Лечение застойной сердечной недостаточности предварительно обработанной аутологичной кровью

1 Предпосылки изобретения 1. Область назначения изобретения. Данное изобретение относится к способам лечения застойной сердечной недостаточности,в частности, введением субъекту-человеку аликвоты модифицированной крови, необязательно в комбинации с одним или несколькими другими способами терапии для ослабления симптомов застойной сердечной недостаточности. 2. Описание предыдущего уровня техники. Застойная сердечная недостаточность(CHF) является относительно обычным нарушением, поражающим приблизительно пять миллионов американцев, с коэффициентом смертности более 80000 в год. Считается, что CHF является сама по себе не особым процессом заболевания, а скорее представляет собой результат многочисленных анатомических, функциональных и биологических отклонений от нормы,в результате совместного воздействия которых образуется в конечном счете прогрессирующая потеря способности сердца осуществлять свою функцию в качестве насоса для кровообращения.CHF может быть обусловлена появлением индикаторного события, такого как инфаркт миокарда (сердечный приступ), или может быть вторичной относительно других причин, таких как гипертензия или пороки сердца, такие как клапанное (вальвулярное) заболевание. Индикаторное событие или другие причины приводят к начальному снижению насосной способности сердца, например, из-за повреждения сердечной мышцы. Это снижение насосной способности может быть сразу не заметным вследствие активации одного или нескольких компенсаторных механизмов. Однако было обнаружено, что прогрессирование CHF является независимым от гемодинамического статуса пациента. Таким образом, повреждающие изменения, вызываемые этим заболеванием, присутствуют и развиваются, даже хотя пациент остается бессимптомным. В самом деле, компенсаторные механизмы, которые поддерживают нормальную сердечно-сосудистую функцию во время ранних фаз CHF, могут фактически способствовать прогрессированию этого заболевания, например, проявлением пагубных эффектов на сердце и в кровообращении. Некоторыми более важными патофизиологическими изменениями, которые встречаются вCHF, являются активация системы гипоталамусгипофиз-надпочечники, системной эндотелиальной дисфункции и ремоделирования миокарда. Способы терапии, направленные на противодействие активации системы гипоталамусгипофиз-надпочечники, включают в себя адренергические блокирующие агенты (блокаторы),ингибиторы ангиотензинконвертирующего фермента (АСЕ), некоторые 2 блокаторы кальциевых каналов, нитраты и эндотелин-1-блокирующие агенты. Хотя блокаторы кальциевых каналов и нитраты дают клиническое улучшение, не было ясно показано, что они продлевают выживание, в то время как было показано, что -блокаторы и АСЕингибиторы значимо продлевают жизнь, как и антагонисты альдостерона. Экспериментальные исследования с использованием эндотелин-1 блокирующих агентов показали благоприятное действие. Системная эндотелиальная дисфункция является хорошо распознаваемым признакомCHF и явным образом присутствует в тот момент, когда имеются симптомы дисфункции левого желудочка (сердца). Эндотелиальная дисфункция является важной в связи с тесной взаимосвязью микроциркуляции миокарда с сердечными миоцитами. Имеющиеся данные предполагают, что капиллярная дисфункция значимо способствует дисфункции мышечных клеток (миоцитов) сердца и морфологическим изменениям, которые приводят к прогрессирующей миокардиальной недостаточности. В смысле лежащем в основе патофизиологии, имеющиеся данные предполагают, что эндотелиальная дисфункция может быть вызвана относительным недостатком NO, который может быть связан с увеличением васкулярного образования O2- НАДН-зависимой оксидазой и последующим избыточным акцептированиемNО. Потенциальные факторы, способствующие повышенному продуцированию O2-, включают в себя увеличенный симпатический тон, норэпинефрин, ангиотензин II, эндотелин-1 и TNF-. Кроме того, уровни IL-10, ключевого противовоспалительного цитокина, являются неприемлемо низкими относительно уровней TNF-. В настоящее время считают, что повышенные уровни TNF- вместе с ассоциированными провоспалительными цитокинами, в том числе IL-6,и растворимыми TNFрецепторами, играют существенную роль в развитии CHF, вызывая пониженную миокардиальную сократимость,бивентрикулярную дилатацию и гипертензию,и, возможно, участвуют в эндотелиальной активации и дисфункции. Считается также, что TNF может играть роль в до сих пор необъясненном мышечном истощении, которое встречается в пациентах с тяжелой CHF. Предварительные исследования на небольшом числе пациентов,проходящих курс терапии растворимым TNFрецептором, показали улучшения в функциональной классификации Нью-Йоркской ассоциации кардиологов и в самочувствии пациентов, измеряемым качеством жизненных критериев. Миокардиальное ремоделирование является сложным процессом, который сопровождает переход от бессимптомной к симптоматической сердечной недостаточности, и может быть опи 3 сано как ряд адаптивных изменений в миокарде. Основными компонентами миокардиального ремоделирования являются изменения в биологии мышечных клеток, потеря мышечных клеток посредством некроза или апоптоза, изменения во внеклеточном матриксе и изменения в геометрии полости левого желудочка. Не ясно,является ли миокардиальное ремоделирование просто конечной ответной реакцией органа, которая возникает после нескольких лет подвергания токсическим воздействиям продолжительной нейрогормональной стимуляции, или миокардиальное ремоделирование способствует независимо прогрессированию сердечной недостаточности. Имеющиеся в настоящее время данные предполагают, что подходящая терапия может замедлить или остановить прогрессирование миокардиального ремоделирования. Хотя использующиеся в настоящее время способы лечения могут ослаблять симптомыCHF и корректировать определенные патофизиологические аномалии, вызываемые этим процессом заболевания, CHF остается неотступно прогрессирующим состоянием с относительно высоким коэффициентом смертности. Действительно, относительные снижения в распространенности болезни и смертности, вызываемые существующими лекарственными средствами, имеют порядок приблизительно 10-25%. Таким образом, существует потребность в дополнительных или лучших способах леченияCHF, в частности, способах, которые могут значимо модифицировать лежащее в основе CHF заболевание. Сущность изобретения Данное изобретение преодолевает по меньшей мере некоторые из отмеченных выше и других недостатков известных в настоящее время способов лечения CHF созданием способа для лечения CHF, в котором аликвоту крови млекопитающего обрабатывают ex vivo и затем вводят в тело субъекта-млекопитающего. Аликвоту крови обрабатывают подверганием ее действию одного или нескольких стресс-факторов (стрессоров), которые, как было обнаружено, модифицируют кровь. В соответствии с данным изобретением аликвота крови может быть модифицирована подверганием крови, или разделенных клеточных или неклеточных фракций крови, или смесей разделенных клеток и/или неклеточных фракций крови,стрессорами, выбранными из температурных стрессоров, электромагнитных излучений и окислительной среды, или любой комбинацией таких стрессоров одновременно или последовательно. Как обсуждалось выше, патофизиологические изменения, связанные с CHF, включают в себя иммунную активацию, эндотелиальную дисфункцию и потерю мышечных клеток посредством некроза и/или апоптоза. Было показано, что способ лечения согласно данному изо 005011 4 бретению обеспечивает терапевтические преимущества в каждой из этих трех областей. Что касается иммунной активации, было обнаружено, что способ лечения по данному изобретению модулирует уровни воспалительных цитокинов в нескольких Th1/TNF-зависимых экспериментальных моделях воспаления в различных видах. Например, было показано, что этот способ лечения уменьшает аллергическую контактную повышенную чувствительность в мышах BALB/c, Th1-запускаемую иммунную реакцию, опосредованную TNF(Shivji et al., Journal of Cutaneous Medicine andSurgery 4: 132-137, 2000); понижающим образом регулирует экспрессию мРНК IL-6 в индуцируемом адъювантом артрите в модели воспалительного заболевания крыс Lewis и уменьшает соотношение Th1-клеток к Тh2-клеткам в пациентах со склеродермией, вызываемой Th1 аутоиммунным заболеванием (Rabinovich et al.,Poster presented at the Pan-American Congress ofRheumatology, Montreal, Canada, June 21-25,1998). Считается, что этот способ лечения даунрегулирует (понижает) провоспалительную иммунную реакцию Th1-типа, например, увеличением противовоспалительных цитокинов Тh2 типа, в том числе IL-10. Было обнаружено, что способ лечения по данному изобретению улучшал эндотелиальную функцию в ряде исследований, проводимых на людях и на животных. Например, было обнаружено, что этот способ лечения улучшал зависимую от эндотелия вазодилататорную (сосудорасширяющую) функцию в открытом исследовании на пациентах с тяжелой первичной болезнью Рейно (симметричной гангреной) (Cooke etal., International Journal of Angiology 16: 250-254,1997), улучшал степень восстановления кровоснабжения кожи после временной окклюзии в двояко-слепом, контролируемым плацебо исследовании на пациентах с запущенным заболеванием периферических сосудов, вторичным относительно атеросклероза (Courtman et al.,Circulation Vol. 102, 18, suppl. II, 2000), уменьшал прогрессирование атеросклероза в получающей холестерин, дефектной по LDLрецептору мыши (Babaei et al., Journal of theAmerican College of Cardiology 35 (Suppl. A): 243, 1999) и заметно улучшал зависимую от эндотелия вазодилататорную функцию в ответ на ацетилхолин в имеющих тяжелый атеросклероз,гиперхолестеринемических кроликах Watanabe,что доказывалось увеличенной вазодилататорной реакцией на агонист оксида азота (ацетилхолин) (Courtman et al., см. выше). Считается,что улучшение в эндотелиальной функции обусловлено противовоспалительным действием и увеличенной доступностью NO, которая может приводить к улучшению сосудорасширяющей способности, которая, как известно, сильно нарушена в пациентах с CHF. 5 Что касается потери мышечных клеток,считается, что способ по данному изобретению снижает уровни апоптоза и некроза. Было показано, что данный способ лечения может защищать почки от ишемии/реперфузионного повреждения (I/R), которое, как известно, связано с увеличенной апоптотической смертью клеток(Tremblay et al., Pathophysiology 5:26; Chen et al.,Medicine Sciences 15 (Suppl. 1):16), и может снижать апоптоз в почках после I/R, что определено наличием ДНК-лэддеринга и плотностью апоптотических ядер, окрашенных Tdt (терминальной дезоксинуклеотид-трансферазой, ферментом-маркером незрелых и пролиферирующих Т-клеточных популяций). Поскольку способ лечения по данному изобретению обеспечивает терапевтические преимущества в трех областях, в которых патофизиологические изменения имеют место вCHF, а именно, эндотелиальной дисфункции,продуцировании воспалительных цитокинов и потере мышечных клеток вследствие апоптоза,обеспечивается сильная теоретическая основа,позволяющая предсказать, что способ лечения по данному изобретению мог бы быть полезным для пациентов с CHF. Способ по данному изобретению может быть использован в качестве терапии CHF отдельно или в комбинации с другими способами терапии, такими как нитратная терапия, -блокаторы, ингибиторы АСЕ, блокирующие АТ-рецептор агенты, антагонисты альдостерона, блокаторы кальциевых каналов,TNF-блокирующие агенты, супрессоры продуцирования TNF-, и/или другими более рутинными мерами лечения, такими как ограничение натрия и жидкости, диуретические (мочегонные) средства, дигиталис и т.д Конкретные лекарственные средства, которые, как известно,подавляют продуцирование TNF-, включают в себя пентоксифиллин, амринон, аденозин, талидомид, ингибиторы TNF-конвертирующего фермента (ТАСЕ) и дексаметазон. КонкретныеTNF-блокирующие агенты включают в себя моноклональные антитела и этанерцепт. Таким образом, согласно одному аспекту данное изобретение представляет собой способ лечения CHF в пациенте-человеке, страдающем от застойной сердечной недостаточности, предусматривающий (а) обработку аликвоты крови пациента ex vivo по меньшей мере одним стресс-фактором, выбранным из группы, состоящей из температуры выше или ниже температуры тела, электромагнитного излучения и окислительной среды; и (b) введение аликвоты крови, обработанной в стадии (а), пациенту,причем эта аликвота имеет объем, достаточный для ослабления CHF в пациенте. В другом аспекте, данное изобретение представляет собой комбинированное лечениеCHF в пациенте-человеке, страдающем от застойной сердечной недостаточности, включаю 005011 6 щее в себя введение пациенту аликвоты собственной крови пациента, которая была предварительно обработана ex vivo одним или несколькими стресс-факторами (стрессорами), выбранными из окислительной среды, теплового стресса и электромагнитного излучения, и лечение с использованием, выбранных из группы, состоящей из нитратов, -блокаторов, ингибиторов АСЕ, блокирующих АТ-рецептор агентов,антагонистов альдостерона, блокирующих агентов кальциевых каналов, TNF-блокирующих агентов, супрессоров продуцирования TNF-,ограничения натрия и жидкости, диуретических средств и дигиталиса. Краткое описание чертежей Данное изобретение описывается теперь,только в качестве примера, со ссылкой на сопутствующие чертежи, в которых фиг. 1 и 2 представляют чертежи, являющиеся графическими представлениями результатов, полученных из примера 2, описанного ниже; фиг. 3 - чертеж, являющийся графическим представлением результатов, полученных из примера 3, описанного ниже; фиг. 4 - чертеж, являющийся графическим представлением результатов, полученных из примера 4, описанного ниже; фиг. 5-8 - чертежи, являющиеся графическими представлениями результатов, полученных из примера 5, описанного ниже; и фиг. 9 - чертеж, являющийся графическим представлением эффектов способа лечения по данному изобретению в Тh1-опосредованном воспалении в контактной аллергии. Подробное описание предпочтительных вариантов Согласно предпочтительному способу по данному изобретению аликвоту крови экстрагируют из субъекта-млекопитающего, предпочтительно человека, и эту аликвоту обрабатываютex vivo определенными стресс-факторами, описанными более подробно ниже. Термин аликвота, аликвота крови или подобные термины, используемые здесь, включают в себя цельную кровь, разделенные клеточные фракции крови, в том числе тромбоциты, разделенные неклеточные фракции крови, в том числе плазму, и их комбинации. Действие стрессоров заключается в том, чтобы модифицировать кровь и/или ее клеточные или неклеточные фракции,содержащиеся в данной аликвоте. Затем модифицированную аликвоту повторно вводят в тело субъекта любым путем, пригодным для вакцинации, предпочтительно выбранным из внутриартериальной инъекции, внутримышечной инъекции, внутривенной инъекции, подкожной инъекции, внутрибрюшинной инъекции, и перорального, назального или ректального введения. 7 Стрессоры, которыми подвергают аликвоту крови ex vivo, в соответствии со способом по данному изобретению выбирают из температурного стресса (выше температуры тела или ниже температуры тела), окислительной среды и электромагнитного излучения, по отдельности или в комбинации, одновременно или последовательно. В случае субъектов-людей удобно,чтобы аликвота имела объем, достаточный для того, чтобы при повторном введении в тело субъекта достигалось по меньшей мере частичное ослабление CHF в этом субъекте. Предпочтительно объем аликвоты равен приблизительно до 400 мл, предпочтительно приблизительно от 0,1 до приблизительно 100 мл, более предпочтительно приблизительно от 5 до приблизительно 15 мл, еще более предпочтительно приблизительно от 8 до приблизительно 12 мл и наиболее предпочтительно приблизительно 10 мл вместе с антикоагулянтом, например, 2 мл цитрата натрия. Согласно данному изобретению предпочтительно применять все три вышеуказанных стрессора одновременно к подлежащей обработке аликвоте, чтобы гарантировать подходящую модификацию крови. В некоторых вариантах может быть также предпочтительным применение любых двух из вышеуказанных стрессоров, например, применение электромагнитного излучения и окислительного стресса, температурного стресса и электромагнитного излучения или электромагнитного излучения и окислительного стресса. Следует соблюдать осторожность в применении подходящего уровня стрессоров для эффективной модификации посредством этого крови для ослабления CHF в субъекте. Температурный стрессор нагревает обрабатываемую аликвоту до температуры выше нормальной температуры тела или охлаждает аликвоту ниже нормальной температуры тела. Температуру выбирают таким образом, что данный температурный стрессор не вызывает избыточного гемолиза в крови, содержащейся в этой аликвоте, и таким образом, что при инъекции обработанной аликвоты в субъект будет достигаться ослабление CHF. Предпочтительно температурный стрессор применяют таким образом, что температура всей аликвоты или ее части повышается до приблизительно 55 С и более предпочтительно находится в диапазоне приблизительно от -5 до приблизительно 55 С. В некоторых предпочтительных вариантах данного изобретения температура аликвоты повышается выше нормальной температуры тела,так что средняя температура аликвоты не превышает приблизительно 55 С, более предпочтительно находится в диапазоне приблизительно от 40 С до приблизительно 50 С, еще более предпочтительно приблизительно от 40 С до приблизительно 44 С и наиболее предпочтительно равна приблизительно 42,5 1 С. 8 В других предпочтительных вариантах аликвоту охлаждают ниже нормальной температуры тела, так что средняя температура аликвоты находится в диапазоне приблизительно от-5 С до приблизительно 36,5 С, более предпочтительно приблизительно от 10 С до приблизительно 30 С и еще более предпочтительно приблизительно от 15 С до приблизительно 25 С. Стрессор в виде окислительной среды может быть применением к аликвоте твердых,жидких или газообразных окислительных агентов. Предпочтительно он включает в себя подвергание аликвоты действию смеси кислорода медицинской чистоты и газа озона, наиболее предпочтительно барботированием через аликвоту в вышеуказанном диапазоне температур потока газообразного кислорода медицинской чистоты, имеющего в качестве незначительного компонента озон. Содержание озона в газовом потоке и скорость газового потока предпочтительно выбраны таким образом, что количество озона, вводимого в аликвоту крови, либо одного, либо в комбинации с другими стрессорами,не приводит к появлению избыточных уровней повреждения клеток, которое сделало бы терапию неэффективной. В подходящем случае газовый поток имеет содержание озона приблизительно до 300 мкг/мл, предпочтительно приблизительно до 100 мкг/мл, более предпочтительно приблизительно 30 мкг/мл, еще более предпочтительно приблизительно до 20 мкг/мл, особенно предпочтительно приблизительно от 10 мкг/мл до приблизительно 20 мкг/мл и наиболее предпочтительно около 14,5 1,0 мкг/мл. В подходящем случае газовый поток подается в аликвоту при скорости приблизительно до 2,0 л/мин,предпочтительно приблизительно до 0,5 л/мин,более предпочтительно приблизительно до 0,4 л/мин, еще более предпочтительно приблизительно до 0,33 л/мин и наиболее предпочтительно приблизительно 0,240,024 л/мин при стандартных условиях температуры и давления(STP). Нижняя граница скорости газового потока равна предпочтительно не ниже 0,01 л/мин,более предпочтительно не ниже 0,1 л/мин и еще более предпочтительно не ниже 0,2 л/мин. Стрессор в виде электромагнитного излучения в подходящем случае применяют, облучая обрабатываемую аликвоту из источника электромагнитного излучения при поддержании аликвоты при вышеуказанной температуре и при барботировании газовой смеси кислород/озон через аликвоту. Предпочтительные электромагнитные излучения выбраны из излучения фотонов, более предпочтительно УФ, видимого и инфракрасного света и еще более предпочтительно УФ-света. Наиболее предпочтительными источниками УФ являются УФлампы, излучающие прежде всего длины волн УФ-С-диапазона, т.е. длины волн, более короткие, чем приблизительно 280 нм. Такие лампы могут также излучать некоторое количество 9 видимого и инфракрасного света. Может также использоваться ультрафиолетовый свет, соответствующий стандартным источникам УФ-А(длинам волн от приблизительно 315 до приблизительно 400 нм) и УФ-В (длинам волн от приблизительно 280 до приблизительно 315 нм). Например, подходящая доза такого УФ-света,применяемая одновременно с вышеуказанными температурным стрессором и стрессором окислительной среды, может быть получена до восьми ламп, размещенных таким образом, что они окружают контейнер, содержащий аликвоту, эксплуатируемых при интенсивности, достаточной для доставки в целом энергии УФ-света к поверхности крови приблизительно от 0,025 до приблизительно 10 Дж/см 2, предпочтительно приблизительно от 0,1 до приблизительно 3,0 Дж/см 2, и эта доза может быть преимущественно использована. Предпочтительно используют четыре такие лампы. Время, в течение которого аликвоту подвергают действию стрессоров, обычно находится в диапазоне времени до приблизительно 60 мин. Это время зависит до некоторой степени от выбранной интенсивности электромагнитного излучения, температуры, концентрации окислительного агента и скорости, при которой он подается в аликвоту. Может потребоваться некоторое экспериментирование со стороны оператора для установления оптимального времени,как только были установлены другие стрессоры. При большинстве стрессорных условий предпочтительные периоды времени будут находиться в приближенном диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 5 мин, более предпочтительно приблизительно 3 или приблизительно 3,5 мин. Первоначальная температура крови и скорость, при которой она может нагреваться или охлаждаться до заданной температуры, обычно меняется от субъекта к субъекту. Такая обработка обеспечивает модифицированную аликвоту крови, которая готова для инъекции в субъекта. В применении на практике предпочтительного способа данного изобретения аликвота крови может обрабатываться стрессорами с использованием аппарата типа, описанного в патенте США 4968483, выданном Mueller. Аликвоту помещают в подходящий стерильный пропускающий УФ-свет контейнер, который вставляют в установку. УФ-лампы включают на фиксированный период времени перед подачей газового потока к аликвоте, обеспечивающего окислительный стресс, для стабилизации излучаемой мощности УФ-ламп. Обычно УФ-лампы являются включенными, в то время как температуру аликвоты доводят до заданной величины, например, 42,51 С. Затем к аликвоте подают смесь газов кислород/озон известного состава и при регулируемой скорости потока в течение заданного периода времени до приблизительно 60 мин, предпочтительно 2-5 мин и 10 наиболее предпочтительно приблизительно 3 мин, как обсуждалось выше, так что аликвота испытывает действие всех трех стресс-факторов одновременно. Таким путем кровь подходящим образом модифицируется в соответствии с данным изобретением с получением желаемых эффектов. Предпочтительно субъект подвергается курсу обработок, причем каждая отдельная обработка предусматривает взятие аликвоты крови, обработку ее, как описано выше, и повторное введение обработанной аликвоты субъекту. Курс таких обработок может предусматривать введение один раз в день обработанных аликвот крови в течение ряда последовательных дней или может предусматривать первый курс обработок один раз в день в течение определенного периода времени с последующим интервалом и затем один или более дополнительных курсов обработок один раз в день. В одном предпочтительном варианте субъекту предоставляется первоначальный курс обработок, предусматривающий введение 4-6 аликвот обработанной крови. В другом предпочтительном варианте субъекту предоставляется первоначальный курс терапии, предусматривающий введение 2-4 аликвот обработанной крови с введением любой пары последовательных аликвот либо в последовательные дни, либо с промежуточным периодом отдыха от 1 до 21 дней, в течение которых аликвоты не вводят пациенту, причем этот период отдыха, отделяющий одну выбранную пару последовательных аликвот, составляет от 3 до 15 дней. В более предпочтительном варианте схема введения доз первоначального курса обработок предусматривает всего три аликвоты, причем первую и вторую аликвоты вводят в последовательные дни и обеспечивается период отдыха 11 дней между введением второй и третьей аликвот. В способе по данному изобретению предпочтительно, чтобы в каждый конкретный день субъекту вводили не более одной аликвоты. Может быть предпочтительным введение затем дополнительных курсов обработок после первоначального курса обработок. Предпочтительно, последующие курсы обработок вводят по меньшей мере спустя приблизительно три недели после окончания первоначального курса обработок. В одном особенно предпочтительном варианте субъект получает второй курс обработок, предусматривающий введение одной аликвоты обработанной крови, каждые 30 дней после окончания первоначального курса обработок в течение периода 6 месяцев. Должно быть понятно, что интервал между последовательными курсами обработок должен быть таким, чтобы поддерживались положительные эффекты обработки согласно данному изобретению, и эти эффекты могут определяться на основании наблюдаемой ответной реакции отдельных субъектов. 11 Как обсуждалось выше, способ по данному изобретению может быть предпочтительно использован в качестве дополнительного лечебного мероприятия в комбинации с другими способами лечения CHF. Предпочтительные примеры таких других способов терапии включают в себя использование одного или нескольких из ингибиторов АСЕ, -блокаторов, антагонистов альдостерона, TNF-блокаторов, супрессоров продуцирования TNF и другие формы рутинной терапии. Далее данное изобретение иллюстрируется и описывается со ссылкой на следующие конкретные примеры. Пример 1. Данный пример описывает исследование,проводимое для определения действия способа лечения по данному изобретению на эндотелиальную функцию в кроликах Watanabe, которые,как известно, развивают комплексные атеросклеротические повреждения во время первого года жизни. Как упоминалось ранее, эндотелиальная дисфункция связана с патофизиологиейCHF. Кролики поступали на исследование в возрасте 7-8 месяцев и их рандомизировали на три группы, первую группу для немедленного умерщвления для измерений, являющихся фоном, вторую группу (n=10), которая получала инъекции крови, обработанной согласно данному изобретению, и третью группу (n=10), которая получала ложные обработки, содержащие инъекции необработанной крови. Обработка предусматривала в целом 4 инъекции обработанной крови на протяжении периода 10 недель. Кровь обрабатывали подверганием действию трех стресс-факторов в аппарате, описанном в общем виде в патенте США 4968483, выданном Mueller et al.,(a) повышенной температурой 42,51,0 С;(b) газовой смесью кислорода медицинской чистоты, содержащей 14,51,0 мкг/мл озона, барботируемой через кровь при скорости тока 24024 мл/мин в течение 3 мин; и(c) ультрафиолетовым светом при длине волны 253,7 нм и общей плотности энергии 2,0 Дж/см 2 (с некоторой флуктуацией в упомянутом ранее диапазоне). Обработанную кровь вводили животным внутримышечной инъекцией. Контрольным животным вводили внутримышечные инъекции необработанной крови при той же самой схеме инъекций, которую использовали для обработанных животных. Всех животных умерщвляли в возрасте 11 месяцев. Кольцевидные препараты получали из подвздошных артерий животных и их оценивали на степень релаксации, индуцируемой ацетилхолином (зависимым от эндотелия вазодилататором (сосудорасширяющим агентом после обработки фенилэфрином (вазоконстриктором 12 Оценка кольцевых препаратов показала значимое увеличение эндотелиально-опосредованного расширения сосудов (вазорелаксации)(52,26%) в обработанных животных в сравнении с контрольными животными, инъецированными необработанной кровью (22,94%,р 0,001). Релаксации не наблюдали при удалении эндотелия из кольцевых препаратов, что дополнительно подтверждало эндотелий-специфическое действие обработки данного изобретения. Пример 2. Этот пример описывает исследование эффектов обработки по способу терапии данного изобретения на пациентах, страдающих от заболевания периферических сосудов (PVD). Это исследование проводили в Университетской клинике, Lund, Sweden. Данное исследование включало в себя контролируемое плацебо, двояко-слепое исследование на 18 пациентах (7 мужчинах, 11 женщинах) с умеренно прогрессирующим заболеванием периферических сосудов (PVD), основным симптомом у которых была перемежающаяся хромота. Пациенты, участвующие в данном исследовании, набирались из получающего медицинскую помощь населения из отделения внутренних болезней клиники Университета, Lund,Sweden. Пациентов рандомизированно относили либо к получавшим плацебо (внутримышечную инъекцию 10 мл теплого солевого раствора),либо к получавшим лечение в соответствии с данным изобретением, предусматривающее внутримышечную инъекцию 10 мл обработанной аутологичной крови. Обработка крови предусматривала сбор аликвот 10 мл венозной крови пациента в 2 мл 3-4% цитрата натрия в качестве антикоагулянта. Каждую аликвоту крови переносили в стерильный, одноразовый сосуд из полиэтилена низкой плотности и затем подвергали действию следующих условий в аппарате,описанном в общих чертах в патенте США 4968483, выданном Mueller et al.,(d) повышенной температуры 42,51,0 С;(e) кислорода медицинской чистоты, содержащего 14,51,0 мкг/мл озона, барботируемого через кровь при скорости тока 24024 мл/мин в течение 3 мин; и(f) ультрафиолетового света при длине волны 253,7 нм и общей плотности энергии 2,0 Дж/см 2. Каждый пациент получал всего 12 инъекций солевого раствора или обработанной крови на протяжении 9 недель. Лечение оценивали измерением скорости восстановления кровообращения кожи и давления кислорода (кислородного потенциала) после общей временной окклюзии кровотока в конечностях каждого пациента перед началом тера 13 пии и при 3 неделях, 6 неделях, 9 неделях и 2 месяцах после начала терапии. Кожное кровообращение в ногах измеряли при помощи лазерной флюксметрии Допплера(Laser Doppler Fluxmetry, LDF) и кислородный потенциал определяли измерением чрескожного давления кислорода (ТсрО 2) в ноге. У пациентов,получающих курс лечения по данному изобретению, наблюдали сильную тенденцию в направлении связанного с лечением снижения как общего времени для достижения максимальной перфузии (ТРН), так и полупериода достижения максимальной перфузии (Т 1/2 РH), что является признаком улучшения скорости восстановления кожного кровообращения. В контрольной группе изменения не наблюдали. Улучшенная скорость восстановления кровообращения у пациентов, лечившихся в соответствии с данным изобретением, была очевидной во время курса обработок и сохранялась на протяжении 2 месяцев, но не достигала значимых результатов, пока не проходили 2 месяца после начала терапии. Сравнение T1/2PH для группы плацебо и группы обработки, измеренного при помощи LDF, показано на фиг. 1. Наблюдали также тенденцию в направлении более быстрого восстановления кислородного потенциала в обработанной группе. Это различие становилось статистически значимым при 2 месяцах после начала терапии. Сравнение полупериода до максимального ТсрО 2 после ишемии (О 2T1/2) для обработанной группы в сравнении с группой плацебо показано на фиг. 2. Таким образом, данное исследование продемонстрировало, что в этой группе пациентов с умеренно прогрессирующим PVD курс лечения по данному изобретению имел явное биологическое действие на скорость, при которой восстанавливался кровоток в коже ног после периода тотальной окклюзионной ишемии. Сходное действие, но меньшего размера, отмечали для восстановления ТсрО 2, тогда как пациенты,получающие обработку плацебо, не обнаруживали никакого изменения. Эти результаты предполагают, что курс лечения по данному изобретению обеспечивает полезное действие на эндотелиальную функцию и, по-видимому, улучшает функцию микроциркуляции (капиллярного кровообращения) в пациентах с заболеванием периферических сосудов (PVD). Пример 3. Этот пример относится к применению курса лечения по данному изобретению для предупреждения появления артрита и описывает результаты исследования, проводимого в установленной модели артрита животного. Конкретной моделью животного, используемой в данном исследовании, был индуцированный адъювантом артрит в крысах (см., например, Pearson, С,1956, Development of Arthritis, periarthritis andbutyricum. Самцов крыс Lewis в возрасте 4-5 недель с весом 100-120 г получали из Charles River Laboratories, выдерживали в изоляции (карантине) в течение одной недели и использовали в исследовании. Адъювантную смесь готовили для индукции артрита суспендированием 50 мг М. butyricum (Difco Laboratories, Inc., Detroit, MI) в 5 мл белого жидкого парафина - m3516 (SigmaChemical Co., St. Louis, МО) и тщательно перемешивали при помощи гомогенизатора. Аликвоты этой смеси, достаточные для доставки 0,15 мг М. butyricum, инъецировали подкожно в каждое животное у основания хвоста. Симптомы артрита появлялись спустя приблизительно 12 дней после индукции в каждом животном, что выражалось распуханием конечностей. Двух крыс, которых не инъецировали адъювантной смесью, использовали в качестве доноров крови. Кровь брали из этих доноров сердечной пункцией и 10 мл цитратной крови переносили в стерильный сосуд из полиэтилена низкой плотности для обработки ex vivo стрессорами в соответствии с данным изобретением. С использованием аппарата, описанного в общем в вышеупомянутом патенте Mueller, кровь подвергали стрессу обработкой в соответствии с данным изобретением. Шесть животных получали курс из 2 инъекций аликвот 0,2 мл обработанной крови, причем инъекции вводили в последовательные дни после появления артрита. Контрольная группа из 8 крыс получала инъекции необработанной крови с использованием той же самой схемы инъекций, что и получавшие обработанную кровь животные. Измеряли объемы задних лапок этих животных в чередующиеся дни после появления артрита посредством вытеснения воды в химический стакан на 250 мл с использованием загружаемых сверху весов Меттлера. Получали средние величины для каждой группы животных и они представлены графически на прилагаемой фиг. 3 в виде графика среднего объема лапки в зависимости от дней после индукции артрита. Верхняя кривая воспроизведена из результатов контрольной группы животных,нижняя кривая из результатов животных, которые получали курс инъекций обработанной крови. Значимое уменьшение тяжести артрита, демонстрируемое меньшими объемами лапок, является очевидным для проходящих курс лечения животных в сравнении с животными контрольной группы. Приведенные выше результаты показывают, что курс лечения субъектов модифицированной кровью может эффективно предотвращать появление артрита у млекопитающих. Экспрессию мРНК IL-6 в лимфатических узлах обработанных и необработанных живот 15 ных измеряли спустя 10 дней после индукции артрита, и эти результаты представлены ниже в таблице. Обработка Активная Контрольная Приведенные выше в таблице результаты показывают, что курс лечения в соответствии с данным изобретением может модулировать уровни воспалительных цитокинов в Th1/TNF-зависимой модели артрита. Получено доказательство того, что продуцирование воспалительных цитокинов, таких как IL-6 и TNF-,связано с патофизиологией CHF. Пример 4. Эксперимент, описываемый в этом примере, демонстрирует с использованием системы модели животного, включающей в себя ишемию и последующую реперфузию различных органов тела, что курс лечения по данному изобретению проявлял действие уменьшения апоптоза и некроза. Известно, что вызываемые ишемиейреперфузией повреждения включают в себя апоптоз и некроз в пораженных органах и тканях - см., например, Saikumar P. et al., Mechanisms of cell death in hypoxia/reoxygenationreperfusion injury of human renal allografts,Transplantation, 1998 Oct. 15; 66(7): 872-6 и другие публикации, как предшествующие этим работам, так и последующие. В этом примере использовали известные способы определения апоптоза на клеточном уровне. В качестве экспериментальных животных использовали чистопородных коротконогих гончих собак в возрасте 1-2 лет, равное число самцов и самок. Животных делили на четыре группы, А, В, С и D, причем каждая группа состояла из шести животных, трех самцов и трех самок. Животных групп А и С подвергали способу по данному изобретению, подвергая их двум 10-дневным курсам ежедневного взятия аликвоты 8 мл крови, экстракорпоральной обработки этой аликвоты кислородом/озоном, УФоблучением и нагреванием и повторного введения 5 мл обработанной аликвоты в то же самое животное посредством внутримышечной инъекции. Каждую такую обработку проводили следующим образом. Аликвоту крови 8 мл экстрагировали из животного, обрабатывали цитратом натрия (2 мл) и помещали в стерильный контейнер. Его подвергали одновременно действию стрессфакторов в виде УФ-облучения, окислительной среды в виде газа кислород/озон и повышенной температуры в аппарате, описанном в вышеуказанном патенте США 4968483, выданном Mueller. Более конкретно, пробу крови в стерильном 16 прозрачном для УФ контейнере нагревали с использованием инфракрасных ламп до 42,5 С и,поддерживая при этой температуре, подвергали УФ-облучению с преобладающей длиной волны 253,7 нм при описанных ранее предпочтительных условиях. Одновременно, смесь кислорода и озона медицинской чистоты с содержанием озона 13,5-15,5 мкг/мл барботировали через пробу крови при скорости тока в диапазоне 60240 мл/мин (STP). Время одновременного подвергания действию УФ и газовой смеси было 3 мин. Порцию 5 мл обработанной аликвоты крови повторно инъецировали внутримышечно в каждое испытуемое животное. Каждое животное групп А и С, получающих курсы лечения в соответствии с данным изобретением, получало трехнедельный период отдыха между 10-дневными курсами лечения. Группы В и D были контрольными группами,которым предоставляли два 10-дневных курса ежедневных инъекций 5 мл физиологического солевого раствора с трехнедельным периодом отдыха между 10-дневными курсами. Спустя один день после второго курса инъекций животных анестезировали посредством анестезии газообразным моноксидом азота и правую почку каждого животного удаляли через боковой разрез. Окклюзирующий зажим помещали на оставшуюся почечную артерию и вену для подвергания левой почки временной ишемии в течение 60 мин. Затем зажим удаляли,делая возможной реперфузию этой почки нормальным кровотоком. Животных наблюдали в течение 6 дней после этой процедуры, вызывающей ишемию, и затем умерщвляли. Ишемическую почку каждого животного извлекали хирургическим путем и делили на две части. Одну часть хранили в замороженном виде при -80 С, а другую часть фиксировали в 10% формалине для иммуногистопатологических и рутинных гистопатологических исследований. Митохондриальный мембранный потенциал измеряли в проксимальных трубчатых клетках, выделенных из ишемической и контрольной почек, как во время удаления контрольной почки, так и после умерщвления. Для этой цели проксимальные почечные трубочки собак очищали от нормального или ишемического коркового вещества почки посредством процедуры обработки коллагеназой, описанной Marshanskyproximal tubes in suspension, J. Membr. Biol. 153(1), 59-73, 1996. Почечные митохондрии выделяли в суспензии при помощи дифференциального центрифугирования (см. Marshansky,Organic hydroperoxides at high concentrationscause energization and activation of AATP synthesis in mitochondria, J. Biol. Chem. 264(7), 36703673. 1989) после гомогенизации ткани в буфере, содержащем 250 мМ сахарозу, 10 мМHEPES-Трис (рН 7,5) и 250 мкМ ЭДТА. Кле 17 точные остатки (дебрис) удаляли центрифугированием при 10000 g в течение 30 мин. Митохондрии промывали буфером сахароза/HEPES без ЭДТА. Митохондриальный мембранный потенциал измеряли, как описано Kroemer, G., Zamzam,N. and Susin, S.A., Mitochondrial Control ofmitochondrial functionality during apoptosis,FEBS Letters 411 (1), 77-82, 1987. Флуоресценцию JC-1 в суспензии очищенных митохондрий из нормальной и ишемической почек подвергали непрерывному мониторингу на спектрофлоуриметре Deltascan Model RFM-2001 (PhotonTechnology International, South Brunswick, NJ). Длина волны возбуждения была 490 нм (ширина щели 2 нм), а длина волны испускания была 590 нм (ширина щели 4 нм). Сигналы регистрировали с использованием программы Felix (Version 1.1). Все измерения выполняли при непрерывном перемешивании при 37 С. Инкубационный буфер для измерения митохондриального мембранного потенциала содержал 200 мМ сахарозу, 5 мМ МgСl2, 5 мМ КН 2 РО 4, 0,1 мкМ JC-1 и 30 мМ HEPES-Трис (рН 7,5). Концентрации субстрата и ингибиторов были 10 мМ сукцинат,0,1 мкМ ротенон с 0,1 мкМ FCCP или без него. Митохондриальный мембранный потенциал проксимальных трубочек определяли приближенно в правой (контрольной) почке перед ишемией и в левой (ишемической) почке после умерщвления собак в 6-й день после появления ишемии и оценивали как разность JC-1 флуоресценции после разобщения митохондрий при помощи FCCP, как показано в прилагаемой фиг. 4 А. Для каждого измерения использовали 50 мкг очищенного материала. Флуоресценция JC-1 является пропорциональной митохондриальному мембранному потенциалу. Контралатеральная (противоположно расположенная) нефрэктомированная почка служила в качестве контроля. Как видно из фиг. 4 В, способ обработки по данному изобретению не модифицировал мембранный потенциал неишемической контрольной правой почки(р=0,445 для варианта с обработкой крови в сравнении с обработкой крови солевым раствором). Однако ишемическая почка инъецированных солевым раствором животных показала значимо более низкую (р 0,05) флуоресценцию в сравнении с контрольной почкой. Стрессовая обработка в соответствии с данным изобретением предотвращала разобщение митохондрий во время ишемии/реперфузии, и мембранный потенциал не обнаружил значимого различия(р=0,244) между ишемической и контрольной почками. Этот параметр оставался значимо более высоким (р=0,0006 в сравнении с инъециро 005011 18 ванными солевым раствором собаками) в ишемических почках собак, предварительно обработанных в соответствии со способом по данному изобретению, в течение по меньшей мере 6 дней после реперфузии. Эти результаты указывают на то, что способ по данному изобретению осуществляет защиту почки против апоптоза и/или ускоряет восстановление на митохондриальном уровне. Таким образом, способ по данному изобретению является показанным для предварительного кондиционирования клеток, тканей и органов млекопитающего против встречающихся впоследствии факторов, которые обычно будут ускорять апоптоз. Конкретно, сохранение митохондриального мембранного потенциала свидетельствует о способности этого способа терапии защищать митохондрии и тем самым заранее кондиционировать клетки против апоптоза. Пример 5. Группу из 12 самцов крыс SHR обрабатывали либо инъекциями объединенной крови,подвергнутой стрессам, как описано в примере 4 выше, либо, в контрольных животных, инъекциями солевого раствора. Поскольку кровь из всех животных этой генетической линии является идентичной, кровь из каждого животного обрабатывали по способу по данному изобретению для введения испытуемому животному. Кровь обрабатывали цитратом натрия в качестве антикоагулянта и помещали в стерильный контейнер. Животные получали либо инъекции 150 мкл подвергнутой стрессу крови в дни -14 и -13 с последующим периодом отдыха 11 дней и третью инъекцию в день перед ишемической хирургией, либо параллельные инъекции солевым раствором. В день хирургии крыс анестезировали моноксидом азота (fluran) и правую почку удаляли через срединный абдоминальный разрез. Затем левую почку подвергали временной ишемии окклюзией левой почечной артерии и вены при помощи микрозажима. Затем кожу временно закрывали. После 60 мин окклюзии зажим удаляли и рану закрывали швом. Животных умерщвляли спустя 12 ч после реперфузии. Ишемические и неишемические почки испытуемых животных удаляли и подвергали тестам ДНК-лэддеринга. Фрагментация олигонуклеосомальной ДНК на 180-200 п.н. является характерным распределением, которое выглядит как лестница (лэддер) после электрофореза в агарозном геле, в различных органах, подвергающихся апоптозу. Для оценки степени фрагментации ДНК в корковом веществе почки аликвоту порошкообразного коркового вещества почки взвешивали и тотальную ДНК ткани экстрагировали согласно процедуре с феноломхлороформом после расщепления ткани протеиназой К и РНКазой А в присутствии ЭДТА. Один мкг экстрагированной ДНК метили с использованием ферментативного анализа с при 19 менением терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы P32-dCTP (см. Teiger et al., Apoptosis in pressure overload-induced heart hypertrophy in the rat, J. Clin. Invest. 97, 2891-2897,1996). Увеличивающиеся количества радиоактивно меченой ДНК наносили на 1,5% агарозные гели. После электрофореза ДНК переносили на найлоновые мембраны (Hybond) и радиоактивность, связанную с ДНК-фрагментами 1501500 п.н., определяли количественно в приборе для получения изображений с использованием меченого фосфора (Phosphoimager, MolecularDynamics). Линию регрессии рисовали для радиоактивности как функции ДНК, нанесенной на гель (см. deBlois et al., Smooth muscle cellapoptosis during vascular regression in spontaneously hypertensive rats. Hypertension 29, 340349, 1997). Наклон линии линейной регрессии служил в качестве индекса фрагментации ДНК(имп/мин на пиксел на мкг ДНК). Результаты из ишемических/реперфузионных (I/R) почек и из нормальных, не I/Rпочек, все из животных, которые не получали инъекций подвергнутой стрессу крови, показаны графически на фиг. 5, в виде диаграммы наклона линий регрессии для различных проб(вертикальная ось) против времени после начала реперфузии. ДНК-лэддеринг, являющийся указанием на фрагментацию ДНК, явно увеличивался в корковом веществе ишемической почки в сравнении с контралатеральным неишемическим органом, и максимум достигался при 12 ч с возвращением до почти фоновых величин при 48 ч. Таким образом, 12 ч были выбраны в качестве временной точки для исследования действия подвергнутой стрессу крови по данному изобретению на ранний индуцированный ишемией почечный апоптоз. Фиг. 6 А является картиной геля электрофореза фрагментированной ДНК, в диапазоне 150-1500 п.н., радиоактивно меченой, как описано, для присоединения радиоактивных меток к ДНК-фрагментам. Трек S происходит из ДНК почек из животных, которые получали инъекции солевого раствора перед ишемиейреперфузией почек, а трек V происходит из ДНК почек животных, которые получали инъекции обработанной стрессом крови перед ишемией-реперфузией почек. Эта фигура показывает, что 60 мин почечной ишемии индуцировали явное накопление фрагментированной ДНК в обеих группах крыс при 12 ч, но уровень этого параметра был значимо более низким (р 0,05) в животных, получающих обработанную кровь. Фиг. 6 В показывает количество излучения из этих проб, в произвольных единицах, и показывает, что лестница фрагментации ДНК имеет место как в S- так и в V-пробах как результат ишемии/реперфузии, но степень фрагментации является заметно сниженной в Vпробах в сравнении с S-пробами. Результаты,представленные на фиг. 6 В, являются средними 20 величинами для шести животных в каждом случае. Эти результаты подтверждают, что клеточно-защитное действие введения обработанной стрессом крови в соответствии с данным изобретением на почечное реперфузионное повреждение включает в себя ингибирование раннего или позднего апоптоза. Способность курса лечения по данному изобретению уменьшать апоптоз в почках после ишемии/реперфузии во время фазы апоптоза(после 12 ч), определяемого ДНК-лэддерингом и плотностью апоптотических ядер, окрашенных Tdt (терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой), показана на фиг. 7 и 8 соответственно. Фиг. 3 В также показывает, что числа клеток в почках после ишемии/реперфузии были также значимо более высокими у животных,обработанных в соответствии с данным изобретением. Пример 6. Этот пример описывает курс лечения небольшого числа пациентов - людей с прогрессирующей хронической застойной сердечной недостаточностью. Эти пациенты имели хроническую застойную сердечную недостаточность класса III-IV Нью-Йоркской ассоциации кардиологов (NYHA), с фракцией изгнания крови из левого желудочка (LVEF) менее 40% и расстоянием, проходимым за 6 мин, равным 300 м. Некоторые из этих пациентов ранее проходили другие курсы лечения CHF. Протокол. Пациенты получают несколько инъекций обработанной крови. Схема введения инъекций предусматривает инъекции в дни 1, 2 и 14, затем одну инъекцию каждые 30 дней в течение 5 месяцев, причем каждая инъекция имеет объем 10 мл. Каждая отдельная обработка предусматривает следующие стадии: 1. Сбор 10 мл собственной венозной крови пациента в 2 мл 3-4% цитрата натрия для инъекций, USP (Фармакопея США). Цитрат натрия добавляют к пробе для предотвращения коагуляции крови во время обработки. 2. Перенос пробы цитратной крови в стерильный, одноразовый сосуд из полиэтилена низкой плотности. 3. Обработка ex vivo пробы крови одновременным подверганием действию: повышенной температуры 42,51,0 С,газовой смеси кислорода медицинской чистоты, содержащей 14,51,0 мкг/мл озона,которую барботируют через пробу крови при скорости тока 24024 мл/мин (при стандартных температуре и давлении (STP); и ультрафиолетового света при длине волны 253,7 нм. 4. Перенос пробы крови из стерильного одноразового контейнера в стерильный шприц. 5. Внутримышечная инъекция 2 мл или 10 мл обработанной пробы крови в ягодичную 21 мышцу того же самого пациента после местной анестезии (1 мл 2% новокаина или его эквивалента) в месте инъекции. Обработку ex vivo пробы крови, описанную в стадии (3) выше, выполняют в аппарате,описанном в общем в патенте США 4968483,выданном Mueller et al. Пробу крови одновременно подвергают действию всех трех стрессфакторов в течение периода 3 мин. Оценка CHF. Пациентов подвергают мониторингу на побочные неблагоприятные явления во время каждого визита. Проводят также последующее врачебное наблюдение (отдаленных результатов) после обработки для мониторинга выживания, госпитализаций и значимых неблагоприятных событий. Первичными конечными точками, используемыми для оценки эффективности данного курса лечения, являются изменения в расстоянии, проходимом за 6 мин, и/или функциональная классификация Нью-Йоркской ассоциации кардиологов. Вторичные конечные точки включают в себя улучшение сердечной функции,снижение потребности в диуретических средствах; уменьшение продолжительности госпитализаций; улучшение в симптомах. Как демонстрируется описанными выше данными, было показано, что курс лечения по данному изобретению имеет значимую биологическую активность в людях и в ряде модельных систем животных, причем во всех случаях обнаруживаются TM/TNFзависимые воспалительные реакции. Как упоминалось выше,считается, что этот способ терапии понижает(даун-регулирует) провоспалительную иммунную реакцию Th1-типа, например, увеличением провоспалительных цитокинов Тh2-типа, в том числе IL-10. Это могло бы по меньшей мере частично объяснять способность способа терапии по данному изобретению давать терапевтические преимущества в каждой из трех областей, которые характеризуют CHF. Кроме того, имеются данные для предположения, что способ терапии по данному изобретению является IL-10-зависимым (фиг. 9 иShahid et al., Journal of Investigative Dermatology,14, No. 4, 2000), вызывающим положительную регуляцию (ап-регуляцию) Th-1-регулируемых иммунных реакций. Также было высказано предположение, что IL-10 может быть важным компонентом сети цитокинов CHF, так как, повидимому, имеется снижение в уровне IL-10 относительно TNF- в CHF (Yamaoka et al., JpnCirc J 63:951-956). Хотя данное изобретение было описано со ссылкой на конкретные предпочтительные варианты, должно быть понятно, что многочисленные вариации могут быть произведены в отношении данного изобретения без отхода от его идеи или объема. Предполагается, что все 22 подобные модификации включены в объем следующей далее формулы изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение в приготовлении лекарственного средства для лечения застойной сердечной недостаточности (CHF) пациентачеловека аликвоты модифицированной крови пациента, приготовленной обработкой аликвоты крови пациента ex vivo стресс-факторами(стрессорами), включающими в себя ультрафиолетовый свет и окислительную среду. 2. Применение по п.1, отличающееся тем,что окислительная среда, используемая в обработке аликвоты крови, предусматривает применение окислительного агента к данной аликвоте. 3. Применение по п.2, отличающееся тем,что окислительный агент содержит газ озон,вводимый в аликвоту крови, в количестве, которое не приводит к появлению избыточных уровней повреждения клеток. 4. Применение по п.2 или 3, отличающееся тем, что окислительный агент содержит смесь газа озона и кислорода медицинской чистоты,причем газ озон содержится в этой смеси в концентрации до 300 мкг/мл. 5. Применение по п.4, отличающееся тем,что газ озон содержится в указанной смеси в концентрации до 30 мкг/мл. 6. Применение по п.5, отличающееся тем,что газ озон содержится в указанной смеси в концентрации от 13,5 до 15,5 мкг/мл. 7. Применение по п.4, или 5, или 6, отличающееся тем, что смесь применяют к аликвоте при скорости тока до 0,33 л/мин. 8. Применение по п.7, отличающееся тем,что смесь применяют к аликвоте при скорости тока от 0,21 до 0,27 л/мин. 9. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что ультрафиолетовый свет, используемый в обработке аликвоты крови, имеет одну или несколько длин волн диапазона УФ-С. 10. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что во время обработки аликвоты крови ее охлаждают или нагревают до температуры, при которой по меньшей мере часть этой аликвоты находится в диапазоне от -5 до 55 С. 11. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что средняя температура крови в аликвоте во время стадии обработки находится в диапазоне от 37 до 55 С. 12. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что средняя температура крови в аликвоте во время стадии обработки находится в диапазоне от 0 до 36,5 С. 13. Применение по п.12, отличающееся тем, что средняя температура крови в аликвоте находится в диапазоне от 10 до 30 С. 23 14. Применение по п.11, отличающееся тем, что указанная температура равна 42,51 С. 15. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что объем аликвоты составляет от 0,1 до 400 мл. 16. Применение по п.15, отличающееся тем, что объем аликвоты составляет от 0,1 до 100 мл. 17. Применение по п.15, отличающееся тем, что объем аликвоты составляет от 5 до 15 мл. 18. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что аликвоту обрабатывают стрессорами в течение периода до 60 мин. 19. Применение по п.18, отличающееся тем, что аликвоту обрабатывают стрессорами в течение периода от 2 до 5 мин. 20. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что аликвоту обрабатывают ультрафиолетовым светом и окислительной средой одновременно. 21. Применение в приготовлении лекарственного средства для лечения застойной сердечной недостаточности (CHF) пациентачеловека комбинации аликвоты собственной крови пациента, которая была обработана exvivo одним или несколькими стресс-факторами(стрессорами), выбранными из окислительной среды, термического стресса и электромагнит 005011 24 ного излучения, с фармацевтическим агентом,выбранным из группы, состоящей из нитратов,-блокаторов, ингибиторов АСЕ, блокирующих АТ-рецептор агентов, антагонистов альдостерона, блокаторов кальциевых каналов, TNFблокирующих агентов, супрессоров продуцирования TNF-, ограничения натрия и жидкости,диуретических средств и дигиталиса. 22. Применение по п.21, отличающееся тем, что фармацевтический агент является супрессором TNF-, выбранным из группы, состоящей из пентоксифиллина, ингибиторов ТАСЕ, амринона, аденозина, талидомида и дексаметазона. 23. Применение по п.21 или 22, отличающееся тем, что стрессоры включают в себя окислительную среду и ультрафиолетовый свет,применяемые одновременно к аликвоте кровиex vivo. 24. Применение по п.23, отличающееся тем, что окислительная среда содержит смесь кислорода медицинской чистоты и озона, барботируемую через аликвоту крови, и ультрафиолетовый свет, имеет одну или несколько длин волн диапазона УФ-С и применяется одновременно к аликвоте крови ex vivo, в то время как кровь в этой аликвоте имеет среднюю температуру в диапазоне от 37 до 55 С.