Новый конъюгат интерферона альфа с полиэтиленгликолем, представленный одним позиционным изомером пэг-nαh-ифн, и иммунобиологическое средство на его основе

НОВЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ,ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NH-ИФН, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и медицины, в частности,к новым ПЭГ-производным интерферонов и касается создания конъюгата интерферона с полиэтиленгликолем с активностью интерферона альфа общей формулы: Черновская Татьяна Вениаминовна,Денисов Лев Александрович, Морозов Дмитрий Валентинович, Руденко Елена Георгиевна, Кленова Ангелина Всеволодовна (RU) Мухина А.К. (RU) где n - количество мономерных звеньев в ПЭГ с молекулярной массой от 20 до 40 кДа, за исключением ПЭГ с молекулярной массой 30 кДа; m - целое число 4; IFN - природный или рекомбинантный полипептид, обладающий активностью ИФН-альфа. Также изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим заявляемый конъюгат формулы (I),фармацевтическим композициям, пригодным для лечения вирусных и онкологических заболеваний и заболеваний, сопровождающихся первичными или вторичными иммунодефицитными состояниями, содержащим конъюгат ПЭГ-ИФН формулы (I) и терапевтически приемлемые вспомогательные компоненты.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "БИОКАД" (RU) Изобретение относится к фармацевтике и медицине, а именно, к новым физиологически активным конъюгатам интерферона, в частности, к новым конъюгатам интерферона с полиэтиленгликолем, которые могут быть использованы в медицине, например, для лечения вирусных, иммунных и онкологических заболеваний. Интерфероны (ИФН) - это группа биологически активных белков или гликопротеидов, продуцируемых различными клетками в ответ на вирусную инфекцию или при воздействии на клетки некоторых химических и биологических веществ (Pestka, S., J. Biol. Chem. 2007, 13; 282(28), стр. 20047-20051). Связывание ИФН с клеточными рецепторами приводит к индукции синтеза целого ряда внутриклеточных белков, которые опосредуют противовирусное, иммуномодулирующее и антипролиферативное действие ИФН (Pestka, S., et al., Immunological Reviews, 2004, 202, стр. 8-32; Bekisz, J., et al., Growth Factors, 2004,22 (4), стр. 243-251). Гены различных ИФН человека были клонированы и экспрессированы в бактериальных и животных клетках, в результате были получены и очищены многие рекомбинантные ИФН (Pestka, S., J. Biol.Chem. 2007, 13; 282(28), стр. 20047-20051). Лекарственные препараты, содержащие рекомбинантные ИФН, применяются в клинической практике для лечения целого ряда вирусных, онкологических и иммунных заболеваний (Chevaliez S., Pawlotsky J.M., 2009, Handb. Exp. Pharmacol., (189), стр. 203-41). В настоящее время препараты на основе ИФН применяются в клинической практике для лечения целого ряда вирусных, онкологических и иммунных заболеваний. Наиболее широкое использование препараты ИФН получили для лечения вирусных гепатитов, представляющих одну из наиболее серьезных социальных проблем. В настоящее время в мире насчитывается около 350 млн. хронически больных гепатитом В и 170 млн. больных гепатитом С (Marcellin P., Liver International, 2009, 29(s1), стр. 1-8). Заболевание гепатитом С в большинстве случаев приобретает хроническое течение с формированием тяжелых исходов - цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (Modi A.A. et al., Oral. Dis. 2008, 14(1), стр. 10-4). По данным ВОЗ, с 1961 года в США и странах Западной Европы хронические гепатиты и циррозы печени, как причина смерти, переместились с 10 на 5 место (Marcellin P., Liver International,2009, 29 (s1), стр. 1-8). Известно также применение препаратов, содержащих ИФН-, для лечения ряда лейкозов и солидных опухолей, в том числе рецедивирующей меланомы (Bukowski R. et al., Clin. Oncol.,2002; 20(18), стр. 3841-3849; Decatris M. et al., BioDrugs, 2002; 16(4), стр. 261-81; Quintas-Cardama A. etal., Semin Thromb Hemost, 2006; 32 (4 Pt 2), стр. 409-16). Эффективность действия препаратов нативных ИФН ограничена быстрым всасыванием из подкожных тканей, большим объемом распределения, относительно низкой стабильностью, коротким периодом полувыведения, высокой иммуногенностью и токсичностью (Wills R.J., Clin Pharmacokin. 1990; 19, стр. 390-399.). В результате, в течение нескольких часов после введения наблюдается быстрое падение концентрации ИФН в плазме крови, при этом интерферон не определяется в плазме уже через 24 ч после инъекции (Chatelut E. et al., Br. J. Clin. Pharmacol. 1999; 47, стр. 365-371). Снижение концентрации интерферона создает условия для возобновления репликации вируса и увеличения концентрации вирусных частиц (Lam N.P. et al., Dig. Dis. Sci. 1997: 42(1), стр. 178-185). Поэтому возникает необходимость частых введений препарата для достижения эффективных терапевтических концентраций в плазме крови, что приводит к возникновению дозозависимых побочных эффектов. Вследствие указанных особенностей монотерапия хронического гепатита С (ХГС) ИФН-2b в течение 12 мес. приводила к устойчивому вирусологическому ответу всего у 15-20% пациентов, у больных с генотипом Iв и высокой вирусологической нагрузкой эффективность препарата не наблюдалась вовсе (McHutchinson J. et al., N. Engl. J. Med. 1998: 339, 21, стр. 1485-1492). Терапевтическая эффективность ИФН может быть повышена при использовании препаратов пролонгированного действия, в частности - "ПЭГилированных" ИФН (Manns М.Р. et al., Lancet 2001, 358,стр. 958-65; Zeuzem S. et al., Expert Opin Investig Drugs 2001, 10(12), стр. 2201-2213). Получение ПЭГилированных ИФН заключается в химическом связывании молекулы интерферона с полимером - монометоксиполиэтиленгликолем (мПЭГ), состоящим из повторяющихся субъединиц этиленоксида с метоксигруппой на одном конце и гидроксильной группой - на другом. Молекула мПЭГ может иметь различную молекулярную массу и стереохимическую структуру (линейная или разветвленная). Для проведения реакции ПЭГилирования гидроксильную группу на конце мПЭГ активируют различными реактивными функциональными группами. Активированный мПЭГ может ковалентно связываться с белком в одном или в нескольких местах, что зависит от природы активированной группы и условий реакции (Zalipsky S., Bioconj. Chem.1995: 6, стр. 150-165; Roberts M.J., et al., Adv Drag Deliv Rev. 2002, 54(4), стр. 459-476). ПЭГилирование ИФН приводит к улучшению фармакокинетики, увеличению времени полувыведения из крови, снижению колебаний концентрации в крови, снижению иммуногенности и токсичности,увеличению активности in vivo (при снижении активности in vitro); увеличению стабильности (Glue P. etal., Clin. Pharmacol. Ther. 2000; 68, стр. 556-67; Reddy K.R. et al, Hepatology, 2001, 33, стр. 433-438). Снижение активности в системе in vitro напрямую зависит от молекулярной массы используемого ПЭГ. Присоединение небольших молекул ПЭГ с молекулярной массой 5 кДа вызывает незначительные изменения активности in vitro (Grace, M. J., et al, J. Biol. Chem. 2005, 280, стр. 6327-6336). Фармакодинамические и фармакокинетические свойства ПЭГилированных белков, содержащих ПЭГ с такой массой, и немодифицированных белков практически не различаются. Присоединение ПЭГ с большей молекулярной массой и множественными участками приводит к значительному снижению биоактивности in vitro, в результате неэффективного связывания с рецептором, однако в этом случае наблюдается улучшение фармакокинетических и фармакодинамических свойств ПЭГилированных белков (Delgado С., et al., Crit.Rev. Ther. Drag Carrier Syst 1992, 9, стр. 249-304), что в результате приводит к увеличению биологической активности in vivo (Bailon P., Berthold W., Pharm., Sci.Technol. Today 1998, 1, стр. 352-356). Форма ПЭГ также оказывает влияние на биоактивность и фармакокинетические свойства - конъюгат с линейным ПЭГ распространяется на больший объем, чем с ПЭГ, имеющим разветвленную структуру (CalicetiP., Veronese F.M, Adv. Drag. Deliv. Rev. 2003; 55(10), стр. 1261-1277). Противовирусная активность и биологические свойства конъюгатов ПЭГ-ИФН в значительной степени зависят также от используемых активированных мПЭГ, функциональные группы которых различаются по способности модифицировать различные аминокислотные остатки белка и по типу образуемых с белком химических связей (Roberts M.J., et al., Adv Drag Deliv Rev. 2002, 54(4), стр. 459-476). При получении ПЭГилированных белков наиболее широкое применение нашли активированные мПЭГи, способные связываться со свободными аминогруппами белков (сукцинимидил-карбонатные, сукцинимидилсукцинатные, трезилатные, триазиновые, гидроксисукцинимидные эфиры, ацетальальдегиды и др.). Из уровня техники известны различные конъюгаты ПЭГ-ИФН. Известен конъюгат ПЭГ-ИФН-2 а с линейным ПЭГ с молекулярной массой 1-5000 Да (Патент U.S.No. 5382657 (1995. Для конъюгации использовали этандиольные производные мПЭГ, реакцию проводили при pH 10 при комнатной температуре в течение 0,5-4 ч. Для проведения реакции ПЭГилирования ИФН использовали 3-кратный избыток ПЭГ. В используемых условиях связывание ПЭГ с ИФН происходило через стерически доступные свободные аминогруппы различных лизинов (Lys-31, Lys133,Lys134, Lys23, Lys131, Lys 121, Lys70, Lys83, Lys49 и Lys112) с образованием карбамидной связи (Monkarsh S.P. et al., Analytical Biochemistry 2007, 247, стр. 434-440). Таким образом, полученный конъюгат ПЭГ-ИФН-2 а состоял из смеси позиционных изомеров, где каждый изомер содержал один ПЭГ. В сравнении с немодифицированным ИФН удельная противовирусная активность изомеров варьировала от 6% (для Lys112) до 40% (для Lys133). Суммарная удельная активность полученного конъюгата, состоящего из 11 изомеров, составляла 34% от немодифицированного ИФН. Активность полученных конъюгатов in vitro также зависела от молекулярной массы ПЭГ и варьировала от 45% (для ПЭГ - 25 кДа) до 25%(в случае ПЭГ- 10 кДа). Недостатками полученного конъюгата являются: 1. Использование этандиол-активированных мПЭГ с низкой молекулярной массой (5 кДа), в результате чего фармакокинетические параметры полученного конъюгата ПЭГ-ИФН и немодифицированного ИФН различались незначительно, в связи с чем данный конъюгат не нашел применения в клинике. 2. Образование большого количества позиционных изомеров с различной удельной активностью, в которых ПЭГ был связан с молекулой ИФН через свободные аминогруппы различных лизинов. Известны конъюгаты ПЭГ-ИФН-2b, полученные при конъюгации нативного ИФН-2b с линейным (патент RU 2311930 (2004 или разветвленным (патент RU 2382048 (2008 производными мПЭГ с молекулярной массой 13-17 кДа. Реакцию проводили при pH 9,5 в течение 60 ч (для линейного мПЭГ) или при pH 7,5 в течение 12 ч (для разветвленного мПЭГ), используя 50-100-кратный молярный избыток активированного ПЭГ. В результате были получены конъюгаты ПЭГ-ИФН, суммарная противовирусная активность которого варьировала от 29 до 38% от активности немодифицированного ИФН. Данных о стабильности связи, количестве позиционных изомеров и их удельной противовирусной активности не приведено. Недостатками полученных конъюгатов являются: 1. Использование трезилпроизводных активированного мПЭГ с временем полужизни в водных растворах - менее 20 мин. Ранее было показано, что при взаимодействии трезилатпроизводных ПЭГ с белками, помимо стабильных амидных связей через аминогруппы, образуются также нестабильные сульфаматные связи (GaisRuppert, 1995, Tetrahedron letters, 22 (36), стр. 3837-3838). 2. Связывание трезил-активированных ПЭГ с белками происходит через все стерически доступные свободные аминогрупп лизина (Roberts et al., 2002, Adv Drug Deliv Rev., 54(4), стр. 459-476), что приводит к образованию нескольких позиционных изомеров. 3. Проведение реакции ПЭГилирования ИФН при высоких значениях pH (рН 10) в течение длительного времени (60 ч) может привести к изменению структуры ИФН. 4. Значительный избыток активированного ПЭГ при проведении реакции ПЭГилирования ИФН(молярное соотношение ПЭГ/белок составляло 50-100/1) приводит к высокой стоимости полученного продукта. Известен конъюгат ПЭГ-ИФН-2b, полученный при связывании нативного ИФН-2b с разветвленным триазиновым производным мПЭГ с молекулярной массой 7,5-35 кДа (патент RU 2298560, 2004),суммарная противовирусная активность которого составляла 6,4% от активности немодифицированного ИФН. Данных о стабильности связи, количестве позиционных изомеров и их удельной противовирусной активности не приведено. Недостатками полученного конъюгата являются: 1. Использование триазин-хлорид производных активированного мПЭГ, которые помимо свободных аминогрупп способны связываться с функциональными группами других аминокислот - серина, тирозина, треонина и гистидина, что приводит к появлению множества изомеров, часть из которых характеризуется нестабильной связью. Более того, триазиновые производные в настоящее время не используются из-за их высокой токсичности (VeronesePasut, Drug Discov. Today, 2005, 1: 10(21), стр. 14511458). 2. Низкая удельная активность конъюгата ПЭГ-ИФН. Известен конъюгат ПЭГ-ИФН-2 а, полученый при конъгации ИФН-2 а с разветвленным ПЭГ с молекулярной массой 40 кДа (патент RU 2180595, 1997). Для конъюгации использовали Nгидроксисукцинимид-эфир производное мПЭГ, избирательно взаимодействующий с доступными свободными аминогруппами белка с образованием стабильной амидной связи. Реакцию проводили при pH 9 при 4C в течение 2 ч при соотношении мПЭГ/белок равном трем. Реакцию останавливали и очистку полученного конъюгата проводили на сорбенте Fractogel EMD СМ 650 (М). Выход очищенного конъюгата составлял 40-45%. В этом случае был получен конъюгат ИФН-ПЭГ, состоящий из 6 позиционных изомеров, каждый из которых был связан с одной молекулой ПЭГ стабильной связью через свободные аминогруппы лизинов - Lys31, Lys121, Lys 131, Lys 134, Lys 70 и Lys 83 (Bailon P., et al., Bioconjug.Chem. 2001; 12, стр. 195-202; Foser S, et al., Protein Expr. Purif. 2003, 30(1), стр. 78-87). Изомеры, связанные с ПЭГ, через лизины в положении 31, 121, 131 и 134, в сумме составляли 94%. Активность суммарного конъюгата, состоящего из 6 позиционных изомеров, составляла 1-7% от нативного ИФН-2 а (Boulestin A., et al., J.Interferon Cytokine Res. 2006, 26, стр. 849-853). Несмотря на низкую противовирусную активность in vitro, данный конъюгат по сравнению с немодифицированным ИФН обладал улучшенными фармакокинетическими свойствами (Silva M., et al., Journal Hepatology 2006, 45, стр. 204-213), и в настоящее время используется в клинике под названием "Пегасис" (производство фирмы "Хоффманн-Ля Рош). Недостатками полученного конъюгата являются: 1. Использование N-гидроксисукцинимид-эфир активированного ПЭГа, связывающегося со всеми стерически доступными аминогруппами, в результате полученный конъюгат представлял смесь из 6 изомеров, различающихся по удельной активности. 2. Низкая противовирусная удельная активность полученного конъюгата in vitro. Прототипом для настоящего изобретения является конъюгат ПЭГ-ИФН-2b, описанный в патентеUS 5951974 (1999). Для реакции ПЭГилирования использовали линейный мПЭГ, активированный сукцинимидил карбонатной группой (SC-mPEG) с молекулярной массой от 5 до 12 кДа. По описанному методу был получен конъюгат ИФН с ПЭГ с молекулярной массой 12 кДа, который настоящее время применяется в клинике для лечения вирусных гепатитов - препарат "Пегинтрон" (фирма "Shering-Plough",США). Установлено, что полученный конъюгат ПЭГ-ИФН-2b (препарат "Пегинтрон") состоит из 13 позиционных изомеров, каждый из которых содержит одну молекулу ПЭГ, присоединенную к различным участкам молекулы белка (Wang, Y.-S. et al., Biochemistry, 2000, 39(35), стр. 10634-10640; Grace M., et al.,J. Interferon Cytokine Res. 2001, 21, стр. 1103-1115; Youngster S., et al., Curr Pharm Des. 2002; 8(24), стр. 2139-2157). Было показано, что молекула ПЭГ была связана с интерфероном не только через свободные аминогруппы лизинов (Lys31 Lys 49, Lys 83, Lys 121, Lys 131, Lys 133, Lys 134 и Lys 164) и N-концевого цистеина (Cys1), но и через имидазольное кольцо гистидина (His7, His34), тирозина (Tyr129) и ОНгруппу серина (Ser163). Содержание отдельных изомеров варьировало от 0,8 (Tyr129) до 47 % (His34). Противовирусная активность суммарного препарата Пегинтрона, состоящего из 13 позиционных изомеров, составляла 28 % от нативного белка. Удельная активность отдельных изомеров варьировала от 11 до 37 % от нативного ИФН-2b (Youngster S., et al., Curr Pharm Des. 2002; 8(24), стр. 2139-2157). Наибольшая удельная активность была у основного изомера, сконъюгированного с ПЭГ через His34, которая составляла 37 % от нативного белка. Свободные аминогруппы ИФН были соединены с ПЭГ через стабильную связь, тогда как в основном изомере, составляющим примерно 47%, ПЭГ был соединен с имидазольным кольцом гистидина (His34) через нестабильную (в водных растворах) карбаматную связь (Roberts M.J., et al. Adv Drag Deliv Rev. 2002, 54(4), стр. 459-476). Фармакокинетические параметры полученного конъюгата были лучше, чем у немодифицированного ИФН (Silva M., et al., Journal Hepatology 2006, 45, стр. 204-213). Недостатками полученного конъюгата являются: 1. Использование сукцинимидил карбонат активированного ПЭГа, связывающегося не только со свободными аминогруппами ИФН, но и с функциональными группами других аминокислот. В результате полученный конъюгат состоял из смеси 13 позиционных изомеров, различающихся по противовирусной удельной активности. 2. Образование нестабильной имидазол-карбонатной (карбаматной) связи в основном (His-34) изо-3 020257 мере конъюгата ПЭГ-ИФН приводит к тому, что при попадании в организм препарат "Пегинтрон" гидролизуется и высвобождается нативный ИФН, который оказывает биологическое действие. Таким образом, препарат "Пегинтрон" лучше всего расценивать как про-лекарство, которое после введения в организм расщепляется с образованием активного интерферона (Youngster S., et al., Curr Pharm Des. 2002; 8(24), стр. 2139-2157). Из-за нестабильности ПЭГ-ИФН в растворе лекарственная форма "Пегинтрона" хранится только в виде лиофильно-высушенного порошка. Задача настоящего изобретения состояла в получении нового стабильного конъюгата ПЭГилированного ИФН, с активностью ИФН альфа, состоящего из одного позиционного изомера, с улучшенной стабильностью, со сниженной иммуногенностью, с улучшенными фармакокинетическими параметрами,с оптимальным сочетанием параметров молекулярной массы ПЭГ и противовирусной активности, пригодного для создания лекарственного препарата медицинского назначения, способствующего расширению арсенала лекарственных средств заданной направленности, фармацевтической композиции на основе полученного ПЭГ-ИФН. Поставленная задача решается созданием новой молекулы функционально активного конъюгата ПЭГ-ИФН с активностью интерферона-льфа, в котором линейная молекула ПЭГ с молекулярной массой 20 до 40 кДа, за исключением ПЭГ с 30 кДа, связана с молекулой ИФН- стабильной связью строго через альфа аминогруппу N-концевого цистеина так, что общая формула конъюгата ПЭГ-ИФН с линейным мПЭГ представляет собой следующее соединение (I): где n - количество мономерных звеньев в ПЭГ с молекулярной массой от 20 кДа до 40 кДа, за исключением ПЭГ с молекулярной массой 30 кДа;IFN - природный или рекомбинантный полипептид, обладающий активностью ИФН-альфа. В полученном конъюгате линейный ПЭГ с молекулярной массой 20 - 40 кДа, за исключением ПЭГ молекулярной массы 30 кДа, связан с альфа аминогруппой N-концевой аминокислоты ИФН. Избирательность модификации ИФН строго по альфа-аминогруппе N-концевой аминокислоты достигается за счет использования альдегид-активированных мПЭГ общей формулы (II) и проведения реакции ПЭГилирования при pH 6: где n - количество мономерных звеньев в ПЭГ с молекулярной массой от 20 до 40 кДа, за исключением ПЭГ с молекулярной массой 30 кДа;m - целое число 4; Оптимальное соотношение параметров молекулярной массы ПЭГ и противовирусной активности достигается за счет использования активированного мПЭГ (II) со значением m 4. Снижение иммуногенности, токсичности и улучшение фармакокинетических параметров достигается за счет увеличения молекулярной массы присоединенного ПЭГ. Новым по сравнению с прототипом является: 1. Для получения конъюгата ПЭГ-ИФН использованы альдегидные производные активированных мПЭГ. 2. Структурная формула конъюгата ПЭГ-ИФН. 3. Полученный конъюгат ПЭГ-ИФН представлен одним позиционным изомером. 4. Стабильная связь между молекулой ПЭГ и молекулой ИФН. 5. Увеличение молекулярной массы конъюгата ПЭГ-ИФН за счет размера присоединенного ПЭГ. 6. Улучшенные фармакокинетические параметры. Для получения заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН был использован рекомбинантный ИФН-2b человека (производство ЗАО "Биокад") и бутир- или пентальалдегидные производные мПЭГ формулы (II) с молекулярной массой 20 кДа. Реакцию конъюгирования проводили при pH ниже 6.0 в присутствии восстанавливающего агента при температуре, равной или ниже 20C. Молярное соотношение ПЭГ/белок составляло 2,5-5/1. Контроль образования конъюгата ПЭГ-ИФН проводили при помощи электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС) в восстанавливающих условиях и обратнофазной высокоэффективной хроматографии (ОФ ВЭЖХ). Очистку моноПЭГ-ИФН от продуктов реакции, немодифицированного ИФН и от нежелательных форм ПЭГ-ИФН, содержащих две и более молекулы ПЭГ на молекулу белка, проводили при помощи хроматографии на катионообменных сорбентах. Элюцию моноПЭГ-ИФН проводили градиентом концентрации хлористого натрия от 0,05 до 0,2 М в бу-4 020257 ферном растворе с pH ниже 6. Очищенный препарат моноПЭГ-ИФН диализовали против 10-50 мМ буферного раствора с pH 4-5, добавляли соли, или полисахариды, или многоатомные спирты, или поливинилпирролидоны, или моносахариды, или аминосахара, или белки, или аминокислоты и неионные детергенты и хранили в пластиковых или стеклянных флаконах с силиконизированной поверхностью при температуре 42C. Для характеристики полученного конъюгата моноПЭГ-ИФН-2b исследовали его чистоту, гомогенность, физико-химические, биологические и фармакокинетические параметры в сравнении с немодифицированным ИФН. Предлагаемое изобретение иллюстрируется фигурами графического изображения, где представлены: фиг. 1 - кинетика образования конъюгата ИФН-2b при проведении реакции с использованием бутиральдегидного производного мПЭГ; фиг. 2 - обратно-фазная ВЭЖХ конъюгата ПЭГ-ИФН-2b на колонке "Symmetry С 18" (4,6150 мм). фиг. 3 - электрофоретический анализ конъюгата ПЭГ-ИФН-2b в сравнении с модифицированным ИФН-2b; фиг. 4 - MALDI масс-спектры немодифицированного ИФН-2b и конъюгата ПЭГ-ИФН-2b; фиг. 5 - локализация сайта ПЭГилирования в конъюгате ПЭГ-ИФН-2b. Сравнение масс-спектров триптических пептидов немодифицированного ИФН-2b (А) и конъюгата ПЭГ-рчИФН-2 (В) в диапазоне m/z 1200-1400; фиг. 6 - термостабильность конъюгата ПЭГ-ИФН-2; фиг. 7 - протеолитическая стабильность конъюгата ПЭГ-ИФН-2b при обработке трипсином; фиг. 8 - иммуногенность конъюгата ПЭГ-ИФН-2b в сравнении с немодифицированньм ИФН-2b; фиг. 9 - фармакокинетика конъюгата ПЭГ-ИФН-2b в сравнении с немодифицированным ИФН 2b. Примеры конкретного выполнения способа получения ПЭГ-ИФН-2b и исследования его свойств приведены ниже. Конъюгаты ПЭГ-ИФН-2 формулы (I), являющиеся объектом настоящего изобретения, могут быть использованы для получения лекарственных средств для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, поскольку помимо высокой стабильности и сниженной иммуногенности, обладают высоким значением противовирусной активности. Также фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента эффективное количество конъюгата формулы (I) и получаемые известными методами, применяемыми в фармацевтике, могут использоваться как отдельно, так и совместно с другими терапевтическими средствами (например, рибавирин) для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний (хронический активный гепатит (в частности, гепатиты В и С (Jay H. et al., The New England J.of medicine 2006, 356, стр. 1269-1271; McHutchison J. et al., The New England J. of medicine 2009, 361, стр. 580-593, 2009). Объектом настоящего изобретения также является способ профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, например гепатита С и гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества заявляемого конъюгата формулы (I). Из уровня техники известно также использование ИФН- и ПЭГилированных интерферонов-а в качестве иммуномодуляторов для лечения онкологических заболеваний, в частности волосатоклеточного лейкоза, папилломатоза гортани, меланомы, почечной карциномы, миелолейкозов, саркомы Капоши (Decatris M., et al, BioDrugs 2002;16(4), стр. 261-281; Bukowski R., et al., Clin. Oncol. 2002; 20(18), стр. 38413849; Quintas-Cardama A. et al, Semin Thromb Hemost. 2006; 32(4 Pt 2), стр.:409-16; Loquai et al., Eur JDermatol. 2008 Jan-Feb;18(1), стр. 29-35; Kaehler et al, Eur J Cancer. 2010 Jan;46 (1), стр. 41-46). На основании известного из уровня техники этиопатогенеза данных заболеваний и применения ИФН-, а также из конъюгатов для их профилактики и/или лечения, объектами настоящего изобретения являются также лекарственные средства и фармацевтические композиции, содержащие заявляемый конъюгат ПЭГ-ИФН в эффективном количестве, обладающие антипролиферативным и иммуномодулирующим действием,которые могут применяться для профилактики и/или лечения онкологических заболеваний и заболеваний, сопровождающихся первичными или вторичными иммунодефицитными состояниями, а также объектом настоящего изобретения является способ профилактики и/или лечения онкологических заболеваний и заболеваний, сопровождающихся первичными или вторичными иммунодефицитными состояниями, включающий введение терапевтически эффективного количества конъюгата ПЭГ-ИФН- формулы(I). Конъюгат формулы (I) с необязательным фармакологически приемлемым наполнителем, разбавителем и/или фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами вводят внутривенно, подкожно, внутримышечно или каким-либо другим подходящим способом, например, в виде капсул, сиропа,спрея, капель, инъекции или суппозитория. Путь введения варьируют в зависимости, например, от симптомов и возраста, частота введения и интервал между введениями варьируют в зависимости от заболевания и его тяжести или от цели (терапевтическое или профилактическое использование), эффективное количество активного начала ПЭГ-ИФН- выбирается с учетом вышеизложенных факторов. В качестве фармацевтически приемлемых вспомогательных компонентов, которые могут входить в фармацевтическую композицию с ПЭГ-ИФН-2, могут быть использованы: буферные соли (например,ацетатный, цитратный, водород-карбонатный, фосфатный буферы), стабилизаторы (например, полисорбаты, ЭДТА, поливинилпирролидоны, декстраны, ЧСА, эфиры параоксибензойной кислоты, спирты (например, бензиловый спирт), фенолы, сорбиновая кислота), обеззараживающий компонент (например,бензиловый спирт), регулятор осмотического давления (например, хлорид натрия, хлорид калия, полиолы, например, глицерин, арабитол, сорбитол, маннитол, лактоза, декстран), сурфактанты (например,ЧСА, поливинилпирролидон, лецитин, Твин 80, полиоксиэтилен-полиоксипропилен сополимер, казеин),поверхностно-активные вещества (например, блок-сополимеры этиленоксида и пропиленоксида, пропиленоксида и этиленоксида, сорбитанмонолаурат, сложный эфир сорбита, сложный эфир жирной кислоты полиглицирина, кокамид ДЭА лаурилсульфат, алканоламид, стеарит полиоксиэтилен пропилен гликоля,лауриновый эфир полиоксиэтилена, цетиловый эфир полиоксиэтилена, полисорбат, моностеарат глицерина, дистеарат глицерина, монопальмитат сорбита, сорбитанмоноолеат полиоксиэтилена, сорбитанмонолаурат полиоксиэтилена и моностеарат пропиленгликоля), антиоксиданты (например, Трилон Б, Lцистеин, сульфит натрия, аскорбат натрия, глутатион, 2-меркаптоэтанол, дитиотриитол, цистеингидрохлорид моногидрат, аскорбиновая кислота) и разбавители (например, вода). Пример 1. Получение конъюгата ПЭГ-ИФН-2b с использованием бутиральдегидного производного мПЭГ. К 785 мл буферного раствора (100 мМ натрий-ацетата, 150 мМ натрия хлористого, pH 5,0), содержащего рекомбинантный ИФН-2 в концентрациии 1,7 мг/мл, добавляли 16 мл 1 М раствора цианборгидрида натрия, перемешивали и добавляли 5 г сухого бутиральдегидного производного ПЭГ с молекулярной массой 20000 Да. Смесь тщательно перемешивали и инкубировали в течение 22 ч при температуре 173C. Через различные промежутки времени из реакционной смеси отбирали аликвоты по 50 мкл и анализировали кинетику образования конъюгата ПЭГ-ИФН-2 при помощи метода электрофореза в ПААГ в присутствии ДДС. Для этого к отобранной пробе добавляли 1/3 объема буфера, содержащего 125 мМ Трис-HCl, pH 6,8, 20% глицерин, 3% ДДС, 0,005% бромфеноловый синий, и нагревали 3 мин на кипящей водяной бане. Пробы в объеме 5 мкл вносили в лунки подготовленных пластин ПААГ и проводили электрофорез в 12,5% ПААГ в присутствии ДДС. По окончании электрофореза гель окрашивали при помощи Кумасси R-250. Кинетика образования конъюгата ПЭГ-ИФН-2 представлена на фиг. 1. В момент времени, когда содержание ПЭГ-ИФН составляло более 70%, реакционную смесь разводили в 10 раз 5 мМ натрий ацетатным буфером, pH 5,0. Пример 2. Получение конъюгата ПЭГ-ИФН-2b с использованием пентальальдегидного производного мПЭГ. К 100 мл буферного раствора (100 мМ натрий-ацетата, 150 мМ натрия хлористого, pH 5,5), со лежащего рекомбинантный ИФН-2b в концентрациии 2,2 мг/мл, добавляли 2,05 мл 1 М раствора цианборгидрида натрия, перемешивали и добавляли 0,9 г сухого пентальдегидного производного ПЭГ с молекулярной массой 20 кДа. Смесь тщательно перемешивали и инкубировали в течение 24 ч при температуре 62C. Через различные промежутки времени из реакционной смеси отбирали аликвоты по 50 мкл и анализировали кинетику образования конъюгата ПЭГ-ИФН при помощи метода электрофореза в ПААГ, как описано в примере 1. В момент времени, когда содержание ПЭГ-ИФН составляло более 70%, реакционную смесь разводили в 10 раз 5 мМ натрий ацетатным буфером, pH 5,0. Пример 3. Очистка конъюгата моноПЭГ-ИФН-2b при помощи ионообменной хроматографии на катионообменном сорбенте. Разбавленный раствор, полученный в примере 1, наносили на колонку с катиоонообменным сорбентом (СМ-сефароза, 300 мл), уравновешенным 5 мМ натрий ацетатным буфером, pH 5.0, (буфер А) со скоростью 5 мл/мин. Колонку с сорбентом промывали последовательно буфером А и буфером А, содержащим градиент концентрации NaCl от 0,05 до 0,2 М. Из каждой фракции отбирали аликвоты для анализа проб методом электрофореза в ПААГ как описано в примере 1. Фракции, содержащие моноПЭГилированный конъюгат ПЭГ-ИФН-2, объединяли, диализовали против 10 объемов 20 мМ натрий ацетатного буфера, содержащего 150 мМ натрия хлористого, проводили стерильную фильтрацию и хранили при температуре 42C. Пример 4. Очистка конъюгата моноПЭГ-ИФН-2b при помощи ионообменной хроматографии на катионообменном сорбенте. Разбавленный раствор, полученный в примере 2, наносили на колонку с катиоонообменным сорбентом (SP-сефароза, 50 мл), уравновешенным 5 мМ натрий ацетатным буфером, pH 5.0, (буфер А) со скоростью 5 мл/мин. Колонку с сорбентом промывали последовательно буфером "А" и буфером А, содержащим градиент концентрации NaCl от 0,03 до 0,3 М. Из каждой фракции отбирали аликвоты для анализа проб методом электрофореза в ПААГ, как описано в примере 1. Фракции, содержащие моноПЭГилированный конъюгат ПЭГ-ИФН-2, объединяли, диализовали против 10 объемов 20 мМ натрий ацетатного буфера, содержащего 150 мМ натрия хлористого, проводили стерильную фильтрацию и хранили при температуре 42C. Пример 5. Анализ конъюгата ПЭГ-ИФН-2b при помощи метода обратно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Конъюгат ПЭГ-ИФН-2, полученный по п.3, разводили 20 мМ натрий-ацетатным буфером с pH 5.0 до концентрации 0,1 мг/мл, и 100 мкл полученной пробы вносили на колонку Symmetry C18 (4.6150 мм). Исследование проводили на хроматографе "Breeze" фирмы "Waters" при 214 нм. Из результатов,представленных на фиг. 2, следует, что по данньм ОФ ВЭЖХ чистота заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН 2 составляет более 99%. Пример 6. Определение уровня эндотоксинов. Содержание бактериальных эндотоксинов (БЭ) в пробах конъюгата ПЭГ-ИФН-2, приготовленных по пп.3 и 4, определяли in vitro с помощью ЛАЛ-теста (модификация гель-тромб тест) в соответствии с требованиями ОФС 42-0002-00. В работе использовали диагностический многокомпонентный набор фирмы "Associates of CAPE COD, Inc. ЛАЛ-реактив PYROTELL с чувствительностью 0,03 ЕЭ/мл, контрольный стандарт эндотоксина (КСЭ, 0,5 мкг во флаконе), воду для ЛАЛ-теста. Из результатов, представленных в табл. 1, видно, что содержание БЭ в пробах конъюгата составляет менее 1,5 единиц эндотоксина (еЭ) на мг белка, что гораздо ниже уровня БЭ, допустимого для медицинских препаратов на основе рекомбинантных белков. Таблица 1. Содержание бактериальных эндотоксинов в конъюгате ПЭГ-ИФН-2 Пример 7. Электрофоретический анализ конъюгата ПЭГ-ИФН-2b в сравнении с немодифицированным ИФН-2b. Пробу конъюгата ПЭГ-ИФН, полученную по примеру 3, анализировали методом электрофореза в ПААГ, как описано в п.1. Электрофорез проводили с нагрузкой на лунку 40 мкг белка в нередуцирующих условиях. Окраску белков в геле проводили красителем. Кумасси R-250. Одновременно проводили электрофорез немодифицированного ИФН-2. Конъюгат ПЭГ-ИФН был представлен одной полосой (фиг. 3, трек 1). Из электрофореграмм конъюгата ПЭГ-ИФН 2 и немодифицированного ИФН-2, представленных на фиг. 3, видно, что конъюгат ПЭГ-ИФН- имеет более высокую молекулярную массу, чем рчИФН- (фиг. 3, треки 1 и 2). Следует отметить, что методом ЭФ точное значение молекулярной массы для ПЭГилированных белков определить нельзя, так как присоединение гидрофильной молекулы ПЭГ к белку значительно увеличивает радиус Стокса образовавшегося комплекса. В результате продвижение комплекса ПЭГ-белок в геле замедляется, и значение его молекулярной массы оказывается значительно выше, чем сумма молекулярных масс белка и ПЭГ. Пример 8. Определение молекулярной массы конъюгата ПЭГ-ИФН-2 в сравнении с немодифицированным ИФН-2 методом масс-спектрометрии. 1 мкл пробы конъюгата ПЭГ-ИФН, полученной по п.3, и 0,3 мкл раствора 2,5-дигидроксибензойной кислоты (Aldrich, 10 мгмл-1 в 20 % ацетонитриле в воде с 0,5% ТФУ) смешивали и высушивали на воздухе. Аналогичным способом готовили пробу немодифированного ИФН-2. Масс-спектры были получены на MALDI-времяпролетном масс-спектрометре Ultraflex II BRUKER(Германия), оснащенном УФ лазером (Nd). Масс-спектры получены в режиме положительных ионов, в линейном режиме, погрешность измерения средней массы не превышает 10-15 Да. Результаты по масс-спектрометрическому анализу немодифицированного рчИФН-2 и конъюгата ПЭГ-ИФН-2 в диапазоне m/z от 10000-50000 приведены на фиг. 4. Из фиг. 4 А видно, что масс-спектр рчИФН-2 содержит основной пик, соответствующий однозарядному иону[М]+ с молекулярной массой 19,295 кДа. В масс-спектре конъюгата ПЭГ-ИФН-2, приведенном на фиг. 3 В, представлен размытый основной пик, соответствующий однозарядному иону [М]+ с молекулярной массой 40,498 кДа. Размытость пика связана с гетерогенностью препаратов монометоксиПЭГ. Для конъюгата ПЭГ-ИФН измеренное значение m/z в максимуме пика (40,498 кДа) совпадает с расчетными данными по сумме молекулярных масс ИФН-2 (19,295 кДа) и присоединенного ПЭГ (20 кДа). Пример 9. Локализация сайта ПЭГилирования в конъюгате ПЭГ-ИФН-2b. К 5 мкл пробы конъюгата ПЭГ-ИФН, полученной по примеру 3, добавляли 5 мкл раствора модифицированного трипсина (Promega) в 0,05 М NH4HCO3 с концентрацией 15 мкгмл-1. Гидролиз проводили в течение 16 ч при 37C, затем к раствору добавляли 10 мкл 0,5% ТФУ в 10% растворе ацетонитрила в воде и тщательно перемешивали. Аналогичным способом готовили пробу немодифированного ИФН. Полученные растворы использовали для получения MALDI-масс-спектров. Локализацию сайта связывания ПЭГ с молекулой ИФН определяли путем сравнения масс-спектров триптического гидролизата конъюгата ПЭГ-ИФН-2 и немодифицированного рчИФН-2. В триптическом гидролизате конъюгата ПЭГ-ИФН-2 должен отсутствовать пептид, соответствующий участку белка, по которому произошла модификация. В табл. 2 представлены масс-спектры экспериментальных триптических пептидов для немодифицированного ИФН- и конъюгата ПЭГ-ИФН-2. Из таблицы видно, что масс-спектры триптических пептидов немодифицированного ИФН-2b практически совпадают с масс-спектрами триптических пептидов конъюгата ПЭГ-ИФН-2 (табл. 2), но в триптическом переваре конъюгата ПЭГ-ИФН-2 отсутствует пептид с молекулярной массой 1313.649, присутствующий в триптическом переваре немодифицированного рчИФН-2 (см. также фиг. 5). Согласно анализу теоретических масс триптического гидролизата ИФН-2, пик с m/z 1313,649 соответствует N-концевому пептиду белка (табл. 2). Его отсутствие в триптическом переваре конъюгата ПЭГ-ИФН-2 свидетельствует о модификации N-концевого пептида, который, став тяжелее на массу ПЭГ, находится за пределами исследуемой области спектра. Связывание ПЭГ с молекулой ИФН произошло по единственной свободной аминогруппе, присутствующей в этом пептиде - по аминогруппе N-концевого цистеина. Таблица 2. Экспериментальные масс-спектры триптических пептидов конъюгата ПЭГ-ИФН-2 и немодифицированного ИФН-2 в сравнении с теоретическими значениями Пример 10. Определение специфической противовирусной активности конъюгата ПЭГ-ИФН-2b. В пробах, полученных по примеру 3 и по примеру 4, исследовали противовирусную специфическую активность согласно протоколу, описанному в Европейской фармакопее с использованием культуры перевиваемых клеток MBDK, чувствительных к интерферону альфа-типа и вируса везикулярного стоматита (VSV). В табл. 3 представлены результаты исследования противовирусной активности. В качестве стандарта был использован международный референс-стандарт. Из табл. 3 видно, что, несмотря на присоединение молекулы ПЭГ с молекулярной массой 20 кДа, противовирусная активность полученных конъюгатов составляет 42-45% от активности немодифицированного ИФН-2. Следует отметить,что конъюгат ПЭГ-ИФН, описанный в способе прототипе, содержащий ПЭГ с молекулярной массой 12 кДа, обладал более низкой активностью (28-30%). Таблица 3. Удельная противовирусная активность конъюгата ПЭГ-ИФН-2 в сравнении с немодифицированным ИФН-2 Пример 11. Исследование термостабильности конъюгата ПЭГ-ИФН-2b. 5 мл пробы конъюгата ПЭГ-ИФН, полученного по примеру 3, помещали в водяную баню при температуре (502)C и через различные интервалы времени исследовали появление мутности в растворе белка, измеряя оптическую плотность при 340 нм. Аналогично проводили исследование термостабильности немодифицированного ИФН-2. Образование нерастворимых агрегатов белка приводило к появлению мутности и к увеличению оптической плотности при 340 нм. На фиг. 6 представлены результаты исследования. За период наблюдения (28 ч) конъюгат ПЭГ-ИФН-2 оставался стабильным, тогда как немодифицированный ИФН-2b через 28 ч практически весь выпал в осадок. Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод о значительном увеличении термостабильности конъюгата ПЭГ-ИФН-2 по сравнению с немодифицированным белком. Пример 12. Исследование протеолитической стабильности конъюгата ПЭГ-ИФН-2b при обработке трипсином. К 1 мл конъюгата ПЭГ-ИФН, полученному по примеру 3, прибавляли 150 мкл 1 М трис-HCl буфера,pH 8,5, 2 мкл 0,5 М раствора CaCl2 и 15 мкл трипсина (Promega) с концентрацией 20 мкг/мл. Пробы инкубировали при 37C. Через определенные промежутки времени отбирали аликвоты в 100 мкл и прибавляли 150 мкл 0,5% раствора трифторуксусной кислоты для остановки реакции. Аналогично готовили пробы, содержащие немодифицированный ИФН-2. Далее пробы анализировали при помощи обратнофазовой ВЭЖХ и определяли площадь основного пика. Результаты исследования, приведенные на фиг. 7, показывают, что при обработке трипсином протеолитическая стабильность конъюгата ПЭГ-ИФН-2 выше, чем у немодифицированного ИФН-2b. Пример 13. Определение стабильности конъюгата ПЭГ-ИФН-2b при хранении. Из пробы, полученной по примеру 3, отбирали аликвоты в стерильные пробирки с крышками типа"Эппендорф". Концентрация белка в конъюгате ПЭГ-ИФН-2 составляла 1 мг/мл. Пробы помещали в холодильник при температуре (62)C. Через определенные промежутки времени отбирали пробы и анализировали специфическую противовирусную активность и гомогенность препарата при помощи ОФ ВЭЖХ и электрофореза (ЭФ) в ПААГ в присутствии ДДС в не редуцирующих условиях, как описано в примере 1. Из данных табл. 4 видно, что при хранении при температуре (62)C конъюгат ПЭГ-ИФН-2 стабилен в течение по крайней мере 24 месяцев. Таблица 4. Стабильность конъюгата ПЭГ-ИФН-2b при температуре (62)C Пример 14. Исследование иммуногенности конъюгата ПЭГ-ИФН-2b. Конъюгаты ПЭГ-ИФН, полученные по примеру 3 и по примеру 4, разводили до концентрации 5 млн МЕ/мл и вводили по 200 мкл (1 млн МЕ/мышь) внутримышечно мышам ICR с массой тела 20-22 г 1 раз в неделю, в течение 5 недель (5 групп по 5 мышей в группе). Параллельно готовили пробу немодифицированного ИФН и вводили аналогичным образом мышам также в дозе 1 млн ME. В конце пятой недели у животных отбирали кровь при помощи ретроорбитальной пункции. Сыворотку крови получали стандартным методом. Титр антител в сыворотках, полученных в результате иммунизации мышей немодифицированным ИФН и конъюгатами ПЭГ-ИФН, определяли при помощи прямого твердофазного иммуноферментного метода (ИФА). Для этого в лунки микропланшет вносили по 100 мкл раствора немодифицированного ИФН-2 в концентрации 200 нг/100 мкл. Антисыворотки, полученные от разных групп животных, вносили в лунки планшета в серии из последовательных разведений в два раза. Для детекции образовавшегося иммунного комплекса использовали антимышиные иммуноглобулины,сконъюгированные с пероксидазой. Титр антисыворотки после введения немодифицированного ИФН составлял 1/1024. Титр антисывороток после введения конъюгатов ПЭГ-ИФН составлял 1/128. Результаты исследования представлены на фиг. 8. Таким образом, из полученных результатов следует, что иммуногенность полученных конъюгатов ПЭГ-ИФН-2 в 8 раз ниже, чем у немодифицированного ИФН. Пример 15. Исследование фармакокинетики конъюгата ПЭГ-ИФН-2b. Пробу конъюгата ПЭГ-ИФН, полученного по примеру 3, в дозе 1 млн ME вводили внутрибрюшинно мышам-самцам. Параллельно другой группе мышей вводили немодифицированный ИФН-2. Через определенные промежутки времени у животных отбирали кровь при помощи ретроорбитальной пункции. Сыворотку крови получали стандартным методом. Наличие интерферона в сыворотке определяли по противовирусной активности. Результаты фармакокинетики представлены на фиг. 9. Из результатов следует, что заявляемый конъюгат ПЭГ-ИФН-2 обладает значительным пролонгированным эффектом. При введении нативного ИФН-2 его содержание в крови животных достигало максимума через 1 ч после введения и затем очень быстро снижалось. При введении конъюгата ПЭГ-ИФН, максимальное содержание ИФН в крови животных наблюдалось через 12 ч (фиг. 9), и этот уровень сохранялся в течение 50 ч, и только затем происходило медленное снижение содержания ИФН-2 в течение 350 ч. Площадь под кривой для заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН более чем в 50 раз превышала соответствующее значение для немодифицированного ИФН. Нужно отметить, что для описанного в способе прототипе конъюгата ПЭГ-ИФН-2b, связанного с ПЭГ с молекулярной массой 12 кДа, величина площади под кривой превышала величину площади под кривой для ИФН всего в 3-10 раз. Исходя из полученных результатов (фиг. 9), были рассчитаны основные фармакокинетические параметры для заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН-2. Результаты показали, что всасывание из места введения, объем распределения, клиренс конъюгата ПЭГ-ИФН значительно замедлены по сравнению с немодифицированным ИФН, что и обеспечило длительную циркуляцию заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН в крови (более 14 дней). Пример 16. Сравнительная характеристика заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН-2b в сравнении с конъюгатом ПЭГ-ИФН-2b, описанном в способе прототипе. Проведено сравнение структуры, основных физико-химических и фармакокинетических параметров заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН-2b в сравнении с конъюгатом ПЭГ-ИФН-2b, описанном в способе прототипе (табл.5). Данные, представленные в табл. 5, свидетельствуют о значительном улучшении свойств заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН в сравнении с конъюгатом из способа-прототипа. Таблица 5. Основные физико-химические и фармакокинетические параметры заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН-2 в сравнении с конъюгатом ПЭГ-ИФН-2, описанном в способе прототипе (US 5951974).- Структурная формула конъгата ПЭГ-ИФН, полученного по способу-прототипу дана по ссылке"WHO Drug Information", 2001, v. 15, N. 3-4, p.206. Пример 17. Примеры фармацевтических композиций на основе заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН-2b. Пример 18. Упаковка в контейнер лекарственного средства, содержащего ПЭГ-ИФН-2b. Лекарственное средство, включающее эффективное количество заявляемого ПЭГ-ИФН-2b (пример 17), разливают в стерильных условиях по 0,5, 0,8, 1,0 и 1,2 мл (для дозировки 100 мкг/мл), по 0,5, 0,6,0,75 и 0,9 мл (для дозировки 200 мкг/мл), по 0,5, 0,6, 0,8, 1,0 и 1,2 мл (для дозировки 300 мкг/мл) в шприцы из нейтрального стекла I гидролитического класса, с впаянными иглами, покрытыми колпачками защитными эластичными или жесткими, укупоренные наконечниками на поршни из бутилкаучука, ламинированного фторполимером. Пример 19. Упаковка в контейнер лекарственного средства, содержащего ПЭГ-ИФН-2b. Лекарственное средство, включающее эффективное количество ПЭГ-интерферона альфа-2b (пример 17), разливают в стерильных условиях по 0,5, 0,8, 1,0 и 1,2 мл (для дозировки 100 мкг/мл), по 0,5, 0,6,0,75 и 0,9 мл (для дозировки 200 мкг/мл), по 0,5, 0,6, 0,8, 1,0 и 1,2 мл (для дозировки 300 мкг/мл) во флаконы из нейтрального стекла I гидролитического класса, укупоренные фторрезиновыми или бутилрезиновыми пробками с тефлоновым покрытием, обжатых алюминиевыми колпачками. Пример 20. Набор, включающий упакованное в контейнеры лекарственное средство, содержащее ПЭГ-ИФН-2b. Набор содержит по 1 или 4 шприца в комплекте с поршнем (1 или 4 соответственно) /флакона в контурной ячейковой упаковке из пленки полимерной вместе с инструкцией по применению, которые помещают в пачку из картона. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Стабильный коньюгат ПЭГилированного интерферона-, представляющий собой один позиционный изомер с монометоксиполиэтиленгликолем, присоединенным к N-концевому цистеину, формулы где n - количество мономерных звеньев в ПЭГ с молекулярной массой от 20 до 40 кДа за исключением ПЭГ с молекулярной массой 30 кДа;NH-IFN - интерферон-. 2. Коньюгат по п.1, в котором m представляет собой целое число, равное 4. 3. Коньюгат по п.1, в котором интерферон- представляет собой природный или рекомбинантный интерферон 2b. 4. Коньюгат по п.1, в котором средняя молекулярная масса полиэтиленгликоля составляет 20 или 40 кДа. 5. Фармацевтическая композиция, обладающая противовирусной, антипролиферативной и иммуномодулирующей активностью, содержащая коньюгат общей формулы (I) по любому из пп.1-4 в эффективном количестве и фармацевтически приемлемые вспомогательные компоненты. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства для лечения вирусных и онкологических заболеваний и заболеваний, сопровождающихся первичными или вторичными иммунодефицитными состояниями. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, где вирусное заболевание представляет собой гепатит С или гепатит В. 8. Фармацевтическая композиция по п.6, где онкологическое заболевание представляет собой миелолейкоз. 9. Фармацевтическая композиция по п.6, где онкологическое заболевание представляет собой меланому. 10. Лекарственное средство, включающее коньюгат формулы (I) по любому из пп.1-4, обладающее противовирусной, антипролиферативной и иммуномодулирующей активностью. 11. Лекарственное средство по п.10, включающее буфер, изотонирующий агент, стабилизатор и во- 11020257 ду. 12. Лекарственное средство по п.11, включающее натрия ацетата тригидрат, уксусную кислоту, натрия хлорид, полисорбат 80, ЭДТА, воду для инъекций. 13. Применение коньюгата формулы (I) по любому из пп.1-4 для получения лекарственного средства, обладающего противовирусной, антипролиферативной и иммуномодулирующей активностью. 14. Применение по п.13 для получения лекарственного средства, обладающего противовирусной активностью в отношении гепатита С или гепатита В. 15. Способ профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, включающий введение терапевтически эффективного количества коньюгата формулы (I) по любому из пп.1-4. 16. Способ по п.15, где вирусное заболевание представляет собой гепатит С или гепатит В. 17. Способ по п.15, включающий дополнительное введение терапевтически эффективного количества рибавирина. 18. Способ профилактики и/или лечения заболеваний, сопровождающихся первичными или вторичными иммунодефицитными состояниями, включающий введение терапевтически эффективного количества коньюгата формулы (I) по любому из пп.1-4. 19. Способ профилактики и/или лечения онкологических заболеваний, включающий введение терапевтически эффективного количества коньюгата формулы (I) по любому из пп.1-4. 20. Способ по п.19, где онкологическое заболевание представляет собой миелолейкоз. 21. Способ по п.19, где онкологическое заболевание представляет собой меланому. 22. Контейнер, герметично запаянный в стерильных условиях, включающий фармацевтическую композицию по п.5. 23. Контейнер по п.22, представляющий собой предварительно заполненный шприц, флакон или автоинжектор. 24. Набор, включающий контейнер по п.23 и инструкцию по применению.