Антитела против m-csf

011669 В этом патенте испрашивается приоритет предварительной заявки США 60/502163, поданной 10 сентября 2003 г. Предшествующий уровень техники Макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF) является членом семейства белков, называемых колониестимулирующими факторами (CSF). M-CSF представляет собой секретируемый гликопротеин или гликопротеин клеточной поверхности, состоящий из двух субъединиц, связанных дисульфидной связью, и имеющий общую молекулярную массу в пределах от 40 до 90 кДа (Stanley E.R., etal., Mol. Reprod. Dev., 46:4-10 (1997. Аналогично другим CSF, M-CSF продуцируется макрофагами, моноцитами и клетками ткани человеческих суставов, такими как хондроциты и синовиальные фибробласты, в ответ на воздействие белков, таких как интерлейкин-1 или фактор некроза опухоли - альфа. M-CSF стимулирует образование колоний макрофагов из плюрипотентных гемопоэтических стволовых клетокпредшественников (Stanley E.R., et al., Mol. Reprod. Dev., 46:4-10 (1997.M-CSF обычно связывается со своим рецептором, c-fms, в результате чего продуцируется биологический эффект. c-fms содержит пять внеклеточных доменов Ig, один трансмембранный домен и один внутриклеточный домен с двумя киназными доменами. После связывания M-CSF с c-fms, этот рецептор образует гомодимер и инициирует каскад реакций путем передачи сигнала, включая пути JAK/STAT,PI3K и ERK.M-CSF является важным регулятором функции, активации и выживания моноцитов/макрофагов. Используя животных с различными моделями заболевания, подтвердили роль M-CSF в развитии различных заболеваний, включая ревматоидный артрит (РА) и рак. Макрофаги играют роль ключевых эффекторных клеток при РА. Было показано, что степень инфильтрации макрофагов в синовиальную жидкость при РА тесно коррелирует с уровнем деструкции суставов. M-CSF, эндогенно продуцируемый моноцитами/макрофагами, фибробластами и эндотелиальными клетками в суставе, пораженном ревматоидным артритом, действует на клетки, дифференцирующиеся в направлении моноцитов/макрофагов, стимулируя их выживание и дифференцировку в остеокласты, разрушающие кость, и усиливая провоспалительные клеточные функции, такие как цитотоксичность, продуцирование супероксида, фагоцитоз, хемотаксис и продуцирование вторичных цитокинов. Например, M-CSF-обработка крыс с моделью экспериментального артрита, вызываемого Streptococcus agalactiae и индуцированного ультразвуком, приводит к усилению патологии (Abd, A.H., et al., Lymphokine Cytokine Res. 10:43-50 (1991. Аналогичным образом,подкожные инъекции M-CSF мышам с коллаген-индуцированным артритом (КИА), который является моделью РА, приводит к значительному обострению симптомов заболевания PA (Campbell I.K., et al., J.Leuk. Biol. 68:144-150 (2000. Кроме того, у мышей MRL/lpr, которые в высокой степени восприимчивы к РА и другим аутоиммунным заболеваниям, наблюдались повышенные базальные концентрации M-CSF в сыворотке (Yui M.A., et al., Am. J. Pathol. 139:255-261 (1991. Необходимость присутствия эндогенногоM-CSF для поддержания КИА была продемонстрирована значительным снижением тяжести установленного заболевания под действием M-CSF-нейтрализующего мышиного моноклонального антитела (Campbell I.K., et al., J. Leuk. Biol. 68:144-150 (2000. Что касается рака, то ингибирование колониестимулирующих факторов под действием антисмысловых олигонуклеотидов приводит к подавлению роста опухоли в эмбриональных ксенотрансплантатах и в кишечных опухолевых ксенотрансплантатах у мышей путем замедления разрушения ЕСМ, опосредованного макрофагами (Seyedhossein A., et al., Cancer Research, 62:5317-5324 (2002. Связывание M-CSF с c-fms и последующая активация моноцитов/макрофагов играют важную роль в развитии различных патологических состояний. Помимо РА и рака, другими примерами заболеваний,ассоциированных с M-CSF, являются остеопороз, деструктивный артрит, атерогенез, гломерулонефрит,болезнь Кавазаки и инфекции, вызываемые ВИЧ-1, в развитии которых определенную роль играют моноциты/макрофаги и родственные клетки. Например, остеокласты подобны макрофагам и отчасти регулируются M-CSF. Сигналы роста и дифференцировки, индуцированные M-CSF в начальных стадиях созревания остеокластов, играют важную роль в последующей активности остеокластов в кости. Опосредуемый остеокластами остеопороз в форме как локальной эрозии, так и более диффузного околосуставного остеопороза, представляет собой одну из главных нерешенных проблем, связанных с РА. Последствиями остеопороза являются деформация суставов, потеря трудоспособности, повышенный риск переломов кости и увеличение смертности. M-CSF играет исключительно важную роль в остеокластогенезе, и экспериментальная блокада этого цитокина на животных моделях артрита с успехом предотвращает деструкцию сустава. Известно, что аналогичные пути деструкции действуют и при других формах деструктивного артрита, такого как псориатический артрит, и могут представлять собой участки аналогичного действия. Постклимактерический остеопороз возникает в результате дефектного ремоделирования кости, вызываемого нарушением остеогенеза в результате резорбции кости, опосредуемой избыточным количеством остеокластов, обусловленным дефицитом эстрогенов. Было показано, что нейтрализация in vivo MCSF у мышей с использованием блокирующего антитела полностью предотвращает увеличение числа остеокластов, усиление резорбции кости и, тем самым, развитие остеопороза, индуцированного овариеэктомией.-1 011669 Существует несколько точек зрения относительно центральной роли M-CSF в развитии атерогенеза и пролиферативной гиперплазии выстилки сосудов после механической травмы стенки артерий. Было показано, что клетки всех главных типов, участвующие в атеросклеротических поражениях, экспрессируют M-CSF, который затем активируется под действием окисленного липопротеина. Блокирование передачи сигнала M-CSF c-fms-нейтрализующим антителом приводит к снижению аккумуляции происходящих от макрофагов пенистых клеток в основании аорты у дефицитных по аполипопротеину Е мышей,которые получали корм с высоким содержанием жира. Было обнаружено, что при экспериментальном гломерулонефрите и гломерулонефрите человека экспрессия гломерулярного M-CSF ассоциируется с локальной аккумуляцией, активацией и пролиферацией макрофагов и коррелирует со степенью гломерулярного поражения и протеинурией. Блокирование передачи сигнала M-CSF посредством антитела, направленного против его рецептора c-fms, в значительной степени ингибирует локальную аккумуляцию макрофагов у мышей в процессе почечного воспалительного ответа, индуцированного экспериментальной односторонней обструкцией мочеточника. Болезнь Кавазаки (БК) представляет собой острый лихорадочный васкулит у детей неизвестной этиологии. Эти наиболее распространенные и серьезные осложнения поражают коронарную сосудистую сеть и проявляются в форме аневризматической дилатации. В острой фазе болезни Кавазаки уровень MCSF в сыворотке значительно увеличивается и нормализуется после лечения путем внутривенного введения иммуноглобулина. Гигантоклеточный артрит (ГКА) представляет собой воспалительную васкулопатию, развивающуюся в основном у пожилых людей, у которых Т-клетки и макрофаги инфильтрируют стенки средней и крупной артерий, что приводит к клиническим осложнениям, к слепоте и инсульту в результате артериальной окклюзии. Активное участие макрофагов в развитии ГКА, очевидно, обусловлено присутствием повышенных уровней макрофагальных медиаторов воспаления в области поражения сосудов. Сообщалось, что M-CSF повышает восприимчивость макрофагов, происходящих от человеческих моноцитов, к ВИЧ-1-инфекции in vitro. В недавно проведенных исследованиях было установлено, что MCSF повышает частоту инфицирования макрофагов, происходящих от человеческих моноцитов, а также увеличивает уровень мРНК ВИЧ, экспрессируемой на одну инфицируемую клетку, и уровень провирусной ДНК, экспрессируемой на одну инфицируемую культуру. Учитывая роль M-CSF в различных заболеваниях, было бы желательно разработать способ ингибирования активности M-CSF. Поэтому необходимость в получении терапевтических антител против M-CSF остается крайне актуальной. Описание сущности изобретения Настоящее изобретение относится к выделенным человеческим антителам или к их антигенсвязывающим частям, которые специфически связываются с человеческим M-CSF и действуют как антагонисты M-CSF, а также к композициям, содержащим указанное антитело или его часть. Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим тяжелую и/или легкую цепи,их вариабельные области или антигенсвязывающие части анти-M-CSF-антитела, либо молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитело, цепь антитела или ее вариабельную область согласно изобретению, которые являются эффективными для лечения заболеваний, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах изобретения указанные композиции могут также содержать другой компонент, такой как терапевтическое средство или диагностическое средство. Настоящее изобретение также относится к диагностическим и терапевтическим способам. В некоторых вариантах изобретения указанные композиции применяются в терапевтически эффективном количестве, необходимом для лечения или предупреждения конкретного заболевания или состояния. Настоящее изобретение также относится к способам лечения или предупреждения различных заболеваний и состояний, таких как, но не ограничивающихся ими, воспаление, рак, атерогенез, неврологические расстройства и болезни сердца, с использованием эффективного количества анти-M-CSFантитела согласно изобретению или его антигенсвязывающей части; нуклеиновых кислот, кодирующих указанное антитело или его тяжелую и/или легкую цепь, вариабельные области или антигенсвязывающие части. Настоящее изобретение относится к выделенным клеточным линиям, таким как гибридомы, которые продуцируют анти-M-CSF-антитела и/или их антигенсвязывающие части. Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим тяжелые и/или легкие цепи анти-M-CSF-антител, их вариабельные области или антигенсвязывающие части. Настоящее изобретение относится к векторам и к клеткам-хозяевам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, а также к способам рекомбинантного продуцирования полипептидов, кодируемых молекулами нуклеиновой кислоты. Кроме того, настоящее изобретение относится к трансгенным животным, не происходящим от человека и экспрессирующим тяжелые и/или легкие цепи или антигенсвязывающие части анти-M-CSFантител.-2 011669 Краткое описание графического материала На фиг. 1 А и 1 В представлены графики, на которых проиллюстрировано, что анти-M-CSF-антитела обеспечивают дозозависимое снижение общего числа моноцитов у самцов и самок обезьян в зависимости от времени. Число моноцитов определяли по рассеянию света с использованием диагностической системы Abbott Diagnostics Inc. Cell Dyn. Мониторинг числа моноцитов проводили через 24 часа и в течение последующих 3 недель после введения носителя или антитела 8.10.3 в дозе 0, 0,1,1 или 5 мг/кг в объеме 3,79 мл/кг в течение приблизительно 5 мин. На фиг. 1 А приведены данные для самцов обезьян. На фиг. 1 В приведены данные для самок обезьян. На фиг. 2 А и 2 В представлены графики, на которых проиллюстрировано, что обработка анти-МCSF-антителом приводила к снижению процента CD14+CD16+-моноцитов у самцов и самок обезьян. Мониторинг проводили в дни 0-21 после введения носителя или антитела 8.10.3 в дозе 0, 0,1, 1 или 5 мг/кг в объеме 3,79 мл/кг в течение приблизительно 5 мин. Для каждой тестируемой обезьяны процент моноцитов среди CD14+CD16+-субпопуляции определяли после каждого забора крови в дни 1, 3, 7, 14 и 21 после инъекции антитела 8.10.3. На фиг. 2 А приведены данные для самцов обезьян. На фиг. 2 В приведены данные для самок обезьян. На фиг. 3 А и 3 В представлены графики, на которых показано, что обработка анти-M-CSFантителом приводит к снижению процентного изменения общего числа моноцитов при всех дозах антитела 8.10.3F и антитела 9.14.4I по сравнению с предварительно протестированными уровнями моноцитов. На фиг. 3 А приведены данные, полученные из экспериментов с использованием антитела 8.10.3F. На фиг. 3 В приведены данные, полученные из экспериментов с использованием антитела 9.14.4I. На фиг. 4 показано выравнивание первичных структур для сравнения аминокислотных последовательностей вариабельных областей легкой и тяжелой цепей двадцати шести анти-M-CSF-антител с аминокислотными последовательностями соответствующих генов вариабельных областей зародышевой линии. Различия между последовательностями антител и последовательностями генов зародышевой линии показаны жирным шрифтом. Пунктиром обозначено отсутствие изменений по сравнению с зародышевой линией. Подчеркнутые последовательности в каждом выравнивании представляют собой, слева направо,последовательности FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. На фиг. 4 А показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 252 (остатки 21-127 SEQ IDNO:4) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 В показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 88 (остатки 21-127 SEQ IDNO:8) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 С показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 100 (остатки 21-127 SEQ IDNO:12) с последовательностью VKL2, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:107). На фиг. 4D показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 3.8.3 (остатки 23-130 SEQ IDNO:16) с последовательностью VKL5, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:109). На фиг. 4 Е показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 2.7.3 (остатки 23-130 SEQ IDNO:20) с последовательностью VKL5, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:117). На фиг. 4F показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 1.120.1 (остатки 21-134 SEQ IDNO:24) с последовательностью VKB3, JK1 зародышевой линии (SEQ ID NO:112). На фиг. 4 С показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 252 (остатки 20-136 SEQ IDNO:2) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH6 зародышевой линии (SEQ ID NO:106). На фиг. 4 Н показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 88 (остатки 20-138 SEQ IDNO:6) с последовательностью VH3-7, DH6-13, JH4 зародышевой линии (SEQ ID NO:105). На фиг. 4I показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 100 (остатки 20-141 SEQ IDNO:10) с последовательностью VH3-23, DH1-26, JH4 зародышевой линии (SEQ ID NO:104). На фиг. 4J показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 3.8.3 (остатки 20-135 SEQ IDNO:14) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4 зародышевой линии (SEQ ID NO:108). На фиг. 4K показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 2.7.3 (остатки 20-137 SEQ IDNO:18) с последовательностью VH3-33, DH1-26, JH4 зародышевой линии (SEQ ID NO:110). На фиг. 4b показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 1.120.1 (остатки 20-139 SEQID NO:22) с последовательностью VH1-18, DH4-23, JH4 зародышевой линии (SEQ ID NO:111). На фиг. 4 М показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3 (остатки 21-129 SEQ IDNO:44) с последовательностью VKA27, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:114). На фиг. 4N показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3 (остатки 20-141 SEQ IDNO:30) с последовательностью VH3-48, DH1-26, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:113). На фиг. 4O показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4 (остатки 23-130 SEQ IDNO:28) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 Р показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4 (остатки 20-135 SEQ IDNO:38) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4Q показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.7.2 (остатки 23-130 SEQ IDNO:48) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4R показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.7.2 (остатки 20-136 SEQ IDNO:46) с последовательностью VH3-11, DH6-13, JH6b зародышевой линии (SEQ ID NO:115). На фиг. 4S показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4I (остатки 23-130 SEQ IDNO:28) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 Т показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4I (остатки 20-135 SEQ IDNO:26) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4U показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3F (остатки 21-129 SEQ IDNO:32) с последовательностью VKA27, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:114). На фиг. 4V показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3F (остатки 20-141 SEQID NO:30) с последовательностью VH3-48, DH1-26, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:113). На фиг. 4W показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.7.2IF (остатки 23-130 SEQ IDNO:36) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 Х показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.7.2IF (остатки 20-136 SEQ IDNO:34) с последовательностью VH3-11, DH6-13, JH6b зародышевой линии (SEQ ID NO:115). На фиг. 4Y показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.7.2C-Ser (остатки 23-130 SEQID NO:52) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4Z показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.7.2C-Ser (остатки 20-136SEQ ID NO:50) с последовательностью VH3-11, DH6-13, JH6b зародышевой линии (SEQ ID NO:115). На фиг. 4 АА показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4C-Ser (остатки 23-130 SEQID NO:56) с последовательностью VK012, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 ВВ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4C-Ser (остатки 20-135SEQ ID NO:54) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4 СС показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3C-Ser (остатки 21-129 SEQID NO:60) с последовательностью VKA27, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:114). На фиг. 4DD показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3C-Ser (остатки 20-141SEQ ID NO:58) с последовательностью VH3-48, DH1-26, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:113). На фиг. 4 ЕЕ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3-CG2 (остатки 21-129 SEQID NO:60) с последовательностью VKA27, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:114). На фиг. 4FF показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокис-4 011669 лотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3-CG2 (остатки 23-141SEQ ID NO:62) с последовательностью VH3-48, DH1-26, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:113). На фиг. 4GG показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.7.2-CG2 (остатки 23-130 SEQID NO:52) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 НН показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.7.2-CG2 (остатки 20-136 SEQID NO:66) с последовательностью VH3-11, DH6-13, JH6b зародышевой линии (SEQ ID NO:115). На фиг. 4II показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.7.2-CG4 (остатки 23-130 SEQID NO:52) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4JJ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.7.2-CG4 (остатки 20-135 SEQID NO:70) с последовательностью VH3-11, DH6-13, JH6b зародышевой линии (SEQ ID NO:115). На фиг. 4KK показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4-CG2 (остатки 23-130 SEQID NO:56) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4LL показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4-CG2 (остатки 20-135SEQ ID NO:74) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4 ММ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4-CG4 (остатки 23-130 SEQID NO:56) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4NN показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4-CG4 (остатки 20-135SEQ ID NO:78) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4OO показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4-Ser (остатки 23-130 SEQID NO:28) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 РР показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4-Ser (остатки 20-135 SEQID NO:82) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4QQ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.7.2-Ser (остатки 23-130 SEQID NO:48) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4RR показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.7.2-Ser (остатки 20-136 SEQID NO:86) с последовательностью VH3-11, DH6-13, JH6b зародышевой линии (SEQ ID NO:115). На фиг. 4SS показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3-Ser (остатки 21-129 SEQID NO:44) с последовательностью VKA27, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:114). На фиг. 4 ТТ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3-Ser (остатки 20-141 SEQID NO:90) с последовательностью VH3-48, DH1-26, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:113). На фиг. 4UU показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3-CG4 (остатки 21-129 SEQHa фиг. 4VV показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3-CG4 (остатки 20-141SEQ ID NO:94) с последовательностью VH3-48, DH1-26, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:113). На фиг. 4WW показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 9.14.4G1 (остатки 23-130 SEQID NO:28) с последовательностью VKO12, JK3 зародышевой линии (SEQ ID NO:103). На фиг. 4 ХХ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 9.14.4G1 (остатки 20-135 SEQID NO:102) с последовательностью VH3-11, DH7-27, JH4b зародышевой линии (SEQ ID NO:116). На фиг. 4YY показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 8.10.3FG1 (остатки 21-129 SEQID NO:32) с последовательностью VKA27, JK4 зародышевой линии (SEQ ID NO:114). На фиг. 4ZZ показано выравнивание первичных структур для сравнения предсказанной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела 8.10.3FG1 (остатки 20-141-5 011669 Подробное описание изобретения Определения и общие методы Если не указано особо, все научные и технические термины, используемые в настоящем изобретении, имеют общепринятые значения, известные специалисту. Кроме того, если это не следует из контекста описания, то термин, обозначающий данный объект в единственном числе, включает в себя этот объект и во множественном числе, и, наоборот, термин, обозначающий данный объект во множественном числе, включает этот объект и в единственном числе. В общих чертах, номенклатура, используемая в описании методов культивирования клеток и тканей и методов молекулярной биологии, иммунологии,микробиологии, генетики и химических методов получения белков и нуклеиновых кислот, а также методов гибридизации, хорошо известна и широко применяется специалистами. Способы и процедуры согласно изобретению обычно осуществляют в соответствии со стандартной хорошо известной методикой, которая описана в различных общих и более специальных руководствах,цитируемых и обсуждаемых в настоящем описании, если это не оговорено особо. Смотрите, например,руководство Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2d ed., Cold Spring Harbor LaboratoryPress, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989), и Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992) and HarlowLane Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990), которое включена в настоящее описание посредством ссылки. Ферментативные реакции и очистку проводят в соответствии с инструкциями производителей в основном известными методами или методами, описанными в настоящей заявке. Номенклатура, используемая в описанных здесь лабораторных процедурах, а также в методах аналитической химии, химии органического синтеза и в медицинской и фармацевтической химии, хорошо известна и широко применяется специалистами. Проведение химического синтеза и химических анализов, получение фармацевтических препаратов и композиций и их доставку пациентам, а также лечение пациентов осуществляют стандартными методами. Используемые здесь термины, если это не оговорено особо, имеют следующие значения. Термин "полипептид" охватывает природные или искусственные белки, фрагменты белков и полипептидные аналоги последовательности белка. Полипептид может быть мономерным или полимерным. Термин "выделенный белок", "выделенный полипептид" или "выделенное антитело" означает белок, полипептид или антитело, которые, по своему происхождению или источнику получения, обладают одним из четырех нижеследующих свойств, а именно, они (1) не ассоциируются с компонентами, с которыми они обычно ассоциируются в природе, (2) не содержат других белков, происходящих от организма того же самого вида, (3) экспрессируются клеткой другого вида или (4) не существуют в природе. Таким образом, полипептид, который синтезирован химическими методами или синтезируется клеточной системой, отличающейся от клетки, в которой он обычно продуцируется в природе, рассматривается как полипептид, "изолированный" от обычно ассоциированных с ним компонентов. Белок, который, по существу, не содержит ассоциированных с ним природных компонентов, может быть также выделен с применением техники очистки белков, хорошо известной специалистам. Примерами выделенных антител являются анти-M-CSF-антитело, которое было аффинно очищено с использованием M-CSF; анти-М-CSF-антитело, которое было синтезировано с использованием гибридомы или другой клеточной линии in vitro; и человеческое анти-M-CSF-антитело, происходящее от трансгенной мыши. Белок или полипептид является "в основном чистым", "по существу гомогенным" или "по существу очищенным", если по меньшей мере примерно 60-75% образца включает в себя полипептид одного вида. Указанный полипептид или белок может быть мономерным или мультимерным. По существу чистый полипептид или белок обычно составляет примерно 50, 60, 70, 80 или 90% по массе всего белка образца,а обычно его чистота составляет примерно 95%, а предпочтительно более 99%. Чистота или гомогенность белка может быть определена различными хорошо известными методами, такими как электрофорез образца белка в полиакриламидном геле с последующей визуализацией одной полипептидной полосы после окрашивания геля хорошо известным красителем. Для некоторых целей может быть достигнуто более высокое разрешение с применением ВЭЖХ или других методов очистки, хорошо известных специалистам. Используемый здесь термин "полипептидный фрагмент" относится к полипептиду, который имеет аминоконцевую и/или карбоксиконцевую делецию, но в котором остальная аминокислотная последовательность в соответствующих положениях аминокислот идентична природной аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах изобретения фрагменты имеют длину по меньшей мере 5, 6, 8 или 10 аминокислот. В других вариантах изобретения фрагменты имеют длину по меньшей мере 14, по меньшей мере 20, по меньшей мере 50 или по меньшей мере 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот. Используемый здесь термин "полипептидный аналог" означает полипептид, который содержит сегмент, по существу, идентичный части аминокислотной последовательности, и который обладает по меньшей мере одним из нижеследующих свойств, а именно, он (1) специфически связывается с M-CSF в подходящих условиях связывания; и (2) может ингибировать M-CSF. Обычно полипептидные аналоги, по сравнению с природной последовательностью, содержат кон-6 011669 сервативную аминокислотную замену (инсерцию или делецию). Обычно аналоги имеют длину по меньшей мере 20 или 25 аминокислот, предпочтительно по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот или более, а чаще всего они имеют такую же длину, как и полноразмерный природный полипептид. В некоторых вариантах изобретения аминокислотными заменами в антителе или в его антигенсвязывающей части являются замены, которые приводят (1) к снижению чувствительности к протеолизу, (2) к снижению чувствительности к окислению, (3) к изменению аффинности связывания для образования белковых комплексов или (4) к сообщению таким аналогам других физико-химических или функциональных свойств или модификации уже имеющихся свойств. Аналогами могут быть различные мутеины с последовательностью, отличающейся от природной пептидной последовательности. Например, в природную последовательность, а предпочтительно в ту часть полипептида, которая расположена за пределами доменобразующих межмолекулярных контактов, могут быть внесены одна или множество аминокислотных замен (предпочтительно консервативных аминокислотных замен). Консервативная аминокислотная замена не должна значительно влиять на структурные свойства родительской последовательности, например аминокислотная замена не должна приводить к изменению антипараллельной -складчатой структуры, которая образует связывающий домен иммуноглобулина,присутствующий в родительской последовательности, или к разрушению вторичной структуры других типов, характеризующей родительскую последовательность. В общих чертах, в антипараллельной складчатой структуре не должны присутствовать глициновые и пролиновые аналоги. Примеры известных вторичных и третичных структур полипептида описаны в работах Protein, Structures and Molecular(1991), каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки. Непептидные аналоги обычно используются в фармацевтической промышленности в качестве лекарственных средств со свойствами, аналогичными свойствам матричного пептида. Непептидные соединения этого типа называются "пептидомиметиками". Смотрите работы Fauchere, J. Adv. Drug. Res. 15:29(1986); VeberFreidinger, TINS p.392 (1985) и Evans et al., J. Med. Chem. 30: 1229 (1987), которые включены в настоящее описание посредством ссылки. Такие соединения часто выявляют с помощью компьютерной программы молекулярного моделирования. Пептидомиметики, структурно сходные с терапевтически ценными пептидами, могут быть использованы для достижения эквивалентного терапевтического или профилактического эффекта. Обычно пептидомиметики по своей структуре сходны с репрезентативным полипептидом (то есть с полипептидом, который обладает нужными биохимическими свойствами или фармакологической активностью), таким как человеческое антитело, но они имеют одну или несколько пептидных связей, необязательно замененных связью, выбранной из группы, состоящей из-CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH- (цис- и транс-), -СОСН 2-, -СН(ОН)СН 2- и -CH2SO-, в соответствии с хорошо известными методами. Системная замена одной или нескольких аминокислот консенсусной последовательности D-аминокислотой того же типа (например, замена L-лизина на D-лизин) может быть использована для продуцирования более стабильных пептидов. Кроме того, пептиды с конформационными ограничениями, содержащие консенсусную последовательность или вариант последовательности, в основном идентичный консенсусной последовательности, могут быть получены известными методами (RizoGierasch, Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992); эта публикация включена в настоящее описание посредством ссылки), например, путем присоединения внутренних цистеиновых остатков, способных образовывать внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые циклизуют данный пептид. Термин "антитело" означает интактное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание. В общих чертах, смотрите монографию Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul W. ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989 (которая во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки). Антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены методами рекомбинантных ДНК или путем ферментативного или химического гидролиза интактных антител. В некоторых вариантах изобретения антигенсвязывающими фрагментами являютсяFab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, фрагменты гипервариабельной области (CDR), одноцепочечные антитела(scFv), химерные антитела, диантитела и полипептиды, которые содержат по меньшей мере часть антитела, достаточную для сообщения данному полипептиду способности к специфическому связыванию с антигеном. Зрелые вариабельные домены легкой и тяжелой цепей, от их N-конца и до С-конца, содержат области FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Присвоение аминокислот каждому домену осуществляется в соответствии с нумерацией по Кэбату, Sequences of Protein of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991, ChothiaLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)Chothiaet al., Nature 342:878-883 (1989). Используемое здесь "антитело" обозначается так же, как и моноклональное антитело, полученное из гибридомы, имеющей такое же обозначение. Например, моноклональное антитело 3.8.3 представляет собой антитело, полученное из гибридомы 3.8.3.-7 011669 Используемый здесь термин "Fd-фрагмент" означает фрагмент антитела, который состоит из доменов VH и СН 1; Fv-фрагмент состоит из VL- и VH-доменов одного сегмента антитела; a dAb-фрагмент(Ward et al., Nature 341:544-546 (1989) состоит из VH-домена. В некоторых вариантах изобретения указанным антителом являются одноцепочечное антитело(scFv), в котором VL- и YH-домены являются спаренными и образуют одновалентные молекулы посредством синтетического линкера, который обеспечивает образование этих молекул в виде одной цепи белка. (Bird et al., Science 242:423-426 (1988)Huston et al., Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 85:5879-5883 (1988. В некоторых вариантах изобретения указанными антителами являются диантитела, то есть двухвалентные антитела, в которых VH- и VL-домены экспрессируются на одной полипептидной цепи, но посредством линкера, который является слишком коротким для того, чтобы происходило спаривание между двумя доменами на одной и той же цепи, что вынуждает эти домены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и образовывать два антигенсвязывающих сайта. (Смотрите, например, Holliger P. etal., Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 90:6444-6448 (1993)Poljak R.J. et al., Structure 2:1121-1123 (1994. В некоторых вариантах изобретения одна или несколько областей CDR антитела согласно изобретению могут быть, ковалентно или нековалентно, введены в молекулу иммуноадгезина, который специфически связывается с М-CSF. В таких вариантах изобретения одна или несколько CDR могут быть введены в виде части более крупной полипептидной цепи, либо они могут быть ковалентно связаны с другой полипептидной цепью, либо они могут быть введены посредством нековалентной связи. В вариантах, имеющих один или несколько сайтов связывания, такие сайты связывания могут быть идентичными или различными. Используемый здесь термин "человеческое антитело" означает любое антитело, в котором последовательности вариабельного и константного доменов являются человеческими. Этот термин включает в себя антитела, которые имеют последовательности, происходящие от человеческих генов, но которые были изменены так, что они обладают потенциально пониженной иммуногенностью и повышенной аффинностью и не содержат цистеинов, которые могут приводить к нежелательной пространственной упаковке и т.п. Этот термин также включает в себя антитела, которые были продуцированы рекомбинантными методами в клетках, не являющихся клетками человека, которые могут негативно влиять на гликозилирование, нетипичное для человеческих клеток. Эти антитела могут быть получены различными методами, описанными ниже. Используемый здесь термин "химерное антитело" означает антитело, которое содержит области,происходящие от двух или более различных антител. В одном из вариантов изобретения одна или несколько областей CDR происходят от человеческого анти-М-CSF-антитела. В другом варианте изобретения все CDR происходят от человеческого анти-M-CSF-антитела. В другом варианте изобретения CDR,происходящие от более чем одного из человеческих анти-M-CSF-антител, образуют химерное антитело. Например, химерное антитело может содержать CDR1 легкой цепи "первого" человеческого анти-МCSF-антитела, CDR2 легкой цепи "второго" человеческого анти-М-CSF-антитела и CDR3 легкой цепи"третьего" человеческого анти-М-CSF-антитела, a CDR тяжелой цепи могут происходить от одного или нескольких других анти-М-CSF-антител. Кроме того, каркасные области могут происходить от одного из анти-М-CSF-антител, от которых происходят одна или несколько указанных CDR, или от одного или нескольких других человеческих антител. Фрагменты или аналоги молекул антител или иммуноглобулинов могут быть легко получены любым специалистом, исходя из описания изобретения. Предпочтительные амино- и карбоксиконцевые фрагменты или аналоги расположены почти на стыках функциональных доменов. Структурные и функциональные домены могут быть идентифицированы путем сравнения данных нуклеотидных и/или аминокислотных последовательностей с общедоступными или частными базами данных. Для идентификации мотивов последовательностей или доменов белков с предсказанной конформацией, которые присутствуют в других белках с известной структурой и/или функцией, предпочтительно применяются методы компьютерного сравнения. Методы идентификации последовательностей белка, который имеет пространственную упаковку, образующую известную трехмерную структуру, хорошо известны специалистам. Смотрите Bowie et al., Science 253:164 (1991). Используемый здесь термин "поверхностный плазмонный резонанс" означает оптическое явление,которое позволяет проводить анализ биоспецифических взаимодействий в режиме реального времени путем детекции изменения концентраций белка в биосенсорной матрице, например, с применением системы BIACORE (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.). Дополнительное описание можно найти, например, у Johnsson U. et al., Ann. Biol. Clin. 51:19-26 (1993); Johnsson U. et al., Biotechniques 11:620-627 (1991); Johnsson B. et al., J. Mol. Recognit. 8:125-131 (1995) и Johnsson B. et al., Anal.Biochem. 198:268-277 (1991). Термин "KD" означает константу равновесной диссоциации конкретного взаимодействия "антителоантиген". Термин "эпитоп" означает детерминанту любого белка, способную специфически связываться с иммуноглобулином или с Т-клеточным рецептором или как-либо иначе взаимодействовать с данной молекулой. Эпитопные детерминантаты обычно состоят из химически активных поверхностных групп мо-8 011669 лекул, таких как аминокислоты или сахарные боковые цепи, и в основном имеют специфическую трехмерную структуру, а также специфические зарядовые характеристики. Эпитоп может быть "линейным" или "конформационным". В линейном эпитопе все участки взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) расположены по всей длине первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе участки взаимодействия находятся в аминокислотных остатках, которые расположены на белке против друг друга и отделены друг от друга. Считается,что антитело специфически связывается с антигеном, если константа диссоциации составляет 1 мМ,предпочтительно 100 нМ, а наиболее предпочтительно 10 нМ. В некоторых вариантах изобретенияKD составляет от 1 до 500 пМ. В других вариантах KD составляет от 500 пМ до 1 мкМ. В других вариантах KD составляет от 1 мкМ до 100 нМ. В других вариантах KD составляет от 100 мМ до 10 нМ. После определения нужного эпитопа на антигене можно продуцировать антитела против этого эпитопа, например, с помощью техники, описанной в настоящем изобретении. Альтернативно, в процессе обнаружения эпитопа, генерирование и характеризация антител может дать необходимую информацию о нужных эпитопах. Затем, исходя из такой информации, можно проводить одновременный скрининг антител на связывание с одним и тем же эпитопом. Один из подходов для достижения этой цели заключается в проведении перекрестно-конкурентных исследований для обнаружения антител, которые конкурентно связываются друг с другом, например антител, которые конкурируют за связывание с антигеном. Высокоэффективный способ "накопления информации" об антителах, исходя из их перекрестной конкуренции,описан в Международной патентной заявкеWO 03/48731. Используемые здесь двадцать главных аминокислот имеют общепринятые сокращения. Смотрите монографию Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. GolubD.R. Gren Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991, которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Используемый здесь термин "полинуклеотид" означает полимерную форму нуклеотидной последовательности длиной по меньшей мере в 10 нуклеотидов, рибонуклеотидов или дезоксинуклеотидов последовательности, либо модифицированную форму, состоящую из нуклеотидов любого типа. Этот термин также включает в себя одноцепочечные и двухцепочечные полимерные формы. Используемый здесь термин "выделенный полинуклеотид" означает полинуклеотид геномной ДНК,кДНК или синтезированной ДНК или их некоторые комбинации, где "выделенный полинуклеотид" по своему происхождению или источнику получения обладает одним из трех нижеследующих свойств, а именно, (1) не ассоциируется со всеми полинуклеотидами или с частью полинуклеотидов, с которыми этот "выделенный полинуклеотид" обычно ассоциируется в природе, (2) функционально присоединен к полинуклеотиду, с которым он не связан в природе, или (3) отсутствует в природе как часть более крупной последовательности. Используемый здесь термин "олигонуклеотид" означает природные и модифицированные нуклеотиды, связанные друг с другом природными или неприродными олигонуклеотидными связями. Олигонуклеотиды представляют собой полинуклеотидную подпоследовательность, обычно содержащую 200 или менее нуклеотидов. Предпочтительно, чтобы олигонуклеотиды имели в длину 10-60 нуклеотидов, а наиболее предпочтительно - 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-40 нуклеотидов. Обычно олигонуклеотиды являются одноцепочечными, например олигонуклеотиды, используемые для праймеров и зондов, хотя они могут быть и двухцепочечными, например олигонуклеотиды, используемые для конструирования генного мутанта. Олигонуклеотиды согласно изобретению могут быть смысловыми или антисмысловыми. Используемый здесь термин "природные нуклеотиды" означает дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Используемый здесь термин "модифицированные нуклеотиды" означает нуклеотиды с модифицированными или с замещенными сахарными группами и т.п. Используемый здесь термин "олигонуклеотидные связи" включает в себя такие олигонуклеотидные связи как фосфортиоат, фосфордитиоат,фосфорселеноат, фосфордиселеноат, фосфоранилотиоат, фосфоранилидат, фосфорамидат и т.п. См., например, работы LaPlanche et al., Nucl. Acids. Res. 14:9081 (1986); Stec et al., J. Am. Chem. Soc. 106:6077(1990), которые включены в настоящее описание посредством ссылки. Если необходимо, олигонуклеотид может включать в себя метку для детекции."Функционально присоединенные" последовательности включают в себя последовательности регуляции экспрессии, которые являются смежными с представляющим интерес геном, и последовательности регуляции экспрессии, которые осуществляют регуляцию экспрессии представляющего интерес гена,действуя in trans или на расстоянии от него. Используемый здесь термин "последовательность регуляции экспрессии" означает полинуклеотидные последовательности, которые необходимы для осуществления экспрессии и процессинга кодирующих последовательностей, с которыми они лигированы. Последовательностями регуляции экспрессии являются соответствующие последовательности инициации транскрипции, терминации транскрипции, промоторные и энхансерные последовательности; эффективные-9 011669 сигналы процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полнаденилирования; последовательности,стабилизирующие цитоплазматическую мРНК; последовательности, повышающие эффективность трансляции (то есть консенсусная последовательность Козака); последовательности, повышающие стабильность белка, и, если это необходимо, последовательности, усиливающие секрецию белка. Природа таких регуляторных последовательностей варьирует в зависимости от организма-хозяина; например, у прокариотов такие регуляторные последовательности обычно включают в себя промотор, сайт связывания с рибосомой и последовательность терминации транскрипции, а у эукариотов такие регуляторные последовательности обычно включают в себя промоторы и последовательность терминации транскрипции. Термин "регуляторные последовательности" включает в себя, как минимум, все компоненты, присутствие которых необходимо для экспрессии и процессинга, и может также включать в себя дополнительные компоненты, присутствие которых является желательным, например лидерные последовательности и последовательности-партнеры по связыванию. Используемый здесь термин "вектор" означает молекулу нуклеиновой кислоты, способную переносить другую нуклеиновую кислоту, к которой она присоединена. В некоторых вариантах изобретения таким вектором является плазмида, то есть кольцевая двухцепочечная ДНК-петля, в которую могут быть лигированы дополнительные ДНК-сегменты. В некоторых вариантах изобретения таким вектором является вирусный вектор, где дополнительные ДНК-сегменты могут быть лигированы в вирусный геном. В некоторых вариантах изобретения такие векторы способны автономно реплицироваться в клеткехозяине, в которую они встраиваются (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный ориджин репликации и эписомные векторы млекопитающих). В других вариантах изобретения такие векторы (например, неэписомные векторы млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клеткихозяина после введения в эту клетку-хозяина, а поэтому они могут реплицироваться вместе с геномом хозяина. Кроме того, некоторые векторы способны регулировать экспрессию генов, к которым они функционально присоединены. Такие векторы называются здесь "рекомбинантными экспрессирующими векторами" (или просто "экспрессирующими векторами"). Используемый здесь термин "рекомбинантная клетка-хозяин" (или просто "клетка-хозяин") означает клетку, в которую был введен рекомбинантный экспрессирующий вектор. Следует отметить, что термины "рекомбинантная клетка-хозяин" и "клетка-хозяин" означают не только клетку конкретного индивида, но также и ее потомство. Поскольку в последующих генерациях могут присутствовать некоторые модификации, вызванные либо мутацией, либо воздействием окружающей среды, то такое потомство фактически не может быть идентичным родительской клетке, но при этом оно все же входит в объем используемого здесь термина "клетка-хозяин". Используемый здесь термин "селективная гибридизация" относится к детектируемому и специфическому связыванию. Полинуклеотиды, олигонуклеотиды и их фрагменты согласно изобретению селективно гибридизуются с цепями нуклеиновой кислоты в таких условиях гибридизации и промывки, которые значительно минимизируют уровень детектируемого связывания с неспецифическими нуклеиновыми кислотами. Для достижения селективной гибридизации, известной специалистам и обсуждаемой в настоящей заявке, могут быть использованы условия "высокой жесткости" или "в высокой степени жесткие" условия. Одним из примеров условий "высокой жесткости" или "в высокой степени жестких" условий является инкубирование полинуклеотида с другим полинуклеотидом, где один полинуклеотид может быть фиксирован на твердой поверхности, такой как мембрана, в буфере для гибридизации, содержащем 6SSPE или SSC, 50% формамид, 5 реагент Денхардта, 0,5% ДСН, 100 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, при температуре гибридизации 42 С в течение 12-16 ч, с последующей двухкратной промывкой при 55 С в промывочном буфере, содержащем 1SSC, 0,5% ДСН. См. также Sambrook et al., смотрите выше pp. 9.50-9.55. Термин "процент идентичности последовательностей", относящийся к последовательностям нуклеиновой кислоты, означает процент остатков при сравнении и выравнивании первой непрерывной последовательности на максимальное соответствие со второй непрерывной последовательностью. Длина последовательности, используемой для определения идентичности, может составлять по меньшей мере примерно девять нуклеотидов, а обычно - по меньшей мере примерно 18 нуклеотидов, или по меньшей мере примерно 24 нуклеотида или примерно 28 нуклеотидов, чаще всего по меньшей мере примерно 32 нуклеотида, а предпочтительно по меньшей мере примерно 36, 48 или более нуклеотидов. Для определения идентичности нуклеотидных последовательностей могут быть использованы различные алгоритмы,известные специалистам. Например, полинуклеотидные последовательности можно сравнивать с помощью программ FASTA, Gap или Bestfit, которые входят в пакет программ Wisconsin Package Version 10.0,Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. Программа FASTA, в которую входят, например,программы FASTA2 и FASTA3, позволяет проводить выравнивание последовательностей и определять процент идентичности последовательностей для областей с наилучшим перекрыванием между запрашиваемыми последовательностями и последовательностями поиска (Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998), включены в настоящее изобретение посредством ссылки). Если это- 10011669 не оговорено особо, то используются параметры по умолчанию, установленные для данной программы или алгоритма. Например, процент идентичности последовательностей нуклеиновых кислот может быть определен с помощью программы FASTA с параметрами по умолчанию (размер слова 6 и факторNOPAM для оценочной матрицы) или с помощью программы Gap с ее параметрами по умолчанию, которая поставляется в GCG Version 6.1 и которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Если особо не оговорено, термин "нуклеотидная последовательность" охватывает и комплементарную ей последовательность. Таким образом, подразумевается, что термин "нуклеиновая кислота, имеющая конкретную последовательность", должен охватывать ее комплементарную цепь вместе с ее комплементарной последовательностью. Термин "процент идентичности последовательностей" означает отношение, выражаемое как процент числа идентичных остатков по сравнению с числом всех сравниваемых остатков. Термин "значительное сходство" или "значительное сходство последовательностей", относящийся к нуклеиновой кислоте или к ее фрагменту, означает, что при оптимальном сопоставлении путем выравнивания соответствующих нуклеотидных вставок или делеций с соответствующими вставками или делециями другой нуклеиновой кислоты (или комплементарной ей цепи), идентичность нуклеотидов в нуклеотидных последовательностях составляет по меньшей мере примерно 85%, предпочтительно по меньшей мере примерно 90%, а более предпочтительно по меньшей мере примерно 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, как было определено с помощью любого из хорошо известных алгоритмов для определения идентичности последовательностей, такого как FASTA, BLAST или Gap, указанных выше. Термин "по существу, идентичный", используемый по отношению к полипептидам, означает, что две пептидных последовательности, при их оптимальном выравнивании, например, с помощью программGAP или BESTFIT с использованием "весов" пробелов по умолчанию, установленных в этих программах, имеют по меньшей мере 70, 75 или 80%-ную идентичность, предпочтительно по меньшей мере 90 или 95%-ную идентичность, а более предпочтительно по меньшей мере 97, 98 или 99%-ную идентичность. В некоторых вариантах изобретения положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются по своим консервативным аминокислотным заменам. Термин "консервативная аминокислотная замена" означает замену одного аминокислотного остатка другим аминокислотным остатком, имеющим группу R боковой цепи с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В общих чертах, консервативная аминокислотная замена не оказывает значительного влияния на функциональные свойства белка. В случаях, когда две или более аминокислотных последовательности отличаются друг от друга консервативными заменами, процент идентичности последовательностей может быть скорректирован в расчете на консервативную природу такой замены. Методы осуществления такой коррекции хорошо известны специалистам. См., например, Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31(1994). Примерами групп аминокислот, которые имеют боковые цепи с аналогичными химическими свойствами, являются 1) аминокислоты с алифатическими боковыми цепями: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) аминокислоты с алифатическими-гидроксильными боковыми цепями: серин и треонин; 3) аминокислоты с амидсодержащими боковыми цепями: аспарагин и глутамин; 4) аминокислоты с ароматическими боковыми цепями: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) аминокислоты с основными боковыми цепями: лизин, аргинин и гистидин; 6) аминокислоты с кислотными боковыми цепями: аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота; и 7) аминокислоты с серусодержащими боковыми цепями: цистеин и метионин. Консервативными аминокислотными заменами являются замены в пределах таких групп, как валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутаматаспартат и аспарагин-глутамин. Альтернативно, консервативной заменой является любая замена, имеющая положительную величину в матрице логарифмического правдоподобия РАМ 250, как описано в работе Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992), которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Термин "умеренно консервативная" замена означает любую замену, имеющую неотрицательную величину в матрице логарифмического правдоподобия РАМ 250. Идентичность полипептидных последовательностей обычно определяют с помощью компьютерной программы для анализа последовательностей. Компьютерный анализ белков проводят для установления соответствия последовательностей с использованием "цены" сходства, приписываемой заменам, делециям и другим модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Например, GCG включает программы, такие как "Gap" и "Bestfit", которые могут быть использованы с параметрами по умолчанию, установленными в этих программах, для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близкородственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды от организмов различных видов, или между белком дикого типа и его мутеином. Смотрите,например, GCG Version 6.1. Полипептидные последовательности могут быть также подвергнуты сравнению с помощью программы FASTA с использованием параметров по умолчанию или рекомендованных параметров, смотрите GCG Version 6.1 (University of Wisconsin WI). Программа FASTA (например,FASTA2 и FASTA3) позволяет проводить сопоставление последовательностей и определять процент идентичности последовательностей для областей с наилучшим перекрыванием между запрашиваемыми последовательностями и последовательностями поиска (Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990);Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000. Другим предпочтительным алгоритмом для сравнения последовательности согласно изобретению с последовательностью базы данных, содержащей большое число последовательностей, происходящих от различных организмов, является компьютерная программаBLAST, а в частности blastp или tblastn, с параметрами по умолчанию, установленными в таких программах. См., например, Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997). Длина полипептидных последовательностей, сравниваемых для определения их гомологии, обычно составляет по меньшей мере примерно 16 аминокислотных остатков, обычно по меньшей мере примерно 20 остатков, чаще всего по меньшей мере примерно 24 остатка или примерно 28 остатков, а предпочтительно более чем примерно 35 остатков. При поиске базы данных, содержащей последовательности от большого числа различных организмов, предпочтительно сравнивать аминокислотные последовательности. Используемые здесь термины "метка" или "меченый" относится к включению другой молекулы в антитело. В одном варианте изобретения указанной меткой является детектируемый маркер, например радиоактивно меченная аминокислота, включение которой в полипептид биотинильной молекулы или ее присоединение к полипептиду биотинильной молекулы может быть детектировано по меченому авидину(например, стрептавидину, содержащему флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которая может быть детектирована оптическими или колориметрическими методами). В другом варианте указанная метка или маркер могут также обладать терапевтическими свойствами, например, они могут быть конъюгированными с лекарственным средством или токсином. При этом могут быть использованы различные методы мечения полипептидов и гликопротеинов, хорошо известные специалистам. Примерами меток, используемых для полипептидов, являются, не ограничиваясь ими, радиоизотопы или радионуклиды (например, 3 Н, 14 С, 15N, 35S, 90Y, 94Tc, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные метки (например,ФИТЦ, родамин, комплекс "лантанид-фосфор"), ферментативные метки (например, пероксидаза хрена,-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные метки, биотинильные группы,предварительно определяемые полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичной репортерной молекулой (например, двухкомпонентные последовательности лейциновой молнии, сайты связывания для"вторых" антител, металлосвязывающие домены, эпитопные метки), магнитные вещества, такие как гадолиниевые хелатные комплексы; токсины, такие как коклюшный токсин; таксол; цитохалазин В; грамицидин D; этидийбромид; эметин; митомицин; этопозид; тенопозид; винкристин; винбластин; колхицин; доксорубицин; даунорубицин; дигидроксиантрациндион; митоксантрон; митрамицин; актиномицинD; 1-дегидротестостерон; глюкокортикоиды; прокаин; тетракаин; лидокаин; пропранолол; пуромицин и их аналоги или гомологи. В некоторых вариантах осуществления изобретения, метки присоединяют посредством спейсерных групп различной длины для уменьшения возможного стерического затруднения. В описании изобретения и в формуле изобретения слово "содержать" или его варианты, такие как"содержит" или "содержащий", следует понимать как включение определенного элемента или группы элементов, но не исключение любого другого элемента или группы элементов. Антитела против человеческого M-CSF и их характеристики В одном из вариантов настоящее изобретение относится к гуманизованным анти-M-CSF-антителам. В другом варианте настоящее изобретение относится к антителам против человеческого M-CSF. В некоторых вариантах изобретения антитела против человеческого M-CSF продуцируют путем иммунизации трансгенного животного, не относящегося к человеку, например грызуна, геном которого содержит гены человеческого иммуноглобулина, так, чтобы у этого грызуна продуцировались человеческие антитела. Анти-M-CSF-антитело согласно изобретению может содержать человеческую легкую каппа- или лямбда-цепь или происходящую от нее аминокислотную последовательность. В некоторых вариантах изобретения относящихся к легкой каппа-цепи, вариабельный домен легкой цепи (VL) частично кодируется человеческим геном VKO12, VKL2, VKL5, VKA27 или VKB3 и геном JK1, JK2, JK3 или JK4. В конкретных вариантах изобретения вариабельный домен легкой цепи кодируется геном VKO12/JK3, VKL2/JK3,VKL5/JK3, VKL5/JK4, VKA27/JK4 или VKB3/JK1. В некоторых вариантах изобретения VL анти-M-CSF-антитела содержит одну или несколько аминокислотных замен по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии. В некоторых вариантах изобретения VL анти-M-CSF-антитела содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии. В некоторых вариантах изобретения одна или несколько таких замен, по сравнению с зародышевой линией, присутствуют в областях CDR легкой цепи. В некоторых вариантах изобретения замены в аминокислотной последовательности, по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, присутствуют в одном или нескольких положениях, соответствующих положениям последовательности, в любом одном или нескольких VL антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3,9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4,9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. Например, VL анти-M-CSF-антитело,по сравнению с зародышевой линией, может содержать одну или несколько аминокислотных замен, присутствующих в VL антитела 88, и другие аминокислотные замены присутствующие в VL антитела 252, в- 12011669 котором VL кодируется таким же геном VK, как в антителе 88. В некоторых вариантах изобретения аминокислотные замены присутствуют в одном или нескольких тех же самых положениях, но, в отличие от исходного антитела, вызывают другую мутацию. В некоторых вариантах изобретения аминокислотные замены, по сравнению с зародышевой линией, присутствуют в одном или нескольких положениях, аналогичных положениям в любом из VL антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser,8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser,8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, но эти замены могут быть консервативными аминокислотными заменами в положениях, которые соответствуют положениям аминокислот в исходном антителе. Например, если в конкретном положении в одном из указанных антител имеется замена, по сравнению с зародышевой линией, и если в таком положении присутствует глутамат, то он может быть заменен аспартатом в этом положении. Аналогичным образом, если в данном положении заменяемой аминокислоты присутствует серин, то, по сравнению с зародышевой линией, этот серин может быть заменен треонином. Консервативные аминокислотные замены обсуждаются выше. В некоторых вариантах изобретения легкая цепь человеческого анти-M-CSF-антитела содержит аминокислотную последовательность, аналогичную аминокислотной последовательности VL антитела 252 (SEQ ID NO:4), 88 (SEQ ID NO:8), 100 (SEQ ID NO:12), 3.8.3 (SEQ ID NO:16), 2.7.3 (SEQ ID NO:20),1.120.1 (SEQ ID NO:24), 9.14.4I (SEQ ID NO:28), 8.10.3F (SEQ ID NO:32), 9.7.2IF (SEQ ID NO:36), 9.14.4(SEQ ID NO:32) или 9.14.4G1 (SEQ ID NO:28), или указанную аминокислотную последовательность,имеющую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 консервативных аминокислотных замен и/или всего от 1 до 3 неконсервативных аминокислотных замен. В некоторых вариантах изобретения легкая цепь любого из вышеуказанных антител содержит аминокислотную последовательность, начинающуюся с области CDR1 и заканчивающуюся областью CDR3. В некоторых вариантах изобретения легкая цепь анти-M-CSF-антитела содержит по меньшей мереCDR1, CDR2 или CDR3 легкой цепи последовательности зародышевой линии или последовательности антитела, описанного в настоящей заявке. В другом варианте изобретения указанная легкая цепь может содержать области CDR1, CDR2 или CDR3 антитела, независимо выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3,1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или области CDR, каждая из которых имеет менее 4 или менее 3 консервативных аминокислотных замен и/или всего 3 или менее неконсервативных аминокислотных замен. В других вариантах изобретения указанная легкая цепь анти-М-CSF-антитела может содержать области CDR1, CDR2 илиCDR3 легкой цепи, каждая из которых независимо выбрана из областей CDR1, CDR2 и CDR3 антитела,имеющего вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность VLобласти, выбранной из SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60, или кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей VL-область и выбранной из SEQ ID NO:3, 7, 11, 27, 31, 35,43 или 47. Легкая цепь анти-M-CSF-антитела может включать в себя области CDR1, CDR2 или CDR3 антитела, содержащего аминокислотную последовательность VL-области и выбранного из 252, 88, 100,3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser,8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4,8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32,36, 44, 48, 52, 56 или 60. В некоторых вариантах изобретения указанная легкая цепь содержит области CDR1, CDR2 илиCDR3 антитела, независимо выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF,9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2,9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или указанные областиCDR, каждая из которых имеет менее 4 или менее 3 консервативных аминокислотных замен и/или всего три или менее неконсервативных аминокислотных замен. Что касается тяжелой цепи, то в некоторых вариантах изобретения вариабельная область аминокислотной последовательности тяжелой цепи частично кодируется человеческим геном VH3-11, VH3-23,VH3-7, VH1-18, VH3-33, VH3-48 и геном JH4, JH6, JH4b или JH6b. В конкретном варианте изобретения, вариабельная область тяжелой цепи кодируется геном VH3-11/DH7-27/JH6, VH3-7/DH6-13/JH4, VH3-23/DH126/JH4, VH3-11/DH7-27/JH4, VH3-33/DH1-26/JH4, VH1-18/DH4-23/JH4, VH3-11/DH7-27/JH4b, VH3-48/DH126/JH4b, VH3-11/DH6-13/JH6b, VH3-11/DH7-27/JH4b, VH3-48/DH1-6/JH4b или VH3-11/DH6-13/JH6b. В некоторых вариантах изобретения VH анти-M-CSF-антитела, по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, содержит одну или несколько аминокислотных замен, делеций или инсерций(добавлений). В некоторых вариантах изобретения вариабельный домен тяжелой цепи, по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,- 13011669 14, 15, 16, 17 или 18 мутаций. В некоторых вариантах изобретения указанной(ыми) мутацией(ями), по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, является(ются) неконсервативная(ые) замена(ы). В некоторых вариантах изобретения указанные мутации находятся в областях CDR тяжелой цепи. В некоторых вариантах изобретения аминокислотные замены введены в одно или несколько положений, аналогичных положениям мутаций в зародышевой линии в любом одном или нескольких VL антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2CSer, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В других вариантах изобретения аминокислотные замены присутствуют в одном или нескольких аналогичных положениях, но, в отличие от исходного антитела, вызывают другую мутацию. В некоторых вариантах изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена (VH) антитела 252 (SEQ ID NO:2), 88 (SEQ ID NO:6), 100 (SEQ ID NO:10), 3.8.3(SEQ ID NO:78), 9.14.4-Ser (SEQ ID NO:82), 9.7.2-Ser (SEQ ID NO:86), 8.10.3-Ser (SEQ ID NO:90), 8.10.3CG4 (SEQ ID NO:94), 8.10.3FG1 (SEQ ID NO:98) или 9.14.4G1 (SEQ ID NO:102), или указанную аминокислотную последовательность, имеющую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 консервативных аминокислотных замен и/или всего от 1 до 3 неконсервативных аминокислотных замен. В некоторых вариантах изобретения тяжелая цепь любого из вышеуказанных антител содержит аминокислотную последовательность,начинающуюся с области CDR1 и заканчивающуюся областью CDR3. В некоторых вариантах изобретения указанная тяжелая цепь содержит области CDR1, CDR2 илиCDR3 антитела 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser,9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser,8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или указанные области CDR, каждая из которых имеет менее чем 8, менее чем 6, менее чем 4 или менее чем 3 консервативных аминокислотных замен и/или всего три или менее неконсервативных аминокислотных замен. В некоторых вариантах изобретения указанная тяжелая цепь содержит вышеописанную областьCDR3 зародышевой линии или описанного выше антитела, и может также содержать области CDR1 иCDR2 последовательности зародышевой линии, либо она может содержать области CDR1 и CDR2 последовательности антитела, каждая из которых независимо выбрана из областей антитела, содержащего тяжелую цепь антитела, выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4,8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В другом варианте изобретения указанная тяжелая цепь содержит CDR3 описанной здесь последовательности антитела и может также содержать области CDR1 и CDR2, каждая из которых независимо выбрана из областей CDR1 и CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность VH-области, выбранную из SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102, или кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей VH-область, выбранную из SEQ ID NO:1, 5, 9, 25, 29, 33, 37, 45, 97 или 101. В другом варианте изобретения указанное антитело содержит легкую и тяжелую цепи, описанные выше. Одним из типов аминокислотных замен, которые могут быть введены в антитело, является замена одного или нескольких цистеинов, которые могут быть химически реакционноспособными, другими остатками, такими как - но не ограничиваясь ими аланин или серин. В одном из вариантов изобретения рассматривается замена неканонического цистеина. Такая замена может присутствовать в каркасной области вариабельного домена или в константной области антитела. В другом варианте изобретения этот цистеин находится в неканонической области антитела. Другим типом аминокислотной замены, которая может быть введена в антитело, является удаление любых потенциальных протеолитических сайтов, присутствующих в антителе, а в частности, сайтов,которые присутствуют в области CDR или в каркасной области вариабельного домена или в константной области антитела. Замена цистеиновых остатков и удаление протеолитических сайтов может снижать риск, связанный с любой гетерогенностью продукта антитела, и тем самым, увеличивать его гомогенность. Другим типом аминокислотной замены является элиминация пар аспарагин-глицин, которые могут образовывать сайты деамидирования, путем модификации одного или обоих остатков. В некоторых вариантах изобретения С-концевой лизин тяжелой цепи анти-М-CSF-антитела согласно изобретению отсутствует (Lewis D.A. et al., Anal. Chem. 66(5):585-95 (1994). В различных вариантах настоящего изобретения, тяжелая и легкая цепи анти-M-CSF-антител могут, но необязательно, включать сигнальную последовательность. В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к ингибированию человеческих моноклональных антител против М-CSF и клеточных линий, сконструированных таким образом, что они продуцируют эти антитела. В табл. 1 перечислены идентификаторы последовательностей (SEQ ID NO) нук- 14011669 леиновых кислот, которые кодируют вариабельную область тяжелой и легкой цепей, и соответствующие предсказанные аминокислотные последовательности моноклональных антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3,1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3 и 9.7.2. Другие варианты антител 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser,8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser,8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1 могут быть получены методами, известными специалистам. Таблица 1 Классы и подклассы анти-M-CSF-антител Класс и подкласс анти-M-CSF-антител могут быть определены любым методом, известным специалистам. В общих чертах, класс и подкласс анти-M-CSF-антител могут быть определены с использованием антител, которые являются специфическими в отношении конкретного класса и субкласса антитела. Такие антитела являются коммерчески доступными. Класс и подкласс антитела может быть определен с помощью ELISA или Вестерн-блот-анализа, а также другими методами. Альтернативно, класс и подкласс антитела может быть определен путем секвенирования всех константных доменов тяжелой и/или легкой цепей антител или их части, сравнения их аминокислотных последовательностей с известными аминокислотными последовательностями различных классов и субклассов иммуноглобулинов и определения класса и подкласса этих антител. В некоторых вариантах изобретения анти-M-CSF-антитело представляет собой моноклональное антитело. Таким анти-M-CSF-антителом может быть молекула IgG, IgM, IgE, IgA или IgD. В предпочтительных вариантах анти-M-CSF-антителом является IgG подклассов IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В других предпочтительных вариантах указанным антителом является иммуноглобулин подклассов IgG2 илиIgG4. В другом предпочтительном варианте таким антителом является иммуноглобулин подкласса IgG1.- 15011669 Видовая и молекулярная селективность В другом аспекте настоящего изобретения анти-M-CSF-антитела обладают как видовой, так и молекулярной селективностью. В некоторых вариантах изобретения анти-M-CSF-антитело связывается с MCSF человека, собакоподобных обезьян и мышей. В соответствии с описанием изобретения, можно определить видовую селективность анти-M-CSF-антитела хорошо известными методами. Например, видовую селективность можно определить с помощью Вестерн-блот-анализа, FACS, ELISA, РИА, анализа на пролиферацию клеток и анализа на связывание с M-CSF-рецептором. В предпочтительном варианте изобретения видовую селективность можно определить с помощью анализа на пролиферацию клеток или с помощью ELISA. В другом варианте изобретения анти-M-CSF-антитело обладает селективностью к M-CSF, которая по меньшей мере в 100 раз превышает селективность в отношении GM-CSF/G-CSF. В некоторых вариантах изобретения, анти-M-CSF-антитело не обнаруживает заметного специфического связывания с любым другим белком, не являющимся M-CSF. Селективность анти-M-CSF-антитела в отношении M-CSF может быть определена методами, хорошо известными специалистам, в соответствии с описанием настоящего изобретения. Например, такая селективность может быть определена с помощью Вестерн-блот-анализа,FACS, ELISA или РИА. Идентификация эпитопов M-CSF, распознаваемых анти-M-CSF-антителами Настоящее изобретение относится к человеческому моноклональному анти-M-CSF-антителу, которое связывается с М-CSF и конкурирует за связывание с таким же эпитопом, перекрестно конкурирует за связывание с таким же эпитопом и/или связывается с M-CSF с таким же KD, как (а) антитело, выбранное из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3 и 9.7.2. Другие варианты антител 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1; (b) антитело, которое содержит область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34,38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102, (с) антитело, которое содержит область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44,48, 52, 56 или 60; (d) антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, определяемую в(b), и вариабельную область легкой цепи, определяемую в (с). Для того, чтобы определить, может ли антитело связываться, конкурировать за связывание, перекрестно конкурировать за связывание с таким же эпитопом, и/или имеет ли оно такое же KD, как и антиM-CSF-антитело, могут быть применены методы, известные специалистам. В одном из вариантов изобретения, анти-M-CSF-антитело согласно изобретению может связываться с M-CSF в условиях насыщения, а затем может быть определена способность тестируемого антитела связываться с M-CSF. Если тестируемое антитело способно связываться с M-CSF одновременно с анти-М-CSF-антителом, то тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, чем тот эпитоп, с которым связывается анти-M-CSFантитело. Однако, если тестируемое антитело неспособно связываться с M-CSF одновременно с анти-MCSF-антителом, то тестируемое антитело связывается с тем же самым эпитопом, с перекрывающимся эпитопом или с эпитопом, который находится в непосредственной близости к эпитопу, связанному с человеческим анти-M-CSF-антителом. Этот эксперимент может быть проведен с помощью ELISA, РИА или FACS. В предпочтительном варианте изобретения, такой эксперимент проводят с использованиемBIACORE. Аффинность связывания анти-М-CSF-антител с M-CSF В некоторых вариантах изобретения анти-M-CSF-антитела связываются с M-CSF с высокой аффинностью. В некоторых вариантах изобретения анти-M-CSF-антитело связывается с M-CSF при KD 110-7M или менее. В других предпочтительных вариантах изобретения указанное антитело связывается с MCSF при KD 110-8 M, 110-9 M, 110-10 M, 110-11 M, 110-12 M или менее. В некоторых вариантах изобретения KD составляет от 1 пМ до 500 пМ. В других вариантах изобретения KD составляет от 500 пМ до 1 мкМ. В других вариантах изобретения KD составляет от 1 мкМ до 100 нМ. В других вариантах изобретения KD составляет от 100 мМ до 10 нМ. В еще более предпочтительном варианте указанное антитело связывается с M-CSF в основном при таком же KD, как и антитело, выбранное из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3,1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В другом предпочтительном варианте указанное антитело связывается с М-CSF в основном при таком же KD, как и антитело, которое содержит CDR2 легкой цепи и/или CDR3 тяжелой цепи антитела, выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2CSer, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В еще одном предпочтительном варианте антитело связывается с M-CSF в основном при таком же KD, как и антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26,30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102, или которое содержит вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28,- 16011669 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело связывается с M-CSF в основном при таком же KD, как и антитело, которое содержит CDR2, и может, но необязательно, содержать CDR1 и/или CDR3 вариабельной области легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность VL-области SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60,или которое содержит CDR3 и может, но необязательно, содержать CDR1 и/или CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность VH-области SEQ ID NO:2, 6, 10, 14,18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102. В некоторых вариантах изобретения анти-M-CSF-антитело имеет низкую скорость диссоциации. В некоторых вариантах изобретения анти-М-CSF-антитело имеет koff 2,010-4 с-1 или менее. В других предпочтительных вариантах изобретения указанное антитело связывается с M-CSF при koff 2,010-5 с-1 илиkoff 2,0 10-6 с-1 или менее. В некоторых вариантах изобретения koff является в основном таким же, как иkoff описанного здесь антитела, такого как антитело, выбранное из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1,9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2,9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В некоторых вариантах изобретения указанное антитело связывается с M-CSF в основном с таким же koff,как и антитело, которое содержит (a) CDR3 и может, но необязательно, содержать CDR1 и/или CDR2 тяжелой цепи антитела, выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4,8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1; или (b) CDR2 и может, но необязательно, содержать CDR1 и/или CDR3 легкой цепи антитела, выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3,1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В некоторых вариантах изобретения антитело связывается с M-CSF в основном с таким же koff,как и антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90,94, 98 или 102, или которое содержит вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело связывается с M-CSF в основном с таким же koff, как и антитело, которое содержит CDR2, и может, но необязательно, содержать CDR1 и/или CDR3 вариабельной области легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24,28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60, или которое содержит CDR3 и может, но необязательно, содержать CDR1 и/или CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102. Аффинность связывания анти-M-CSF-антитела с M-CSF и скорость диссоциации такого антитела могут быть определены методами, известными специалистам. Аффинность связывания может быть определена с помощью конкурентных ELISA, РИА, поверхностного плазмонного резонанса (например, с применением технологии BIACORE). Скорость диссоциации может быть измерена с применением поверхностного плазмонного резонанса. Предпочтительно, аффинность связывания и скорость диссоциации измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса. Более предпочтительно, аффинность связывания и скорость диссоциации измеряют с применением технологии BIACORE. В примере VI описан репрезентативный способ определения констант аффинностей моноклональных анти-M-CSFантител с применением технологии BIACORE. Ингибирование активности M-CSF-анти-M-CSF-антителом Ингибирование связывания M-CSF с c-fms В другом варианте изобретения настоящее изобретение относится к анти-M-CSF-антителу, которое ингибирует связывание M-CSF с рецептором c-fms и блокирует или предупреждает активацию c-fms. В предпочтительном варианте изобретения M-CSF представляет собой человеческий M-CSF. В другом предпочтительном варианте изобретения указанным анти-M-CSF-антителом является человеческое антитело. IC50 может быть определена с помощью анализов ELISA и РИА, а также клеточных анализов, таких как анализ на пролиферацию клеток, анализ на изменение формы моноцитов цельной крови или анализ на связывание с рецептором. В одном из вариантов изобретения антитело или его часть ингибируют пролиферацию клеток при IC50 не более чем 8,010-7 М, предпочтительно не более чем 310-7 М, или более предпочтительно не более чем 810-7 М, как было измерено с помощью анализа на пролиферацию клеток. В другом варианте изобретения IC50, измеренная с помощью анализа на изменение формы моноциитов, составляет не более чем 210-6 М, предпочтительно не более чем 9,010-7 М, или более предпочтительно не более чем 9,010-8 М. В другом предпочтительном варианте изобретения IC50, измеренная с помощью анализа на связывание с рецептором составляет не более чем 210-6 М, предпочтительно не более чем 8,010-7 М или более предпочтительно не более чем 7,010-8 М. В примерах III, IV и V проиллюстрированы анализы различных типов. В другом аспекте изобретения анти-M-CSF-антитела согласно изобретению ингибируют пролиферацию моноцитов/макрофагов в ответ на воздействие M-CSF по меньшей мере на 20%, а более предпоч- 17011669 тительно на 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 85, 90, 95 или 100% по сравнению с пролиферацией клеток в отсутствии антитела. Способы продуцирования антител и антителопродуцирующих клеточных линий Иммунизация В некоторых вариантах изобретения человеческие антитела продуцируют путем иммунизации антигеном M-CSF животного, не являющегося человеком и содержащего в своем геноме некоторые или все локусы тяжелой и легкой цепей человеческого иммуноглобулина, В предпочтительном варианте изобретения, указанным животным, не являющимся человеком, является животное XENOMOUSE (AbgenixInc., Fremont, CA). Другим животным, которое может быть использовано в настоящем изобретении, и которое относится к человеку, является трансгенная мышь, продуцированная Medarex (Medarex, Inc.,Princeton, NJ). Мыши XENOMOUSE представляют собой генетически сконструированные виды мышей, которые содержат крупные фрагменты локусов тяжелой и легкой цепей человеческого иммуноглобулина и являются дефицитными по продуцированию мышиного антитела. См., например, Green et al., Nature Genetics 7:13-21 (1994) и патенты США 5916771, 5939598, 5985615, 5998209, 6075181, 6091001, 6114598,6130364, 6162963 и 6150584. Смотрите также WO 91/10741, WO 94/02602, WO 96/34096, WO 96/33735,WO 98/16654, WO 98/24893, WO 98/50433, WO 99/45031, WO 99/53049, WO 00/09560 и WO 00/037504. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу получения анти-M-CSFантител от животных, не являющихся человеком и не являющихся мышью, путем иммунизации антигеном М-CSF трансгенных животных, не являющихся человеком, который имеют человеческий локус иммуноглобулина. Такие животные могут быть созданы методами, описанными в вышеуказанных документах. Методы, описанные в этих документах, могут быть модифицированы как описано в патенте США 5994619. В патенте США 5994619 описаны методы продуцирования новых клеток и клеточных линий культуральной внутренней клеточной массы (CICM), полученных от свиней и коров, и трансгенных клеток CICM, в которые была введена гетерологичная ДНК. Трансгенные клетки CICM могут быть использованы для продуцирования клонированных трансгенных эмбрионов, плода и потомства. В патенте 5994619 также описаны методы создания трансгенных животных, которые способны передавать потомству гетерологичную ДНК. В предпочтительных вариантах изобретения животными, не относящимися к человеку, являются крысы, овцы, свиньи, козы, крупный рогатый скот или лошади. У мышей XENOMOUSE продуцируется репертуар полноразмерных человеческих антител, подобный тому, который обычно продуцируется у взрослого человека, и генерируются антигенспецифические человеческие антитела. В некоторых вариантах изобретения мыши XENOMOUSE обычно содержат примерно 80% генов V, кодирующих репертуар человеческих антител, благодаря введению этим мышам фрагментов дрожжевой искусственной хромосомы (YAC), имеющих мегануклеотиды определенной длины и конфигурацию зародышевой линии, и находящихся в локусах тяжелой цепи и легкой каппа-цепи человеческих антител. В другом варианте изобретения мышь XENOMOUSE, кроме того,содержит почти весь локус легкой лямбда-цепи. Смотрите, Mendez et al., Nature Genetics 16:14 6-156(1997), GreenJakobovits, J.Exp. Med. 188:483-495 (1998) и WO 98/24893, которые включены в настоящее описание посредством ссылки. В некоторых вариантах изобретения животными, не являющимися человеком и содержащими гены человеческого иммуноглобулина, являются животные, которые имеют "минилокусы" человеческого иммуноглобулина. В подходе, основанном на минилокусах, экзогенный локус Ig имитируется посредством включения отдельных генов локуса Ig. Таким образом, конструкция для введения животному образуется из одного или нескольких генов VH, одного или нескольких генов DH, одного или нескольких генов JH,константного домена mu и второго константного домена (предпочтительно, константного домена гаммацепи). Этот подход описан, inter alia, в патентах США 5545807, 5545806, 5569825, 5625126, 5633425,5661016, 5770429, 5789650, 5814318, 5591669, 5612205, 5721367, 5789215 и 5643763, которые включены в настоящее описание посредством ссылки. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу получения анти-M-CSFантител. В некоторых вариантах изобретения указанных животных, не являющихся человеком, иммунизируют антигеном M-CSF как описано ниже в условиях, позволяющих продуцировать антитело. Антитело-продуцирующие клетки выделяют из этих животных, подвергают слиянию с миеломами для продуцирования гибридом, и выделяют нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи представляющего интерес анти-M-CSF-антитела. Затем эти нуклеиновые кислоты модифицируют известными методами генной терапии и методами, подробно описанными ниже, в целях уменьшения размера нечеловеческой последовательности, то есть в целях "гуманизации" антитела для снижения иммунного ответа у человека. В некоторых вариантах изобретения антигеном M-CSF является выделенный и/или очищенный MCSF. В предпочтительном варианте изобретения указанным антигеном M-CSF является человеческий МCSF. В некоторых вариантах изобретения указанным антигеном М-CSF является фрагмент M-CSF. В некоторых вариантах изобретения указанным фрагментом M-CSF является внеклеточный домен M-CSF.- 18011669 В некоторых вариантах изобретения указанный фрагмент M-CSF содержит по меньшей мере один эпитоп M-CSF. В других вариантах изобретения указанным антигеном M-CSF является клетка, которая экспрессирует или сверхэкспрессирует M-CSF или его иммуногенный фрагмент на поверхности клетки. В некоторых вариантах изобретения указанным антигеном M-CSF является гибридный белок M-CSF. MCSF может быть выделен из природных источников известными методами. Рекомбинантный M-CSF является коммерчески доступным. Иммунизация животных может быть проведена любым методом, известным специалистам. См., например, HarlowLane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990. Методы иммунизации животных, не относящихся к человеку, таких как крысы, овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот и лошади, хорошо известны специалистам. Смотрите, например, HarlowLane, смотрите выше и патент США 5994 619. В предпочтительном варианте изобретения антиген M-CSF вводят вместе с адъювантом для стимуляции иммунного ответа. Примерами адъювантов являются полный или неполный адъювант Фрейнда, RIBI (мурамилдипептиды) или ISCOM (иммуностимулирующие комплексы). Такие адъюванты могут защищать полипептид от быстрого диспергирования путем его изолирования в локальном участке, либо они могут содержать вещества, стимулирующие секрецию факторов, которые являются хемотаксическими для макрофагов и других компонентов иммунной системы, из организма-хозяина. При введении полипептида схема иммунизации, предпочтительно, включает два или более введения данного полипептида за период времени в несколько недель. В примере I проиллюстрирован метод продуцирования моноклональных анти-M-CSF-антител у мышей XENOMOUSE . Продуцирование антител и антителопродуцирующих клеточных линий После иммунизации животного антигеном M-CSF, у этого животного могут продуцироваться антитела и/или антителопродуцирующие клетки. В некоторых вариантах изобретения сыворотку, содержащую анти-M-CSF-антитело, получают от животного путем взятия крови или после его умерщвления. Эта сыворотка может быть использована в том виде, в каком она была получена от животного, либо из этой сыворотки может быть получена иммуноглобулиновая фракция, либо из нее могут быть выделены антиM-CSF-антитела. В некоторых вариантах изобретения антителопродуцирующие иммортализованные клеточные линии получают из клеток, выделенных из иммунизованного животного. После иммунизации животное умерщвляют, и В-клетки лимфоузлов и/или селезенки подвергают иммортализации. Методы иммортализации клеток включают, но не ограничиваются ими, трансфекцию клеток онкогенами, инифицирование клеток онкогенным вирусом, культивирование в условиях отбора на иммортализованные клетки, обработку этих клеток канцерогенными или мутирующими соединениями, слияние этих клеток с иммортализованной клеткой, например, с миеломной клеткой, и инактивацию клеток геном-супрессором опухоли. Смотрите выше, например, HarlowLane. Если применяется слияние с миеломными клетками, то,предпочтительно, чтобы миеломные клетки не секретировали полипептиды иммуноглобулина (не секреторная клеточная линия). Иммортализованные клетки скринируют с использованием M-CSF или его части, либо клетки, экспрессирующей M-CSF. В предпочтительном варианте изобретения предварительный скрининг осуществляют с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) или радиоиммуноанализа. Пример ELISA-скрининга приводится в заявке WO 00/37504, которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Клетки, продуцирующие анти-M-CSF-антитело, например гибридомы, отбирают, клонируют, а затем скринируют на нужные свойства, включая устойчивый рост, продуцирование антител на высоком уровне и с нужными свойствами, как подробно обсуждается ниже. Гибридомы могут быть размножены("голых") мышей или в клеточной культуре in vitro. Методы отбора, клонирования и размножения гибридом хорошо известны специалисту в данной области. В предпочтительном варианте изобретения иммунизированным животным, не относящимся к человеку, является животное, у которого экспрессируются гены человеческих иммуноглобулинов; и В-клетки селезенки этого животного подвергают слиянию с миеломной клеточной линией, взятой у животного того же самого вида, не являющегося человеком. В более предпочтительном варианте изобретения иммунозированным животным является животное XENOMOUSE, а миеломной клеточной линией является несекреторная мышиная миелома. В еще более предпочтительном варианте изобретения указанной миеломной клеточной линией является P3-X63-AG8-653. См., например, пример I. Таким образом, в одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к способам получения клеточной линии, которая продуцирует человеческое моноклональное антитело или его фрагмент против M-CSF, где указанные способы включают: (а) иммунизацию описанного здесь трансгенного животного, не являющегося человеком, фактором M-CSF, частью M-CSF или клеткой или тканью, экспрессирующей M-CSF; (b) стимуляцию вырабатывания у трансгенного животного иммунного ответа на MCSF; (с) выделение В-лимфоцитов из трансгенного животного; (d) иммортализацию В-лимфоцитов; (е) создание отдельных моноклональных популяций иммортализованных В-лимфоцитов; и (f) скрининг иммортализованных В-лимфоцитов для идентификации антитела против M-CSF. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к гибридомам, которые продуцируют че- 19011669 ловеческое анти-M-CSF-антитело. В предпочтительном варианте изобретения указанными гибридомами являются мышиные гибридомы, описанные выше. В других вариантах изобретения указанные гибридомы продуцируются животными, не относящимися к человеку и мыши, такими как крысы, овцы, свиньи,козы, крупный рогатый скот или лошади. В другом варианте осуществления изобретения указанными гибридомами являются человеческие гибридомы. В другом предпочтительном варианте изобретения трансгенное животное иммунизируют M-CSF; затем первичные клетки, например клетки селезенки или периферической крови выделяют из иммунизованного трансгенного животного, и идентифицируют отдельные клетки, продуцирующие антитела против нужного антигена. Из каждой отдельной клетки выделяют полиаденилированную мРНК и проводят полимеразные цепные реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) с использованием смысловых праймеров, которые гибридизуются с последовательностями вариабельных областей, например, с использованием вырожденных праймеров, распознающих большинство или все области FR1 генов вариабельных областей человеческой тяжелой и легкой цепей, и антисмысловых праймеров, которые гибридизуются с последовательностями константных областей и областей стыка. Затем кДНК вариабельных областей тяжелой и легкой цепей клонируют и экспрессируют в любой подходящей клетке-хозяине, например, в миеломной клетке, в виде химерных антител с соответствующими константными областями иммуноглобулина, такими как константные домены тяжелой цепи и - или -цепи. См., например, работу Babcook J.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-48, 1996, которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Затем анти-M-CSF-антитела идентифицируют и выделяют как описано в настоящей заявке. В другом варианте изобретения может быть использована техника фагового представления для создания библиотек, содержащих репертуар антител с различными аффинностями по отношению к M-CSF. Для продуцирования такого репертуара В-клетки, выделенные из иммунизованного животного, не должны быть обязательно иммортализованы. Наоборот, предпочтительнее использовать первичные В-клетки непосредственно в качестве источника ДНК. Смесь ДНК, полученных из В-клетки, например из клетки селезенки, используют для получения экспрессионной библиотеки, например библиотеки фагового представления, трансфецированной в Е. coli. Полученные клетки тестируют на иммунореактивность с M-CSF. Методы идентификации высокоаффинных человеческих антител из таких библиотек описаны, например,Griffiths et al., EMBO J. 13:3245-3260 (1994); Nissim et al., ibid., pp.692-698 и Griffiths et al., ibid, 12:725734. И наконец из данной библиотеки идентифицируют клоны, имеющие нужные значения аффинностей связывания с антигеном, затем выделяют ДНК, кодирующую продукт, ответственный за такое связывание, и эту ДНК модифицируют для осуществления экспрессии рекомбинантных продуктов. Библиотеки фагового представления могут быть также сконструированы с использованием предварительно модифицированных нуклеотидных последовательностей и скринированы аналогичным образом. Вообще говоря,кДНК, кодирующие тяжелые и легкие цепи, получают либо независимо друг от друга, либо присоединяют друг к другу с образованием Fv-аналогов для продуцирования фаговой библиотеки. Затем фаговую библиотеку скринируют на антитела, имеющие наиболее высокие аффинности по отношению к M-CSF, и из соответствующего клона выделяют генетический материал. Последующие раунды скрининга могут приводить к повышению аффинности исходного выделенного антитела. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к гибридомам, которые продуцируют человеческое анти-M-CSF-антитела. В предпочтительном варианте изобретения указанными гибридомами являются мышиные гибридомы, описанные выше. В другом варианте изобретения указанные гибридомы продуцированы у животных, не относящихся к человеку и мыши, таких как крысы, овцы, свиньи, козы,крупный рогатый скот или лошади. В другом варианте осуществления изобретения указанными гибридомами являются человеческие гибридомы. Нуклеиновые кислоты, векторы, клетки-хозяева и рекомбинантные методы получения антител Нуклеиновые кислоты Настоящее изобретение также охватывает молекулы нуклеиновых кислот, кодирующих анти-MCSF-антитела. В некоторых вариантах изобретения различные молекулы нуклеиновых кислот кодируют тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина против M-CSF. В другом варианте изобретения те же самые молекулы нуклеиновых кислот кодируют тяжелую и легкую цепи иммуноглобулина против М-CSF. В одном из вариантов изобретения нуклеиновая кислота кодирует анти-M-CSF-антитело согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения молекула, кодирующая вариабельный домен легкой цепи, содержит ген VKL5, 012, L2, В 3, А 27 и ген JK1, JK2, JK3 или JK4. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, кодирует аминокислотную последовательность, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VL, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 неконсервативных аминокислотных замен и/или 1, 2 или 3 неконсервативных замен по сравнению с последовательностью зародышевой линии. Такие замены могут быть сделаны в областях CDR, в каркасных областях или в кон- 20011669 стантном домене. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность VL, содержащую, по сравнению с последовательностью зародышевой линии, один или несколько вариантов, идентичных вариантам, присутствующим в VL одного из антител 252, 88, 100,3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser,8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4,8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В некоторых вариантах изобретения данная молекула нуклеиновой кислоты кодирует по меньшей мере три аминокислотных мутации по сравнению с последовательностью зародышевой линии, обнаруживаемой в VL одного из антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4, 8.10.3 или 9.7.2. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность VL моноклонального антитела 252 (SEQ ID NO:4), 88 (SEQ ID NO:8), 100 (SEQ ID NO:12), 3.8.3 (SEQ ID NO:16), 2.7.3 (SEQ ID NO:20),1.120.1 (SEQ ID NO:24), 9.14.4I (SEQ ID NO:28), 8.10.3F (SEQ ID NO:32), 9.7.2IF (SEQ ID NO:36), 9.14.4(SEQ ID NO:32) или 9.14.4G1 (SEQ ID NO:28) или ее часть. В некоторых вариантах изобретения указанная часть содержит по меньшей мере область CDR2. В некоторых вариантах изобретения нуклеиновая кислота кодирует аминокислотную последовательность CDR легкой цепи указанного антитела. В некоторых вариантах изобретения указанная часть состоит из смежных остатков и содержит CDR1-CDR3. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую одну из следующих аминокислотных последовательностей легкой цепиSEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60. В некоторых предпочтительных вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность легкой цепиSEQ ID NO:3, 7, 11, 27, 31, 35, 43 или 47 или ее часть. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность VL, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности VL, представленной на фиг. 1, или аминокислотным последовательностямVL любого одного из следующих антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4,8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или аминокислотной последовательности любой из следующих последовательностей SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48,52, 56 или 60. Молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению являются нуклеиновые кислоты,которые гибридизуются в условиях высокой жесткости, описанных выше, с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO:4, 8, 12,16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60, или аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ IDNO:3, 7, 11, 27, 31, 35, 43 или 47. В другом варианте изобретения нуклеиновая кислота кодирует полноразмерную легкую цепь антитела, выбранного 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser,9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser,8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60 и константную область легкой цепи, или легкую цепь, содержащую мутацию. Кроме того, указанная нуклеиновая кислота может содержать нуклеотидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO:3, 7, 11, 27, 31, 35, 43 или 47 и нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область легкой цепи, либо молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь, содержащую мутацию. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует вариабельный домен тяжелой цепи (VH), и содержит последовательность человеческого гена VH 1-18, 3-33, 3-11, 3-23, 3-48 или последовательность гена 3-7, или происходящую от них последовательность. В различных вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает человеческий ген VH1-18, человеческий ген DH4-23 и человеческий ген JH4; человеческий ген VH3-33, человеческий ген DH1-26 и человеческий ген JH4; человеческий ген VH3-11, человеческий ген DH7-27 и человеческий ген JH4; человеческий ген VH3-11, человеческий ген DH7-27 и человеческий ген JH6; человеческий ген VH3-23, человеческий ген DH1-26 и человеческий ген JH4; человеческий ген VH3-7, человеческий ген DH6-13 и человеческий ген JH4; человеческий ген VE3-11, человеческий ген DH7-27 и человеческий ген JH4b; человеческий ген VH3-48, человеческий ген DH1-26 и человеческий ген JH4b; человеческий генVH3-11, человеческий ген DH6-13 и человеческий ген JH6b или последовательность, происходящую от указанных человеческих генов. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 мутаций по срав- 21011669 нению с аминокислотной последовательностью зародышевой линии, кодируемой человеческими генамиV, D или J. В некоторых вариантах изобретения указанные мутации присутствуют в VH-области. В некоторых вариантах изобретения указанные мутации присутствуют в областях CDR. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты, по сравнению с последовательностью нуклеиновой кислоты зародышевой линии, кодирует одну или несколько аминокислотных мутаций, идентичных аминокислотным мутациям, присутствующим в VH моноклонального антитела 252,88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2, 9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3CSer, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser, 9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В некоторых вариантах изобретения нуклеиновая кислота, по сравнению с последовательностью зародышевой линии, кодирует по меньшей мере три аминокислотных мутации,которые идентичны по меньшей мере трем аминокислотным мутациям, присутствующим в одном из вышеперечисленных моноклональных антител. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере часть аминокислотной последовательности VH антитела 252 (SEQ ID NO:2), 88 (SEQ ID NO:6), 100 (SEQ ID NO:10), 3.8.3 (SEQ ID NO:14), 2.7.3 (SEQ ID(SEQ ID NO:82), 9.7.2-Ser (SEQ ID NO:86), 8.10.3-Ser (SEQ ID NO:90), 8.10.3-CG4 (SEQ ID NO:94),8.10.3FG1 (SEQ ID NO:98) или 9.14.4G1 (SEQ ID NO:102), либо указанная последовательность имеет консервативные аминокислотные мутации и/или имеет все три или менее неконсервативных аминокислотных замен. В различных вариантах изобретения указанная последовательность кодирует одну или несколько областей CDR, предпочтительно область CDR3, все три области CDR, непрерывную часть,включающую CDR1-CDR3, или полноразмерную область VH. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает нуклеотидную последовательность тяжелой цепи, которая кодирует аминокислотную последовательность одной из SEQID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере часть нуклеотидной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO:1, 5, 9, 25, 29, 33, 37, 45, 97 или 101. В некоторых вариантах изобретения указанная часть кодирует VH-область, область CDR3, все три области CDR или непрерывную часть, включающую CDR1-CDR3. В некоторых вариантах изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность VH, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентична аминокислотным последовательностям VH, представленным на фиг. 4, аминокислотной последовательностиVH любой одной из SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90,94, 98 или 102. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению включают нуклеиновые кислоты,которые гибридизуются в условиях высокой жесткости, описанных выше, с нуклеотидной последовательностью, кодирующей аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18,22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102, или имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, 5, 9, 25, 29, 33, 37, 45, 97 или 101. В другом варианте изобретения нуклеиновая кислота кодирует полноразмерную тяжелую цепь антитела, выбранного из 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2,9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser,9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1, или тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86,90, 94, 98 или 102 и константную область тяжелой цепи, или тяжелую цепь, содержащую мутацию. Кроме того, указанная нуклеиновая кислота может содержать нуклеотидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:1, 5, 9, 25, 29, 33, 37, 45, 97 или 101 и нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область легкой цепи, или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь,содержащую мутацию. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь или полноразмерную легкую цепь анти-M-CSF-антител или его части, может быть выделена из любого источника, продуцирующего такое антитело. В различных вариантах изобретения молекулы нуклеиновой кислоты выделяют из В-клетки,полученной от животного, иммунизованного M-CSF, или из иммортализованных клеток, происходящих от В-клетки, экспрессирующей анти-M-CSF-антитело. Методы выделения мРНК, кодирующей антитело,хорошо известны специалистам. Смотрите, например, Sambrook et al. Указанная мРНК может быть использована в целях продуцирования кДНК для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) или для кДНК-клонирования генов антитела. В предпочтительном варианте изобретения молекулу нуклеиновой кислоты выделяют из гибридомы, которая имеет, в качестве одного из партнеров по слиянию, клетку,продуцирующую человеческий иммуноглобулин и происходящую от трансгенного животного, не являющегося человеком. В еще более предпочтительном варианте изобретения клетку, продуцирующую- 22011669 человеческий иммуноглобулин, выделяют из животного XENOMOUSE. В другом варианте изобретения клетка, продуцирующая человеческий иммуноглобулин, происходит от трансгенного животного, не являющегося человеком и мышью, как описано выше. В другом варианте изобретения нуклеиновую кислоту выделяют из нетрансгенного животного, не являющегося человеком. Молекулы нуклеиновой кислоты, выделенные из нетрансгенного животного, не являющегося человеком, могут быть использованы,например, для гуманизации антител. В некоторых вариантах изобретения нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь анти-M-CSFантитела согласно изобретению, может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую VHдомен согласно изобретению, присоединенную, с сохранением рамки считывания, к нуклеотидной последовательности, кодирующей константный домен тяжелой цепи, происходящий от любого источника. Аналогичным образом, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь анти-M-CSF-антитела согласно изобретению, может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую VL-домен согласно изобретению, присоединенную, с сохранением рамки считывания, к нуклеотидной последовательности, кодирующей константный домен легкой цепи, происходящий от любого источника. В другом аспекте настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельный домен тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей, "превращают" в полноразмерные гены антитела. В одном из вариантов изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие VH или VL-домены превращают в полноразмерные гены антитела путем их инсерции в экспрессионный вектор, который уже кодирует константный домен (CH) тяжелой цепи или константный домен (CL) легкой цепи, соответственно, так, чтобы в данном векторе, VH-сегмент был функционально присоединен к CH-сегменту(ам), а VHсегмент был функционально присоединен к CL-сегменту. В другом варианте изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие VH и/или VH-домены, превращают в полноразмерные гены антитела путем соединения, например, путем лигирования молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей VH и/илиVL-домены, с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей CH и/или CL-домен, в соответствии со стандартными методами молекулярной биологии. Нуклеотидные последовательности генов константного домена тяжелой и легкой цепей человеческого иммуноглобулина известны специалистам. Смотрите, например, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., NIH Publ. No. 91-3242, 1991. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полноразмерные тяжелые цепи и/или легкие цепи, могут быть затем экспрессированы в клетке, в которую они были введены, с последующим выделением антиM-CSF-антитела. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы для рекомбинантной экспрессии больших количеств анти-M-CSF-антител. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть также использованы для продуцирования химерных антител, биспецифических антител, одноцепочечных антител, иммуноадгезинов, диантител, мутированных антител и производных антител, подробно описанных ниже. Если молекулы нуклеиновой кислоты происходят от нетрансгенного животного, не являющегося человеком,то такие молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы для гуманизации антитела, как описано ниже. В другом варианте изобретения молекула нуклеиновой кислоты согласно изобретению используется в качестве зонда или ПЦР-праймера для специфической последовательности антитела. Например,нуклеиновая кислота может быть использован в качестве зонда в диагностических методах, или в качестве ПЦР-праймера для амплификации областей ДНК, которые могут быть использованы inter alia для выделения дополнительных молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих вариабельные домены анти-МCSF-антител. В некоторых вариантах изобретения молекулами нуклеиновой кислоты являются олигонуклеотиды. В некоторых вариантах изобретения такие олигонуклеотиды происходят от высоковариабельных областей тяжелой и легкой цепей представляющего интерес антитела. В некоторых вариантах изобретения указанные олигонуклеотиды кодируют все CDR или часть одной или нескольких CDR антител 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1 или их варианты, описанные в настоящей заявке. Векторы Настоящее изобретение относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелую цепь анти-М-CSF-антител согласно изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента. Настоящее изобретение также относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие легкую цепь таких антител согласно изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента. Кроме того, настоящее изобретение относится к векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие гибридные белки, модифицированные антитела, фрагменты антител и их зонды. В некоторых вариантах изобретения анти-M-CSF-антитела или их антигенсвязывающие части согласно изобретению экспрессируются в результате встраивания ДНК, кодирующих неполные или полноразмерные легкие и тяжелые цепи и полученных как описано выше, в экспрессионные векторы так, чтобы эти гены были функционально присоединены к нужным последовательностям регуляции экспрессии,таким как последовательности регуляции транскрипции и трансляции. Экспрессионными векторами являются плазмиды, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы (AAV), вирусы растения,такие как вирус мозаики цветной капусты, вирус мозаики табака, космиды, YAC, эписомы, происходящие от EBV и т.п. Ген антитела лигируют в вектор так, чтобы в данном векторе последовательности ре- 23011669 гуляции транскрипции и трансляции выполняли присущую им функцию регуляции транскрипции и трансляции гена антитела. Экспрессионный вектор и последовательности регуляции экспрессии выбирают так, чтобы они были совместимы с клеткой-хозяином, используемой для экспрессии. Ген легкой цепи антитела и ген тяжелой цепи антитела могут быть встроены в отдельные векторы. В предпочтительном варианте изобретения оба гена встраивают в один и тот же экспрессионный вектор. Эти гены антитела встраивают в экспрессионный вектор стандартными методами (например, путем лигирования комплементарных рестрикционных сайтов с фрагментом гена антитела и с вектором, либо путем лигирования с затуплением концов, если рестрикционные сайты отсутствуют). Подходящим вектором является вектор, кодирующий функционально полную последовательностьCH или CL человеческого иммуноглобулина с соответствующими рестрикционными сайтами, сконструированными так, что любая VH- или VL-последовательность может быть легко встроена и экспрессирована как описано выше. В таких векторах, сплайсинг обычно происходит между сайтом донорного сплайсинга во встроенной J-области и сайтом акцепторного сплайсинга, находящимся перед человеческим Сдоменом, а также в областях сплайсинга, которые находятся в человеческих CH-экзонах. Последовательности полиаденилирования и терминации транскрипции расположены в нативных хромосомных сайтах,находящихся ниже кодирующих областей. Рекомбинантный экспрессионный вектор может также кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела, происходящего от клеткихозяина. Ген цепи антитела может быть клонирован в вектор так, чтобы сигнальный пептид был присоединен, с сохранением рамки считывания, к аминоконцу иммуноглобулиновой цепи. Таким сигнальным пептидом может быть иммуноглобулиновый сигнальный пептид или гетерологичный сигнальный пептид(то есть сигнальный пептид, происходящий от белка, не являющегося иммуноглобулином). Помимо генов цепи антитела, рекомбинантные экспрессионные векторы согласно изобретению несут регуляторные последовательности, которые регулируют экспрессию генов цепи антитела в клеткехозяине. Для специалиста в этой области очевидно, что конструирование экспрессионного вектора,включая выбор регуляторных последовательностей, может быть осуществлено в зависимости от таких факторов, как выбор трансформируемой клетки-хозяина, уровня экспрессии нужного белка и т.п. Предпочтительными регуляторными последовательностями для экспрессии в клетке-хозяине млекопитающего являются вирусные элементы, регулирующие высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающего, такие как промоторы и/или энхансеры, происходящие от ретровирусных LTR, цитомегаловируса (CMV) (такие как промотор/энхансер CMV), обезьяньего вируса 40 (SV40) (такие как промотор/энхансер SV40), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса (AdMLP, промоторы полиомы и сильные промоторы млекопитающих, такие как промоторы нативного иммуноглобулина и актина. Более подробное описание вирусных регуляторных элементов и их последовательностей можно найти, например, в патенте США 5168062, патенте США 4510245 и в патенте США 4968 615. Методы экспрессии антител в растениях, включая описание промоторов и векторов, а также трансформация растений, известны специалистам. Смотрите, например, патент США 6517529, который включен в настоящее описание посредством ссылки. Методы экспрессии полипептидов в бактериальных клетках или в клетках грибов, например в дрожжевых клетках, также хорошо известны специалистам. Помимо генов цепи антитела и регуляторных последовательностей, рекомбинантные экспрессионные векторы согласно изобретению могут содержать дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, ориджин репликации), и селективные маркерные гены. Селективный маркерный ген облегчает отбор клетокхозяев, в которые был встроен вектор (смотрите, например, патенты США 4399216, 4634665 и 5179017). Например, обычно селективный маркерный ген сообщает клетке-хозяину, в которую был введен данный вектор, резистентность к лекарственным средствам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. Предпочтительными селективными маркерными генами являются ген дегидрофолат-редуктазы(DHFR) (используемый в dhfr-клетках хозяевах для отбора на метотрексат или для амплификации), ген резистентности к неомицину (для отбора на G418) и ген глутамат-синтетазы. Негибридомные клетки-хозяева и методы рекомбинантного продуцирования белка Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие анти-M-CSF-антитела и векторы, содержащие эти молекулы нуклеиновой кислоты, могут быть использованы для трансфекции подходящих клеток-хозяев млекопитающих, растений, бактерий или дрожжей. Трансформация может быть осуществлена любым подходящим методом введения полинуклеотидов в клетку-хозяина. Методы введения гетерологичных полипептидов в клетки млекопитающих хорошо известны специалистам, и такими методами являются опосредуемая декстраном трансфекция; преципитация фосфатом кальция; опосредуемая полибреном трансфекция, слияние протопластов; электропорация; инкапсуляция полинуклеотида(ов) в липосомы; и прямая микроинжекция ДНК в ядро. Кроме того,молекулы нуклеиновой кислоты могут быть введены в клетки млекопитающих с помощью вирусных векторов. Методы трансформации клеток хорошо известны специалистам. Смотрите, например, патенты США 4399216, 4912040, 4740461 и 4959455 (которые включены в настоящее описание посредством ссылки). Методы трансформации клеток растений хорошо известны специалистам, и такими методами являются, например, трансформация, опосредуемая Agrobacterium, биобаллистическая трансформация,- 24011669 прямая инъекция, электропорация и трансформация вирусом. Методы трансформации бактериальных и дрожжевых клеток также хорошо известны специалистам. Клеточные линии млекопитающих, подходящие для экспрессии, хорошо известны специалистам и такие линии включают множество иммортализованных клеточных линий, имеющихся в Американской коллекции типовых культур (АТСС). Эти линии включают, inter alia, клетки яичника китайского хомячка(СНО), клетки NSO, клетки SP2, клетки HeLa, клетки почки детеныша хомячка (ВНК), клетки почки обезьяны (COS), клетки человеческой гепатоцеллюлярной карциномы (например, Hep G2), клетки А 549 и различные другие клеточные линии. При этом особенно предпочтительно выбирать клеточные линии,которые обеспечивают высокие уровни экспрессии. Другими клеточными линиями, которые могут быть использованы, являются клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9. После введения в клеткихозяева млекопитающих рекомбинантных экспрессионных векторов, содержащих гены антитела, эти антитела продуцируют путем культивирования указанных клеток-хозяев в течение периода времени,достаточного для осуществления экспрессии такого антитела в клетках-хозяевах, или, более предпочтительно, путем секреции указанного антитела в культуральную среду, в которой были культивированы эти клетки-хозяева. Антитела могут быть выделены из культуральной среды стандартными методами очистки белков. Клетками растений-хозяев являются, например, клетки Nicotians (табака), Arabidopsispombe, Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris. Кроме того, экспрессия антител согласно изобретению (или других происходящих от них молекул) в клеточных линиях-продуцентах может усилена различными известными методами. Например, система экспрессии гена глутамин-синтетазы (система GS) наиболее часто используется для повышения уровня экспрессии в определенных условиях. Полное или частичное обсуждение системы GS можно найти в европейских патентах 0216846, 0256055 и 0323997 и в европейской патентной заявке 89303964.4. Антитела, экспрессируемые различными клеточными линиями или экспрессируемые в трансгенных животных, могут иметь различный характер гликозилирования. Однако все антитела, кодируемые описанными здесь молекулами нуклеиновой кислоты или содержащие описанные здесь аминокислотные последовательности, являются частью настоящего изобретения, независимо от статуса или характера гликозилирования или от модификации антител. Трансгенные животные или растения Анти-M-CSF-антитела согласно изобретению также могут быть трансгенно продуцированы путем создания млекопитающего или растения, являющегося трансгенным по представляющем интерес последовательностям тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина и по продуцированию антитела в форме, которая может быть затем выделена из этого млекопитающего или растения. Что касается трансгенного продуцирования в млекопитающих, то анти-M-CSF-антитела могут быть продуцированы в молоке коз,коров или других млекопитающих, и выделены из этого молока. См., например, патенты США 5827690, 5756687, 5750172 и 5741957. В некоторых вариантах изобретения трансгенные животные, не являющиеся человеком и содержащие локусы человеческого иммуноглобулина, были иммунизованы MCSF или его иммуногенной частью, как описано выше. Методы получения антител в растениях, дрожжах или в грибах/водорослях описаны, например, в патентах США 6046037 и 5959177. В некоторых вариантах изобретения трансгенные животные, не являющиеся человеком, или трансгенные растения продуцируют путем введения указанному животному или растению одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих анти-M-CSF-антитело согласно изобретению, стандартными методами генной инженерии. См. выше, Hogan и патент США 6417429. Трансгенными клетками, используемыми для создания трансгенного животного, могут быть стволовые эмбриональные клетки или соматические клетки. Трансгенными организмами, не являющимися человеком, могут быть химерные и нехимерные гетерозиготы и нехимерные гомозиготы. См., например, Hogan et al., Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual 2ed., Cold Spring Harbor Press (1999); Jackson et al., Mouse Genetics and Transgenics: A Practical Approach, Oxford University Press (2000); и Pinkert, Transgenic AnimalTechnology: A Laboratory Handbook, Academic Press (1999). В некоторых вариантах изобретения трансгенные животные, не являющиеся человеком, имеют специально введенную дизрупцию и замену с помощью конструкции, которая нацелена на соответствующую мишень, и которая кодирует представляющую интерес тяжелую и/или легкую цепь. В предпочтительном варианте изобретения трансгенные животные содержат и экспрессируют молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелые и легкие цепи,которые специфически связываются с M-CSF, предпочтительно с человеческим M-CSF. В некоторых вариантах изобретения трансгенные животные содержат молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие модифицированное антитело, такое как одноцепочечное антитело, химерное антитело или гуманизованное антитело. Анти-M-CSF-антитела могут быть продуцированы у любого трансгенного животного. В предпочтительном варианте изобретения указанными животными, не относящимися к человеку, являются мыши, крысы, овцы, свиньи, козы, крупный рогатый скот или лошади. У трансгенных животных, не являющихся человеком, указанные кодируемые полипептиды экспрессируются в крови, молоке, моче,слюне, слезах, слизи и в других физиологических жидкостях.- 25011669 Библиотеки фагового представления Настоящее изобретение относится к способу продуцирования анти-M-CSF-антитела или его антигенсвязывающей части, включающему стадии синтеза библиотеки человеческих антител на фаге; скрининга библиотеки с помощью M-CSF или его части; выделения фага, который связывается с M-CSF; и получения антитела из этого фага. В качестве примера может служить один метод получения библиотеки антител, которая может быть использована в способах фагового представления, где указанный метод включает стадии иммунизации животного, не являющегося человеком и содержащего локусы человеческого иммуноглобулина, фактором M-CSF или его антигенной частью для вырабатывания иммунного ответа; экстрагирования антителопродуцирующих клеток из указанного иммунизованного животного; выделения РНК из экстрагированных клеток; обратной транскрипции РНК с получениям кДНК; амплификации кДНК с использованием праймера; и встраивания кДНК в вектор фагового представления так,чтобы в этом фаге экспрессировались данные антитела. Таким образом могут быть получены рекомбинантные анти-M-CSF-антитела согласно изобретению. Рекомбинантные анти-M-CSF-антитела согласно изобретению могут быть выделены путем скрининга рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител. Предпочтительной библиотекой является библиотека фагового представления scFv, генерированная с использованием кДНК человеческих VL иVH, полученных из мРНК, выделенной из В-клеток. Методика получения и скрининга таких библиотек известна специалистам. Существуют коммерчески доступные наборы для генерирования библиотек фагового представления (например, система для фагового представления рекомбинантных антител Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catalog no.27-9400-01; и набор для фагового представленияStratagene SurfZAP, catalog no. 240612). Для генерирования и скрининга библиотек представления антител существуют также и другие методы и реагенты (смотрите, например, патент США 5223409; публикации РСТWO 92/18 619, WO 91/17271, WO 92/20791, WO 92/15679, WO 93/01288, WO 92/01047, WO 92/09690; Fuchs et al., Bio/Technology 9:1370-1372 (1991); Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85 (1992); Huse et al., Science 246:1275-1281 (1989); McCafferty et al., Nature 348:552-554et al., Nature 352:624-628 (1991); Gram et al., Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 89:3576-3580 (1992); Garrad et al.,Bio/Technology 9:1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Nuc. Acid Res. 19:4133-4137 (1991) и Barbas et al.,Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 88:7978-7982 (1991). В одном из вариантов изобретения для выделения человеческих анти-M-CSF-антител с нужными свойствами сначала используют описанное здесь человеческое анти-M-CSF-антитело для отбора последовательностей человеческих тяжелых и легких цепей, обладающих аналогичной активностью связывания с M-CSF, где такой отбор осуществляют методами эпитопного импринтинга, описанными в публикации заявки РСТWO 93/06213. Библиотеками антител, используемыми в этих методах, являются,предпочтительно, библиотеки scFv, полученные и скринированные как описано в публикации РСТWO 92/01047, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); и Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734 (1993). Библиотеки scFv антител, предпочтительно, скринируют с использованием человеческого M-CSF в качестве антигена. После предварительного отбора человеческих VL- и VH-доменов проводят эксперименты по "смешиванию и совместимости", в которых различные пары предварительно отобранных VL- и VH-сегментов скринируют на связывание с M-CSF для отбора предпочтительных комбинаций пар VL/VH. Кроме того,для улучшения качества антитела, VL- и Vн-сегменты предпочтительных пар VL/VH могут быть неспецифически мутированы, предпочтительно, в области CDR3 VH и/или VL способом, аналогичным соматическому процессу мутации in vivo, ответственному за созревание аффинности антител во время вырабатывания природного иммунного ответа. Такое in vitro созревание аффинности антител может быть осуществлено путем амплификации VH- и VL-доменов с использованием ПЦР-праймеров, комплементарныхVH CDR3 или VL CDR3, соответственно, где указанные праймеры были "пронизаны" произвольной смесью четырех нуклеотидных оснований в определенных положениях так, чтобы полученные ПЦРпродукты кодировали VH- и VL-сегменты с введенными в них, а именно в их VH и/или VL CDR3-области,случайные мутации. Эти произвольно мутированные VH- и VL-сегменты могут быть снова скринированы на связывание с M-CSF. После скрининга и выделения анти-M-CSF-антитела согласно изобретению из библиотеки представления рекомбинантных иммуноглобулинов, нуклеиновые кислоты, кодирующие отобранное антитело, могут быть выделены из упаковочного вектора представления (например, из фагового генома) и субклонированы в другие экспрессионные векторы методами рекомбинантных ДНК. Если это необходимо,то нуклеиновая кислота может быть дополнительно модифицирована для создания других форм согласно изобретению, как описано ниже. Для экспрессии рекомбинантного человеческого антитела, выделенного путем скрининга комбинаторной библиотеки, ДНК, кодирующую антитело, клонируют в рекомбинантный экспрессионный вектор и вводят к клетки-хозяева млекопитающих, как описано выше. Переключение классов В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу конверсии класса или подкласса анти-М-СSF-антитела в другой класс или подкласс. В некоторых вариантах изобретения VL- или VH- 26011669 кодирующую молекулу нуклеиновой кислоты, которая не включает какие-либо нуклеотидные последовательности, кодирующие CL или CH, выделяют хорошо известными методами. Затем эту молекулу нуклеиновой кислоты функционально присоединяют к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей CL или CH от иммуноглобулина нужного класса или подкласса. Это может быть достигнуто с использованием вектора или молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей CL- или CH-цепь, описанные выше. Например, исходное анти-M-CSF-антитело, которое первоначально имеет класс IgM, может быть переключено на класс IgG. Кроме того, переключение классов может применяться для превращения IgG одного подкласса в IgG другого подкласса, например, IgG1 в IgG2. Другой способ продуцирования антитела согласно изобретению, имеющего нужный изотип, включает стадии выделения нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь анти-M-CSF-антитела, и нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь анти-М-CSF-антитела; выделения последовательности, кодирующей VH-область; лигирования последовательности VH с последовательностью, кодирующей константный домен тяжелой цепи нужного изотипа; экспрессии гена легкой цепи и конструкции тяжелой цепи в клетке; и сбора анти-М-CSF-антитела,имеющего нужный изотип. В некоторых вариантах изобретения в анти-M-CSF-антителах согласно изобретению, серии в положении 228 (в соответствии с Европейским соглашением о нумерации) тяжелой цепи заменен пролином. В соответствии с этим, подпоследовательность CPSC в Fc-области IgG4 превращается в СРРС, которая представляет собой подпоследовательность, присутствующую в IgG1. (Aalberse R.C.Schuurman, J.Immunology, 105:9-19 (2002. Например, серин в положении 243 SEQ ID NO:46 (которое соответствует остатку 228 в соответствии с Европейским соглашением о нумерации) должен стать пролином. Аналогичным образом, серии в положении 242 SEQ ID NO:38 (которое соответствует остатку 228 в соответствии с Европейским соглашением о нумерации) должен стать пролином. В некоторых вариантах изобретения каркасная область антитела IgG4 может быть подвергнута обратной мутации с получением каркасной последовательности зародышевой линии. Некоторые варианты изобретения включают обратную мутацию каркасной области и замену серина пролином в Fc-области. См., например, SEQ ID NO:54 (антитело 9.14.4C-Ser) и SEQ ID NO:58 (антитело 8.10.3 С-Ser) в табл. 1."Деиммунизированные" антитела Другим способом продуцирования антител с пониженной иммуногенностью является "деиммунизация" антител. В другом аспекте настоящего изобретения антитела могут быть "деиммунизированы" способами, описанными в публикации заявок РСТ WO98/52976 и WO00/34317 (которые во всей своей полноте включены в настоящее описание посредством ссылки). Мутированные антитела В другом варианте изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, векторы и клетки-хозяева могут быть использованы для получения мутированных анти-M-CSF-антител. Эти антитела могут быть мутированы в вариабельных доменах тяжелой и/или легкой цепях, например, для изменения связывающих свойств антитела. Например, такая мутация может быть сделана в одной или нескольких CDR-областях для увеличения или снижения KD антитела против M-CSF, для увеличения или снижения koff или для изменения специфичности связывания указанного антитела. Методы сайт-направленного мутагенеза хорошо известны специалистам. Смотрите выше, например, Sambrook et al., и Ausubel et al. В предпочтительном варианте изобретения, аминокислотный остаток, по сравнению с остатком в зародышевой линии, как известно, имеет мутацию в вариабельной области анти-M-CSF-антитела. В другом варианте изобретения аминокислотные остатки, по сравнению с остатком в зародышевой линии, имеют одну или несколько мутаций в области CDR или в каркасной области вариабельного домена, или в константной области моноклонального антитела 252, 88, 100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3, 9.7.2,9.7.2C-Ser, 9.14.4C-Ser, 8.10.3C-Ser, 8.10.3-CG2, 9.7.2-CG2, 9.7.2-CG4, 9.14.4-CG2, 9.14.4-CG4, 9.14.4-Ser,9.7.2-Ser, 8.10.3-Ser, 8.10.3-CG4, 8.10.3FG1 или 9.14.4G1. В другом варианте изобретения аминокислотный остаток, по сравнению с остатком в зародышевой линии, имеет одну или несколько мутаций в области CDR или в каркасной области вариабельного домена тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70,74, 78, 82, 86, 90, 94, 98 или 102, или имеющей нуклеотидную последовательность, представленную вSEQ ID NO:1, 5, 9, 25, 29, 33, 37, 45, 97 или 101. В другом варианте изобретения аминокислотный остаток, по сравнению с остатком в зародышевой линии, имеет одну или несколько мутаций в области CDR или в каркасной области вариабельного домена легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 44, 48, 52, 56 или 60, или имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO:3, 7, 11, 27, 31, 35, 43 или 47. В одном из вариантов изобретения каркасную область подвергают мутации так, чтобы полученная в результате каркасная область имела аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности зародышевой линии. Эта мутация может быть введена в каркасную область или в константный домен для увеличения времени полужизни анти-M-CSF-антитела. См., например,публикацию заявки РСТWO 00/09560, которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Мутация в каркасной области или в константном домене может быть сделана в целях изменения иммуногенности антитела, в целях введения сайта для ковалентного или нековалентного связывания с другой- 27011669 молекулой, или в целях изменения таких свойств, как фиксация комплемента, связывание с FcR и антителозависимой клеточноопосредуемой цитотоксичностью (ADCC). В соответствии с настоящим изобретением одно антитело может иметь мутации в одной или нескольких областях CDR или в каркасных областях вариабельного домена или константного домена. В некоторых вариантах изобретения мутированное анти-M-CSF-антитело, по сравнению с анти-МCSF-антителом зародышевой линии до его мутации, имеет 1-8, включая любое число в данном интервале, аминокислотных мутаций либо в домене VH, либо в домене VL. В любом из вышеуказанных вариантов, эти мутации могут присутствовать в одной или в нескольких областях CDR. Кроме того, любые такие мутации могут быть консервативными аминокислотными заменами. В некоторых вариантах изобретения в константных доменах присутствует не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных замен. Модифицированные антитела В другом варианте изобретения гибридное антитело или иммуноадгезин могут быть сконструированы так, чтобы они содержали полноразмерное анти-M-CSF-антитело согласно изобретению, присоединенное к другому полипептиду, или его часть. В предпочтительном варианте изобретения к указанному полипептиду присоединены только вариабельные домены анти-M-CSF-антитела. В другом предпочтительном варианте изобретения VH-домен анти-M-CSF-антитела присоединен к первому полипептиду, аVL-домен анти-M-CSF-антитела присоединен ко второму полипептиду, который связан с первым полипептидом так, что VH-и VL-домены могут взаимодействовать друг с другом с образованием связывающего сайта антитела. В другом предпочтительном варианте изобретения VH-домен отделен от VL-домена линкером, в результате чего VH- и VL-домены могут взаимодействовать друг с другом (смотрите ниже раздел "Одноцепочечные антитела"). Затем антитело "VH-линкер-VL" присоединяют к представляющему интерес полипептиду. Такое гибридное антитело может быть использовано для прямой доставки полипептида в клетку или в ткань, экспрессирующую M-CSF. Указанным полипептидом может быть терапевтическое средство, такое как токсин, фактор роста или другой регуляторный белок, либо указанным полипептидом может быть диагностическое средство, такое как фермент, который может быть легко визуализирован, например пероксидаза хрена. Кроме того, могут быть сконструированы гибридные антитела,в которых два (или более) одноцепочечных антитела присоединены друг к другу. Это может быть осуществлено, если необходимо создать двухвалентное или поливалентное антитело на одной полипептидной цепи, или если необходимо создать биспецифическое антитело. Для создания одноцепочечного антитела (scFv), VH- и VL-кодирущие фрагменты ДНК функционально присоединяют к другому фрагменту, кодирующему гибкий линкер, например, кодирующему аминокислотную последовательность (Gly4-Ser)3, так, что последовательности VH и VL могут экспрессироваться как непрерывный одноцепочечный белок, имеющий VL- и VH-домены, соединенные гибким линкером. Смотрите, например, Bird et al., Science 242:423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,USA, 85:5879-5883 (1988); McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990). Одноцепочечное антитело может быть одновалентным, если используется только один VH или VL, двухвалентным, если используется обаVH и VL, или поливалентным, если используются более двух VH и VL. Могут быть генерированы биспецифические или поливалентные антитела, которые специфически связываются с M-CSF или с другой молекулой. В другом варианте изобретения другие модифицированные антитела могут быть получены с использованием молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих анти-М-CSF-антитело. Например, "каппаантитела" (Ill et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997, "миниантитела" (Martin et al., EMBO J. 13:5303-9(1992 могут быть получены стандартными методами молекулярной биологии, описанными в настоящей заявке. Биспецифические антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены различными методами, включая метод слияния с получением гибридом или присоединения Fab'-фрагментов. Смотрите, например, SongsivilaiLachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990), Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992). Кроме того, биспецифические антитела могут быть получены в виде "диантител" или "янусинов" (Janusins). В некоторых вариантах изобретения указанное биспецифическое антитело связывается с двумя различными эпитопами M-CSF. В некоторых вариантах изобретения биспецифическое антитело имеет первую тяжелую цепь и первую легкую цепь моноклонального антитела 252, 88,100, 3.8.3, 2.7.3, 1.120.1, 9.14.4I, 8.10.3F, 9.7.2IF, 9.14.4, 8.10.3 или 9.7.2 и дополнительные тяжелую цепь и легкую цепь антитела. В некоторых вариантах изобретения дополнительные тяжелая цепь и легкая цепь происходят также от одного из идентифицированных выше моноклональных антител, но отличаются от первой тяжелой цепи и первой легкой цепи. В некоторых вариантах изобретения описанные выше модифицированные антитела получают с использованием одного или нескольких вариабельных доменов или областей CDR, происходящих от описанного здесь человеческого моноклонального анти-M-CSF-антитела, от аминокислотной последовательности указанного моноклонального антитела, или от тяжелой цепи или легкой цепи, кодируемой последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей указанное моноклональное антитело.- 28011669 Дериватизированное и меченое антитела Анти-М-CSF-антитело или его антигенсвязывающая часть согласно изобретению могут быть дериватизированы или присоединены к другой молекуле (например, к другому пептиду или белку). В общих чертах, антитела или их части дериватизируют так, чтобы такая дериватизация или мечение не оказывали негативного влияния на связывание с M-CSF. В соответствии с этим, антитела или их части согласно изобретению конструируют так, чтобы они включали как интактные, так и модифицированные формы описанных здесь человеческих анти-M-CSF-антител. Например, антитело или его часть согласно изобретению могут быть функционально присоединены (путем химического связывания, генетического сцепления, нековалентного связывания или как-либо иначе) к одной или нескольким другим молекулам, таким как другое антитело (например, биспецифическое антитело или диантитело), детектирующий агент,цитотоксический агент, фармацевтическое средство и/или белок или пептид, который может опосредовать связывание антитела или его части с другой молекулой (такой как стрептавидиновая коровая область или полигистидиновая метка). Дериватизированное антитело одного типа продуцируют путем перекрестного сшивания двух или нескольких антител (того же самого типа или различных типов, например, для получения биспецифических антител). Подходящими перекрестносшивающими агентами являются агенты, которые представляют собой гетеробифункциональные агенты, имеющие две различных реакционноспособных группы, разделенных соответствующим спейсером (например, м-малеимидобензоил-N-гидроксисукцинимидоэфиром), или гомобифункциональные агенты (например, дисукцинимидилсуберат). Такие линкеры поставляются фирмой Pierce Chemical Company, Rockford, III. Дериватизированным антителом другого типа является меченое антитело. Подходящими детектирующими агентами, с помощью которых может быть дериватизировано антитело или его антигенсвязывающая часть согласно изобретению, являются флуоресцентные соединения, включая флуоресцеин,флуоресцеинизотиоцианат, родамин, 5-диметиламин-1-нафталинсульфонилхлорид, фикоэритрин, лантанидфосфор и т.п. Антитело может быть также помечено ферментами, которые используют для детекции,например, такие как пероксидаза хрена, -галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза, глюкозооксидаза и т.п. Если антитело метят детектируемым ферментом, то его детектируют путем добавления дополнительных реагентов, в присутствии которых данный фермент продуцирует реакционный продукт,который может быть идентифицирован. Например, в присутствии фермента пероксидазы хрена, добавление пероксида водорода и диаминобензидина приводит к окрашиванию реакционного детектируемого продукта. Антитело может быть также помечено биотином и детектировано путем непрямого измерения уровня связывания с авидином или стрептавидином. Антитело может быть также помечено предварительно определенным полипептидным эпитопом, распознаваемым вторичным репортером (например,двухкомпонентными последовательностями лейциновой молнии, сайтами связывания для "вторых" антител, металлосвязывающими доменами, эпитопными метками). В некоторых вариантах изобретения метки присоединяют посредством спейсерных групп различной длины для уменьшения возможного стерического затруднения. Анти-М-CSF-антитело может быть также помечено радиоактивно меченной аминокислотой. Радиоактивно меченное анти-M-CSF-антитело может быть использовано как в диагностических, так и в терапевтических целях. Например, радиоактивно меченное анти-М-CSF-антитело может быть использовано для детекции M-CSF-экспрессирующих опухолей с помощью рентгеновской или другой диагностической аппаратуры. Кроме того, радиоактивно меченное анти-M-CSF-антитело может быть использовано в терапевтических целях в качестве токсина для раковых клеток или опухолей. Примерами меток, используемых для полипептидов, являются, но не ограничиваются ими, радиоизотопы или радионуклиды 3 Н,14 С, 15N, 35S, 90Y, 99 Тс, 111In, 125I и 131I. Анти-M-CSF-антитело может быть также дериватизировано химической группой, такой как полиэтиленгликоль (ПЭГ), метильная или этильная группа или углеводная группа. Эти группы могут быть использованы для улучшения биологических свойств антитела, например, для увеличения его времени полужизни в сыворотке или для увеличения уровня связывания в ткани. Фармацевтические композиции и наборы Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим человеческое анти-M-CSFантитело-антагонист и применяемым для лечения индивидов, страдающих ревматоидным артритом, остеопорозом или атеросклерозом. В некоторых вариантах изобретения указанным индивидом, подвергаемым лечению, является человек. В других вариантах изобретения таким индивидом является животное. Гиперпролиферативные расстройства, в развитии которых определенную роль играют моноциты, и которые могут быть подвергнуты лечению анти-M-CSF-антителом-антагонистом согласно изобретению, могут включать рак, меланомы, лимфомы, лейкоз или множественные миеломы любых тканей или органов,которыми являются, но не ограничиваются ими, головной мозг, легкие, чешуйчатые клетки, мочевой пузырь, желудок, поджелудочная железа, молочная железа, голова, шея, печень, почки, яичник, предстательная железа, прямая и толстая кишка, пищевод, женские половые органы, носоглотка или щитовидная железа. В частности, человеческие анти-M-CSF-антитела-антагонисты согласно изобретению могут быть использованы для лечения или предупреждения карцином молочной железы, предстательной железы,- 29011669 прямой кишки и легких. Настоящее изобретение также относится к композициям для лечения состояния, выбранного из группы, состоящей из артрита, псориатического артрита, синдрома Рейтера, подагры, травматического артрита, коревого артрита, острого синовита, ревматоидного артрита, ревматоидного спондилита, анкилозирующего спондилита, остеоартрита, подагрического артрита и других артритных состояний, сепсиса, септического шока, эндотоксического шока, сепсиса, вызванного грам-отрицательными бактериями,синдрома токсического шока, болезни Альцгеймера, инсульта, нейротравмы, астмы, острого респираторного дистресс-синдрома, церебральной малярии, хронического воспалительного заболевания легких,силикоза, саркоидоза легких, резорбции кости, остеопороза, рестеноза, реперфузионного поражения сердца и почек, тромбоза, гломерулонефрита, диабета, реакции "трансплантат против хозяина", отторжения аллотрансплантата, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, рассеянного склероза, дегенерации мышц, экземы, контактного дерматита, псориаза солнечных ожогов или острого конъюнктивита у млекопитающих, включая человека, где указанные композиции включают определенное количество человеческого моноклонального анти-M-CSF-антитела согласно изобретению,эффективное для такого лечения, и фармацевтически приемлемый носитель. Лечение может предусматривать введение одного или нескольких моноклональных анти-M-CSFантител-антагонистов согласно изобретению или их антигенсвязывающих фрагментов, отдельно или вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемый носитель" означает любой и все растворители, дисперсионные среды, агенты для покрытий,антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические агенты, агенты, замедляющие абсорбцию и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Некоторыми примерами фармацевтически приемлемых носителей являются вода, физиологический раствор, забуференный фосфатом физиологический раствор, декстроза, глицерин, этанол и т.п., а также их комбинации. Во многих случаях, в композицию предпочтительно включать изотонические агенты, например сахара, полиспирты, такие как маннит и сорбит, или хлорид натрия. Другими примерами физиологически приемлемых веществ являются смачивающие агенты или небольшие количества добавок, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые повышают срок хранения или эффективность данного антитела. Анти-M-CSF-антитела согласно изобретению и содержащие их композиции могут быть введены в комбинации с одним или несколькими другими терапевтическими, диагностическими или профилактическими средствами. Дополнительными терапевтическими средствами являются другие антинеопластические, противоопухолевые, антиантиогенные или химиотерапевтические средства. Такие дополнительные средства могут быть включены в одну и ту же композицию, либо они могут быть введены отдельно. В некоторых вариантах изобретения одно или несколько ингибирующих анти-M-CSF-антител согласно изобретению могут быть использованы в качестве вакцины или в качестве адъювантов для вакцин. Композиции согласно изобретению могут быть приготовлены в различных формах, например в жидкой, полутвердой или в твердой лекарственных формах, таких как жидкие растворы (например, растворы для инъекций и инфузий), дисперсии или суспензии, таблетки, драже, порошки, липосомы и суппозитории. Предпочтительная форма зависит от способа введения и от терапевтического применения. Типичные предпочтительные композиции приготавливают в форме растворов для инъекций или инфузий, таких как композиции, аналогичные композициям, используемым для пассивной иммунизации человека. Предпочтительным способом введения является парентеральное (например, внутривенное, подкожное, внутрибрюшинное, внутримышечное) введение. В предпочтительном варианте изобретения указанное антитело вводят путем внутривенной инфузий или инъекции. В другом предпочтительном варианте изобретения указанное антитело вводят путем внутримышечной или подкожной инъекции. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу лечения индивида, нуждающегося в таком лечении, с применением антитела или его антигенсвязывающей части, которая специфически связывается с М-CSF, где указанный способ включает стадии: (а) введения эффективного количества выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть; выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть,или молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих легкую цепь и тяжелую цепь или их антигенсвязывающие части, и (b) экспрессии указанной молекулы нуклеиновой кислоты. Терапевтические композиции должны быть стерильными и стабильными в условиях их получения и хранения. Такая композиция может быть приготовлена в виде раствора, микроэмульсии, дисперсии,липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для приготовления лекарственного средства высокой концентрации. Стерильные растворы для инъекций могут быть получены путем включения анти-M-CSF-антитела в требуемом количестве в соответствующий растворитель вместе с одним из перечисленных выше ингредиентов или с их комбинацией, если это необходимо, и с последующей стерилизацией путем фильтрации. В общих чертах, дисперсии получают путем включения активного соединения в стерильный носитель, содержащий основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из числа вышеперечисленных ингредиентов. В случае стерильных порошков, используемых для при- 30