Антитела против madcam
Номер патента: 12872
Опубликовано: 30.12.2009
Авторы: Моллой Элизабет, Грин Ларри Л., Келлерманн Зирид-Аймее, Хаак-Френдшо Мэри, Пуллен Николас
Формула / Реферат
1. Моноклональное антитело человека или его антигенсвязывающая часть, которая специфически связывается с молекулой клеточной адгезии адрессина слизистой (MAdCAM), причем указанное антитело или его часть связывается с MAdCAM человека с Kd, равным 3_10-10 М или менее, и ингибирует связывание a4b7 с MAdCAM человека.
2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которая специфически связывается с MAdCAM и ингибирует связывание MAdCAM с a4b7, где
(a) тяжелая цепь содержит аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи первого моноклонального антитела, выбранного из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod и 7.26.4-mod;
(b) легкая цепь содержит аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи второго моноклонального антитела, выбранного из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod и 7.26.4-mod;
(c) антитело содержит тяжелую цепь (а) и легкую цепь (b) или
(d) антитело представляет собой антитело (с), где первое моноклональное антитело такое же, как второе антитело.
3. Моноклональное антитело человека или его антигенсвязывающая часть по п.1, где указанное антитело или его часть обладает по меньшей мере одним из следующих свойств:
(a) конкурирует с эталонным антителом за перекрестное связывание с MAdCAM;
(b) конкурирует с эталонным антителом за связывание с MAdCAM;
(c) связывается тем же эпитопом MAdCAM, что и эталонное антитело;
(d) связывается с MAdCAM, по существу, с таким же Kd, что и эталонное антитело;
(e) связывается с MAdCAM, по существу, с такой же константой диссоциации, что и эталонное антитело;
где указанное эталонное антитело выбрано из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod и 7.26.4-mod.
4. Моноклональное антитело человека или его антигенсвязывающая часть по п.1, где указанное антитело или его часть обладает по меньшей мере одним из следующих свойств:
(a) связывается с клетками человека;
(b) обладает селективностью в отношении MAdCAM человека, которая по меньшей мере в 100 раз выше селективности в отношении VCAM или к фибронектину;
(c) ингибирует связывание a4b7-экспрессирующих клеток с MAdCAM человека или
(d) ингибирует рекрутинг лимфоцитов в лимфоидную ткань желудочно-кишечного тракта.
5. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.2, в котором тяжелая цепь содержит аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи моноклонального антитела 7.16.6, а легкая цепь содержит аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи моноклонального антитела 7.16.6.
6. Линия гибридомных клеток, продуцирующая моноклональное антитело по п.2, где указанная гибридома выбрана из группы, состоящей из 1.7.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090901), 1.8.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090902), 6.14.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090903), 6.22.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090904), 6.34.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090905), 6.67.1 (ЕСАСС регистрационный номер 03090906), 6.73.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090907), 6.77.1 (ЕСАСС регистрационный номер 03090908), 7.16.6 (ЕСАСС регистрационный номер 03090909), 7.20.5 (ЕСАСС регистрационный номер 03090910), 7.26.4 (ЕСАСС регистрационный номер 03090911) и 9.8.2 (ЕСАСС регистрационный номер 03090912).
7. Моноклональное антитело человека, продуцируемое линией гибридомных клеток по п.6, или антигенсвязывающая часть указанного моноклонального антитела.
8. Моноклональное антитело человека или его антигенсвязывающая часть по п.2, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod и 7.26.4-mod.
9. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.3, где антитело выбрано из группы, состоящей из:
(a) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:2 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:4 без сигнальной последовательности;
(b) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:6 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:8 без сигнальной последовательности;
(c) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:10 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:12 без сигнальной последовательности;
(d) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:14 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:16 без сигнальной последовательности;
(e) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:18 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:20 без сигнальной последовательности;
(f) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:22 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:24 без сигнальной последовательности;
(g) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:26 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:28 без сигнальной последовательности;
(h) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:30 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:32 без сигнальной последовательности;
(i) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:34 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:36 без сигнальной последовательности;
(j) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:38 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:40 без сигнальной последовательности;
(k) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:42 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:44 без сигнальной последовательности;
(l) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:46 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:48 без сигнальной последовательности;
(m) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:52 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:54 без сигнальной последовательности;
(n) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:56 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:58 без сигнальной последовательности;
(о) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:60 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:62 без сигнальной последовательности;
(р) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:64 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:66 без сигнальной последовательности;
(q) антитела, содержащего аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO:42 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:68 без сигнальной последовательности.
10. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.3, причем антитело представляет собой антитело, содержащее аминокислотные последовательности SEQ ID NO:34 без сигнальной последовательности и SEQ ID NO:36 без сигнальной последовательности.
11. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.2, где указанное антитело содержит:
(a) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области (VH) тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2 (SEQ ID NO:2), 1.8.2 (SEQ ID NO:6), 6.14.2 (SEQ ID NO:10), 6.22.2 (SEQ ID NO:14), 6.34.2 (SEQ ID NO:18), 6.67.1 (SEQ ID NO:22), 6.73.2 (SEQ ID NO:26), 6.77.1 (SEQ ID NO:30), 7.16.6 (SEQ ID NO:34), 7.20.5 (SEQ ID NO:38), 7.26.4 (SEQ ID NO:42), 9.8.2 (SEQ ID NO:46), 6.22.2-mod (SEQ ID NO:52), 6.34.2-mod (SEQ ID NO:56), 6.67.1-mod (SEQ ID NO:60), 6.77.1-mod (SEQ ID NO:64) и 7.26.4-mod (SEQ ID NO:42);
(b) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области (VL) легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2 (SEQ ID NO:4), 1.8.2 (SEQ ID NO:8), 6.14.2 (SEQ ID NO:12), 6.22.2 (SEQ ID NO:16), 6.34.2 (SEQ ID NO:20), 6.67.1 (SEQ ID NO:24), 6.73.2 (SEQ ID NO:28), 6.77.1 (SEQ ID NO:32), 7.16.6 (SEQ ID NO:36), 7.20.5 (SEQ ID NO:40), 7.26.4 (SEQ ID NO:44), 9.8.2 (SEQ ID NO:48), 6.22.2-mod (SEQ ID NO:54), 6.34.2-mod (SEQ ID NO:58), 6.67.1-mod (SEQ ID NO:62), 6.77.1-mod (SEQ ID NO:66) и 7.26.4-mod (SEQ ID NO:68); или
(c) тяжелую цепь (а) и легкую цепь (b); или
(d) тяжелую цепь (а) и легкую цепь (b), где (а) и (b) принадлежат одному антителу.
12. Моноклональное антитело человека по п.2, где указанное антитело содержит:
(a) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи моноклонального антитела, выбранного из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod и 7.26.4-mod;
(b) аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела, выбранного из группы, состоящей из моноклональных антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod и 7.26.4-mod; или
(c) обе последовательности (а) и (b).
13. Моноклональное антитело по п.3, содержащее аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи моноклонального антитела 7.16.6.
14. Моноклональное антитело по любому из пп.1-5 и 11, которое представляет собой молекулу иммуноглобулина G (IgG), IgM, IgE, IgA или IgD.
15. Антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-5 и 7-11, которая представляет собой Fab-фрагмент, F(ab')2-фрагмент, Fv-фрагмент или одноцепочечное антитело.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество моноклонального антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп.1-5 и 7-14 и фармацевтически приемлемый носитель.
17. Способ лечения воспалительного заболевания у индивидуума, включающий стадии введения указанному индивидууму моноклонального антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп.1-5 и 7-14.
18. Способ по п.17, где указанным воспалительным заболеванием является воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта.
19. Способ по п.18, где указанным воспалительным заболеванием желудочно-кишечного тракта является болезнь Крона, язвенный колит или оба этих заболевания.
20. Выделенная клеточная линия, продуцирующая моноклональное антитело или его антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-5, 7-14, или тяжелую или легкую цепи указанного антитела, или его части.
21. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь антитела, или его антигенсвязывающую часть, или легкую цепь антитела, или его антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-5, 7-14.
22. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.21, где указанный вектор необязательно содержит последовательность регуляции экспрессии, функционально связанную с молекулой нуклеиновой кислоты.
23. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.22 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.21.
24. Способ получения моноклонального антитела человека или его антигенсвязывающей части по любому из пп.1-5 и 7-14, где указанный способ включает культивирование клетки-хозяина по п.23 или клеточной линии по любому из пп.6 и 20 в подходящих условиях и выделение указанного антитела или его антигенсвязывающей части.
25. Трансгенное животное, не являющееся человеком, содержащее: (а) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь антитела или ее антигенсвязывающую часть; (b) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь антитела или ее антигенсвязывающую часть; или (с) обе молекулы (а) и (b), кодирующие антитело по любому из пп.1-5 и 7-14, причем экспрессируется указанная тяжелая цепь и/или легкая цепь полипептида, кодируемого молекулами нуклеиновых кислот.
26. Трансгенное растение, содержащее: (а) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь антитела или ее антигенсвязывающую часть; (b) молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь антитела или ее антигенсвязывающую часть; или (с) обе молекулы (а) и (b), кодирующие антитело по любому из пп.1-5 и 7-14, причем экспрессируется указанная тяжелая цепь и/или легкая цепь полипептида, кодируемого молекулами нуклеиновых кислот.
27. Способ ингибирования лейкоцитарной адгезии, миграции и инфильтрации в ткани, где указанный способ включает стадию контактирования эндотелиальных клеток с моноклональным антителом или антигенсвязывающей частью по любому из пп.1-5, 7-14.
28. Способ диагностики расстройства, характеризующегося наличием в кровотоке растворимой молекулы MAdCAM человека, где указанный способ включает стадии: (1) контактирования биологического образца с моноклональным антителом или его антигенсвязывающей частью по любому из пп.1-5, 7-14 и (2) детектирование связывания указанного антитела или антигенсвязывающей части с MAdCAM в указанном биологическом образце.
29. Диагностический набор для детекции MAdCAM, содержащий моноклональное антитело или его антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-5 и 7-14.
30. Вакцина для ингибирования a4b7/MAdCAM-зависимого связывания, содержащая эффективное количество моноклонального антитела или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-5 и 7-14 и фармацевтически приемлемый носитель.
31. Вакцина по п.30, где указанная вакцина является вакциной для введения в слизистую.
32. Способ определения эффективности ингибирования связывания MAdCAM с a4b7 при введении моноклонального антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп.1-5 и 7-14 у индивидуума, где указанный способ включает стадии определения увеличения уровня циркулирующих a4b7-экспрессирующих лейкоцитов у указанного индивидуума после введения указанного антитела, где повышение уровня указанных циркулирующих лимфоцитов указывает на ингибирование указанного связывания.
33. Способ по п.32, где указанными a4b7-экспрессирующими лейкоцитами являются лимфоциты.
34. Способ по п.32, где указанное увеличение уровней циркулирующих a4b7-экспрессирующих лейкоцитов определяют с помощью FACS-анализа.
Текст
012872 По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США 60/535490,поданной 9 января 2004. Предшествующий уровень техники Клеточно-адгезивная молекула адрессина слизистой (MAdCAM) является членом иммуноглобулинового суперсемейства клеточно-адгезивных рецепторов. Селективность хоминга лимфоцитов в специализированную лимфоидную ткань и в области слизистой желудочно-кишечного тракта определяется эндотелиальной экспрессией MAdCAM (Berlin С. et al., Cell 80:413-422 (1994); Berlin С, et al., Cell, 74:185195 (1993); и Erle D.J. et al., J. Immunol., 153:517-528 (1994. MAdCAM экспрессируется исключительно на клеточной поверхности верхнего эндолелия венул в организованной кишечной лимфоидной ткани,такой как пейеровы бляшки и мезентриальные лимфоузлы (Sreeter et al., Nature 331:41-6 (1988); Nakacheet al., Nature 337:179-81 (1989); Briskin et al., Am. J. Pathol. 151-97-110 (1997, а также в других лифмоидных органах, таких как поджелудочная железа, желчный пузырь, венулы селезенки и крайний синус белой пульпы селезенки (Briskin et al. (1997) см. выше; Kraal et al. Am. J. Path. 147:763-771 (1995.MAdCAM играет определенную физиологическую роль в иммунном надзоре в кишечнике, и, очевидно, способствует избыточной экстравазации лимфоцитов при воспалительном заболевании кишечника на фоне хронического воспаления желудочно-кишечного тракта. TNF и другие провоспалительные цитокины усиливают эндотелиальную экспрессию MAdCAM и, в образцах-биоптатах, взятых у пациентов с болезнью Крона и язвенным колитом, наблюдалась приблизительно 2-3-кратное локальное увеличение экспрессии MAdCAM на участках воспаления (Briskin et al., (1997) Souza et al., Gut, 415:856-63(1999); Arihiro et al., Pathol. Int., 52:367-74 (2002. Аналогичная картина повышенной экспрессии наблюдалась в экспериментальных моделях колита (Hesterberg et al., Gastroenterology, 111:1373-1380 (1997);al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 295:183-9 (2000); Hokari et al., Clin. Exp. Immunol., 26:259-65 (2001); Shigematsu et al., Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 281:G1309-15 (2001. В других пре-клинических моделях воспалительных состояний, таких как инсулинзависимый диабет (Yang et al., Diabetes, 46:1542-7al., Scand J. Gastroenterol., 38:437-42 (2003), Murai et al., Nat. Immunol., 4:154-60 (2003, хроническое заболевание печени (Hillan et al., Liver, 19:509-18 (1999); Grant et al., Hepatology, 33:1065-72 (2001, воспалительная энцефалопатия (Stalder et al., Am. J. Pathol., 153:767-83 (1998); Kanawar et al., Immunol. Cell.Immunol., 130:183-9 (2002, также наблюдалось повторное индуцирование экспрессии фетального MAdCAM и участие активированных 47+-лимфоцитов в патогенезе заболевания. В этих воспалительных моделях, а также в мышиных моделях гаптен-опосредованного колита (например, TNBS, DSS и т.п. ) или колита, вызванного адоптивным переносом (CD4+CD45Rbhigh), крысиное моноклональное антитело против мышиного MAdCAM (mAb), МЕСА-367, которое блокирует связывание 47+-лимфоцитов с MAdCAM, снижало уровень рекрутинга лимфоцитов и их экстравазации из ткани, а также ослабляло воспаление и снижало тяжесть заболевания. Также были описаны мышиные моноклональные антитела (mAb) против человеческого MAdCAM (см., например, WO 96/24673 и WO 99/58573). Если принять во внимание ту роль, которую MAdCAM играет в воспалительном заболевании кишечника (ВЗК) и в других воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта или других тканей, то возникает необходимость в разработке средства для ингибирования связывания 47 и MAdCAMопосредованного рекрутинга лейкоцитов. Кроме того, желательно, чтобы такое терапевтическое средство обладало преимущественными свойствами, включая, но не ограничиваясь ими, отсутствие нежелательных взаимодействий с другими лекарственными средствами, принимаемыми пациентом, и благоприятными физико-химическими свойствами, такими как желательные величины pK/pD в организме человека, растворимость, стабильность, длительный срок хранения и продолжительное время полужизни invivo. При этом, предпочтительно, чтобы терапевтический белок, такой как антитело, не содержал нежелательных посттрансляционных модификаций или не образовывал агрегаты. В соответствии с этим, необходимость в разработке терапевтических антител против MAdCAM остается особенно актуальной. Описание сущности изобретения Настоящее изобретение относится к выделенному антителу, которое специфически связывается сMAdCAM, где по меньшей мере последовательности CDR указанного антитела представляют собой человеческие последовательности CDR или к антигенсвязывающей части указанного антитела. В некоторых вариантах изобретения указанным антителом является человеческое антитело, а предпочтительно антитело, которое действует как антагонист MAdCAM. Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим указанные антитела или их части. Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей тяжелую и/или легкую цепь указанного антитела-антагониста против MAdCAM или его вариабельную область или другую антигенсвязывающую часть, или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любой из вышеуказанных компонентов, и фармацевтически приемлемый носитель. Композиции согласно изобретению могут дополнительно включать и другой компонент, такой как терапевтический агент или диагностический агент. На-1 012872 стоящее изобретение также относится к диагностическим и терапевтическим способам. Настоящее изобретение также относится к выделенной клеточной линии, продуцирующей указанное антитело против MAdCAM или его антигенсвязывающую часть. Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим тяжелую и/или легкую цепь указанного анти-MAdCAM антитела или его вариабельной области или антигенсвязывающей части. Настоящее изобретение относится к векторам и к клеткам-хозяевам, содержащим указанные молекулы нуклеиновой кислоты, а также к способам рекомбинантного продуцирования полипептидов, кодируемых указанными молекулами нуклеиновой кислоты. Настоящее изобретение также относится к трансгенным животным, не являющимся человеком, или к трансгенным растениям, которые экспрессируют тяжелую и/или легкую цепь указанного антиMAdCAM антитела или его антигенсвязывающую часть. Краткое описание чертежей На фиг. 1 проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанных аминокислотных последовательностей вариабельных областей тяжелой цепи и легкой каппа-цепи двенадцати человеческих моноклональных антител против MAdCAM с аминокислотными последовательностями, кодируемыми соответствующими человеческими генами зародышевой линии. На фиг. 1 А проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антител 1.7.2 и 1.8.2 с последовательностью генного продукта VH3-15 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1 В проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 6.14.2 с последовательностью генного продукта VH3-23 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1 С проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 6.22.2 с последовательностью генного продукта VH3-33 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1D проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 6.34.2 с последовательностью генного продукта VH3-30 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1E проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 6.67.1 с последовательностью генного продукта VH4-4 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1F проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 6.73.2 с последовательностью генного продукта VH3-23 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1G проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 6.77.1 с последовательностью генного продукта VH3-21 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1 Н проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антител 7.16.6 и 7.26.4 с последовательностью генного продукта VH1-18 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1I проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 7.2 0.5 с последовательностью генного продукта VH4-4 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1J проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела 9.8.2 с последовательностью генного продуктаVH3-33 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1K проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антител 1.7.2 и 1.8.2 с последовательностью генного продукта A3 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1L проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 6.14.2 с последовательностью генного продукта 012 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1M проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 6.22.2 с последовательностью генного продукта А 26 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1N проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 6.34.2 с последовательностью генного продукта 012 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1O проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 6.67.1 с последовательностью генного продукта В 3 человеческой зародышевой линии.-2 012872 На фиг. 1P проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 6.73.2 с последовательностью генного продукта 012 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1Q проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 6.77.1 с последовательностью генного продукта А 2 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1R проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антител 7.16.6 и 7.26.4 с последовательностью генного продукта А 2 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1S проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 7.20.5 с последовательностью генного продукта A3 человеческой зародышевой линии. На фиг. 1T проиллюстрировано выравнивание последовательностей для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности легкой каппа-цепи антитела 9.8.2 с последовательностью генного продукта 018 человеческой зародышевой линии. На фиг. 2 проиллюстрировано выравнивание последовательностей с помощью программыCLUSTAL для сравнения предсказанных аминокислотных последовательностей тяжелой цепи и легкой каппа-цепи человеческих анти-MAdCAM антител. На фиг. 2 А проиллюстрировано выравнивание последовательностей с помощью программыCLUSTAL для сравнения предсказанных аминокислотных последовательностей легкой каппа-цепи, и радиальное дерево этих последовательностей, указывающие на степень сходства между последовательностями легких каппа-цепей анти-MAdCAM антитела. На фиг. 2 В проиллюстрировано выравнивание последовательностей с помощью программыCLUSTAL для сравнения предсказанных аминокислотных последовательностей тяжелой цепи, и радиальное дерево этих последовательностей, указывающие на степень сходства между последовательностями тяжелых цепей анти-MAdCAM антитела. На фиг. 3 проиллюстрировано выравнивание аминокислотных последовательностей с помощью программы CLUSTAL для сравнения 2 N-концевых доменов MAdCAM собакоподобных обезьян и человека, которые образуют 47-связывающий домен, -нити выравнивали, как описано в работе Tan et al.,Structure (1998) 6:793-801. На фиг. 4 приводится график дозозависимого влияния очищенных биотинилированных антител 1.7.2 и 7.16.6 на адгезию лимфоцитов человеческой периферической крови в срезах MAdCAMэкспрессирующего замороженного эндотелия печени человека. На фиг. 5 приводится двумерное графическое представление, полученное по данным, взятым из табл. 7 для различных эпитопов MAdCAM, с которыми связываются анти-MAdCAM антитела 1.7.2,6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2. Анти-MAdCAM антитела в одном и том же кружке имеют одинаковые типы реактивности, связываются с одним и тем же участком эпитопа, и, вероятно,распознают один и тот же эпитоп на MAdCAM. Клоны анти-MAdCAM антитела в перекрывающихся кружках не способны к одновременному связыванию, а поэтому, они, вероятно, распознают перекрывающийся эпитоп на MAdCAM. Обособленные кружки представляют клоны анти-MAdCAM антител,имеющие различные эпитопы, пространственно отделенные друг от друга. На фиг. 6 представлены данные "сэндвич"-ELISA-анализа для анти-MAdCAM антитела 1.7.2 и анти-MAdCAM антитела 7.16.6, меченного Alexa 488, указывающие на то, что два антитела, способные распознавать различные эпитопы на MAdCAM, могут быть использованы для детекции растворимогоMAdCAM в диагностических целях. На фиг. 7 проиллюстрировано действие ингибирующего анти-MAdCAM антитела (1 мг/кг), а именно, анти-MAdCAM mAb 7.16.6, в модели собакоподобных обезьян, на ряд циркулирующих периферических 47+-лимфоцитов, выраженное как кратное увеличение по сравнению с контрольным mAb IgG2a или носителем. Подробное описание изобретения Определения и общие методы Если это не оговорено особо, то все научные и технические термины, используемые в описании настоящего изобретения, имеют значения, хорошо известные специалистам. Кроме того, если это не очевидно из контекста изобретения, то под термином, употребляемом в единственном числе, могут подразумеваться также термины во множественном числе, и наоборот, под термином, употребляемым во множественном числе, могут подразумеваться также термины в единственном числе. В общих чертах, номенклатура, используемая в описании методов молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии,генетики, химии белков и нуклеиновых кислот и гибридизации, относящихся к клеточным и тканевым культурам, хорошо известна и широко применяется специалистами. Упомянутые выше способы и процедуры согласно изобретению, если это не оговорено особо, обычно осуществляют в соответствии со стандартной хорошо известной методикой, которая описана в различных общих и более конкретных цити-3 012872 руемых руководствах и обсуждается в описании настоящего изобретения. См. например, руководствоSpring Harbor, N.Y. (1990), которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Ферментативные реакции и процедуры очистки проводят в соответствии с инструкциями производителей, как описано в литературе или в настоящей заявке. Для проведения химического синтеза и химических анализов,для получения фармацевтических препаратов и композиций, а также для их доставки пациентам и лечения пациентов, применяются стандартные методы. Используемые здесь термины, если это не оговорено особо, имеют нижеследующие значения. Термин "полипептид" включает природные или искусственные белки, фрагменты белков и полипептидные аналоги последовательностей белков. Полипептид может быть мономерным или полимерным. Используемый здесь термин "выделенный белок" или "выделенный полипептид" означает белок или полипептид, который, по своей природе или по своему происхождению (1) не ассоциируется с природными компонентами, с которыми он обычно ассоциируется в природе, (2) не содержит других белков от того же самого источника, (3) экспрессируется клеткой другого вида, или (4) не существует в природе. Таким образом, полипептид, полученный методом химического синтеза или синтезированный в клеточной системе, отличающейся от клеточной системы, от которой он обычно происходит, будет "изолированным" от его природных компонентов. Белок также может быть, по существу, отделен от ассоциированных с ним природных компонентов методами очистки белков, хорошо известными специалистам. Белок или полипептид является "по существу, чистым", "по существу, гомогенным", или "по существу, очищенным", если по меньшей мере примерно 60-75% образца содержит полипептид одного вида. Такой полипептид или белок может быть мономерным или мультимерным. По существу, чистый полипептид или белок обычно составляет примерно 50, 60, 70, 80 или 90% мас./мас. в образце белка, а в основном, примерно 95%, а предпочтительно более 99%. Чистота или гомогенность белка может быть определена различными хорошо известными методами, такими как электрофорез образца белка в полиакриламидном геле, с последующей визуализацией одной полипептидной полосы после окрашивания геля красителем, хорошо известным специалистам. В некоторых целях, для очистки с более высоким разрешением может быть использована ВЭЖХ или другие хорошо известные методы. Используемый здесь термин "полипептидный фрагмент" означает полипептид, который имеет амино-концевую и/или карбокси-концевую делецию, но в котором остальная аминокислотная последовательность в соответствующих положениях аминокислот идентична природной аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах изобретения, фрагменты имеют длину по меньшей мере 5, 6, 8 или 10 аминокислот. В других вариантах, фрагменты имеют длину по меньшей мере 14 аминокислот, более предпочтительно по меньшей мере 20 аминокислот, обычно по меньшей мере 50 аминокислот, а еще более предпочтительно по меньшей мере 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот. Используемый здесь термин "полипептидный аналог" означает полипептид, который содержит сегмент, имеющий по меньшей мере 25 аминокислот, в основном, идентичных части аминокислотной последовательности, и который обладает по меньшей мере одним из нижеследующих свойств, а именно, он(1) специфически связывается с MAdCAM в подходящих условиях связывания; (2) он может ингибировать связывание интегрина 47- и/или L-селектина с MAdCAM или (3) он способен ингибировать экспрессию MAdCAM на клеточной поверхности in vitro или in vivo. Обычно, полипептидные аналоги, по сравнению с природной последовательностью, содержат консервативную аминокислотную замену (добавление или делецию). Эти аналоги обычно имеют длину по меньшей мере 20 аминокислот, предпочтительно, по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот или более, а в большинстве случаев, они имеют такую же длину, как и полноразмерный природный полипептид. Предпочтительными аминокислотными заменами являются замены, которые приводят: (1) к снижению чувствительности к протеолизу, (2) к снижению чувствительности к окислению, (3) к изменению аффинности связывания для образования белковых комплексов, (4) к изменению аффинности связывания или (5) к сообщению или модификации других физико-химических или функциональных свойств таких аналогов. Такими аналогами могут быть различные мутеины с последовательностью, отличающейся от природной пептидной последовательности. Так, например, в природную последовательность (предпочтительно, в ту часть полипептида, которая расположена за пределами доменобразующих межмолекулярных контактов) могут быть внесены одна или множество аминокислотных замен (предпочтительно, консервативных аминокислотных замен). Консервативная аминокислотная замена не должна значительно влиять на структурные свойства родительской последовательности (например, аминокислотная замена не должна приводить к разрушению спирали, присутствующей в родительской последовательности, или к нарушению вторичной структуры других типов, которая характеризует родительскую последовательность). Примеры известных вторичных и третичных структур полипептида описаны в публикациях Protein, Structures and Molecular Principles (Creighton ed., W.H. Freeman and Company, New York 1984); Introduction to Protein Structure (Branden C.Tooze J. eds., Garland Publishing, New York, N,Y. 1991) и у Thorn-4 012872ton et al., Nature 354:105 (1991), которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки.Heпептидные аналоги обычно используются в фармацевтической промышленности в качестве лекарственных средств со свойствами, аналогичными свойствам матричного пептида. Heпептидные соединения этого типа называются "пептидными миметиками" или "пептидомиметиками". См. публикацииChem. 30:1229 (1987), которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Такие соединения часто разрабатывают с помощью компьютерных программ молекулярного моделирования. Пептидные миметики, структурно сходные с терапевтически ценными пептидами, могут быть использованы для достижения эквивалентного терапевтического или профилактического эффекта. В общих чертах, пептидомиметики являются структурно сходными с репрезентативным полипептидом (то есть, с полипептидом, который обладает биохимическими свойствами или фармакологической активностью), таким как человеческое антитело, и обычно они имеют одну или несколько пептидных связей, необязательно замененных связью, такой как -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -СН=СН- (цис и транс), -СОСН 2-, -CH(OH)CH2- и-CH2SO-, в соответствии с хорошо известной методикой. Системная замена одной или нескольких аминокислот консенсусной последовательности D-аминокислотой того же типа (например, замена L-лизина на D-лизин) может быть использована для генерирования более стабильных пептидов. Кроме того, пептиды с конформационными ограничениями, содержащие консенсусную последовательность или вариант последовательности, в основном, идентичный консенсусной последовательности, могут быть генерированы известными методами (см. публикацию RizoGierasch, Ann.Rev. Biochem. 61:387 (1992), которая вводится в настоящее описание посредством ссылки), например, путем присоединения внутренних цистеиновых остатков, способных образовывать внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые циклизуют данный пептид."Иммуноглобулин" представляет собой тетрамерную молекулу. В природном иммуноглобулине,каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая из которых имеет одну"легкую" цепь (примерно 25 кДа) и одну "тяжелую" цепь (примерно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи включает вариабельную область, состоящую примерно из 100-110 или более аминокислот,ответственных, главным образом, за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи определяет константную область, ответственную, главным образом, за эффекторную функцию. Человеческие легкие цепи классифицированы как легкие цепии . Тяжелые цепи классифицированы как , , , или , и определяют изотип антитела, такой как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. В легкой и тяжелой цепях, вариабельные и константные области связаны посредством "J"-области, состоящей примерно из 12 или более аминокислот, при этом, тяжелая цепь также включает "D-область, состоящую примерно из 10 или более аминокислот. См. в общих чертах публикацию Fundamental Immunology, Gh. 7(Paul, W. ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989), которая для всех целей осуществления изобретения вводится в настоящее описание посредством ссылки). Вариабельные области каждой пары "легкая цепь/тяжелая цепь" образуют связывающий сайт антитела, в результате чего интактный иммуноглобулин имеет два связывающих сайта. Иммуноглобулиновые цепи имеют идентичную общую структуру, состоящую из относительно консервативных каркасных областей (FR), связанных тремя гипервариабельными областями, также называемыми комплементарность-определяющими областями или CDR. CDR двух цепей каждой пары выравнивают по каркасным областям с получением эпитоп-специфического сайта связывания. Легкие и тяжелые цепи, в направлении от N-конца к С-концу, содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3,CDR3 и FR4. Присвоение аминокислот для каждого домена осуществляют в соответствии с нумерацией Кэбата, описанной в публикациях Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes ofal., Nature 342:878-883 (1989), каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Термин "антитело" означает интактный иммуноглобулин или его антигенсвязывающую часть, которая конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание. В некоторых вариантах изобретения, антителом является его антигенсвязывающая часть. Антигенсвязывающие части могут быть получены методами рекомбинантных ДНК или путем ферментативного или химического гидролиза интактных антител. Антигенсвязывающими фрагментами являются inter alia Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dAb и фрагменты гипервариабельной области (CDR), одноцепочечные антитела (scFv), химерные антитела,диантитела и полипептиды, которые содержат по меньшей мере часть иммуноглобулина, достаточную для специфического связывания антигена с полипептидом. Fab-фрагментом является одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; F(ab)2-фрагментом является двухвалентный фрагмент, содержащий два Fab-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; Fdфрагмент состоит из доменов VH и СН 1; Fv-фрагмент состоит из доменов VL и VH одной цепи антитела; а dAb-фрагмент (Ward et al., Nature, 341:544-546 (1989 состоит из домена VH. Используемый здесь термин "антитело", которое обозначается, например, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.34.2,6.67.1, 6.77.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 или 9.8.2, представляет собой моноклональное антитело, которое про-5 012872 дуцируется гибридомой с таким же обозначением. Так, например, антитело 1.7.2 продуцируется гибридомой 1.7.2. Антитело, обозначаемое 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod,представляет собой моноклональное антитело, последовательность которого была модифицирована путем сайт-направленного мутагенеза соответствующей родительской последовательности. Одноцепочечное антитело (scFv) представляет собой антитело, в котором области VL и VH являются спаренными и образуют одновалентную молекулу посредством синтетического линкера, который способствует образованию молекул в виде одной цепи белка. (Bird et al., Science, 242:423-426 (1988) иHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85:5879-5883 (1988. Диантитела представляют собой двухвалентные биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессируются на одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который является слишком коротким для того, чтобы происходило спаривание между двумя доменами на одной и той же цепи, что вынуждает эти домены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и образовывать два антигенсвязывающих сайта, (см. например, Holliger P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90:6444-6448 (1993) и Poljak R.J. et al., Structure, 2:11211123 (1994. Одна или несколько областей CDR антитела согласно изобретению могут быть включены в молекулу путем ковалентного или нековалентного связывания с образованием иммуноадгезина, который специфически связывается с MAdCAM. Иммуноадгезин может вводить CDR как часть более крупной полипептидной цепи; может ковалентно связывать CDR с другой полипептидной цепью; или может вводить CDR путем нековалентного связывания. CDR позволяют иммуноадгезину специфически связываться с конкретным представляющим интерес антигеном. Антитело может иметь один или несколько связывающих сайтов. Если присутствует более, чем один связывающий сайт, то такие связывающие сайты могут быть идентичны друг другу, либо они могут быть различными. Так, например, природный иммуноглобулин имеет два идентичных связывающих сайта; одноцепочечное антитело или Fab-фрагмент имеет один связывающий сайт, а "биспецическое" или"бифункциональное" антитело (диантитело) имеет два различных связывающих сайта. Термин "выделенное антитело" представляет собой антитело, которое (1) не ассоциируется с природными компонентами, включая другие нативные антитела, с которыми оно ассоциируется в природе,(2) не содержит других белков от того же самого источника, (3) экспрессируется клеткой другого вида,или (4) не существует в природе. Примерами выделенных антител являются анти-MAdCAM антитело,которое было аффинно очищено с использованием MAdCAM; анти-MAdCAM антитело, которое было продуцировано гибридомой или другой клеточной линией in vitro; и человеческое анти-MAdCAM антитело, полученное от трансгенного млекопитающего или растения. Используемый здесь термин "человеческое антитело" означает антитело, в котором последовательностями вариабельной и константной областей являются последовательности человеческого антитела. Этот термин также охватывает антитела, последовательности которых происходят от человеческих генов, но которые были модифицированы, например, в целях снижения возможной иммуногенности, повышения аффинности и удаления цистенов или сайтов гликозилирования, которые могут приводить к образованию нежелательной укладки и т.п. Этот термин охватывает такие антитела, которые рекомбинантно продуцируются в нечеловеческих клетках, и которые могут вызывать гликозилирование, не являющееся типичным для человеческих клеток. Этот термин также охватывает антитела, которые вырабатываются у трансгенных мышей, имеющих несколько или все локусы тяжелой и легкой цепей человеческого иммуноглобулина. В одном из своих аспектов, настоящее изобретение относится к гуманизированному антителу. В некоторых вариантах изобретения, гуманизированным антителом является антитело, которое происходит от видов животных, не являющихся человеком, и в котором некоторые аминокислоты каркасных и константных доменов тяжелой и легкой цепей были мутированы во избежание или для элиминации иммунного ответа у человека. В некоторых вариантах изобретения, гуманизированное антитело может быть продуцировано путем присоединения константных доменов человеческого антитела к вариабельным доменам антитела животного, не являющегося человеком. Примеры получения гуманизированных антител можно найти в патентах США 6054297, 5886152 и 5977293. В некоторых вариантах изобретения,гуманизированное анти-MAdCAM антитело согласно изобретению содержит аминокислотную последовательность одной или нескольких каркасных областей одного или нескольких человеческих антиMAdCAM антител согласно изобретению. В другом своем аспекте настоящее изобретение включает "химерное антитело". В некоторых вариантах изобретения, химерное антитело означает антитело, которое содержит одну или несколько областей одного антитела и одной или нескольких областей одного или нескольких других антител. В предпочтительном варианте изобретения, одна или несколько CDR происходят от человеческого антиMAdCAM антитела согласно изобретению. В более предпочтительном варианте изобретения, все CDR происходят от человеческого анти-MAdCAM антитела согласно изобретению. В другом предпочтительном варианте, CDR, происходящие от более, чем одного человеческого анти-MAdCAM антитела согласно изобретению, являются смешанными и совместимыми в химерном антителе. Так, например, химерное антитело может содержать область CDR1 от легкой цепи первого человеческого анти-MAdCAM антитела, которая может быть объединена с CDR2 и CDR3 легкой цепи второго человеческого анти-MAdCAM-6 012872 антитела, и область CDR тяжелой цепи, которая может происходить от третьего анти-MAdCAM антитела. Кроме того, каркасные области могут происходить от одного из одинаковых анти-MAdCAM антител,от одного или нескольких различных антител, таких как человеческое антитело, или от гуманизированного антитела."Нейтрализующее антитело", "ингибирующее антитело" или антитело-антагонист представляет собой антитело, которое ингибирует связывание лиганда 47 или 47-экспрессирующих клеток или любого другого когнатного лиганда или клеток, экспрессирующих когнатный лиганд, с MAdCAM по меньшей мере примерно на 20%. В предпочтительном варианте изобретения указанное антитело ингибирует связывание интегрина 47 или 47-экспрессирующих клеток с MAdCAM по меньшей мере примерно на 40%, более предпочтительно на 60%, а еще более предпочтительно на 80, 85, 90, 95 или 100%. Ингибирование связывания может быть определено любым методом, известным среднему специалисту в данной области, например, оно может определено in vitro с помощью анализа на конкурентное связывание. Пример такого определения ингибирования связывания 47-экспрессирующих клеток с MAdCAM представлен в примере 1. Фрагменты или аналоги антител могут быть легко получены средним специалистом в данной области, исходя из описания настоящего изобретения. Предпочтительно, чтобы амино- и карбокси-концы этих фрагментов или аналогов находились вблизи границ функциональных доменов. Структурные и функциональные домены могут быть идентифицированы путем сравнения данных нуклеотидных или аминокислотных последовательностей с последовательностями, имеющимися в известных общедоступных базах данных или в базах данных, находящихся в частной собственности. Предпочтительно, для идентификации мотивов последовательностей или конформационных доменов предсказанных белков,которые встречаются в других белках с известной структурой и/или функцией, используются методы компьютерного сравнения. Методы идентификации последовательностей белка, которые образуют известную трехмерную структуру, известны специалистам и описаны в работе Bowie et al., Science 253:164(1991) . Используемый здесь термин "поверхностный плазмонный резонанс" означает оптическое явление,который позволяет анализировать в режиме реального времени биоспецифические взаимодействия путем детекции изменений концентрации белка в биосенсорной матрице, например, с использованием системыBIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ). Более подробное описание можно найти у Jonsson U. et al., Ann.Biol. Clin. 51:19-26 (1993); Jonsson U. et al., Biotechniques, 11:620-627 (1991);(1991). Термин "koff" означает константу скорости обратной реакции, т.е., константу диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген. Термин "Kd" означает константу диссоциации конкретной реакции взаимодействия "антителоантиген". Считается, что антитело связывается с антигеном, если константа диссоциации составляет 1 мкМ, предпочтительно 100 нМ, а наиболее предпочтительно 10 нМ. Термин "эпитоп" означает любую детерминанту белка, способную специфически связываться с иммуноглобулином или Т-клеточным рецептором или как-либо иначе взаимодействовать с молекулой. Эпитопные детерминантаты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или углеводные боковые цепи, и, в основном, имеют специфическую трехмерную структуру, а также специфические зарядовые характеристики. Эпитоп может быть "линейным" или"конформационным". В линейном эпитопе все сайты взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) располагаются вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе, сайты взаимодействия расположены по всей длине первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе, сайты взаимодействия находятся в аминокислотных остатках, которые расположены на белке друг против друга и отделены друг от друга. Используемые здесь двадцать главных аминокислот имеют общепринятые аббревиатуры. См. монографию Immunology - A Synthesis (2d ed., Golub E.S.Gren D.R. eds., Sinauer Associates, Sunderland,Mass. (1991, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Стереоизомеры (например,D-аминокислоты) двадцати главных аминокислот, неприродных аминокислот, таких как ,дизамещенные аминокислоты, N-алкилзамещенных аминокислот, молочной кислоты и других редких аминокислот могут также служить подходящими компонентами для описанных здесь полипептидов согласно изобретению. Примерами редких аминокислот являются 4-гидроксипролин, -карбоксиглутамат,-N,N,N-триметиллизин, -N-ацетиллизин, О-фосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3 метилгистидин, 5-гидроксилизин, -N-метиларгинин и другие аналогичные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В используемой здесь системе обозначения полипептидов, в соответствии с общепринятой практикой и принятым соглашением о терминологии, левый конец аминокислоты называется аминоконцом, а правый конец аминокислоты называется карбоксиконцом. Используемый здесь термин "полинуклеотид" означает полимерную форму нуклеотидов длиной по-7 012872 меньшей мере в 10 нуклеотидов, либо рибонуклеотидов или дезоксинуклеотидов, либо модифицированную форму, состоящую из нуклеотидов любого типа. Этот термин также включает одноцепочечные и двухцепочечные формы ДНК. Используемый здесь термин "выделенный полинуклеотид" означает полинуклеотид геномной ДНК,кДНК или синтетический полинуклеотид или некоторые их комбинации; причем, по своей природе, "выделенный полинуклеотид" (1) не ассоциируется со всем полинуклеотидом или с частью полинуклеотида,с которым указанный "выделенный полинуклеотид" ассоциируется в природе; (2) функционально присоединен к полинуклеотиду, который не связан с ним в природе, или (3) не существует в природе как часть более крупной последовательности. Используемый здесь термин "олигонуклеотид" означает природные и модифицированные нуклеотиды, связанные друг с другом природными или неприродными олигонуклеотидными связями. Олигонуклеотиды представляют собой полинуклеотидную подпоследовательность, обычно содержащую 200 или менее нуклеотидов. Олигонуклеотиды, предпочтительно, имеют длину 10-60 нуклеотидов, а наиболее предпочтительно 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-40 нуклеотидов. Обычно олигонуклеотиды являются одноцепочечными, например олигонуклеотиды, используемые для зондов, однако они могут быть и двухцепочечными, например, олигонуклеотиды, используемые для конструирования генного мутанта. Олигонуклеотиды согласно изобретению могут быть смысловыми или антисмысловыми. Используемый здесь термин "природные нуклеотиды" означает дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Используемый здесь термин "модифицированные нуклеотиды" означает нуклеотиды с модифицированными или с замещенными сахарными группами и т.п. Используемый здесь термин "олигонуклеотидные связи" включает такие олигонуклеотидные связи,как фосфортиоат, фосфордитиоат, фосфорселеноат, фосфордиселеноат, фосфоранилотиоат, фосфоранилидат, фосфорамидат и т.п. См., например, публикации LaPlanche et al., Nucl. Acids. Res. 14:9081 (1986);UhlmannPeyman Chemical Reviews, 90:543 (1990), которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Если необходимо, олигонуклеотид может включать метку для детекции."Функционально присоединенные" последовательности включают последовательности регуляции экспрессии, которые являются смежными с представляющими интерес генами, и последовательности регуляции экспрессии, которые осуществляют регуляцию представляющего интерес гена, действуя intrans или на расстоянии от него. Используемый здесь термин "последовательность регуляции экспрессии" означает полинуклеотидные последовательности, которые необходимы для эффективной экспрессии и процессинга кодирующих последовательностей, к которым они присоединены. Последовательностями регуляции экспрессии являются соответствующие последовательности инициации и терминации транскрипции, промоторные и энхансерные последовательности; сигналы эффективного процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности,стабилизирующие цитоплазматическую мРНК; последовательности, повышающие эффективность трансляции (то есть, консенсусная последовательность Козака); последовательности, повышающие стабильность белка, и если это необходимо, то последовательности, усиливающие секрецию белка. Природа таких регуляторных последовательностей варьируется в зависимости от типа организма-хозяина, например у прокариотов такие регуляторные последовательности обычно включают промотор, сайт связывания с рибосомой и последовательность терминации транскрипции, а у эукариотов такие регуляторные последовательности обычно включают промоторы и последовательность терминации транскрипции. Термин"регуляторные последовательности" включает, как минимум, все компоненты, присутствие которых необходимо для экспрессии и процессинга, и может также включать дополнительные компоненты, присутствие которых является желательным, например лидерные последовательности и последовательности партнеров по связыванию. Используемый здесь термин "вектор" означает молекулу нуклеиновой кислоты, способную переносить другую нуклеиновую кислоту, к которой она присоединена. Одним из типов векторов является"плазмида", представляющая собой кольцевую двухцепочечную ДНК-петлю, к которой могут быть присоединены дополнительные ДНК-сегменты. Другим типом вектора является вирусный вектор, в котором дополнительные ДНК-сегменты могут быть лигированы в вирусный геном. Некоторые векторы способны автономно реплицироваться в клетке-хозяине, в которую они вводятся (например, бактериальные векторы, имеющие ориджин репликации в бактерии, и эписомные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, не-эписомные векторы млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клеткихозяина после их введения в указанную клетку-хозяина, а поэтому, они могут реплицироваться вместе с геномом хозяина. Кроме того, некоторые векторы способны регулировать экспрессию генов, к которым они функционально присоединены. Такие векторы называются здесь "рекомбинантными экспрессионными векторами" (или просто "экспрессионными векторами"). В общих чертах, в методах рекомбинантных ДНК, экспрессионные векторы часто используются в форме плазмид. В настоящем описании термины "плазмида" и "вектор" могут быть взаимозаменяемыми, поскольку плазмида чаще всего используется-8 012872 в качестве вектора. Однако настоящее изобретение включает и другие формы экспрессионных векторов,такие как вирусные векторы (например, дефектные по репликации ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), которые имеют эквивалентные функции. Используемый здесь термин "рекомбинантная клетка-хозяин" (или просто "клетка-хозяин") означает клетку, в которую был введен рекомбинантный экспрессионный вектор. Следует отметить, что такие термины могут означать не только конкретную клетку индивидуума, но также и потомство таких клеток. Поскольку в последующих генерациях могут возникать некоторые модификации, обусловленные либо мутацией, либо влиянием окружающей среды, то такое потомство, фактически, не может быть идентичным родительской клетке, однако оно все же входит в объем используемого здесь термина "клеткахозяин". Используемый здесь термин "селективная гибридизация" относится к детектируемому и специфическому связыванию. Полинуклеотиды, олигонуклеотиды и их фрагменты согласно изобретению селективно гибридизуются с цепями нуклеиновой кислоты в таких условиях гибридизации и промывки, которые значительно минимизируют уровень детектируемого связывания с неспецифическими нуклеиновыми кислотами. Для достижения селективной гибридизации, известной специалистам и обсуждаемой в настоящей заявке, могут быть использованы условия "высокой жесткости" или "в высокой степени жесткие" условия. Одним из примеров условий "высокой жесткости" или "в высокой степени жестких" условий является инкубирование полинуклеотида с другим полинуклеотидом, где один полинуклеотид может быть фиксирован на твердой поверхности, такой как мембрана, в буфере для гибридизации, содержащем 6SSPE или SSC, 50% формамид, 5 реагент Денхардта, 0,5% ДСН, 100 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, при температуре гибридизации 42 С в течение 12-16 ч, с последующей двухкратной промывкой при 55 С в промывочном буфере, содержащем 1SSC, 0,5% ДСН. См. также Sambrook et al., см. выше, pp. 9,50-9,55. Термин "процент идентичности последовательностей", относящийся к нуклеотидным последовательностям, означает процент остатков двух последовательностей, которые являются одинаковыми при их сравнении путем выравнивания на максимальное соответствие. Длина сравниваемой последовательности, используемой для определения идентичности, может составлять по меньшей мере примерно более девяти нуклеотидов, а обычно по меньшей мере примерно 18 нуклеотидов, или по меньшей мере примерно 24 нуклеотида, а обычно по меньшей мере примерно 28 нуклеотидов, чаще всего по меньшей мере примерно 32 нуклеотида, а предпочтительно по меньшей мере примерно 36, 48 или более нуклеотидов. Для определения идентичности нуклеотидных последовательностей могут быть применены различные алгоритмы, известные специалистам. Так, например, полинуклеотидные последовательности можно сравнивать с помощью программ FASTA, Gap или Bestfit, которые входят в пакет программ WisconsinPackage Version 10.3, Accelrys, San Diego, CA. Программа FASTA, в которую входят, например, программы FASTA2 и FASTA3, позволяет проводить выравнивание последовательностей и определять процент идентичности последовательностей для областей с наилучшим перекрыванием между запрашиваемыми последовательностями и исследуемыми последовательностями (публикации Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998), которые вводятся в настоящее изобретение посредством ссылки). Если это не оговорено особо, то используются параметры по умолчанию, установленные для данной программы или алгоритма. Так, например, процент идентичности нуклеотидных последовательностей может быть определен с помощью программы FASTA с соответствующими параметрами по умолчанию (размер слова 6 и фактор NOPAM для оценочной матрицы) или с помощью программы Gap с ее параметрами по умолчанию, которая поставляется в Wisconsin Package Version, и которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Если это не оговорено особо, то термин "нуклеотидная последовательность" охватывает и комплементарную ей последовательность. Таким образом, подразумевается, что термин "молекула нуклеиновой кислоты", имеющая конкретную последовательность", должен охватывать ее комплементарную цепь вместе с ее комплементарной последовательностью. В молекулярной биологии, исследователи используют термины "процент идентичности последовательностей", "процент сходства последовательностей" и "процент гомологии последовательностей", которые являются взаимозаменяемыми. В настоящей заявке, эти термины имеют одно и то же значение только, если они относятся к нуклеотидным последовательностям. Термин "по существу, аналогичный", или "по существу, аналогичные последовательности", если он относится к нуклеиновой кислоте или к ее фрагменту, означает, что при оптимальном выравнивания, с соответствующими нуклеотидными инсерциями или делециями, для сравнения этой последовательности с другой нуклеиновой кислотой (или ее комплементарной цепью), идентичность нуклеотидных оснований в этих нуклеотидных последовательностях составляет по меньшей мере примерно 85%, предпочтительно по меньшей мере примерно 90%, а еще более предпочтительно по меньшей мере примерно 95, 96,97, 98 или 99%, как может быть определено с помощью любого хорошо известного алгоритма для определения идентичности последовательностей, такого как FASTA, BLAST или GAP, и как обсуждается-9 012872 выше. Термин "в основном, идентичный", относящийся к полипептидам, означает, что две пептидных последовательности, при их оптимальном выравнивании, например, с помощью программ GAP или BESTFIT с использованием "весов" пробелов по умолчанию, имеют по меньшей мере 75- или 80%-ную идентичность последовательностей, предпочтительно по меньшей мере 90- или 95%-ную идентичность последовательностей, а более предпочтительно по меньшей мере 98- или 99%-ную идентичность последовательностей. При этом предпочтительно чтобы положения остатков, которые не являются идентичными, отличались по своим консервативным аминокислотным заменам. Термин "консервативная аминокислотная замена" означает аминокислотный остаток, замененный другим аминокислотным остатком,имеющим боковую цепь (группу R) и аналогичные химические свойства (например, заряд или гидрофобность). В общих чертах, консервативная аминокислотная замена не будет оказывать значительного влияния на функциональные свойства белка. В тех случаях, когда две или более аминокислотных последовательности отличаются друг от друга консервативными заменами, то процент идентичности последовательностей или степень их сходства могут быть скорректированы с учетом консервативной природы такой замены. Способы осуществления такой коррекции хорошо известны специалистам. См., например,публикацию Pearson, Methods Mol. Biol., 24:307-31 (1994), которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Примерами групп аминокислот, которые имеют боковые цепи с аналогичными химическими свойствами, являются 1) аминокислоты, имеющие алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) аминокислоты, имеющие алифатические гидроксильные боковые цепи: серин и треонин; 3) аминокислоты, имеющие амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) аминокислоты, имеющие ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) аминокислоты, имеющие основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; и 6) аминокислоты,имеющие серусодержащие боковые цепи: цистеин и метионин. Предпочтительными консервативными аминокислотными заменами являются замены в пределах таких групп, как валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. Альтернативно, консервативной заменой является любая замена, имеющая положительное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ 250, описанной в публикации Gonnet et al., Science 256: 1443-45 (1992), которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Термин "умеренно консервативная замена" означает любую замену, имеющую неотрицательное значение в матрице логарифмического правдоподобия РАМ 250. Сходство полипептидных последовательностей обычно определяют с помощью компьютерной программы для анализа последовательностей. Компьютерный анализ белков проводят для установления соответствия последовательностей с использованием "цены" сходства, приписываемой различным заменам, делециям и другим модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Так, например, GCG включает программы, такие как "Gap" и "Bestfit", которые могут быть использованы с параметрами по умолчанию, установленными в этих программах, для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близкородственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды, происходящие от организмов различных видов, или между белком дикого типа и его мутеином. См., например, Wisconsin package Version 10.3. Полипептидные последовательности могут быть также подвергнуты сравнению с помощью программы FASTA с использованием параметров по умолчанию или рекомендованных параметров, а именно, программы, входящей в пакет программ Wisconsin package Version 10.3. Программа FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) позволяет проводить сопоставление последовательностей и определять процент идентичности последовательностей для областей с наилучшим перекрыванием между запрашиваемыми последовательностями и исследуемыми последовательностями (Pearson (1990); Pearson (2000. Другим предпочтительным алгоритмом для сравнения последовательности согласно изобретению с последовательностью базы данных, содержащей большое число последовательностей, происходящих от различных организмов, является компьютерная программа BLAST, а в частности, blastp или tblastn, с параметрами по умолчанию, установленными в таких программах. См. например, руководство Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Altschul etal., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997), которое вводится в настоящее описание посредством ссылки. Длина полипептидных последовательностей, сравниваемых для определения их гомологии, обычно составляет по меньшей мере примерно 16 аминокислотных остатков, обычно по меньшей мере примерно 20 остатков, чаще всего по меньшей мере примерно 24 остатка или примерно 28 остатков, а предпочтительно более, чем примерно 35 остатков. При поиске содержащихся в базе данных последовательностей,происходящих от большого числа различных организмов, предпочтительно, сравнивать аминокислотные последовательности. Используемые здесь термины "метка" или "меченный" относятся к включению другой молекулы в антитело. В одном варианте изобретения, указанной меткой является детектируемый маркер, например радиоактивно меченная аминокислота, включение которой в полипептид биотинильной молекулы или ее присоединение к полипептиду биотинильной молекулы может быть детектировано по меченному авидину (например, стрептавидину, содержащему флуоресцентный маркер или ферментативную активность,которые могут быть детектированы оптическими или колориметрическими методами). В другом вариан- 10012872 те указанная метка или маркер могут также обладать терапевтическими свойствами, например они могут быть конъюгированы с лекарственным средством или токсином. При этом могут быть использованы различные методы мечения полипептидов и гликопротеинов, хорошо известные специалистам. Примерами меток, используемых для полипептидов, являются, но не ограничиваются ими, радиоизотопы или радионуклиды (например, 3 Н, 14 С, 15N, 35S, 90Y, 94Tc, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные метки (например, ФИТЦ,родамин, комплекс "лантанид-фосфор"), ферментные метки (например, пероксидаза хрена, галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные маркеры, биотинильные группы, предварительно определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичной репортерной молекулой (например, двухкомпонентные последовательности лейциновой молнии, сайты связывания для "вторых" антител, металлосвязывающие домены, эпитопные метки), магнитные вещества, такие как гадолиниевые хелатные комплексы; токсины, такие как коклюшный токсин; таксол; цитохалазин В; грамицидин D; этидийбромид; эметин; митомицин; этопозид; тенопозид; винкристин; винбластин; колхицин; доксорубицин; даунорубицин; дигидроксиантрациндион; митоксантрон; митрамицин; актиномицинD; 1-дегидротестостерон; глюкокортикоиды; прокаин; тетракаин; лидокаин; пропранолол; пуромицин и их аналоги или гомологи. В некоторых вариантах осуществления изобретения, метки присоединяют посредством спейсерных групп различной длины для уменьшения возможного стерического затруднения. Используемый здесь термин "агент" означает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, полученный из биологических материалов. Используемый здесь термин "фармацевтический агент или лекарственное средство" означает химическое соединение или композицию, способные индуцировать нужный терапевтический эффект при их соответствующем введении пациенту. Другие используемые здесь химические термины имеют общепринятые значения, описанные в публикации The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S. Ed.,McGraw-Hill, San Francisco (1985, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Используемый здесь термин "противовоспалительное" или "иммуномодулирующее" средство означает средства, которые обладают функциональным свойством, заключающимся в снижении степени воспаления, включая снижение тяжести воспалительного заболевания у индивидуума, включая человека. В различных вариантах изобретения, указанными воспалительными заболеваниями могут быть, но не ограничиваются ими, воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, включая болезнь Крона,язвенный колит, дивертикулез, гастрит, заболевание печени, первичный билиарный склероз, склерозирующий холангит. Воспалительными заболеваниями также являются, но не ограничиваются ими, заболевание брюшной полости (включая перитонит, аппендицит, заболевание желчных путей), острый поперечный миелит,аллергический дерматит (включая кожную аллергию, аллергическую экзему, кожную атопию, атопическую экзему, кожное воспаление, воспалительную экзему, атопический дерматит, воспалительный дерматит, блошиную кожу, милиарный дерматит, милиарную экзему, дерматит, вызываемый клещом домашней пыли), анкилозирующий спондилит (синдром Рейтера), астма, воспаление дыхательных путей,атеросклероз, артериосклероз, билиарная атрезия, воспаление мочевого пузыря, рак молочной железы,панкардит (включая васкулиты, ревматоидное поражения эпонихия, язвы на ногах, полимиозит, хронические сосудистые воспаления, перикардит, хроническую обструктивную болезнь легких), хронический панкреатит, периневрит, колиты (включая амебный колит, инфекционный колит, бактериальный колит,болезнь Крона, ишемический колит, язвенный колит, идиопатический проктоколит, воспалительное заболевание кишечника, псевдомембранозный колит), колагенозы (васкулиты) (ревматоидный артрит,СКВ, прогрессирующий системный склероз, смешанное заболевание соединенительной ткани, сахарный диабет), болезнь Крона (регионарный энтерит, грануломатозный илеит, илеоколит, воспаление пищеварительной системы), демиелинизирующее заболевание (включая миелит, рассеянный склероз, диссеминированный склероз, острый диссеминированный энцефаломиелит, перивенозную демиелинизацию, дефицит витамина В 12, синдром Гийена-Барре, ассоциированный с ретровирусом рассеянный склероз(PC), дерматомиозит, дивертикулит, экссудативная диарея, гастрит, грануломатозный гепатит, грануломатозное воспаление, холецистит, инсулинзависимый сахарный диабет, воспалительное заболевание печени (фиброз печени, первичный билиарный цирроз печени, гепатит, склерозирующий холангит), воспаление легких (идиопатический фиброз легких, эозинофильная гранулема легких, легочный гистиоцитозX, перибронхиолярное воспаление, острый бронхит), венерическая лимфогранулема, злокачественная меланома, болезни полости рта/зубов (включая гингивит, периодонтоз), мукозит, воспаление скелетномышечной системы (миозит), неалкогольный стеатогепатит (неалкогольное жировое перерождение печени), воспаление глаз и глазниц (включая увеит, неврит зрительного нерва, периферическое ревматоидное изъязвление, периферическое воспаление роговицы), остеоартрит, остеомиелит, фарингит, полиартрит, проктит, псориаз, лучевое поражение, саркоидоз, серповидно-клеточная невропатия, поверхностный тромбофлебит, синдром системной воспалительной реакции, тиреоидит, системная красная волчанка,реакция "трансплантат против хозяина", острые поражения, вызванные ожогами, синдром Бехчета и синдром Сьегрена. Термины "пациент" и "индивидуум" включают человека и других животных.- 11012872 Человеческие антитела против MAdCAM и их характеризация В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к анти-MAdCAM антителам, содержащим человеческие последовательности CDR. В своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к человеческим антителам против MAdCAM. В некоторых вариантах изобретения человеческие антитела против MAdCAM продуцируют путем иммунизации трансгенного животного, не являющегося человеком, например грызуна, геном которого содержит гены человеческого иммуноглобулина, так, чтобы у этого трансгенного животного продуцировались человеческие антитела. В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к анти-MAdCAM антителу, которое не связывается с комплементом. В предпочтительном варианте изобретения анти-MAdCAM антителом является антитело 1.7.2,1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения анти-MAdCAM антитело включает легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ IDNO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 или 68 (с сигнальной последовательностью или без нее), или вариабельную область любой из указанных аминокислотных последовательностей, либо один или несколько CDR, происходящих от этих аминокислотных последовательностей. В другом предпочтительном варианте изобретения, анти-MAdCAM антитело включает тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46,52, 56, 60 или 64 (с сигнальной последовательностью или без нее), или аминокислотную последовательность указанной вариабельной области, либо одну или несколько CDR, происходящих от этих аминокислотных последовательностей. Настоящее изобретение также включает человеческие анти-MAdCAM антитела, включающие аминокислотную последовательность, простирающуюся от области CDR1 до области CDR3, включительно, и происходящую от любой одной из вышеупомянутых последовательностей. Настоящее изобретение также относится к анти-MAdCAM антителу, включающему одну или несколько каркасных областей (FR) любой из вышеупомянутых последовательностей. Настоящее изобретение также относится к анти-MAdCAM антителу, включающему одну из вышеупомянутых аминокислотных последовательностей, в которые были внесены одна или несколько модификаций. В некоторых вариантах изобретения, цистеины антитела которые могут быть химически реактивными, заменены другими остатками, таким как, но не ограничивающимися ими, аланин или серин. В одном из вариантов изобретения присутствует замена не канонического цистеина. Такая замена может быть сделана в CDR или в каркасной области вариабельного домена или в константной области антитела. В некоторых вариантах изобретения такой цистеин является каноническим. В некоторых вариантах изобретения аминокислотную замену вносят для удаления возможных протеолитических сайтов, присутствующих в данном антителе. Такие сайты могут присутствовать в CDR или в каркасной области вариабельного домена или в константной области данного антитела. Замена цистеиновых остатков и удаление протеолитических сайтов может снижать степень гетерогенности продукта антитела. В некоторых вариантах изобретения, пары аспарагин-глицин, которые могут образовывать сайты деамидирования, удаляют путем замены одного или обоих этих остатков. В некоторых вариантах изобретения, аминокислотную замену делают в целях добавления или удаления потенциальных сайтов гликозилирования в вариабельной области антитела согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения отщепляют С-концевой лизин тяжелой цепи анти-MAdCAM антитела согласно изобретению. В различных вариантах настоящего изобретения тяжелая и легкая цепи анти-MAdCAM антител могут, но необязательно, включать сигнальную последовательность. В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к двенадцати ингибирующим человеческим моноклональным антителам против MAdCAM и к гибридомным клеточным линиям, продуцирующим эти антитела. В табл. 1 перечислены идентификаторы последовательностей (SEQ ID NO:) нуклеиновых кислот, которые кодируют полноразмерную тяжелую и легкую цепи (включая сигнальную последовательность) и соответствующие полноразмерные выведенные аминокислотные последовательности. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к модифицированному варианту некоторых идентифицированных выше человеческих моноклональных антител против MAdCAM. В табл. 2 перечислены идентификаторы последовательностей ДНК и последовательностей белков модифицированных антител. Таблица 2 Классы и подклассы анти-MAdCAM антител Указанное антитело может представлять собой молекулу IgG, IgM, IgE, IgA или IgD. В предпочтительном варианте изобретения указанное антитело относится к классу IgG и к подклассу IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В более предпочтительном варианте анти-MAdCAM антитело принадлежит к подклассу IgG2 или IgG4. В другом предпочтительном варианте изобретения, анти-MAdCAM антитело принадлежит к такому же классу и подклассу, как антитела 1.7.2, 1.8.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod, которые принадлежат к подклассу IgG2, или антитела 6.14.2,6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 или 9.8.2, которые принадлежат к подклассу IgG4. Класс и подкласс анти-MAdCAM антител могут быть определены любым методом, известным специалистам. В общих чертах, класс и подкласс данного антитела могут быть определены с использованием антител, которые являются специфичными к антителу конкретного класса и подкласса. Такие антитела являются коммерчески доступными. Класс и подкласс антитела может быть определен с помощьюELISA или Вестерн-блот-анализа, а также другими методами. Альтернативно, класс и подкласс антитела может быть определен путем секвенирования всех или части константных доменов тяжелой и/или легкой цепей антител, сравнения их аминокислотных последовательностей с известными аминокислотными последовательностями различных классов и подклассов иммуноглобулинов, и определения класса и подкласса этих антител как класса, указывающего на наибольшую идентичность последовательностей.- 13012872 Видовая и молекулярная селективность В другом аспекте настоящего изобретения анти-MAdCAM антитело обладает как видовой, так и молекулярной селективностью. В одном из вариантов изобретения анти-MAdCAM антитело связывается с MAdCAM человека, собакоподобных обезьян или собак. В некоторых вариантах изобретения антиMAdCAM антитело не связывается с MAdCAM цепкохвостых обезьян, таких как мартышки. В соответствии с описанием настоящего изобретения можно определить видовую селективность анти-MAdCAM антитела хорошо известными методами. Так, например, видовую селективность можно определить с помощью Вестерн-блот-анализа, FACS, ELISA или иммуногистохимического анализа. В предпочтительном варианте изобретения видовую селективность можно определить с помощью иммуногистохимического анализа. В некоторых вариантах изобретения, анти-MAdCAM антитело которое специфически связывается сMAdCAM, обладает селективностью к MAdCAM, которая по меньшей мере в 10, предпочтительно по меньшей мере в 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90 раз, а более предпочтительно в 100 раз превышает селективность к VCAM, фибронектину или к любому другому антигену. В предпочтительном варианте изобретения анти-MAdCAM антитело не обнаруживает какого-либо заметного связывания с VCAM, фибронектином или с любым другим антигеном, не являющимся MAdCAM. Селективность анти-MAdCAM антитела по отношению к MAdCAM может быть определена методами, хорошо известными специалистам, в соответствии с описанием настоящего изобретения. Так, например, такая селективность может быть определена с помощью Вестерн-блот-анализа, FACS, ELISA или иммуногистохимического анализа. Аффинность связывания анти-MAdCAM антител с MAdCAM В другом аспекте настоящего изобретения анти-MAdCAM антитела специфически связываются сMAdCAM с высокой аффинностью. В одном из вариантов изобретения анти-MAdCAM антитело специфически связывается с MAdCAM с Kd 310-8 М или менее, как было определено с помощью поверхностного плазмонного резонанса, такого как BIAcore. В более предпочтительных вариантах изобретения указанное антитело специфически связывается с MAdCAM с Kd 110-8 М или менее, или 110-9 М, или менее. В еще более предпочтительном варианте изобретения указанное антитело специфически связывается с MAdCAM с Kd 110-10 М или менее. В других предпочтительных вариантах изобретения указанное антитело специфически связывается с MAdCAM с Kd, равным 2,6610-10 М или менее, 2,3510-11 М или менее или 910-12 М или менее. В другом предпочтительном варианте изобретения, указанное антитело специфически связывается с MAdCAM с Kd 110-11 M или менее. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело специфически связывается с MAdCAM, в основном, с таким жеKd, как и антитело, выбранное из 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5,7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. Антитело "в основном, с таким же Kd", как и эталонное антитело, имеет Kd, которое составляет 100 пМ, предпочтительно 50 пМ,более предпочтительно 20 пМ, еще более предпочтительно 10 пМ, 5 пМ или 2 пМ по сравнению сKd эталонного антитела в том же самом эксперименте. В другом предпочтительном варианте изобретения, указанное антитело связывается с MAdCAM, в основном, с таким же Kd, как и антитело, которое содержит один или несколько вариабельных доменов или одну или несколько областей CDR антитела,выбранного из 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.2 6.4-mod. В еще одном предпочтительном варианте изобретения, указанное антитело связывается с MAdCAM, в основном, с таким же Kd, как и антитело, которое содержит одну из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12,14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 или 68 (с сигнальной последовательностью или без нее) или ее вариабельный домен. В другом предпочтительном варианте антитело связывается с MAdCAM, в основном, с таким же Kd, как и антитело, которое содержит одну или несколько областей CDR антитела, содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56,58, 62, 64, 66 или 68. Аффинность связывания анти-MAdCAM антитела с MAdCAM может быть определена любым методом, известным специалистам. В одном из вариантов изобретения, аффинность связывания может быть определена с помощью конкурентных анализов ELISA, РИА или поверхностного плазмонного резонанса,такого как BIAcore. В более предпочтительном варианте изобретения, аффинность связывания измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса. В еще более предпочтительном варианте изобретения, аффинность связывания и скорость диссоциации измеряют с применением BIAcore. Пример определения аффинности связывания описан ниже в примере II. Время полужизни анти-MAdCAM антител В соответствии с другим аспектом изобретения анти-MAdCAM антитело имеет время полужизни invitro или in vivo по меньшей мере один день. В предпочтительном варианте изобретения указанное антитело или его часть имеет время полужизни по меньшей мере три дня. В более предпочтительном варианте изобретения указанное антитело или его часть имеет время полужизни четыре дня или более. В другом варианте изобретения указанное антитело или его часть имеет время полужизни восемь дней или- 14012872 более. В другом варианте изобретения, указанное антитело или его антигенсвязывающая часть дериватизированы или модифицированы так, что они имеют более длительное время полужизни, как обсуждается ниже. В другом предпочтительном варианте изобретения антитело может содержать точковые мутации для увеличения его времени полужизни в сыворотке, описанные в заявке WO 00/09560, опубликованной 24 февраля 2000. Время полужизни антитела может быть измерено любыми методами, известными среднему специалисту в данной области. Так, например, время полужизни антитела может быть измерено с помощью Вестерн-блот-анализа, ELISA или РИА в течение соответствующего периода времени. Время полужизни антитела может быть измерено у любого подходящего животного, такого как примат, например собакоподобная обезьяна или человек. Идентификация эпитопов MAdCAM, распознаваемых анти-MAdCAM антителом Настоящее изобретение также относится к человеческому моноклональному анти-MAdCAM антителу, которое связывается с таким же антигеном или эпитопом, как и описанное здесь человеческое антиMAdCAM антитело. Кроме того, настоящее изобретение относится к человеческому анти-MAdCAM антителу, которое конкурирует или перекрестно конкурирует за связывание с человеческим антиMAdCAM антителом. В предпочтительном варианте изобретения, человеческим анти-MAdCAM антителом является 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod,6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения,человеческое анти-MAdCAM антитело содержит один или несколько вариабельных доменов или одну или несколько областей CDR антитела, выбранного из 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2,6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В еще одном предпочтительном варианте изобретения человеческое анти-MAdCAM антитело содержит одну из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24,26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 или 68 (с сигнальной последовательностью или без нее), или ее вариабельный домен. В другом предпочтительном варианте изобретения человеческое анти-MAdCAM антитело включает одну или несколько областей CDR антитела, содержащего одну из аминокислотных последовательностей, выбранную из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20,22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 или 68. В особенно предпочтительном варианте изобретения анти-MAdCAM антителом является другое человеческое антитело. Для того чтобы определить, может ли анти-MAdCAM антитело связываться с таким же антигеном,как другое анти-MAdCAM антитело, применяются различные методы, известные специалистам. Так,например, может быть использовано известное анти-MAdCAM антитело для захвата антигена, элюирования антигена из анти-MAdCAM антитела и последующего определения связывания тестируемого антитела с элюированным антигеном. Можно определить, конкурирует ли данное антитело с антиMAdCAM антителом за связывание с MAdCAM в условиях насыщения, а затем определить способность тестируемого антитела связываться с MAdCAM. Если тестируемое антитело способно связываться сMAdCAM одновременно с анти-MAdCAM антителом, то тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, чем тот эпитоп, с которым связывается анти-MAdCAM антитело. Однако, если тестируемое антитело неспособно связываться с MAdCAM одновременно с анти-MAdCAM антителом, то тестируемое антитело конкурирует с человеческим анти-MAdCAM антителом. Этот эксперимент может быть проведен с помощью ELISA, поверхностного плазмонного резонанса, или, предпочтительно, BIAcore. Для того, чтобы определить, имеет ли место перекрестное конкурирование анти-MAdCAM антитела с другим анти-MAdCAM антителом, может быть использован вышеописанный конкурентный метод, осуществляемый в двух направлениях, то есть метод, в котором определяют, блокирует ли известное антитело тестируемое антитело и наоборот. Гены, кодирующие легкую и тяжелую цепи Настоящее изобретение также относится к анти-MAdCAM антителу, содержащему вариабельную область легкой цепи, кодируемую геном каппа-цепи человеческого антитела. В предпочтительном варианте изобретения, вариабельная область легкой цепи кодируется генами семейства Vk A2, A3, А 26, В 3,O12 или O18. В различных вариантах изобретения, легкая цепь содержит не более, чем одиннадцать, не более, чем шесть или не более, чем три аминокислотных замены по сравнению с последовательностью генов Vk А 2, A3, А 26, В 3, O12 или O18 человеческой зародышевой линии. В предпочтительном варианте изобретения, такими аминокислотными заменами являются консервативные замены. Последовательности SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44 и 48 представляют собой аминокислотные последовательности полноразмерных легких каппа-цепей двенадцати анти-MAdCAM антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 и 9.8.2. На фиг. 1 К-1 Т проиллюстрировано сравнение путем выравнивания аминокислотных последовательностей вариабельных доменов легкой цепи двенадцати анти-MAdCAM антител с последовательностями зародышевой линии,от которой они происходят. На фиг. 2 А проиллюстрировано сравнение путем выравнивания аминокислотных последовательностей вариабельных доменов легких каппа-цепей двенадцати анти-MAdCAM антител друг с другом. В соответствии с описанием настоящего изобретения любой средний специалист в данной области может определить различия между последовательностями антител зародышевой линии и- 15012872 последовательностями других анти-MAdCAM антител. Последовательности SEQ ID NO: 54, 58, 62, 66 или 68 представляют собой аминокислотные последовательности полноразмерных легких каппа-цепей пяти дополнительных анти-MAdCAM антител: 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod, модифицированных путем внесения аминокислотных замен в родительские анти-MAdCAM антитела 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1 или 7.26.4, соответственно. В предпочтительном варианте изобретения область VL анти-MAdCAM антител, по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, содержит такие же мутации, как любая одна или несколько областей VL антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5,7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.2 6.4-mod. Настоящее изобретение включает анти-MAdCAM антитело, в котором присутствуют области, кодируемые такими же человеческими генами Vk и Jk, как в репрезентативном антителе. В некоторых вариантах изобретения данное антитело по сравнению с антителом зародышевой линии содержит такие же одну или несколько мутаций,как и репрезентативные антитела. В некоторых вариантах изобретения данное антитело содержит различные замены в таких же одном или нескольких положениях, как в репрезентативных антителах. Так,например, VL анти-MAdCAM антител может содержать одно или несколько аминокислотных замен, которые являются аналогичными заменам, присутствующим в антителе 7.16.6, и другую аминокислотную замену, которая является аналогичной замене в антителе 7.26.4. Таким образом, можно смешивать и подбирать по соответствию различные признаки связывающего антитела в целях, например, изменения аффинности данного антитела против MAdCAM или скорости диссоциации этого антитела от антигена. В другом варианте изобретения, эти мутации присутствуют в таком же положении, как и мутации, имеющиеся в любой одной или нескольких областях VL антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.2 6.4-mod,но, при этом, консервативные аминокислотные замены сделаны в других аминокислотных положениях. Так, например, если аминокислотной заменой, по сравнению с зародышевой линией, в одном из антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod, является глутамин, то консервативной заменой может быть аспартат. Аналогичным образом, если аминокислотной заменой является серин, то консервативной заменой может быть треонин. В другом предпочтительном варианте изобретения легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, аналогичную аминокислотной последовательности области VL 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом особенно предпочтительном варианте изобретения легкая цепь содержит аминокислотные I последовательности, аналогичные аминокислотным последовательностям CDR-областей легкой цепи антитела 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2,6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения легкая цепь содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере с одной CDRобластью легкой цепи антитела 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5,7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения легкая цепь содержит аминокислотную последовательность с CDR-областями,происходящими от различных легких цепей, в которых Vk и Jk кодируются одними и теми же генами. В более предпочтительном варианте изобретения CDR из различных легких цепей были получены от антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28,32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 64, 66 или 68 с сигнальной последовательностью или без нее. В другом варианте изобретения легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61,65 или 67 (с сигнальной последовательностью или без нее), или нуклеотидной последовательностью,кодирующей аминокислотную последовательность, имеющую 1-11 аминокислотных инсерций, делеций или замен. При этом предпочтительно, чтобы аминокислотные замены были консервативными. В другом варианте изобретения антитело или его часть содержит легкую цепь лямбда. Настоящее изобретение также относится к анти-MAdCAM антителу или его части, содержащим человеческую генную последовательность VH или последовательность, происходящую от человеческого гена VH. В одном из вариантов изобретения аминокислотная последовательность тяжелой цепи происходит от семейства человеческих генов VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 или 4-4. В различных вариантах изобретения тяжелая цепь содержит не более, чем пятнадцать, не более, чем шесть или не более, чем три аминокислотных замены по сравнению с последовательностью генов VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30,3-33 или 4-4 человеческой зародышевой линии. Последовательности SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 и 46 представляют собой аминокислотные последовательности полноразмерных тяжелых цепей двенадцати анти-MAdCAM антител. На фиг. 1A-1J проиллюстрировано сравнение путем выравнивания аминокислотных последовательно- 16012872 стей вариабельных областей тяжелой цепи двенадцати анти-MAdCAM антител с последовательностями зародышевой линии, от которой они происходят. На фиг. 2 В проиллюстрировано сравнение путем выравнивания аминокислотных последовательностей вариабельных доменов тяжелой цепи двенадцати анти-MAdCAM антител друг с другом. Исходя из настоящего описания и исходя из нуклеотидных последовательностей согласно изобретению, любой средний специалист в данной области может определить кодируемую аминокислотную последовательность для тяжелых цепей двенадцати анти-MAdCAM антител и тяжелых цепей зародышевой линии, а также может определить различия между последовательностями антител зародышевой линии и последовательностями других антител. SEQ ID N0: 52, 56, 60 и 64 представляют собой аминокислотные последовательности полноразмерных тяжелых цепей антиMAdCAM антител: 6.22.2-mod, 6.34.2-mod и 6.77.1-mod, модифицированных путем внесения аминокислотных замен в родительские анти-MAdCAM антитела 6.22.2, 6.34.2 и 6.67.1, соответственно. Одно дополнительно модифицированное анти-MAdCAM антитело, 7.26.4-mod, имеет аминокислотную последовательность полноразмерной тяжелой цепи, которая представляет собой SEQ ID NO:42. В предпочтительном варианте изобретения область VH анти-MAdCAM антител, по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, содержит такие же мутации, как любая одна или несколько VH антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4,9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. Как обсуждается выше, указанное антитело, по сравнению с антителом зародышевой линии, содержит такие же одну или несколько мутаций, как и репрезентативные антитела. В некоторых вариантах изобретения данное антитело содержит различные замены в таких же одном или нескольких положениях, как в репрезентативных антителах. Так, например, VH анти-MAdCAM антител может содержать одно или несколько аминокислотных замен, которые являются аналогичными заменам, присутствующим в антителе 7.16.6, и другую аминокислотную замену, которая является аналогичной замене в антителе 7.26.4. Таким образом, можно смешивать и подбирать по соответствию различные признаки связывающего антитела в целях, например, изменения аффинности данного антитела против MAdCAM или его скорости диссоциации от антигена. В другом варианте изобретения аминокислотная замена по сравнению с зародышевой линией присутствует в таком же положении, как и замена, имеющаяся в любой одной или нескольких областей VH сравниваемого антитела 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod, но при этом положение, в котором сделана замена другим остатком, является консервативной заменой по сравнению с со сравниваемым антителом. В другом предпочтительном варианте изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, аналогичную аминокислотной последовательности VH антитела 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом особенно предпочтительном варианте изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотные последовательности, аналогичные аминокислотным последовательностям CDR-областей тяжелой цепи антитела 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2,6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере из одной CDR-области тяжелой цепи антитела 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2,6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотные последовательности с CDR-областями, происходящими от различных тяжелых цепей. В более предпочтительном варианте изобретения CDR из различных тяжелых цепей были получены от антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1,7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность,выбранную из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 или 64 с сигнальной последовательностью или без нее. В другом варианте изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 1, 5, 9,13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 или 63, или нуклеотидной последовательностью, кодирующей аминокислотную последовательность, имеющую 1-15 аминокислотных инсерций, делеций или замен. В другом варианте изобретения указанной заменой является консервативная аминокислотная замена. Способы получения антител и антителопродуцирующих клеточных линий Иммунизация В одном из вариантов изобретения человеческие антитела продуцируют путем иммунизации антигеном MAdCAM животного, не являющегося человеком и содержащего в своем геноме некоторые или все локусы тяжелой и легкой цепей человеческого иммуноглобулина, антигеном MAdCAM. В предпочтительном варианте изобретения указанным животным, не являющимся человеком, является животноеXENOMOUSE, которое представляет собой сконструированный мышиный штамм, содержащий крупные фрагменты локусов человеческого иммуноглобулина, и является дефицитным по продуцированию мышиного антитела. См., например, Green et al., Nature Genetics 7:13-21 (1994) и патенты США 5916771,5939598, 5985615, 5998209, 6075181, 6091001, 6114598 и 6130364. См. также WO 91/10741, WO 94/02602,WO 96/34096, WO 96/33735, WO 98/16654, WO 98/24893, WO 98/50433, WO 99/45031, WO 99/53049, WO- 17012872 00/09560 и WO 00/037504. У животных XENOMOUSE продуцируется репертуар полноразмерных человеческих антител, подобный тому, который обычно продуцируется у взрослого человека, и генерируются антигенспецифические человеческие mAbs. Второе поколение животных XENOMOUSE содержат примерно 80% генов V, кодирующих репертуар человеческих антител, благодаря введению этим мышам фрагментов дрожжевой искусственной хромосомы (YAC), имеющих мегаоснования определенной длины и конфигурацию зародышевой линии, и находящихся в локусах тяжелой цепи и легкой каппа-цепи человеческих антител. В другом варианте изобретения мыши XENOMOUSE, кроме того, содержат почти весь человеческий локус тяжелой цепи и легкой -цепи. См. публикации Mendez et al., Nature Genetics 16:146-156 (1997), GreenJakobovits, J. Exp. Med. 188:483-495 (1998), которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Настоящее изобретение также относится к способу получения анти-MAdCAM антител от животных, не являющихся человеком и не являющихся мышью, путем иммунизации трансгенных животных,не являющихся человеком, которые имеют локус человеческого иммуноглобулина. Такие животные могут быть созданы методами, непосредственно описанными выше. Методы, описанные в этих документах,могут быть модифицированы как описано в патенте США 5994619 (патент "619"), который вводится в настоящее описание посредством ссылки. В патенте "619" описаны методы продуцирования новых клеток и клеточных линий культуральной внутренней клеточной массы (CICM), полученных от свиней и коров, и трансгенных клеток CICM, в которые была введена гетерологичная ДНК. Трансгенные клеткиCICM могут быть использованы для продуцирования клонированных трансгенных эмбрионов, плода и потомства. В патенте "619" также описаны методы создания трансгенных животных, которые способны передавать потомству гетерологичную ДНК. В предпочтительных вариантах изобретения животными, не являющимися человеком, являются крысы, овцы, свиньи, козы, крупный рогатый скот или лошади. В другом варианте изобретения животными, не являющимися человеком и содержащими локус человеческого иммуноглобулина, являются животные, которые имеют "минилокусы" человеческих иммуноглобулинов. В методе, основанном на минилокусах, экзогенный локус Ig имитируется посредством включения отдельных генов локуса Ig. Таким образом, конструкция для введения животному образуется из одного или нескольких генов VH, одного или нескольких генов DH, одного или нескольких генов JH константного доменаи второго константного домена (предпочтительно, константного домена гаммацепи). Этот метод описан, inter alia, в патентах США 5545807, 5545806, 5625126, 5633425, 5661016,5770429, 5789650, 5814318, 5591669, 5612205, 5721367, 5789215 и 5643763, которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Преимуществом метода с использованием минилокуса является быстрота, с которой конструкции,включающие части локуса IgG, могут генерироваться и встраиваться в геном животного. Однако возможным недостатком метода с использованием минилокуса, является то, что разнообразия иммуноглобулинов может оказаться недостаточным для поддержания полного формирования В-клеток, так, чтобы можно было снижать уровень продуцирования антител. Для продуцирования анти-MAdCAM антитела животное, не являющееся человеком и содержащее несколько или все локусы человеческого иммуноглобулина, иммунизируют антигеном MAdCAM, a затем у этого животного выделяют антитело или антитело-продуцирующие клетки. Антиген MAdCAM может представлять собой выделенный и/или очищенный MAdCAM, а предпочтительным антигеном является человеческий MAdCAM. В другом варианте изобретения антигеном MAdCAM является фрагмент MAdCAM, а предпочтительно внеклеточный домен MAdCAM. В другом варианте изобретения антигеном MAdCAM является фрагмент, содержащий по меньшей мере один эпитоп MAdCAM. В другом варианте изобретения, антигеном MAdCAM является клетка, которая экспрессирует MAdCAM на своей поверхности, а предпочтительно, клетка, которая сверхэкспрессирует MAdCAM на своей поверхности. Иммунизация животных может быть проведена любым методом, известным специалистам. См., например, HarlowLane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990. Методы иммунизации животных, не являющихся человеком, таких как крысы, овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот и лошади, хорошо известны специалистам. См., например, HarlowLane, и патент США 5994619. В предпочтительном варианте изобретения антиген MAdCAM вводят вместе с адъювантом для стимуляции иммунного ответа. Такими адъювантами являются полный или неполный адъювант Фрейнда, RIBI (мурамилдипептиды) или ISCOM (иммуностимулирующие комплексы). Такие адъюванты могут защищать полипептид от быстрого диспергирования путем его изолирования в локальном участке,либо они могут содержать вещества, стимулирующие секрецию факторов, которые являются хемотаксическими для макрофагов и других компонентов иммунной системы, из организма-хозяина. При введении полипептида схема иммунизации предпочтительно включает два или более введения данного полипептида за период времени в несколько недель. В примере I проиллюстрирован протокол иммунизации животного XENOMOUSE полноразмерным человеческим MAdCAM в забуференом фосфатом физиологическом растворе. Продуцирование антител и антителопродуцирующих клеточных линий После иммунизации животного антигеном MAdCAM у этого животного могут продуцироваться ан- 18012872 титела и/или антителопродуцирующие клетки. Сыворотку, содержащую анти-MAdCAM антитело, получают от животного путем взятия у него крови или после его умерщвления. Эта сыворотка может быть использована в том виде, в каком она была получена от животного, или из этой сыворотки может быть получена иммуноглобулиновая фракция, либо из нее могут быть выделены анти-MAdCAM антитела. В другом варианте изобретения антителопродуцирующие иммортализованные клеточные линии получают от иммунизованного животного. После иммунизации животное умерщвляют и В-клетки подвергают иммортализации хорошо известными методами. Методы иммортализации клеток включают, но не ограничиваются ими, трансфекцию клеток онкогенами, инфицирование клеток онкогенным вирусом,культивирование в условиях отбора на иммортализованные клетки, обработку этих клеток канцерогенными или мутирующими соединениями, слияние этих клеток с иммортализованной клеткой, например, с миеломной клеткой, и инактивацию клеток геном-супрессором опухоли. См. выше, например, HarlowLane. В тех вариантах, в которых используются миеломные клетки, эти миеломные клетки не секретируют полипептиды иммуноглобулина (не-секреторные клеточные линии). После иммортализации и отбора с использованием антибиотиков иммортализованные клетки или супернатанты их культур скринируют с использованием MAdCAM или его части, либо MAdCAM-экспрессирующей клетки. В предпочтительном варианте изобретения предварительный скрининг осуществляют с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) или радиоиммуноанализа (РИА), а предпочтительно ELISA. Пример ELISAскрининга приводится в заявке WO 00/37504, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. В другом варианте изобретения антителопродуцирующие клетки могут быть получены от человека,который страдает аутоиммунным расстройством, или у которого экспрессируются анти-MAdCAM антитела. Клетки, экспрессирующие анти-MAdCAM антитела, могут быть выделены путем забора лейкоцитов и их обработки посредством клеточного сортинга с активацией флуоресценции (FACS) или путем"пэннинга" на планшетах, сенсибилизированных антигеном MAdCAM или его частью. Эти клетки могут быть подвергнуты слиянию с человеческими не-секреторными миеломными клетками с получением человеческих гибридом, экспрессирующих человеческие анти-MAdCAM антитела. Вообще говоря, этот вариант является менее предпочтительным, поскольку есть вероятность, что анти-MAdCAM антитела будут обладать низкой аффинностью по отношению к MAdCAM. Клетки, продуцирующие анти-MAdCAM антитело, например гибридомы, отбирают, клонируют, а затем скринируют на нужные свойства, включая устойчивый рост, продуцирование антител на высоком уровне и другие желаемые свойства, как подробно обсуждается ниже. Гибридомы могут быть культивированы и размножены in vivo у сингенных животных, у животных с отсутствием иммунной системы,например, у бестимусных ("голых") мышей или в клеточной культуре in vitro. Методы отбора, клонирования и размножения гибридом хорошо известны среднему специалисту в данной области. Предпочтительным иммунизированным животным, не являющимся человеком, является животное,у которого экспрессируются гены человеческих иммуноглобулинов; и В-клетки селезенки этого животного подвергают слиянию с миеломной клеточной линией, взятой у животного того же самого вида, не являющегося человеком. Более предпочтительным иммунизированным животным является животноеXENOMOUSE, а миеломной клеточной линией является несекреторная мышиная миелома, такая как миеломная клеточная линия P3-X63-AG8-653 (АТСС). См., например, пример I. Таким образом, в одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к способам получения клеточной линии, которая продуцирует человеческое моноклональное антитело или его фрагмент против MAdCAM, где указанные способы включают: (а) иммунизацию описанного здесь трансгенного животного, не являющегося человеком, антигеном MAdCAM, частью MAdCAM или клеткой или тканью, экспрессирующей MAdCAM; (b) стимуляцию вырабатывания у данного трансгенного животного иммунного ответа против MAdCAM; (с) выделение антитело-продуцирующих клеток из трансгенного животного; (d) иммортализацию этих антитело-продуцирующих клеток; (е) создание отдельных моноклональных популяций иммортализованных антитело-продуцирующих клеток; и (f) скрининг иммортализованных антитело-продуцирующих клеток или супернатантов их культур для идентификации антитела против MAdCAM. В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к гибридомам, которые продуцируют человеческие анти-MAdCAM антитела. В предпочтительном варианте изобретения указанными гибридомами являются мышиные гибридомы, описанные выше. В другом варианте изобретения указанные гибридомы продуцируются животными, не являющимися человеком и мышью, такими как крысы, овцы,свиньи, козы, крупный рогатый скот или лошади. В другом варианте осуществления изобретения указанными гибридомами являются человеческие гибридомы, в которых человеческие несекреторные миеломные клетки слиты с человеческими клетками, экспрессирующими анти-MAdCAM антитело.- 19012872 Нуклеиновые кислоты, векторы, клетки-хозяева и рекомбинантные методы получения антител Нуклеиновые кислоты Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующих антиMAdCAM антитела. В одном из вариантов изобретения, указанная молекула нуклеиновой кислоты кодирует тяжелую и/или легкую цепи иммуноглобулина против MAdCAM. В предпочтительном варианте изобретения одна молекула нуклеиновой кислоты кодирует тяжелую цепь иммуноглобулина противMAdCAM, а другая молекула нуклеиновой кислоты кодирует легкую цепь иммуноглобулина противMAdCAM. В более предпочтительном варианте изобретения кодируемым иммуноглобулином является человеческий иммуноглобулин, предпочтительно человеческий IgG. Указанная кодируемая легкая цепь может быть -цепью или k-цепью, а предпочтительно k-цепью. В предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область легкой цепи, содержит последовательность генов человеческой Vk A2, A3, А 26, В 3,O12 или O18 зародышевой линии или вариант указанной последовательности. В предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, содержит последовательность, происходящую от человеческих генов JK1, JK2, JK3, JK4 ИЛИ JK5. В предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, кодирует не более, чем одиннадцать, а предпочтительно не более, чем шесть, а еще более предпочтительно, не более, чем три аминокислотных замены по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодируемой генами Vk А 2,A3, А 26, В 3, O12 или O18 зародышевой линии. В более предпочтительном варианте изобретения указанной нуклеиновой кислотой, кодирующей легкую цепь, является последовательность зародышевой линии. Настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую от одной до одиннадцати аминокислотных замен по сравнению с последовательностью зародышевой линии, где эти аминокислотные замены идентичны, по сравнению с зародышевой линией, аминокислотным заменам, присутствующим в последовательности VL одного из антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2,6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4mod. Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность одной или нескольких областей CDR любой одной из легких цепей антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2,6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В предпочтительном варианте изобретения указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность всех областей CDR любой одной из легких цепей антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4,9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность одной из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 или 68 или содержит нуклеотидную последовательность одной из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35,39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 или 67. В другом предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность одной или нескольких CDR любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54,58, 62, 66 или 68, или содержит нуклеотидную последовательность одной или нескольких CDR любой изSEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 или 67. В более предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность всех областей CDR любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20,24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 или 68 или содержит нуклеотидную последовательность всех областей CDR любой из SEQ ID N0: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 или 67. Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности VL, описанной выше, а в частности, VL, содержащей аминокислотную последовательность одной из SEQ ID N0: 4, 8, 12, 16, 20,24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 или 68. Настоящее изобретение также относится к нуклеотидной последовательности, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности одной из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57,61, 65 или 67. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей VL,как описано выше, а в частности, с молекулой нуклеиновой кислоты, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24,28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 или 68. Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеино- 20012872 вой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты,содержащей нуклеотидную последовательность одной из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39,43, 47, 53, 57, 61, 65 или 67. Настоящее изобретение также относится к молекуле нуклеиновой кислоты, в которой вариабельную область тяжелой цепи (VH) кодируют гены человеческой VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 или 44. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая VH, также содержит семейство генов JH4 или JH6. В некоторых вариантах изобретения, молекула нуклеиновой кислоты,кодирующая VH, также содержит гены человеческой JH4b или JH6b. В другом варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность, происходящую от человеческого гена D 3-10, 4-23, 5-5, 6-6 или 9-19. В еще более предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая VH, содержит не более, чем пятнадцать, не более, чем шесть или не более, чем три аминокислотных замены по сравнению с последовательностью генов VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30,3-33 или 4-4 человеческой зародышевой линии. В особенно предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая VH, содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену, по сравнению с последовательностью зародышевой линии, где эта аминокислотная замена идентична аминокислотной замене зародышевой линии, присутствующей в последовательности тяжелой цепи одного из антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2,6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В еще более предпочтительном варианте изобретения VH содержит не более чем пятнадцать аминокислотных замен, по сравнению с последовательностью зародышевой линии, где указанные замены идентичны заменам зародышевой линии, присутствующим в последовательности VH одного из антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2,6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В одном из вариантов изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VH антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность одной или нескольких областейCDR тяжелой цепи антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4,9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотные последовательности всех областей CDR тяжелой цепи антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом предпочтительном варианте изобретения, молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотные последовательности одной из последовательностей SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 54, 56, 60 или 64 или содержит нуклеотидную последовательность одной из последовательностей SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21,25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 или 63. В другом предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотные последовательности одной или нескольких областей CDR любой из последовательностей SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14,18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 54, 56, 60 или 64 или содержит нуклеотидную последовательность одной или нескольких областей CDR любой из последовательностей SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33,37, 41, 45, 51, 55, 59 или 63. В предпочтительном варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности всех областей CDR любой из последовательностей SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 54, 56, 60 или 64 или содержит нуклеотидную последовательность всех областей CDR любой из последовательностей SEQ IDNO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 или 63. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую непрерывную область от CDR1 и до CDR3 (включительно) тяжелой или легкой цепи любого из вышеупомянутых антиMAdCAM антител. В другом варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность VH, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична одной из нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотные последовательности VH, описанные непосредственно выше, а в частности, VH, содержащей аминокислотную последовательность одной из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 54, 56, 60 или 64. Настоящее изобретение также относится к нуклеотидной последовательности, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96,97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности одной из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25,29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 или 63. В другом своем варианте молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей VH, является молекула,которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с нуклеотидной последовательностью, кодирующей область VH, описанную выше, а в частности, область VH, содержащую аминокислотную последовательность одной из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 54, 56, 60 или 64. Настоящее- 21012872 изобретение также относится к нуклеотидной последовательности, кодирующей область VH, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность одной из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 или 63. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полноразмерную тяжелую цепь или легкую цепь,либо ту и другую цепи анти-MAdCAM антитела или его вариабельной области, может быть выделена из любого источника, продуцирующего анти-MAdCAM антитело. Методы выделения мРНК, кодирующей антитело, хорошо известны специалистам. См., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1989) . Указанная мРНК может быть использована в целях продуцирования кДНК для проведения полимеразной цепной реакции(ПЦР) или для кДНК-клонирования генов антитела. В одном из вариантов изобретения молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены из гибридомы, экспрессирующей анти-MAdCAM антитело, описанное выше, а предпочтительно, из гибридомы которая имеет, в качестве одного из партнеров по слиянию, клетку трансгенного животного, экспрессирующую гены человеческого иммуноглобулина, такого как животное XENOMOUSE, трансгенная мышь или трансгенное животное, не являющееся человеком и мышью. В другом варианте изобретения, гибридому получают из не-трансгенного животного, не являющегося человеком, которое может быть использовано, например, для продуцирования гуманизированных антител. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полноразмерную тяжелую цепь анти-MAdCAM антитела, может быть сконструирована путем присоединения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полноразмерный вариабельный домен тяжелой цепи или ее антигенсвязывающий домен, к константному домену тяжелой цепи. Аналогичным образом, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь анти-MAdCAM антитела, может быть сконструирована путем присоединения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полноразмерный вариабельный домен легкой цепи или ее антигенсвязывающий домен, к константному домену легкой цепи. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие области VH и VL, могут быть превращены в полноразмерные гены антитела путем их встраивания в экспрессионные векторы, которые уже кодируют константную область тяжелой цепи или константную область легкой цепи, соответственно, так, чтобы в данном векторе, сегмент VH был функционально присоединен к сегменту(ам) константной области тяжелой цепи (СН), а сегмент VL был функционально присоединен к сегменту константной области легкой цепи (CL). Альтернативно, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие цепи VH или VL, превращают в полноразмерные гены антитела путем объединения, например, путем лигирования молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей цепь VH с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей цепь СН, в соответствии со стандартными методами молекулярной биологии. Аналогичный результат может быть достигнут с использованием молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих цепи VL и CL. Последовательности генов константной области тяжелой и легкой цепей человеческого антитела известны специалистам. См., например, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 th Ed., NIH Publ. No. 91-3242 (1991). Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полноразмерные тяжелые цепи и/или легкие цепи, могут быть затем экспрессированы в клетке, в которую они были введены, с последующим выделением анти-MAdCAM антитела. В предпочтительном варианте изобретения нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи, кодирует вариабельную область, состоящую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 54, 56, 60 или 64, а молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область легких цепей, кодирует вариабельную область, состоящую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62,66 или 68. В одном из вариантов изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая либо тяжелую цепь анти-MAdCAM антитела, либо ее антигенсвязывающую часть, или легкую цепь анти-MAdCAM антитела либо ее антигенсвязывающую часть, может быть выделена у животного, не являющегося человеком и мышью, у которого экспрессируются гены человеческого иммуноглобулина, и которое было иммунизовано антигеном MAdCAM. В другом варианте изобретения, молекула нуклеиновой кислоты может быть выделена из клетки, продуцирующей анти-MAdCAM антитело и происходящей от нетрансгенного животного или взятой у человека, у которого продуцируются анти-MAdCAM антитела. мРНК от клеток, продуцирующих анти-MAdCAM антитело, может быть выделена стандартными методами, клонирована и/или амплифицирована с помощью ПЦР и методами конструирования библиотек, а также скринирована в соответствии со стандартными протоколами с получением молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих тяжелые и легкие цепи анти-MAdCAM антитела. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы для рекомбинантной экспрессии больших количеств анти-MAdCAM антител, описанных ниже. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть также использованы для продуцирования химерных антител, одноцепочечных антител, иммуноадгезинов, диантител, мутированных антител и производных антител, подробно описанных ниже. Если молекулы нуклеиновой кислоты происходят от нетрансгенного животного, не являющегося человеком, то такие молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы для гуманизации антитела, как описано ниже.- 22012872 В другом варианте изобретения молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть использованы в качестве зондов или ПЦР-праймеров для специфических последовательностей антител. Так, например, молекула нуклеиновой кислоты в качестве зонда, может быть использована в диагностических методах, а молекула нуклеиновой кислоты в качестве ПЦР-праймера может быть использована для амплификации областей ДНК, которые могут применяться inter alia для выделения нуклеотидных последовательностей в целях продуцирования вариабельных доменов анти-MAdCAM антител. В предпочтительном варианте изобретения молекулами композиции настоящего изобретения являются олигонуклеотиды. В более предпочтительном варианте изобретения такие олигонуклеотиды происходят от высоковариабельных областей тяжелой и легкой цепей представляющего интерес антитела. В еще более предпочтительном варианте изобретения эти олигонуклеотиды кодируют все или часть одной или нескольких CDR. Векторы Настоящее изобретение относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению, кодирующие тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть. Настоящее изобретение также относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению,кодирующие легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть. Настоящее изобретение также относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие гибридные белки, модифицированные антитела, фрагменты антител и их зонды. Для экспрессии антител или фрагментов антител согласно изобретению ДНК, кодирующие неполные или полноразмерные легкие и тяжелые цепи и полученные как описано выше, встраивают в экспрессионные векторы так, чтобы эти гены были функционально присоединены к последовательностям регуляции транскрипции и трансляции. Экспрессионными векторами являются плазмиды, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы (AAV), вирусы растений, такие как вирус мозаики цветной капусты, вирус мозаики табака, космиды, YAC, эписомы, происходящие от EBV и т.п. Ген антитела лигируют в вектор так, чтобы в данном векторе последовательности регуляции транскрипции и трансляции выполняли присущую им функцию регуляции транскрипции и трансляции гена антитела. Экспрессионный вектор и последовательности регуляции экспрессии выбирают так, чтобы они были совместимы с клеткой-хозяином, используемой для экспрессии. Ген легкой цепи антитела и ген тяжелой цепи антитела могут быть встроены в отдельные векторы. В предпочтительном варианте изобретения оба гена встраивают в один и тот же экспрессионный вектор. Эти гены антитела встраивают в экспрессионный вектор стандартными методами (например, путем лигирования комплементарных рестрикционных сайтов с фрагментом гена антитела и с вектором, либо путем лигирования с затуплением концов, если рестрикционные сайты отсутствуют). Подходящим вектором является вектор, кодирующий функционально полноразмерную последовательность СН или CL человеческого иммуноглобулина с соответствующими рестрикционными сайтами,сконструированными так, что любая VH или VL-последовательность может быть легко встроена и экспрессирована как описано выше. В таких векторах сплайсинг обычно происходит между сайтом донорного сплайсинга во встроенной J-области и сайтом акцепторного сплайсинга, находящимся перед человеческим С-доменом, а также в областях сплайсинга, которые находятся в человеческих СН-экзонах. Последовательности полиаденилирования и терминации транскрипции расположены в нативных хромосомных сайтах, находящихся ниже кодирующих областей. Рекомбинантный экспрессионный вектор может также кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела, происходящего от клетки-хозяина. Ген цепи антитела может быть клонирован в вектор так, чтобы сигнальный пептид был присоединен, с сохранением рамки считывания, к амино-концу гена цепи антитела. Таким сигнальным пептидом может быть иммуноглобулиновый сигнальный пептид или гетерологичный сигнальный пептид (то есть, сигнальный пептид, происходящий от белка, не являющегося иммуноглобулином). Помимо генов цепи антитела, рекомбинантные экспрессионные векторы согласно изобретению несут регуляторные последовательности, которые регулируют экспрессию генов цепи антитела в клеткехозяине. Для специалиста в этой области очевидно, что конструирование экспрессионного вектора,включая выбор регуляторных последовательностей, может быть осуществлено в зависимости оттаких факторов, как выбор трансформируемой клетки-хозяина, уровень экспрессии нужного белка и т.п. Предпочтительными регуляторными последовательностями для экспрессии в клетке-хозяине млекопитающего являются вирусные элементы, которые регулируют высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающего, такие как промоторы и/или энхансеры, происходящие от ретровирусных LTR, цитомегаловируса (CMV) (такие, как промотор/энхансер CMV), обезьяньего вируса 40 (SV40) (такие, как промотор/энхансер SV40), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса (AdMLP), промоторы полиомы и сильные промоторы млекопитающих, такие как промоторы нативного иммуноглобулина и актина. Более подробное описание вирусных регуляторных элементов и их последовательностей можно найти, например, в патентах США 5168062, 4510245 и 4968615, каждый из которых вводится в настоящее описание посредством ссылки. Методы экспрессии антител в растениях, включая описание промоторов и векторов, а также трансформация растений, известны специалистам. См., например, патент США 6517529. Методы экспрессии полипептидов в бактериальных клетках или в клетках грибов, на- 23012872 пример, в дрожжевых клетках, также хорошо известны специалистам. Помимо генов цепи антитела и регуляторных последовательностей рекомбинантные экспрессионные векторы согласно изобретению могут содержать дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, ориджин репликации), и селективные маркерные гены. Селективный маркерный ген облегчает отбор клетокхозяев, в которые был встроен данный вектор (см., например, патенты США 4399216, 4634665 и 5179017). Так, например, обычно, селективный маркерный ген сообщает клетке-хозяину, в которую был введен данный вектор, резистентность к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. Предпочтительными селективными маркерными генами являются ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (используемый в dhfrклетках-хозяевах для отбора на метотрексат/амплификации),ген пео (для отбора на G418) и ген глутамат-синтетазы. Не-гибридомные клетки-хозяева и методы рекомбинантного продуцирования белка Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть и/или легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть анти-MAdCAM антитела, и векторы, содержащие эти молекулы нуклеиновой кислоты, могут быть использованы для трансформации подходящих клетокхозяев млекопитающих, растений, бактерий или дрожжей. Такая трансформация может быть осуществлена путем введения полинуклеотидов в клетку-хозяина любым подходящим методом. Методы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны специалистам, и такими методами являются опосредуемая декстраном трансфекция; преципитация фосфатом кальция; опосредуемая полибреном трансфекция, слияние протопластов; электропорация; инкапсуляция полинуклеотида(ов) в липосомы; биобаллистическая инжекция, и прямая микроинжекция ДНК в ядро. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут быть введены в клетки млекопитающих с помощью вирусных векторов. Методы трансформации клеток хорошо известны специалистам. См., например, патенты США 4399216, 4912040, 4740461 и 4959455 (которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки). Методы трансформации клеток растений хорошо известны специалистам, и такими методами являются, например, трансформация, опосредуемая Agrobacterium, биобаллистическая трансформация, прямая инжекция, электропорация и трансформация вирусом. Методы трансформации бактериальных и дрожжевых клеток также хорошо известны специалистам. Клеточные линии млекопитающих, подходящие для экспрессии в качестве хозяев, хорошо известны специалистам, и такими линиями являются многие иммортализованные клеточные линии, имеющиеся в Американской коллекции типовых культур (АТСС). Эти линии включают, inter alia, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки NS0, клетки SP2, клетки НЕК 293T, клетки NIH-3T3, клетки HeLa, клетки почек детеныша хомячка (ВНК), клетки почек обезьяны (COS), клетки человеческой гепатоцеллюлярной карциномы (например, Hep G2), клетки А 549, клетки 3 Т 3 и различные другие клеточные линии. Клетками-хозяевами млекопитающих являются клетки человека, мыши, крысы, собаки, обезьяны, свиньи, козы, коровы, лошади и хомячка. При этом особенно предпочтительно выбирать клеточные линии,которые обеспечивают высокие уровни экспрессии. Другими клеточными линиями, которые могут быть использованы, являются клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9, клетки амфибий, бактериальные клетки, клетки растений и клетки грибов. После введения в клетки-хозяева млекопитающих рекомбинантных экспрессионных векторов, кодирующих тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть и легкую цепь и/или ее антигенсвязывающую часть, эти антитела продуцируют путем культивирования указанных клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для экспрессии такого антитела в клетках-хозяевах, или, более предпочтительно, секреции указанного антитела в культуральную среду, в которой были культивированы эти клетки-хозяева. Антитела могут быть выделены из культуральной среды стандартными методами очистки белков. Растительными клетками-хозяевами являются, например,клетки Nicotiana (табака), Arabidopsis (резушки Таля), ряски, кукурузы, пшеницы, картофеля и т.п. Бактериальными клетками-хозяевами являются E.coli и виды Streptomyces. Дрожжевыми клеткамихозяевами являются Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris. Кроме того, экспрессия антител согласно изобретению (или других происходящих от них молекул) в клеточных линиях-продуцентах может усилена различными известными методами. Так, например, система экспрессии гена глутамин-синтетазы (система GS) наиболее часто используется для повышения уровня экспрессии в определенных условиях. Полное или частичное обсуждение системы GC можно найти в Европейских патентах 0216846, 0256055, 0338841 и 0323997. По всей вероятности, антитела, экспрессируемые различными клеточными линиями или экспрессируемые в трансгенных животных, могут иметь различный характер гликозилирования. Однако, все антитела, кодируемые описанными здесь молекулами нуклеиновой кислоты или содержащие описанные здесь аминокислотные последовательности, являются частью настоящего изобретения, независимо от характера гликозилирования антител. Трансгенные животные и растения Настоящее изобретение также относится к трансгенным животным, не являющимся человеком, и к трансгенным растениям, содержащим одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты согласно изобретению, которые могут быть использованы для продуцирования антител согласно изобретению. Анти- 24012872 тела могут быть продуцированы в тканях или физиологических жидкостях и выделены из таких тканей или физиологических жидкостей, как молоко, кровь или моча коз, коров, лошадей, свиней, крыс, мышей,кроликов, хомячков или других млекопитающих. См., например, патенты США 5827690, 5756687,5750172 и 5741957. Как описано выше, трансгенные животные, не являющиеся человеком, и содержащие локусы человеческого иммуноглобулина, могут быть иммунизованы MAdCAM или его частью. Методы получения антител в растениях описаны, например, в патентах США 6046037 и 5959177, которые вводятся в настоящее описание посредством ссылки. В другом варианте изобретения трансгенные животные, не являющиеся человеком, и трансгенные растения продуцируют путем введения указанному животному или растению одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты согласно изобретению стандартными методами генной инженерии. См. выше, Hogan. Трансгенными клетками, используемыми для создания трансгенного животного, могут быть стволовые эмбриональные клетки, соматические клетки или оплодотворенные яйцеклетки. Трансгенными организмами, не являющимися человеком, могут быть химерные и не-химерные гетерозиготы и нехимерные гомозиготы. См. например, Hogan et al., Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual 2ed., Cold Spring Harbor Press (1999); Jackson et al., Mouse Genetics and Transgenics: A Practical Approach,Oxford University Press (2000); и Pinkert, Transgenic Animal Technology: A Laboratory Handbook, AcademicPress (1999). В другом варианте изобретения трансгенные животные, не являющиеся человеком, могут иметь дизрупцию и замену, которая нацелена на соответствующую мишень, и которая кодирует представляющую интерес тяжелую и/или легкую цепь. В предпочтительном варианте изобретения трансгенные животные или растения содержат и экспрессируют молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют тяжелые и легкие цепи, и которые, при их объединении, специфически связываются с MAdCAM, а предпочтительно, с человеческим MAdCAM. В другом варианте изобретения трансгенные животные или растения содержат молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие модифицированное антитело, такое как одноцепочечное антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело. Анти-MAdCAM антитела могут быть продуцированы у любого трансгенного животного. В предпочтительном варианте изобретения указанными животными, не являющимися человеком, являются мыши, крысы, овцы, свиньи, козы,крупный рогатый скот или лошади. У трансгенных животных, не являющихся человеком, указанные кодируемые полипептиды экспрессируются в крови, молоке, моче, слюне, слезах, слизи и в других физиологических жидкостях. Библиотеки фагового представления Настоящее изобретение относится к способу продуцирования анти-MAdCAM антитела или его антигенсвязывающей части, включающему стадии синтеза библиотеки человеческих антител на фаге; скрининга библиотеки с помощью MAdCAM или его части; выделения фага, который связывается сMAdCAM; и получения антитела из этого фага. Один из методов получения библиотеки антител включает стадии иммунизации животного-хозяина, не являющегося человеком и содержащего локусы человеческого иммуноглобулина, антигеном MAdCAM или его антигенной частью для вырабатывания иммунного ответа; экстрагирования из указанного животного-хозяина клеток, ответственных за продуцирование антител; выделения РНК из экстрагированных клеток; обратной транскрипции РНК с получением кДНК; амплификации кДНК с использованием праймера; и встраивания кДНК в вектор фагового представления так, чтобы в этом фаге экспрессировались данные антитела. Таким образом могут быть получены рекомбинантные анти-MAdCAM антитела согласно изобретению. Рекомбинантные человеческие антитела против MAdCAM согласно изобретению, помимо описанных здесь анти-MAdCAM антител, могут быть выделены путем скрининга рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител, а предпочтительно, библиотеки фагового представления scFv, полученной с использованием кДНК человеческих VL и VH, продуцированных из мРНК, выделенной из человеческих лимфоцитов. Методика получения и скрининга таких библиотек известна специалистам. Существуют коммерчески доступные наборы для генерирования библиотек фагового представления (например, система для фагового представления рекомбинантных антител Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catalog no.27-9400-01; и набор для фагового представления Stratagene SurfZA, catalog no. 240612). Для генерирования и скрининга библиотек представления антител могут быть также применены и другие методы и реагенты (см. например, патент США 5223409; публикации РСТWO 92/18619, WO 91/17271, WO 92/20791, WO 92/15679, WO 93/01288, WO 92/01047, WO 92/09690; Fuchs et al. (1991), Biotechnology 9:1370-1372; Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85 (1992); Huse et al., Science 246:12751281 (1989); McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734 (1993); Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992); Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Gram et al., Proc.Natl.Acad. Sci., USA, 89:3576-3580 (1992); Garrad et al., Biotechnology 9:1373-1377 (1991); Hoogenboom et al.,Nuc. Acid Res. 19:4133-4137 (1991) и Barbas et al., Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 88:7978-7982 (1991). В предпочтительном варианте изобретения для выделения человеческих анти-MAdCAM антител с нужными свойствами, сначала используют описанное здесь человеческое анти-MAdCAM антитело для отбора последовательностей человеческих тяжелых и легких цепей, обладающих аналогичной активностью связывания с MAdCAM, где такой отбор осуществляют методами эпитопного импринтинга, описанными Hoogenboom et al., в публикации заявки РСТWO 93/06213. Библиотеками антител, исполь- 25012872 зуемыми в этих методах, являются, предпочтительно, библиотеки scFy, полученные и скринированные как описано McCafferty et al. в публикации РСТWO 92/01047, и в работах McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); и Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734 (1993). Библиотеки scFv антител, предпочтительно, скринируют с использованием человеческого MAdCAM в качестве антигена. После предварительного отбора человеческих VL- и VH-сегментов проводят эксперименты по"смешиванию и совместимости", в которых различные пары предварительно отобранных VL- и VHсегментов скринируют на связывание с MAdCAM для отбора предпочтительных комбинаций парVL/VH. Кроме того, для улучшения качества антитела, VL- и VH-сегменты предпочтительных парVL/VH могут быть неспецифически мутированы, предпочтительно в области CDR3 VH и/или VL способом, аналогичным соматическому процессу мутации in vivo, ответственному за созревание аффинности антител во время вырабатывания природного иммунного ответа. Такое in vitro созревание аффинности антител может быть осуществлено путем амплификации областей VH и VL с использованием ПЦРпраймеров, комплементарных CDR3 VH или CDR3 VL, соответственно, где указанные праймеры были"пронизаны" произвольной смесью четырех нуклеотидных оснований в определенных положениях, так,чтобы полученные ПЦР-продукты кодировали VL- и VH-сегменты с введенными в них, а именно в ихCDR3-области, VH и/или VL, случайными мутациями. Эти произвольно мутированные VL- и VHсегменты могут быть снова скринированы на связывание с MAdCAM. После скрининга и выделения анти-MAdCAM антитела согласно изобретению из библиотеки представления рекомбинантных иммуноглобулинов, нуклеиновая кислота, кодирующая отобранное антитело,может быть выделена из упаковочного вектора представления (например, из фагового генома) и субклонирована в другие экспрессионные векторы стандартными методами рекомбинантных ДНК. Если это необходимо, то нуклеиновая кислота может быть дополнительно модифицирована для создания других форм антител согласно изобретению, как описано ниже. Для экспрессии рекомбинантного человеческого антитела, выделенного путем скрининга комбинаторной библиотеки, ДНК, кодирующую антитело, клонируют в рекомбинантный экспрессионный вектор и вводят в клетки-хозяева млекопитающих, как описано выше. Переключение классов В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к механизму, благодаря которому класс анти-MAdCAM антитела может быть переключен на другой класс. В одном из аспектов изобретения VLили VH-кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты выделяют хорошо известными методами, так,чтобы она не включала каких-либо нуклеотидных последовательностей, кодирующих CL или СН. Затем эту молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую VL или VH, функционально присоединяют к нуклеотидной последовательности, кодирующей CL или СН молекулы иммуноглобулина другого класса. Это может быть достигнуто с использованием вектора или молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей CLили СН-кодирующие последовательности, описанные выше. Так, например, исходное анти-MAdCAM антитело, которое первоначально имело класс IgM, может быть переключено на класс IgG. Кроме того,переключение классов может применяться для превращения IgG одного подкласса в IgG другого подкласса, например IgG4 в IgG2. Предпочтительный способ продуцирования антитела согласно изобретению, имеющего нужный изотип или подкласс, включает стадии выделения нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь анти-MAdCAM антитела, и нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь анти-MAdCAM антитела; получения вариабельной области тяжелой цепи; лигирования вариабельной области тяжелой цепи с константным доменом тяжелой цепи нужного изотипа; экспрессии легкой цепи и лигированной тяжелой цепи в клетке; и сбора анти-MAdCAM антитела, имеющего нужный изотип. Производные антитела Описанные выше молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы для генерирования производных антител способами и методами, известными среднему специалисту в данной области. Гуманизированные антитела Иммуногенность не-человеческих антител может быть, до некоторой степени, снижена путем применения методов гуманизации, возможно, с использованием соответствующих библиотек представления. Следует отметить, что мышиные антитела или антитела животных других видов могут быть гуманизированы или "примитизированы" хорошо известными методами. См., например, WinterHarris, Immunol.Today, 14:43-46 (1993) и Wright et al., Crit. Reviews in Immunol., 12125-168 (1992). Представляющее интерес антитело может быть сконструировано методами рекомбинантных ДНК для замены СН 1, CH2, CH3,шарнирных доменов и/или каркасного домена соответствующей человеческой последовательностью (см.WO 92/02190 и патенты США 5530101, 5585089, 5693761, 5693792, 5714350 и 5777085). В другом варианте изобретения, не-человеческое анти-MAdCAM антитело может быть гуманизировано путем замены CH1, шарнирного домена, CH2, СН 3, и/или каркасных доменов соответствующей человеческой последовательностью анти-MAdCAM антитела согласно изобретению. Мутированные антитела В другом варианте изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, векторы и клетки-хозяева могут быть использованы для получения мутированных анти-MAdCAM антител. Эти антитела могут быть мутированы в вариабельных доменах тяжелой и/или легкой цепей для изменения связывающих свойств- 26012872 антитела. Так, например, такая мутация может быть сделана в одной или в нескольких CDR-областях для увеличения или снижения Kd антитела против MAdCAM. Методы сайт-направленного мутагенеза хорошо известны специалистам. См. выше, например, Sambrook et al., и Ausubel et al. В предпочтительном варианте изобретения, мутации могут быть введены в вариабельную область анти-MAdCAM антитела в известный аминокислотный остаток, который, по сравнению с остатком в зародышевой линии, необходимо модифицировать. В более предпочтительном варианте изобретения в известные аминокислотные остатки, которые, по сравнению с остатком в зародышевой линии, необходимо модифицировать, вводят одну или несколько мутаций в вариабельную область или область CDR одного из анти-MAdCAM антител 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом варианте изобретения в известные аминокислотные остатки, которые, по сравнению с остатком в зародышевой линии, необходимо модифицировать,вводят одну или несколько мутаций в вариабельную область или область CDR, аминокислотная последовательность которой представлена в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34,36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 или 68, либо нуклеотидная последовательность которой представлена в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47,51, 53, 55, 57, 61, 63, 65 или 67. В другом варианте изобретения молекулы нуклеиновой кислоты имеют мутации в одной или нескольких каркасных областях. Мутация может быть сделана в каркасной области или в константном домене в целях увеличения времени полужизни анти-MAdCAM антитела. См., например, заявку WO 00/09560, опубликованную 24 февраля, 2000, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов изобретения может присутствовать одна, три, пять или десять точковых мутаций, но не более, чем пятнадцать точковых мутаций. Мутация в каркасной области или в константном домене может быть также сделана в целях изменения иммуногенности антитела, в целях введения сайта для ковалентного или нековалентного связывания с другой молекулой, или в целях изменения таких свойств, как фиксация комплемента. Мутации могут быть сделаны в каждой из таких участков, как каркасные области, константный домен и вариабельные области одного мутированного антитела. Альтернативно, мутации могут быть сделаны либо в каркасной области, либо в вариабельных областях, либо в константном домене одного мутированного антитела. В одном из вариантов изобретения мутированное анти-MAdCAM антитело, по сравнению с антиMAdCAM антителом до его мутации, имеет не более, чем пятнадцать аминокислотных замен в любой из областей VH или VL. В более предпочтительном варианте изобретения мутированное анти-MAdCAM антитело, в областях VH или VL имеет не более, чем десять аминокислотных замен, более предпочтительно, не более, чем пять аминокислотных замен, а еще более предпочтительно, не более, чем три аминокислотных замены. В другом варианте изобретения в константных областях присутствует не более,чем пятнадцать аминокислотных замен, более предпочтительно не более, чем десять аминокислотных замен, а еще более предпочтительно не более, чем пять аминокислотных замен. Модифицированные антитела В другом варианте изобретения гибридное антитело или иммуноадгезин могут быть сконструированы так, чтобы они содержали целое анти-MAdCAM антитело или его часть, присоединенные к другому полипептиду. В предпочтительном варианте изобретения к указанному полипептиду присоединены только вариабельные области анти-MAdCAM антитела. В другом предпочтительном варианте изобретения, VH-домен анти-MAdCAM антитела присоединен к первому полипептиду, а VL-домен антиMAdCAM антитела присоединен ко второму полипептиду, который связан с первым полипептидом так,что VH- и VL-домены могут взаимодействовать друг с другом с образованием связывающего сайта антитела. В другом предпочтительном варианте изобретения VH-домен отделен от VL-домена линкером, в результате чего VH- и VL-домены могут взаимодействовать друг с другом (см. ниже раздел "Одноцепочечные антитела"). Затем антитело "VH-линкер-VL" присоединяют к представляющему интерес полипептиду. Такое гибридное антитело может быть использовано для прямой доставки полипептида в клетку или в ткань, экспрессирующую MAdCAM. Указанным полипептидом может быть терапевтическое средство, такое как токсин, фактор роста или другой регуляторный белок, либо указанным полипептидом может быть диагностическое средство, такое как фермент, который может быть легко визуализирован,например, пероксидаза хрена. Кроме того, могут быть сконструированы гибридные антитела, в которых два (или более) одноцепочечных антитела присоединены друг к другу. Это может оказаться полезным,если необходимо создать двухвалентное или поливалентное антитело на одной полипептидной цепи, или если необходимо создать биспецифическое антитело. Для создания одноцепочечного антитела (scFv), VH- и VL-кодирущие фрагменты ДНК функционально присоединяют к другому фрагменту, кодирующему гибкий линкер, например, кодирующему аминокислотную последовательность (Gly4-Ser)3, так, чтобы последовательности VH и VL могли экспрессироваться как непрерывный одноцепочечный белок, имеющий VL- и VH-области, соединенные гибким линкером (см., например, Bird et al., Science 242:423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad.Sci., USA, 85:5879-5883 (1988); McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990). Одноцепочечное антитело может быть одновалентным, если используется только одна область VH или VL; двухвалентным, если- 27012872 используются обе области VH и VL; или поливалентным, если используются более двух областей VH иVL. В другом варианте изобретения другие модифицированные антитела могут быть получены с использованием молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих анти-MAdCAM антитело. Так, например,"каппа-антитела" (Ill et al., Protein Eng. 10:94 9-57 (1997, "миниантитела" (Martin et al., EMBO J. 13:5303-9 (1994, "диантитела" (Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90:6444-6448 (1993 или "янусины" (Janusins) (Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991)Traunecker et al., "Janusins:new molecular design for bispecific reagents", Int. J. Cancer Suppl, 7:51-52 (1992 могут быть получены стандартными методами молекулярной биологии, описанными в настоящей заявке. В другом аспекте изобретения могут быть генерированы химерные и биспецифические антитела. Может быть получено химерное антитело, содержащее CDR и каркасные области от различных антител. В предпочтительном варианте изобретения CDR химерного антитела содержат все CDR вариабельной области легкой цепи или тяжелой цепи человеческого анти-MAdCAM антитела, а каркасные области происходят от одного или нескольких различных антител. В более предпочтительном варианте изобретения, CDR химерного антитела содержат все CDR вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи человеческого анти-MAdCAM антитела. Каркасные области могут происходить от антител животных других видов, а в предпочтительном варианте могут быть гуманизированными. Альтернативно, каркасные области могут происходить от другого человеческого антитела. Может быть генерировано биспецифическое антитело, которое специфически связывается с MAdCAM посредством одного связывающего домена и с другой молекулой посредством второго связывающего домена. Биспецифическое антитело может быть продуцировано методами рекомбинантных ДНК,применяемыми в молекулярной биологии, либо оно может быть физически конъюгировано. Кроме того,может быть генерировано одноцепочечное антитело, содержащее более, чем одну область VH и VL, и специфически связывающееся с MAdCAM и с другой молекулой. Такие биспецифические антитела могут быть получены методами, хорошо известными специалистам, например, в соответствии с пунктами(i) и (ii), см., например, Fanger et al., Immunol. Methods 4:72-81 (1994) и WrightHarris, см. выше, и в соответствии с пунктом (iii), см. например, Traunecker et al., Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992). В предпочтительном варианте изобретения, биспецифическое антитело связывается с MAdCAM и с другой молекулой, экспрессируемыми на высоком уровне в эндотелиальных клетках. В более предпочтительном варианте изобретения, такой другой молекулой является VCAM, ICAM или L-селектин. В различных вариантах изобретения описанные выше модифицированные антитела получают с использованием одной или нескольких вариабельных областей или одной или нескольких областей CDR,происходящих от одного из антител, выбранных из 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1,7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod или 7.26.4-mod. В другом варианте изобретения модифицированные антитела получают с использованием одной или нескольких вариабельных областей или одной или нескольких областей CDR, аминокислотные последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40,42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 или 68, или нуклеотидные последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 51, 53,55, 57, 61, 63, 65 или 67. Дериватизированные и меченные антитела Антитело или его часть согласно изобретению могут быть дериватизированы или присоединены к другой молекуле (например, к другому пептиду или белку). В общих чертах, антитела или их части дериватизируют так, чтобы такая дериватизация или мечение не оказывали негативного влияния на связывание с MAdCAM. В соответствии с этим, антитела или их части согласно изобретению конструируют так,чтобы они включали как интактные, так и модифицированные формы описанных здесь человеческих анти-MAdCAM антител. Так, например, антитело или его часть согласно изобретению могут быть функционально присоединены (путем химического связывания, генетического сцепления, нековалентного связывания или как-либо иначе) к одной или нескольким другим молекулам, таким как другое антитело(например, биспецифическое антитело или диантитело), детектирующий агент, цитотоксический агент,фармацевтическое средство и/или белок или пептид, которые могут опосредовать связывание антитела или его части с другой молекулой (такой как стрептавидиновая коровая область или полигистидиновая метка). Дериватизированное антитело одного типа продуцируют путем перекрестного сшивания двух или более антител (того же самого типа или различных типов, например, для получения биспецифических антител). Подходящими перекрестносшивающими агентами являются агенты, которые представляют собой гетеробифункциональные агенты, имеющие две различных реакционноспособных группы, разделенные соответствующим спейсером (например, м-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимидоэфиром),или гомобифункциональные агенты (например, дисукцинимидилсуберат). Такие линкеры поставляются фирмой Pierce Chemical Company, Rockford, III. Дериватизированным антителом другого типа является меченное антитело. Подходящими детектирующими агентами, с помощью которых может быть дериватизировано антитело или его часть согласно- 28012872 изобретению, являются флуоресцентные соединения, включая флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат,родамин, 5-диметиламин-1-нафталинсульфонилхлорид, фикоэритрин, лантанид-фосфор и т.п. Антитело может быть также помечено ферментами, которые используют для детекции, например, такие как пероксидаза хрена, -галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза, глюкозооксидаза и т.п. Если антитело метят детектируемым ферментом, то его детектируют путем добавления дополнительных реагентов, в присутствии которых данный фермент продуцирует реакционный продукт, который может быть идентифицирован. Так, например, в присутствии фермента пероксидазы хрена добавление пероксида водорода и диаминобензидина приводит к окрашиванию реакционного детектируемого продукта. Антитело может быть также помечено биотином и детектировано путем непрямого измерения уровня связывания с авидином или стрептавидином. Антитело может быть помечено агентом, обладающим магнитными свойствами, таким как гадолиний. Антитело может быть также помечено предварительно определенным полипептидным эпитопом, распознаваемым вторичным репортером (например, двухкомпонентными последовательностями лейциновой молнии, сайтами связывания для "вторых" антител, металл-связывающими доменами, эпитопными метками). В некоторых вариантах изобретения, метки присоединяют посредством спейсерных групп различной длины для уменьшения возможного стерического затруднения. Анти-MAdCAM антитело может быть также помечено радиоактивно меченной аминокислотой. Радиоактивно меченное антитело может быть использовано как в диагностических, так и в терапевтических целях. Так, например, радиоактивно меченное анти-MAdCAM антитело может быть использовано для детекции MAdCAM-экспрессирующих тканей с помощью рентгеновской или другой диагностической аппаратуры. Кроме того, радиоактивно меченное анти-MAdCAM антитело может быть использовано в терапевтических целях в качестве токсина для патологических тканей или MAdCAM-экспрессирующих опухолей. Примерами меток, используемых для полипептидов, являются, но не ограничиваются ими,нижеследующие радиоизотопы или радионуклиды 3 Н, 14 С, 15N, 35S, 90Y, 94Tc, 111In, 125I, 131I. Анти-MAdCAM антитело может быть также дериватизировано химической группой, такой как полиэтиленгликоль (ПЭГ), метильная или этильная группа, или углеводная группа. Эти группы могут быть использованы для улучшения биологических свойств антитела, например, для увеличения его времени полужизни в сыворотке или для повышения уровня связывания с тканью. Эта методика может также применяться к любым антигенсвязывающим фрагментам или к вариантам анти-MAdCAM антител. Фармацевтические композиции и наборы В другом своем аспекте настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим ингибирующее человеческое анти-MAdCAM антитело и к способам лечения индивидуумов такими композициями. В некоторых вариантах изобретения указанным индивидуумом, подвергаемым лечению, является человек. В других вариантах изобретения таким индивидуумом является животное. В некоторых вариантах изобретения таким животным является собака или примат, но не человек. Лечение может предусматривать введение одного или нескольких ингибирующих моноклональных антител против MAdCAM согласно изобретению или их антигенсвязывающих фрагментов, отдельно или вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Ингибирующие анти-MAdCAM антитела согласно изобретению и композиции, содержащие эти антитела, могут быть введены в комбинации с одним или несколькими другими терапевтическими, диагностическими или профилактическими средствами. Такими другими терапевтическими средствами являются противовоспалительные или иммуномодулирующие средства. Такими средствами являются, но не ограничиваются ими, кортикостероиды для местного и перорального введения, такие как преднизолон, метилпрендизолон, NCX-1015 или будезонид; аминосалицилаты, такие как мезалазин, олсалазин, балсалазид или NCX-456; иммуномодуляторы такого класса,как азатиоприн, 6-меркаптопурин, метотрексат, циклоспорин, FK506, IL-10 (илодекакин), IL-11 (опрелевкин), IL-12, антагонисты MIF/CD74, антагонисты CD40, такие как TNX-100/5-D12, антагонистыOX40L, GM-CSF, пимекролимус или рапамицин; средства против TNF такого класса, как инфликсимаб,адалимумаб, CDP-870, онерцепт, этанерцепт; противовоспалительные средства такого класса, как ингибиторы PDE-4 (рофлумиласт и т.п.), ингибиторы ТАСЕ (DPC-333, RDP-58 и т.п.) и ингибиторы ICE (VX740 и т.п.), а также антагонисты рецептора IL-2, такие как даклизумаб; антагонисты селективных адгезивных молекул такого класса, как натализумаб, MLN-02 или аликафорсен, аналгетики такого класса,как, но не ограничивающиеся ими, ингибиторы СОХ-2, такие как рофекоксиб, вальдекоксиб, целекоксиб,модуляторы потенциал-зависимых каналов типа P/Q (2), такие как габапентин и прегабалин, антагонисты рецептора NK-1, модуляторы каннабиноидных рецепторов и агонисты дельта-опиоидных рецепторов, а также антинеопластические, противоопухолевые, антиангиогенные или химиотерапевтические средства. Такие дополнительные средства могут быть включены в одну и ту же композицию, либо они могут быть введены отдельно. В некоторых вариантах изобретения, одно или несколько ингибирующих анти-MAdCAM антител согласно изобретению могут быть использованы в качестве вакцины или в качестве адъювантов для вакцины. В частности, поскольку MAdCAM экспрессируется в лимфоидной ткани,то вакцинные антигены могут быть преимущественно доставлены в лимфоидную ткань путем их конъюгирования с анти-MAdCAM антителом согласно изобретению. Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемый носитель" означает любой и все рас- 29012872 творители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические агенты, агенты, усиливающие или замедляющие абсорбцию и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Некоторыми примерами фармацевтически приемлемых носителей являются вода,физиологический раствор, забуференный фосфатом физиологический раствор, ацетатный буфер с хлоридом натрия, декстроза, глицерин, полиэтиленгликоль, этанол и т.п., а также их комбинации. Во многих случаях, в композицию предпочтительно включать изотонические агенты, например сахара, полиспирты,такие как маннит и сорбит, или хлорид натрия. Другими примерами физиологически приемлемых веществ являются поверхностно-активные вещества, смачивающие агенты или небольшие количества добавок, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые увеличивают срок хранения или повышают эффективность данного антитела. Композиции согласно изобретению могут быть приготовлены в различных формах, например, в жидкой, полутвердой или в твердой лекарственных формах, таких как жидкие растворы (например, растворы для инъекций и инфузий), дисперсии или суспензии, таблетки, драже, лиофилизованный осадок,сухие порошки, липосомы и суппозитории. Предпочтительная форма зависит от способа введения и от терапевтического применения. Типичные предпочтительные композиции приготавливают в форме растворов для инъекций или вливаний, таких как композиции, аналогичные композициям, используемым для пассивной иммунизации человека. Предпочтительным способом введения является парентеральное(например, внутривенное, подкожное, внутрибрюшинное, внутримышечное, внутрикожное) введение. В предпочтительном варианте изобретения, указанное антитело вводят путем внутривенной инфузии или инъекции. В другом предпочтительном варианте изобретения, указанное антитело вводят путем внутримышечной, внутрикожной или подкожной инъекции. Терапевтические композиции должны быть стерильными и стабильными в условиях их получения и хранения. Такая композиция может быть приготовлена в виде раствора, лиофилизованного осадка, сухого порошка, микроэмульсии, дисперсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для приготовления лекарственного средства высокой концентрации. Стерильные растворы для инъекций могут быть получены путем включения анти-MAdCAM антитела в требуемом количестве в соответствующий растворитель вместе с одним из перечисленных выше ингредиентов или с их комбинацией, если это необходимо, и с последующей стерилизацией. В случае стерильных порошков, используемых для приготовления стерильных растворов для инъекций, предпочтительными методами такого приготовления является вакуумная сушка и лиофилизация с получением порошка, содержащего активный ингредиент и любой другой нужный ингредиент, из предварительно стерилизованного раствора. В общих чертах,дисперсии получают путем включения активного соединения в стерильный носитель, содержащий основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из числа вышеперечисленных ингредиентов. Нужные свойства раствора можно поддерживать, например с использованием поверхностноактивных веществ и получением частиц нужного размера в случае дисперсии, и с использованием поверхностно-активных веществ, фосфолипидов и полимеров. Пролонгированная абсорбция инъецируемых композиций может быть достигнута путем включения в данную композицию агента, замедляющего абсорбцию, например, моностеаратных солей, полимерных материалов, масел и желатина. Антитела согласно изобретению могут быть введены различными известными способами, хотя для многих терапевтических применений, предпочтительным путем/способом введения является подкожная,внутримышечная, внутрикожная или внутривенная инфузия. Как очевидно для специалистов в данной области, такой путь и/или способ введения варьируется в зависимости от желаемых результатов. В некоторых вариантах изобретения, композиции антител могут быть приготовлены в комбинации с носителем, который будет защищать антитело от быстрого высвобождения, и такими композициями являются препараты с регулируемым высвобождением, включая имплантаты, чрезкожные пластыри и микроинкапсулированные системы для доставки. При этом могут быть использованы биологически разлагаемые биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие методы получения таких композиций запатентованы или, по существу, известны специалистам. См., например, Sustained and ControlledRelease Drug Delivery Systems (J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York 1978). В некоторых вариантах изобретения анти-MAdCAM антитело согласно изобретению может быть введено перорально, например, вместе с инертным разбавителем или с хорошо усваиваемым пищевым наполнителем. Соединение (и другие ингредиенты, если это необходимо) может быть также заключено в твердую или мягкую желатиновую капсулу, спрессовано в таблетки или введено непосредственно в пищу индивидуума. Для перорального терапевтического применения, анти-MAdCAM антитела могут быть введены вместе с наполнителями, и могут быть использованы в форме таблеток для проглатывания, таблеток для растворения в щечном кармане, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. Для введения соединения согласно изобретению не-парентеральным способом, может оказаться необходимым покрытие данного соединения материалом, предупреждающим его инактивацию, или введение данного соединения вместе с указанным материалом. Композиции согласно изобретению могут включать "терапевтически эффективное количество" или"профилактически эффективное количество" антитела или его антигенсвязывающей части согласно изо- 30
МПК / Метки
МПК: C07K 16/28, A61P 43/00
Метки: антитела, madcam, против
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-12872-antitela-protiv-madcam.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антитела против madcam</a>
Ингибиторы ароматазы и моноклональные антитела против her2 как противоопухолевые агенты
Номер патента: 5931
Опубликовано: 25.08.2005
Авторы: Пишителли Габриэлла, Массимини Джорджо, Пурандаре Дайнеш
МПК: A61K 39/395, A61P 35/00
Метки: ароматазы, против, противоопухолевые, моноклональные, ингибиторы, агенты, антитела
Формула / Реферат:
1. Применение ингибитора ароматазы для производства фармацевтической композиции для лечения гормонзависимого нарушения, характеризуемого сверхэкспрессией HER2. 2. Применение по п.1, где нарушение представляет собой рак молочной железы, шейки матки, яичников и эндометрия или эндометриоз. 3. Применение по п.2, где нарушение представляет собой рак молочной железы. 4. Применение по п.1, где ингибитор ароматазы выбран из эксеместана,...
Антитела против рецептора интерферона-альфа/бета
Номер патента: 2543
Опубликовано: 27.06.2002
Авторы: Новик Даниела, Рубинштейн Менахем
МПК: C07K 16/28, C12N 15/13, A61K 39/395...
Метки: антитела, против, рецептора
Формула / Реферат:
1. Антитело, способное связываться с рецептором IFN-a/b и обеспечивающее более высокий антивирусный блокирующий титр против IFN-a, чем против IFN-b, отличающееся тем, что оно не является поликлональным антителом, или его Fаb-фрагменты. 2. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что оно представляет собой моноклональное антитело. 3. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что оно представляет собой химерное антитело. 4. Антитело по п. 1, отличающееся...
Fab-фрагменты моноклонального антитела человека, направленные против гликопротеина е2 hcv и обладающие нейтрализующей активностью in vitro
Номер патента: 9861
Опубликовано: 28.04.2008
Автор: Буриони Роберто
МПК: G01N 33/576, C07K 16/42, C07K 16/10...
Метки: человека, направленные, нейтрализующей, антитела, vitro, против, гликопротеина, моноклонального, активностью, fab-фрагменты, обладающие
Формула / Реферат:
1. Применение человеческого антитела или его функциональных фрагментов, распознающих эпитоп белка Е2 вируса HCV, распознаваемый Fab-фрагментами е137 и е301 человеческого моноклонального антитела и обладающий нейтрализующей активностью in vivo, для получения: а) лекарственного средства для терапии против вируса HCV или б) профилактического средства в виде препаратов для местного применения с целью ингибирования передачи вируса субъектам при...
Антитела против m-csf
Номер патента: 11669
Опубликовано: 28.04.2009
Авторы: Девалараджа Мадхав Нарасимха, Лоу Джозеф Эдвин, Мобли Джеймс Лесли, Хаак-Френдшо Мэри, Фолтц Ян, Бедиан Вахе, Келлерманн Зирид-Аймее
МПК: A61P 43/00, C07K 16/00, C12N 15/00...
Метки: против, антитела, m-csf
Формула / Реферат:
1. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые специфически связываются с M-CSF, которые содержат a) тяжелую цепь, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser,...
Антитела против vla-1
Номер патента: 6705
Опубликовано: 24.02.2006
Авторы: Карпусас Майкл, Гарбер Эллен А., Салдана Хосе В., Лайн Пол Д.
МПК: A61K 39/395, C07K 16/24, C07H 21/04...
Метки: антитела, vla-1, против
Формула / Реферат:
1. Антитело против VLA-1, в котором определяющие комплементарность области тяжелой цепи определяются аминокислотными остатками 31-35, 50-65 и 98-107 последовательности SEQ ID NO: 2 (нумерация по Кабату). 2. Антитело по п.1, которое включает по крайней мере один из следующих остатков в своей тяжелой цепи: V12, F29, A49, T93 и R94. 3. Антитело против VLA-1, в котором определяющие комплементарность области легкой цепи определяются аминокислотными...
Предыдущий патент: Матирующее вещество для порошкового покрытия, включающее сложный эфирамидный продукт конденсации
Следующий патент: 6,6-бициклические кольцевые замещенные гетеробициклические ингибиторы протеинкиназ
Случайный патент: Вытяжной колпак, сборочный комплект для вытяжного колпака и способ сборки вытяжного колпака