых примерах осуществления изобретения полипептид очищается частично. В некоторых примерах осуществления изобретения частичная очистка может быть выполнена путем использования меньшего количества этапов очистки или путем использования различных форм той же общей схемы очистки. Например, в некоторых примерах осуществления изобретения катионообменная колоночная хроматография, выполняемая с использованием аппарата HPLC, обычно приводит к большей очистке складки, чем такая же методика с использованием системы хроматографии под низким давлением. В некоторых примерах осуществления изобретения способы, приводящие к более низкой степени очистки,могут иметь преимущества в полном восстановлении полипептида или в поддержании связывающей активности полипептида. В некоторых случаях электрофорезная миграция полипептида может меняться, иногда значительно,при различных условиях анализа с помощью додецилсульфата натрия/электрофореза в полиакриламидном геле. См., например, Капалди и др. (Capaldi et al.), Biochem. Biophy/Res. Comm., 76:425 (1977). Следует понимать, что при различных условиях электрофореза могут быть различными очевидные молекулярные веса очищенного или частично очищенного полипептида. Некоторые показательные эпитопы. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются эпитопы, с которыми связывается анти-ФРГ (см., например, пример 8, фиг. 10 и 11, и последовательности : 164 и 165). В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для предотвращения связывания антитела анти-ФРГ или специфического связывающего агента с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для уменьшения связывания антитела анти-ФРГ или специфического связывающего агента с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для практического ингибирования связывания антитела анти-ФРГ или специфического связывающего агента с ФРГ. Эпитоп практически ингибирует связывание антитела анти-ФРГ или специфического связывающего агента с ФРГ, когда излишек эпитопа снижает количество антитела анти-ФРГ или специфического связывающего агента с ФРГ по крайней мере на 20,40, 60, 80, 85% или более. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может использоваться для связывания антитела анти-ФРГ или специфического связывающего агента. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для идентификации антител или специфических связывающих агентов, связывающихся с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для выделения антител или специфических связывающих агентов, связывающихся с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для генерации антител или специфических связывающих агентов, связывающихся с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован как иммуноген для генерации антител или специфических связывающих агентов, связывающихся с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может вводиться животному, и впоследствии от животного могут быть получены антитела, связывающиеся с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения эпитоп ФРГ может быть использован для вмешательства в нормальную- 25015363 активацию ФРГ-Мет. Некоторые терапевтические использования. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются способы лечения рака,включающие введение терапевтически эффективного количества одного или более связывающих с ФРГ агентов. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются способы лечения рака,включающие введение терапевтически эффективного количества одного или более связывающих с ФРГ агентов и другого терапевтического агента. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются способы лечения или профилактики малярии, включающие введение терапевтически эффективного количества одного или более агентов, связывающих с ФРГ. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются способы лечения или профилактики малярии, включающие введение терапевтически эффективного количества одного или более связывающих с ФРГ агентов и другого терапевтического агента. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются способы лечения или профилактики пролиферативной диабетической ретинопатии, включающие введение терапевтически эффективного количества одного или более связывающих с ФРГ агентов. В некоторых примерах осуществления изобретения предусматриваются способы лечения или профилактики пролиферативной диабетической ретинопатии, включающие введение терапевтически эффективного количества одного или более связывающих с ФРГ агентов и другого терапевтического агента. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий с ФРГ агент вводится отдельно. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент с ФРГ вводится до приема по крайней мере одного другого терапевтического агента. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент с ФРГ вводится одновременно с приемом по крайней мере одного другого терапевтического агента. В некоторых примерах осуществления изобретения специфический связывающий агент с ФРГ вводится после приема по крайней мере одного другого терапевтического агента. Терапевтические агенты включают по крайней мере один другой агент для терапии рака, но не ограничиваются им. Показательные агенты для терапии рака включают радиационную терапию и химиотерапию, но не ограничиваются ими. Фармацевтические композиции по данному изобретению могут назначаться в комбинационной терапии, т.е. в комбинации с другими агентами. В некоторых примерах осуществления изобретения комбинационная терапия включает специфический связывающий агент, способный связывать ФРГ, в комбинации по крайней мере с одним антиангиогенным агентом. Агенты включают синтетически приготовленные in vitro химические композиции, антитела, области связывания антигена, радионуклиды и их комбинации и конъюгаты, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения агент может действовать как агонист, антагонист, аллостерический модулятор или токсин. В некоторых примерах осуществления изобретения агент может действовать для ингибирования или стимулирования своей мишени (например, активация или ингибирование рецептора или фермента) и тем самым способствовать умерщвлению клетки или блокировке роста клетки. Химиотерапевтическое лечение включает использование антинеопластических агентов, но не ограничивается ими, включающих алкилирующие агенты, включающие азотистые иприты, такие как мехлорэтамин, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан и хлорамбуцил; нитромочевины, подобные кармустину(BCNU), ломустину (CCNU) и семустину (метил-CCNU); Temodal (темозоламид), этиленимины/метилмеламины, такие как триэтиленмеламин (ТЕМ), триэтилен, тиофосфорамид (тиотепа), гексаметилмеламин (НММ, алтретамин); соли алкилсульфокислоты, такие как бусульфан; триазины, такие как дакарбазин (DTIC); антиметаболиты, включающие такие аналоги фолиевой кислоты, как метотрексат и триметрексат; аналоги пиримидина, такие как 5-фторурацил (5FU), фтородезоксиуридин, гемцитабин,цитозин арабинозид (AraC, цитарабин), 5-азацитидин, 2,2'-дифтородезоксицитидин, аналоги пурина, такие как 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, азотиоприн, 2'-дезоксикоформицин (пентостатин), эритрогидроксинониладенин (EHNA), флюдарабин фосфат и 2-хлородэоксиаденозин (кладрибин, 2-CdA); природные продукты, включающие антимитотические лекарства, такие как паклитаксел, винка алкалоиды, включающие винбластин (VLB), винкристин и винорелбин, таксотер, эстрамустин и эстрамустин фосфат; пиподофилотоксины, такие как этопозид и тенипозид; антибиотики, такие как актимомицин D, дауномицин(рубидомицин), доксорубицин, митоксантрон, идарубицин, блеомицины, пликамицин (митрамицин),митомицин C и актиномицин; ферменты, такие как L-аспарагиназа; биологические модификаторы отклика, такие как интерферон альфа, IL-2, G-CSF и GM-SCF; различные агенты, включающие платиновые координационные комплексы, такие как цисплатин и карбоплатин, антраценедионы, такие как митоксантрон, замещенная мочевина, такая как гидроксиуреа, производные метилгидразина, включающие Nметилгидразин (MIH) и прокарбазин, адренокортиковые суппрессанты, такие как митотан (o,p'-DDD) и аминоглютетимидин; гормоны и антагонисты, включающие адренокортикостероидные антагонисты, такие как преднизон и эквиваленты, дексаметазон и аминоглютетимидин; Gemzar (гемцитабин), прогестин, такой как гидроксипрогестерон капроат, медроксипрогестерон ацетат и мегестрол ацетат; эстрогены, такие как эквиваленты диэтилстилбестрола и этинил эстрадиола; антиэстрогены, такие как тамокси- 26015363 фен; андрогены, включающие тестостерон пропионат и флуоксиместерон/эквиваленты; антиандрогены,такие как флютамид, аналоги гормонов, выделяющих гонадотропин и лейпролид; и нестероидные антиандрогены, такие как флютамид, но не ограничиваются ими. Раковая терапия, которая может назначаться со специфическим связывающим агентом с ФРГ, также включает направленную терапию, но не ограничивается ею. Примеры направленной терапии включают использование терапевтических антител, но не ограничивается данным. Показательные примеры терапевтических антител включают мышиные антитела, мышиночеловеческие химерные антитела, CDRтрансплантированные, гуманизированные и полностью человеческие антитела и синтетические антитела,но не ограничиваются ими, включая антитела, выбранные путем скрининга библиотек антител, но не ограничиваясь данным. Показательные антитела включают антитела, связывающиеся с поверхностными протеинами Her2, CDC20, CDC33, муциноподобные гликопротеины и рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), присутствующие в опухолевых клетках, но не ограничиваются ими, и по выбору оказывают цистостатическое и/или цитотоксическое воздействие на клетки опухоли, проявляющие эти белки. Показательные антитела включают HERCEPTIN (трастузумаб), который может использоваться при лечении рака молочной железы и других форм рака, и RITUXAN (ритуксимаб), ZEVALIN (ибритумомаб тиуксетан), GLEEVEC и LYMPHOCIDE (эпратузумаб), который может использоваться для лечения лимфомы не Ходжкина и других форм рака. Некоторые показательные антитела включают ERBITUX (IMC-C225); эртинолиб (Иресса); BEXXAR (тозитумомаб йода 131); ингибиторы KDR (рецепторов домена киназы); антитела анти VEGF (васкулярный эндотелиальный фактор роста) и антагонисты (например, Avastin и VEGAF-TRAP); антитела рецептора анти VEGF (васкулярный эндотелиальный фактор роста) и области связывания антигена; антитела анти-Ang-1 и Ang-2 и области связывания антигена; антитела к Tie-2 и другие рецепторы Ang-1 и Ang-2; лиганды Tie-2; антитела против ингибиторов киназы Tie-2 и Campath (алемтузумаб). В некоторых примерах осуществления изобретения раковые терапевтические агенты являются полипептидами, селективно индуцирующими апоптоз в раковых клетках, включая полипептид TRAIL, относящийся к TNF, но не ограничиваясь им. В некоторых примерах осуществления изобретения раковые терапевтические агенты являются антиангиогенными агентами, снижающими ангиогенезис. Некоторые подобные агенты включают IL-8;Campath; B-FGF; антагонисты FGF; антагонисты Tek (Церретти и др.) (Cerretti et al.), публикацию США 2003/0162712; Церретти и др. (Cerretti et al.), патент США 6413932 и Церретти и др. (Cerretti et al.),патент США 6521424, каждый из которых включен в данную заявку путем ссылки для любой цели); агенты анти-TWEAK (включающие антитела и области связывания антигенов, не ограничиваясь ими); растворимые антагонисты рецептора TWEAK (Вилей (Wiley), патент США 6727225); домен дисинтеграции ADAM для антогонизации связывания интегрина с его лигандами (Фенслоу и др. (Fanslow et al.),публикация США 2002/0042368); рецептор анти-eph и антитела анти-ephrin; области связывания антигена или антагонисты (патенты США 5981245; 5728813; 5969110; 6596852; 6232447; 6057124 и члены их семейства патентов-аналогов); агенты анти-VEGF (например, антитела или области связывания антигена, связывающие именно VEGF (васкулярный эндотелиальный фактор роста) или растворимые рецепторы VEGF или их области связывания лигандов), такие как Avastin или VEGF-TRAP и агенты рецептора анти-VEGF (например, антитела или области связывания антигена, связывающиеся именно с ними), ингибирующие агенты EGFR (например, антитела или области связывания антигена, связывающиеся именно с ними), такие как панитумумаб, IRESSA (gefitinib), TARCEVA (erlotinib), агенты антиAng-1 и анти-ANG-2 (например, антитела или области связывания антигена, связывающиеся именно с ними или с их рецепторами, например, Tie-2/TEK), и агенты, ингибирующие киназу анти-Tie-2 (например, антитела или области связывания антигена антитела, связывающиеся именно с ними и ингибирующие активность факторов роста, таких как антагонисты факторов роста гепатоцита (ФРГ, также известного как фактор рассеяния) и антитела или области связывания антигена, связывающиеся именно с рецептором "с-met"; антагонисты анти-PDGF-BB; антитела или областей связывания антигена с лигандамиPDGF-BB и ингибиторы киназы PDGFR, но не ограничиваются ими. В некоторых примерах осуществления изобретения агенты раковой терапии являются ингибиторами ангиогенезиса. Некоторые подобные ингибиторы включают SD-7784 (Pfizer, США); циленгитид- 27015363 бенефин (Lane Labs, США); Tz-93 (Tsumura, Япония); TAN-1120 (Takeda, Япония); FR-111142 (Fujisawa,Япония, JP 02233610); плателет фактор-4 (RepliGen, США, EP 407122); антагонист васкулярного эндотелиального фактора роста (Borean, Дания); раковая терапия (Университет Южной Каролины, США); бевацизумаб (pINN) (Genetech, США); ингибиторы ангиогенезиса (SUGEN, США); XL 784 (Exelixis,США); XL 647 (Exelixis, США); Mab, альфа 5 бета 3 интегрин, второе поколение (Applied Molecular Evolution, США и Medlmmune, США); генная терапия, ретинопатия (Oxford BioMedica, Великобритания); гидрохлорид энзастаурина (USAN), (Lilly, США); СЕР 7055 (Cephalon, США и Sanofi-Synthelabo, Франция);PPI 2458 (Praecis,США); AZD 9935 (AstraZeneca, Великобритания), AZD 2171 (AstraZeneca, Великобритания), ваталаниб (pINN) (Novartis, Швейцария и Schering AG, Германия); ингибиторы пути тканевого фактора (EntreMed, США); пегаптаниб (Pinn) (Gilead Sciences, США); ксанторризол (Yonsei University,Южная Корея); вакцина, базирующаяся на гене, VEGF - 2 (Scripps Clinic and Research Foundation, США);(pINN), (GlaxoSmithKline, Великобритания); E 7820 (Eisai, Япония); CYC 381 (Гарвардский университет,США); АЕ 941 (Aeterna, Канада); вакцина, ангиогенезис (EntreMed, США); ингибитор активатора плазминогена урокиназы (Dendreon, США); оглуфанид (pINN) (Melmottee, США); ингибиторы HIF-1 альфа(InKine, США); А 6 (Angstrom, США), KR 31372 (Корейский исследовательский институт химической технологии, Южная Корея); GW 2286 (GlaxoSmithKline, Великобритания); ЕНТ 0101 (ExonHit, Франция); СР 868596 (Pfizer, США); СР 564959 (OSI, США); СР 547632 (Pfizer, США); 786034 (GlaxoSmithKline,Великобритания); KRN 633 (Kirin Brewery, Япония); система доставки лекарств, интраокулярная, 2 метоксиэстрадиол (EntreMed, США); ангинекс (Маастрихтский университет, Нидерланды и Университет Миннесоты, США); ABT 510 (Abbot, США); AAL 993 (Novartis, Швейцария); VEGI (ProteomTech, США); ингибиторы альфа-фактора некроза опухоли (Национальный институт старения, США); SU 11248 (Pfizer,США и SUGEN USA); ABT 518 (Abbot, США); YH16 (Yantai Rongchang, Китай); S-3APG (Бостонский детский госпиталь, США и EntreMed, США); MAb, KDR (ImClone Systems, США); альфа 5 бета 1 (ProteinAC (IBEX, Канада); BAY RES 2690 (Bayer, Германия); AGM 1470 (Гарвардский университет, США, Такеда, Япония и ТАР, США); AG 13925 (Agouron, США); тетратиомолибдат (Университет Мичигана,США); GCS 100 (Вейнский государственный университет, США); CV 247 (Ivy Medical, Великобритания); CKD 732 (Chong Kun Dang, Южная Корея); MAb, васкулярный эндотелиальный фактор роста,(Xenova, Великобритания); ирзогладин (INN) (Nippon Shinyaku, Япония); RG 13577 (Aventis, Франция);(васкулярный эндотелиальный фактор роста рецептора 1) (MerckCo, США); Tie-2 лиганды (Regeneron,США); ингибитор тромбомпондин 1 (Allegheny Health, Education and Research Foundation, США); 2 бензолсульфонамид, 4-(5-(4-хлорофенил)-3-(трифторометил)-1H-пиразол-1-ил)-; Arriva и C-Met. AVE 8062 2S)-2-амино-3-гидрокси-N-[2-метокси-5-[(1Z)-2-(3,4,5-триметоксифенил)этенил)]p хенил]пропанамид моногидрохлорид); меттелимумаб (pINN) (иммуноглобулин G-4, анти(человеческий трансформирующий фактор роста, бета 1 (человеческая моноклональная CAT 192. гамма.4-цепь), дисульфид с человеческим моноклональным димером CAT 192.каппа.-цепи); лиганд Flt3; CD40 лиганд; интерлейкин-2; интерлейкин-12; 4-1BB лиганд; антитела анти-4-1 ВВ; антагонисты TNF и антагонисты рецептора TNF,включающие TNFR/Fc, антагонисты TWEAK и TWEAK-R, включая TWEAK-R/Fc; TRAIL; антагонистыPTPRJ, см. Такаши и др. (Takahashi et al.), Журнал американского общества нефрологии (J. Am. Soc.Nephrol.), 10:2135-45 (1999), включенный в данную заявку путем ссылки для любой цели); ингибитор тромбоспондин 1 и ингибиторы одного или обоих Tie-2 или Tie-2 лигандов (таких как Ang-2), но не ограничиваются ими. Ряд ингибиторов Ang-2 известен в данной области, включая антитела анти-Ang-2,описанные в опубликованной заявке на патент США 20030124129 (соответствующей заявке PCTWO 03/030833) и в патенте США 6166185, содержание которых включено в данную заявку полностью путем ссылки. Дополнительно, в данной области также хорошо известны пептидные тела Ang-2 и они могут быть найдены в опубликованной заявке на патент США 20030229023 (соответствующей заявке PCTWO 03/057134) и опубликованной заявке на патент США 20030236193, содержание которых включено в данную заявку полностью путем ссылки. Некоторые раковые терапевтические агенты включают талидомид и аналоги талидомида (N-(2,6 диоксо-3-пиперидил)фталамид); текогалан натрия (сульфатированный полисахарид пептидогликана);KM 2550; интегрин специфические пептиды; INGN 401; GYKI 66475; GYKI 66462; гринстатин (101-354 плазминоген (человеческий; генная терапия для ревматоидного артрита, рака простаты, рака яичников,глиомы, эндостатина, колоректального рака, ATF BTPI, антиангиогенезависимые гены, ингибитор ангиогенезиса или ангиогенезис; ингибитор желатиназы; FR 111142 (5-метокси-4-[2-метил-3-(3-метил-2 бутенил)оксиранил]-1-оксаспиро[2.5]окт-6-ил эфир 4,5-дегидрокси-2-гексеновой кислоты); форфенимекс(pINN) (S)-альфа-амино-3-гидрокси-4-(гидроскиметил)бензолоуксусная кислота); антагонист фибронектина (1-ацетил-L-пролил-L-гистидил-L-серил-L-цистеинил-L-аспартамид); ингибитор рецептора фактора роста фибробласта; антагонист фактора роста фибробласта; FCE 27164 гексанатриевая соль (7,7'[карбонил-бис-[имино(1-метил)-1H-пиррол-4,2-диил)карбонилимино(1-метил-1H-пиролл-4,2-диил)карбонилимино-бис-1,3,5-нафталинтрисульфоновой кислоты); FCE 26752 (8,8'-[карбонил-бис-[имино(1 метил-1H-пиролле-4,2-диил)карбонилимино(1-метил)-1H-пирроле-4,2-диил)карбонилимино-бис-1,3,6 нафталинтрисульфоновая кислота; эндотелиальный полипептид II, активирующий моноциты; VEGFR антисенсорный олигонуклеотид; антиангиогенный и трофический факторы; ANCHOR ангиостатический агент; эндостатин; Del-1 ангиогенный белок; CT 3577; конторстатин; CM 101; хондроитиназа AC;

МПК / Метки

МПК: C07K 14/00, A61K 38/16, A61K 39/395, C07K 16/00

Метки: специфически, применение, агенты, роста, гепатоцитов, фактор, связывающие

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/30-15363-agenty-specificheski-svyazyvayushhie-faktor-rosta-gepatocitov-i-ih-primenenie.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Агенты, специфически связывающие фактор роста гепатоцитов, и их применение</a>

Похожие патенты

Агенты, специфически связывающие ангиопоэтин-2

Номер патента: 10726

Опубликовано: 30.10.2008

Автор: Олинер Джонатан Дэниэл

МПК: A61K 39/385, A61K 39/395, C07H 21/04...

Метки: агенты, ангиопоэтин-2, специфически, связывающие

Формула / Реферат:

1. Агент, специфически связывающий ангиопоэтин-2, содержащий по крайней мере один пептид, с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей и их фрагменты. 2. Агент по п.1, являющийся антителом. 3. Агент по п.2, являющийся поликлональным, моноклональным, химерным, гуманизированным или полноразмерным антителом человека. 4. Агент по п.3, являющийся одноцепочечным антителом. 5. Гибридома, продуцирующая моноклональное антитело...

Агенты, специфически связывающие ангиопоэтин-2

Номер патента: 11866

Опубликовано: 30.06.2009

Авторы: Олайнер Джонатон Даниел, Грэхэм Кевин

МПК: A61K 39/395, A61K 39/385, A61P 35/00...

Метки: агенты, связывающие, ангиопоэтин-2, специфически

Формула / Реферат:

1. Выделенный полипептид, специфически связывающий ангиопоэтин-2, где полипептид включает по меньшей мере один участок, определяющий комплементарность (CDR), причём CDR представляет собой: а) участок CDR1, включающий аминокислотную последовательность формулы где X1 представляет собой R, S, T, G, E, D; X2 представляет собой S, G, A, R, N, T, Y, Н; X3 представляет собой S, D, N, Q, T, Y, A, G, Е; X4 представляет собой Q, K, S, N, A, G, I, M, W,...

Агенты, специфически связывающиеся с человеческим ангиопоэтином-2

Номер патента: 8248

Опубликовано: 27.04.2007

Авторы: Мин Хосунг, Олинер Джонатан Дэниэл

МПК: C07K 14/00, A61K 38/00, C07K 1/00...

Метки: ангиопоэтином-2, специфически, человеческим, агенты, связывающиеся

Формула / Реферат:

1. Полипептид, способный связываться с Ang-2, содержащий аминокислотную последовательность WDPWT (SEQ ID NO: 65) длиной в 5-50 аминокислот, и его физиологически приемлемые соли. 2. Полипептид, способный связываться с Ang-2, содержащий аминокислотную последовательность WDPWTC (SEQ ID NO: 66) и его физиологически приемлемые соли. 3. Полипептид, способный связываться с Ang-2, содержащий аминокислотную последовательность Cz2WDPWT (SEQ ID NO: 67) где...

Связывающие агенты, ингибирующие миостатин

Номер патента: 9056

Опубликовано: 26.10.2007

Авторы: Мин Хосунг, Хан Хкью, Бун Томас Чарлз

МПК: C07K 14/00, C07K 14/475, C07K 14/495...

Метки: агенты, связывающие, ингибирующие, миостатин

Формула / Реферат:

1. Связывающий агент, включающий по меньшей мере один пептид, способный связывать миостатин, причем пептид включает аминокислотную последовательность WMCPP (SEQ ID NO: 633). 2. Связывающий агент по п.1, отличающийся тем, что пептид содержит от 5 до 50 аминокислот. 3. Связывающий агент, включающий по меньшей мере один пептид, способный связывать миостатин, причем пептид включает аминокислотную последовательность Ca1a2Wa3WMCPP (SEQ ID NO: 352),...

Вакцинная композиция, содержащая трансформирующий фактор роста альфа

Номер патента: 6240

Опубликовано: 27.10.2005

Авторы: Гонсалес Маринельо Хисела Мария, Гильен Ньето Херардо Энрике, Альварес Акоста Анабель, Менендес Медина Тамара, Санчес Рамирес Белинда, Перес Родригес Роландо, Мулет Сьерра Айлетте

МПК: C07K 14/495, A61K 38/18, A61P 37/04...

Метки: композиция, трансформирующий, содержащая, фактор, роста, вакцинная, альфа

Формула / Реферат:

1. Вакцинная композиция для индукции иммунного ответа против аутологичного TGFa, которая содержит в качестве активного начала белок слияния между белком-носителем и человеческим TGFa или любым его пептидным производным, отдельно или в комбинации с любым лигандом EGF-R, и дополнительно содержащая адъювант, где указанный белок слияиния способен вызвать указанный иммунный ответ против TGFa. 2. Вакцинная композиция по п.1, где белок-носитель...

Предыдущий патент: Способ производства жидкого сахара

Следующий патент: 6,6′-диизопропил-8,8′-диметил-2,2′-динитро-3,3′-бис(трифторметил)- 3н,3′н-[9,9']ди[бензо(f)хроменил]-5,10,5′,10′-тетраол, обладающий противоопухолевой и противогрибковой активностью, и способ его получения

Случайный патент: Инсектицидные соединения

Агенты, специфически связывающие фактор роста гепатоцитов, и их применение

Формула / Реферат

Текст

МПК / Метки

Код ссылки

О сайте

Архивы

Контакты