Способ производства свободно плавающих науплиусов artemia и упакованные цисты для использования в этом способе
Номер патента: 5276
Опубликовано: 30.12.2004
Авторы: Ньюман Ховард У., Траккарт Вим, Ван Ньивенхове Люк, Мерхи Грэт, Нассенс Эдди
Формула / Реферат
1. Способ производства свободно плавающих науплиусов Artemia из цист Artemia, содержащих диапаузные цисты, путем инкубации цист в среде выведения, при плотности, которая максимально составляет около 5 г сухого вещества цист на литр среды выведения, в течение заданного периода инкубации и в таких условиях, которые позволяют по меньшей мере части цист выводить и освобождать свободно плавающие науплиусы в течение заданного периода инкубации, причем цисты вводят в контакт с перекисью водорода для нарушения диапаузы по меньшей мере в некотором числе указанных диапаузных цист, чтобы позволить им произвести свободно плавающие науплиусы в течение этого заданного периода инкубации, причем перекись водорода вносят в среду выведения в количестве, выбранном в диапазоне от 0,5 до 30 мг на литр среды выведения, в которой проводят инкубацию.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что выбранное количество перекиси водорода составляет менее 20 мг/л, в частности менее 15 мг/л, и более чем 1 мг/л, в частности более чем 2 мг/л, а преимущественно более чем 3 мг/л.
3. Способ по одному из пп.1-2, отличающийся тем, что выведение цист в среде выведения проводят при плотности менее 4 г сухого вещества цист на литр, в частности менее 3 г сухого вещества цист на литр, а преимущественно при плотности около 2 г или менее сухого вещества цист на литр.
4. Способ по одному из пп.1-3, отличающийся тем, что цисты содержат такое количество диапаузных цист, что, за счет внесения оптимального количества перекиси водорода в среду выведения процент выведения может быть увеличен от X% до максимального процента выведения M%, причем указанное количество перекиси водорода выбирают в указанном диапазоне таким образом, чтобы увеличить процент выведения от X% до процента выведения, который по меньшей мере равен X%+0,4*(M-X)%, а преимущественно до процента выведения, который по меньшей мере равен X%+0,6*(M-X)%.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанный максимальный процент выведения определяют путем отбора выбранного числа проб цист, выведения этих проб в средах выведения, которые различаются друг от друга внесенным на единицу объема среды количеством перекиси водорода, выбранным в указанном диапазоне, путем нахождения процента выведения для разных количеств перекиси водорода и путем выбора самого высокого процента выведения среди найденных процентов выведения.
6. Способ по одному из пп.1-3, отличающийся тем, что для выбора указанного количества перекиси водорода отбирают ряд проб цист, производят выведение указанных проб в средах выведения, которые различаются друг от друга количеством перекиси водорода, внесенным на единицу объема среды, выбранным в указанном диапазоне, находят проценты выведения для разных количеств перекиси водорода и максимальный процент выведения M% среди этих процентов выведения и выбирают количество перекиси водорода, которое увеличивает процент выведения от X% до значения выше чем X%, в частности выбирают количество перекиси водорода, которое дает максимальный процент выведения M% или процент выведения, по меньшей мере равный X%+0,4*(M-X)%, а преимущественно по меньшей мере равный X%+0,6*(M-X)%, причем количество вносимой перекиси водорода преимущественно выбирают, главным образом, соответствующим указанному количеству перекиси водорода, которое дает максимальный процент выведения M%.
7. Способ по одному из пп.1-6, отличающийся тем, что перекись водорода вносят в среду выведения путем добавления в эту среду перекиси водорода и/или по меньшей мере одного соединения, производящего перекись водорода в среде выведения, причем перекись водорода преимущественно вносят в среду выведения путем добавления в эту среду по меньшей мере одного производящего перекись водорода соединения, которое имеет пероксидную связь и выбрано из группы, в которую входят пероксиды, пербораты, персульфаты, перацетаты или их комбинации, при этом производящее перекись водорода соединение наиболее предпочтительно включает в себя пероксид кальция и/или пероксид магния.
8. Способ по одному из пп.1-7, отличающийся тем, что перекись водорода вносят в среду выведения менее чем за 10 ч, преимущественно менее чем за 8 ч, предпочтительно менее чем за 6 ч и наиболее предпочтительно менее чем за 5 ч после начала инкубации в ней цист.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что перекись водорода вводят в среду выведения, в основном, одновременно с цистами, в частности путем смешения с цистами и/или нанесения на цисты в виде покрытия.
10. Способ по одному из пп.1-9, отличающийся тем, что заданный инкубационный период представляет собой период около 24 ч или меньше, причем по меньшей мере 90% цист, которые выводят в течение инкубационного периода 48 ч, выводят в течение этого заданного инкубационного периода.
11. Цисты Artemia, предназначенные для инкубации в среде выведения для производства свободно плавающих науплиусов, имеющие процент выведения X% от общего числа полных цист при выведении в среде выведения в отсутствие перекиси водорода, отличающиеся тем, что они упакованы вместе с количеством перекиси водорода и/или по меньшей мере одного соединения, производящего перекись водорода при его добавлении в среду выведения, причем указанное количество достаточно для внесения такого количества перекиси водорода в среду выведения, при котором процент выведения цист увеличивается с X% до процента выведения большего, чем X%, когда это количество перекиси водорода добавляют в среду выведения.
12. Цисты Artemia по п.11, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения, производящего перекись водорода, определяется таким образом, что когда это количество добавляют в среду выведения, процент выведения цист увеличивается от X% до процента выведения большего, чем X%.
13. Цисты Artemia по п.11 или 12, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения, производящего перекись водорода, определяется таким образом, что когда это количество добавляют в среду выведения, количество перекиси водорода составляет от 0,5 до 30 мг/л.
14. Цисты Artemia по любому из пп.11-13, отличающиеся тем, что они предназначены для инкубации в среде выведения с предопределенной плотностью около 5 г или менее сухого вещества цист на литр.
15. Цисты Artemia по одному из пп.11-14, отличающиеся тем, что содержат такое количество диапаузных цист, что при внесении оптимального количества перекиси водорода в среду выведения процент выведения может быть увеличен от X% до максимального процента выведения M%, причем указанное количество перекиси водорода таково, что при выведении цист в его присутствии процент выведения по меньшей мере равен X%+0,4*(M-X)%, а преимущественно по меньшей мере равен X%+0,6*(M-X)%.
16. Цисты Artemia по одному из пп.11-15, отличающиеся тем, что находятся в комбинации с определенным количеством по меньшей мере одного соединения, производящего перекись водорода при добавлении в среду выведения, причем указанное по меньшей мере одно производящее перекись водорода соединение имеет пероксидную связь и преимущественно выбрано из группы, в которую входят пероксиды, пербораты, персульфаты, перацетаты или их комбинации, при этом производящее перекись водорода соединение наиболее предпочтительно включает в себя пероксид кальция и/или пероксид магния.
17. Цисты Artemia по одному из пп.11-16, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения содержит и/или производит менее чем около 15 мг и более чем около 0,5 мг, предпочтительно более чем около 1 мг, а наиболее предпочтительно более чем 1,5 мг перекиси водорода на 1 г сухого вещества цист, причем указанное количество предпочтительно перемешано с цистами или нанесено на них в виде покрытия.
18. Цисты Artemia по п.17, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения содержит и/или производит менее чем около 10 мг и предпочтительно менее чем около 7,5 мг перекиси водорода на 1 г сухого вещества цист.
19. Цисты Artemia по любому из пп.11-18, отличающиеся тем, что они упакованы вместе с указанным количесттюь перекиси водорода и/или по крайней мере одного соединения, производящего перекись водорода при добавлении в среду выведения.
20. Цисты Artemia по п.19, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения заключено в дополнительную упаковку, отделяющую перекись водорода и/или указанное соединение от цист.
21. Цисты Artemia по п.19, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения заключено в ту же самую упаковку, что и цисты, и в частности перемешано с цистами или нанесено на них в виде покрытия.
Текст
1 Настоящее изобретение имеет отношение к созданию способа производства свободно плавающих науплиусов Artemia из заданного количества цист Artemia, содержащих диапаузные цисты, путем инкубации цист в среде выведения, при плотности, которая максимально составляет около 5 г сухого вещества цист на литр среды выведения, в течение заданного периода инкубации и в таких условиях, которые позволяют по меньшей мере части цист выводить и освобождать свободно плавающие науплиусы в течение этого заданного периода инкубации, причем в соответствии с указанным способом цисты вводят в контакт с перекисью водорода для нарушения диапаузы по меньшей мере в некотором числе указанных диапаузных цист, чтобы позволить им произвести свободно плавающиe науплиусы в течение этого заданного периода инкубации, что позволяет увеличить процент выведения инкубированных цист от Х% общего числа всех полных цист, когда цисты не введены в контакт с перекисью водорода,до более высокого, чем Х%, процента выведения, когда цисты введены в контакт с перекисью водорода. Науплиусы Artemia обычно используют в качестве живых питательных организмов в аквакультуре, а более конкретно как живую пищу на ранних личиночных стадиях разведения морской рыбы и креветок. Науплиусы Artemia в виде живой пищи не продаются на рынке, а имеются в виде цист Artemia, из которых могут быть выведены указанные науплиусы. Инкубацию цист проводят в среде выведения в течение инкубационного периода, который обычно не превышает 24 ч, так что каждый день может быть получена новая порция свободно плавающих науплиусов с использованием одной и той инкубационной инфраструктуры. В инцистированных эмбрионах или цистахArtemia эмбриональное развитие животного тормозится (или входит в диапаузу) на стадии гаструлы. Такие выделяемые самкой в водную среду диапаузные или спящие эмбрионы не будут далее развиваться в свободно плавающие науплиусы при воздействии условий окружающей среды, в других отношениях способствующих инкубации. Развитие будет восстановлено только тогда, когда механизмы управления диапаузой будут дезактивированы при помощи внешнего воздействия. Известно, что в природной среде воздействие холодом (в зимний период) и дегидратация приводят к окончанию диапаузы. После этого активированные эмбрионы могут продолжить развитие, если это позволяют условия инкубации. Диапаузные и находящиеся в покое цисты могут переносить длительные периоды обезвоживания (дегидратации) и аноксии (дефицита кислорода), а также крайние значения температур и давлений. В природной среде такая стойкость является стратегией выживания, так как 2 цисты часто являются единственной стадией жизни животного в данной среде обитания. Вне их природной среды, при достаточной дегидратации и надлежащем хранении, а именно в сухой среде, преимущественно при низких температурах и в отсутствие воздействия света и кислорода, цисты сохраняют жизнеспособность в течение длительного периода (несколько лет). Эта возможность продолжительного хранения и соответствующая возможность их получения в течение круглого года со склада, а также короткий инкубационный период, необходимый для производства свободно плавающих науплиусов,делает цисты наиболее удобным и наименее трудоемким источником живой пищи для аквакультуры (Van Stappen, 1996). В ходе обычной инкубации цист следует поддерживать такие абиотические параметры среды инкубации, как содержание соли, рН,концентрация кислорода и температура воды. Каждый из указанных параметров обсуждался в указанной публикации (Van Stappen, 1996), и были найдены диапазоны каждого из параметров для обеспечения оптимальной инкубации находящихся в покое цист (то есть максимального производства свободно плавающих науплиусов): соленость: 5-35 г растворенных солей на литр рН: 8 кислород:2 г на литр, а преимущественно 5 г на литр температура: 25-28 С Для облегчения восстановления развития эмбриона, в ходе инкубации интенсивность света у водной поверхности не должнa быть менее 2000 люкс. В указанной публикации далее указано, что наилучшие результаты могут быть получены в резервуарах для инкубации с коническим дном, когда плотность цист не превышает 2 г цист на литр. Цисты Artemia, предназначенные для дальнейшего использования в аквакультуре,собирают в природной среде. В таком собранном исходном продукте находящиеся в покое и диапаузные цисты присутствуют в различных пропорциях. Сухой готовый к применению коммерческий продукт получают после применения ряда процедур обработки. При проведении таких обработок исходный продукт очищают (удаляют из него отходы), промывают (удаляют из него соль), а затем сушат. При использовании стандартных технологий хранения стремятся копировать природные условия охлаждения зимой (хранение в охлаждаемых помещениях) и/или обезвоживания (сушка горячим воздухом как часть методики обработки),что, в основном, позволяет добиться дезактивации механизма диапаузы практически для всех индивидуальных цист. Общее качество данной пробы цист оценивают по ряду характеристик. Параметрами,которые наиболее часто принимают во внима 3 ние при оценке проб цист, являются чистота цист (например, фракция цист с нарушенными оболочками, процент загрязнений, таких как пустые оболочки, фрагменты оболочек, песок и/или другие остатки); биометрия цист и науплиусов (диаметр цист, длина и ширина науплиусов); питательная ценность науплиусов для личинок рыбы и креветки (например, содержаниеHUFA); загрязнение цист и, возможно, науплиусов токсичными веществами, такими как,например, тяжелые металлы и пестициды; и инкубируемость (выводимость) цист. С экономической точки зрения эта последняя характеристика наиболее часто принимается во внимание, так как она прямо дает количество живой пищи (науплиусов), которое может быть получено из данного количества цист в оптимальных условиях выведения. Эта характеристика может быть выражена при помощи ряда общепринятых параметров (см. публикацию Van Stappen,1996): процент выведения (Н%: число свободно плавающих науплиусов, которое получают из 100 полных цист), эффективность выведения(Heff: число свободно плавающих науплиусов,которое получают из 1 г цистового продукта),производительность выведения (Houtput: вес свободно плавающих науплиусов, который получают из 1 г цистового продукта). Взаимное сравнение и классификация проб (образцов) цист на базе характеристик выведения должны производиться в одинаковых экспериментальных условиях для каждой пробы. Указанные условия должны учитывать оптимальные диапазоны ряда критических абиотических параметров, которые обсуждены в указанной публикации (Van Stappen, 1996). Выведение происходит только для находящихся в покое цист в приемлемых условиях окружающей среды. Оно является результатом комплексных и интегрированных (объединенных) последовательностей событий, которые по общепринятому мнению могут быть сгруппированы в 3 различные фазы (Clegg and Conte, 1980). Первой фазой процесса выведения является так называемое предварительное развитие(развитие до появления на свет) (PED). В зависимости от условий инкубации PED продолжается около 6-18 ч (Clegg and Conte, 1980). Эта фаза заканчивается с разрывом оболочки цист,когда будущий науплиус становится частично видимым через разорванную стенку оболочки(Hofmann and Hand, 1990a). Эту стадию выведения цист называют E1-стадией (Nakanishi et al.,1962, Clegg and Conte, 1980). В течение фазыPED число клеток не возрастает (Nakanishi et al.,1962) и нет свидетельств синтеза ДНК (Nakanishiet al., 1963). Изменения эмбриона происходят на субклеточном уровне и включают в себя среди прочего созревание митохондрий, структурные,количественные и качественные изменения тромбоцитов желтка, активацию некоторых систем ферментов и частичное поглощение на 005276Hofmann and Hand, 1990b; Hand, 1993; Clegg, 1997). В течение второй фазы процесса выведения E1-стадия постепенно развивается и ориентировочно через 2 ч фаза PED завершается(Clegg and Conte, 1980), при этом науплиус становится видимым полностью. В этот момент развития эмбриона начинается так называемая Е 2-стадия, или стадия зонтика. На Е 2-стадии эмбрион окружен мембраной выведения, которая является также последней связью эмбриона с пустой теперь оболочкой цисты. После 2-4 ч дополнительной инкубации мембрана выведения разрывается, и теперь полностью развившаяся личинка науплиуса (науплиус N-1 стадии или науплиус первой стадии) освобождается в окружающей среду (действительное выведение, или третья фаза полного процесса выведения), Clegg and Conte (1980). Выводимость (измеряемая как Н%, Heff или Houtput) принимает во внимание (учитывает) окончательный результат процесса выведения, то есть наличие свободно плавающего науплиуса, при этом никакой информации не дается относительно различных фаз выведения, которые предшествуют появлению свободно плавающего науплиуса. В связи с этим выводимость не обязательно является индикатором жизнеспособности инцистированного эмбриона. Причины, по которым эмбрионы на E1-стадии(=после завершения PED) в некоторых случаях не могут перейти к стадии свободно плавающего науплиуса, чаще всего связаны с неадекватными условиями инкубации. Однако существуют и другие присущие цистам факторы, которые могут вызывать эту проблему (например,недостаточное количество накопленной энергии). Более того, в некоторых штаммах Artemia или в некоторых партиях одного и того же штамма существует большее или меньшее число эмбрионов, которые хотя и являются жизнеспособными, но не могут начинать PED и, следовательно, не могут достичь E1-стадии. Для таких штаммов или партий применяемые до настоящего времени виды обработки совершенно очевидно не позволяют дезактивировать диапаузу во всех индивидуальных цистах, поэтому, чтобы получить максимальное число свободно плавающих науплиусов, необходимы дополнительные и более специфические процедуры дезактивации диапаузы (Van Stappen,1996). Среди таких процедур можно указать длительное хранение на холоде сухих цист, повторные циклы гидрации-дигидрации, инкубацию в течение короткого промежутка времени в растворе специфического химиката (например,перекиси водорода). Эти технологии являются специфическими к штамму и партии, причем отклик цист на них зачастую является непостоянным. При осуществлении указанных процедур ненадлежащим образом (например, при проведении инкубации в химических растворах 5 при неадекватных комбинациях времени и дозы) могут быть получены даже неблагоприятные результаты. Указанные технологии применяют в дополнение к процедурам обработок,которые были применены ранее пользователем цист, что требует от него проведения большого объема работы и достаточных базовых знаний относительно цист Artemia в целом, а также наличия специфической информации относительно конкретного подвергающегося обработке штамма или партии. Отсутствие такой информации может служить причиной ошибок и/или нежелательных результатов. Не дружественная к пользователю природа этих специфических дополнительных технологий дезактивации диапаузы исключает одно из основных преимуществ цист Artemia, a именно то, что они являются источник легкодоступной свежей пищи для применения в аквакультуре. Способ увеличения процента выведения цист Artemia с использованием перекиси водорода, в том числе диапаузных цист раскрыт,например, в публикации Van Stappen et al.(1998). В соответствии с этим способом цисты предварительно гидрируют в водопроводной воде в течение периода от 30 до 180 мин, а затем производят их обработку в растворе перекиси водорода разбавленном деионизованной водой при концентрациях 1, 5, 10, 20 или 27 вес.%. После обработки в течение 1, 5, 10, 20 или 30 мин цисты собирают на сите, тщательно промывают водопроводной водой для удаления следов Н 2 О 2 и инкубируют в морской воде при стандартных условиях выведения, указанных в публикации Sorgeloos et al. (1986). Эта повторная инкубация цист в морской воде после удаления перекиси водорода является основной операцией в указанном известном способе, так как авторы указывают, что уровень примененной концентрации Н 2 О 2 обычно считается летальным для любой живой клетки. Недостатком указанного известного способа является необходимость тщательного контроля времени обработки и примененной концентрации перекиси водорода для достижения желательного результата. Более того, авторы наблюдали, что применение этого способа для различных штаммов Artemia или различных партий одного и того же штамма не приводит к одинаковой степени дезактивации диапаузы. Поэтому они предупреждают о риске обобщения при использовании этого способа. Другой недостаток заключается в том, что цисты должны быть переведены из среды гидрации в раствор перекиси водорода, а затем в среду выведения, что вызывает необходимость применения целого ряда дополнительных операций, которые к тому же следует проводить в заданные моменты времени. В связи с изложенным, задачей настоящего изобретения является создание нового способа,который предусматривает обработку цист пере 005276 6 кисью водорода для увеличения процента выведения без использования множества новых технологических и контрольных операций в дополнение к технологическим и контрольным операциям, которые необходимы для осуществления известного способа выведения. Для этого перекись водорода вносят в среду выведения в количестве, выбранном в диапазоне от 0,5 до 30 мг/л среды выведения, причем цисты инкубируют при максимальной плотности около 5 г сухого вещества цист на литр, для увеличения процента выведения от Х% до значения выше чем Х%. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что внесение таких малых количеств перекиси водорода в среду выведения позволяет нарушить диапаузу в диапаузных цистах и, следовательно, повысить процент выведения. Важное преимущество использования таких малых количеств перекиси водорода заключается в том, что не требуется обновлять среду выведения по истечении некоторого времени обработки, причем не требуется проводить после такой обработки дополнительные операции по нейтрализации перекиси водорода. В действительности, было обнаружено, что если просто оставить перекись водорода в среде выведения с цистами, то ее концентрация будет снижаться в результате химических реакций, которые протекают между самими цистами, когда при разрыве оболочек цист концентрация перекиси водорода снижается до уровня, безопасного для науплиусов. Добавление перекиси водорода в среду выведения уже известно само по себе из публикации Bogatova and Erofeeva (1985). В экспериментах, описанных в указанной статье, сухие цисты были инкубированы для выведения при плотностях 8, 10 и 15 г/л, причем перекись водорода добавляли в количествах 23, 33, 66, 99,132 и 247 мг/л. Полученные результаты показывают, что при 33, 66 и 99 мг/л H2O2 может быть получено существенное увеличение процента выведения. Однако авторы утверждают, что применение Н 2 О 2 в количестве 23 мг/л является недостаточным, а количество 132 и 247 мг/л приводят к большому числу мертвых науплиусов. Существенным недостатком способа в соответствии с указанной публикацией Bogatovaand Erofeeva (1985) является то, что он имеет ограниченное практическое применение в больших системах выведения; в соответствии с публикацией Van Stappen (1996), плотность цист может достигать 5 г/л для малых объемов(20 л), но должна быть снижена максимально до 2 г/л для больших объемов, чтобы свести к минимуму механическое повреждение науплиусов и избежать субоптимальных водных условий. По этой причине высокие плотности цист,указанные в публикации Bogatova and Erofeeva(1985), будут создавать большие проблемы в практических условиях, и в частности не позволяют обеспечить постоянное надежное произ 7 водство науплиусов. Более того, при оптимальных концентрациях Н 2 О 2, проверенных в публикации Bogatova and Erofeeva (1985), цисты будут выводить только в течение 48 ч, в то время как на практике они должны выводить в течение 24 ч, так чтобы каждый день могли быть получены свежие науплиусы с использованием одной и той же инфраструктуры выведения. Так как задачей исследования, описанного в публикации Bogatova and Erofeeva (1985), является снижение количества перекиси водорода, которое требуется для нарушения диапаузы для диапаузных цист (по сравнению с известными в то время способами, в которых цисты были активированы при помощи 1 кг Н 2 О 2 на кг сухих цист перед их выведением), то подразумеваются высокие плотности цист не только для снижения производственной площади поверхности, но и снижения количества перекиси водорода, необходимого для активации цист. Эта задача описана не только в статье Bogatova and Erofeeva, но также в документе SUA-935044. В экспериментах, описанных в этом документе, процент выведения определялся спустя 48 ч после инкубации. Они осуществлялись при плотности выведения 10 г цист на литр и при концентрациях перекиси водорода от 33 до 99 мг/л. Меньшие концентрации не использовались, так как тогда цисты не были бы полностью активированы. В соответствии с настоящим изобретением обнаружено, что при использовании более низких плотностей цист, в частности плотностей цист, составляющих 5 г сухого вещества цист на литр, или преимущественно меньших плотностей, предложенные в публикации Bogatova andErofeeva (1985) количества перекиси водорода для получения желательного увеличения процента выведения не обеспечивают такое увеличение процента выведения, а, скорее, уменьшают его. Кроме того, совершенно удивительным образом было обнаружено, что предложенные в публикации Bogatova and Erofeeva (1985) количества перекиси водорода, которые указаны как недостаточные для нарушения диапаузы для диапаузных цист, в способе в соответствии с настоящим изобретением, напротив, являются достаточными для нарушения диапаузы для диапаузных цист. Важным преимуществом способа в соответствии с настоящим изобретением является то, что, несмотря на тот факт, что цисты производят выведение в больших объемах среды выведения, позволяющих сделать способ эффективным в практических условиях, этот способ не требует применения больших количеств перекиси водорода для достижения требуемой ее концентрации в среде выведения. В действительности, представляется, что диапаузные цисты забирают необходимое для нарушения диапаузы количество перекиси водорода,вне зависимости от того, внесено ли это количество перекиси водорода в относительно малый 8 или большой объем среды выведения, так что,независимо от объема среды выведения, главным образом, одинаковое количество перекиси водорода требуется на 1 г цист. Способ, при котором перекись водорода добавляют в среду выведения для активирования цист Artemia, раскрыты также в SU 1472011. При этом способе цисты инкубируют с плотностью 10 г на литр среды выведения и на кг цист добавляют 10 г перекиси водорода. Основываясь на этих величинах, можно подсчитать, что на литр среды выведения вводится 100 мг перекиси водорода. Вновь гораздо большие значения плотности цист и концентрации перекиси водорода используются в этом известном способе. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления способа по настоящему изобретению выбранное количество перекиси водорода составляет менее чем 20 мг/л, а в частности ниже чем 15 мг/л, и более чем 1 мг/л, в частности выше чем 2 мг/л, а преимущественно выше чем 3 мг/л. Настоящее изобретение, кроме того, имеет отношение к цистам Artemia, которые предназначены для инкубации в среде выведения для производства свободно плавающих науплиусов,которые имеют процент выведения Х% от общего числа цист, при выведении в среде выведения в отсутствие перекиси водорода. Цисты характеризуются тем, что они скомбинированы вместе с заданным количеством перекиси водорода и/или по меньшей мере одного соединения,производящего перекись водорода при добавлении в среду выведения, причем указанное количество достаточно для ввода в среду выведения такого количества перекиси водорода, при котором процент выведения цист увеличивается с Х% до значения больше Х%. По сравнению с другими цистами, в частности цистами, которые содержат диапаузные и находящиеся в покое цисты, комбинация цист с перекисью водорода или соединением, производящим перекись водорода, в соответствии с настоящим изобретением преимущественно обеспечивает достижение более высокого процента выведения за счет добавки перекиси водорода и/или соединения, производящего перекись водорода в среде выведения. Так как указанная перекись водорода и/или указанное соединение образуют комбинацию с цистами, то исключаются неудобства для пользователя, связанные с раздельной закупкой и хранением индивидуальных компонентов, предназначенных для использования в способе инкубации. Предпочтительно, цисты и перекись водорода и/или соединение упаковывают вместе. Перекись водорода и/или соединение могут содержаться в отдельной упаковке, но предпочтительно их смешивают с цистами или наносят на них. В соответствии с предпочтительным вариантом упакованных цист в соответствии с настоящим изобретением указанное количество 9 перекиси водорода и/или указанного соединения определяют таким образом, что при добавке этого количества в среду выведения, в которой будет происходить инкубация упакованных цист, процент выведения цист увеличивается с Х% до указанного процента, большего, чем Х%. Этот преимущественный вариант устраняет необходимость проверки правильности и своевременности внесения доз добавок в данную партию цист. Так как оптимальные дозы могут быть различными для различных штаммов цист или партий одного и того же штамма,то комбинированная упаковка устраняет риск получения неоптимальных и даже неблагоприятных результатов, например риск сильной передозировки перекиси водорода или соединений, производящих перекись водорода, что сильно снижает выведение, или минимальной передозировки, которая замедляет выведение. Указанные ранее и другие характеристики изобретения будут более ясны из последующего детального описания некоторых конкретных вариантов способа выведения и упакованных цист в соответствии с настоящим изобретением,данных в качестве примера, не имеющего ограничительного характера и приведенного со ссылкой на сопроводительные чертежи. На фиг. 1 приведен график, который показывает изменение во времени (часы) процента выведения цист Artemia при добавлении 5 мг/л перекиси водорода в среду выведения, после начала инкубации цист Artemia, содержащих диапаузные цисты. На фиг. 2 приведен график, который показывает воздействие дозы перекиси водорода,добавленной в среду выведения, на выведение цист Artemia, содержащих диапаузные цисты. На фиг. 3 приведен график, который показывает снижение концентрации перекиси водорода в среде выведения, в которую было добавлено 8,5 мг/л перекиси водорода в зависимости от плотности цист в этой среде выведения. На фиг. 4 приведен график, который показывает процент выведения в зависимости от плотности цист в среде выведения, аналогичной использованной на фиг. 3, в которую было добавлено около 8,5 мг/л перекиси водорода. На фиг. 5 приведен график, аналогичный графику фиг. 3, и в той же среде выведения, в которую тоже было добавлено около 8,5 мг/л перекиси водорода, но для другой партии цистArtemia, которая содержит меньше диапаузных цист. На фиг. 6 приведен график, аналогичный графику фиг. 4, но для цист фиг. 5. Настоящее изобретение, главным образом,имеет отношение к созданию способа производства свободно плавающих науплиусов Artemia,начиная с цист Artemia, содержащих диапаузные цисты. Аналогично известным способам выведения, производят инкубацию цист в среде инкубации, в таких условиях, которые позволя 005276 10 ют цистам выводить и освобождать свободно плавающие науплиусы в течение заданного периода инкубации, который обычно составляет 1 день (24 ч). В течение этого инкубационного периода, который составляет 24 ч или меньше,по меньшей мере 90% цист, которые выводят(науплиусы) в течение инкубационного периода 48 ч, преимущественно выводят в течение инкубационного периода 24 ч. Инкубационный период начинается в тот момент, когда сухие(высушенные) цисты или цисты, которые хранились в солевом растворе (мокрые цисты), добавляют в среду выведения, которая содержит,по меньшей мере, воду, то есть когда начинается гидрация цист. Так как состав среды выведения и оптимальные условия выведения, главным образом, известны специалистам и описаны в литературе, в частности в упомянутой здесь ранее публикации Van Stappen (1996), то нет необходимости приводить здесь дополнительное описание среды выведения и указанных условий. Однако следует указать, что выведение цист может быть произведено также и в других условиях, которые несколько отличаются от указанных оптимальных условий. Например,выведение цист может быть произведено при температуре выше чем 28 С, например при температуре около 30 С, или в среде выведения,которая содержит более 35 г растворенных солей. Кроме того, несмотря на то, что плотность цист около 2 г/л или несколько меньше является предпочтительной в практических условиях,плотность цист может быть также выше чем 2 г/л,однако, в соответствии с настоящим изобретением она не должна быть выше чем около 5 г/л. Существенной характеристикой способа в соответствии с настоящим изобретением также является то, что заданное количество перекиси водорода вносят в среду выведения, а более конкретно вносят количество перекиси водорода, которое составляет от 0,5 до 30 мг/л. Это количество выбирают таким образом, что происходит эффективное нарушение диапаузы по меньшей мере для некоторого числа диапаузных цист Artemia, что позволяет также таким диапаузным цистам производить свободно плавающие науплиусы в течение инкубационного периода. В том случае, когда цисты содержат порцию диапаузных цист, то процент выведения увеличивается от Х% от общего числа всех цист, когда цисты выводят в среде выведения, в которую не вносили перекись водорода, до процента выведения, более высокого, чем Х%, когда цисты выводят в среде выведения, содержащей перекись водорода. Следует иметь в виду, что в соответствии со способом по настоящему изобретению по меньшей мере одна порция диапаузных цист будет выводить, однако,не обязательно все диапаузные цисты, которые были добавлены в среду выведения, однако,преимущественно возможно большее число диапаузных цист будет выводить. 11 В отличие от известных ранее способов,используют 1 вес.% или больше перекиси водорода для увеличения процента выведения при обработке сухих цист перед их выведением,причем увеличение процента выведения в способе в соответствии с настоящим изобретением достигнуто за счет обеспечения относительно низкой концентрации перекиси водорода в среде выведения, а более конкретно такой концентрации перекиси водорода, которая не требует промывки, так как она снижается до безопасной концентрации для науплиусов, когда они достигают Е 1-стадии развития. Поэтому преимущество способа в соответствии с настоящим изобретением состоит в том, что не нужно обновлять среду выведения после проведения обработки при помощи перекиси водорода, причем не следует удалять или нейтрализовать перекись водорода после проведения такой обработки. Это,главным образом, вызвано отбором перекиси водорода цистами, а также относительно малым количеством перекиси водорода, которое внесено в среду, по сравнению с количеством выводимых в ней цист. Необязательно, соединение,которое усиливает нейтрализацию перекиси водорода, может быть добавлено после периода заданной обработки в среду выведения, в частности, после завершения фазы PED, или же среда выведения может быть обновлена. Однако такая нейтрализация или обновление среды не являются необходимыми в способе в соответствии с настоящим изобретением. В способе в соответствии с настоящим изобретением перекись водорода может быть внесена в среду выведения в начале инкубационного периода, в частности одновременно с добавкой в указанную среду цист. Как уже было упомянуто здесь ранее, это может быть в случае, когда создающее перекись водорода соединение перемешано с сухими цистами. Перекись водорода может быть также внесена в среду выведения перед добавкой в нее цист. В этом случае под количеством перекиси водорода в среде выведения понимается количество перекиси водорода, которое содержится в ней, когда туда добавлются цисты, поскольку после добавления перекиси водорода часть его могла быть выведена. Вместо внесения перекиси водорода в полный объем среды выведения, она может быть внесена первоначально в порцию среды выведения, которую позднее разбавляют для получения окончательного объема среды выведения. В этом случае количество добавленной или внесенной в среду выведения перекиси водорода выражают в мг на литр окончательного объема среды выведения, в которой цисты инкубируют при максимальной плотности, составляющей около 5 г сухого вещества цист на литр. В первой порции среды выведения, в которую первоначально вносят перекись водорода, может быть достигнут более высокий уровень перекиси водорода, который, однако, не является 12 летальным для цист. Поэтому цисты могут быть добавлены в эту порцию среды выведения. Перед тем, как цисты становятся чувствительными к уровню перекиси водорода в результате процесса выведения, например в течение 1 ч после добавления цист, порцию среды выведения следует разбавить при помощи дополнительного объема среды выведения, чтобы получить окончательный объем среды выведения, в которой происходит инкубация цист при максимальной плотности, составляющей около 5 г сухого вещества цист на литр. Следует иметь в виду, что в первой порции среды выведения не будет такого же состава, как в окончательной среде выведения, причем в этой порции вода может иметь, например, меньшее содержание солей,чем морская вода, при этом это может быть водопроводная вода. При внесении перекиси водорода не одновременно с цистами в среду выведения ее вносят преимущественно в течение промежутка менее 10 ч, а еще лучше менее 8 ч,после начала инкубационного периода. Наилучшее воздействие на процент выведения достигается в том случае, когда перекись водорода вносят в среду выведения в течение промежутка менее 6 ч, а еще лучше менее 5 ч, после начала инкубационного периода. Следует иметь в виду,что не нужно сразу вносить все количество перекиси водорода в среду выведения, а нужно производить внесение несколько раз. На фиг. 1 приведен график, который показывает изменение во времени (часы) процента выведения (Н%) после добавления в среду выведения 5 мг/л Н 2 О 2. В этом примере было использовано несколько воронок емкостью 1 л, в которых проводили инкубацию в отфильтрованной морской воде (35 ppt) 2 г цист Artemia одной и той же партии, содержащих диапаузные цисты (содержание влаги: 7,5%). Температуру воды в воронках поддерживали около 30 С, воду постоянно аэрировали и освещали. Для проведения различных видов обработки в среду выведения добавляли 5 мг Н 2 О 2 в различные моменты времени (от 0 до 10 ч) после начала инкубации цист. Каждый вид обработки дублировали и результаты обработки усредняли для дублей. Из рассмотрения фиг. 1 можно сделать вывод о том, что в этом примере добавление Н 2 О 2 ориентировочно через 4 ч после начала инкубации дает наибольшее увеличение процента выведения, измеренного через 24 ч. Количество перекиси водорода, которое следует вносить в соответствии с настоящим изобретением в среду выведения для получения максимального процента выведения, меняется от штамма к штамму или от партии к партии цист. Как правило, это количество ниже чем 30 мг/л, в частности ниже чем 20 мг/л и преимущественно ниже чем 15 мг/л, но выше чем 1 мг/л, в частности выше чем 2 мг/л и преимущественно выше чем 3 мг/л. Для одной и той же плотности цист в среде выведения это количество зависит 13 среди прочего от числа диапаузных цист и, в особенности, от глубины диапаузы, то есть от стадии диапаузы. Количество перекиси водорода, которое следует вносить в среду выведения для увеличения процента выведения, в частности оптимальное количество перекиси водорода, обеспечивающее максимальный процент выведения М%, может быть определено с использованием нескольких проб цист путем их выведения,главным образом, в идентичных условиях (одинаковые температура, содержание соли, плотность цист, и т.п.), в средах выведения, которые отличаются друг от друга количеством перекиси водорода в единице объема среды. После этого могут быть определены проценты выведения для различных количеств перекиси водорода и найдены количества перекиси водорода, которые дают желательное увеличение процента выведения, в частности оптимальное количество перекиси водорода, которое дает самый высокий процент выведения М%. Вместо поиска количества перекиси водорода, которое дает самый высокий процент выведения М%, можно также находить количество перекиси водорода,которое дает меньший процент выведения, в частности процент выведения, который по меньшей мере равен Х%+0,4(М-X)%(X%=процент выведения без добавления H2O2) и преимущественно по меньшей мере равен Х%+0,6(M-X)%,причем преимущественно следует выбрать такое количество перекиси водорода, которое будет, главным образом, соответствовать тому количеству перекиси водорода, которое дает самый высокий процент выведения М%. На фиг. 2 приведен график, который показывает воздействие дозы перекиси водорода,добавленной в среду выведения, на процент выведения (Н%) партии цист Artemia, содержащих диапаузные цисты. В этом примере было использовано несколько воронок емкостью 1 л,в которых проводили инкубацию 2 г цист Artemia с содержанием влаги 8,3%, при тех же условиях выведения, которые описаны выше для фиг. 1 (морская вода при температуре около 30 С, при постоянной аэрации и освещении). Перекись водорода была добавлена сразу после начала инкубации цист. В разные воронки добавляли разное количество Н 2O2, в диапазоне от 0 до 30 г/л. Здесь также каждый вид обработки дублировали и результаты обработки усредняли для дублей. Из рассмотрения фиг. 2 можно сделать вывод о том, что для использованной партии цистArtemia оптимальное количество перекиси водорода составляет около 12 мг/л (=млн-1) Н 2 О 2 и приводит к увеличению процента выведения ориентировочно от 22% (=Х%) до ориентировочно 76% (=М%). При превышении этой концентрации перекись водорода токсично воздействует на науплиусы Artemia и вновь вызывает снижение процента выведения. 14 В дополнение к взаимным различиям между разными штаммами или партиями цист, в соответствии с настоящим изобретением было также обнаружено, что оптимальное количество перекиси водорода, которое следует вносить в среду выведения для достижения самого высокого процента выведения, зависит также от плотности цист в среде выведения. В частности,было обнаружено, что чем выше плотность цист, тем больше следует вносить перекиси водорода на единицу объема среды выведения. В способе в соответствии с настоящим изобретением плотность цист, самое большее, составляет 5 г сухого вещества цист на литр и преимущественно составляет менее 4 г сухого вещества цист на литр, предпочтительно менее 3 г сухого вещества цист на литр и в самом лучшем случае около 2 г сухого вещества цист на литр или еще меньше. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что чем выше плотность цист, тем большее количество перекиси водорода отбирается цистами и тем больше следует вносить перекиси водорода на единицу объема среды выведения. В следующем примере производили инокуляцию нескольких воронок емкостью 1 л различными количествами цист, содержащих диапаузные цисты (содержание влаги: 8%), что соответствует плотностям 0,5, 1, 2, 3 и 4 г сухого вещества цист на литр. Для каждой испытуемой плотности цист первый комплект воронок не имел перекиси водорода, в то время как во второй комплект воронок добавляли около 8,5 мг/л перекиси водорода в момент начала инкубации. Каждую комбинацию плотности цист и перекиси водорода при проведении эксперимента дублировали. Кроме 20 воронок для проведения экспериментальных обработок использовали 2 контрольные воронки для проведения контрольных обработок, которые содержали только среду выведения и около 8,5 мг/л перекиси водорода. Во всех воронках использовали отфильтрованную морскую воду 35 ppt. В ходе экспериментов воду постоянно аэрировали, освещали и поддерживали ее температуру постоянной на уровне около 30 С. В данном примере концентрацию перекиси водорода в каждой воронке измеряли с интервалами 30 мин до истечения 4,5 ч от начала инкубации. На кривых фиг. 3 показаны для каждой экспериментальной обработки остаточные количества перекиси водорода в моменты измерения, которые получены при уменьшении средних значений двух дублей на количество, равное среднему значению двух контрольных проб. Результаты выведения для экспериментальных обработок в виде усредненных для дублей значений были подсчитаны через 24 ч инкубации (фиг. 4). Фиг. 3 четко показывает, что снижение количества перекиси водорода зависит от плотности цист. Количество 8,5 мг/л Н 2 О 2 представляется слишком низким для плотности 4 г/л, так как по ис 15 течении 4,5 ч перекись водорода уже исчезает почти полностью. Нашли, что это должно происходить преимущественно по истечении 8 ч. Так как это может быть в случае плотности 2 г сухого вещества цист на литр, то можно ожидать, что количество 8,5 мг/л будет оптимальным количеством при этой плотности, в то время как при меньшей плотности количество 8,5 мг/л будет слишком высоким. На фиг. 4 приведен график, который показывает воздействие перекиси водорода на процент выведения в зависимости от плотности цист в среде выведения. Результаты выведения представлены в виде процента выведения (Н%: число свободно плавающих науплиусов, которое получают от 100 полных цист) или эффективного процента (Е%: полное число свободно плавающих науплиусов, Е 2- и Е 1-стадии, которое получено от 100 полных цист). На фиг. 4 показано, что при обработке без перекиси водорода партия цист имеет процент выведения около 20%. При добавлении 8,5 мг Н 2 О 2 на литр среды выведения процент выведения может достигать ориентировочно 70% для плотности 2 г/л. При более низких плотностях стадии Е 1 и Е 2 больше не развиваются по причине слишком высокой концентрации перекиси водорода, которая остается в среде выведения. Когда Е%,главным образом, превышает Н%, тогда имеется передозировка перекиси водорода. При более высоких плотностях концентрация 8,5 мг/л не является достаточно высокой для получения оптимальных результатов выведения. На фиг. 5, которая является аналогичной фиг. 3, показано снижение содержания Н 2 О 2 в среде выведения в зависимости от плотности цист, но для другой партии. На фиг. 6, которая является аналогичной фиг. 4, показаны проценты выведения и эффективные проценты, полученные для различных плотностей указанной партии цист. Выведение цист проводили в таких же условиях, как и в предыдущем примере, и добавляли сравнимое количество Н 2 О 2, а именно около 8,5 мг Н 2 О 2 на литр среды выведения. Из рассмотрения фиг. 5 можно сделать вывод о том, что теперь цисты вызывают значительно меньшее снижение концентрации перекиси водорода в среде выведения, причем слишком много перекиси водорода остается в среде выведения на стадии Е 1 выведения науплиусов. На фиг. 6 показано, что для этой партии цист нормальный процент выведения (Н%) составляет около 65%, так что эта партия цист содержит значительно меньше диапаузных цист, чем в предыдущем примере. По всей видимости, диапаузные цисты отбирают больше перекиси водорода, чем находящиеся в покое цисты. Из рассмотрения фиг. 6 можно сделать вывод о том, что количество перекиси водорода было слишком высоким, даже для плотности цист 4 г/л, так как процент цист, которые производят свободно плавающие науплиусы (=N1-стадия), 005276 16 был меньше, чем при отсутствии добавки перекиси водорода. За счет того факта, что полное количество Е 1-стадии, Е 2-стадии и N1-стадии тем не менее возросло, может быть получен увеличенный процент выведения с использованием меньшего количества перекиси водорода. Требуемое количество перекиси водорода может быть внесено в среду выведения за счет добавления в нее раствора перекиси водорода. Однако в способе в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы соединения, производящие перекись водорода при их внесении в среду выведения, в частности производящие перекись водорода соединения, которые имеют пероксидные связи, такие как пероксиды (перекиси), пербораты, персульфаты и перацетаты. Наиболее предпочтительными производящими перекись водорода соединениями являются перекись магния и, в особенности,перекись кальция. Эти соединения имеются в виде твердых веществ, которые содержат обычно от 50 до 70% по весу активного вещества. Преимущество использования таких твердых веществ состоит в том, что они могут быть перемешаны с сухими цистами перед упаковкой цист в банки. Дополнительным преимуществом перекиси магния и перекиси кальция перед другими твердыми веществами является их более высокая стабильность, например, по сравнению с перборатами или персульфатами (калия или натрия), так что даже при хранении банок при относительно высоких температурах в течение практически применяемых промежутков времени способность такого соединения магния и кальция к производству требуемого количества перекиси водорода при добавлении в среду выведения существенно не снижается, причем не происходит существенного выделения газообразного кислорода, который мог бы снижать срок хранения упакованных цист. В описанных здесь ранее примерах для определения оптимального количества перекиси водорода, которое следует вносить в среду выведения для достижения максимального процента выведения, внесение перекиси водорода в указанную среду производят при помощи непосредственного добавления в нее раствора перекиси водорода. Когда на практике используют другое соединение или вещество, производящее перекись водорода в среде выведения, тогда следует произвести расчет необходимого количества такого соединения или вещества или произвести его определение при помощи простого титрования, наприме, при помощи перманганата калия, который входит в реакцию с перекисью водорода в среде выведения в соответствии со следующим выражением: 2KМnO4+3H4SO4+5 Н 2O25 О 2+2MnSO4+K2SO4+8H2O Альтернативно, тесты для определения количества производящего перекись водорода соединения или вещества могут быть выполнены 17 непосредственно над таким соединением, тогда никакого преобразования не требуется. Цисты, которые предназначены для использования в способе в соответствии с настоящим изобретением, преимущественно хранятся в упаковке, а в частности в банках, и перемешаны с заданным количеством перекиси водорода и/или по меньшей мере одного соединения,производящего перекись водорода при его добавлении в среду выведения. Примеры таких соединений даны здесь ранее. Количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения должно быть по меньшей мере достаточно для внесения указанных выше количеств перекиси водорода в среду выведения, при добавлении в нее упакованных цист(цист из упаковки), при плотности, которая составляет, самое большее, около 5 г сухого вещества цист на литр. Количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения, объединенного с цистами, преимущественно выбирают таким образом, что при добавлении этого количества в среду выведения, в которой должна происходить инкубация упакованных цист, в нее вносится требуемое количество перекиси водорода. За счет этого заданное количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения может быть просто добавлено вместе с цистами в среду выведения, без измерения количества отдельных компонентов. Более конкретно, количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения выбирают таким образом, что при добавлении этого количества в объем среды выведения, в которой должна происходить инкубация упакованных цист, количество внесенной в указанную среду перекиси водорода составляет от 0,5 до 30 мг/л. Как уже было объяснено здесь ранее, это количество более конкретно выбирают в указанном диапазоне таким образом, чтобы увеличить процент выведения от Х% полного числа цист, когда выведение цист происходит в отсутствиe перекиси водородa, до процента выведения, более высокого, чем Х%, когда выведение цист производят в присутствии этого количества перекиси водорода. Количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения преимущественно выбирают таким образом, что когда выведение цист производят в присутствии внесенного за счет указанного количества в среду выведения заданного количества перекиси водорода, тогда процент выведения по меньшей мере равен Х%+0,4(М-Х)%, преимущественно по меньшей мере равен Х%+0,6(М-Х)%, а еще лучше, главным образом, равен М%. Как уже было объяснено здесь ранее, М% представляет собой максимальный процент выведения, который может быть достигнут при использованных условиях выведения, когда вносят оптимальное количество перекиси водорода в среду выведения. 18 В соответствии с настоящим изобретением нашли, что оптимальное количество перекиси водорода в среде выведения сильно зависит от плотности цист. Из проведенных авторами настоящего изобретения экспериментов совершенно неожиданно выясняется, что цисты, и в частности диапаузные цисты, отбирают требуемое количество перекиси водорода практически независимо от концентрации перекиси водорода в среде выведения. Это означает, что не следует применять высокую плотность цист для экономии перекиси водорода, так как при меньшей плотности цист, то есть при использовании большего объема среды выведения, должны быть обеспечены более низкие концентрации перекиси водорода. В зависимости от числа диапаузных цист, глубины диапаузы и других различий от партии к партии или от штамма к штамму, количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения должно содержать и/или производить более чем 0,5 мг, предпочтительно более 1 мг, наиболее предпочтительно более 1,5 мг перекиси ворода на грамм сухого вещества цист, но менее 15 мг,предпочтительно менее 10 мг и особенно предпочтительно менее 7,5 мг перекиси водорода на грамм сухого вещества цист. На практике цисты никогда не бывают абсолютно сухими, и, следовательно, в зависимости от содержания воды в цистах (которое обычно менее 10%), соответствующее количество перекиси водорода на грамм цист несколько меньше. Количество перекиси водорода и/или производящего перекись водорода соединения может храниться в совместной с цистами дополнительной упаковке, но отдельно от них. Предпочтительно, перекись водорода и/или производящее перекись водорода соединение упаковывают вместе с цистами, например фиксируют внутри упаковки цист. Например, при использовании раствора перекиси водорода он может содержаться в стеклянном или пластмассовом сосуде (бутылке), который может быть упакован вместе с цистами в банку. При использовании твердого производящего перекись водорода соединения это соединение может быть непосредственно перемешано с цистами, причем оно может иметь вид порошка, гранул или таблеток или любой другой формы твердого вещества. Само собой разумеется, что это соединение может иметь вид капсул, перемешанных с цистами. Альтернативно, производящее перекись водорода соединение может быть нанесено на цисты в виде покрытия. СсылкиArch. Hydrobiol. Spec. Issues Advanc. Limnol. 52,p. 281-296. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ производства свободно плавающих науплиусов Artemia из цист Artemia, содержащих диапаузные цисты, путем инкубации цист в среде выведения, при плотности, которая максимально составляет около 5 г сухого вещества цист на литр среды выведения, в течение заданного периода инкубации и в таких условиях, которые позволяют по меньшей мере части цист выводить и освобождать свободно плавающие науплиусы в течение заданного периода инкубации, причем цисты вводят в контакт с 20 перекисью водорода для нарушения диапаузы по меньшей мере в некотором числе указанных диапаузных цист, чтобы позволить им произвести свободно плавающиe науплиусы в течение этого заданного периода инкубации, причем перекись водорода вносят в среду выведения в количестве, выбранном в диапазоне от 0,5 до 30 мг на литр среды выведения, в которой проводят инкубацию. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что выбранное количество перекиси водорода составляет менее 20 мг/л, в частности менее 15 мг/л, и более чем 1 мг/л, в частности более чем 2 мг/л, а преимущественно более чем 3 мг/л. 3. Способ по одному из пп.1-2, отличающийся тем, что выведение цист в среде выведения проводят при плотности менее 4 г сухого вещества цист на литр, в частности менее 3 г сухого вещества цист на литр, а преимущественно при плотности около 2 г или менее сухого вещества цист на литр. 4. Способ по одному из пп.1-3, отличающийся тем, что цисты содержат такое количество диапаузных цист, что, за счет внесения оптимального количества перекиси водорода в среду выведения процент выведения может быть увеличен от Х% до максимального процента выведения М%, причем указанное количество перекиси водорода выбирают в указанном диапазоне таким образом, чтобы увеличить процент выведения от Х% до процента выведения, который по меньшей мере равен Х%+0,4(М-X)%, а преимущественно до процента выведения, который по меньшей мере равен Х%+0,6(М-X)%. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанный максимальный процент выведения определяют путем отбора выбранного числа проб цист, выведения этих проб в средах выведения, которые различаются друг от друга внесенным на единицу объема среды количеством перекиси водорода, выбранным в указанном диапазоне, путем нахождения процента выведения для разных количеств перекиси водорода и путем выбора самого высокого процента выведения среди найденных процентов выведения. 6. Способ по одному из пп.1-3, отличающийся тем, что для выбора указанного количества перекиси водорода отбирают ряд проб цист, производят выведение указанных проб в средах выведения, которые различаются друг от друга количеством перекиси водорода, внесенным на единицу объема среды, выбранным в указанном диапазоне, находят проценты выведения для разных количеств перекиси водорода и максимальный процент выведения М% среди этих процентов выведения и выбирают количество перекиси водорода, которое увеличивает процент выведения от Х% до значения выше чем Х%, в частности выбирают количество перекиси водорода, которое дает максимальный процент выведения М% или процент выведения,по меньшей мере равный Х%+0,4(М-X)%, а 21 преимущественно по меньшей мере равный Х%+0,6(М-X)%, причем количество вносимой перекиси водорода преимущественно выбирают, главным образом, соответствующим указанному количеству перекиси водорода, которое дает максимальный процент выведения М%. 7. Способ по одному из пп.1-6, отличающийся тем, что перекись водорода вносят в среду выведения путем добавления в эту среду перекиси водорода и/или по меньшей мере одного соединения, производящего перекись водорода в среде выведения, причем перекись водорода преимущественно вносят в среду выведения путем добавления в эту среду по меньшей мере одного производящего перекись водорода соединения, которое имеет пероксидную связь и выбрано из группы, в которую входят пероксиды, пербораты, персульфаты, перацетаты или их комбинации, при этом производящее перекись водорода соединение наиболее предпочтительно включает в себя пероксид кальция и/или пероксид магния. 8. Способ по одному из пп.1-7, отличающийся тем, что перекись водорода вносят в среду выведения менее чем за 10 ч, преимущественно менее чем за 8 ч, предпочтительно менее чем за 6 ч и наиболее предпочтительно менее чем за 5 ч после начала инкубации в ней цист. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что перекись водорода вводят в среду выведения, в основном, одновременно с цистами, в частности путем смешения с цистами и/или нанесения на цисты в виде покрытия. 10. Способ по одномуиз пп.1-9, отличающийся тем, что заданный инкубационный период представляет собой период около 24 ч или меньше, причем по меньшей мере 90% цист,которые выводят в течение инкубационного периода 48 ч, выводят в течение этого заданного инкубационного периода. 11. Цисты Artemia, предназначенные для инкубации в среде выведения для производства свободно плавающих науплиусов, имеющие процент выведения Х% от общего числа полных цист при выведении в среде выведения в отсутствие перекиси водорода, отличающиеся тем,что они упакованы вместе с количеством перекиси водорода и/или по меньшей мере одного соединения, производящего перекись водорода при его добавлении в среду выведения, причем указанное количество достаточно для внесения такого количества перекиси водорода в среду выведения, при котором процент выведения цист увеличивается с Х% до процента выведения большего, чем Х%, когда это количество перекиси водорода добавляют в среду выведения. 12. Цисты Artemia по п.11, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения, производящего перекись водорода, определяется таким образом, что когда это количество добавляют в 22 среду выведения, процент выведения цист увеличивается от Х% до процента выведения большего, чем Х%. 13. Цисты Artemia по п.11 или 12, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения,производящего перекись водорода, определяется таким образом, что когда это количество добавляют в среду выведения, количество перекиси водорода составляет от 0,5 до 30 мг/л. 14. Цисты Artemia по любому из пп.11-13,отличающиеся тем, что они предназначены для инкубации в среде выведения с предопределенной плотностью около 5 г или менее сухого вещества цист на литр. 15. Цисты Artemia по одному из пп.11-14,отличающиеся тем, что содержат такое количество диапаузных цист, что при внесении оптимального количества перекиси водорода в среду выведения процент выведения может быть увеличен от Х% до максимального процента выведения М%, причем указанное количество перекиси водорода таково, что при выведении цист в его присутствии процент выведения по меньшей мере равен Х%+0,4(М-X)%, а преимущественно по меньшей мере равен Х%+0,6(М-X)%. 16. Цисты Artemia по одному из пп.11-15,отличающиеся тем, что находятся в комбинации с определенным количеством по меньшей мере одного соединения, производящего перекись водорода при добавлении в среду выведения,причем указанное по меньшей мере одно производящее перекись водорода соединение имеет пероксидную связь и преимущественно выбрано из группы, в которую входят пероксиды, пербораты, персульфаты, перацетаты или их комбинации, при этом производящее перекись водорода соединение наиболее предпочтительно включает в себя пероксид кальция и/или пероксид магния. 17. Цисты Artemia по одному из пп.11-16,отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения содержит и/или производит менее чем около 15 мг и более чем около 0,5 мг, предпочтительно более чем около 1 мг, а наиболее предпочтительно более чем 1,5 мг перекиси водорода на 1 г сухого вещества цист, причем указанное количество предпочтительно перемешано с цистами или нанесено на них в виде покрытия. 18. Цисты Artemia по п.17, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения содержит и/или производит менее чем около 10 мг и предпочтительно менее чем около 7,5 мг перекиси водорода на 1 г сухого вещества цист. 19. Цисты Artemia по любому из пп.11-18,отличающиеся тем, что они упакованы вместе с указанным количеством перекиси водорода и/или по крайней мере одного соединения, производящего перекись водорода при добавлении в среду выведения. 20. Цисты Artemia по п.19, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения заключено в дополнительную упаковку, отделяющую перекись водорода и/или указанное соединение от цист. 21. Цисты Artemia по п.19, отличающиеся тем, что указанное количество перекиси водорода и/или указанного соединения заключено в ту же самую упаковку, что и цисты, и в частности перемешано с цистами или нанесено на них в виде покрытия.
МПК / Метки
МПК: A01K 61/00
Метки: плавающих, производства, способ, использования, цисты, науплиусов, упакованные, свободно, способе, этом, artemia
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/13-5276-sposob-proizvodstva-svobodno-plavayushhih-naupliusov-artemia-i-upakovannye-cisty-dlya-ispolzovaniya-v-etom-sposobe.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способ производства свободно плавающих науплиусов artemia и упакованные цисты для использования в этом способе</a>
Предыдущий патент: Способ прогнозирования преэклампсии и других заболеваний
Следующий патент: Вспученные перлиты с направленным распределением частиц по размерам
Случайный патент: Способ и система для установки оборудования в скважине