Модифицированные вич-пептиды на основе белка gag p24, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ определения вич-индуцированных антител

1 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к области генной инженерии и иммунохимии и, в частности, к новым пептидам на основе консервативных участков белка gag ВИЧ р 24, антигенам в свободной или связанной р носителем формы,включающим по крайней мере один из упомянутых пептидов, вакцинным композициям, содержащим по крайней мере один из антигенов,наборам для иммуноанализа и способу определения антител, индуцированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или ВИЧспецифичными пептидами, с использованием таких антигенов. Уровень техники В настоящее время имеется насущная необходимость в борьбе с глобальным эпидемическим распространением ВИЧ-инфекции, а разработка вакцины против ВИЧ является одной из приоритетных задач в исследованиях СПИДа. В целом, вакцины должны активировать антигенсодержащие клетки, преодолевать генетическую ограниченность Т-клеточных ответов и генерировать Т- и В-клетки памяти. Изменчивость вирусной популяции создат дополнительные трудности в получении эффективной вакцины против ВИЧ. Поэтому до сих пор не было сообщений о прорывах в предпринимаемых попытках разработать вакцину против ВИЧ. В настоящее время в целом считается, что индукция антиген-специфичного гуморального и клеточного иммунитета является ключевым фактором в разработке эффективной профилактической и лечебной вакцины. Все три основных разветвления иммунной системы, включая нейтрализующие антитела, клетки CD8+CTL и Тхелперные клетки 1-го типа (Тh1), должны быть необходимыми звеньями защитного иммунитета в отношении ВИЧ. Известно, что лимфоциты CTL способны уничтожать другие вирусные инфекции (Ada,1994, Immunol. Cell Biol., 72, 447-454) и что CTL способны лизировать инфицированные мишени на ранней стадии инфекции, т.е. перед тем, как вирусное потомство может быть образовано с последующим выходом в результате лизиса клеток (Ada et al., цит. выше). Основное внимание было сосредоточено на выборе антигенов, а также на подборе и оценке различных вспомогательных компонентов. Все антигены, используемые в различных исследованиях in vitro и in vivo, начиная от белков из неочищенных экстрактов и вплоть до различных синтетических пептидов, в основном на основе gp160 и иногда от р 24. Было проведено значительное число исследований в отношении петли V3 в составе белка gp120. Была выявлена индукция и В-клеточного, и Т-клеточного ответов: однако, по результатам исследованийin vitro было сообщено, что пептид из консервативного участка gp41 способствует усилению 2 инфекции (S.J.Bell et al., 1992, Clin. Exp. Immunol., 87 (1), 37-45). Встречающиеся в нативных условиях последовательности ВИЧ в предполагаемых вакцинах неспособны стимулировать стабильный иммунный ответ из-за присущей вирусам способности изменяться за счт изменения эпитопов клеточной поверхности инфицированных клеток. Это в буквальном смысле обманывает иммунную систему, которая воспринимает конкретную аминокислотную последовательность как свою, хотя на самом деле существенные аминокислоты спрятаны. Недавние исследования титров антител против белка gag p24 показали, что медленная прогрессия развития СПИДа связана с высокими титрами, в то время как быстрая прогрессия развития СПИДа связана с низкими титрами. Было показано, что субъекты с низким титром антитела к р 24 характеризуются существенно более быстрым развитием СПИДа по сравнению с субъектами, имеющими высокие титры антител к р 24 (G.Zwart et al., 1994, Virology, 201, p. 285-293): это указывает на то, что р 24 может играть ключевую роль в контроле развития СПИДа. Новые пептиды р 24 ВИЧ описаны в международной патентной заявке WO 91/13360, в которой пептиды были использованы в способе,дискриминирующем правильно и ложно диагностированными ВИЧ-позитивными образцами сыворотки. У R.P.Johnson et al., 1991, Journal of Immunology, Vol. 147, N 5 (September 1), pp. 15121521 описан анализ установления точной специфичности gag-специфичных CTL-ответов у 3 больных, серопозитивных по ВИЧ-1, где было обнаружено, что gag-специфичные CTL-ответы опосредуются лимфоцитами CD3+/CD8+, которые ограничены классом I HLA. Европейская патентная заявка ЕР А 0356007 описывает антигенные детерминанты, в частности, она касается синтетических полипептидных последовательностей, которые родственны белкам, присутствующим в ВИЧ-1, и которые могут быть использованы в качестве основы для потенциальной вакцины против ВИЧ. У E.S.Rosenberg et al., 1997, Science, Vol. 278 (21 November), p. 1447-1450 описано, что специфичные для вируса CD4+ Т-хелперные лимфоциты являются ключевыми для поддержания эффективного иммунитета при ряде хронических вирусных инфекций, однако, они не выявляются при хронической инфекции вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ-1). Специфичные для ВИЧ-1 пролиферативные ответы на р 24 характеризуются обратно пропорциональной связью с вирусной нагрузкой. Авторы заключили, что специфичные для ВИЧ-1 хелперные клетки, по-видимому, важны с точки 3 зрения иммунотерапевтического вмешательства и разработки вакцин. Европейские патентные заявки ЕР 0230222, ЕР 0-270114, германский патент 3711016 и британский патент 2-188639, все от имени F.Hoffmann-La RocheCo. Aktiengesellschaft, касаются экспрессии и очистки рекомбинантного белка, кодируемого геном HTLVIIIGag/Env, или химерных белков. Белки, состоящие из природных последовательностей, могут быть очищены до гомогенного состояния и использованы в качестве основы для диагностических тестов, предназначенных для выявления антител, специфичных в отношении вирусов,связанных со СПИДом. Белок gag/env также может быть использован в качестве вакцины с целью защиты от СПИДа путм профилактической иммунизации. С точки зрения диагностики и терапевтического применения основные проблемы использования р 24 в качестве элемента тестирования или лечения связаны со значительным числом эпитопов в составе р 24, которые стимулируют выработку большого числа антител, обладающих слабой специфичностью, которые в результате повторяющегося бустинга в отношении возможных мутировавших последовательностей могут вызывать появление аутоантителUSA, (23), 10849-10853, Nov. 8). Далее, сообщено, что титр антител к р 24 не достигает таких же высоких уровней, что и в отношении оболочечных белков (gpl20 и gp41). В норме антитела к р 24 образуются на самой ранней стадии инфекции, однако, титр довольно быстро стабилизируется после начального периода инфекции. Позднее титр р 24 постепенно снижается, в то время как в отношении gpl60 имеется противоположная тенденция. Также данные, полученные в недавних исследованиях, указывают на то, что варианты gag ВИЧ-1 проявляют антагонистическую активность в отношении цитотоксических Т-клеток (P.Klenerman et al., 1994,Nature, 369 (2) (6479), p. 355, 2 June). Это может быть одной из причин того, что обнаруживается быстрая стабилизация титра р 24 и позднее начинается его снижение. Сущность изобретения Основываясь на описанных выше предпосылках, авторы предприняли исследование возможности создания новых синтетических пептидов, которые способны имитировать эпитоп р 24, не проявляя антагонизма в отношении активности цитотоксических Т-клеток, с целью удовлетворения необходимости в эффективной профилактической и лечебной вакцине. Исходная работа была основана на одном эпитопе, который был опубликован у B.Korber Однобуквенные, равно как и трхбуквенные аббревиатуры, определяющие аминокислоты в последовательностях, приведнных в настоящей заявке, соответствуют международным стандартам и расшифрованы в руководствах,например, у A.L.Lehninger "Principles of Biochemistry", 1982, Worth Publishers Inc., NewYork. Аминокислоты, приведнные ниже основной последовательности, отражают естественную изменчивость этой последовательности. Исходный анализ последовательности, включающей такой модифицированный эпитоп, был проведн на материале следующей последовательности: где X означает 2-аминогексановую кислоту, а остатки цистеина имеют окисленный тип, т.е. образуют внутрицепочечный дисульфидный мостик. Результаты (неопубликованные) исследований с использованием данного пептида,как компонента диагностического набора, показали, что специфичность в отношении заранее отобранной панели Африканских сывороток достигает 87% (n=279). Неожиданно чувствительность составила 100% в отношении панели позитивных по ВИЧ-1 сывороток, включающих сыворотки ВИЧ-1 субтипа О, которые весьма значительно отличаются от других субтипов. С целью повышения специфичности, т.е. с целью определения аминокислот, которые обусловливают чистый ответ по антителам без перекрстной реактивности, сходный анализ был проведн на материале существенно более короткого и дополнительно модифицированного пептида: где X имеет указанное выше значение, а остатки цистеина образуют внутрицепочечный дисульфидный мостик. Результаты настоящего исследования показали, что специфичность теста увеличивалась до 96% (n=293), что сходно со специфичностью,выявленной в тесте без использования пептида р 24. При специфичности на уровне 87% в тесте,в котором использовали первый пептид, можно было бы предположить, что пептид будет индуцировать иммунный ответ более чем на один эпитоп, поскольку он распознавался неспецифическими антителами, если его использовали в качестве предполагаемой вакцины. Последнее,однако, показывает, что пептидная последовательность вызывает иммунный ответ, который уникален для ВИЧ-1. Следовательно, если осно 5 ванная на нм последовательность используется в качестве антигена в предполагаемой вакцине,то наиболее вероятно это вызовет уникальный иммунный ответ в отношении ВИЧ-1. Для дальнейшего повышения числа Тклеточных эпитопов и снижения вероятности образования способных маскироваться мутантов три дополнительные пептидные последовательности были основаны на следующих трх последовательностях, состоящих из остатков 264284, 253-271 и 166-186, соответственно, опубликованных в "Human Retroviruses and AIDS",1997; "A Compilation and Analysis of Nucleic Некоторые модифицированные пептиды были синтезированы с целью определения уникальных последовательностей, которые и специфичны, и чувствительны в отношении ВИЧ-1. Пептиды в соответствии с настоящим изобретением разработаны на основе четырх различных консервативных участков в составе основного белка р 24 ВИЧ-1, который описан выше, и по свойствам уникальны (чувствительность и специфичность) в отношении эпитопа ВИЧ-1. Кроме того, новые пептиды в соответствии с настоящим изобретением не проявляют распознаваемого антагонистического эффекта в отношении цитотоксических Т-лимфоцитов(CTL) и должны включать по крайней мере один потенциальный эпитоп для CTL. Пептиды в соответствии с настоящим изобретением, которые удовлетворяют указанным выше критериям, выбирают из следующих групп.Xaa18 Val Xaa20 (SEQ ID NO 1), где аминокислоты в полипептиде могут иметь следующие значения: Хаа в положении 1 пептидного производного представляет собой Lys или Arg; Хаа в положении 2 представляет собойGly или Arg; причм пептид включает по крайней мере девять расположенных подряд аминокислот из состава последовательности SEQ ID NO 1.Xaa18 Ile Leu Xaa21 Xaa22 (SEQ ID NO 4), где аминокислоты в полипептиде имеют следующие значения: Хаа в положении 1 представляет собойAsp, Glu, Cys или Gly; Хаа в положении 22 представляет Gly или отсутствует; где последовательность SEQ ID NO 4 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а n = 0, 1, 2 или 3.Leu или отсутствует; где последовательность SEQ ID NO 9 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а n = 1, 2 или 3.Gly или отсутствует; где последовательность SEQ ID NO 15 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а n = 1, 2 или 3 и m = 0, 1, 2 или 3; концевые сегменты последовательностей могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; два или большее число остатков Cys могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи: -S-(CH2)p-S- или мостик -(СН 2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или S, и/или упомянутые пептидные последовательности иммобилизованы на тврдую подложку. Новые пептидные последовательности можно использовать в качестве эффективного антигена при том, что антиген включает по крайней мере один пептид, выбранный из группы последовательностей SEQ ID NO 1, SEQ IDNO 4, SEQ ID NO 9 или SEQ ID NO 15. Антигенность может быть адаптирована путм корректировки отношения или концентрации различных пептидов или длины пептидов, например, за счт димеризации или полимеризации,и/или иммобилизации на тврдую фазу. Антиген включает две или большее число полипептидных последовательностей по настоящему изобретению, которые либо соединены мости 9 ком, например, дисульфидным мостиком между остатками Cys в составе полипептидов,либо такими мостиками, как С 1-С 8-алкилен,возможно прерываемый одним или несколькими гетероатомами типа О, S или N, либо предпочтительно они не связаны между собой. Полипептиды могут быть иммобилизованы на тврдую фазу в мономерной, димерной или олигомерной формах. Кроме того, аминокислоты могут быть добавлены к концам с целью получения плеч, облегчающих иммобилизацию. Все аминокислоты в составе пептидов по настоящему изобретению могут находиться и вD-, и в L-форме, хотя предпочтительными являются природные L-аминокислоты. С- и N-концевые участки пептидных последовательностей могут отклоняться от природных последовательностей в результате модификации концевых NH2-группы и/или СООНгруппы: они могут быть, например, ацилированы, ацетилированы, амидированы или модифицированы так, чтобы образовать сайт связывания с носителем или иной молекулой. Пептиды в соответствии с настоящим изобретением состоят из 6-50 аминокислот, предпочтительно из 10-30 аминокислот. Они охватывают любую известную природную аминокислотную изменчивость в идентифицированных положениях. Полипептидный антиген по настоящему изобретению находится либо в свободной форме, либо связан с носителем. Носитель или тврдая фаза, с которой пептид необязательно связан, могут быть выбраны из широкого круга известных носителей. Его следует выбирать с учтом предполагаемого применения иммобилизованного полипептида в качестве диагностического антигена или в качестве иммунизующего компонента вакцины. Примерами носителей, которые можно использовать, например, для целей диагностики,являются магнитные шарики или латекс из сополимеров, таких как стирендивинилбензол,гидроксилированный стирендивинилбензол,полистирен, карбоксилированный полистирен,шарики из углеродной сажи, неактивированное или активированное полистиреном или поливинлхлоридом стекло, активированное эпоксидами пористое магнитное стекло, желатиновые или полисахаридные частицы или иные белковые частицы, клетки красной крови, моно- или поликлональные антитела или Fab-фрагменты таких антител. В соответствии со следующим вариантом настоящего изобретения антигены могут образовывать составную часть вакцины, возможно объединнную с носителями, адъювантами или объединнную с другими иммуностимулирующими компонентами, такими как вирус канареечной оспы, имеющей ген env. Примерами носителей и/или адъювантов, применяемых в вакцинах, является другие белки, такие как бычий 10 или человеческий сывороточный альбумин и гемоцианин слизня. Иммуностимулирующие средства можно разделить на три группы: адъюванты, носители для антигенов и наполнители. Примерами адъювантов являются гидроксид алюминия, соли алюминия, сапонин, мурамильные ди- и трипептиды, монофосфориллипид-А,B.pertussis и различные цитокины, включая цитокины IL-12 и IL-1 лимфоцитов Тh1. Ряд белковых токсинов можно использовать для перемещения белков-пассажиров через клеточные мембраны в цитоплазму, которые применимы для создания CTL-направленных вакцин. Носителями являются бактериальные токроиды, такие как инактивированные столбнячные и холерные токсины, генетически детоксицированные бактериальные токсины, такие как термолабильный энтератоксин E.coli, жирные кислоты,живые векторы, такие как полиохимеры и химерные белки, которые образуют частицы, например, химерные частицы дрожжевого ретротранспозона TY и частицы HBcAg. Наполнители, которые обычно используют в качестве компонентов современных вакцин, представлены эмульсией минеральных масел, полным и неполным адьювантом Фройнда, эмульсиями растительных масел, поверхностно-активными неионогенными блокирующими сополимерами,скваленом или скваланом, липосомами и биологически разрушаемыми микросферами. Двумя новыми адъювантами, которые обладают существенным потенциалом по созданию новых вакцин, являются микроэмульсия масло-в-воде(MF59) и полимерные микрочастицы. Может быть использовано любое вещество, которое способно усиливать иммуногенность антигена, а некоторые дополнительные альтернативы носителей или адъювантов приведены в американской или европейской фармакопеях. Подходящий препарат антигена, предназначенный для использования в качестве иммуностимулятора, также может содержать интерфероны, такие как -интерферон, антивирусные хемокины или факторы роста кроветворной ткани, такие как фактор роста гранулоцитов/макрофагов. Другим подходом к усилению стимуляции и поглощения, например, в кишечнике, является введение пептидов по настоящему изобретению вместе с небольшими пептидами, такими как ди-, три- или тетрапептиды. Такие пептиды могут быть введены дополнительно или в сочетании с пептидами по настоящему изобретению. Предпочтительно пептиды вводят вместе с трипептидом YGG, состоящим из аминокислот в Dили L-форме, предпочтительно в D-форме. Современными подходами к непарентеральной доставке вакцин, например, через слизистые, являются технология химеризации генов, нацеленная на создание нетоксичных производных адъювантов для слизистых, генетически инактивированных антигенов, несущих де 11 леции в ключевом гене, совместная экспрессия антигена и специфического цитокина, который является ключевым в модуляции и контроле иммунного ответа слизистых, и сам генетический материал, который обеспечивает поглощение ДНК или РНК и их эндогенную экспрессию в клетках-хозяевах. Один из подходов к выработке длительных ответов, для которых необходим механизм клеточного иммунитета, связан с вакцинацией плазмидной ДНК, которая кодирует один или несколько специфичных антигенов. С целью защиты против ВИЧ-инфекции вакцины должны индуцировать и иммунные ответы в слизистых, и системные иммунные ответы, и они могут быть введены по любому стандартному пути, например, парентерально или непарентерально, например подкожно,внутрикожно, внутривенно, внутримышечно,перорально, в слизистую или через нос. В предпочтительном варианте вакцины по настоящему изобретению она содержит антигены, включающие пептиды SEQ ID NO 1, 4, 9 и 15, более предпочтительно эти пептиды включены в соотношении 1:1:1:1. В следующем предпочтительном варианте вакцинная композиция содержит антигены Одна из последовательностей включает Вклеточный эпитоп и должна активировать систему гуморальных ответов, в то время как другие последовательности привносят CTLэпитопы, а аминокислотные замены, внеснные в рамку CTL-эпитопа, сформированы таким образом, чтобы обеспечить усиленное связывание. Другие аминокислотные замены были произведены с целью облегчения синтеза пептида и/или повышения растворимости пептида. Способ определения в образце жидкостей тела антител, индуцированных ВИЧ-1 или специфичными для ВИЧ-1 пептидами или белками,с использованием заявляемых антигенов является следующим вариантом изобретения. Также настоящим изобретением охватывается набор для иммунологического тестирования, сформированный с целью указанной детекции, а также антитела, способные избирательно взаимодействовать с упомянутыми антигенами. Получение пептидов Пептиды по настоящему изобретению могут быть получены с помощью любого известного метода получения линейной аминокислотной последовательности, такого как методы рекомбинантных ДНК. Последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует пептид по настоящему изобретению или мультимер упомянутых пептидов, вносят в состав экспрессирующего вектора. Подходящими экспресси 004802 12 рующими векторами являются, например, плазмиды, космиды, вирусы и YAC (искусственные дрожжевые хромосомы), которые включают необходимые регуляторные элементы, обеспечивающие репликацию и экспрессию. В клеткехозяине экспрессирующий вектор может быть простимулирован к экспрессу. Подходящими клетками-хозяевами являются, например, бактерии, дрожжевые клетки и клетки млекопитающих. Такие методы хорошо известны в данной области техники и описаны, например, у Sambrook et al., 1989, "Molecular Coning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor LaboratoryPress, Cold Spring Harbor. Другими хорошо известными методами являются разделение на фрагменты или синтез путм сочетания одного аминокислотного остатка со следующим в жидкой фазе или, что предпочтительно, на тврдой фазе (на полимере), например, с помощью так называемого синтеза по Мэррифилду: см., например, ВаrаnуMerrifield, In "Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 2, eds. E.GrossPeptide Protein Res., 35, p. 161-214. Если желательным является соединенный или циклический пептид, то аминокислотную последовательность подвергают реакции химического окисления с целью циклизации или соединения двух остатков цистеина в пределах одного полипептида или между двумя пептидыми последовательностями после того, как синтезированы подходящие линейные аминокислотные последовательности: см. Akaji et al.,1992, Tetrahedron Letter, 33, 8, p. 1073-1076. Синтез пептидов Все пептидные производные, полученные в примерах, приведнных далее, были синтезированы с помощью пептидного синтезатораMilligen-9050 с использованием стандартной программы. Использованным полимером являлся Tenta Gel P RAM с теоретической величиной загрузки 0,20 meq/г (RAPP POLYMERE GmbH,Tubingen). Конечный продукт синтеза высушивали в вакууме в течение ночи. Затем пептид отщепляли от полимера обработкой 90%-ной трифторуксусной кислотой в присутствие этандитиола (5%) и воды (5%) (1,5 ч при комнатной температуре). Затем полимер отфильтровывали и промывали на фильтре дополнительно трифторуксусной кислотой (100%) (2 раза по 20 мл). Объединнные фильтраты упаривали в вакууме(водяная баня при комнатной температуре), и остаток растирали в этиловом эфире и отфильтровывали осажднный продукт. Тврдое вещество быстро растворяли на фильтре ледяной уксусной кислотой (100 мл) и добавляли к 1,5 л 20%-ной уксусной кислоты в метаноле и обрабатывали 0,1 М раствором иода в метаноле до установления бледно-коричневой окраски. Затем добавляли ионный обменник Dowex 1x8 в 13 ацетатной форме (15 г) (Bio-Rad, Richmond,СА), и смесь отфильтровывали. Фильтрат выпаривали, и остаток лиофилизовали из уксусной кислоты. Затем продукт очищали методом жидкостной хроматографии с обращенной фазой на колонке, заполненной Kromasil 100-5 С 8 (ЕКАNobel, Surte, Швеция) в подходящей системе,содержащей водный раствор ацетонитрила с 0,1% трифторуксусной кислоты. Образцы, собранные с колонки, анализировали методом аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (Beckman System (Gold,США), оборудованной колонкой Kromasil 1005 С 8 (ЕКА Nobel, Surte, Швеция). Фракции, содержащие чистое вещество, объединяли, растворитель выпаривали, и продукт лиофилизовали из уксусной кислоты. В отношении конечного продукта проводили окончательный ВЭЖХанализ, и структуру пептида подтверждали путм аминокислотного анализа и массспектроскопии (АКА-МС). Все аминокислоты, использованный в ходе синтеза, являлись L-аминокислотами, защищенными флуоренилметоксикарбонильной группой по -аминогруппе. Боковые цепи были защищены следующим образом:Trt - трифенилметил,t-Bu - трет-бутил,OtBu - трет-бутиловый сложный эфир. Аминокислотные производные были приобретены у Bachem AG, Швейцария. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Пример 1. Получение KALGPGATLQTPWTACQGVG - NH2 (SEQ ID NO 2). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - 87%. Пример 2. Получение RALGPAATLQTPWTASLGVG (SEQ ID NO 3). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - более 95%. Молекулярная масса (свободное основание) - 1966. Молекулярная формула - C88H144O25N26. Пример 3. Получение WIIPGLNPLVGGGKLYSPTSILCG- NH2 (SEQ ID NO 5). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, 004802 14 а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - 95%. Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2454,9. Экспериментальная молекулярная масса 2454,8 ES+. Пример 4. Получение RWLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILG (SEQ ID NO 6). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - более 95%. Молекулярная масса (свободное основание) - 2552. Молекулярная формула - C119H195O29N33. Пример 5. Получение KILLGLNPLVID NO 24). Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопииGGDIYKRWQA LCL (SEQ ID NO 10). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - 85%. Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2817,3. Экспериментальная молекулярная масса 2813,7 ES+. Пример 7. Получение RAIPIPAGTLLSGGGRAIYKRWAI LG (SEQ ID NO 11). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - более 95%. Молекулярная масса (свободное основание) - 2707. Молекулярная формула - С 125 Н 208O29N38. Пример 8. Получение ALPIPAGFIYGGGRIYKRWQALG 15 Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопииGAISYDLNTNlLNCI (SEQ ID NO 16). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Nl в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - более 80%. Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2783,3. Экспериментальная молекулярная масса 2783,3 ES+. Пример 10. Получение KFIIPNlFSALSGGGAISYDLNTFLN CIG (SEQ ID NO 17). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. N1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - более 80%. Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2932,4. Экспериментальная молекулярная масса 2931,8 ES+. Пример 11. Получение RFIIPNlFTALSGGRRALLYGATPY AIG (SEQ ID NO 18). Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. N1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа,а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС). ВЭЖХ-чистота - более 95%. Молекулярная масса (свободное основание) - 2894. Молекулярная формула - C137H217O32N37. Пример 12. Получение KIIPNlFSALGG(SEQ ID NO 25). Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путм аминокислотного анализа и масс-спектроскопии 16 Пептидные последовательности примеров 1 и 3 соединяли на стадии окисления с образованием дипептида, в котором остатки цистеина образовывали дисульфидную связь. Этот мостик образовывался по одному из путей:(A) Окисление иодом. Равные количества пептидов растворяли в уксусной кислоте/метаноле (1:4) и добавляли 0,1 М I2 в метаноле, получая смесь димера, или(5:2) с получением димера SEQ ID NO 21. Чистоту пептида определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, и структуру пептида подтверждали с помощью аминокислотного анализа. Содержание пептида (свободное основание аминокислоты) составило 80%. ВЭЖХ-чистота - 92%. Пример 14. Готовили вакцину, содержащую пептидыSEQ ID NO 3, 6, 11 и 18. Лиофилизованные пептиды растворяли в стерильной воде до конечной концентрации 4 мг/мл. Конечная концентрация соли составила 0,9%. Также включали препарат колоние-стимулирующего фактора гранулоцитов/макрофагов (GM-CSF) в соответствии с руководством производителя по применению до конечной концентрации 0,3 мг/мл. Два раствора вводили внутрикожно. Типичная доза инъекции составляет 100 мкл. Пример 15. Раствор или суспензию антигена смешивали в равных долях с полным или неполным адъювантом Фройнда (Behring) и затем окончательно эмульгировали путм втягивания (всасывания) и сильно сдавливали с помощью инъекционного шприца или гомогенизатора. Эмульсия должна оставаться стабильной на протяжении по крайней мере 30 мин. Эмульсии антигена/адъюванта лучше всего инъецировать подкожно в форме депо. Пример 16. Данные по токсичности. Дипептид примера 13 разводили в 0,9%ном растворе до концентрации тест-раствора 0,4 мг/мл. Пептид вводили с помощью инъекции самкам мышей линии NMFI дозой 100 мкг на 1 кг массы тела. Не было выявлено проявлений токсичности, поэтому пептид рассматривался как нетоксичный. Анализ токсичности проводили на мышах и крысах на материале пептидной композиции вакцины примера 14. Мыши были выбраны для анализа с целью получения сравнительных данных по второму из наиболее часто используемых видов грызунов. Анализируемая субстанция представляла собой смесь четырх пептидов, внеснную в 17 одну ампулу, содержащую лиофилизованный материал для разведения физиологическим раствором, а величины доз выражали количеством общей белковой нагрузки. Отдельные пептиды присутствовали в соотношении 1:1:1:1, что давало дозу каждого пептида 0,0075 мг на 1 кг массы тела, 0,075 мг на 1 кг массы тела и 0,75 мг на 1 кг массы тела, что вплоть до 500 раз превышает предполагаемую дозу для человека. Анализируемых животных разделили на четыре группы по 10 особей в каждой (по пять самцов и пять самок): контрольную группу (только физиологический раствор) и группы с низкой, средней и высокой дозами. Анализируемую композицию вводили однократно путм внутривенной инфузии в хвостовую вену при скорости дозы 3 мл/мин. Животных умерщвляли на 15-й и 16-й дни путм внутрибрюшинной инъекции пентобарбитона натрия. Результаты проведнных исследований показали, что величины доз, введнных мышам и крысам, не вызывают нежелательных реакций,и не было какого-либо эффекта при избыточной дозе 3 мг/кг. Пример 17. Иммуноанализ для определения антител, индуцированных ВИЧ-1. Магнитные частицы готовили в соответствии с рекомендациями производителя. Использовали шарики Dynabeads (Dynal AS). Магнитные частицы, покрытые лигандом, называли реагентом-1. Пептид по настоящему изобретению ковалентно присоединяли к предварительно активированной поверхности магнитных частиц. Также возможной является физическая адсорбция пептида на поверхности магнитных частиц. Концентрация частиц реагента-1 составляла от 1 мг/мл до 15 мг/мл. Размер частиц составлял от 0,2 мкм до 15 мкм. Концентрация пептидов составляла от 0,01 мг/мг частиц до 1 мг/мг частиц. Антитела против иммуноглобулинов человека, конъюгированные с щелочной фосфатазойDako AS. Это стандартный метод в данной области. Данный реагент называли реагентом-2. Раствор субстрата фенолфталеинмонофосфата готовили в соответствии с рекомендациямиFluka AG. Это стандартный метод для данной области процедурой. Раствор субстрата называли реагентом-3. Для промывки и инкубации использовали стандартный 0,05 М Трис-HCl буфер со следующими дополнительными компонентами: Твин-20 (0,01-0,1%), глицерин (0,1-10%) и хлорид натрия (0,2-0,1%). Процедура анализа включает стадию инкубации, на которой в каждой лунке 1 каплю реагента-1 смешивают с 2 каплями промывочного буфера. После смешивания добавляют 30 мкл образца, и полученный раствор инкубируют в течение 5 мин. Магнитные шарики могут быть собраны с помощью магнита с удалением жидкости до 18 снятия магнита. Затем лунки дважды промывают 4 каплями промывочного раствора с последующей инкубацией с реагентом-2. Одну каплю реагента-2 добавляют к 2 каплям промывочного буфера, и раствор инкубируют в течение 5 мин. Магнитные частицы могут быть собраны магнитом с удалением жидкости до снятия магнита. Затем стадию промывки повторяют с последующей инкубацией с реагентом-3. По 2 капли реагента-3 добавляют в каждую лунку, и раствор инкубируют в течение 3 мин. Полученные результаты просчитывают относительно белого фона. Положительные результаты представляют собой красную окраску (3+ = интенсивный красный цвет), в то время как негативные результаты представлены отчтливо светложелтыми/бурыми растворами, как это получено в негативном контроле. Иммунологический набор может быть использован для выявления антител, индуцированных либо вирусом ВИЧ, либо ВИЧспецифичными пептидами или белками, например, пептидами по настоящему изобретению. Приведнные выше примеры служат исключительно для иллюстрирования настоящего изобретения. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что он может модифицировать пептиды, антигены и вакцины,описанные здесь, без отклонения от сути и объма настоящего изобретения в соответствии с указанным в формуле изобретения. Полипептиды по настоящему изобретению могут быть использованы в сочетании по крайней мере с одним пептидом, выбранным из каждой группы последовательностей: SEQ ID NO 1, SEQID NO 4, SEQ ID NO 9 и SEQ ID NO 15, - с образованием антигенов и получением активных компонентов профилактической или лечебной вакцины, предназначенной для создания защиты против вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ 1). Вакцина может содержать соединения, обладающие положительными свойствами по защите или стимуляции иммунной системы реципиента(человека или позвоночного животного), например, интерлейкины, интерфероны, факторы роста гранулоцитов/макрофагов, факторы роста кроветворной ткани или подобное. Предпочтительно вакцинная композиция дополнительно содержит адъювант или наполнитель, более предпочтительно адъювантом или наполнителем является монофосфориллипид-А (MPL), возможно вместе с квасцами, адъювантом Фройнда (полным или неполным) или гидроксидом алюминия. Оптимальное количество адъюванта/наполнителя будет диктоваться выбранным его типом (типами). Пептид или вакцинный препарат могут быть лиофилизованы для хранения. Вакцину можно предпочтительно хранить при низкой температуре в ампулах, содержащих одну или несколько стандартных доз, готовых к применению. Типичная стандартная доза пептида по настоящему изобретению находится в диапазоне концентраций от 1 19 мкг до 1 мг на 1 кг массы тела, предпочтительно от 2 мкг до 0,15 мг на 1 кг массы тела. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что подходящая доза будет зависеть от массы тела больного, типа заболевания, тяжести состояния, пути введения и ряда других факторов. Вакцина может быть введена вплоть до 12 раз с помощью инъекции, обычно е нужно вводить приблизительно трижды. В препаратах растворов для инъекций пептиды растворяют в стерильном растворе хлорида натрия при конечных концентрациях по 1 мг/мл каждого пептида и 0,9% хлорида натрия. Обычно объм инъекции составляет 100200 мкл (2 х 100 мкл). Пептид предпочтительно вводят вместе с подходящим адъювантом и/или фактором роста гранулоцитов/макрофагов, например, Leucomax (Shering Plough). Подходящим путм введения может быть внутрикожный, подкожный, внутривенный, пероральный, внутримышечный, интраназальный, через слизистую или любой иной подходящий путь введения. Для поддержания защиты могут потребоваться бустерные введения. Для специалиста в данной области техники будет понятно, что вакцинные композиции по настоящему изобретению применимы не только для профилактики инфекции, но также и для лечения инфекции. Список последовательностей ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Пептид на основе белка ВИЧ gag р 24,включающий по крайней мере девять расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности SEQ ID No 1: Хаа 1 Хаа 2 Хаа 3 Хаа 4 Хаа 5 Xaa6 Ala Хаа 8 Хаа 9 Gln Thr Pro Тrp Хаа 14 Хаа 15 Хаа 16 Хаа 17 Хаа 18 Val Xaa20 (SEQ ID NO 1),где Xaa в положении 1 пептидного производного означает Lys или Arg; Хаа в положении 2 означает Ala, Gly, Ser или Arg;Arg; Хаа в положении 20 означает Gly или Arg; причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами,ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Cys могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи - S-(CH2)P-S- или мостик -(СН 2)Р-, где р=1-8, необязательно 35 прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или S. 2. Пептид по п.1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 2 или SEQID NO 3. 3. Пептид на основе белка ВИЧ gag p24,включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности SEQ ID No 4:n = 0, 1, 2 или 3; причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами,ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Cys могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи - S-(CH2)P-S- или мостик -(СН 2)Р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или S. 4. Пептид по п.3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 5, SEQ IDNO 6, SEQ ID NO 7 или SEQ ID NO 8. 5. Пептид на основе белка ВИЧ gag p24,включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности SEQ ID No 9:n=1, 2 или 3; причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами,ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Cys могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи: -S-(CH2)P-S- или мостик -(СН 2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или S. 6. Пептид по п.5, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 10, SEQ IDID NO 14. 7. Пептид на основе белка ВИЧ gag p24,включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности SEQ ID No 15:n=1, 2 или 3 и m=0, 1, 2 и 3, независимо друг от друга; причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами,ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Cys могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи -S-(CH2)P-S- или мостик -(СН 2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или S. 8. Пептид по п.7, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 16, SEQ ID 38 9. ВИЧ-антиген, включающий по крайней мере один пептид по любому из пп.1-8. 10. Антиген по п.9, включающий по крайней мере один пептид по п.1, по крайней мере один пептид по п.3, по крайней мере пептид по п.5 и по крайней мере пептид по п.7. 11. Вакцинная композиция, включающая антиген по п.9 вместе с фармацевтически приемлемым растворителем и необязательно с адъювантом, носителем и/или наполнителем и необязательно с дополнительным(ми) иммуностимулирующим(ми) соединением(ями). 12. Вакцинная композиция по п.11, включающая по крайней мере четыре пептида, причем по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.1, по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.3, по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.5 и по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.7. 13. Вакцинная композиция по п.8, включающая пептиды с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 3 по п.2, с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 6 по п.4, с аминокислотной последовательностьюSEQ ID NO 11 по п.6 и с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 18 по п.8. 14. Вакцинная композиция по любому из пп.12-13, в которой пептиды растворены в водном физиологическом растворе, а необязательным иммуностимулирующим соединением является фактор роста гранулоцитов/макрофагов. 15. Вакцинная композиция по любому из пп.12-14, включающая адъювант, выбираемый из группы монофосфориллипида-А (MRL),полного или неполного адъюванта Фрейнда или гидроксида алюминия. 16. Способ определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, в образце жидкостей тела, в котором упомянутый образец подвергают иммуноанализу с использованием антигена по любому из пп.9-10. 17. Набор для иммуноанализа с целью определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, в образце жидкостей тела, в котором в качестве диагностического антигена использован антиген по любому из пп.9-10. 18. Антитело, способное избирательно взаимодействовать с антигеном по п.9 или 10.