Рекомбинантная клетка человека, способная экспрессировать белок длинного пентраксина ptx3 человека, и ее применение

РЕКОМБИНАНТНАЯ КЛЕТКА ЧЕЛОВЕКА, СПОСОБНАЯ ЭКСПРЕССИРОВАТЬ БЕЛОК ДЛИННОГО ПЕНТРАКСИНА PTX3 ЧЕЛОВЕКА, И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ Настоящее изобретение относится к рекомбинантной клетке человека, способной экспрессировать белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, к применению указанной рекомбинантной клетки человека для получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека и к способу получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека с помощью указанной рекомбинантной клетки человека.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: СИГМА-ТАУ ИНДУСТРИЕ ФАРМАСЬЮТИКЕ РИУНИТЕ С.П.А. Область техники Настоящее изобретение относится к рекомбинантной клетке человека, способной экспрессировать белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, к применению указанной рекомбинантной клетки человека для получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека и к способу получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека с помощью указанной рекомбинантной клетки человека. Уровень техники Длинный пентраксин человека 3, РТХ 3 или hPTX3 (номер доступа в "GeneBank" BD 131701) представляет собой мультимерный гликопротеин из восьми субъединиц, соединенных дисульфидными мостиками. Авторы настоящего изобретения разработали систему экспрессии для получения РТХ 3 в линии клеток человека HEK293F. В основе данной системы лежит плазмида, содержащая ген устойчивости к неомицину, в которой ген РТХ 3 находится под контролем последовательности промотора убиквитина С человека. Такая система не допускает потенциального образования химерного РТХ 3, получаемого при эндогенном продуцировании РТХ 3 линией клеток, которые происходят не от человека. Среди полученных клонов отобрали изолированный клон, обозначенный 2F12, который обладал наиболее высокой продуктивностью. Был достигнут уровень продукции РТХ 3 около 20 мг/л, что является недостаточным для нужд промышленного производства. В целях повышения уровня экспрессии РТХ 3 авторы настоящего изобретения сконструировали плазмиду, в которой ген РТХ 3 находится под контролем промотора CMV(цитомегаловируса). Указанную плазмиду применили для повторной трансфекции клона 2F12, экспрессирующего РТХ 3. Уровень продуктивности, определенный для новых изолированных трансфектом, превысил ожидаемый уровень и составил около 80 мг/л. Описание изобретения Клон человеческого происхождения, экспрессирующий высокие уровни РТХ 3, был получен при помощи экспериментальной стратегии, включающей следующие стадии: а) конструирование кассет экспрессии на основе плазмиды, содержащей ген РТХ 3 человека под контролем промотора CMV;b) встраивание кассеты устойчивости к гигромицину в указанную плазмиду с целью отбора стабильных трансфектом, полученных в результате повторной трансфекции РТХ 3-экспрессирующего клона с устойчивостью к G418;c) проверка тождественности и уровней экспрессии рекомбинантных белков;d) определение биохимических характеристик рекомбинантного hPTX3. Содержание заявки РСТ/ЕР 2009/050937 включено в настоящее описание посредством ссылки. Объектом настоящего изобретения является рекомбинантная клетка, способная экспрессировать белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, представляющая собой рекомбинантный клон 293F/PTX3/2F12, депонированный в ЕСАСС под номером 08011001, дополнительно трансформированная вектором с последовательностью SEQ ID NO: 1, содержащим последовательность нуклеотидов, кодирующую белок длинного пентраксина РТХ 3 человека под контролем эффективного промотора, такого как CMV, и последовательность нуклеотидов, кодирующую селектируемый маркер, такой как ген устойчивости к гигромицину. Предпочтительно трансформированная рекомбинантная клетка представляет собой рекомбинантный клон MS24PTX, депонированный в Агентстве защиты здоровья, центре коллекций культур готовности и мерам реагирования в чрезвычайных ситуациях, под номером 09072902. Еще одним аспектом настоящего изобретения является применение указанной трансформированной рекомбинантной клетки, раскрываемой выше, для получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека. Еще одним объектом настоящего изобретения является способ получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека, включающий:a) трансформацию рекомбинантной клетки человека, способной экспрессировать белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, представляющей собой рекомбинантный клон 293F/PTX3/2F12, депонированный в ЕСАСС под номером 08011001, вектором с последовательностью SEQ ID NO: 1, содержащим последовательность нуклеотидов, кодирующую белок длинного пентраксина РТХ 3 человека под контролем промотора CMV, и последовательность нуклеотидов, кодирующую ген устойчивости к гигромицину в качестве селектируемого маркера;b) селекцию и выращивание трансфецированной рекомбинантной клетки человека;c) очистку белка длинного пентраксина РТХ 3 человека из культуральной среды указанной трансформированной рекомбинантной клетки человека. Предпочтительно указанная рекомбинантная клетка человека, экспрессирующая рекомбинантный белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, представляет собой рекомбинантный клон MS24PTX, депонированный в Агентстве защиты здоровья, центре коллекций культур готовности и мерам реагирования в чрезвычайных ситуациях (Солсбери, Великобритания), под номером 09072902. Согласно предпочтительному варианту реализации стадия очистки включает по меньшей мере одну из следующих стадий: анионно-обменную хроматографию, хроматографию с гидроксиапатитом или эксклюзионную хроматографию. Настоящее изобретение ниже проиллюстрировано неограничивающими примерами, которые, в частности, ссылаются на следующие фигуры. Фиг. 1: карта и основные особенности pSASSI-hPTX3. Фиг. 2: рост, жизнеспособность и продуктивность в роллерной колбе (А) клона MS24PTX и (В) клона 293F/PTX3/2F12. Фиг. 3: оценка характеристик рекомбинантного РТХ 3 человека, выделенного из клона MS24PTX,методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) в градиенте 4-15% (А) и методом эксклюзионной хроматографии (В). Фиг. 4: способность к связыванию FGF2 у hPTX3-клона 293F/PTX3/2F12 и hPTX3-клона MS24PTX. Фиг. 5: карта и основные особенности pSC1-hPTX3. Пример 1. Клон 293F/PTX3/2F12. Конструирование плазмиды pSC1-РТХ 3. 1. Конструирование pSG/Ub. 1.1. Приготовление последовательности промотора убиквитина С человека. Промотор убиквитина С человека получали из плазмиды pUB/Bsd ("Invitrogen", каталожный номерV512-20) путем амплификации методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). Как часть стратегии клонирования в оба конца встраивали последовательности, распознаваемые рестрикционными эндонуклеазами (рестриктазами). В праймере для амплификации, расположенном выше по направлению траскрипции, создали сайт BsaAI, а в праймере, расположенном ниже - сайт EcoRI. Амплифицируемая область соответствует нуклеотидам с 1941 до 3161 в последовательности pUB/Bsd. Олигонуклеотиды конструируют следующим образом:Taq ("Sigma Genosys"); температурный режим: 3 мин 94 С, 30 раз (30 секунд (с) 94 С, 30 с 46 С, 2 мин 72 С), 5 мин 72 С, охлаждение при 4 С до дальнейшего применения. Продукт амплификации (1238 п.о.) очищают на спин-колонке с кремниевой мембраной ("NucleoSpin", "Machery-Nagel GmbHCo."), лигируют в вектор pGEM-T-Easy ("Promega", каталожный номер А 1360) и трансформируют в штамм E.coli HB2151 ("Pharmacia Biotech"). Трансформанты отбирают по росту на среде Лурия-Бертани (LB) с добавлением 50 мг/л ампициллина. Плазмидную ДНК, выделенную из устойчивых к ампициллину колоний, проверяли методом рестрикционного анализа с применением ферментов StuI плюс SacI (фрагменты предположительно 3650 и 600 пар оснований (п.о Плазмиды, демонстрирующие правильную рестрикционную карту, далее проверяли посредством секвенирования всей вставки и затем подвергали действию рестриктаз EcoRI ("Sigma-Genosys") и BsaAI("New England Biolabs"). Промотор убиквитина С человека очищали путем разделения на агарозном геле и элюции на спинколонке с кремниевой мембраной. 1.2. Приготовление фрагмента вектора pSG5. Плазмиду pSG5 (4076 п.о., Stratagene) расщепляли при помощи рестриктаз EcoRI ("Sigma-Genosys") и BsaAI ("New England Biolabs"); получаемые в результате фрагменты имели длину 1432 и 2644 п.о. Фрагмент длиной 2644 п.о., содержащий каркас pSG5, готовили и очищали методом электрофореза в агарозном геле и на спин-колонке с кремниевой мембраной. 1.3. Приготовление pSG/Ub. Фрагменты ДНК, приготовленные на стадиях 1.1 и 1.2, сшивали при помощи ДНК-лигазы Т 4("Promega") и трансформировали в клетки Е.coli HB2151. Трансформанты отбирали по росту на среде LB с добавлением 50 мг/л ампициллина. ДНК плазмид, выделенных из устойчивых к ампициллину колоний, проверяли методом рестрикционного анализа с применением ферментов EcoRI плюс SacII (фрагменты предположительно 2670 и 1192 п.о.). ДНК плазмиды с желаемой рестрикционной картой обозначили как pSG/Ub. 2. Конструирование pSC1. 2.1. Приготовление кассеты экспрессии генов устойчивости к неомицину (NeoR). Кассету экспрессии генов устойчивости к неомицину (NeoR) получали из плазмиды pcDNA3 (5446 п.о., "Invitrogen") путем ее амплификации методом ПЦР. Как часть стратегии клонирования в оба конца встраивали последовательности, распознаваемые рестрикционной эндонуклеазой AflIII. Амплифицируемая область соответствует нуклеотидам с 1788 до 3252 в последовательности pcDNA3 и включает промотор SV40, а также точку начала репликации, открытую рамку считывания (ОРС) гена устойчивости к неомицину и сигнал полиаденилирования (полиА) SV40. Олигонуклеотид конструируют следующим образом:HB2151. Трансформанты отбирали по росту на среде LB с добавлением 50 мг/л ампициллина. ДНК плазмид, выделенных из устойчивых к ампициллину колоний, проверяли методом рестрикционного анализа с применением ферментов SmaI и SacI (фрагменты предположительно 1200 и 3300 п.о.). Плазмиды, демонстрирующие должную рестрикционную карту, далее проверяли посредством секвенирования всей вставки и затем подвергали действию рестриктазы AflIII ("New England Biolabs"). Кассету NeoR (1471 п.о.) очищали путем разделения на агарозном геле и элюции на спин-колонке с кремниевой мембраной. 2.2. Приготовление фрагмента вектора pSG/Ub. Плазмиду, приготовленную на стадии 1.3, линеаризовали путем обработки ферментом AflIII и очищали на спин-колонке с кремниевой мембраной. 2.3. Приготовление pSC1. Фрагменты ДНК, приготовленные на стадиях 2.1 и 2.2, сшивали при помощи ДНК лигазы Т 4("Promega") и трансформировали в клетки Е.coli штамма JM109 ("New England Biolabs"). Трансформанты отбирали по росту на среде LB с добавлением 50 мг/л ампициллина. Устойчивые к антибиотику колонии предварительно анализировали посредством амплификации методом ПЦР с олигонуклеотидами 5'NeoR и 3'NeoR, как описывалось ранее, и затем очищенные плазмиды проверяли методом рестрикционного анализа. Для этой цели применяли ферменты SmaI (положение 602, внутри последовательности NeoR) иSacII (положение 4142, внутри последовательности UbC). ДНК плазмиды с желаемой рестрикционной картой (фрагменты 3540 и 1793 п.о.) обозначали как pSC1. 3. Конструирование pSC1-РТХ 3. 3.1. Приготовление последовательности, кодирующей hPTX3. Последовательность hPTX3 (номер доступа в "GeneBank" BD 131701) получали из pSG5-РТХ 3(WO 99/32516 "Фармацевтические композиции, содержащие длинный пентраксин РТХ 3") путем обработки ферментом BamHI ("Roche Applied Science"). Фрагмент РТХ 3 человека (1463 п.о.) очищали методом электрофореза на агарозном геле и на спин-колонке с кремниевой мембраной. 3.2. Приготовление фрагмента вектора pSC1. Вектор pSC1 линеаризовали путем обработки ферментом BamHI и очищали на спин-колонке с кремниевой мембраной. 3.3. Конструирование и проверка pSC1-PTX3. Фрагменты ДНК, приготовленные на стадиях 3.2 и 3.3, сшивали при помощи ДНК-лигазы Т 4("Roche Applied Science") и трансформировали в клетки Е.coli штамма JM109. Трансформанты отбирали по росту на среде LB с добавлением 50 мг/л ампициллина и проводили предварительный скрининг методом ПЦР с двумя олигонуклеотидами, комплементарными последовательности РТХ 3. Последовательности олигонуклеотидов следующие: В конечном объеме 10 мкл присутствовали следующие реагенты для амплификации: 1 мкл колонии после выпаривания (1 колония в 50 мл воды), 2 мМ MgCl2, 0,2 мМ дезоксинуклеозидтрифосфатов, 320 нМ каждого праймера, 0,06% формамида, 1X поставляемый буфер и 0,08 ед./мкл ДНК-полимеразы Taq("Sigma Genosys"); температурный режим: 3 мин 96 С, 30 раз (30 с 94 С, 30 с 58 С, 2 мин 72 С), 5 мин 72 С, охлаждение при 4 С до дальнейшего применения. Плазмиды, выделенные из колоний, дающих положительный результат при ПЦР скрининге, обрабатывали рестриктазой SalI ("Roche Applied Science") для контроля вставки hPTX3. Плазмиду с желаемой рестрикционной картой (6619 и 177 п.о.) секвенировали в областях, кодирующих промотор UbC, кассетуNeoR и hPTX3, и обозначали как pSC1-РТХ 3. Далее конструировали новую плазмиду (pSC1-РТХ 3) с последовательностью кДНК для РТХ 3, находящейся под контролем промотора убиквитина, и геном устойчивости к неомицину под контролем промотора SV40; все остальные свойства и карта плазмиды представлены на фиг. 1. Полная последовательность pSC1-РТХ 3 следующая (SEQ ID NO: 2). Последовательность pSC1hPTX3 приведена, начиная с первого сайта EcoRI (фиг. 5). Последовательность, полученная из pSG5,содержащей кДНК для РТХ 3, выделена подчеркиванием. Старт-кодон (ATG) и стоп-кодон выделены жирным шрифтом. Линия клеток человека (HEK293F) была выбрана в связи с ее способностью к росту в суспензии, а также в среде без сыворотки и без белков (Florian M. Wurm "Production of recombinant protein therapeuticsand novel purification of recombinant human protein С from three mammalian cell lines" Biotechnology (N.Y.) 1990 Jul 8 (7): 655-61. "Use of cell lines for the production of influenza virus vaccines: an appraisal of technical,manufacturing, and regulatory considerations" Initiative for Vaccine Research, World Health Organization, Geneva, Switzerland (10 Aprile 2007. Для трансфекции HEK293F применяли плазмиду pSC1-РТХ 3 либо в линейной (обработанной ферментом PvuI), либо в кольцевой форме. Самый высокий выход трансфекции получали при применении линейной плазмиды; отбор клонов проводили на основании продуктивности и способности к росту. После нескольких циклов субклонирования был выбран клон 2F12. Клон клеток человека 2F12, экспрессирующий hPTX3, депонировали в ЕСАСС (Европейская коллекция культивируемых клеток животных, Агентство защиты здоровья, Портон Даун, Уилтшир SP4 0JG,Соединенное королевство) 10 января 2008 г. в соответствии с Будапештским договором о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры под номером 08011001. Детальное описание экспериментов приведено ниже. 3.4. Рекомбинантные 293F-клетки, генерируемые из pSC1-РТХ 3. Трансфекция и субклонирование. Клетки 293F в концентрации 106 клеток/мл ("Invitrogen", каталожный номер R790-07) засевали в роллерную колбу объемом 125 мл с готовой питательной средой Freestyle (объем 28 мл) в день трансфекции. Далее плазмиде pSC1/РТХ 3 позволяли адсорбироваться на реагенте 293-фектине ("GIBCO"/"Invitrogen") в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, в двух отдельных пробирках 30 мкг кольцевой плазмиды pSC1-РТХ 3 или линеаризованной плазмиды PvuI разводили в 1 мл среды Optimem ("GIBCO"/"Invitrogen", Карлсбад, Калифорния, США), и 40 мкл 293-фектина ("Invitrogen") разводили до объема 1 мл средой Optimem. Оба раствора инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре, затем смешивали (конечный объем 2 мл) и инкубировали в течение 30 мин при тех же условиях. К клеткам добавляли смесь ДНК/липиды и инкубировали при 37 С, 5% СО 2 при взбалтывании (120 об/мин). После культивирования в течение 36 ч среду преобразовывали в среду для селекции (200 мл среды Freestyle + 500 мкг/мл G418), и трансфецированные клетки распределяли в планшеты на 96 лунок,по 200 мкл на лунку. Через 15 дней методом ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) выявляли популяции клеток с наивысшей продуктивностью и амплифицировали в планшетах на 24 лунки, 6 лунок и в колбе Т 25. Полученные популяции рекомбинантных клеток субклонировали в количестве 1 клетка на лунку в планшеты на 96 лунок, в 50% свежей среды и 50% кондиционированной среды. Пример 2. Клон MS24PTX. Конструирование плазмиды pSASSI-hPTX3. 1. Конструирование pCEPlight. Плазмиду рСЕР 4 ("Invitrogen", каталожный номер V044-50), в которую ранее клонировали легкую цепь антитела, утратившую часть сайта множественного клонирования и сайта рестрикции BamHI, разрезали при помощи рестриктаз EcoRV и ClaI ("Roche Applied Science"); расщепление позволяло получить плазмиду без точки начала репликации вируса Эпштейна-Барр (oriP) и ядерного антигена (кодируемого геном EBNA-1), который делает возможной внехромосомную репликацию. Полученные фрагменты имели длину 6910 и 4281 п.о. Фрагмент 6910 п.о., содержащий каркас рСЕР, очищали посредством электрофореза в агарозном геле плюс на спин-колонке с кремниевой мембраной. Поскольку ClaI образует "липкий" конец, фрагмент достраивали при помощи ДНК-полимеразы Т 4 ("Roche Applied Science") в соответствии со следующим протоколом: 150 нг очищенного фрагмента ClaI/EcoRV (38 мкг), 5 мкл 10 буфера для ДНК-полимеразы Т 4, 4 мкл смеси дезоксинуклеозидтрифосфатов, 3 мкл ДНК-полимеразы Т 4. После проведения реакции в течение 15 мин при 37 С ее останавливали при 70 С в течение 5 мин, затем на льду. Указанный фрагмент очищали на спин-колонке с кремниевой мембраной и лигировали с самим собой в течение ночи при комнатной температуре с применением ДНК-лигазы Т 4 ("Promega"). Компетентные клетки ТОР 10 ("Invitrogen") трансформировали смесью, полученной при лигировании, и трансформанты отбирали по способности к росту на чашках со средой LB с добавлением 100 мг/л ампициллина. ДНК плазмид, выделенных из устойчивых к ампициллину колоний, конструировали какpCEPlight. 2. Приготовление фрагмента вектора, содержащего гены устойчивости к гигромицину и промоторCMV. Кассету генов устойчивости к гигромицину вместе с предранним энхансером/промотором цитомегаловируса (CMV) получали из pCEPlight посредством амплификации методом ПЦР. Как часть стратегии клонирования последовательность, распознаваемую рестрикционной эндонуклеазой BamHI, встраивали в олигонулеотид, отжигаемый по 3'-концу промотора CMV. Амплифицированная область имеет длину приблизительно 5500 п.о., включая промотор CMV, ген устойчивости к гигромицину под контролем промотора ТК вместе с полиА-сигналом ТК. Олигонуклеотиды конструировали следующим образом: Протокол амплификации был следующий: 2 нг pCEPlight, 200 нМ каждого праймера, 0,2 мМ дезоксинуклеозидтрифосфатов, 1X поставляемый буфер, 1,5 мкл ДМСО (диметилсульфоксида), 0,5 мкл ДНК-полимеразы Taq ("Phusion") конечный объем 50 мкл; температурный режим: 1 мин 98 С, 35 раз (10 с 98 С, 30 с 55 С, 3 мин 72 С), 10 мин 72 С, охлаждение при 4 С до дальнейшего применения. Продукт амплификации (5500 п.о.) очищали посредством электрофореза в агарозном геле плюс на спин-колонке с кремниевой мембраной. Очищенный фрагмент лигировали с самим собой и применяли для трансформации компетентных клеток ТОР 10 ("Invitrogen"). ДНК плазмид, выделенных из устойчивых к ампициллину колоний, проверяли посредством рестрикционного анализа и секвенирования и обозначали как рСЕРBam. 3. Приготовление гена hPTX3. Последовательность гена hPTX3 (номер доступа в "GeneBank" BD 131701) получали из pSC1-РТХ 3,как указано выше, посредством обработки ферментом BamHI ("Roche Applied Science"). Фрагмент РТХ 3 человека очищали посредством электрофореза в агарозном геле и на спин-колонке с кремниевой мембраной. 4. Приготовление pCEPBam-hPTX3. Вектор pCEPBam линеаризовали посредством обработки ферментом BamHI и очищали на спинколонке с кремниевой мембраной. pCEPBam линеаризовали и фрагмент ДНК, соответствующий генуhPTX3, приготовленный на стадии 3, сшивали с применением ДНК-лигазы Т 4 ("Roche Applied Science") и применяли для трансформации штамма Е.coli TOP10. Трансформанты отбирали по способности к росту на среде LB с добавлением 100 мг/л ампициллина и проводили предварительный скрининг путем рестрикционного анализа для оценки ориентации фрагмента РТХ 3. 5. Приготовление сигнала полиаденилирования SV40. Сигнал полиА SV40 получали из плазмиды рСЕРlight путем амплификации методом ПЦР. Как часть стратегии клонирования в концы фрагмента встраивали последовательности, распознаваемые рестрикционными эндонуклеазами HindIII и XhoI соответственно. Олигонуклеотиды конструировали следующим образом: Протокол амплификации был следующий: 1 нг pCEPlight, 200 нМ каждого праймера, 0,2 мМ дезоксинуклеозидтрифосфатов, 1X поставляемый буфер, 2 мкл MgCl2 50 мМ, 0,5 мкл ДНК-полимеразы Taq("Invitrogen"), конечный объем 50 мкл; температурный режим: 1 мин 94 С, 30 раз (30 с 94 С, 1 мин 55 С,1 мин 72 С), 15 мин 72 С, охлаждение при 4 С до дальнейшего применения. Продукт амплификации (420 п.о.) очищали посредством электрофореза в агарозном геле плюс на спин-колонке с кремниевой мембраной. 6. Приготовление pSASSI-hPTX3. Очищенный фрагмент, соответствующий сигналу полиА SV40 и рСЕРВат-hPTX3, обрабатывали рестриктазами HindIII/XhoI и сшивали при помощи ДНК-лигазы Т 4 ("Promega"). Смесь, полученную при лигировании, применяли для трансформации компетентных клеток ТОР 10 ("Invitrogen"), и трансформанты отбирали по способности к росту на чашках со средой LB, содержащей 100 мг/л ампициллина. ДНК плазмид, выделенных из устойчивых к ампициллину колоний, проверяли посредством рестрикционного анализа и секвенирования, и указанную плазмиду обозначали pSASSI-hPTX3. Полная последовательность pSASSI-hPTX3 следующая (SEQ ID NO: 1). Последовательность pSASSI-hPTX3 приведена, начиная с сайта BamHI (фиг. 1). Последовательность hPTX3 обозначена строчными Пример 3. Рекомбинантный клон MS24PTX, генерируемый при трансфекции pSASSI-hPTX3. 1. Трансфекция и субклонирование. Клетки 293F/PTX3/2F12 в концентрации 106 клеток/мл засевали в роллерную колбу объемом 125 мл с готовой питательной средой Freestyle (объем 28 мл) в день трансфекции. Далее плазмиде pSASSI- 10023191hPTX3 позволяли адсорбироваться на реагенте 293-фектине ("GIBCO"/"Invitrogen") в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, в двух отдельных пробирках 30 мкг линеаризованной плазмиды pSASSI-hPTX3 NruI разводили в 1 мл среды Optimem ("GIBCO"/"Invitrogen", Карлсбад, Калифорния, США), и 40 мкл 293 фектина ("Invitrogen") разводили до объема 1 мл средой Optimem. Оба раствора инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре, затем смешивали (конечный объем 2 мл) и инкубировали в течение 30 мин при тех же условиях. К клеткам добавляли смесь ДНК/липиды и инкубировали при 37 С, 5% СО 2 при взбалтывании (120 об/мин). После культивирования в течение 36 ч среду преобразовывали в среду для селекции (200 мл среды Freestyle + 200 мкг/мл гигромицина), и трансфецированные клетки распределяли в планшеты на 96 лунок, по 200 мкл на лунку. Через 15 дней методом ELISA выявляли популяции клеток с наивысшей продуктивностью и амплифицировали в планшетах на 24 лунки, 6 лунок и в колбе Т 25. Полученные популяции рекомбинантных клеток субклонировали в количестве 1 клетка на лунку в планшеты на 96 лунок, в 50% свежей среды и 50% кондиционированной среды. 2. Определение рекомбинантного hPTX3 методом ELISA. Очищенный РТХ 3 или РТХ 3, секретированный в надосадочную жидкость культуры, титровали при помощи "сэндвич"-метода ELISA. Для детекции РТХ 3 титрационные микропланшеты Nunc Maxisorb("Nunc", Роскилле, Дания) покрывали моноклональными антителами крысы MNB4 против РТХ 3 человека ("Alexis Biochemicals", Лозанна, Швейцария) в концентрации 700 нг/мл в 15 мМ натрийкарбонатном буфере, рН 9,6, на одну ночь при 4 С. Лунки промывали ФСБ (фосфатно-солевым буфером) плюс 0,05% Твин-20 (ФБС-Тв, промывочный раствор) и блокировали путем добавления 300 мкл ФБС-Тв,содержащего 5% сухого молока, в течение 2 ч при комнатной температуре. Надосадочную жидкость из культуры клеток или очищенный рекомбинантный РТХ 3 человека добавляли в лунки, разводили промывочным раствором плюс 1% БСА (бычий сывороточный альбумин). Для количественного анализа строили стандартную кривую для очищенного рекомбинантного РТХ 3 человека из клеток СНО (яичников китайского хомячка), в диапазоне от 0 до 100 нг/мл. После инкубации в течение 1 ч при 37 С связанный РТХ 3 определяли при помощи биотинилированного поликлонального антитела кролика против РТХ 3,после чего инкубировали со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена ("Sigma-Aldrich",США). В заключение для развития окраски добавляли 2,2'-азино-бис-3-этилбензтиазолин-6-сульфоновую кислоту ("Sigma Chemical Co", США) и оценивали оптическую плотность на длине волны 405 нм при помощи планшетного ридера, модель 3550 EIA ("Bio-Rad, Hercules", Калифорния, США). Пример 4. Сравнение роста, жизнеспособности и продуктивности клонов 293F/PTX3/2F12 иMS24PTX. Клетки, полученные из двух клонов, высевали на 500 мл среды FreeStyle 293 в роллерные колбы объемом 1 л с плотностью 1000000 клеток/мл (жизнеспособность 90%). Рост, жизнеспособность и продуктивность отслеживали приблизительно в течение 1 недели, пока клетки не начинали гибнуть. На фиг. 2 показаны рост, жизнеспособность и продуктивность клонов MS24PTX (панель А) и 293F/PTX3/2F12 (панель В) при одинаковых условиях посева и культивирования. Как показано на указанной фигуре, при повторной трансфекции клона, экспрессирующего РТХ 3, 293F/PTX3/2F12, новой плазмидой, в которой ген РТХ 3 находится под контролем промотора CMV (клон MS24PTX) авторы изобретения смогли получить повышение продуктивности РТХ 3 приблизительно в 4 раза. Пример 5. Очистка рекомбинантного РТХ 3 человека от клона MS24PTX. Надосадочную жидкость культуры клона MS24PTX, выращиваемого в роллерной колбе, загружали на колонку, заполненную Q-сефарозой Fast Flow ("GE Healthcare", Соединенное королевство). Удерживаемый в колонке материал элюировали при помощи нелинейного градиента. Фракцию, содержащую РТХ 3, непосредственно вводили в керамическую колонку, заполненную гидроксиапатитом ("BioRad,Hercules", Калифорния, США). Удерживаемый в колонке материал элюировали при помощи нелинейно возрастающей концентрации фосфатов. Фракцию, содержащую РТХ 3, концентрировали, и буфер, замененный на ультрафильтрационной мембране (Pellicon-Biomax 100, "Millipore"), затем охарактеризовывали методом эксклюзионной хроматографии на Biosep SEC S4000 ("Phenomenex") и на SDS-PAGE (фиг. 3). Пример 6. Связывание h-РТХ 3 с FGF2. Связывание очищенного рекомбинантного hPTX3 с FGF2 оценивали в системе ELISA. Планшет на 96 лунок (Falcon 3912) покрывали 2 мг/мл FGF2 ("Calbiochem") в ФСБ и инкубировали в течение ночи при 4 С. Лунки промывали ФСБ плюс 0,1% Тритон Х-100 (ФСБ-Тр, промывочный раствор) и блокировали путем добавления 200 мкл ФБС-Тр, содержащего 3% БСА (раствор для ФСБ-Б-блокирования и разведения) в течение 2 ч при комнатной температуре. После промывания проводили связывание, добавляя 100 мкл проб, разведенных ФСБ-Б при концентрациях РТХ 3 от 0 до 120 нг/мл, и инкубируя планшет при 37 С в течение 1 ч. После промывания планшеты инкубировали с 100 нг/мл поликлонального антитела кролика против РТХ 3, добавляемого в количестве 100 мкл/лунку (1 ч при 37 С), повторно промывали и инкубировали с 100 мкл антикроличьего IgG козы (1:1000 в ФСБ-Б; 1 ч при 37 С). После промывания добавляли 100 мкл хромогенного субстрата 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (ТМБ) ("Sigma-Aldrich"), через 10-15 мин реакцию останавливали путем добавления 100 мкл 1 М HCl и определяли поглощение при помощи планшетного ридера, модель 3550 EIA ("Bio-Rad, Hercules", Калифорния, США) (фиг. 4). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Рекомбинантная клетка человека, способная экспрессировать белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, представляющая собой рекомбинантный клон 293F/PTX3/2F12, депонированный в ЕСАСС под номером 08011001, дополнительно трансформированная вектором с последовательностью SEQ ID NO: 1,содержащим последовательность нуклеотидов, кодирующую белок длинного пентраксина РТХ 3 человека под контролем эффективного промотора, такого как CMV, и последовательность нуклеотидов, кодирующую селектируемый маркер, такой как ген устойчивости к гигромицину. 2. Трансформированная рекомбинантная клетка человека по п.1, представляющая собой рекомбинантный клон MS24PTX, депонированный в Агентстве защиты здоровья, центре коллекций культур для готовности и мер реагирования в чрезвычайных ситуациях, Солсбери, Великобритания, под номером 09072902. 3. Применение трансформированной рекомбинантной клетки человека по п.1 или 2 для получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека. 4. Способ получения белка длинного пентраксина РТХ 3 человека, включающий: а) трансформацию рекомбинантной клетки человека, способной экспрессировать белок длинного пентраксина РТХ 3 человека, представляющей собой рекомбинантный клон 293F/PTX3/2F12, депонированный в ЕСАСС под номером 08011001, вектором с последовательностью SEQ ID NO: 1, содержащим последовательность нуклеотидов, кодирующую белок длинного пентраксина РТХ 3 человека под контролем промотора CMV, и последовательность нуклеотидов, кодирующую ген устойчивости к гигромицину в качестве селектируемого маркера;b) селекцию и выращивание трансформированной рекомбинантной клетки человека;c) очистку белка длинного пентраксина РТХ 3 человека из культуральной среды указанной трансформированной рекомбинантной клетки человека. 5. Способ по п.4, где трансформированная рекомбинантная клетка человека представляет собой рекомбинантный клон MS24PTX, депонированный в Агентстве защиты здоровья, центре коллекций культур для готовности и мер реагирования в чрезвычайных ситуациях, Солсбери, Великобритания, под номером 09072902. 6. Способ по п.4 или 5, согласно которому стадия очистки включает по меньшей мере одну из следующих стадий: анионно-обменную хроматографию, хроматографию с гидроксиапатитом или эксклюзионную хроматографию.