Ликопиновые композиции для лечения атеросклеротических состояний

013465 Область техники Настоящее изобретение относится к производству соединений, пригодных для лечения атеросклеротических и сердечно-сосудистых нарушений, в особенности соединений, ингибирующих активность абзимов, окисляющих липиды. Предпосылки изобретения Окисление липидов представляет собой один из основных процессов, приводящих к превращению циркулирующих в крови липопротеинов в высокоатерогенные факторы [Goto Y. (1982) ранее, Halliwell В. и J.M.С. Gutteridge, (1989) ранее, Schultz D. и Harrison D.G. (2000) ранее]. Главной причиной окисления липидов являются каталитические антитела или абзимы (см. WO 03/017992, WO 03/019196 иWO 03/019198), обнаруженные в атеросклеротических поражениях и в сыворотке индивидуумов с атеросклеротическими состояниями. Указанные абзимы (также известные как AtheroAbzymes) образуются в ответ на хламидийную инфекцию и дают перекрестную реакцию с циркулирующими липопротеинами,образуя окисленные атерогенные факторы. AtheroAbzymes представляют собой основной патогенный фактор в развитии атеросклероза и являются важной мишенью для терапевтического воздействия на сердечно-сосудистые и связанные с атеросклерозом состояния. Краткое описание изобретения В настоящее время неожиданно обнаружено, что соединения, в частности амфипатические или липофильные соединения-антиоксиданты, которые проявляют невысокую ингибиторную активность или вовсе не проявляют ингибиторной активности по отношению к абзимам, можно превратить в мощные ингибиторы абзимов путем повышения их растворимости в водных растворителях, например, смешивая их с солюбилизирующими агентами. В одном из аспектов настоящее изобретение обеспечивает способ идентификации и/или получения соединения, пригодного для лечения атеросклеротического состояния, включающий приведение в контакт абзима, окисляющего липиды, с композицией, содержащей исследуемое соединение и солюбилизирующий агент, и определение ингибирования активности абзима указанной композицией. Ингибирование активности абзима свидетельствует о том, что указанное соединение может быть пригодно для лечения атеросклеротического состояния, такого как ишемическая болезнь сердца (ИБС). Присутствие солюбилизирующих агентов повышает способность исследуемых соединений ингибировать активность абзимов. Например, исследуемое соединение может проявлять ингибирование в незначительной степени или вовсе не проявлять способности ингибировать активность абзимов в отсутствие солюбилизирующего агента. Подходящие исследуемые соединения включают негидрофильные антиоксиданты, например каротиноиды, такие как ликопин. Подходящие солюбилизирующие агенты включают растворимые белки,например лактопротеины. В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ увеличения способности исследуемого соединения ингибировать абзимы, окисляющие липиды, включающий смешивание исследуемого соединения с солюбилизирующим агентом. В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ получения композиции для применения при лечении атеросклеротического состояния, включающий: смешивание негидрофильного антиоксиданта, например каротиноида, такого как ликопин, с солюбилизирующим агентом например, растворимым белком, таким как лактопротеин. В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает применение композиции, содержащей солюбилизирующий агент и негидрофильный антиоксидант, для получения лекарства для лечения атеросклеротического состояния. В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает композицию, которая содержит солюбилизирующий агент и негидрофильный антиоксидант, для лечения атеросклеротического состояния. В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ лечения атеросклеротического состояния, включающий введение индивидууму композиции, которая содержит солюбилизирующий агент и негидрофильный антиоксидант. В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ изготовления композиции для применения при лечении атеросклеротического состояния, включающий: смешивание солюбилизирующего агента и негидрофильного антиоксиданта. Методы лечения, включающие введение описанных в данном изобретении композиций, могут приводить к уменьшению активности абзимов, окисляющих липиды в сосудистой системе индивидуума, тем самым улучшая или облегчая симптомы атеросклеротического состояния. В некоторых вариантах реализации описанный в данном изобретении способ может дополнительно включать стадию определения активности абзимов, окисляющих липиды, в образце, полученном от индивидуума, перед началом, во время и/или по окончании указанного лечения.-1 013465 Описание таблиц Табл. 1 показывает действие различных композиций, содержащих ликопин, на его активность в отношении ингибирования абзимов. Табл. 2 показывает вопросник Роуза-Блэкберна. Табл. 3 показывает действие лактоликопина на уровень активности абзимов, окисляющих липиды,и тяжесть заболевания у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС). Табл. 4 показывает сравнительное действие другого препарата ликопина, Lyc-O-Mato, на уровень активности абзимов, окисляющих липиды, и тяжесть заболевания у пациентов с ИБС. Табл. 5 показывает сравнительное действие на уровень активности абзимов, окисляющих липиды,пищевых основ из хлеба или лепешки, включающих либо лактоликопин (INNEOV), либо Lyc-O-Mato. Подробное описание изобретения Соединения, применяемые в сочетании с солюбилизирующим агентом для лечения атеросклеротических состояний, можно идентифицировать путем приведения в контакт абзима, окисляющего липиды,с композицией, которая содержит исследуемое соединение и солюбилизирующий агент, и определения ингибирования активности абзима указанной композицией. Абзим, окисляющий липиды (или AtheroAbzyme), представляет собой каталитическое антитело, в частности молекулу IgG, которое связывается с липидами и катализирует их окисление. Абзимы, окисляющие липиды, организм может производить в ответ на хламидийную инфекцию, и они могут связываться или вступать в реакцию с хламидийными клетками, т.е. абзимы могут катализировать окисление хламидийных клеток. Абзимы, окисляющие липиды, связывают и окисляют хламидийные клетки, такие как клетки Chlamydia pneumoniae человека или клетки видов хламидий, поражающих овец, относящихся к группе Chlamydia psittaci, которая включает Chlamydia psittaci и Chlamydia pneumoniae. Абзимы, связывающие и окисляющие хламидийные клетки, могут давать перекрестную реакцию с липопротеинами организмахозяина и по этой причине являются мощными атерогенными агентами. Подходящие абзимы, окисляющие липиды, можно получить из атеросклеротических поражений или из сыворотки индивидуума, страдающего атеросклеротическим заболеванием. Как вариант, абзимы,окисляющие липиды, можно получить с применением общеизвестных иммунологических методик. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения абзимы могут находиться в изолированной или частично изолированной форме. Подходящие способы выделения и/или получения окисляющих липиды антихламидийных абзимов, подходящих для применения в способах согласно настоящему изобретению, хорошо известны в данной области и описаны в WO 03/017992, WO 03/019196 и WO 03/019198. Измерение активности абзимов, окисляющих липиды, более подробно описано ниже. Активность абзима в присутствии композиции, содержащей исследуемое соединение и солюбилизирующий агент, можно сравнить с активностью абзима в сопоставимых реакционной среде и условиях в отсутствие указанной композиции, и, возможно, в присутствии одного лишь исследуемого соединения. Уменьшение активности в присутствии композиции по сравнению с отсутствием композиции и/или присутствием только лишь исследуемого соединения, указывает на то, что исследуемое соединение является ингибитором активности абзима в присутствии солюбилизирующего агента. Солюбилизирующий агент,подходящий для описанного в данном изобретении применения, представляет собой гидрофильное соединение, растворимое в водном растворе. В некоторых вариантах реализации солюбилизирующий агент может быть нерастворим в органических растворителях. Подходящие гидрофильные солюбилизирующие агенты включают растворимые белки, в частности лактопротеины, такие как казеин, бета-лактоглобулин, альфа-лактальбумин, и сывороточный альбумин. В качестве солюбилизирующего агента удобно использовать белок молочной сыворотки. Белок молочной сыворотки представляет собой совокупность глобулярных белков, в природе встречающихся в молоке. Его выделяют из молочной сыворотки, которая является побочным продуктом при производстве сыра. Он представляет собой смесь бета-лактоглобулина (65%), альфа-лактальбумина (25%) и сывороточного альбумина (8%), которые в их естественном виде растворимы независимо от величины pH. Белок молочной сыворотки имеется в продаже от ряда поставщиков (например, Euroserum, France). Подходящим исследуемым соединением может являться любая негидрофильная (т.е. амфипатическая или липофильная) небольшая химическая единица или другая молекула. Подходящие исследуемые соединения можно выбрать из наборов соединений и созданных соединений, например, используя комбинаторную химию. Подходящие исследуемые соединения включают амфипатические или амфифильные соединения,содержащие гидрофильную часть и гидрофобную или липофильную часть, и образующие самоорганизующуюся мицеллярную структуру в водном растворе. Внутри мицеллярной структуры гидрофобные части расположены во внутренней части мицеллы, а гидрофильные или полярные части обращены наружу, чтобы взаимодействовать с полярными молекулами воды. В частности, к подходящим исследуемым соединениям относятся антиоксиданты. Антиоксидант ингибирует окислительные реакции в организме, например, удаляя примеси и обезвреживая окислительные соединения, такие как свободные радикалы, и, тем самым, ограничивает повреждение клеток, вызы-2 013465 ваемое указанными соединениями. В некоторых вариантах реализации указанный способ может включать стадию определения антиоксидантной активности исследуемого соединения и идентификацию указанного соединения в качестве антиоксиданта. Антиоксидантную активность можно определять в любой подходящей биохимической или биофизической системе диагностирования. Подходящие исследуемые соединения могут включать негидрофильные антиоксиданты, такие как ликопин и его аналоги, их соли и производные, другие каротиноиды, помимо ликопина, полифенолы, флавоноиды, изофлавоны, куркуминоиды, церамиды, проантоцианидины, терпеноиды, стеролы, фитостеролы, сложные эфиры стеролов, токотриенолы, сквалены и ретиноиды, или их соли, аналоги или производные, проявляющие антиоксидантную активность. Соль указанного соединения может представлять собой соль, образованную присоединением кислоты, в которой основание сохраняет биологическую эффективность и свойства исходного соединения и которая является физиологически приемлемой. Указанные соли включают соли, образованные неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и т.п. В некоторых предпочтительных вариантах реализации исследуемое соединение представляет собой ликопиновое соединение, например ликопин или производное ликопина, обладающее сходными с ликопином биологическими свойствами. Ликопин представляет собой ненасыщенный каротиноид С 40 с открытой цепью, структуры I (Chemical Abstracts Service Registry Number 502-65-8), в природе обнаруженный в таких растениях, как помидоры, гуава, шиповник, арбуз и розовый грейпфрут. Ликопин для описанного в данном изобретении применения может включать один или более различных изомеров. Например, ликопин может содержать по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% (Z)-изомеров, (полностью-Е)изомеров или цис-изомеров, таких как S-цис- или 9-цис- или 13-цис-изомеров, обладающих повышенной биодоступностью по сравнению с транс-изомерами. Транс-изомеры могут изомеризоваться в цис-формы in vivo, или в процессе хранения и переработки. Производные ликопина, обладающие сходными с ликопином биологическими свойствами, могут включать, например, каротиноиды, такие как ретиноевая кислота, синтетическая ациклическая ретиноевая кислота; или 1-НО-3',4'-дидегидроликопин, 3,1'-(НО)2-гамма-каротин, 1,1'-(НО)2-3,4,3',4'тетрадегидроликопин и 1,1'-(НО)2-3,4-дидегидроликопин. Ликопиновое соединение для описанного выше применения может являться природным, т.е. полученным из природного источника, например экстрагированным из растения, такого как помидор или арбуз. Ряд способов экстрагирования, концентрации и/или очистки ликопиновых соединений из растений широко известен в данной области. Например,можно применить экстракцию растворителем, с применением этанола, ДМСО, этилацетата, гексана, ацетона, соевого или другого растительного масла, или масел не растительного происхождения. Ликопиновые соединения для описанного выше применения могут являться синтетическими, т.е. полученными искусственными методами, например путем химического синтеза. Ряд способов химического синтеза ликопина и других каротиноидов широко известен в данной области. Например,можно применить трехстадийный химический синтез, основанный на стандартной схеме реакции олефинирования по Виттигу для синтеза каротиноидов, согласно которой получают органический раствор метаносульфоната фосфония С 15 в дихлорметане (ДХМ) и органический раствор диальдегида С 10 в толуоле,после чего указанные два органических раствора постепенно соединяют с раствором метоксида натрия и подвергают реакции конденсации, чтобы получить неочищенный ликопин. Полученный неочищенный ликопин затем можно очистить с применением общепринятых методик, например, добавляя к смеси ледяную уксусную кислоту и деионизированную воду, интенсивно перемешивая, разделяя водную и органическую фазы и экстрагируя водой органическую фазу, содержащую ДХМ и черновой ликопин. К органической фазе добавляют метанол и удаляют ДХМ перегонкой при пониженном давлении. Неочищенный раствор ликопина в метаноле затем нагревают и охлаждают до появления кристаллической взвеси,которую отфильтровывают и промывают метанолом. Полученные кристаллы ликопина можно затем перекристаллизовать и высушить при нагревании в атмосфере азота. Синтетический ликопин также имеется в наличии у промышленных поставщиков (например, BASF Corp, NJ USA). Синтетический ликопин может содержать увеличенную долю цис-изомеров по сравнению с природным ликопином. Например, синтетический ликопин может содержать вплоть до 25% 5-цис, 1% 9-цис,-3 013465 1% 13-цис и 3% других цис-изомеров, тогда как ликопин, полученный из помидоров, может содержать 35% 5-цис, 0-1% 9-цис, 1% 13-цис и 1% других цис-изомеров. Поскольку цис-ликопин обладает повышенной биодоступностью по сравнению с транс-ликопином, синтетический ликопин в некоторых вариантах реализации настоящего изобретения является предпочтительным. Описанные выше производные ликопина можно получить при помощи химического синтеза, аналогично синтезу, описанному выше, или путем химической модификации природного ликопина, экстрагированного из растительного материала. В предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения негидрофильный антиоксидант ликопин комбинируют с белком молочной сыворотки. Композиции ликопина с белком молочной сыворотки (называемые лактоликопин) известны в данной области (см., например, Richelle et al. J. Nutr. 132:404-408, 2002 и PCT/EPOI/06145) и имеются в продаже (INNEOV, L'Oreal (UK) Ltd, London). Ликопин может быть получен или доступен при помощи способов, описанных в указанных документах, или способа, описанного в данном изобретении. В некоторых предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения исследуемое соединение можно определить как не оказывающее никакого воздействия или никакого заметного воздействия на активность абзимов в отсутствие солюбилизирующих агентов. Количество исследуемого соединения, которое может входить в состав композиции для применения в способе согласно настоящему изобретению, обычно можно определить эмпирическим путем в зависимости от вида используемого соединения. В основном можно использовать концентрации предполагаемого соединения-ингибитора от примерно 0,01 до 100 нМ, например от 0,1 до 10 нМ. Композиция может содержать от 0,05 до 50% по весу исследуемого соединения и от 5 до 90% по весу солюбилизирующего агента. Солюбилизирующий агент и исследуемое соединение могут присутствовать в весовом соотношении от 1:1 до 1000:1, предпочтительно от 2:1 до 250:1 и более предпочтительно от примерно 3:1 до 20:1. Исследуемые соединения, которые можно использовать, могут представлять собой природные или синтетические химические соединения, применяемые в программах скрининга лекарств. Можно использовать экстракты растений, содержащих несколько описанных или неописанных компонентов. Солюбилизирующий агент и антиоксидант можно смешивать друг с другом для получения композиции или можно непосредственно или опосредованно связать в композиции (например, в виде сложного соединения). Солюбилизирующий агент и антиоксидант могут быть связаны, например, ковалентной связью, например посредством одной или более ковалентных связей, с применением обычных химических способов или нековалентной связью, например, при помощи связывания антиген-антитело. Например, композицию можно приготовить путем растворения исследуемого соединения в растворителе и смешивания полученного раствора с растворимым белком (например, лактопротеином), который может находиться в твердом виде или в водном растворе. Исследуемое соединение можно растворять в любом фармацевтически совместимом растворителе. Предпочтительно растворителем является ацетон, этанол или изопропанол. Если водный раствор белка смешивают с растворителем, предпочтительным соотношением растворитель/вода является примерно 60/40 по объему. После перемешивания полученную смесь можно выдержать в течение от 30 до 60 мин при температуре немного выше температуры окружающей среды. Растворитель можно выпарить, чтобы получить композицию в виде эмульсии или дисперсии. Выпаривание можно легко осуществить с применением пониженного давления (например, от 200 до 300 мбар). Затем композицию можно дополнительно обработать, например, высушивая, чтобы получить порошок или нагревая, чтобы получить гель. Активность абзима, окисляющего липиды, включая активность перекисного окисления липидов, можно определить путем определения окисления липида, который может представлять собой липид из чужеродного антигена, такого как хламидийная клетка, или липид из другого источника, который, например, может быть добавлен как часть способа исследования. Можно измерить накопление продуктов окисления или побочных продуктов, таких как совместно окисленные связанные молекулы-репортеры, или исчезновение или расходование исходных веществ, таких как неизмененные липиды, или участвующих в реакции веществ, таких как кислород. В данной области существует множество способов определения перекисного окисления липидов, они описаны, например, в CRC Handbook of Methods for Oxygen Radical Research,CRC Press, Boca Raton, Florida (1985), Oxygen Radicals in Biological Systems. Methods in Enzymology, v. 186, Academic Press, London (1990); Oxygen Radicals in Biological Systems. Methods in Enzymology, v. 234,Academic Press, San Diego, New York, Boston, London (1994); и Free Radicals. A practical approach. IRLPress, Oxford, New York, Tokyo (1996). В предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения активность окисления липидов абзимами можно определить, определяя образование (т.е. присутствие или количество) продуктов окисления липида, включая альдегиды, такие как малоновый диальдегид (МДА), пероксиды (липидов), диеновые соединения и газообразные углеводороды. Продукты окисления липидов можно определять любым подходящим способом. Например, продукты перекисного окисления липидов можно определять при помощи ВЭЖХ (Brown, R.K., and Kelly, F.J In: Free Radicals. A practical approach. IRL Press, Oxford, NewIbid.133-145), или газовой хроматографии - масс-спектрометрии (Morrow, J.D., and Roberts, L.J. F2-4 013465Isoprostanes: prostaglandin-like products of lipid peroxidation. Ibid. 147-157). Образование малонового диальдегида (МДА), например, можно определить, после реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (удобно в концентрации 1 мМ), по измерению поглощения на соответствующей длине волны, например 525 нм. Определение активности абзимов более подробно описано в WO 03/017992, WO 03/019196 иWO 03/019198. Активность абзимов также можно определять с применением иммунологических методик, например, как описано в GB 0503940.9. Ингибирование активности абзима можно определить, используя такие условия, в которых, в отсутствие средства, исследуемого на положительную реакцию, абзим окисляет липид. Указанные соединения можно применять в качестве средств для ингибирования действия абзимов, окисляющих липиды, например, для лечения атеросклеротических состояний. Композицию, способную ингибировать активность абзимов, можно далее оценить при помощи одного или более вторичных способов проверки. Вторичная проверка может включать исследование активности абзима в сосудистой системе или биологического действия абзима, например, в экспериментальной модели на животных. Подходящие биологические функции, которые можно оценить во вторичной проверке, включают уменьшение размера или числа атеросклеротических поражений, или уменьшение других симптомов или результатов атеросклеротического расстройства, таких как кровяное давление. Способы согласно настоящему изобретению могут включать идентификацию композиции, содержащей исследуемое соединение и солюбилизирующий агент в качестве композиции, ингибирующей активность абзимов. Идентифицируемую композицию можно синтезировать или изготовить. Как вариант,композицию, идентифицируемую в качестве ингибитора активности, как описано в данном изобретении,можно изменять, чтобы оптимизировать активность или получить другие выгодные характеристики, такие как увеличенный период полувыведения или уменьшенные побочные эффекты при введении индивидууму. Методики и алгоритмы модификации соединений-лидеров широко известны в данной области. Композицию, содержащую ликопиновое соединение, такое как ликопин, и солюбилизирующий агент, такой как белок молочной сыворотки, как описано в данном изобретении, можно использовать для лечения организма человека или животного, в частности для лечения атеросклеротического состояния. Подобную композицию можно использовать при производстве лекарства для лечения атеросклеротического состояния. Способ лечения атеросклеротического состояния может включать введение композиции, содержащей ликопиновое соединение, такое как ликопин, и солюбилизирующий агент, такой как белок молочной сыворотки, индивидууму, нуждающемуся в этом. Атеросклеротическое состояние включает атеросклероз и/или одно или более его клинических осложнений, или связанное с атеросклерозом сердечно-сосудистое состояние, такое как гиперлипидемия; ишемическая (коронарная) болезнь сердца; ишемия миокарда (стенокардия); инфаркт миокарда; аневризматическая болезнь; атероматозная болезнь периферических сосудов; болезнь аортоподвздошных сосудов, хроническая и критическая ишемия нижних конечностей; висцеральная ишемия; болезнь почечной артерии; болезнь сосудов головного мозга; инсульт; атеросклеротическая ретинопатия; повышенная свертываемость крови; тромбоз и нарушенная свертываемость крови; и гипертония. Указанные состояния могут представлять собой состояния человека или животных. Индивидуумы, к которым можно применять способы согласно настоящему изобретению, включают человека и других животных, включая домашних животных, таких как собаки, кошки, лошади и попугаи,сельскохозяйственных животных, таких как овцы и рогатый скот, и редких или экзотических животных,таких как слоны и тигры. Ссылку на человека здесь следует понимать, как включающую в себя прочих животных, если конкретные обстоятельства не указывают на иное. Лечение или терапия относится к любому введению соединения согласно изобретению, которое предназначено для облегчения тяжести атеросклеротического расстройства у пациента, и включает лечение, предназначенное для излечивания заболевания, для освобождения от симптомов заболевания и для предотвращения или задержки развития или приступа заболевания у индивидуума, имеющего риск развития заболевания или у индивидуума, имеющего симптомы, указывающие на развитие заболевания у указанного индивидуума. Определенную композицию, описанную в данном изобретении, можно составить с применением фармацевтически приемлемого наполнителя, как описано ниже. Указанную композицию можно вводить индивидууму. Композиции можно составить для любого подходящего пути и средств введения. Фармацевтически приемлемые носители или разбавители включают те, которые можно использовать для орального, ректального, назального, поверхностного (включая буккальное и сублингвальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутрикожное, интратекальное и эпидуральное) введения. Указанные композиции удобно выпускать в виде дозировочных единиц, и их можно приготовить любыми способами, хорошо известными в области фармацевтики. Указанные способы включают стадию соединения активного компонента с носителем, который состоит из одного или более вспомогательных компонентов. В общем, указанные композиции изготавливают путем однородного и-5 013465 тесного соединения активного компонента с жидкими носителями, или с тонкоизмельченными твердыми носителями, или с носителями обоих этих видов, и затем, при необходимости, придания продукту определенной формы. В случае твердых композиций можно применять обычные неядовитые твердые носители, которые включают, например, фармацевтические сорта маннита, лактозы, целлюлозы, производных целлюлозы,крахмала, стеарата магния, сахарината натрия, талька, глюкозы, сахарозы, карбоната магния. Активный компонент, определенный выше, можно сформировать в виде суппозиториев, с применением в качестве носителя, например полиалкиленгликолей, ацетилированных триглицеридов и т.п. Жидкие фармацевтические композиции для введения можно приготовить, например, растворяя, диспергируя и т.д., активное соединение, определенное выше, и возможные фармацевтические вспомогательные средства, в носителе,таком как, например, вода, вводно-солевой раствор глюкозы, глицерин, этанол и т.п., получая, таким образом, раствор или суспензию. По желанию, фармацевтическая композиция для введения может также содержать меньшие количества неядовитых вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие средства, буферные вещества для регулирования pH и т.п., например ацетат натрия, сорбитанмонолаурат, триэтаноламина натрия ацетат, сорбитанмонолаурат, триэтаноламина олеат и т.д. Существующие способы приготовления указанных дозировочных форм известны или легко могут быть понятны специалисту в данной области; например, см. "Remington: The Science and Practice of Pharmacy",20th Edition, 2000, pub. Lippincott, WilliamsWilkins. Композиция или состав для введения может содержать, так или иначе, такое количество активного компонента(ов), которое достаточно для эффективного облегчения симптомов у пациента, подлежащего лечению. Можно приготовить дозировочные формы или композиции, содержащие активный компонент в диапазоне от 0,25 до 50%, остальную часть составляют солюбилизирующий агент и нетоксичный носитель. Для орального введения фармацевтически приемлемую нетоксичную композицию получают путем включения в любые традиционно применяемые наполнители, такие как, например, фармацевтические сорта маннита, лактозы, целлюлозы, производных целлюлозы, кросскармеллозы натрия, крахмала, стеарата магния, сахарината натрия, талька, глюкозы, сахарозы, карбоната магния и т.п. Указанные композиции имеют форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, композиций с замедленным освобождением и тому подобное. Указанные композиции могут содержать 1-50% активного компонента, более предпочтительно 2-50%, наиболее предпочтительно 5-8%. Парентеральное введение, в общем, осуществляют путем инъекции, подкожно, внутримышечно или внутривенно. Композиции для инъекций можно приготовить в обычной форме, в виде жидких растворов или суспензий, в твердых формах, пригодных для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией, или в виде эмульсий. Подходящими наполнителями являются, например, вода, солевой раствор, глюкоза, глицерин, этанол или т.п. Кроме того, при желании, фармацевтические композиции для введения могут также содержать малые количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие агенты или эмульгаторы, буферные средства для поддержания pH и т.п., такие как, например, ацетат натрия, сорбитанмонолаурат, триэтаноламина олеат, триэтаноламина натрия ацетат и т.д. Разработанный в последнее время подход к парентеральному введению использует имплантацию системы медленного освобождения или длительного освобождения, таким образом, поддерживая постоянный уровень дозировки. См., например, патент США 3710795. Процентное содержание активного соединения, входящего в состав указанных парентеральных композиций, сильно зависит от его конкретной природы, а также от активности указанного соединения и от потребностей пациента. Несмотря на это, применимо процентное содержание активного компонента в растворе от 0,1 до 10%, и оно может быть выше, если композиция представляет собой твердое вещество,которое надлежит разбавить соответствующим образом, чтобы получить указанное выше процентное содержание. Эффективное количество соединения или его соли для введения окончательно остается на усмотрение терапевта, принимая во внимание тяжесть заболевания у конкретного пациента (например, пациентачеловека или модели на животных) и общего состояния пациента. Подходящие интервалы дозировок обычно находятся в диапазоне от 0,01 до 20 мг/кг/день, предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг/день. Повторные дозы можно вводить через подходящие интервалы, например один или два раза в день,дважды в неделю, еженедельно или ежемесячно. Композицию негидрофильного антиоксиданта, такого как ликопин, и солюбилизирующего агента, такого как белок молочной сыворотки, для лечения атеросклеротического состояния можно включить в состав пищевого продукта. Например, ее можно включить в хлеб, зерновой продукт, сухое печенье, масло, спрэды (например, маргарин), сыр, йогурты, напитки или корма для домашних животных, например консервированный или сухой корм для кошек или собак. Другие подходящие пищевые продукты могут быть очевидны для специалиста в данной области. Композицию можно смешивать с компонентами пищевого продукта перед приготовлением (например, выпеканием) и/или добавлять к пищевому продукту после приготовления. Приведенные в данном изобретении результаты показывают, что композиции можно вводить в состав пищевых продуктов без потери качества пищи, и они сохраняют активность после приготовления в составе пищевых продуктов. Предпочтительно ликопиновое соединение, включенное в пищевой продукт, представляет собой ге-6 013465 терологическое ликопиновое соединение. Например, ликопиновое соединение может представлять собой синтетическое ликопиновое соединение, как описано выше, или природное ликопиновое соединение, не присутствующее в натуральном пищевом продукте. Например, ликопиновое соединение из фрукта или овоща можно включить в состав хлеба или зернового продукта. Таким образом, еще одним аспектом настоящего изобретения является пищевой продукт, который содержит ликопиновое соединение, для лечения атеросклеротического состояния, причем указанное ликопиновое соединение не присутствует в натуральном пищевом продукте. Также представлен способ изготовления пищевого продукта для лечения, или замедления, или предотвращения наступления атеросклеротического состояния, причем указанный способ включает:(i) производство компонента пищевого продукта,(ii) смешивание ликопинового соединения с указанным компонентом,(iii) включение указанного компонента и указанного ликопинового соединения в состав пищевого продукта. Компоненты пищевых продуктов представляют собой основные продукты питания, такие как мука,мясо, яйца, желатин, молоко, соль, консерванты и вода, которые используют для производства пищевых продуктов. Подходящие компоненты пищевых продуктов для использования согласно настоящим способам хорошо известны в данной области. Различные дополнительные аспекты и варианты реализации настоящего изобретения могут быть понятны специалисту в данной области, принимая во внимание настоящее описание изобретения. Все упомянутые в настоящем описании документы включены в его состав согласно ссылке во всей их полноте. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения будут приведены далее для примера и со ссылками на описанные ниже таблицы. Эксперимент. Клинический материал. Антитела экстрагированы из развитых атеросклеротических поражений аорты человека, извлеченных у двух пациентов мужского пола, в возрасте 53 и 64 лет, при операции шунтирования стеноза брюшной аорты в Центре сердечно-сосудистой хирургии медицинского университета Ростова-на-Дону,Российская Федерация. После извлечения указанные образцы немедленно помещают в 30% вес./об. раствор NaCl и хранят при 0-4 С в течение 1 месяца перед исследованием. В контрольных экспериментах показано, что в течение указанного периода активность таких ферментов, как трипсин, каталаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, креатинкиназа и лактатдегидрогеназа, а также уровень фрагментации иммуноглобулина (IgG) и степень перекисного окисления липидов существенно не меняются. Участки аорты (сырой массой приблизительно 200-400 мг) нарезают на кусочки приблизительно по 10 мг каждый, помещают в 5,0 мл ФСБ с 1% неионного поверхностно-активного вещества Igepal CA-630 и гомогенизируют при помощи механического гомогенизатора (Ultra-Turrax) на полной мощности с 15 мм зондом три раза по 3 с с перерывами для охлаждения по 20 с. После гомогенизации нерастворимые части отделяют центрифугированием при 5000 g в течение 10 мин, а надосадочную жидкость используют для анализа. Экстракция обогащенного абзимами IgG атеромы. Антитела экстрагируют и анализируют отдельно из поражений двух участков брюшной аорты, полученных от четырех различных пациентов. Первой стадией является обработка надосадочной жидкости белком А, присоединенным к сшитой 4% агарозе в виде шариков при 37 С в течение 30 мин. После этого иммуноглобулиновую фракцию,присоединенную к шарикам, отделяют центрифугированием при 5000 g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют декантацией. Чтобы удалить любые липопротеины, присоединенные к осажденным иммуноглобулинам, образцы повторно суспендируют с 10% Igepal CA-630. Затем образцы центрифугируют при 5000 g в течение 10 мин и удаляют надосадочную жидкость декантацией. Чтобы удалить поверхностно-активное вещество, проводят три последовательных промывания избытком фосфатного буфера, с центрифугированием в том же режиме. Удаление липопротеина из иммуноглобулиновой фракции подтверждают по отсутствию в указанной фракции холестерина. Исследование противоабзимной активности. Образцы сыворотки крови человека инкубируют с различными концентрациями ликопина, ликопин/лактопротеинового конъюгата или отдельно (контрольные образцы) в присутствии экстрагированного из атеромы IgG в течение 16 ч при 37 С и pH 5,6. Уровень перекисного окисления липидов устанавливают как уровень концентрации МДА, которую измеряют спектрофотометрическим способом [Draper,H.H. et al. Free Radic. Biol. Med. (1993) 15, 353]. Данный способ основан на образовании окрашенного продукта при взаимодействии малонового диальдегида с тиобарбитуровой кислотой. Вкратце, уровень абзимов в образце определяют следующим образом: образцы сыворотки разбавляют 1:1 0,05 М ацетатным буфером с pH 4,0, чтобы полученная величина pH указанных образцов была между 5,6-5,8. 990 мкл разбавленной сыворотки смешивают с 10 мкл имеющейся в продаже живой овечьей хламидий-7 013465 ной вакцины (Intervet). Образцы инкубируют на протяжении ночи (12-16 ч) при 37 С. В каждый образец добавляют 250 мкл 40% трифторуксусной кислоты и 250 мкл 1 мМ 2-тиобарбитуровой кислоты. Все образцы помещают на водяную баню и кипятят в течение 30 мин. Затем образцы охлаждают и центрифугируют при 3000 g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость собирают и измеряют ее поглощение при 525 нм, чтобы определить концентрацию малонового диальдегида (МДА), который является продуктом перекисного окисления липидов. Тест на абзимы по методу ELISA. Тесты ELISA проводят с применением материалов и реактивов фирмы Medac, применяя их в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, образцы сыворотки от пациентов обрабатывают, как описано выше. 50 мкл разбавителя для образцов переносят при помощи пипетки в ячейку микротитровального планшета А 1 в качестве холостой пробы, а в другие ячейки микротитровального планшета переносят при помощи пипетки 50 мкл отрицательного контроля, положительного контроля и разбавленных образцов пациентов. Ячейки микротитровального планшета инкубируют в течение 60 мин (5 мин) при 37 С (1 С) во влажной камере,после чего трижды промывают 200 мкл буфера для промывки на ячейку. Затем в каждую ячейку добавляют 50 мкл конъюгата и вновь инкубируют ячейки микротитровального планшета в течение 60 мин(5 мин) при 37 С (1 С) во влажной камере, после чего промывают. Затем в каждую ячейку добавляют 50 мкл субстрата ТМВ и инкубируют ячейки микротитровального планшета в течение 30 мин (2 мин) при 37 С (1 С) во влажной камере. Реакцию останавливают добавлением в каждую ячейку 100 мкл Стоп-раствора. Фотометрическое измерение проводят при 450 нм (опорный сигнал 620-650 нм) не позднее 15 мин после добавления Стоп-раствора. Для вычисления результатов значение OD (оптической плотности) холостого опыта (ячейка А 1) вычитают из всех остальных значений OD. Предпочтительно, чтобы величинаOD холостого опыта составляла 0,150, средняя величина OD отрицательного контроля составляла 0,100, а величина OD положительного контроля составляла 0,800. Граница=среднее значение OD отрицательного контроля+0,380. Серая зона=граница 10%. Препараты ликопина. Приготовление композиции ликопина с лактопротеином осуществляют, как описано вUS 20020107292. Вкратце, 13,3 кг изолята белка молочной сыворотки растворяют в 330 л деминерализованной воды и перемешивают полученную смесь в течение 6 ч при 25-30 С. Отдельно смешивают 550 г олеорезина Lycored (LycoRed Corp NJ USA), содержащего 6% ликопина, с 438 л ацетона и перемешивают полученную смесь. Указанные два раствора впоследствии смешивают в течение 60 мин при 30 С. Конечную смесь умеренно нагревают и отгоняют ацетон при умеренном давлении. Наконец, частично отгоняют воду при давлении 40-50 мбар. Получают водный раствор 200 кг изолята белка молочной сыворотки и олеорезина,который впоследствии высушивают распылением. Вопросник Роуза-Блэкберна. Вопросник Роуза-Блэкберна представляет собой средство для оценки тяжести стенокардии. В нем оценивают набор из семи важных субъективных и объективных критериев, коррелирующих с тяжестью заболевания, и конвертируют их в балльные оценки. Каждому критерию дают оценку от 1 до 4, если у пациента имеется соответствующий симптом, и 0,если указанный симптом отсутствует. Сумма оценок по всем семи симптомам дает балл пациента по вопроснику Роуза-Блэкберна. Максимальный балл равен 28. Два пациента, получавших лечение в настоящем исследовании, имеют тяжелую стенокардию, и их средняя оценка по каждому симптому в данном вопроснике составляет 3 балла; у остальных заболевание менее тяжелое, и средняя оценка составляет 2 балла или ниже. Результаты. Тесты in vitro. Препараты ликопина исследуют на активность ингибирования абзимов, как описано выше, полученные результаты приведены в табл. 1. Обнаружено, что ликопин (L9879: Sigma) неэффективен в качестве ингибитора абзимов как в тестеELISA, так и в тесте на окисление липидов. Обнаружено, что композиция, содержащая совместно ликопин и лактопротеин (препарат лактоликопин: INNEOV), является мощным ингибитором активности абзимов. Обнаружено, что экстракт ликопина Lyc-O-Mato (LycoRed Corp NJ USA) также ингибирует активность абзимов, но его величина ID50 более чем в 3,5 раза выше, чем для лактоликопина. Клиническое испытание. Действие двух препаратов ликопина, лактоликопина и Lyc-O-Mato, оценивают в пробном клиническом испытании при лечении ишемической болезни сердца (ИБС). Всего семнадцать положительных по AtheroAbzyme пациентов с ИБС, в возрасте 45-60 лет, были-8 013465 набраны для настоящего испытания. Первая группа, состоящая из 7 пациентов женского пола и 7 пациентов мужского пола, ежедневно получает с пищей 2-3 драже лактоликопина, что составляет 4-6 мг ликопина. Вторая группа, состоящая из 1 пациента женского пола и 2 пациентов мужского пола, ежедневно получает с пищей 1 капсулу Lyc-O-Mato, что составляет 15 мг ликопина. Лечение каждой группы продолжают на протяжении 2 месяцев. До начала лечения пациентам предлагают заполнить вопросник Роуза-Блэкберна (табл. 2), чтобы получить меру тяжести их заболевания. Заполнение вопросника повторяют спустя два месяца, а также измеряют активность AtheroAbzyme. Спустя два месяца после начала лечения с использованием лактоликопина/INNEOV активностьAtheroAbzyme уменьшилась до необнаруживаемых значений у всех четырнадцати пациентов (табл. 3). Тринадцать из четырнадцати пациентов показали клиническое улучшение, измеренное по снижению на 25% баллов по вопроснику Роуза-Блэкберна. Во второй группе пациентов два месяца введения Lyc-OMato привели к пониженным, но еще обнаруживаемым уровням AtheroAbzyme (табл. 4). Клиническое состояние указанных пациентов также слегка улучшилось, но в меньшей степени, чем в первой группе: 9% баллов по вопроснику Роуза-Блэкберна. Результаты пробного клинического испытания показывают эффективность препаратов лактоликопина не только для ингибирования абзимов in vivo, но и для улучшения состояния пациентов с ИБС. Включение ликопина в пищевую основу. Включение в хлеб. Рецепт на одну буханку хлеба включает: дрожжи - 3/4 ч. л., сильная белая мука - 400 г, сахар - 1 ч. л.,масло - 15 г, сухое молоко - 1 ч. л., соль - 1 ч. л., вода 280 мл, в которой растворяют драже лактоликопина(LL) (INNEOV) или капсулы Lyc-O-Mato (LM). Выпекают семь буханок: одна (контрольная) не содержит препаратов ликопина, вторая содержит 5 драже LL, третья - 10 драже LL и четвертая - 20 драже LL, пятая, шестая и седьмая буханки содержат такое количество капсул ликопина Lyc-O-Mato, LM, что количество ликопина эквивалентно буханкам с LL. Исследование. Пять добровольцев, исследовавших вслепую указанный хлеб, не обнаружили различий в структуре, вкусе или запахе между всеми четырьмя указанными буханками. Кроме того, исследуют способность указанного хлеба ингибировать активность абзимов, окисляющих липиды. Указанное исследование осуществляют при помощи набора AtheroAbzyme ELISA (CTL, UK) в соответствии с процедурой,приведенной в инструкциях производителя. Хлеб, содержащий лактоликопин, обладает значительной противоабзимной активностью, тогда как хлеб, содержащий Lyc-O-Mato, LM, или контрольный хлеб не обладают указанной активностью (табл. 5). Включение в лепешки. Рецепт для порции из четырех лепешек включает: мука с разрыхлителем - 175 г, пекарский порошок - 1 ч. л., щепотка соли, сахарная пудра - 20 г, несоленое масло - 37 г, молоко - 90 мл, в котором растворен LL в виде драже INNEOV. Выпекают семь порций лепешек: одна (контрольная) не содержит препаратов ликопина, вторая содержит 0,5 драже LL на лепешку, третья - 1 драже LL на лепешку и четвертая - 2 драже LL на лепешку, пятая, шестая и седьмая порции содержат такое количество капсул ликопина Lyc-O-Mato, LM, что количество ликопина эквивалентно лепешкам с LL. Исследование. Пять добровольцев, исследовавших вслепую указанные лепешки, не обнаружили различий в структуре, вкусе или запахе между всеми четырьмя указанными порциями. Кроме того, исследуют способность указанных лепешек ингибировать активность абзимов, окисляющих липиды. Указанное исследование осуществляют при помощи набора AtheroAbzyme ELISA (CTL, UK) в соответствии с процедурой, приведенной в инструкциях производителя. Лепешки, содержащие лактоликопин, обладают значительной противоабзимной активностью, тогда как лепешки, содержащие Lyc-O-Mato, LM, или контрольные лепешки не обладают указанной активностью (табл. 5). Таблица 1 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Композиция, которая содержит солюбилизирующий агент и ликопиновое соединение для применения при лечении атеросклеротического состояния, причем указанный солюбилизирующий агент включает один или более гидрофильных полипептидов. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное ликопиновое соединение представляет собой ликопин. 3. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что указанный солюбилизирующий агент включает один или более лактопротеинов. 4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что указанный солюбилизирующий агент включает лактоглобулин, -лактальбумин и сывороточный альбумин. 5. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что указанный солюбилизирующий агент представляет собой белок молочной сыворотки. 6. Композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что ее получают способом, включающим растворение указанного ликопинового соединения в растворителе; смешивание получившегося раствора с солюбилизирующим агентом и испарение указанного растворителя с получением композиции. 7. Композиция по любому из пп.1-6, которая входит в состав пищевого продукта. 8. Композиция по п.7, отличающаяся тем, что указанный пищевой продукт представляет собой хлеб, крупу, печенье, масло, пасту, сыр, йогурт или напиток. 9. Способ лечения атеросклеротического состояния, включающий введение композиции по любому из пп.1-8 нуждающемуся в этом индивидууму. 10. Применение композиции по любому из пп.1-8 для производства лекарства для лечения атеросклеротического состояния. 11. Способ получения композиции для применения при лечении атеросклеротического состояния,включающий смешивание ликопинового соединения с солюбилизирующим агентом, который включает один или более гидрофильных полипептидов. 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанное ликопиновое соединение представляет собой ликопин. 13. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что указанный солюбилизирующий агент включает один или более лактопротеинов. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанные один или более лактопротеинов включают лактоглобулин, -лактальбумин и сывороточный альбумин. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанный солюбилизирующий агент представляет собой белок молочной сыворотки. 16. Способ идентификации и/или получения композиции, которая ингибирует абзимы, окисляющие липиды, включающий приведение в контакт абзима, окисляющего липиды, с композицией, содержащей исследуемое соединение и солюбилизирующий агент, который включает один или более гидрофильных полипептидов, и определение ингибирования активности абзима указанной композицией. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанное ингибирование активности абзима указывает- 11013465 на то, что указанная композиция пригодна для лечения атеросклеротического состояния. 18. Способ по п.16 или 17, включающий приведение в контакт абзима, окисляющего липиды, с исследуемым соединением, и определение ингибирования активности абзима указанным соединением. 19. Способ по п.18, отличающийся тем, что указанное исследуемое соединение не ингибирует активность абзима в отсутствие солюбилизирующего агента. 20. Способ по любому из пп.16-19, включающий смешивание исследуемого соединения с солюбилизирующим агентом с получением указанной композиции. 21. Способ по любому из пп.16-20, отличающийся тем, что указанное исследуемое соединение представляет собой негидрофильный антиоксидант. 22. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанное исследуемое соединение выбирают из группы, состоящей из каротиноидов, полифенолов, флавоноидов, изофлавонов, куркуминоидов, церамидов,проантоцианидинов, терпеноидов, стеролов, фитостеролов, сложных эфиров стеролов, токотриенолов,скваленов и ретиноидов. 23. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанное исследуемое соединение выбирают из группы, состоящей из ликопина, ретиноевой кислоты, синтетической ациклической ретиноевой кислоты или 1-НО-3',4'-дидегидроликопина, 3,1'-(НО)2 каротина, 1,1'-(HO)2-3,4,3',4'-тетрадегидроликопина и 1,1'(НО)2-3,4-дидегидроликопина. 24. Способ по любому из пп.16-23, отличающийся тем, что указанный солюбилизирующий агент включает один или более лактопротеинов. 25. Способ по п.24, отличающийся тем, что указанные один или более лактопротеинов включают лактоглобулин, -лактальбумин и сывороточный альбумин. 26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанный солюбилизирующий агент представляет собой белок молочной сыворотки. 27. Способ по любому из пп.16-26, включающий идентификацию указанной композиции в качестве ингибитора абзимов, окисляющих липиды. 28. Способ увеличения способности ликопинового соединения ингибировать абзимы, окисляющие липиды, включающий смешивание ликопинового соединения с солюбилизирующим агентом, который включает один или более гидрофильных полипептидов для получения композиции по любому из пп.1-8.