Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки
Формула / Реферат
1. Лекарственный гибрид, имеющий формулу
или
где X представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению к первой мишени;
Y представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину;
Z представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению ко второй мишени;
а, b, с и d независимо представляют собой полипептид, содержащий от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков, или отсутствуют;
n1 означает от 1 до приблизительно 10;
n2 означает от 1 до приблизительно 10 и
n3 означает от 0 до приблизительно 10,
при условии, что когда n1 и n2, оба, означают 1 и n3 означает 0, тогда X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; где указанный лекарственный гибрид имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного полипептидного лекарства X.
2. Лекарственный гибрид по п.1, где n1 и n3, оба, означают 1 и n2 означает от 2 до приблизительно 10.
3. Лекарственный гибрид по п.1, где Y содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26.
4. Лекарственный гибрид по п.1, где Y содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
5. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой IL-1ra или функциональный вариант
IL-1ra.
6. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой аналгезирующий агент, противораковый агент, гормон или противомикробный полипептид или пептид.
7. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой иммуносупрессорный агент, противовирусный агент, антибиотик, противовоспалительный агент, цитотоксин или цитотоксический агент.
8. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой ингибитор протеазы.
9. Лекарственный гибрид, содержащий группировки X' и Y', где
X' представляет собой полипептидное лекарство при условии, что X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; и
Y' представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину; где указанный лекарственный гибрид имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного полипептидного лекарства.
10. Лекарственный гибрид по п.9, где X' расположен на аминоконце от Y'.
11. Лекарственный гибрид по п.9, где Y' расположен на аминоконце относительно X'.
12. Лекарственный гибрид по п.9, где указанные VH и VL обладают специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину человека.
13. Лекарственный гибрид по п.12, где Y' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13,
SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26.
14. Лекарственный гибрид по п.12, где Y' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19,
SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
15. Лекарственный гибрид по п.9, где X' представляет собой IL-1ra или функциональный вариант IL-1ra.
16. Лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое ковалентно связано с указанным VH или VL; где указанный лекарственный конъюгат не является одной непрерывной полипептидной цепью и указанный лекарственный конъюгат имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного полипептидного лекарства при условии, что указанное лекарство не содержит один вариабельный домен антитела или белковый структурный каркас, содержащий трансплантированные области, определяющие комплементарность антитела (CDR).
17. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарственный конъюгат содержит один VH.
18. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарственный конъюгат содержит один VL.
19. Лекарственный конъюгат по п.16, где указанное лекарство связано ковалентно с указанным VH или VL через линкерную группировку.
20. Лекарственный конъюгат по п.16, где два или более различных лекарств ковалентно связаны с указанным VH или VL.
21. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой полипептид.
22. Лекарственный конъюгат по п.21, где указанный полипептид представляет собой IL-1ra или функциональный вариант IL-1ra.
23. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой аналгезирующий агент, противораковый агент, гормон или противомикробный полипептид или пептид.
24. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой иммуносупрессорный агент, противовирусный агент, антибиотик, противовоспалительный агент, цитотоксин или цитотоксический агент, антиметаболит, алкилирующий агент, антациклин или радионуклид.
25. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой ингибитор протеазы.
26. Лекарственный конъюгат по п.16, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
27. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая лекарственный гибрид по п.1 или 9.
28. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.27.
29. Клетка-хозяин, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.27.
30. Способ получения лекарственного гибрида, при котором поддерживают клетку-хозяина по п.29 в условиях, подходящих для экспрессии указанной рекомбинантной нуклеиновой кислоты, в результате чего получают лекарственный гибрид.
31. Фармацевтическая композиция, содержащая лекарственный гибрид по п.1 или 9 и физиологически приемлемый носитель.
32. Фармацевтическая композиция, содержащая лекарственный конъюгат по п.16 и физиологически приемлемый носитель.
33. Способ лечения индивидуума, имеющего воспалительное заболевание, при котором вводят указанному индивидууму терапевтически эффективное количество лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.5, 15 и 22.
34. Способ по п.33, где указанное воспалительное заболевание представляет собой артрит.
35. Применение лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.3, 4, 13, 14 и 26 в терапии, диагностике или профилактике.
36. Применение лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.5, 15 ш 22 в терапии, диагностике или профилактике.
37. Применение лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.5, 15 и 22 для изготовления лекарственного препарата для лечения воспалительного заболевания.
38. Применение по п.37, где указанное воспалительное заболевание представляет собой артрит.
39. Нековалентный лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое нековалентно связано с указанным VH или VL, где указанный нековалентный лекарственный конъюгат имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного лекарства, при условии, что указанное лекарство не содержит один вариабельный домен антитела или белковый структурный каркас, содержащий трансплантированные области, определяющие комплементарность антитела (CDR).
40. Нековалентный лекарственный конъюгат по п.39, где указанный VH или VL и указанное лекарство нековалентно связаны через комплементарных связывающих партнеров.
41. Нековалентный лекарственный конъюгат по п.40, где указанные комплементарные связывающие партнеры представляют собой биотин и авидин или биотин и стрептавидин.
42. Применение полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию, в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
43. Применение полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию, в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
44. Применение полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию, в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo и уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
45. Применение по любому из пп.42-44, где лекарственный препарат содержит лекарственную композицию, в которой лекарство связано ковалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
46. Применение по п.45, где лекарственная композиция представляет собой лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат.
47. Применение по любому из пп.42-44, где лекарственный препарат содержит лекарственную композицию, в которой лекарство связано нековалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
48. Применение по п.47, где лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
49. Применение по любому из пп.42-48, где указанная полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
50. Применение по п.49, где указанная полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
51. Применение по любому из пп.42-50, где лекарственный препарат содержит лекарственную композицию, которая имеет большую активность, чем указанное лекарство.
52. Способ увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, при котором связывают лекарство с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в результате чего получают лекарственную композицию, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно указанного лекарства и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
53. Способ уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, при котором связывают лекарство с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в результате чего получают лекарственную композицию, где указанная лекарственная композиция является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
54. Способ увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo и уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, при котором связывают лекарство с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в результате чего получают лекарственную композицию, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно указанного лекарства, является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
55. Способ по любому из пп.52-54, при котором указанное лекарство ковалентно связывают с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
56. Способ по п.55, где лекарственная композиция представляет собой лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат.
57. Способ по любому из пп.52-54, при котором указанное лекарство нековалентно связывают с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
58. Способ по п.57, где лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
59. Способ по любому из пп.52-58, при котором еще отбирают указанную полипептидсвязывающую группировку из одного или более полипептидов, где выбранная полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, с KD по меньшей мере приблизительно 5 мМ.
60. Способ по любому из пп.52-59, где указанная полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
61. Способ по п.60, где указанная полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
62. Способ по любому из пп.52-61, где лекарственная композиция имеет большую активность, чем указанное лекарство.
63. Лекарственная композиция, содержащая лекарство, которое связано с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно лекарства и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности лекарства.
64. Лекарственная композиция, содержащая лекарство, которое связано с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, котоЁыщ увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, где указанная лекарственная композиция является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
65. Лекарственная композиция, содержащая лекарство, которое связано с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно указанного лекарства, является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
66. Лекарственная композиция по любому из пп.63-65, где лекарство связано ковалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
67. Лекарственная композиция по п.66, где указанная лекарственная композиция представляет собой лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат.
68. Лекарственная композиция по любому из пп.63-65, где лекарство связано нековалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
69. Лекарственная композиция по п.68, где указанная лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
70. Лекарственная композиция по любому из пп.63-69, где указанная полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
71. Лекарственная композиция по п.70, где указанная полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
72. Лекарственная композиция по любому из пп.63-71, где лекарственная композиция имеет большую активность, чем указанное лекарство.
73. Лекарственный гибрид по п.1, где X выбран из группы, состоящей из антиметаболита, полипептидного токсина, полипептидного агониста, активатора, стимулятора секреции, антагониста, ингибитора, фактора роста кератиноцитов, интерферона, эритропоэтина, протеазы, эластазы, аналога LHRH, агониста LHRH, антагониста LHRH, агониста опиоидных рецепторов, кальцитонина, аналога кальцитонина, антидиуретического гормона, антагониста окситоцина, вазоактивного интестинального пептида, ингибитора тромбина, фактора Виллебранда, поверхностно-активного вещества, яда улитки, цитокина, фактора роста, растворимого участка рецептора цитокина, растворимого участка рецептора фактора роста, растворимого участка рецептора гормона, пептидов и полипептидов, которые имеют противораковые активности, пептидов и полипептидов, которые имеют противовирусную активность, антагониста рецептора, агониста рецептора, миметика хемокина, ингибитора клеточных взаимодействий адгезивных молекул, ингибитора интегрина, белка, инактивирующего рибосомы, ингибитора матриксных металлопротеиназ.
74. Лекарственный гибрид по п.1, где указанная первая мишень выбрана из группы, включающей АроЕ, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, СЕА, CD40, CD40 лиганд, CD56, CD38, CD138, EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAPa, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (CX3C), GDNF, G-CSF, GM-CSF, GF-b1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-g, IGF-I, IGF-II, IL-1a, IL-1b, IL-1 рецептор, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.), IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18 (IGIF), ингибин a, ингибин b, IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), МСР-1 (MCAF), МСР-2, МСР-3, МСР-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1a, MIP-1b, MIP-3a, MIP-3b, MIP-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртурин (Neurturin), фактор роста нервов, b-NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-ВВ, PF-4, RANTES, SDF1a, SDF1b, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-a, TGF-b, TGF-b2, TGF-b3, фактор некроза опухолей (TNF), TNF-a, TNF-b, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1, TPO, VEGF, VEGF A, VEGF В, VEGF С, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3, GCP-2, GRO/MGSA, GRO-b, GRO-g, HCC1, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4.
75. Лекарственный гибрид по п.1, где указанная первая мишень представляет собой антиген CD, цитокин, цитокиновый рецептор, адгезивную молекулу, костимулирующую молекулу, фактор роста или рецептор фактора роста.
76. Лекарственный гибрид по п.9, где X' выбран из группы, состоящей из иммуносупрессорного агента, противовирусного агента, антибиотика, противовоспалительного агента, цитотоксина, цитотоксического агента, антиметаболита, ингибитора протеаз, аналгезирующего агента, полипептидного токсина, полипептидного агониста, активатора, стимулятора секреции, антагониста, ингибитора, гормона, фактора роста кератиноцитов, интерферона, эритропоэтина, протеазы, эластазы, аналога LHRH, агониста LHRH, антагониста LHRH, агониста опиоидных рецепторов, кальцитонина, аналога кальцитонина, антидиуретического гормона, антагониста окситоцина, вазоактивного интестинального пептида, ингибитора тромбина, фактора Виллебранда, поверхностно-активного вещества, яда улитки, цитокина, фактора роста, растворимого участка рецептора цитокина, растворимого участка рецептора фактора роста, растворимого участка рецептора гормона, пептидов и полипептидов, которые имеют противораковые активности, пептидов и полипептидов, которые имеют противовирусную активность, антимикробного средства, антагониста рецептора, миметика хемокина, ингибитора клеточных взаимодействий адгезивных молекул, ингибитора интегрина, белка, инактивирующего рибосомы, ингибитора матриксных металлопротеиназ, противовирусного пептида или полипептида.
77. Лекарственный гибрид по п.9, где указанное полипептидное лекарство связывает мишень, выбранную из группы, включающей ApoE, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, СЕА, CD40, CD40 лиганд, CD56, CD38, CD138, EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAPa, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (СХ3С), GDNF, G-CSF,
GM-CSF, GF-b1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-g, IGF-I, IGF-II, IL-1a, IL-1b, IL-1 рецептор, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.), IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18 (IGIF), ингибин a, ингибин b, IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), МСР-1 (MCAF), МСР-2, МСР-3, МСР-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1a, MIP-1b, MIP-3a, MIP-3b, MIP-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртуЁшэ (Neurturin), фактор роста нервов, b-NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PF-4, RANTES, SDF1a, SDF1b, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-a, TGF-b,
TGF-b2, TGF-b3, фактор некроза опухолей (TNF), TNF-a, TNF-b, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1, TPO, VEGF, VEGF A, VEGF B, VEGF C, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3, GCP-2, GRO/MGSA, GRO-b, GRO-g, HCC1, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4.
78. Лекарственный гибрид по п.9, где указанное полипептидное лекарство связывает антиген CD, цитокин, цитокиновый рецептор, адгезивную молекулу, костимулирующую молекулу, фактор роста или рецептор фактора роста.
79. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство выбрано из группы, состоящей из полипептидного токсина, полипептидного агониста, активатора, стимулятора секреции, антагониста, ингибитора, фактора роста кератиноцитов, интерферона, эритропоэтина, протеазы, эластазы, аналога LHRH, агониста LHRH, антагониста LHRH, агониста опиоидных рецепторов, кальцитонина, аналога кальцитонина, антидиуретического гормона, антагониста окситоцина, вазоактивного интестинального пептида, ингибитора тромбина, фактора Виллебранда, поверхностно-активного вещества, яда улитки, цитокина, фактора роста, растворимого участка рецептора цитокина, растворимого участка рецептора фактора роста, растворимого участка рецептора гормона, пептидов и полипептидов, которые имеют противовирусную активность, антагониста рецептора, миметика хемокина, ингибитора клеточных взаимодействий адгезивных молекул, ингибитора интегрина, белка, инактивирующего рибосомы, ингибитора матриксных металлопротеиназ, противовирусного пептида или полипептида.
80. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство связывает мишень, выбранную из группы, включающей АроЕ, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, СЕА, CD40, CD40 лиганд, CD56, CD38, CD138, EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAPa, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (СХ3С), GDNF, G-CSF, GM-CSF, GF-b1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-g, IGF-I, IGF-II, IL-1a, IL-1b, IL-1 рецептор, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.), IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18 (IGIF), ингибин a, ингибин b, IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), МСР-1 (MCAF), МСР-2, МСР-3, МСР-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1a, MIP-1b, MIP-3a, MIP-3b, MIP-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртурин (Neurturin), фактор роста нервов, b-NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PF-4, RANTES, SDF1a, SDF1b, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-a, TGF-b, TGF-b2, TGF-b3, фактор некроза опухолей (TNF), TNF-a, TNF-b, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1, TPO, VEGF, VEGF A, VEGF B, VEGF C, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3, GCP-2, GRO/MGSA, GRO-b, GRO-g, HCCl, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4.
81. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство связывает антиген CD, цитокин, цитокиновый рецептор, адгезивную молекулу, костимулирующую молекулу, фактор роста или рецептор фактора роста.
82. Лекарственный гибрид по п.1, где X выбран из группы, включающей ApoE, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, СЕА, CD40, лиганд CD40, CD56, CD38, CD138, EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAPa, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (СХ3С), GDNF, G-CSF, GM-CSF, GF-b1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-g, IGF-I, IGF-II, IL-1a, IL-1b, рецептор IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.),
IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18 (IGIF), ингибин a, ингибин b, IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), МСР-1 (MCAF), МСР-2, МСР-3, МСР-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1a, MIP-1b, MIP-3a, MIP-3b, MIP-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртурин (Neurturin), фактор роста нервов, b-NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PF-4, RANTES, SDF1a, SDF1b, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-a, TGF-b, TGF-b2, TGF-b3, фактор некроза опухолей (TNF), TNF-a, TNF-b, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1, TPO, VEGF, VEGF A, VEGF В, VEGF С, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3, GCP-2, GRO/MGSA, GRO-b, GRO-g, HCCl, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4.
83. Лекарственный гибрид по п.9, где указанное полипептидное лекарство выбрано из группы, включающей ApoE, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, СЕА, CD40, лиганд CD40, CD56, CD38, CD138, EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAPa, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (СХ3С), GDNF, G-CSF, GM-CSF, GF-b1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-g, IGF-I, IGF-II, IL-1a, IL-1b, рецептор IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, I
L-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.), IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18 (IGIF), ингибин a, ингибин b, IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), МСР-1 (MCAF), МСР-2, МСР-3, МСР-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1a, MIP-1b, MIP-3a, MIP-3b, MIP-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртурин (Neurturin), фактор роста нервов,
b-NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-АВ, PDGF-BB, PF-4, RANTES, SDF1a, SDF1b, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-a, TGF-b, TGF-b2, TGF-b3, фактор некроза опухолей (TNF), TNF-a, TNF-b, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1, TPO, VEGF, VEGF A, VEGF B, VEGF C, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3,
GCP-2, GRO/MGSA, GRO-b, GRO-g, HCC1, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4.
84. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство выбрано из группы, включающей АроЕ, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, CEA, CD40, лиганд CD40, CD56, CD38, CD138, EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAPa, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (СХ3С), GDNF, G-CSF, GM-CSF, GF-b1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-g, IGF-I, IGF-II, IL-1a, IL-1b, рецептор IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.), IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18 (IGIF), ингибин a, ингибин b, IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MCP-1 (MCAF), MCP-2, MCP-3, MCP-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1a, MIP-1b, MIP-3a, MIP-3b, MIP-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртурин (Neurturin), фактор роста нервов, b-NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-ВВ, PF-4, RANTES, SDF1a, SDF1b, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-a, TGF-b, TGF-b2, TGF-b3, фактор некроза опухолей (TNF), TNF-a, TNF-b, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1, TPO, VEGF, VEGF A, VEGF B, VEGF C, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3, GCP-2, GRO/MGSA, GRO-b, GRO-g, HCCl, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4.
85. Лекарственный гибрид по п.1, где Y содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24,
SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26.
86. Лекарственный гибрид по п.1, где Y содержит аминокислотную последовательность, которая
по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21,
SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
87. Лекарственный гибрид по п.12, где Y' содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26.
88. Лекарственный гибрид по п.12, где Y' содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21,
SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
89. Лекарственный конъюгат по п.16, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15,
SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,
SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
90. Лекарственный конъюгат по п.39, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15,
SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23.
91. Лекарственный конъюгат по п.90, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 16,
SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и
SEQ ID NO: 23.
92. Применение лекарственного гибрида по п.1 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
93. Применение лекарственного гибрида по п.9 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
94. Применение лекарственного конъюгата по п.16 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
95. Применение нековалентного лекарственного конъюгата по п.39 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
Текст
012622 Родственные заявки Эта заявка основана на предварительной заявке на патент США 60/632361, поданной 2 декабря 2004 г., и на предварительной заявке на патент США 60/576271, поданной 1 июня 2004 г. Идеи вышеупомянутых заявок целиком включены в данное описание путем ссылки. Предшествующий уровень техники Многие лекарства, которые обладают активностями, которые могли бы быть полезны для терапевтических и/или диагностических целей, имеют ограниченное значение, так как при введении они быстро выводятся из организма. Например, многие полипептиды, которые имеют терапевтически полезные активности, быстро выводятся из кровотока через почки. Соответственно, для достижения желаемого терапевтического эффекта нужно вводить большую дозу. Существует потребность в улучшенных терапевтических и диагностических агентах, которые имеют улучшенные фармакокинетические свойства. Полипептиды, которые связывают сывороточный альбумин, известны в данной области (см., например ЕР 0486525 В 1 (Cemu Bioteknik АВ); US 6267964 B1 (Nygren et al.); WO 04/001064 A2 (Dyax, Corp.);WO 02/076489 A1 (Dyax, Corp.); WO 01/45746 (Genentech, Inc Краткое изложение сущности изобретения Изобретение относится к лекарственным композициям (например, лекарственным конъюгатам, нековалентным лекарственным конъюгатам, лекарственным гибридам), которые имеют улучшенные периоды полувыведения из сыворотки. В одном аспекте изобретение представляет собой лекарственный гибрид, представляющий собой непрерывную полипептидную цепь, имеющую формулу или где X представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению к первой мишени;Y представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Vl), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину;Z представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению ко второй мишени; а, b, с и d, каждый независимо, отсутствуют или включают от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков;n3 означает от 0 до приблизительно 10,при условии, что когда n1 и n2 оба означают 1, и n3 означает ноль, тогда X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела. В некоторых воплощениях Y содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23. В конкретных воплощениях X представляет собой IL-1ra или функциональный вариант IL-1ra. В другом аспекте лекарственный гибрид содержит непрерывную полипептидную цепь, содержащую группировки X' и Y', гдеX' представляет собой полипептидное лекарство при условии, что X' не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; иY' представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В некоторых воплощениях Y' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12,SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 иIL-1ra. В другом аспекте изобретение представляет собой лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL),который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство,-1 012622 которое ковалентно связано с указанным VH или VL. В некоторых воплощениях вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы,состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23. В конкретных воплощениях лекарство представляет собой IL-1ra или функциональный вариант IL-1ra. В другом аспекте изобретение представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое нековалентно связано с указанным VH или VL. В некоторых воплощениях вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13,SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17,SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23. В изобретении также предложены рекомбинантные нуклеиновые кислоты и конструкции, которые кодируют лекарственные гибриды, раскрытые в данном описании, и клетки-хозяева, которые содержат рекомбинантные нуклеиновые кислоты и/или конструкции. В изобретении дополнительно предложен способ продуцирования лекарственного гибрида, включающий поддержание клетки-хозяина, которая содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту и/или конструкцию, кодирующую лекарственный гибрид, раскрытый в данном описании, в условиях, подходящих для экспрессии указанной рекомбинантной нуклеиновой кислоты, в соответствии с которым продуцируют лекарственный гибрид. В изобретении также предложены композиции (например, фармацевтические композиции), содержащие лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению. В изобретении также предложен способ лечения индивидуума, имеющего заболевание или расстройство, например такое, которое раскрыто в данном описании, включающий введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) по изобретению. В некоторых воплощениях заболевание или расстройство представляет собой воспалительное заболевание, такое как артрит (например, ревматоидный артрит). В изобретении также предложено применение лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) по изобретению для изготовления лекарственного препарата для лечения заболевания или расстройства, такого как воспалительное заболевание (например, артрит (например, ревматоидный артрит. Изобретение также относится к лекарственной композиции (например, лекарственному конъюгату, нековалентному лекарственному конъюгату, лекарственному гибриду), как раскрыто в данном описании, для применения в терапии, диагностике или профилактике. Краткое описание графических материалов На фиг. 1 А представлено выравнивание аминокислотных последовательностей трех V, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином мыши (MSA). Выровненные аминокислотные последовательности происходят из V, обозначенных MSA16, который также обозначен как DOM7m-16(SEQ ID NO: 1), MSA12, который также обозначен как DOM7m-12 (SEQ ID NO: 2), и MSA 26, который также обозначен как DOM7m-26 (SEQ ID NO: 3). На фиг. 1 Б представлено выравнивание аминокислотных последовательностей шести V,выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином крысы (RSA). Выровненные аминокислотные последовательности происходят из V, обозначенных DOM7r-1 (SEQ ID NO: 4), DOM7r-3DOM7r-8 (SEQ ID NO: 9). На фиг. 1B представлено выравнивание аминокислотных последовательностей шести V, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином человека (HSA). Выровненные аминокислотные последовательности происходят из V, обозначенных DOM7h-2 (SEQ ID NO: 10), DOM7h-3DOM7h-7 (SEQ ID NO: 15). На фиг. 1 Г представлено выравнивание аминокислотных последовательностей семи VH, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином человека, и консенсусной последовательности(SEQ ID NO: 23). Выровненные последовательности происходят из VH, обозначенных DOM7h-22-2 012622 На фиг. 1 Д представлено выравнивание аминокислотных последовательностей трех V, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином человека и сывороточным альбумином крысы. Выровненные аминокислотные последовательности происходят из V, обозначенных DOM7h-8(SEQ ID NO: 24), DOM7r-13 (SEQ ID NO: 25) и DOM7r-14 (SEQ ID NO: 26). На фиг. 2A и 2 Б представлены схематические карты векторов, используемых для экспрессии гибридов MSA16IL-1ra (также обозначенного как DOM7m-16/IL-1ra) и IL-1raMSA16 (также обозначенного какIL-1ra/DOM7m-16) соответственно. На фиг. 2 В-2 Г представлены нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 27), кодирующая гибрид IL-1raMSA16 (также обозначенный как IL-1ra/DOM7m-16), и аминокислотная последовательность(SEQ ID NO: 28) данного гибрида. На фиг. 2 Д-2 Е представлены нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 29), кодирующая гибрид MSA16IL-1ra (также обозначенный как DOM7m-16/IL-1ra), и аминокислотная последовательность(SEQ ID NO: 30) данного гибрида. На фиг. 2 Ж, 2 З представлены нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 31), кодирующая гибрид DummyIL-1ra, который не связывал сывороточный альбумин, и аминокислотная последовательностьHeLa, и демонстрирующая механизм, с помощью которого IL-8 определяют в анализе ELISA. На фиг. 3 Б представлен график, демонстрирующий, что каждый из IL-1ra, MSA16IL-1ra иIL-1raMSA16 ингибировал IL-1-индуцированную секрецию IL-8 культивируемыми клетками MRC-5. Наблюдавшееся ингибирование было дозозависимым для IL-1ra, MSA16IL-1ra и IL-1raMSA16. На фиг. 4 А-4 В представлены графики, демонстрирующие, что и IL-1ra и MSA16IL-1ra ингибировали IL-1-индуцированную секрецию IL-8 культивируемыми клетками MRC-5 в анализах, в которых не использовали сывороточный альбумин мыши (фиг. 4 А), использовали 5% сывороточного альбумина мыши (фиг. 4 Б) или 10% сывороточного альбумина мыши (фиг. 4 В). Наблюдавшееся ингибирование было дозозависимым для IL-1ra и MSA16IL-1ra во всех протестированных условиях. На фиг. 5 представлено схематическое изображение результатов анализа ELISA, демонстрирующего, что и гибрид MSA16IL1-ra, и гибрид IL-1raMSA16 связывали сывороточный альбумин, а гибридDummyIL1-ra нет. На фиг. 6 А-6 В представлены сенсограммы и таблицы, демонстрирующие BIACORE данные по аффинности для клона DOM7h-1, связывающегося с сывороточным альбумином человека (HSA) (фиг. 6A),DOM7h-7, связывающегося с HSA (фиг. 6 Б), и DOM7r-1, связывающегося с сывороточным альбумином крысы (RSA) (фиг.6B). На фиг. 7 представлена таблица, демонстрирующая аффинности DOM7h-1, DOM7r-1, DOM7h-2,DOM7r-3, DOM7h-7, DOM7h-8, DOM7r-8, DOM7r-13, DOM7r-14, DOM7m-16, DOM7h-22, DOM7h-23,DOM7h-26, DOM7r-16, DOM7m-26, DOM7r-27 и DOM7R-31 к сывороточным альбуминам, которые они связывают. DOM7h-8 связывает также свиной сывороточный альбумин с аффинностью (KD) 60 нМ. На фиг. 8 А представлена нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 33) нуклеиновой кислоты,кодирующей антагонист рецептора интерлейкйна-1 человека (IL-1ra), депонированная в GenBank под регистрационным номером NM 173842. Данная нуклеиновая кислота имеет открытую рамку считывания,начинающуюся в положении 65. На фиг. 8 Б представлена аминокислотная последовательность IL-1ra человека (SEQ ID NO: 34), кодируемая нуклеиновой кислотой, приведенной на фиг. 8 А (SEQ ID NO: 33). Зрелый белок состоит из 152 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 26-177 из SEQ ID NO: 34). На фиг. 9 представлен график, демонстрирующий концентрацию (мкг/мл) гибридного белка MSAсвязывающее dAb/эпитопная метка НА в мышиной сыворотке после однократной внутривенной (в/в) инъекции (доза составляла приблизительно 1,5 мг/кг) самцам животных линии CD1 в зависимости от времени (сутки). Концентрацию сыворотки определяли с помощью ELISA, используя анти-НА козы(Abeam, UK) для захвата и реагенты для определения белка L-HRP (Invitrogen, США). Стандартные кривые известных концентраций гибрида MSA-связывающее dAb/HA были построены в присутствии 1 мышиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тест-образцами. Моделирование с 1-компонентной моделью (WinNonlin Software, Pharsight Corp., США) показало, что гибридный белокMSA-связывающее dAb/эпитопная метка НА имел конечную фазу t1/2 29,1 ч и площадь под кривой 559 чмкг/мл. На фиг. 10 представлены аминокислотные последовательности V, выбранные посредством связывания с сывороточным альбумином крысы (RSA). Проиллюстрированные последовательности происходят из V, обозначенных DOM7r-15 (SEQ ID NO: 37), DOM7r-16 (SEQ ID NO: 38), DOM7r-17(SEQ ID NO: 39), DOM7r-18 (SEQ ID NO: 40), DOM7r-19 (SEQ ID NO:41). На фиг. 11 А, 11 Б представлены аминокислотные последовательности VH, которые связывают сывороточный альбумин крысы (RSA). Проиллюстрированные последовательности происходят из VH, обозначенных DOM7r-20 (SEQ ID NO: 42), DOM7r-21 (SEQ ID NO: 43), DOM7r-22 (SEQ ID NO: 44),-3 012622(SEQ ID NO: 55). На фиг. 12 представлен график, демонстрирующий концентрацию (% начальной дозы) DOM7m-16,DOM7m-26 или контрольного dAb, которое не связывает MSA, каждый из которых содержал эпитопную метку НА, в мышиной сыворотке после однократной внутривенной (в/в) инъекции (доза составляла приблизительно 1,5 мг/кг) самцам животных линии CD1 в зависимости от времени. Концентрацию сыворотки определяли с помощью ELISA, используя анти-НА козы (Abeam, UK) для захвата и реагенты для определения белка L-HRP (Invitrogen, США). Стандартные кривые известных концентраций гибридаMSA-связывающее dAb/HA были построены в присутствии 1 мышиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тест-образцами. Моделирование с 1-компонентной моделью (WinNonlin Software,Pharsight Corp., США) показало, что контрольное dAb имело конечную фазу t1/2 20 мин, тогда какDOM7m-16, DOM7m-26 сохранялись в сыворотке значительно дольше. На фиг. 13 представлен график, демонстрирующий, что DOM7m-16/IL-1ra был более эффективным,чем IL-1ra или ENBREL (этанерцепт; Immunex Corporation), в лечении артрита в мышиной модели коллагениндуцированного артрита (CIA). Артрит индуцировали и начиная с 21 суток мышей лечили дексаметазоном в концентрации 0,4 мг/кг (стероид), DOM7m-16/IL-1ra в концентрации 1 мг/кг (IL-1ra/антиSA, 1 мг/кг) или 10 мг/кг (IL-1ra/анти-SA, 10 мг/кг), IL-1ra в концентрации 1 мг/кг или 10 мг/кг,ENBREL (этанерцепт; Immunex Corporation) в концентрации 5 мг/кг или физиологическим раствором. Результаты показывают, что в этом исследовании DOM7m-16/IL-1ra оказался более эффективным, чемIL-1ra или ENBREL (этанерцепт; Immunex Corporation). Как ожидалось, ответ на IL-1ra был дозозависимым, и ответ на DOM7m-16/IL-1ra также был дозозависимым. Средние баллы за лечение с помощьюDOM7m-16/IL-1ra в концентрации 1 мг/кг были постоянно ниже, чем средние баллы, полученные за лечение с помощью IL-1ra в концентрации 10 мг/кг. Результаты показывают, что в этом исследовании лечение с помощью DOM7m-16/IL-1ra было в 10 раз более эффективным, чем с помощью IL-1ra. На фиг. 14 А-14 Ж показаны аминокислотные последовательности полипептидов сапорина. На фиг. 14 А показана аминокислотная последовательность предшественника сапорина-2, депонированная в банке данных Swissprot под регистрационным номером Р 27559 (SEQ ID NO: 60). Сигнальный пептид представляет собой аминокислоты 1-24 из SEQ ID NO: 60. На фиг. 14 Б показана аминокислотная последовательность сапорина-3, депонированная в Swissprot под регистрационным номером Р 27560(SEQ ID NO: 61). На фиг. 14 В показана аминокислотная последовательность предшественника сапорина 4, депонированная в Swissprot под регистрационным номером Р 27561 (SEQ ID NO: 62). Сигнальный пептид представляет собой аминокислоты 1-24 из SEQ ID NO: 62. На фиг. 14 Г показана аминокислотная последовательность сапорина-5, депонированная в Swissprot под регистрационным номером Q41389(SEQ ID NO: 63). На фиг. 14 Д показана аминокислотная последовательность предшественника сапорина 6, депонированная в Swissprot под регистрационным номером Р 20656 (SEQ ID NO: 64). Сигнальный пептид представляет собой аминокислоты 1-24 из SEQ ID NO: 64, и потенциальный пропептид представляет собой аминокислоты 278-299 из SEQ ID NO: 64. Зрелый полипептид представляет собой аминокислоты 25-277 из SEQ ID NO: 64 (SEQ ID NO: 65). На фиг. 14 Е показана аминокислотная последовательность сапорина-7, депонированная в Swissprot под регистрационным номером Q41391 (SEQ ID NO: 66). На фиг. 14 Ж показана консенсусная аминокислотная последовательность, охватывающая некоторые варианты и изоформы сапорина-6 (SEQ ID NO: 67). На фиг. 15 показаны аминокислотные последовательности некоторых верблюжьих (Camelid) VHH,которые связывают сывороточный альбумин мыши, раскрытые в WO 2004/041862: последовательность(SEQ ID NO: 87), последовательность Q (SEQ ID NO: 88). Подробное описание изобретения Воплощения в пределах этого описания были описаны таким образом, чтобы сделать описание ясным и точным, но подразумевается и будет понятно, что данные воплощения могут быть различным образом объединены или разделены без отклонения от сущности изобретения. Известные вещества (композиции), имеющие структурную формулу, идентичную любому из воплощений изобретения, сами по себе исключаются из объема охраны. При этом не исключаются новые вещества (композиции), новые комбинации известных веществ (композиций), новые применения известных веществ (композиций) или новые способы, вовлекающие известные вещества (композиции).-4 012622 Используемый в данном описании термин "лекарство" относится к любому соединению (например,органической молекуле низкого молекулярного веса, нуклеиновой кислоте, полипептиду), которое может быть введено индивидууму для получения положительного терапевтического или диагностического эффекта в силу связывания с биологической молекулой-мишенью и/или изменение функции биологической молекулы-мишени у индивидуума. Молекула-мишень может представлять собой эндогенную молекулумишень, кодируемую геномом данного индивидуума (например, фермент, рецептор, фактор роста, цитокин, кодируемый геномом данного индивидуума), или экзогенную молекулу-мишень, кодируемую геномом патогена (например, фермент, кодируемый геномом вируса, бактерии, гриба, нематоды или другого патогена). Используемый в данном описании термин "лекарственная композиция" относится к композиции,содержащей лекарство, которое ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, где данная полипептидсвязывающая группировка содержит связывающий сайт (например,антигенсвязывающий сайт), который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. Лекарственная композиция может представлять собой конъюгат, где лекарство ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой. Лекарство может быть ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой непосредственно или опосредованно (например, через подходящий линкер и/или нековалентное связывание комплементарных связывающих партнеров (например, биотина и авидина. При использовании комплементарных связывающих партнеров, один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с полипептидсвязывающей группировкой непосредственно или через подходящую линкерную группировку. Когда лекарство представляет собой полипептид или пептид, лекарственная композиция может представлять собой гибридный белок, где полипептидное или пептидное лекарство и полипептидсвязывающая группировка представляют собой отдельные части (группировки) непрерывной полипептидной цепи. Используемый в данном описании термин "конъюгат" относится к композиции, содержащей антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, который связан с лекарством. Такие конъюгаты включают в себя "лекарственные конъюгаты", содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано ковалентно, и "нековалентные лекарственные конъюгаты", содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано нековалентно. Используемый в данном описании термин "лекарственный конъюгат" относится к композиции, содержащей антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано ковалентно. Лекарство может быть ковалентно связано с антигенсвязывающим фрагментом непосредственно или опосредованно через подходящую линкерную группировку. Лекарство может быть связано с антигенсвязывающим фрагментом в любом подходящем положении, таком как аминоконец, карбоксильный конец или через подходящие аминокислотные боковые цепи (например,-аминогруппу лизина). Используемый в данном описании термин "нековалентный лекарственный конъюгат" относится к композиции, содержащей антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано нековалентно. Лекарство может быть нековалентно связано с антигенсвязывающим фрагментом непосредственно (например, через электростатическое взаимодействие, гидрофобное взаимодействие) или опосредованно (например, через нековалентное связывание комплементарных связывающих партнеров (например, биотина и авидина), где один из партнеров ковалентно связан с лекарством, а комплементарный связывающий партнер ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом). При использовании комплементарных связывающих партнеров, один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин непосредственно или через подходящую линкерную группировку. Используемый в данном описании термин "лекарственный гибрид" относится к гибридному белку,который содержит антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин,и полипептидное лекарство. Антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, и полипептидное лекарство присутствуют в виде отдельных частей (группировок) одной непрерывной полипептидной цепи. Используемый в данном описании термин "лекарственная основа" относится к активностям лекарственных композиций и лекарств, которые стандартизованы на основе количества лекарства (или лекарственной группировки), используемого для оценки, измерения или определения активности. Обычно лекарственные композиции по изобретению (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеют большую молекулярную массу, чем лекарство, которое они содержат. Таким образом, эквивалентные количества лекарственной композиции и лекарства по массе будут содержать различные количества лекарства на основе молекулярной или молярной массы.-5 012622 Например, если лекарственная композиция по изобретению имеет молекулярную массу, которая в два раза больше молекулярной массы лекарства, которое она содержит, то активности могут быть определены на "лекарственной основе" с использованием 2 мкг лекарственной композиции и 1 мкг лекарства, так как эти количества будут содержать одинаковое количество лекарства (в виде свободного лекарства или в виде части лекарственной композиции). Активности могут быть стандартизованы и выражены на "лекарственной основе" с использованием соответствующих вычислений, например путем выражения активности в расчете на целевой связывающий сайт или, для ферментных лекарств, в расчете на активный сайт. Используемый в данном описании термин "антагонист рецептора интерлейкина-1" (IL-1ra) относится к встречающимся в природе или эндогенным белкам IL-1ra млекопитающих и к белкам, имеющим аминокислотную последовательность, которая является такой же, как последовательность соответствующего природного или эндогенного белка IL-1ra млекопитающих (например, рекомбинантные белки,синтетические белки (т.е. полученные с использованием способов синтетической органической химии. Соответственно, как определено в данном описании, этот термин включает в себя зрелый белок, полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы IL-1ra (например, полученные посредством альтернативного сплайсинга или других клеточных процессов), и модифицированные или немодифицированные формы вышеупомянутого (например, липидированные, гликозилированные, ПЭГилированные). Природные или эндогенные IL-1ra включают в себя белки дикого типа, такие как зрелые IL-1ra, полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы, которые встречаются в природе у млекопитающих (например, человека или примата, не являющегося человеком). Такие белки могут быть получены или выделены из источника, который, например, естественно продуцирует IL-1ra. Эти белки и белкиIL-1ra, имеющие такую же аминокислотную последовательность, как соответствующие природные или эндогенные IL-1ra, обозначаются по названию соответствующего млекопитающего. Например, в тех случаях, когда соответствующее млекопитающее представляет собой человека, белок обозначают как IL-1ra человека."Функциональные варианты" IL-1ra включают в себя функциональные фрагменты, функциональные мутантные белки и/или функциональные гибридные белки, которые могут быть получены с использованием подходящих способов (например, мутагенеза (например, химического мутагенеза, радиационного мутагенеза), методов рекомбинантных ДНК). "Функциональный вариант" является антагонистом рецептора интерлейкина-1 типа 1. Обычно фрагменты или участки IL-1ra включают в себя фрагменты или участки, имеющие делецию и/или вставку (т.е. одну или более аминокислотных делеций и/или вставок) аминокислоты (т.е. одной или более аминокислот) относительно зрелого IL-1ra (например,N-концевые, С-концевые или внутренние делеции). Также подразумеваются фрагменты или участки, в которых были делетированы только смежные аминокислоты или в которых были делетированы несмежные аминокислоты относительно зрелого IL-1ra. Функциональный вариант IL-1ra человека может иметь по меньшей мере приблизительно 80%,или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%,или по меньшей мере приблизительно 95%, или по меньшей мере приблизительно 96%,или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%,или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности со зрелой формой человеческого IL-1ra длиной 152 аминокислоты и является антагонистом человеческого рецептора интерлейкина-1 типа 1 (см. Eisenberg et al., Nature 343:341-346 (1990. Данный вариант может содержать одну или более дополнительных аминокислот (например, содержит 153, или 154, или более аминокислот). Например, вариант IL-1ra может иметь аминокислотную последовательность, которая состоит из аминоконцевого остатка метионина, за которым следуют остатки 26-177 из SEQ ID NO: 33(KINERET (анакинра), Amgen Inc.). Используемый в данном описании термин "сапорин" относится к семейству одноцепочечных инактивирующих рибосомы полипептидов, продуцируемых растением Saponaria officinalis (Stirpe, F. et al.,Biochem. J. 216:617-625 (1983), Bagga, S. et al., J. Biol. Chem. 278:4813-4820 (2003. Полипептиды сапорина существуют в нескольких формах, которые различаются по длине и/или аминокислотной последовательности (см., например, Id и Barthelemy, I. et al., J. Biol. Chem. 268:6541-6548 (1993. Сапорин-6 представляет собой наиболее активную форму сапорина (Bagga, S. et al., J. Biol. Chem. 278:4813-4820(2003. Описаны по меньшей мере четыре природные изоформы сапорина-6, в которых аминокислота в положении 48 зрелого полипептида (SEQ ID NO: 65) представляет собой Asp или Glu, a аминокислота в положении 91 зрелого полипептида (SEQ ID NO: 65) представляет собой Arg или Lys (Barthelemy, I. etID NO: 65) представляет собой Lys или Arg (Id). Консенсусная последовательность, охватывающая эти изоформы и варианты, представлена на фиг. 14 Ж (SEQ ID NO: 67). Соответственно, термин "сапорин" включает в себя белок-предшественник, зрелый полипептид, нативный белок, полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы (например, полученные посредством альтернативного сплайсинга или других клеточных процессов) и модифицированные или немодифицированные формы вышеупомянутого (например, липидированные, гликозилированные, ПЭГилированные) включая природные, синтетические или рекомбинантно полученные полипептиды. Природный или эндогенный сапорин включает в себя белки дикого типа, такие как зрелый сапорин (например, зрелый сапорин-6), полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы, которые встречаются в природе в Saponaria officinalis. Такие белки могут быть получены или выделены из Saponariaofficinalis с использованием любых подходящих способов. "Функциональные варианты" сапорина включают в себя функциональные фрагменты, функциональные мутантные белки и/или функциональные гибридные белки, которые могут быть получены с использованием подходящих способов (например,мутагенеза (например, химического мутагенеза, радиационного мутагенеза), методов рекомбинантных ДНК). Обычно фрагменты или участки сапорина (например, сапорин-6) включают в себя фрагменты или участки, имеющие делецию и/или вставку (т.е. одну или более аминокислотных делеций и/или вставок) аминокислоты (т.е. одной или более аминокислот) относительно зрелого сапорина (например,N-концевые, С-концевые или внутренние делеций). Также подразумеваются фрагменты или участки, в которых были делетированы только смежные аминокислоты или в которых были делетированы несмежные аминокислоты относительно зрелого сапорина. Могут быть получены различные функциональные варианты сапорина. Например, были получены гибридные белки сапорина-6, которые содержат аминоконцевые удлинения, и было показано, что они полностью сохраняют рибосомоингибирующую активность в анализах лизата ретикулоцитов кролика (Barthelemy, I. et al., J. Biol. Chem. 268:6541-6548 (1993. Варианты или сапорин-6, в которых остаток в активном сайте: Tyr72, Tyr120, Glu176, Arg 179 или Trp208(аминокислоты 72, 120, 176, 179 или 208 из SEQ ID NO: 65) был заменен аланином, имел пониженную цитотоксическую активность в анализах in vitro (Bagga, S. et al., J. Biol. Chem. 278:4813-4820 (2003. Соответственно, если желательно получить дополнительные функциональные варианты сапорина, следует избегать мутации, замены, перестановки, делеции или модификации остатков в активном сайте. Предпочтительно функциональный вариант сапорина, который содержит меньше аминокислот, чем природный зрелый полипептид, включает, по меньшей мере, активный сайт. Например, вариант сапорина-6,который содержит меньше аминокислот, чем природный зрелый сапорин-6, может включать остатки активного сайта зрелого сапорина-6 (Tyr72, Tyr120, Glu176, Arg 179 и Trp208 (аминокислоты 72, 120,176, 179 и 208 из SEQ ID NO: 65 и иметь длину по меньшей мере приблизительно 137 аминокислот,по меньшей мере приблизительно 150 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 175 аминокислот,по меньшей мере приблизительно 200 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 225 аминокислот или по меньшей мере приблизительно 250 аминокислот."Функциональный вариант" сапорина имеет рибосомоинактивирующую активность (например,рРНК N-гликозидазную активность) и/или цитотоксическую активность. Такую активность можно легко оценить, используя любой подходящий способ, такой как ингибирование синтеза белка с использованием хорошо известного анализа лизата ретикулоцитов кролика или любого из хорошо известных анализов цитотоксичности, в которых используются опухолевые клеточные линии (см., например Bagga, S. et al., J.Biol. Chem. 278:4813-4820 (2003) и Barthelemy, I. et al., J. Biol. Chem. 268:6541-6548(1993. В некоторых воплощениях функциональный вариант сапорина имеет по меньшей мере приблизительно 80%, или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%, или по меньшей мере приблизительно 91%, или по меньшей мере приблизительно 92%,или по меньшей мере приблизительно 93%, или по меньшей мере приблизительно 94%,или по меньшей мере приблизительно 95%, или по меньшей мере приблизительно 96%,или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%,или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности со зрелым сапорином-6 (SEQ ID NO: 65). Изобретение относится к лекарственным композициям, содержащим лекарство и полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. Как подробно раскрыто в данном описании в отношении лекарственных композиций, которые содержат антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, лекарство и полипептидсвязывающая группировка могут быть связаны друг с другом ковалентно или нековалентно. В некоторых вопло-7 012622 щениях лекарственная композиция представляет собой гибридный белок, который содержит полипептидное лекарство и полипептидсвязывающую группировку, которая содержит антигенсвязывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. В других воплощениях лекарственная композиция содержит лекарство, которое ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, которая содержит антигенсвязывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. Обычно полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, представляет собой полипептид, который встречается в природе in vivo и который обладает устойчивостью к деградации или удалению посредством эндогенных механизмов, с помощью которых нежелательный материал удаляется из организма (например, человека). Например, полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, может быть выбран из белков внеклеточного матрикса, белков, обнаруженных в крови, белков, обнаруженных в гематоэнцефалическом барьере или в нервной ткани, белков, локализованных в почке, печени, легком, сердце, коже или кости, стресс-белков, белков, специфических для заболевания, или белков, вовлеченных в Fc-транспорт. Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки in vivo,включают в себя, например, гибридные белки, представляющие собой лиганд, специфичный к рецептору трансферрина/нейрофармацевтический агент (см. патент США 5977307, содержание которого включено в данное описание путем ссылки), рецептор эндотелиальных клеток капилляров головного мозга,трансферрин, рецептор трансферрина (например, растворимый рецептор трансферрина), инсулин, рецептор инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF 1), рецептор инсулиноподобного фактора роста 2 (IGF 2),рецептор инсулина, фактор свертывания крови X, 1-антитрипсин и HNF (hepatocyte nuclear factor, ядерный фактор гепатоцитов) 1. Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки, также включают в себя альфа-1 гликопротеин (оросомукоид; AAG), альфа-1 антихимотрипсин (ACT), альфа-1 микроглобулин (белок НС; AIM), антитромбин III (AT III), аполипопротеин А-1(Аро А-1), аполипопротеин В (Аро В), церулоплазмин (Ср), компонент С 3 комплемента (С 3), компонент С 4 комплемента (С 4), ингибитор С 1-эстеразы (C1 INH), С-реактивный белок (CRP), ферритин (FER),гемопексин (НРХ), липопротеин(а) (Lp(a, маннозосвязывающий белок (МБР), миоглобин (Муо), преальбумин (транстиретин; PAL), ретинолсвязывающий белок (RBP) и ревматоидный фактор (RF). Подходящие белки внеклеточного матрикса включают в себя, например, коллагены, ламинины, интегрины и фибронектин. Коллагены являются основными белками внеклеточного матрикса. В настоящее время известно примерно 15 типов молекул коллагена, обнаруженных в различных частях организма,например коллаген I типа (составляющий 90% коллагена организма), обнаруженный в костях, коже, сухожилиях, связках, роговице, внутренних органах, или коллаген II типа, обнаруженный в хряще, позвоночном диске, хорде и стекловидном теле глаза. Подходящие белки крови включают в себя, например, плазматические белки (например, фибрин,-2 макроглобулин, сывороточный альбумин, фибриноген (например, фибриноген А, фибриноген В),сывороточный амилоидный белок А, гаптоглобин, профилин, убиквитин, утероглобулин и -2 микроглобулин), ферменты и ингибиторы ферментов (например, плазминоген, лизоцим, цистатин С, альфа-1-антитрипсин и панкреатический ингибитор трипсина), белки иммунной системы, такие как иммуноглобулиновые белки (например, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, легкие цепи иммуноглобулинов (каппа/лямбда, транспортные белки (например, ретинолсвязывающий белок, -1 микроглобулин), дефензины (например, бета-дефензин 1, нейтрофильный дефензин 1, нейтрофильный дефензин 2 и нейтрофильный дефензин 3) и т.п. Подходящие белки, обнаруженные в гематоэнцефалическом барьере или в нервной ткани, включают в себя, например, рецептор меланокортина, миелин, переносчик аскорбата и т.п. Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки in vivo, также включают в себя белки, локализованные в почке (например, полицистин, коллаген IV типа, транспортер K1 органических анионов, антиген Хейманна (Heymann, белки, локализованные в печени (например, алкогольдегидрогеназу, G250), белки, локализованные в легких (например, секреторный компонент,который связывает IgA), белки, локализованные в сердце (например, HSP 27, который ассоциирован с дилатационной кардиомиопатией), белки, локализованные в коже (например, кератин), белки, специфические для кости, такие как морфогенетические белки (BMP), которые представляют собой подгруппу белков суперсемейства трансформирующего фактора роста , которые демонстрируют остеогенную активность (например, ВМР-2, ВМР-4, ВМР-5, ВМР-6, ВМР-7, ВМР-8), опухолеспецифические белки (например, антиген трофобласта, рецептор герцептина, рецептор эстрогена, катепсины (например, катепсин В, который можно обнаружить в печени и селезенке. Подходящие специфические для заболеваний белки включают в себя, например, антигены, экспрессирующиеся только на активированных Т-клетках, включающие LAG-3 (ген активации лимфоцитов),остеопротегерин-лиганд (OPGL; см. Nature 402, 304-309 (1999, ОХ 40 (член семейства рецепторов кTNF, экспрессируется на активированных Т-клетках и специфически активируется в человеческих клет-8 012622 ках, продуцирующих вирус Т-клеточного лейкоза I типа (HTLV-I); см. Immunol. 165 (1):263-70 (2000. Подходящие специфические для заболеваний белки также включают в себя, например, металлопротеазы(ассоциированные с артритом/видами рака), включая CG6512 Drosophila, параплегин человека, FtsH человека, AFG3L2 человека, мышиные ftsH; и ангиогенные факторы роста, включая кислый фактор роста фибробластов (FGF-1), основный фактор роста фибробластов (FGF-2), сосудистый эндотелиальный фактор роста/фактор проницаемости сосудов (VEGF/VPF), трансформирующий фактор роста- (TGF-),фактор некроза опухолей-альфа (TNF-), ангиогенин, интерлейкин-3 (IL-3), интерлейкин-8 (IL-8), тромбоцитарный эндотелиальный фактор роста (PD-ECGF), плацентарный фактор роста (PlGF), мидкайн(midkine) тромбоцитарный фактор роста-ВВ (PDGF) и фракталкин (fractalkine). Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки in vivo, также включают в себя стресс-белки, такие как белки теплового шока (HSP). HSP обычно обнаруживаются внутри клеток. Когда они обнаруживаются вне клеток, это является признаком смерти клетки и потери ею содержимого. Эта незапрограммированная клеточная гибель (некроз) происходит в результате травмы, заболевания или повреждения, внеклеточные HSP запускают реакцию иммунной системы. Связывание с внеклеточным HSP может приводить к локализации композиций по изобретению в участке заболевания. Подходящие белки, вовлеченные в Fc-транспорт, включают в себя, например, рецептор Брамбелла(Brambell) (также известный как FcRB). Этот Fc-рецептор имеет две функции, которые обе потенциально полезны для доставки. Эти функции представляют собой (1) транспорт IgG от матери ребенку через плаценту, (2) защиту IgG от распада, увеличивающую таким образом период его полувыведения из сыворотки. Предполагают, что этот рецептор осуществляет рециркуляцию IgG из эндосом (см. Holliger et al., Nat.Biotechnol. 15(7):632-6 (1997. Лекарственные композиции по изобретению могут содержать любую полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт),обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка содержит по меньшей мере 31, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 80 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 90 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 100 аминокислот или по меньшей мере приблизительно 110 аминокислот как отдельная молекулярная структурная единица. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, с KD по меньшей мере приблизительно 5 мМ KD (KD=Koff(kd)/Kon(ka. В некоторых воплощениях полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, сKD от приблизительно 10 до приблизительно 100 нМ, или от приблизительно 100 нМ до приблизительно 500 нМ, или от приблизительно 500 нМ до приблизительно 5 мМ, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса (например, с использованием прибора BIACORE). В конкретных воплощениях полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, с KD приблизительно 50 нМ, или приблизительно 70 нМ, или приблизительно 100 нМ, или приблизительно 150 нМ, или приблизительно 200 нМ. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, не является прокариотическим или бактериальным полипептидом или пептидом. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка представляет собой полипептид или пептид эукариот млекопитающих или человека. В некоторых воплощениях полипептидсвязывающая группировка, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, представляет собой свернутый белковый домен. В других воплощениях полипептидсвязывающая группировка имеет молекулярную массу по меньшей мере приблизительно 4 кДа, по меньшей мере приблизительно 4,5 кДа,по меньшей мере приблизительно 5 кДа, по меньшей мере приблизительно 5,5 кДа,по меньшей мере приблизительно 6 кДа, по меньшей мере приблизительно 6,5 кДа,по меньшей мере приблизительно 7 кДа, по меньшей мере приблизительно 7,5 кДа или по меньшей мере приблизительно 8 кДа как отдельная молекулярная структурная единица. Подходящие полипептидсвязывающие группировки, которые содержат связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, могут быть идентифицированы с использованием любого подходящего способа, например путем скрининга встречающихся в природе или не встречающихся в природе полипептидов в подходящем анализе адгезии. Как раскрыто в данном описании, предпочтительные полипептидсвязывающие группировки, которые имеют антигенсвязывающий сайт для полипептида, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, представляют-9 012622 собой антигенсвязывающие фрагменты антител, которые обладают специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Однако в данном изобретении могут быть использованы антигенсвязывающие фрагменты антител, которые обладают специфичностью связывания по отношению к другим полипептидам, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки in vivo. При желании, одна или более определяющих комплементарность областей (CDR) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, который связывает полипептид, увеличивающий период полувыведения из сыворотки in vivo, могут быть преобразованы в неиммуноглобулиновую структуру, которая сохраняет антигенсвязывающую специфичность антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Лекарственные композиции по изобретению могут содержать такую неиммуноглобулиновую связывающую группировку. Такие неиммуноглобулиновые связывающие группировки могут быть получены с использованием любого подходящего способа, например природные бактериальные рецепторы, такие как SpA,были использованы в качестве структурных каркасов (scaffolds) для трансплантации CDR с образованием полипептидсвязывающих группировок, которые специфически связывают эпитоп. Детали этой процедуры описаны в заявке на патент США 5831012, содержание которой включено в данное описание путем ссылки. Другие подходящие структурные каркасы включают в себя структурные каркасы на основе фибронектина и аффител. Детали соответствующих процедур описаны в WO 98/58965. Другие подходящие структурные каркасы включают в себя липокаллин и CTLA4, как описано в van den Beuken et al.,J. Mol. Biol. 310:591-601 (2001), и такие структурные каркасы, которые описаны в WO 00/69907 (MedicalResearch Council) и которые основаны, например, на кольцевой структуре бактериального GroEL или других шаперонных полипептидов. В некоторых воплощениях лекарственная композиция по изобретению содержит неиммуноглобулиновую связывающую группировку, которая обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, где неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит одну, две или три CDR из VH, V или VHH, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В некоторых воплощениях неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит CDR3, но неCDR1 или CDR2, из VH, V или VHH, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В других воплощениях неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит CDR1 и CDR2, но не CDR3, из VH, V или VHH, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В других воплощениях неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит CDR1, CDR2 и CDR3 изVH, V или VHH, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В других воплощениях лекарственная композиция содержит только CDR3 из VH, V или VHH, раскрытых в данном описании, и лекарство. Лекарственные композиции по изобретению могут быть получены с использованием подходящих способов, таких как способы, раскрытые в данном описании, для получения лекарственных гибридов,лекарственных конъюгатов и нековалентных лекарственных конъюгатов. Кроме того, лекарственные композиции по изобретению имеют преимущества и полезность, которые подробно раскрыты в данном описании в отношении лекарственных гибридов, лекарственных конъюгатов и нековалентных лекарственных конъюгатов. В изобретении предложены лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), которые имеют улучшенные фармакокинетические свойства (например, увеличивают период полувыведения из сыворотки) и другие преимущества по сравнению с одним лекарством (неконъюгированным лекарством, негибридным лекарством). Лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды содержат антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и одно или более желаемых лекарств. Как раскрыто в данном описании, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) по изобретению могут иметь существенно более длительный период полувыведения из сыворотки in vivo и/или увеличенную AUC по сравнению с одним лекарством. Кроме того, активность лекарства обычно, по существу, не меняется в лекарственной композиции (например, лекарственном конъюгате, нековалентном лекарственном конъюгате, лекарственном гибриде). Однако некоторое изменение активности лекарственной композиции по сравнению с одним лекарством является приемлемым и обычно компенсируется улучшенными фармакокинетическими свойствами лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида). Например, лекарственные композиции(например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) могут связывать мишень лекарства с меньшей аффинностью, чем одно лекарство, но имеют приблизительно эквивалентную или лучшую эффективность по сравнению с одним лекарством благодаря улучшенным фармакокинетическим свойствам лекарственной композиции (например, более длительному периоду полувыведения из сыворотки in vivo, большей AUC). Кроме того, для достижения желаемого терапевтического или диагностического эффекта можно вводить меньшие количества лекарственных композиций (например, лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов и лекар- 10012622 ственных гибридов). Предпочтительно активность лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) отличается от активности одного лекарства в число раз, составляющее не более чем приблизительно 100,или не более чем приблизительно 50, или не более чем приблизительно 10,или не более чем приблизительно 5,или не более чем приблизительно 4,или не более чем приблизительно 3, или не более чем приблизительно 2. Например, лекарство может иметь KD, Ki или нейтрализующую дозу 50 (ND50) 1 нМ, а лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) может иметь KD,Ki или ND50 приблизительно 2 нМ, или приблизительно 3 нМ, или приблизительно 4 нМ, или приблизительно 5 нМ, или приблизительно 10 нМ. Предпочтительно активность лекарственной композиции(например,лекарственного конъюгата,нековалентного лекарственного конъюгата,лекарственного гибрида),по существу, не уменьшается по сравнению с активностью лекарства. В некоторых воплощениях активность лекарственной композиции уменьшена относительно активности лекарства не более чем на приблизительно 10%, не более чем на приблизительно 9%, не более чем на приблизительно 8%,не более чем на приблизительно 7%, не более чем на приблизительно 6%,не более чем на приблизительно 5%, не более чем на приблизительно 4%,не более чем на приблизительно 3%, не более чем на приблизительно 2%,не более чем на приблизительно 1% или, по существу, не изменена. В качестве альтернативы указано,что лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) сохраняет по меньшей мере приблизительно 90%,по меньшей мере приблизительно 91%,по меньшей мере приблизительно 92%,по меньшей мере приблизительно 93%,по меньшей мере приблизительно 94%,по меньшей мере приблизительно 95%,по меньшей мере приблизительно 96%,по меньшей мере приблизительно 97%,по меньшей мере приблизительно 98%,по меньшей мере приблизительно 99% активности лекарства или, по существу, такую же активность, как лекарство. Предпочтительно активность лекарственных композиций (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и лекарств определяется и/или сравнивается с "лекарственной основой". Как описано и показано в данном описании, лекарственные композиции (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению могут иметь большую активность (например, активность in vivo), чем одно лекарство. Например, как показано в примере 6, DOM7m-16/IL-1ra был более эффективным в лечении артрита в мышиной модели, чем IL-1ra,когда эти агенты вводили в одной и той же дозе по массе (10 мг/кг или 1 мг/кг). DOM7m-16/IL-1ra был более эффективным, несмотря на то, что его молекулярная масса приблизительно в два раза выше молекулярной массы IL-1ra. Таким образом, мыши, которые получали DOM7m-16/IL-1ra, получали приблизительно только половину IL-1ra (в виде группировки в DOM7m-16/IL1-ra) по сравнению с мышами, которые получали IL-1ra. В некоторых воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет большую активность (например, активность in vivo), чем лекарство; например, лекарственная композиция может иметь по меньшей мере приблизительно 100%, по меньшей мере приблизительно 150%, по меньшей мере приблизительно 200%,по меньшей мере приблизительно 250%, по меньшей мере приблизительно 300%,по меньшей мере приблизительно 350%, по меньшей мере приблизительно 400%,по меньшей мере приблизительно 450% или по меньшей мере приблизительно 500% активности лекарства. Предпочтительно активность лекарственных композиций (например, лекарственного конъюгата,нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и лекарств определяется и/или сравнивается с "лекарственной основой". Активность лекарственных композиций (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и лекарства может быть определена с использованием подходящей системы in vitro или in vivo. В некоторых воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет большую активность, чем лекарство, которое она включает, как определено in vivo. В других воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет большую активность, чем лекарство, которое она включает, как определено in vitro. Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), которые содержат доменное антитело (dAb), обладающее специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, обеспечивают дополнительные преимущества. Доменные антитела являются очень стабильными, небольшими относительно антител и других антигенсвязывающих фрагментов антител, могут быть получены с высокими выходами путем экспрессии в E.coli или дрожжах (например, Pichia pastoris) и, как раскрыто в данном описании, антигенсвязывающие фрагменты антител, которые связывают сывороточный альбумин, могут быть легко выбраны- 11012622 из библиотек человеческого происхождения или из любого желаемого вида. Соответственно, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты,лекарственные гибриды), которые содержат dAb, которое связывает сывороточный альбумин, можно легче получить, чем терапевтические агенты, которые обычно получают в клетках млекопитающих (например, человеческие, гуманизированные или химерные антитела), и могут быть использованы dAb, которые не являются иммуногенными (например, человеческое dAb может быть использовано для лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата для лечения или диагностики заболевания у людей). Иммуногенность лекарства может быть уменьшена, когда лекарство является частью лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида), содержащей полипептидсвязывающую группировку, которая связывает сывороточный альбумин (например, антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин). Соответственно, лекарство может быть менее иммуногенным (чем одно лекарство) или, по существу, неиммуногенным в контексте лекарственной композиции, содержащей полипептидсвязывающую группировку, которая связывает сывороточный альбумин (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид). Таким образом, такие лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) можно вводить субъекту повторно с течением времени с минимальной потерей эффективности из-за наработки антитела к лекарству иммунной системой данного субъекта. Кроме того, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), раскрытые в данном описании, могут иметь повышенные показатели безопасности и меньшие побочные эффекты, чем одно лекарство. Например, в результате активности связывания сывороточного альбумина антигенсвязывающего фрагмента антитела,которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, лекарственные гибриды и конъюгаты (лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат) имеют увеличенную продолжительность пребывания в сосудистом кровотоке. Кроме того, конъюгаты и лекарственные гибриды, по существу, не способны проникать через гематоэнцефалический барьер и накапливаться в центральной нервной системе после системного введения (например, внутрисосудистого введения). Соответственно, конъюгаты (лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат) и лекарственные гибриды, которые содержат лекарство, обладающее нейротоксичностью или нежелательными психотропными эффектами, можно вводить с большей безопасностью и уменьшенными побочными эффектами по сравнению с одним лекарством. Аналогично, конъюгаты (лекарственный конъюгат,нековалентный лекарственный конъюгат) и лекарственные гибриды могут иметь уменьшенную токсичность по отношению к конкретным органам (например, почке или печени), чем одно лекарство. Конъюгаты и лекарственные гибриды, раскрытые в данном описании, можно использовать также для задержки лекарства или мишени, связывающей лекарство (например, токсина), в сосудистом кровотоке, уменьшая тем самым эффекты лекарства или мишени на ткани (например, ингибируя эффекты токсина). Подходящие способы фармакокинетического анализа и определения периода полувыведения in vivo хорошо известны в данной области. Такие способы описаны, например в Kenneth, A. et al.: ChemicalA Practical Approach (1996). Ссылка сделана также на "Pharmacokinetics", M. GibaldiD Perron, опубликованную Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982), которая описывает фармакокинетические параметры,такие как t-альфа и t-бета периоды полувыведения (t1/2-альфа, t1/2-бета) и площадь под кривой (area undercurve, AUC). Периоды полувыведения t1/2-альфа, t1/2-бета) и AUC могут быть определены из кривой зависимости концентрации конъюгата или гибрида в сыворотке от времени. Можно использовать пакет программ для анализа WinNonlin (доступный от Pharsight Corp., Mountain View, СА 94040, США), например для моделирования кривой. В первой фазе (альфа-фаза) лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) подвергается у пациента главным образом распределению с некоторой элиминацией. Вторая фаза (бета-фаза) представляет собой конечную фазу, когда лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) распределена, и концентрация в сыворотке уменьшается, поскольку лекарственная композиция выводится из организма пациента. Период полувыведения t-альфа представляет собой период полувыведения в первой фазе, а t-бета период полувыведения представляет собой период полувыведения во второй фазе. Таким образом, в настоящем изобретении предложена лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) или композиция, содержащая лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению, имеющая t период полувыведения в диапазоне от 15 мин или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет 30 мин, 45 мин, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 ч. Кроме того, или в качестве альтернативы, лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) или- 12012622 композиция по изобретению будет иметь t период полувыведения в диапазоне вплоть до и включая 12 ч. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет 11, 10, 9, 8, 7, 6 или 5 ч. Примером подходящего диапазона является диапазон от 1 до 6 ч, от 2 до 5 ч или от 3 до 4 ч. Преимущественно в настоящем изобретении предложены лекарственные композиции (например,лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), имеющие t период полувыведения в диапазоне от 2,5 ч или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 ч. В некоторых воплощениях лекарственные композиции(например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) имеют t период полувыведения в диапазоне вплоть до и включая 21 сутки. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет 12 ч, 24 ч, 2, 3, 5, 10, 15 или 20 суток. В конкретных воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению будет иметь t период полувыведения в диапазоне от 12 до 60 ч. В другом воплощении он будет находиться в диапазоне от 12 до 48 ч. В еще одном воплощении он будет находиться в диапазоне от 12 до 26 ч. Кроме того, или в качестве альтернативы вышеупомянутым критериям в настоящем изобретении предложены лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), имеющие значение AUC (область под кривой) в диапазоне от 0,01 мгмин/мл или более или от 1 мгмин/мл или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет 0,01, 0,1, 1, 5, 10, 15, 20, 30, 100, 200 или 300 мгмин/мл. В конкретных воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат,лекарственный гибрид) имеет AUC в диапазоне вплоть до 600 мгмин /мл. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет 500, 400, 300, 200, 150, 100, 75 или 50 мгмин/мл. В других воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет AUC в диапазоне, выбранном из группы, состоящей из следующего: 15-150 мгмин/мл, 15-100 мг-мин/мл, 15-75 мгмин/мл, 15-50 мгмин/мл, 0,01-50 мгмин/мл,0,1-50 мгмин/мл, 1-50 мгмин/мл, 5-50 мгмин/мл и 10-50 мгмин/мл. Изобретение относится к лекарственным композициям (например, лекарственным конъюгатам, нековалентным лекарственным конъюгатам, лекарственным гибридам), которые содержат лекарство и полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. В предпочтительных воплощениях лекарственных композиций полипептидсвязывающая группировка, которая содержит связывающий сайт (например,антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду,который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В некоторых воплощениях лекарственная композиция содержит лекарство, которое ковалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. В этих воплощениях лекарство может быть ковалентно связано с полипептидсвязывающим доменом в любом подходящем положении, таком как аминоконец, карбоксильный конец, или через подходящие аминокислотные боковые цепи (например,-аминогруппу лизина). В других воплощениях лекарственная композиция содержит лекарство, которое нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo. В таких воплощениях лекарство может быть нековалентно связано с антигенсвязывающим фрагментом непосредственно (например, через электростатическое взаимодействие, гидрофобное взаимодействие) или опосредованно (например, через нековалентное связывание комплементарных связывающих партнеров (например, биотина и авидина), где один партнер ковалентно связан с лекарством, а комплементарный связывающий партнер ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом). При использовании комплементарных связывающих партнеров один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством, непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с полипептидсвязывающим доменом, непосредственно или через подходящую линкерную группировку. В других воплощениях лекарственная композиция представляет собой гибридный белок, содержащий полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, и полипептидное лекарство. Гибридные белки содержат непрерывную полипептидную цепь, содержащую полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфично- 13012622 стью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в качестве первой группировки и полипептидное лекарство в качестве второй группировки,которые присутствуют в виде отдельных частей (группировок) полипептидной цепи. Первые и вторые группировки могут быть непосредственно связаны друг с другом через пептидную связь или через подходящую аминокислоту или пептидный или полипептидный линкер. В соответствующих случаях могут присутствовать дополнительные группировки (например, третья, четвертая) и/или линкерные последовательности. Первая группировка может находиться в N-концевом положении, С-концевом положении или в пределах второй группировки (т.е. полипептидного лекарства). В некоторых воплощениях гибридный белок содержит одну или более полипептидсвязывающих группировок, которые содержат связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, и одну или более полипептидных лекарственных группировок. В этих воплощениях гибридный белок может содержать от 1 до приблизительно 10 (например, 1, 2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) полипептидных лекарственных группировок, которые могут быть одинаковыми или разными, и от 1 до приблизительно 20 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17,18, 19 или 20) полипептидсвязывающих группировок, которые содержат связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, и которые могут быть одинаковыми или разными. Полипептидсвязывающие группировки, которые содержат связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, и полипептидные лекарственные группировки могут присутствовать в любом желаемом положении. Например, начиная с аминоконца к карбоксильному концу, группировки могут присутствовать в следующем порядке: одна или более полипептидсвязывающих группировок, одна или более полипептидных лекарственных группировок, одна или более полипептидсвязывающих группировок. В другом примере, начиная с аминоконца к карбоксильному концу, группировки могут присутствовать в следующем порядке: одна или более полипептидсвязывающих группировок, одна или более полипептидных лекарственных группировок, одна или более полипептидсвязывающих группировок, одна или более полипептидных лекарственных группировок, одна или более полипептидсвязывающих группировок. Как раскрыто в данном описании, полипептидсвязывающие группировки и полипептидные лекарственные группировки могут быть непосредственно связаны друг с другом через пептидную связь или через подходящую аминокислоту или пептидный или полипептидный линкер. В некоторых воплощениях гибридный белок представляет собой непрерывную полипептидную цепь, которая имеет формулу (с аминоконца к карбоксиконцу): или где X представляет собой полипептидное лекарство; Р и Q, каждый независимо, представляют собой полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду,который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo;a, b, с и d, каждый независимо, отсутствуют или включают от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков;n1, n2 и n3 означает соответственно число присутствующих группировок X, Р или Q;n3 означает от 0 до приблизительно 10,при условии, что n2 и n3 не являются нулем одновременно и при условии, что когда n1 и n2 оба означают 1, а n3 означает ноль, тогда X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела. В некоторых воплощениях n2 означает 1, 2, 3, 4, 5 или 6 и n3 означает ноль. В других воплощенияхn3 означает 1, 2, 3, 4, 5 или 6 и n2 означает ноль. В других воплощениях n1, n2 и n3, каждый, означает 1. В некоторых воплощениях X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела. В предпочтительных воплощениях каждый из Р и Q независимо представляет собой полипептидсвязывающую группировку, обладающую специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В особенно предпочтительных воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) содержит полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, где полипептидсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.- 14012622 Изобретение также относится к способу увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo, включающему связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно данного лекарства. В некоторых воплощениях способ предназначен для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно указанного лекарства и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства. В других воплощениях способ предназначен для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo и уменьшения иммуногенности лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат,нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки in vivo относительно данного лекарства и является менее иммуногенной, чем указанное лекарство. В других воплощениях способ предназначен для уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства. В других воплощениях способ предназначен для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo и уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой,имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду,который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сывороткиin vivo относительно указанного лекарства, является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства. Лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, могут быть связаны через ковалентную связь (например, пептидную связь) или нековалентную связь, с применением линкеров или без них, как раскрыто в данном описании. В некоторых воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, связаны через ковалентную связь. Например, полученная лекарственная композиция представляет собой лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид. В других воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, связаны через нековалентную связь, и лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат. Лекарственная композиция, полученная с использованием данного способа, может иметь большую активность (например, активность in vivo), чем лекарство. В некоторых воплощениях способ предназначен для получения лекарственной композиции, которая имеет большую активность (например, активность in vivo), чем одно лекарство, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет большую активность относительно лекарства. В таких воплощениях предпочтительно, чтобы активность лекарственной композиции была больше, чем активность лекарства, как раскрыто в данном описании.- 15012622 В предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В конкретных предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В некоторых воплощениях данный способ включает отбор указанной полипептидсвязывающей группировки из одного или более полипептидов (например, антигенсвязывающих фрагментов антитела,которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину), где выбранная полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, с KD по меньшей мере приблизительно 5 мМ. Изобретение также относится к применению полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo. В некоторых воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата,содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%. В других воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo и уменьшения иммуногенности лекарства. В других воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%. В других воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки in vivo и уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%. Лекарственная композиция может содержать лекарство и полипептидсвязывающую группировку,имеющую связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду,который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, которые связаны через ковалентную связь (например, пептидную связь) или нековалентную связь, с применением линкеров или без них, как раскрыто в данном описании. В некоторых воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, связаны через ковалентную связь. Например, лекарственная композиция может представлять собой лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид. В других воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки in vivo, связаны через нековалентную связь, и лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат. В некоторых воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата,содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения активности (например, активности in vivo) относительно указанного лекарства. В таких воплощениях предпочтительно, чтобы активность лекарственной композиции была больше, чем активность лекарства, как раскрыто в данном описании. В предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В особенно предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.- 16012622 Антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин. Лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды по изобретению содержат (т.е. один или более) антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин. Антигенсвязывающий фрагмент может иметь специфичность связывания по отношению к сывороточному альбумину животного, которому будут вводить лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид. Предпочтительно антигенсвязывающий фрагмент обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину человека. Однако предполагаются ветеринарные применения, и антигенсвязывающий фрагмент может иметь специфичность связывания по отношению к сывороточному альбумину желаемого животного, например сывороточному альбумину собаки, кошки,лошади, коровы, курицы, овцы, свиньи, козы, оленя, норки и т.п. В некоторых воплощениях антигенсвязывающий фрагмент обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину более из чем одного вида. Например, как раскрыто в данном описании, были получены dAb человека,которые обладают специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину крысы и сывороточному альбумину мыши, и dAb, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину крысы, мыши и человека (табл. 1 и фиг. 7). Такие dAb обеспечивают преимущество при проведении доклинических и клинических исследований с использоанием одного и того же лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида и избавляют он необходимости проводить доклинические исследования с подходящим суррогатным лекарственным гибридом или лекарственным конъюгатом. Антигенсвязывающие фрагменты, подходящие для применения в изобретении, включают в себя,например, Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, Р(ab')2-фрагменты, Fv-фрагменты (включая одноцепочечныйFv (scFv) и дисульфидсвязанный Fv), один вариабельный домен и dAb (VH, VL). Такие антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены с использованием любого подходящего способа, такого как протеолиз антитела с помощью пепсина, папаина или другой протеазы, имеющей требуемую специфичность расщепления, или с использованием рекомбинантных методов. Например, Fv-фрагменты могут быть получены путем переваривания антитела подходящей протеазой или с использованием технологии рекомбинантных ДНК. Например, может быть получена нуклеиновая кислота, которая кодирует вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, которые соединены подходящим пептидным линкером, таким как цепь из 2 до приблизительно 20 глицильных остатков. Нуклеиновую кислоту можно вводить в подходящего хозяина (например, E.coli) с использованием любой подходящей методики (например, трасфекции, трасформации, инфекции) и данного хозяина можно поддерживать в условиях, подходящих для экспрессии одноцепочечного Fv-фрагмента. Различные антигенсвязывающие фрагменты антител могут быть получены с использованием генов антител, в которых один или более стоп-кодонов были введены выше от природного стоп-сайта. Например, экспрессирующая конструкция,кодирующая F(ab')2-участок иммуноглобулиновой тяжелой цепи, может быть сконструирована путем введения трансляционного стоп-кодона на 3'-конце последовательности, кодирующей шарнирный участок тяжелой цепи. Лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды по изобретению могут содержать индивидуальные тяжелые и легкие цепи антител, которые связывают сывороточный альбумин, или участки индивидуальных цепей, которые связывают сывороточный альбумин (например, один VH, V или V). Антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают желаемый сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека), могут быть выбраны из подходящей коллекции природных или искусственных антител или индуцированы против соответствующего иммуногена в подходящем хозяине. Например, антитела могут быть индуцированы путем иммунизации подходящего хозяина (например, мыши, трансгенной мыши с человеческими антителами, крысы, кролика, курицы, козы,примата, не являющегося человеком (например, обезьяны сывороточным альбумином (например, выделенным или очищенным сывороточным альбумином человека) или пептидом сывороточного альбумина (например, пептидом, содержащим по меньшей мере приблизительно 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 33,35, 37 или 40 аминокислотных остатков). Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают сывороточный альбумин, могут быть выбраны также из библиотеки рекомбинантных антител или антигенсвязывающих фрагментов, такой как фаговая дисплейная библиотека. Такие библиотеки могут содержать антитела или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые содержат природные или искусственные аминокислотные последовательности. Например, библиотека может содержатьFab-фрагменты, которые содержат искусственные CDR (например, случайные аминокислотные последовательности) и человеческие каркасные области (см., например, патент США 6300064 (Knappik, etal В других примерах библиотека содержит scFv-фрагменты или dAb (один VH, один V или один V) с разнообразием последовательностей в одной или более CDR (см., например WO 99/20749 (Tomlinson иWinter), WO 03/002609 А 2 (Winter et al.), WO 2004/003019A2 (Winter et al Подходящие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают сывороточный альбумин, включают в себя, например, человеческие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты,гуманизированные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, химерные антитела и их антигенсвя- 17012622 зывающие фрагменты, антитела грызунов (например, мыши, крысы) и их антигенсвязывающие фрагменты и Camelid антитела и их антигенсвязывающие фрагменты. В некоторых воплощениях лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды содержат Camelid VHH,который связывает сывороточный альбумин. Camelid VHH представляют собой полипептиды одноцепочечных иммуноглобулиновых вариабельных доменов, которые происходят из тяжелой цепи антител, которые в природе лишены легких цепей. Такие антитела встречаются у видов семейства верблюдовых(Camelidae), включая верблюда, ламу, альпаку, одногорбого верблюда и гуанако. Молекулы VHH приблизительно в десять раз меньше, чем IgG молекулы, и как одиночные полипептиды являются очень стабильными и устойчивыми к критическим рН и температурным условиям. Подходящие Camelid VHH, которые связывают сывороточный альбумин, включают те, которые раскрыты в WO 2004/041862 (AblynxN.V.) и в данном описании (фиг. 15 и SEQ ID NO: 77-88). В некоторых воплощениях Camelid VHH связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере приблизительно 80%, или по меньшей мере приблизительно 85%,или по меньшей мере приблизительно 90%, или по меньшей мере приблизительно 95%,или по меньшей мере приблизительно 96%, или по меньшей мере приблизительно 97%,или по меньшей мере приблизительно 98%, или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75,SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81,SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87 илиSEQ ID NO: 88. Предпочтительно идентичность аминокислотной последовательности определяют, используя подходящий алгоритм выравнивания последовательностей и подходящие значения параметров по умолчанию, такие как BLAST P (Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87(6):2264-2268(1990. Получение иммунизирующего антигена и производство поликлональных и моноклональных антител можно осуществить с использованием любой подходящей методики. Описаны различные способыWileySons: New York, NY), Chapter 11, (1991. Обычно в тех случаях, когда желательно моноклональное антитело, получают гибридому путем слияния подходящих клеток из иммортализованной (бессмертной) клеточной линии (например, миеломной клеточной линии, такой как SP2/0, P3X63Ag8.653 или гетеромиеломы) с антителопродуцирующими клетками. Антителопродуцирующие клетки могут быть получены из периферической крови или, предпочтительно, из селезенки или лимфатических узлов человека,трансгенных животных с человеческими антителами, или других подходящих животных, которых иммунизировали интересующим антигеном. Клетки, которые продуцируют антитела человеческого происхождения (например, человеческое антитело), могут быть получены с использованием подходящих способов, например слияния человеческой антителопродуцирующей клетки и гетеромиеломы или триомы, или иммортализации активированной человеческой В-клетки путем инфицирования вирусом ЭпштейнаБарра (см., например патент США 6197582 (Trakht); Niedbala et al., Hybridoma, 17:299-304 (1998);Zanella et al., J Immunol Methods, 156:205-215 (1992); Gustafsson et al., Hum Antibodies Hybridomas, 2:2632 (1991. Слитые или иммортализованные антителопродуцирующие клетки (гибридомы) могут быть выделены с использованием селективных условий культивирования и клонированы методом лимитирующего разведения. Клетки, которые продуцируют антитела с желаемой специфичностью, могут быть идентифицированы с использованием подходящего анализа (например, ELISA). Антитела могут быть также получены непосредственно (например, синтезированы или клонированы) из изолированной антигенспецифической антителопродуцирующей клетки (например, клетки из периферической крови или предпочтительно селезенки или лимфатических узлов, определенной для получения антитела с желаемой специфичностью) человека, трансгенных животных с человеческими антителами или других подходящих животных, которых иммунизировали интересующим антигеном (см., например, патент США 5627052 (Schrader. Когда лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид предназначены для введения человеку, тогда антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывает сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека), может представлять собой человеческое, гуманизированное или химерное антитело или антигенсвязывающий фрагмент такого антитела. Эти типы антител и антигенсвязывающих фрагментов являются менее иммуногенными или неиммуногенными у людей и дают хорошо известные преимущества. Например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты или лекарственные гибриды, которые содержат антигенсвязывающий фрагмент человеческого, гуманизированного или химерного антитела, могут быть введены человеку повторно с меньшей эффективностью или без потери эффективности (по сравнению с другими полностью иммуногенными антителами) благодаря наработке человеческих антител, которые связываются с лекарственным конъюгатом или лекарственным гибридом. Когда лекарственный конъю- 18012622 гат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид предназначен для ветеринарного введения, тогда могут быть использованы аналогичные антитела или антигенсвязывающие фрагменты. Например, CDR из мышиного или человеческого антитела могут быть трансплантированы на каркасные области из желаемого животного, такого как лошадь или корова. Человеческие антитела и нуклеиновые кислоты, кодирующие их, могут быть получены, например,из человека или из трансгенных животных с человеческими антителами. Трансгенные животные с человеческими антителами (например, мыши) представляют собой животных, которые способны продуцировать набор человеческих антител, такой как XENOMOUSE (Abgenix, Fremont, CA), HUMAB-MOUSE,KIRIN ТС MOUSE или KM-MOUSE (MEDAREX, Princeton, NJ). Обычно геном трансгенных животных с человеческими антителами изменен таким образом, чтобы включать трансген, содержащий ДНК из человеческого иммуноглобулинового локуса, который может подвергаться функциональной перестройке. Эндогенный иммуноглобулиновый локус у трансгенного животного с человеческими антителами может быть разрушен или делетирован для того, чтобы исключить способность животного производить антитела, кодируемые эндогенным геном. Подходящие способы получения трансгенных животных с человеческими антителами хорошо известны в данной области (см., например, патенты США 5939598 и 6075181 (Kucherlapati et al.), патенты США 5569825, 5545806, 5625126, 5633425, 5661016 и 5789650(1992), Green et al., Nature Genetics. 7:13-21 (1994), Mendez et al., Nature Genetics. 15:146-156 (1997),Tuaillon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90(8):3720-3724 (1993) и Fishwild et al., Nat Biotechnol. 14(7):845851 (1996), содержания каждого из вышеупомянутого включены в данное описание путем ссылки во всех их полноте). Трансгенные животные с человеческими антителами могут быть проиммунизированы подходящим антигеном (например, сывороточным альбумином человека) и антителопродуцирующие клетки могут быть выделены и слиты с образованием гибридом с помощью стандартных способов. Гибридомы, которые продуцируют человеческие антитела, имеющие желательные характеристики (например, специфичность, аффинность), могут быть идентифицированы с использованием любого подходящего анализа (например, ELISA) и, при желании, селектированы и субклонированы с использованием подходящих методов культивирования. Гуманизированные антитела и другие CDR-трансплантированные антитела могут быть получены с использованием любого подходящего способа. CDR из CDR-трансплантированного антитела могут быть получены из подходящего антитела, которое связывает сывороточный альбумин (известного как донорное антитело). Другие источники подходящих CDR включают в себя специфические антитела к природному и искусственному сывороточному альбумину, полученные из источников человеческого или нечеловеческого происхождения, таких как грызуны (например, мышь, крыса, кролик), курица, свинья, коза,примат, не являющийся человеком, (например, обезьяна) или библиотека. Каркасные области гуманизированного антитела имеют предпочтительно человеческое происхождение и могут происходить из любой вариабельной области человеческого антитела, имеющей сходство последовательности с аналогичной или эквивалентной областью (например, вариабельной областью тяжелой цепи или вариабельной областью легкой цепи) антигенсвязывающего участка донорного антитела. Другие источники каркасных областей человеческого происхождения включают в себя консенсусные последовательности человеческих вариабельных областей (см., например, Kettleborough, C.A. et al.,Protein Engineering, 4:773-783 (1991); Carter et al., WO 94/04679; Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins ofImmunologieal Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991. Другие типы CDR-трансплантированных антител могут содержать каркасные области подходящего происхождения, такие как каркасные области, кодируемые генными сегментами антител зародышевой линии из лошади, коровы, собаки, кошки и т.п. Каркасные области человеческого происхождения могут включать аминокислотные замены или перестановки, такие как "обратные мутации", которые заменяют аминокислотный остаток в каркасной области человеческого или животного происхождения на остаток из соответствующего положения донорного антитела. Могут быть произведены одна или более мутаций в каркасной области, включая делеции,вставки и замены одной или более аминокислот. Варианты могут быть получены различными подходящими способами, включая мутагенез донора, не являющегося человеком, или акцепторных человеческих цепей (см., например патенты США 5693762 (Queen et al.) и 5859205 (Adair et al.), полное содержание которых включено в данное описание путем ссылки).- 19012622 Константные области антител, цепей антител (например, тяжелой цепи, легкой цепи) или их фрагменты или участки, если присутствуют, могут происходить из любого подходящего источника. Например, константные области человеческих, гуманизированных и некоторых химерных антител, цепей антител (например, тяжелой цепи, легкой цепи) или их фрагментов или участков, если присутствуют, могут иметь человеческое происхождение и могут происходить из любого подходящего человеческого антитела или цепи антитела. Например, константная область человеческого происхождения или его участок могут происходить из человеческой - или -легкой цепи и/или человеческой - (например, 1-, 2-, 3-,4-), -, - (например, 1-, 2-), - или -тяжелой цепи, включая аллельные варианты. В некоторых воплощениях антитело или антигенсвязывающий фрагмент (например, антитело человеческого происхождения, человеческое антитело) может включать аминокислотные замены или перестановки, которые изменяют или задают функцию (например, эффекторную функцию). Например, константная область человеческого происхождения (например, 1-константная область, 2-константная область) может быть сконструирована так, чтобы уменьшить активацию комплемента и/или связывание Fc-рецептора (см., например, патенты США 5648260 (Winter et al.), 5624821 (Winter et al.) и 5834597 (Tso et al.), полное содержание которых включено в данное описание путем ссылки.) Предпочтительно аминокислотная последовательность константной области человеческого происхождения, которая содержит такие аминокислотные замены или перестановки, по меньшей мере приблизительно на 95% идентична полноразмерной аминокислотной последовательности неизмененной константной области человеческого происхождения,более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 99% идентична полноразмерной аминокислотной последовательности неизмененной константной области человеческого происхождения. Гуманизированные антитела, CDR-трансплантированные антитела или антигенсвязывающие фрагменты гуманизированного или CDR-трансплантированного антитела могут быть получены с использованием любого подходящего способа. Некоторые такие способы хорошо известны в данной области (см.,например, патент США 5225539 (Winter), патент США 5530101 (Queen et al Участки гуманизированного или CDR-трансплантированного антитела (например, CDR, каркасная, константная область) могут быть получены или могут происходить непосредственно из подходящих антител (например, путем синтеза участка de novo) или могут быть получены и экспрессированы нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело или его цепь, имеющие желаемое свойство (например, связывает сывороточный альбумин). Чтобы получить участок цепи, один или более стоп-кодонов можно вводить в желаемое положение. Например, последовательности нуклеиновой кислоты (например, ДНК), кодирующие гуманизированные или CDR-трансплантированные вариабельные области, могут быть сконструированы с использованием способов ПЦР-мутагенеза для изменения существующих последовательностей ДНК (см., например, Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res. 17:5404 (1989. ПЦР-праймеры, кодирующие новые CDR, могут быть гибридизованы с ДНК-матрицей предварительно гуманизированной вариабельной области, в основе которой лежит такая же или очень похожая, человеческая вариабельная область (Sato, K., et al., CancerResearch, 53:851-856 (1993. Если похожая последовательность ДНК не доступна для применения в качестве матрицы, то нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области, может быть сконструирована из синтетических олигонуклеотидов (см., например, Kolbinger, F., Protein Engineering, 8:971-980 (1993. Последовательность, кодирующая сигнальный пептид, также может быть включена в нуклеиновую кислоту (например, во время синтеза, после вставки в вектор). Можно использовать природную сигнальную пептидную последовательность из акцепторного антитела, сигнальную пептидную последовательность из другого антитела или другой подходящей последовательности (см., например, Kettleborough, C.A., Protein Engineering, 4:773-783 (1991. Используя эти способы или другие подходящие способы, можно легко получить варианты. В одном воплощении клонированные вариабельные области могут быть мутированы и можно выбрать последовательности, кодирующие варианты с желаемой специфичностью (например, из фаговой библиотеки; см.,например, патент США 5514548 (Krebber et al.) и WO 93/06213 (Hoogenboom et al Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают сывороточный альбумин, могут представлять собой химерное антитело или антигенсвязывающий фрагмент химерного антитела. Химерное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область из одного вида(например, мыши) и, по меньшей мере, участок константной области из другого вида (например, человека). Химерные антитела и антигенсвязывающие фрагменты химерных антител могут быть получены с использованием любого подходящего способа. Некоторые подходящие способы хорошо известны в данной области (см., например, патент США 4816567 (Cabilly et al.), патент США 5116946 (Capon etal Предпочтительный способ получения антигенсвязывающих фрагментов антител, которые связывают сывороточный альбумин, включает отбор антигенсвязывающего фрагмента (например, scFv, dAb),который обладает специфичностью связывания по отношению к желаемому сывороточному альбумину,из набора антигенсвязывающих фрагментов. Например, как раскрыто в данном описании, dAb, которые связывают сывороточный альбумин, могут быть выбраны из подходящей фаговой дисплейной библиотеки. Было описано множество подходящих бактериофаговых дисплейных библиотек и способов отбораet al., патент США 6555313 В 1 (включенный в данное описание путем ссылки); Johnson et al., патент США 5733743 (включенный в данное описание путем ссылки); McCafferty et al., патент США 5969108 (включенный в данное описание путем ссылки); Mulligan-Kehoe, патент США 5702892(включенный в данное описание путем ссылки); Winter, G. et al., Annu. Rev. Immunol. 12:433-455 (1994);(Winter et al.); WO 2004/003019A2 (Winter et al Полипептиды, представленные в бактериофаговой библиотеке, могут быть представлены на любом подходящем бактериофаге, таком как нитевидный фаг (например, fd, M13, F1), литический фаг (например, Т 4, T7, лямбда) или РНК-фаг (например, MS2), и выбраны для связывания с сывороточным альбумином (например, сывороточным альбумином человека). Обычно используют библиотеку фага, который представляет спектр полипептидов в виде гибридных белков с подходящим белком оболочки фага. Такая библиотека может быть получена с использованием любых подходящих способов, таких как введение библиотеки фаговых векторов или фагмидных векторов, кодирующих представленные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, в подходящих бактерий-хозяев и культивирование полученных в результате бактерий для получения фага (например, с использованием подходящего хелперного фага или комплементирующей плазмиды, при желании). Библиотека фага может быть получена из такой культуры с использованием любого подходящего способа,такого как осаждение и центрифугирование. Библиотека может содержать спектр антител или их антигенсвязывающих фрагментов, который содержит любое желаемое количество из разнообразия аминокислотных последовательностей. Например,этот спектр может содержать антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые имеют аминокислотные последовательности, соответствующие встречающимся в природе антителам из желаемого организма, и/или могут содержать одну или более областей случайных или рандомизированных аминокислотных последовательностей (например, CDR-последовательности). Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты в таком спектре или библиотеке могут содержать установленные области случайных или рандомизированных аминокислотных последовательностей и области общей аминокислотной последовательности. В некоторых воплощениях все или, по существу, все полипептиды в спектре представляют собой желаемый тип антигенсвязывающего фрагмента антитела (например, человеческий VH или человеческий VL). Например, каждый полипептид в спектре может содержать VH, VL или FV (например, одноцепочечный FV). Разнообразие аминокислотных последовательностей может быть введено в любую желаемую область антител или их антигенсвязывающих фрагментов с использованием любого подходящего способа. Например, разнообразие аминокислотных последовательностей может быть введено в область-мишень,такую как область, определяющая комплементарность вариабельного домена антитела, путем приготовления библиотеки нуклеиновых кислот, которые кодируют разнообразные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, с использованием любых подходящих способов мутагенеза (например, ПЦР с низкой точностью (low fidelity), олигонуклеотид-опосредованного или сайт-направленного мутагенеза,диверсификации с использованием NNK кодонов) или любого другого подходящего способа. При желании, область антител или их антигенсвязывающих фрагментов, подлежащих диверсификации, может быть рандомизирована. Подходящая фаговая дисплейная библиотека может быть использована для выбранных антител или антигенсвязывающих фрагментов антител, которые связывают сывороточный альбумин и имеют другие полезные свойства. Например, могут быть выбраны антитела или антигенсвязывающие фрагменты, которые устойчивы к агрегации при разворачивании. Агрегация зависит от концентрации полипептида и,как полагают, во многих случаях обусловлена частично свернутыми или несвернутыми промежуточными формами. Факторы и условия, которые поддерживают частично свернутые промежуточные формы,такие как повышенная температура и высокая концентрация полипептида, способствуют необратимой агрегации (Fink, A.L., FoldingDesign 3:R1-R23 (1998. Например, хранение очищенных полипептидов в концентрированной форме, такой как лиофилизированный препарат, часто приводит к необратимой агрегации по меньшей мере части полипептидов. Также производство полипептида путем экспрессии в биологических системах, таких как E.coli, часто приводит к образованию телец включений, которые содержат агрегированные полипептиды. Извлечение активных полипептидов из телец включений может быть очень трудным и может требовать добавления дополнительных стадий, таких как стадия рефолдинга (повторного сворачивания) в биологической продуцирующей системе. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые устойчивы к агрегации и обратимо разворачиваются при нагревании, могут быть выбраны из подходящей фаговой дисплейной библиотеки. Обычно фаговую дисплейную библиотеку, содержащую спектр представленных антител или их антигенсвязывающих фрагментов, нагревают до температуры (Ts), при которой по меньшей мере часть представленных антител или их антигенсвязывающих фрагментов разворачивается, затем охлаждают до температуры(Тс), где TsTc, в результате чего по меньшей мере часть антител или их антигенсвязывающих фрагментов повторно сворачивалась, а часть полипептидов агрегировала. Затем антитела или их антигенсвязы- 21012622 вающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются и связывают сывороточный альбумин, извлекают при температуре (Tr). Извлеченное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обратимо разворачиваются, имеют температуру плавления (Tm), и предпочтительно спектр нагревали до Ts,охлаждали до Тс и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обратимо разворачиваются, выделяли при Tr, такой, что TsTmTc, и TsTmTr. Обычно фаговую дисплейную библиотеку нагревают приблизительно до 80 С и охлаждают приблизительно до комнатной температуры или приблизительно 4 С перед отбором. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обратимо разворачиваются и устойчивы к агрегации, могут быть также разработаны или сконструированы путем замещения определенного аминокислотного остатка остатками, которые обеспечивают способность обратимо разворачиваться. Способы отбора и разработки или конструирования антител или их антигенсвязывающих фрагментов, которые обратимо разворачиваются, детально рассмотрены в WO 2004/101790(Jespers et al.) и предварительных заявках на патент США 60/470340 (поданная 14 мая 2003 г.) и 60/554021 (поданная 17 марта 2004 г.), содержание которых (WO 2004/101790 и обеих вышеупомянутых предварительных заявок на патент США) включено в данное описание путем этой ссылки. Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются и устойчивы к агрегации, дают некоторые преимущества. Например, благодаря их устойчивости к агрегации, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются, могут быть легко получены с высоким выходом в виде растворимых белков путем экспрессии с использованием подходящей биологической продуцирующей системы, такой как E.coli. Кроме того, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются, могут быть приготовлены в виде препарата и/или храниться при более высоких концентрациях, чем стандартные полипептиды, и с меньшей агрегацией и потерей активности. DOM7h-26 (SEQ ID NO: 20) представляет собой человеческий VH, который обратимо разворачивается. Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывает сывороточный альбумин, содержит вариабельный домен (VH, V, V), в котором одна или более каркасных областей (FR, framework region) содержат (а) аминокислотную последовательность человеческой каркасной области, (b) по меньшей мере 8 смежных аминокислот аминокислотной последовательности человеческой каркасной области или (с) аминокислотную последовательность, кодируемую генным сегментом антител человеческой зародышевой линии, где указанные каркасные области являются такими, как определено Кабатом (Kabat). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность одной или более каркасных областей является такой же, как аминокислотная последовательность соответствующей каркасной области, кодируемой генным сегментом антител человеческой зародышевой линии, или аминокислотные последовательности одной или более указанных каркасных областей вместе содержат вплоть до 5 аминокислотных различий относительно аминокислотной последовательности указанной соответствующей каркасной области, кодируемой генным сегментом антител человеческой зародышевой линии. В других воплощениях аминокислотные последовательности FR1, FR2, FR3 и FR4 являются такими же, как аминокислотные последовательности соответствующих каркасных областей, кодируемых генным сегментом антител человеческой зародышевой линии, или аминокислотные последовательностиFR1, FR2, FR3 и FR4 вместе содержат вплоть до 10 аминокислотных различий относительно аминокислотных последовательностей соответствующих каркасных областей, кодируемых генными сегментами антител указанной человеческой зародышевой линии. В других воплощениях аминокислотные последовательности указанных FR1, FR2 и FR3 являются такими же, как аминокислотные последовательности соответствующих каркасных областей, кодируемых генным сегментом антител указанной человеческой зародышевой линии. В конкретных воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, содержит иммуноглобулиновый вариабельный домен (например, VH, VL) на основе последовательности из человеческой зародышевой линии и, при желании, может иметь одну или более диверсифицированных областей, таких как области, определяющие комплементарность. Подходящая последовательность VH из человеческой зародышевой линии содержит, например, последовательности,кодируемые VH генными сегментами DP4, DP7, DP8, DP9, DP10, DP31, DP33, DP45, DP46, DP47, DP49,DP50, DP51, DP53, DP54, DP65, DP66, DP67, DP68 и DP69 и JH сегментами JH1, JH2, JH3, JH4, JH4b, JH5 и JH6. Подходящая последовательность VL из человеческой зародышевой линии содержит, например,последовательности, кодируемые V генными сегментами DPK1, DPK2, DPK3, DPK4, DPK5, DPK6,DPK7, DPK8, DPK9, DPK10, DPK12, DPK13, DPK15, DPK16, DPK18, DPK19, DPK20, DPK21, DPK22,DPK23, DPK24, DPK25, DPK26 и DPK28 и J сегментами J1, J2, J3, J4 и J5. В некоторых воплощениях лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид не содержат антитело мыши, крысы и/или кролика, которое связывает сывороточный альбумин, или антигенсвязывающий фрагмент такого антитела.- 22012622 Антигенсвязывающий фрагмент может связывать сывороточный альбумин с любой желаемой аффинностью, on rate (скоростью ассоциации) и off rate (скоростью диссоциации). Для получения желаемого периода полувыведения конкретного лекарства из сыворотки могут быть выбраны аффинность (KD),on rate (Kon (константа скорости ассоциации) или ka (константа аффинности и off rate (Koff (константа скорости диссоциации) или kd (равновесная константа диссоциации. Например, может быть желательным получение максимального периода полувыведения из сыворотки для лекарства, которое нейтрализует воспалительный медиатор хронического воспалительного расстройства (например, dAb, которое связывает и нейтрализует воспалительный цитокин), тогда как более короткий период полувыведения может быть желательным для лекарства, которое имеет некоторую токсичность (например, химиотерапевтический агент). Для связывания с сывороточным альбумином предпочтительным обычно является быстрая скорость ассоциации и быстрая или умеренная скорость диссоциации. Лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды, которые содержат антигенсвязывающий фрагмент с этими характеристиками, будут быстро связывать сывороточный альбумин после введения и быстро диссоциировать и снова связывать сывороточный альбумин. Эти характеристики будут снижать быстрый клиренс лекарства (например, через почки), но все же обеспечивать эффективную доставку и доступ к лекарству-мишени. Антигенсвязывающий фрагмент, который связывает сывороточный альбумин (например, dAb),обычно связывает с KD от приблизительно 1 нМ до приблизительно 500 мкМ. В некоторых воплощениях антигенсвязывающий фрагмент связывает сывороточный альбумин с KD (KD=Koff(kd)/Kon(ka от приблизительно 10 до приблизительно 100 нМ, или от приблизительно 100 нМ до приблизительно 500 нМ,или от приблизительно 500 нМ до приблизительно 5 мМ, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса (например, с использованием прибора BIACORE). В конкретных воплощениях лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид содержит и антигенсвязывающий фрагмент антитела (например, dAb), которое связывает сывороточный альбумин(например, сывороточный альбумин человека) с KD приблизительно 50 нМ, или приблизительно 70 нМ,или приблизительно 100 нМ, или приблизительно 150 нМ, или приблизительно 200 нМ. Улучшенные фармакокинетические свойства (например, пролонгированный t1/2, увеличенная AUC) лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов и лекарственных гибридов, раскрытых в данном описании, могут коррелировать с аффинностью антигенсвязывающего фрагмента, который связывает сывороточный альбумин. Соответственно, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды, которые имеют улучшенные фармакокинетические свойства,обычно могут быть получены с использованием антигенсвязывающего фрагмента, который связывает сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека) с высокой аффинностью (например, KD приблизительно 500 нМ или меньше, приблизительно 250 нМ или меньше, приблизительно 100 нМ или меньше, приблизительно 50 нМ или меньше, приблизительно 10 нМ или меньше, или приблизительно 1 нМ или меньше, или приблизительно 100 пМ или меньше). Предпочтительно лекарство, которое конъюгировано или слито с антигенсвязывающим фрагментом, который связывает сывороточный альбумин, связывается с его мишенью (мишенью лекарства) с аффинностью (KD), которая выше, чем аффинность антигенсвязывающего фрагмента для сывороточного альбумина, и/или Koff (kd), которая быстрее, чем Koff антигенсвязывающего фрагмента для сывороточного альбумина, как измерено методом поверхностного плазменного резонанса (например, с использованием прибора BIACORE). Например, лекарство может связывать свою мишень с аффинностью,которая от приблизительно 1 до приблизительно 100000, или от приблизительно 100 до приблизительно 100000, или от приблизительно 1000 до приблизительно 100000, или от приблизительно 10000 до приблизительно 100000 раз выше, чем аффинность антигенсвязывающего фрагмента, который связываетSA для SA. Например, антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает SA, может связывать с аффинностью приблизительно 10 мкМ, тогда как лекарство связывает свою мишень с аффинностью приблизительно 100 пМ. В конкретных воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляет собой dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека. Например, V dAb, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей изSEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26, или VH dAb, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23. В других воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляет собой dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит CDR из любых вышеупомянутых аминокислотных последовательностей. В других воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляет собой dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере приблизительно 80%, или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%, или по меньшей мере приблизительно 95%, или- 23012622 по меньшей мере приблизительно 96%, или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%, или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13,SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 илиSEQ ID NO: 23. Идентичность аминокислотной последовательности предпочтительно определяют с использованием подходящего алгоритма выравнивания последовательностей и подходящих значений параметров по умолчанию, таких как BLAST P (Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87(6):22642268 (1990. Лекарства. Некоторые лекарственные композиции по изобретению (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты) могут содержать любое лекарство (например, органическую молекулу низкой молекулярной массы, нуклеиновую кислоту, полипептид), которое может быть введено индивидууму для получения положительного терапевтического или диагностического эффекта, например, благодаря связыванию с биологической молекулой-мишенью и/или изменение функции биологической молекулы-мишени у индивидуума. Другие лекарственные композиции по изобретению (например,лекарственные гибриды) могут содержать полипептидное или пептидное лекарство. В предпочтительных воплощениях лекарственных гибридов лекарство не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела(например, VH, V, V). Подходящие лекарства для применения в изобретении включают в себя, например, иммуносупрессорные агенты (например, циклоспорин А, рапамицин, FK506, преднизон), противовирусные агенты(ацикловир, ганцикловир, индинавир), антибиотики (пенициллин, миноциклин, тетрациклин), противовоспалительные агенты (аспирин, ибупрофен, преднизон), цитотоксины или цитотоксические агенты(например, паклитаксел, цитохалазин В, грамицидин D, бромистый этидий, эметин, митомицин С, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дигидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин,тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, и аналоги или гомологи любых вышеупомянутых агентов. Подходящие лекарства также включают в себя антиметаболиты (например, метотрексат,6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацилдекарбазин), алкилирующие агенты (например,мехлоретамин, тиоэпахлорамбуцил (thioepachlorambucil), CC-1065, мелфалан, кармустин (BSNU), ломустин (CCNU), циклофосфамид, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цисдихлордиамин платины (II) (DDP, цисплатин), антрациклины (например, даунорубицин (ранее дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например, дактиномицин (ранее актиномицин), блеомицин, митрамицин и антрамицин (АМС, радионуклиды (например, йод-125, -126), иттрий (например, иттрий-90,-91) и празеодимий (например, празеодимий-144, -145), и ингибиторы протеаз (например, ингибиторы матриксных металлопротеиназ). Другие подходящие лекарства представляют собой нуклеиновые кислоты, такие как антисмысловые нуклеиновые кислоты и РНК-i. Калихеамицин также подходит для применения в данном изобретении. Подходящие лекарства также включают в себя аналгезирующие агенты, включая наркотики (например, кодеин, налмефен, налоксон, фентанил, меперидин, морфин, трамадол, пропоксифен, оксикодон,метадон, налбуфин), нестероидные противовоспалительные агенты (например, индометацин, кеторолак,артротек, ибупрофен, напроксен, салицилат, целекоксиб, рофекоксиб), ацетаминофен, капсаицин, зиконотид и т.п. В некоторых воплощениях лекарство представляет собой полипептидный токсин, например токсин,такой как абрин, рицин А, псевдомонадный экзотоксин или дифтерийный токсин. Другие подходящие полипептидные лекарства включают в себя антитела или антигенсвязывающие фрагменты (например,dAb) антител, полипептидных агонистов, активаторов, стимуляторов секреции, антагонистов или ингибиторов. Например, полипептидное или пептидное лекарство может связывать и являться агонистом или антагонистом клеточного поверхностного белка, такого как антиген CD, цитокиновый рецептор (например, интерлейкиновый рецептор, хемокиновый рецептор), адгезивная молекула или костимулирующая молекула. Например, полипептидное лекарство может связывать цитокин, факторы роста, цитокиновый рецептор, рецептор фактора роста и другой лиганд-мишень, которые включают в себя, но не ограничиваются этим: ApoE, Apo-SAA, BDNF, кардиотрофин-1, СЕА, CD40, лиганд CD40, CD56, CD38, CD138,EGF, рецептор EGF, ENA-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, FAP, FGF-кислый, FGF-основный, фактор роста фибробластов-10, FLT3 лиганд, фракталкин (Fractalkine) (СХ 3 С), GDNF, G-CSF, GM-CSF,GF-1, сывороточный альбумин человека, инсулин, IFN-, IGF-I, IGF-II, IL-1, IL-1, рецептор IL-1, IL-2,IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 (72 а.к.), IL-8 (77 а.к.), IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17,IL-18 (IGIF), ингибин , ингибин , IP-10, фактор роста кератиноцитов-2 (KGF-2), KGF, лептин, LIF,лимфотактин, Мюллеров ингибиторующий фактор (Mullerian), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, M-CSF, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), МСР-1 (MCAF),МСР-2, МСР-3, МСР-4, MDC (67 а.к.), MDC (69 а.к.), MIG, MIP-1, MIP-1, MIP-3, MIP-3, MIP-4,- 24012622 миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (MPIF-1), NAP-2, неуртурин (Neurturin), фактор роста нервов, -NGF, NT-3, NT-4, онкостатин М, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PF-4, RANTES,SDF1, SDF1, SCF, SCGF, стволовый клеточный фактор (SCF), TARC, TGF-, TGF-, TGF-2, TGF-3,фактор некроза опухолей (TNF), TNF-, TNF-, рецептор TNF типа I, рецептор TNF типа II, TNIL-1,TPO, VEGF, VEGF A, VEGF B, VEGF C, VEGF D, рецептор VEGF типа 1, рецептор VEGF типа 2, рецептор VEGF типа 3, GCP-2, GRO/MGSA, GRO-, GRO-, HCC1, 1-309, HER 1, HER 2, HER 3 и HER 4. Следует понимать, что этот перечень никоим образом не является исчерпывающим. Подходящие лекарства также включают в себя гормоны, включая гормон гипофиза (РТН), адренокортикотропный гормон (АСТН), ренин, гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (LHRH),гонадотропин-высвобождающий гормон (GnRH), лютеинизирующий гормон (LH), фолликулостимулирующий гормон (FSH), альдостерон и т.п. Подходящие лекарства также включают в себя фактор роста кератиноцитов, интерфероны (например, IFN-, IFN-, IFN-), эритропоэтин (ЕРО), протеазы, эластазы,аналоги, агонисты и антагонисты LHRH, агонисты опиоидных рецепторов, такие как агонисты каппаопиоидных рецепторов (например, динорфин А), кальцитонин и аналоги кальцитонина, антидиуретический гормон (вазопрессин), антагонисты окситоцина, вазоактивный интестинальный пептид, ингибиторы тромбина, фактор Виллебранда, поверхностно-активные вещества и яд улитки (например, зиконотид). Подходящие лекарства также включают в себя пептиды и полипептиды, которые имеют противораковые активности (например, ингибирующие пролиферацию, ингибирующие рост, индуцирующие апоптоз, ингибирующие метастазы, ингибирующая адгезию, ингибирующие неоваскуляризацию). Некоторые такие пептиды и полипептиды известны в данной области (см., например Janin Y.L., Amino Acids, 25:1-40(2003). Полное содержание этой ссылки, в частности пептиды и полипептиды, раскрытые в ней, включены в данное описание путем ссылки). Аминокислотные последовательности некоторых таких пептидов представлены в табл. 8. Другие подходящие лекарства включают в себя пептиды и полипептиды, которые обладают противовирусной активностью. Некоторые такие пептиды и полипептиды известны в данной области, например пептиды и полипептиды, раскрытые в Giannecchini, et al., J. Viro., 77(6):3724-33 (2003); Wang, J., et(2001); Bultmann, H., et al., J. Virol, 75(6):2634-45 (2001); Egal, M., et al., Int. J. Antimicrob. Agents,13(7):57-60 (1999) и Robinson, W.E., Jr., J. Leukoc. Biol., 63(7):94-100 (1998). Полное содержание этих ссылок, в частности пептиды и полипептиды, раскрытые в них, включены в данное описание путем ссылки. Эти пептиды и полипептиды являются примерами лекарств, которые могут быть использованы в композициях, лекарственных гибридах, лекарственных конъюгатах, нековалентных лекарственных конъюгатах по настоящему изобретению. Полипептидное лекарство может представлять собой также цитокин или фактор роста, или растворимый участок рецептора (например, рецептор цитокина, рецептор фактора роста, рецептор гормона) или другой полипептид, такой как полипептиды, перечисленные выше. Например, подходящие полипептидные лекарства также включают в себя агонисты и антагонисты рецепторов (например, рецептора фактора роста, рецептора цитокина, рецептора гормона), такие как антагонист рецептора интерлейкина-1(Eisenberg et al., Nature, 343:341-346 (1990, агонисты рецептора тромбопоэтина (например, GW 395058(de Serres et al., Stem Cells, 17:316-326 (1999, антагонисты рецептора меланокортина (например, антагонисты MCR-4 (Cepoi et al., Brain Res. 1000:64-71 (2004, ангинекс, 6DBF7 (Mayo et al., J. Biol. Chem. 278:45746-45752 (2003, миметики хемокина (например, миметики RANTES (Nardese et al., Nat. Struct.Biol. 8:611-615 (2001, гормон роста (например, гормон роста человека), аналоги гормона роста и стимуляторы секреции гормона роста (например, СР-424391 (MacAndrew et al., Eur. J. Pharmacol. 432:195-202(2001, миметики гормона, высвобождающего гормон роста (например, МК-677 (Chapman et al., J. Clin.Endocrinol Metab. 82:3455-3463 (1997, ингибиторы клеточных взаимодействий адгезивных молекул (например, LFA-l/ICAM-1, VLA-l/VCAM-1 (Yusuf-Makagiansar et al., Med. Res. Rev. 22:146-167 (2002, миметики интерферона (например, SYR6 (Sato et al., Biochem. J. 371(Pt.2):603-608 (2003), миметики герцептина (Nature Biotechnol. 18:137 (2000, ингибиторы представления антигена (Bolin et al., J. Med. Chem. 43:2135-2148 (2000, антагонисты GPIIB/IIIA (например, FK633 (Aoki et al., Thromb. Res. 81:439-450- 25012622 Дополнительные подходящие пептидные и полипептидные лекарства включают в себя пептидные антагонисты, которые связывают рецептор IL-1 типа 1 человека (например, AF 11377(J=1-азетидин-2-карбоновая кислота), FEWTPGYWQJY (SEQ ID NO: 58), FEWTPGWYQJY (SEQ ID NO: 59), FEWTPGWYQJYALPL (SEQ ID NO: 60) или любую из вышеупомянутых последовательностей, возможно содержащую ацилированный аминоконец и/или аминированный карбоксильный конец (Akeson etal., J. Biol. Chem. 271:30517-305123 (1996, пептидные антагонисты TNFопосредованной цитотоксичности (например, те, которые раскрыты в Chirinos-Rojas et al., J. Immunol. 161:5621-5626 (1998, пептидные агонисты рецептора эритропоэтина (например, те, которые раскрыты в McConnel et al., Biol. Chem. 379:1279-1286 (1998) или Wrighton et al., Science, 273:458-464 (1996, глюкагон-подобный пептид-1(GLP-1, например GLP-1(7-37), GLP-1(7-36)амид и его аналоги (см., например Ritzel U. et al., J. Endocrinology 159:93-102 (1998 и интерфероны (например, INF-, INF-, INF-). Дополнительные подходящие полипептидные и пептидные лекарства включают в себя ингибиторы интегрина (например, RGDпептиды, такие как H-Glu[цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)]2 (Janssen, M.X., et al., Cancer Research 62:61466151 (2002, цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) (Kantlehner M., et al., Agnew. Chem. Int. Ed. 38:560 (1999,цикло(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys) (Haubner, R., et al., J. Nucl. Med. 42:326-336 (2001, белки, инактивирующие рибосомы (RIP), такие как сапорин (например, SEQ ID NO: 67), ингибиторы матриксных металлопротеиназ (например, патент США 5616605) и противовирусные пептиды и полипептиды, такие как слитые ингибиторы ВИЧ (например, Т-1249 и Т-20 (FUZEON (энфувиртид); Trimeris Inc.), и растворимые антагонисты рецепторов, такие как иммуноадгезины (например, LFA3-Ig, CTLA4-Ig). Противомикробные полипептидные и пептидные лекарства также подходят для применения в изобретении. Примеры подходящих противомикробных полипептидных и пептидных лекарств включают в себя аденорегулин, дермцидин-1L, кателицидины (например, кателицидин-подобный пептид, человеческий LL-37/hCAP-18), дефензины, включая -дефензины (например, нейтрофильный пептид 1 человека(например, гистатин-1, гистатин-3, гистатин-5), лактоферрицинпроисходящий пептид и родственные пептиды (см. Tomita M., et al., Acta Paediatr. Jpn. 36:585-591 (1994) и Strom, M.B., et al. Biochem Cell Biol. 80:65-74 (2002. Лекарственные гибриды. Лекарственные гибриды по изобретению представляют собой гибридные белки, которые содержат непрерывную полипептидную цепь, содержащую антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин в качестве первой группировки, связанный со второй группировкой, которая представляет собой полипептидное лекарство. Первые и вторые группировки могут быть непосредственно связаны друг с другом через пептидную связь или через подходящую аминокислоту, или пептидный или полипептидный линкер. В соответствующих случаях могут присутствовать дополнительные группировки (например, третья, четвертая) и/или линкерные последовательности. Первая группировка может находиться в N-концевом положении, С-концевом положении или в пределах второй группировки (т.е. полипептидного лекарства). В некоторых воплощениях каждая группировка может присутствовать в более чем одной копии. Например, лекарственная гибрид может содержать две или более первых группировок, причем каждая содержит антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин (например, VH, который связывает сывороточный альбумин человека, и VL, который связывает сывороточный альбумин человека, или два или более VH или VL, которые связывают сывороточный альбумин человека). В некоторых воплощениях лекарственный гибрид представляет собой непрерывную полипептидную цепь, которая имеет формулу или где X представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению к первой мишени;Y представляет собой одоцепочечный антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину;Z представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению ко второй мишени; а, b, с и d, каждый независимо, отсутствуют или включают от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков;n3 означает от 0 до приблизительно 10,при условии, что когда n1 и n2, оба, означают 1 и n4 означает 0, тогда X не содержит цепь антитела или- 26012622 фрагмент цепи антитела. В одном воплощении ни X, ни Z не содержат цепь антитела или фрагмент цепи антитела. В одном воплощении n1 означает 1, n3 означает 1 и n2 означает 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9. Предпочтительно Y представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Более предпочтительно, Y представляет собой dAb (например, VH, V или V), которое связывает сывороточный альбумин человека. В конкретном воплощении X или Z означает IL-1ra человека или функциональный вариант IL-1ra человека. В некоторых воплощениях Y содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26. В других воплощениях Y содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 иSEQ ID NO: 23. В других воплощениях лекарственный гибрид содержит группировки X' и Y', где X' представляет собой полипептидное лекарство при условии, что X' не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; и Y' представляет собой одноцепочечный антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Предпочтительно Y' представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Более предпочтительно, Y' представляет собой dAb (например, VH, V или V), которое связывает сывороточный альбумин человека. X' может быть расположен на аминоконце относительно Y', или Y' может быть расположен на аминоконце относительно X'. В некоторых воплощениях X' и Y' разделены аминокислотой или пептидным или полипептидным линкером, который содержит от 2 до приблизительно 100 аминокислот. В конкретном воплощении X' представляет собой IL-1ra человека или функциональный вариант IL-1ra человека. В некоторых воплощениях Y' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26. В других воплощениях Y' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 иSEQ ID NO: 23. В конкретных воплощениях лекарственный гибрид содержит dAb, которое связывает сывороточный альбумин, и IL-1ra человека (например, SEQ ID NO: 28). Предпочтительно dAb связывает сывороточный альбумин человека и содержит человеческие каркасные области. В других воплощениях лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат содержит функциональный вариант IL-1ra человека, который имеет по меньшей мере приблизительно 80%,или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%,или по меньшей мере приблизительно 95%, или по меньшей мере приблизительно 96%,или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%,или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности со зрелой 152 аминокислотной формой IL-1ra человека и является антагонистом рецептора интерлейкина-1 типа 1 человека (см. Eisenberg et al., Nature 343:341-346 (1990. Вариант может содержать одну или более дополнительных аминокислот (например, содержит 153, или 154, или более аминокислот). Лекарственные гибриды по изобретению могут быть получены с использованием любого подходящего способа. Например, некоторые воплощения могут быть получены путем вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей лекарственный гибрид, в подходящий экспрессирующем векторе. Полученную конструкцию затем вводят в подходящую клетку-хозяина для экспрессии. После экспрессии гибридный белок может быть выделен или очищен из клеточного лизата или предпочтительно из культуральных сред или периплазмы с использованием любого подходящего способа (см., например, Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel, F.M. et al., eds., vol. 2, Suppl. 26, p. 16.4.1-16.7.8 (1991. Подходящие экспрессирующие векторы могут содержать множество компонентов, например точку начала (origin) репликации, селектируемый маркерный ген, один или более элементов, контролирующих экспрессию, таких как элемент, контролирующий транскрипцию (например, промотор, энхансер, терминатор), и/или один или более трансляционных сигналов, сигнальную последовательность или лидерную последовательность и т.п. Элементы, контролирующие экспрессию, и сигнальная последовательность,если присутствуют, могут быть предоставлены вектором или другим источником. Например, транскрипционные и/или трансляционные регуляторные последовательности клонированной нуклеиновой кислоты, кодирующей цепь антитела, могут быть использованы для прямой экспрессии.- 27012622 Для экспрессии в желаемой клетке-хозяине может быть предложен промотор. Промоторы могут быть конститутивными или индуцибельными. Например, промотор может быть функциональным образом связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей антитело, цепь антитела или его участок, таким образом, что он направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты. Имеются различные подходящие промоторы для прокариотических (например, lac, tac, Т 3, Т 7 промоторы для Е.coli) и эукариотических (например,ранний или поздний промотор обезьяньего вируса 40, промотор в длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса, промотор цитомегаловируса, поздний промотор аденовируса) хозяев. Кроме того, экспрессирующие векторы обычно содержат селектируемый маркер для селекции клеток-хозяев, несущих данный вектор, и в случае реплицируемого экспрессирующего вектора - точку начала репликации. Гены, кодирующие продукты, которые придают устойчивость к антибиотикам или лекарствам, являются обычными селектируемыми маркерами и могут быть использованы в прокариотических(например, ген лактамазы (устойчивость к ампициллину), ген Tet для устойчивости к тетрациклину) и эукариотических клетках (например, гены устойчивости к неомицину (G418 или генетицин), gpt (микофеноловая кислота), ампициллину или гигромицину). Дигидрофолатредуктазные маркерные гены позволяют осуществить селекцию метотрексатом в различных хозяевах. Гены, кодирующие генный продукт ауксотрофных маркеров хозяина (например, LEU2, URA3, HIS3), часто используют в качестве селектируемых маркеров в дрожжах. Предполагается также применение вирусных (например, бакуловирусных) или фаговых векторов и векторов, которые способны встраиваться в геном клетки-хозяина, таких как ретровирусные векторы. Подходящие экспрессирующие векторы для экспрессии в клетках млекопитающих и прокариотических клетках (E.coli), клетках насекомых (клетках Drosophila Schnieder S2, Sf9) и дрожжах (P.methanolica, P.pastoris, S.cerevisiae) хорошо известны в данной области. Предложены рекомбинантные клетки-хозяева, которые экспрессируют лекарственный гибрид, и способ получения лекарственного гибрида, как раскрыто в данном описании. Рекомбинантная клеткахозяин содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую лекарственный гибрид. Лекарственные гибриды могут быть получены путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, в подходящей клетке-хозяине или с использованием других подходящих способов. Например, экспрессирующие конструкции, раскрытые в данном описании, могут быть введены в подходящую клетку-хозяина, и полученную клетку можно поддерживать (например, в культуре, в животном) в условиях, подходящих для экспрессии данных конструкций. Подходящие клетки-хозяева могут быть прокариотическими, включая бактериальные клетки, такие как E.coli, В.subtilis и/или другие подходящие бактерии, эукариотическими, такими как грибковые или дрожжевые клетки (например, Pichia pastoris,Aspergillus species, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Neurospora crassa), или другие низшие эукариотические клетки, и клетками высших эукариот, такими как клетки насекомых (например,клетки насекомых Sf9 (WO 94/26087 (O'Connor или млекопитающих (например, клетки COS, такие какBiology, Greene Publishing Associates and John WileySons Inc., (1993. Изобретение также включает способ получения лекарственного гибрида, включающий поддержание рекомбинантной клетки-хозяина по изобретению в условиях, подходящих для экспрессии лекарственного гибрида. При желании, способ может дополнительно включать стадию выделения или регенерации лекарственного гибрида. В другом воплощении компоненты лекарственного гибрида (например,dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека и IL-1ra) собирают вместе химическим путем для создания непрерывной полипептидной цепи. Конъюгаты. В другом аспекте согласно изобретению предложены конъюгаты, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, связанный с лекарством. Такие конъюгаты включают в себя "лекарственные конъюгаты", содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано ковалентно, и "нековалентные лекарственные конъюгаты", содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано нековалентно. Предпочтительно конъюгаты являются достаточно стабильными, так что антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, и лекарство остаются, по существу, связанными (либо ковалентно, либо нековалентно) друг с другом в условиях in vivo (например, при введении человеку). Предпочтительно не более чем приблизительно 20%, не более чем приблизительно 15%, не более чем приблизительно 10%, не более чем приблизительно 9%, не более чем приблизительно 8%, не более чем приблизительно 7%, не более чем приблизительно 6%, не более чем приблизительно 5%, не более чем приблизительно 4%, не более чем приблизительно 3%, не более чем приблизительно 2%, не более чем приблизительно 1% или, по существу, ни один из конъюгатов не диссоциирует или не распадается с высвобождением лекарства и антигенсвязывающего фрагмента в условиях in vivo.- 28012622 Например, стабильность в условиях "in vivo" может быть легко оценена путем инкубации лекарственного конъюгата или нековалентного лекарственного конъюгата в течение 24 ч в сыворотке (например,сыворотке человека) при 37 С. В одном из примеров такого способа одинаковые количества лекарственного конъюгата и неконъюгированного лекарства разбавляют в двух разных флаконах сыворотки. Половину содержимого каждого флакона сразу замораживают при -20 С, а другую половину инкубируют в течение 24 ч при 37 С. Все четыре образца могут быть затем проанализированы с использованием любого подходящего способа, такого как ПААГ-ДСН (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия) и/или Вестерн-блоттинг. Вестерн-блоты могут быть исследованы с использованием антитела, которое связывает лекарство. Если диссоциации не произошло, то все лекарство на дорожках с лекарственным конъюгатом будет двигаться на уровне размера лекарственного конъюгата. Для оценки стабильности в условиях "in vivo" можно использовать многие другие подходящие способы, например анализ полученных образцов, как описано выше, с использованием подходящих аналитических способов, таких как хроматография (например, гель-фильтрация, ионный обмен, обращенная фаза),ELISA (твердофазный иммуноферментый анализ), масс-спектроскопия и т.п. Лекарственные конъюгаты. В другом аспекте согласно изобретению предложен лекарственный конъюгат, содержащий антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое ковалентно связано с указанным антигенсвязывающим фрагментом, при условии, что лекарственный конъюгат не является единичной непрерывной полипептидной цепью. В некоторых воплощениях лекарственный конъюгат содержит вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое ковалентно связано с указанным VH или VL, при условии, что лекарственный конъюгат не является единичной непрерывной полипептидной цепью. Предпочтительно лекарственный конъюгат содержит один VH, который связывает сывороточный альбумин, или один VL, который связывает сывороточный альбумин. В некоторых воплощениях лекарственный конъюгат содержит V dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей изSEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 26. В других воплощениях лекарственный конъюгат содержит VH dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23. Лекарственные конъюгаты могут содержать любое желаемое лекарство и могут быть получены с использованием любых подходящих способов. Например, лекарство может быть связано с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин непосредственно или опосредованно через подходящую линкерную группировку в одном или более положениях, таких как аминоконец, карбоксильный конец, или через аминокислотные боковые цепи. В одном воплощении лекарственный конъюгат содержит dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека, и полипептидное лекарство (например, IL-1ra человека или функциональный вариант IL-1ra человека), а аминоконец полипептидного лекарства (например, IL-1ra человека или функциональный вариант of IL-1ra человека) связан с карбоксильным концом dAb непосредственно или через подходящую линкерную группировку. В других воплощениях лекарственный конъюгат содержит dAb, которое связывает сывороточный альбумин человека, и два или более различных лекарств, которые ковалентно связаны с dAb. Например, первое лекарство может быть ковалентно связано (непосредственно или опосредованно) с карбоксильным концом dAb, а второе лекарство может быть ковалентно связано (непосредственно или опосредованно) с аминоконцом или через аминогруппу боковой цепи (например, -аминогруппу лизина). Такие лекарственные конъюгаты могут быть получены с использованием хорошо известных способов селективного связывания (см., например, Hermanson, G. Т., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA(1996,Могут быть использованы различные способы конъюгирования лекарств с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Конкретный выбранный способ будет зависеть от лекарства, подлежащего конъюгации. При желании, для соединения антигенсвязывающего фрагмента и лекарства могут быть использованы линкеры, которые содержат концевые функциональные группы. Обычно конъюгирование осуществляют путем взаимодействия лекарства, которое содержит реактивную функциональную группу (или модифицировано для того, чтобы содержать реактивную функциональную группу), с линкером или непосредственно с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин. Ковалентные связи образуются путем взаимодействия лекарства, которое содержит (или модифицировано, для того чтобы содержать) химическую группировку или функциональную группу, которая может в подходящих- 29012622 условиях взаимодействовать со второй химической группой, образуя, таким образом, ковалентную связь. При желании, подходящая реактивная химическая группа может быть добавлена к антигенсвязывающему фрагменту или к линкеру с использованием любого подходящего способа (см., например,Hermanson, G.Т., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996. Многие комбинации подходящих реактивных химических групп известны в данной области, например аминогруппа может взаимодействовать с электрофильной группой, такой как тозилат, мезилат, галогено (хлоро, бромо,фторо, йодо), N-гидроксисукцинимидиловый эфир (NHS) и т.п. Тиолы могут взаимодействовать с малеимид-, йодацетил-, акрилоил-, пиридилдисульфидами, тиолом 5-тиол-2-нитробензойной кислоты(TNB-тиол) и т.п. Альдегидная функциональная группа может быть связана с амин- или гидразидсодержащами молекулами и азидная группа может взаимодействовать с трехвалентной фосфорной группой с образованием фосфорамидатных или фосфоримидных связей. Подходящие способы для введения активирующих групп в молекулы известны в данной области (см., например, Hermanson, G.Т.,Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA(1996. В некоторых воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, связан с лекарством путем взаимодействия двух тиолов с образованием дисульфидной связь. В других воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, связан с лекарством путем взаимодействия изотиоцианатной группы и первичного амина с получением изотиомочевинной связи. Подходящие линкерные группировки могут быть линейными или разветвленными и включают в себя, например, тетраэтиленгликоль, C2-C12-алкилен, -NH-(CH2)p-NH- или -(CH2)p-NH- (где р означает от 1 до 12), -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-, полипептидную цепь, содержащую от 1 до приблизительно 100 (предпочтительно от одной до приблизительно 12) аминокислот и т.п. Нековалентные лекарственные конъюгаты. Некоторые нековалентные связи (например, водородные связи, взаимодействия Ван-дер-Ваальса) могут давать стабильные, высоко специфические межмолекулярные связи. Например, молекулярные взаимодействия распознавания, достигнутые через множественные нековалентные связи между комплементарными связывающими партнерами, лежат в основе многих важных биологических взаимодействий,таких как связывание ферментов с их субстратами, распознавание антигенов антителами, связывание лигандов с их рецепторами и стабилизация трехмерной структуры белков и пептида. Соответственно,такие слабые нековалентные взаимодействия (например, водородные связи, взаимодействия Ван-дерВаальса, электростатические взаимодействия, гидрофобные взаимодействия и т.п.) могут быть использованы для связывания лекарства с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Предпочтительно нековалентное связывание антигенсвязывающего фрагмента и лекарства является достаточно сильным для того, чтобы антигенсвязывающий фрагмент и лекарство оставались, по существу, связанными друг с другом в условиях in vivo (например, при введении человеку). Обычно нековалентное связывание антигенсвязывающего фрагмента и лекарства имеет силу по меньшей мере приблизительно 1010 М-1. В предпочтительных воплощениях сила нековалентной связи составляет по меньшей мере приблизительно 1011 М-1, по меньшей мере приблизительно 1012 М-1, по меньшей мере приблизительно 1013 М-1, по меньшей мере приблизительно 1014 М-1 или по меньшей мере приблизительно 1015 М 1. Известно, что взаимодействия между биотином и авидином и между биотином и стрептавидином являются очень эффективными и стабильными во многих условиях, и, как раскрыто в данном описании, нековалентные связи между биотином и авидином или между биотином и стрептавидином могут быть использованы для получения нековалентного лекарственного конъюгата по изобретению. Нековалентная связь может быть образована непосредственно между антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое имеет специфичность по отношению к сывороточному альбумину, и лекарством, или может быть образована между подходящими комплементарными связывающими партнерами(например, биотином и авидином или стрептавидином), где один партнер ковалентно связан с лекарством, а комплементарный связывающий партнер ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом. При использовании комплементарных связывающих партнеров, один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин непосредственно или через подходящую линкерную группировку. Комплементарные связывающие партнеры представляют собой пары молекул, которые селективно связываются друг с другом. Многие комплементарные связывающие партнеры известны в данной области, например антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) и распознаваемый им антиген или эпитоп, ферменты и их субстраты и рецепторы и их лиганды. Предпочтительными комплементарными связывающими партнерами являются биотин и авидин и биотин и стрептавидин.
МПК / Метки
МПК: A61K 47/48, C07K 16/44, C07K 16/46
Метки: антитела, увеличенным, сыворотки, периодом, биспецифичные, гибридные, полувыведения
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-12622-bispecifichnye-gibridnye-antitela-s-uvelichennym-periodom-poluvyvedeniya-iz-syvorotki.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки</a>
Молекула антитела, обладающая специфичностью по отношению к kdr человека, и способы применения антитела
Номер патента: 10970
Опубликовано: 30.12.2008
Авторы: Попплвелл Эндрю Джордж, Моррисон Роберт Кендалл, Зинкевич-Пеотти Карен, Тикл Саймон Питер
МПК: A61K 47/48, A61P 17/06, A61K 39/395...
Метки: применения, человека, молекула, обладающая, антитела, отношению, способы, специфичностью
Формула / Реферат:
1. Молекула антитела, обладающая специфичностью по отношению к KDR человека, содержащая тяжелую цепь, в которой вариабельный домен содержит по крайней мере одну CDR, имеющую последовательность, указанную как H1 на фиг. 1 (SEQ ID NO: 1) для CDRH1, H2 на фиг. 1 (SEQ ID NO: 2) для CDRH2 или H3 на фиг. 1 (SEQ ID NO: 3) для CDRH3. 2. Молекула антитела, обладающая специфичностью по отношению к KDR человека, содержащая легкую цепь, в которой...
Способ определения присутствия антигена папилломатозного пальцевидного дерматита в образце сыворотки жвачного животного
Номер патента: 4873
Опубликовано: 26.08.2004
Авторы: Уоллис Джеймс Л., Уоллис Дэйл
МПК: G01N 33/53
Метки: жвачного, сыворотки, определения, животного, дерматита, антигена, папилломатозного, присутствия, образце, пальцевидного, способ
Формула / Реферат:
Способ определения антигена папилломатозного пальцевидного дерматита (PDD) в образце сыворотки жвачного животного, включающий обеспечение контактирования указанного образца с антителом, взаимодействующим с бактериями Serpens spp. в условиях, способствующих связыванию PDD антигена с антителом с образованием комплекса антиген/антитело, и выявление антигена в указанном образце на основании обнаружения комплекса антиген/антитело.
Химерные гибридные анальгетики
Номер патента: 8341
Опубликовано: 27.04.2007
Автор: Крим Ричард М.
МПК: A61K 38/00, C07K 1/00, C07K 14/00...
Метки: анальгетики, гибридные, химерные
Формула / Реферат:
1. Конъюгатная молекула, включающая агонист мю (m) опиоидного рецептора млекопитающего, соединенный ковалентной связью с агонистом рецептора вещества Р млекопитающего, в которой один агонист является пептидом, а один - непептидом. 2. Конъюгатная молекула по п.1, в котором молекула индуцирует анальгезию при введении ее млекопитающему. 3. Конъюгатная молекула по п.2, в котором анальгезию вызывают у млекопитающего при заметно более низком развитии...
Аналоги и гибридные полипептиды gip с избираемыми свойствами
Номер патента: 11653
Опубликовано: 28.04.2009
Авторы: Бэрон Алан Д., Мэк Кристин М., Янг Эндрю А., Питтнер Ричард А., Эриксон Мэри, Леви Одиль Эстер, Янссен Самюэл, Льюис Диана И., Гхош Соумитра С., Соарес Кристофер Дж., Д`соуза Лоуренс Дж., Сривастава Вед, Джодка Кэролин М., Паркес Дэвид Г., Ханли Майкл Р.
МПК: C07K 14/575
Метки: избираемыми, гибридные, аналоги, свойствами, полипептиды
Формула / Реферат:
1. Гибридный полипептид GIP, проявляющий по меньшей мере одну гормональную активность, где указанный гибридный полипептид содержит первый биоактивный модуль пептидного гормона, ковалентно сшитый по меньшей мере с одним дополнительным биоактивным модулем пептидного гормона; где биоактивные модули пептидных гормонов независимо выбраны из группы, состоящей из компонентных пептидных гормонов, фрагментов компонентных пептидных гормонов, которые...
Моноклональные антитела к растворимому рецептору лпнп человека, способы их получения и применения и гибридомы, продуцирующие указанные антитела
Номер патента: 7494
Опубликовано: 27.10.2006
Авторы: Бельзер Илана, Суисса Дани, Йонах Начум, Антонетти Франческо, Дреано Мишель, Смоларски Моше
МПК: C12N 5/20, A61P 31/20, C07K 16/28...
Метки: рецептору, указанные, человека, продуцирующие, применения, лпнп, способы, растворимому, получения, гибридомы, антитела, моноклональные
Формула / Реферат:
1. Моноклональное антитело, химерное антитело, полностью гуманизированное антитело, антитело к антиидиотипическому антителу или его фрагмент, которое специфически распознает и связывает растворимый рецептор ЛПНП человека и его фрагменты, которое получают путем иммунизации животных формой +291 растворимого рецептора ЛПНП человека, включающей аминокислотную последовательность от Asp +4 до Glu +291 последовательности ЛПНП человека, и которое...
Предыдущий патент: Фармацевтически приемлемые соли хинолиноновых соединений с улучшенными фармацевтическими свойствами
Следующий патент: Сухая ароматическая композиция, содержащая носитель
Случайный патент: Горловина загрузочная шприца вакуумного