Способ получения свободно плавающих личинок рачков artemia и набор для аквакультуры

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СВОБОДНО ПЛАВАЮЩИХ ЛИЧИНОК РАЧКОВ ARTEMIA И НАБОР ДЛЯ АКВАКУЛЬТУРЫ Раскрываются способ выведения науплиусов (личинок) рачков Artemia из некоторого количества(порции) цист одного или нескольких видов Artemia, включая находящиеся в диапаузе цисты,путем инкубирования цист в среде выведения в условиях, способствующих вылупливанию хотя бы части цист и выходу свободно плавающих личинок в течение заданного периода инкубации,причем в этом способе цисты приводятся в контакт с соединением, содержащим по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, для устранения диапаузы хотя бы у части находящихся в диапаузе цист с тем, чтобы из них образовались свободно плавающие личинки в течение заданного периода инкубации, при этом выводимость (вылупляемость) проинкубированных цист повышается с Х% от общего числа полноценных цист в том случае, когда они не приводятся в контакт с указанным соединением, до более высокой степени, чем Х% в том случае, когда они приводятся в контакт с указанным соединением; и набор для аквакультуры. Ван Ниувенхов Люсиан Алекс Йохан(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ИНВЕ ТЕКНОЛОДЖИЗ НВ (BE) 017048 Область техники, к которой относится изобретение Изобретение касается способа выведения науплиусов (личинок) рачков Artemia из некоторого количества цист одного или нескольких видов Artemia, включая находящиеся в диапаузе цисты, путем инкубирования цист в среде выведения в условиях, способствующих вылупливанию хотя бы части цист и выходу свободноплавающих личинок в течение заданного периода инкубации, причем в этом способе цисты приводятся в контакт с соединением, прерывающим диапаузу хотя бы у части находящихся в диапаузе цист с тем, чтобы из них образовались свободноплавающие науплиусы в течение заданного периода инкубации, при этом выводимость (вылупляемость) цист повышается с Х% от общего числа полноценных цист в том случае, когда они не приводятся в контакт с данным соединением, до более высокой степени, чем Х% в том случае, когда они приводятся в контакт с данным соединением. Уровень техники Личинки Artemia обычно используются в качестве живых кормовых организмов в аквакультуре, в частности, в качестве живого корма для ранних личиночных стадий морских рыб и креветок. В качестве живого корма они продаются не в виде личинок, а в виде цист, из которых могут выводиться науплиусы. Цисты образуются у различных видов Artemia, как-то Artemia franciscana, Artemia persimilis, Artemiaurmiana, Artemia tunisian, Artemia tibetiana, Artemia sinica и Artemia parthogenetica. У инцистированных зародышей или цист Artemia эмбриональное развитие приостанавливается (или входит в состояние диапаузы) на стадии гаструлы. Выделяемые самками в таком виде в водную среду,эти находящиеся в диапаузе или спячке зародыши не смогут превратиться в свободно плавающие науплиусы даже при воздействии способствующих проклевыванию условий окружающей среды. Развитие возобновляется лишь при отключении механизмов, контролирующих состояние диапаузы, посредством внешнего воздействия. Известно, что в естественных условиях диапауза прерывается при воздействии холода (зимовке) и обезвоживании. При этом активированный (или покоящийся) зародыш может возобновить развитие, если позволят условия инкубации. Как в состоянии диапаузы, так и в состоянии покоя цисты могут пережить длительные периоды обезвоживания и аноксии, экстремальных температур и давления. В естественной среде обитания такая устойчивость является стратегией выживания вида, так как цисты зачастую на какое-то время являются единственной жизненной стадией животного в данном биотопе. За пределами естественной среды обитания, при достаточном обезвоживании и правильном хранении, т.е. в сухом месте, предпочтительно при низкой температуре и в отсутствие света и кислорода, цисты сохраняют жизнеспособность в течение изрядного периода времени (несколько лет). Такое свойство продолжительной сохранности и последующей круглогодичной доступности в наличии, наряду с коротким временем инкубации для получения свободно плавающих личинок, делает их самым удобным, наименее трудоемким источником живого корма для аквакультуры (Van Stappen, 1996). Цисты Artemia для последующего использования в аквакультуре собирают из природных мест обитания. При этом в исходном продукте цисты в состоянии покоя и в состоянии диапаузы находятся в самых разных пропорциях. Сухой, готовый к употреблению коммерческий продукт получается после выполнения ряда процедур обработки и кондиционирования. При обработке исходный продукт подвергается очистке (удаление мусора), промывке (удаление соли), а затем высушиванию. В стандартных методах кондиционирования, как правило, копируются естественные условия зимовки (хранение в охлажденном помещении) и/или обезвоживания (высушивание горячим воздухом как часть процедуры обработки) и обычно приводят к отключению механизма диапаузы практически у всех отдельно взятых цист. Тем не менее, вылупляемость прошедших обработку цист зачастую остается низкой, так как зародыши оказываются не в состоянии перейти в стадию свободно плавающего науплиуса. Выводимость (вылупляемость) измеряется в виде H%, Heff или Houtput, исходя из конечного результата процесса вылупливания, т.е. свободно плавающего науплиуса. Выводимость в процентах (Н%) равна числу свободно плавающих науплиусов, появляющихся из 100 полноценных цист, эффективность выведения (Heff) равна числу свободноплавающих науплиусов, вылупившихся из 1 г препарата цист, а продуктивность выведения (Houtput) равна весу свободно плавающих науплиусов, вылупившихся из 1 г препарата цист. Причины, по которым зародыши иногда оказываются неспособными перейти в стадию свободно плавающего науплиуса, обычно связаны с неадекватными условиями инкубации. Однако и факторы,свойственные самим цистам, тоже могут вызывать проблемы (например, недостаточный запас энергии). Кроме того, у некоторых штаммов Artemia или у некоторых партий одного и того же штамма довольно большое число зародышей, даже если они и жизнеспособны, не могут запустить процесс вылупливания. У таких штаммов или партий применявшиеся до этого способы или методы кондиционирования, очевидно, не способны отключить диапаузу у всех отдельно взятых цист, поэтому для того, чтобы получить максимальное число свободно плавающих личинок, необходимы дополнительные и более специфичные методики отключения диапаузы (Van Stappen, 1996). Описанные методики включают, среди прочего, продолжительное выдерживание высушенных цист на холоде, многократные циклы обводнения-обезвоживания, кратковременную инкубацию в растворах определенных химикатов (например, перекиси водорода). Эти методы специфичны в отношении штам-1 017048 мов и партий, и к тому же цисты часто реагируют непредсказуемым образом. При неправильном выполнении даже можно получить отрицательные результаты (например, при инкубации в химических растворах при неадекватном сочетании времени и дозы). Такие методы должны применяться в дополнение к и после тех методов обработки, которые применялись до этого, т.е. самим потребителем цист. От него требуется много усилий, навыков и достаточного общего запаса знаний об Artemia, а также конкретной информации о данном штамме или партии, подлежащей обработке. Отсутствие всего этого приведет к появлению ошибок и/или нежелательных результатов. Неудобный для потребителя характер этих специфических, вспомогательных методов отключения диапаузы устраняет одно из главных преимуществ цистArtemia, а именно источника легко доступного свежего корма для аквакультуры. Способ, позволяющий проводить обработку цист для повышения их вылупляемости, но не требующий множества стадий, изложен в ЕР 1195088. В этом способе в среду для выведения вносится перекись водорода в количестве от 0,5 до 30 мг/л среды и цисты инкубируют в ней при плотности максимум 5 г сухого вещества цист на литр, при этом вылупляемость повышается с Х% от общего числа полноценных цист в том случае, когда они не приводятся в контакт с перекисью водорода, до более высокой степени, чем Х% в том случае, когда они приводятся в контакт с перекисью водорода. Недостатком этого способа является то, что в нем вылупливание зависит от количества перекиси. В частности, в среду для выведения нужно внести от 0,5 до 30 мг/л с тем, чтобы устранить диапаузу хотя бы у части цист Artemia для того, чтобы из таких цист в состоянии диапаузы получить свободно плавающие личинки за время инкубации. При более низких, чем оптимальные концентрации перекиси, вылупливание не достигает максимальной величины, а при более высоких концентрациях перекись токсична для личинок, что отражается в снижении выводимости относительно максимальной величины. Этот интервал оптимальных концентраций очень узок и, поскольку он также зависит и от штамма или партииArtemia, то приходится определять при помощи стандартизованных тестов интервал оптимальных концентраций перекиси для каждой партии или штамма перед тем, как рассчитывать дозировку перекиси водорода. Определение оптимального интервала отнимает много времени, а при неправильном выполнении может привести к снижению выводимости. Сущность изобретения Целью настоящего изобретения, таким образом, является обеспечение альтернативного способа повышения выводимости цист Artemia, не ограниченного узким интервалом оптимальных концентраций,дающих максимальную выводимость. С этой целью цисты приводятся в контакт по меньшей мере с одним соединением, содержащим по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, чтобы устранить диапаузу хотя бы у части цист в состоянии диапаузы с тем, чтобы из них вывелись свободно плавающие личинки, при этом выводимость повышается с Х% от общего числа полноценных цист в том случае, когда они не приводятся в контакт с данным соединением, до более высокой степени, чем Х% в том случае, когда они приводятся в контакт с данным соединением. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что приведение цист в контакт с данным соединением, в частности, внесение данного соединения в среду для выведения, способствует устранению диапаузы хотя бы у части цист в состоянии диапаузы и тем самым повышению выводимости. Вне ожидания, в этом новом способе максимальная выводимость достигается при довольно широком интервале концентраций данных соединений в противоположность способу, описанному в ЕР 1195088, в котором максимальная выводимость достигается только в узком интервале концентраций перекиси водорода или соединений, образующих перекись водорода. При этом важным преимуществом является то, что при определении интервала оптимальных концентраций не нужно обязательно оставаться вблизи от этой оптимальной концентрации. Летальные эффекты на Artemia возникают не часто, даже при превышении минимальной дозы данных соединений в два или три раза для достижения оптимальных результатов. Другим важным преимуществом является то, что соединения, содержащие по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, менее агрессивны (менее окислительны, менее воспламенимы) по сравнению с перекисями или перекисными соединениями, приведенными в ЕР 1195088, поэтому они менее вредны для работающих на производстве при обработке цист или для фермеров, использующих эти цисты. Изобретение также касается количества цист одного или нескольких видов Artemia, предназначенных для инкубации в среде выведения для получения свободно плавающих личинок и проявляющих степень выводимости Х% от общего числа полноценных цист при выведении их в среде выведения в отсутствие соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-. Цисты по изобретению отличаются тем, что их смешивают с таким количеством по меньшей мере одного соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, которое достаточно для повышения выводимости цист с Х% до более высокой степени, чем Х% при внесении этого количества данного соединения в среду выведения. Преимущество использования одного или нескольких соединений, содержащих по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, вместо перекиси водорода или перекисных соединений, приведенных в ЕР 1195088, заключается в том, что их эффект на выводимость меньше зависит от их количества. Более-2 017048 того, именно эти соединения легче растворяются в воде без потери своей специфической активности, т.е. повышения выводимости. В результате этого они легче попадают на цисты. Другим преимуществом является то, что данные соединения при попадании на цисты сохраняют свою специфическую активность, т.е. повышение выводимости, даже если концентрация цист меньше или больше, чем обычная концентрация, используемая при обычных работах. Следующим преимуществом является то, что при внесении данных соединений в среду выведения одновременно подавляется размножение бактерий на TCBS-агаре без повреждения свободно плавающих личинок Artemia во время или после выведения. Другие особенности и преимущества изобретения станут понятными из последующего описания некоторых частных воплощений способа выведения и цист, уложенных в тару согласно настоящему изобретению. В этом описании будем обращаться к прилагаемым рисункам. Краткое описание фигур На фигурах представлены данные для коммерчески доступного экстракта зеленого чая, содержащего как минимум 98% полифенолов, из которых по меньшей мере 50% составляет эпигаллокатехина галлат. Это коммерческое соединение обозначается как EGCG, а дозы соединения рассчитываются в мг/л или ppm (ч. млн). На фиг. 1 представлен график, показывающий зависимость эффекта от дозы перекиси водорода иEGCG при внесении в среду выведения на вылупливание цист Artemia, включая цисты в состоянии диапаузы. Выводимость, рассчитанная как число вылупившихся личинок от общего числа личинок плюс зонтиков плюс еще не проклюнувшихся зародышей, обозначена как Н-. Выводимость, рассчитанная как число вылупившихся личинок плюс зонтиков от общего числа личинок плюс зонтиков плюс зародышей,обозначена как Н+. На фиг. 2 представлен график, показывающий вариабельность оптимальной дозы EGCG между различными партиями цист Artemia, включая цисты в состоянии диапаузы. На фиг. 3 представлен график, показывающий эффект концентрации цист в среде выведения на выводимость в процентах при внесении EGCG в среду выведения по сравнению с нанесением его на цисты,в частности, в количестве 8 мг EGCG на 1 г цист. На фиг. 4 представлен график, показывающий численность микробов на морском агаре (МА) и наTCBS-агарe через 24 ч после внесения 30 мг EGCG в среду выведения. Осуществление изобретения Настоящее изобретение, в общем, касается способа получения свободно плавающих науплиусов(личинок) рачков Artemia, исходя из цист Artemia, содержащих некоторое количество цист в состоянии диапаузы. Как и в традиционных способах выведения, цисты подвергаются инкубации в среде выведения в условиях, способствующих проклевыванию цист и выходу свободноплавающих личинок, как правило,но необязательно, за период инкубации в одни сутки (24 ч). Период инкубации начинается с того, что высушенные цисты или цисты, хранившиеся в насыщенном растворе NaCl (влажные цисты), вносятся в среду выведения, содержащую, по крайней мере, воду, т.е. когда цисты начинают впитывать воду. Поскольку состав среды выведения и оптимальные условия выведения личинок обычно известны специалистам и описаны в литературе, в частности, Van Stappen (1996), как указано выше, то нет необходимости подробно описывать эти составы и условия. Однако нужно отметить, что цисты можно инкубировать и в условиях, в чем-то отличающихся от оптимальных условий. Например, цисты можно инкубировать при температуре меньше или больше 28 С, например, при температуре около 30 С, либо в среде выведения,содержащей меньше или больше 35 г/л растворенных солей. Хотя в практических условиях концентрация цист предпочтительно составляет около 2 г/л или несколько меньше, концентрация цист может составлять и меньше или больше 2 г/л. Но обычно концентрация цист составляет менее 10 г/л или даже менее 5 г/л. Отличительная особенность способа по изобретению заключается в том, что цисты приводятся в контакт по меньшей мере с одним повышающим выводимость соединением, содержащим по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, в частности, путем внесения повышающего выводимость соединения в среду выведения, чтобы прервать диапаузу хотя бы у части находящихся в диапаузе цист Artemia с тем, чтобы и из таких цист в состоянии диапаузы получить свободно плавающие личинки. В случае если какая-то часть цист находится в состоянии диапаузы, выводимость повышается с Х% от общего числа полноценных цист при инкубации их в среде выведения, в которую не вносились данные соединения, до более высокой степени, чем Х% при инкубации их в среде выведения, содержащей данные соединения. Следует иметь в виду, что в способе по изобретению вылупляется хотя бы часть находящихся в диапаузе цист, но необязательно все находящиеся в диапаузе цисты, внесенные в среду выведения, хотя предпочтительно должно вылупляться как можно больше находящихся в диапаузе цист. Следствием повышения выводимости цист является то, что чем больше цист вылупляется, тем больше субстрата для гетеротрофных морских бактерий выходит в среду выведения. Вне ожидания, при увеличении вылупливания цист путем внесения данного соединения в среду выведения это же соединение одновременно подавляет развитие бактерий (в основном Vibrio) в среде выведения. На фиг. 4 представлена численность бактерий на морском агаре и TCBS-агаре (тиосульфат-цитрат-3 017048 желчные соли-сахароза) в среде выведения цист пяти различных штаммов (от cyst1 до cyst5), из которых хотя бы часть находится в диапаузе, при этом цисты приводились в контакт с EGCG при различных концентрациях, выбранных в интервале эффективных концентраций для устранения диапаузы у максимального числа цист конкретного штамма. Численность бактерий (главным образом Vibrio) на TCBS-arape в среде выведения без применения повышающих выводимость соединений, содержащих по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, обычно превышала 106 к.о.е./мл после 24 ч инкубации. Вне ожидания,при инкубации цист в присутствии EGCG содержание Vibrio в среде выведения существенно снижалось(на 2-4 лог-единицы по сравнению с контролем) после 24 ч инкубации. В способе по изобретению количество соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру (ОН)С=С(ОН)-, которое вносится в среду выведения, предпочтительно составляет как минимум 1 мг/л,более предпочтительно как минимум 3 мг/л. Наилучшие результаты достигаются при внесении соединения в количестве по меньшей мере 5 мг/л, наиболее предпочтительно по меньшей мере 10 мг/л среды выведения. Данное количество следует рассчитывать от общей суммы всех различных соединений, содержащих, по меньшей мере, одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, которые вносятся в среду выведения и повышают выводимость, так как на практике некоторые препараты, содержащие данные соединения,которые можно использовать для повышения выводимости, содержат смесь из нескольких таких соединений. Соединения, содержащие по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, можно вносить в среду выведения в начале периода инкубации, в частности, путем внесения данных соединений в среду выведения при добавлении в нее цист. Как будет ясно из дальнейшего, это и происходит при смешивании данных соединений с высушенными цистами. Соединения, содержащие по меньшей мере одну структуру-(ОН)С=С(ОН)-, также можно вносить в среду выведения и перед добавлением в нее цист. В этом случае под количеством данных соединений, вносимых в среду выведения, следует понимать то количество данных соединений, которое присутствует в ней в момент добавления цист, так как после внесения какая-то их часть может прореагировать и израсходоваться. Если соединение или соединения, содержащие по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, не вносятся в среду выведения одновременно с цистами, то их вносят в нее предпочтительно менее чем через 10 ч, более предпочтительно менее чем через 8 ч после начала инкубации. Наилучшие эффекты на выводимость достигаются при внесении данных соединений в среду выведения менее чем через 6 ч, в особенности менее чем через 5 ч после начала инкубации. Следует иметь в виду, что не нужно обязательно вносить в среду выведения все количество данных соединений за один раз, а можно их вносить в несколько приемов. Количество соединений, содержащих по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, которое согласно изобретению следует вносить в среду выведения для достижения максимальной выводимости,колеблется в зависимости от штамма или партии цист. Среди прочего, оно зависит от количества находящихся в диапаузе цист и особенно также от глубины диапаузы, т.е. от стадии диапаузы. Однако в отличие от способов предшествующего уровня техники, в которых использовалась перекись водорода (ЕР 1195088), интервал, в котором достигается максимальная выводимость, оказывается намного шире, так что можно использовать вдвое или втрое большее количество без каких-либо токсических эффектов на личинки Artemia. Более того, величина максимальной выводимости обычно даже выше, чем в том методе, в котором используется перекись водорода. Эффект дозы EGCG на выводимость (Н+ и Н-) по сравнению с эффектом дозы перекиси водорода приведен на фиг. 1. В этом примере использовали серию банок на 1 л, в которых инкубировали по 2 г цист Artemia, включая находящиеся в диапаузе цисты (влагосодержание: 7,5%) из той же партии, в искусственной морской воде (25 г/л). Температуру воды в банках поддерживали на уровне 30 С, и воду непрерывно аэрировали и подсвечивали. В среду выведения вносили различные дозы EGCG и перекиси водорода (Н 2 О 2) в начале инкубации цист. Каждую обработку проводили в тройном повторе, а результаты обработки усредняли из трех проб. Из фиг. 1 видно, что в этом примере внесение перекиси водорода в дозе 8 мг/л давало максимальную выводимость в 78,9%, а максимальная выводимость для EGCG составила 83,8%. Еще важнее то, что уже при концентрации перекиси в 9 мг/л выводимость заметно снижается. Отличия между Н- и Н+, которые появляются при дозах перекиси водорода свыше 8 мг/л, свидетельствуют о токсическом эффекте на свободно плавающие личинки. Токсический эффект не заметен на кривых EGCG. При концентрации EGCG в 16 мг/л выводимость составляет более 80% и остается свыше 80% даже при внесении, по крайней мере, двойного (40 мг/л) или тройного (60 мг/л) количества EGCG. Пределы дозировки значительно шире, чем для перекиси водорода, а это на практике означает, что при доведении процесса до коммерческих масштабов опасность передозировки будет меньше. На фиг. 2 использовали три различные дозировки EGCG при одинаковых экспериментальных условиях, как описано для фиг. 1, в отношении пяти разных штаммов или партий цист Artemia. Максимальная выводимость колеблется от штамма к штамму или от партии к партии, но при использовании дозыEGCG, к примеру, 30 мг/л во всех партиях без определения конкретной концентрации для максимальной выводимости по каждой из этих партий все-таки такая доза не оказывает токсического действия на эти партии. Поэтому не обязательно определять оптимальный интервал для достижения максимальной вы-4 017048 водимости по каждой партии или штамму цист, а лучше определять лишь нижний предел концентраций,выше которого соответствующая выводимость будет близка к максимальной. В способе согласно изобретению можно использовать препараты, содержащие повышающие выводимость соединения, содержащие, по меньшей мере, одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, либо смесь из нескольких таких повышающих выводимость соединений. Структура -(ОН)С=С(ОН)- в повышающих выводимость соединениях предпочтительно входит в состав ароматической субструктуры данного соединения. Более предпочтительно повышающее выводимость соединение выбирают из группы, содержащей полифенолы и/или флавоноиды, более предпочтительно эти полифенолы и/или флавоноиды содержат структуру катехола и/или галлола (структура катехола, т.е. группа -С 6 Н 5 О 2; структура галлола, т.е. группа -С 6 Н 5 О 3). Примерами таких препаратов являются коммерчески доступные препараты типа экстракта зеленого чая, экстракта Acacia catechu, экстракта семян винограда и т.п. Эти препараты часто содержат смесь различных полифенолов и/или флавоноидов в большом количестве. Полифенолы и флавоноиды составляют большую группу вторичных метаболитов растений. В настоящее время известно более 5000 индивидуальных соединений, в основе которых лежат лишь несколько основных структур. Их многочисленность обусловлена главным образом различными вариантами гидроксилирования (до шести гидроксильных групп) и замещения эфира путем простого метилирования либо разнообразием моно- и дисахаридов. Проантоцианидины преимущественно встречаются в зеленом чае (Camillia sinensis), семенах и кожуре винограда (Vitis vinifera) или какао (Theobroma cacao). Особенно хорошими кандидатами для повышения выводимости находящихся в диапаузе цист являются полифенолы и/или флавоноиды, содержащие структуры катехола и/или галлола. Примеры таковых включают: катехол, пирогаллол, пирокатехол, пропилгаллат, лаурилгаллат, октилгаллат, метилкатехол, пропилкатехол, дигидрокси-бензальдегид, эллагиновой кислоты гидрат, дофамин-HCl, сульфат D,Lизопротеренола безводный, галлацетофенон, розмариновая кислота, бензолтриол, а из принадлежащих к группе флавоноидов: группа флавононов типа лютеолина; группа флавонолов типа кверцетина, физетина, мирицетина; группа флаванонолов типа таксифолина; группа флаван-3-олов типа катехина, эпикатехина, эпигаллокатехина, эпикатехингаллата, эпигаллокатехингаллата, и другие типа цианидина. В сущности, большинство флавоноидов или полифенолов, содержащих по меньшей мере одну ароматическую субструктуру в виде катехола или галлола, являются хорошими кандидатами для повышения выводимости находящихся в диапаузе цист. Общий обзор флавоноидов можно найти в обзоре Pietta(2000), который включен в настоящее изобретение путем ссылки. На практике используются препараты, прежде всего коммерчески доступные препараты, содержащие смесь приведенных выше соединений. Тем не менее, доступны и такие препараты, которые содержат не более одного такого соединения. Максимальная выводимость (М%) цист может быть определена путем отбора некоторого числа образцов цист и выведения этих образцов в практически идентичных условиях (одинаковая температура,содержание соли, концентрация цист и т.п.), лишь отличающихся друг от друга внесением на единицу их объема различного количества одного или нескольких выбранных повышающих выводимость соединений, содержащих по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-. После этого можно определить выводимость для различных количеств, способных вызвать повышение выводимости, в частности, выбрать оптимальное количество, вызывающее наибольшее повышение выводимости М%. Вместо выбора количества, дающего максимальную выводимость М%, можно также выбрать количество, вызывающее меньшее повышение выводимости, в частности такое, при котором выводимость равна Х%+0,4(М-Х)%, где Х% означает выводимость без внесения повышающего выводимость соединения, и предпочтительно она равна Х%+0,6(М-Х)%, но наиболее предпочтительно такое количество, которое практически соответствует количеству, дающему максимальную выводимость М%. Примеры В следующем примере максимальная выводимость достигалась от следующих препаратов, содержащих не более одного отдельного соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру (ОН)С=С(ОН)-, при следующих концентрациях: Для использования в способе по настоящему изобретению предназначаются цисты одного или нескольких видов Artemia. Когда их выставляют на продажу, то они обычно содержатся в сосуде, в частности в банке. Однако они могут содержаться и в других сосудах или контейнерах, как-то пакетах, баночках, бутылках и т.д. В сосуде может содержаться различное количество цист, которое может варьировать, к примеру от 0,01 до 50 кг, более предпочтительно от 0,1 до 10 кг. В соответствии с настоящим-5 017048 изобретением это количество цист предпочтительно содержится в сосуде и в сочетании с некоторым количеством одного или нескольких из вышеописанных повышающих выводимость соединений, содержащих по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)- Количество этого повышающего выводимость соединения, которое находится вместе с цистами, по меньшей мере, достаточно для внесения вышеописанного количества данного соединения в среду выведения при добавлении в нее расфасованных цист в любой концентрации. Предпочтительно количество данного повышающего выводимость соединения, находящегося вместе с цистами, таково, что при инкубации цист в присутствии этого повышающего выводимость соединения в среде выведения выводимость, по меньшей мере, равна Х%+0,4(М-Х)%, предпочтительно, по меньшей мере, равна Х%+0,6(М-Х)%, и наиболее предпочтительно она практически равна М%. Как уже разъяснялось выше, М% - это максимальная выводимость, которая может быть достигнута при используемых условиях выведения при внесении оптимального количества повышающего выводимость соединения или соединений в среду выведения, а Х% - выводимость при тех же условиях выведения, но без добавления этих соединений. В соответствии с изобретением было обнаружено, что оптимальное количество содержащих по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)- соединений в среде выведения зависит от концентрации цист в среде выведения. Из проведенных авторами экспериментов следует, что концентрация повышающего выводимость соединения, внесенного в среду выведения при концентрации цист 2 г/л, не вызывает такого же повышения выводимости, как при более высокой концентрации цист (например, 6 г/л). Это значит, что при более высокой концентрации цист нужно обеспечить более высокую концентрацию данного соединения, чтобы достичь такого же эффекта на выводимость. Поскольку содержащие по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)- соединения более устойчивы и водорастворимы, чем перекиси, то их легче однородно смешать или нанести на цисты таким образом, чтобы при инкубации цист в емкостях как при низкой (например, менее 2 г/л), так и при высокой концентрации (например, более 2 г/л и даже более 5 г/л) цист концентрация данных соединений в среде выведения повышалась с возрастанием концентрации цист таким образом, чтобы она была, по меньшей мере, равна минимальной концентрации, требуемой для повышения выводимости по сравнению с тем,когда данные соединения не добавлялись. Напротив, перекись водорода или соединения, образующие перекись водорода, были неустойчивы и поэтому их было трудно нанести на цисты. Обычно эти соединения приходилось смешивать с цистами, что могло привести, особенно при добавлении высокой концентрации цист, к неправильной концентрации в среде выведения. На фиг. 3 наглядно представлено преимущество нанесения повышающего выводимость соединения или соединений на цисты. Цисты Artemia, включая находящиеся в диапаузе цисты, инкубировали в банках на 1 л при тех же условиях выведения, как описано выше для приведенного на фиг. 1 примера, но при других концентрациях цист в 2 г/л или больше. К одной серии цист в среду выведения вносилиEGCG в концентрации 20 ppm (20 мг/л) во время инкубации цист. При использовании большей концентрации цист и внесении такого же количества EGCG в среду выведения это количество EGCG оказалось недостаточным для повышения выводимости до максимальной величины (см. фиг. 3). В другой серии на цисты с влагосодержанием 7,5% наносили 8 мг EGCG на 1 г цист (т.е. около 8,6 мг EGCG на 1 г сухого вещества цист) и инкубировали в среде выведения. При нормальной плотности (2 г/л) это давало концентрацию EGCG в 16 ppm (мг/л) в среде выведения. При использовании более высоких концентраций цист эта концентрация тоже повышалась, что свидетельствует о преимуществе нанесения соединений на цисты. При концентрации цист в 4 г/л концентрация EGCG составила 32 ppm (8 мгEGCG на г цист 4 г цист/л = 32 мг EGCG на л среды выведения). При инкубации цист в концентрации 6 г/л концентрация EGCG составила 48 мг/л среды выведения, а выводимость в этом примере оставалась выше 80%. Повышающее выводимость соединение или соединения, содержащие по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, которые смешивают с той порцией цист, которая предпочтительно содержится в сосуде, в частности в банке, предпочтительно смешивают с цистами в количестве по меньшей мере 1 мг на г сухого вещества цист, предпочтительно по меньшей мере 2 мг/г сухого вещества цист, более предпочтительно по меньшей мере 3 мг/г сухого вещества цист и наиболее предпочтительно по меньшей мере 5 мг/г сухого вещества цист. На практике цисты никогда не бывают абсолютно сухими, поэтому, в зависимости от влагосодержания цист (которое обычно составляет менее 10%), соответствующее количество данных соединений на 1 г фактических цист будет несколько меньше. Тем не менее, в настоящей патентной заявке концентрация цист в среде выведения выражается, как обычно, в граммах фактических цист (у которых влагосодержание составляет менее 10%) на 1 л среды выведения. Повышающие выводимость соединения, которые смешивают с цистами, предпочтительно представлены соединениями, у которых данная структура входит в состав ароматической субструктуры данного соединения. Такие соединения предпочтительно выбирают из группы, состоящей из полифенолов и/или флавоноидов, в частности полифенолов и/или флавоноидов, содержащих структуру катехола и/или галлола.-6 017048 На практике иногда наборы, содержащие смесь из более чем одного из данных соединений, смешивают с цистами в упаковке. Практические примеры таких наборов приведены выше. Если порция цист содержится в сосуде, то повышающие выводимость соединения можно объединить с цистами, содержащимися в сосуде, путем внесения их в отдельную упаковку с тем, чтобы сосуд,содержащий цисты, и упаковка, содержащая соединение или соединения, повышающие выводимость,составляли набор, который можно продавать как таковой. Предпочтительно такое повышающее выводимость соединение упаковывают вместе с цистами, например, прикрепляют снаружи к сосуду, содержащему цисты, либо помещают вместе с сосудом в одну упаковку. Более предпочтительно, однако, повышающее выводимость соединение или соединения также содержатся в сосуде. При использовании жидкого раствора они могут, к примеру, содержаться в стеклянном или пластиковом флаконе (бутылочке) и уложены вместе с цистами в сосуд, в частности в банку. При использовании твердого соединения, повышающего выводимость, это соединение можно непосредственно смешать с цистами в виде порошка или гранул, либо в виде таблетки или иной твердой формы. Конечно, оно также может содержаться, к примеру, в капсулах в смеси с цистами. Наиболее предпочтительно повышающее выводимость соединение или соединения прилипает или, иными словами, наносится на цисты. При этом в среду выведения всегда попадает правильное количество повышающего выводимость соединения, особенно когда в среду выведения вносится лишь часть цист, содержащихся в сосуде. БиблиографияReference Center, University of Ghent, Belgium, p. 79-136. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения свободно плавающих личинок рачков Artemia из некоторого количества (порции) цист одного или нескольких видов Artemia, включая цисты в состоянии диапаузы, путем инкубирования цист в среде выведения в условиях, способствующих вылупливанию хотя бы части цист и выходу свободноплавающих личинок, отличающийся тем, что цисты приводятся в контакт по меньшей мере с одним соединением, содержащим по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, для устранения диапаузы хотя бы у части находящихся в диапаузе цист с тем, чтобы из них образовались свободно плавающие личинки, при этом вылупляемость проинкубированных цист повышается с Х% от общего числа полноценных цист в том случае, когда они не приводятся в контакт с данным соединением, до более высокой степени, чем Х%, в том случае, когда они приводятся в контакт с данным соединением. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что данное соединение вносится в среду выведения. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что данное соединение вносится в среду выведения в количестве, превышающем 1 мг/л. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что цисты включают такое количество находящихся в диапаузе цист, что при внесении оптимального количества данного соединения в среду выведения выводимость может повыситься с Х% до максимальной выводимости М%, а количество данного соединения выбирается таким образом, чтобы выводимость повысилась с Х% до величины, по меньшей мере, равной Х%+0,4(М-Х)%, предпочтительно до величины, по меньшей мере равной Х%+0,6(МХ)%. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что у данного соединения структура-(ОН)С=С(ОН)- является частью ароматической субструктуры этого соединения, которое предпочтительно выбрано из группы, включающей полифенолы и/или флавоноиды, более предпочтительно полифенолы и/или флавоноиды, содержащие структуру катехола и/или галлола. 6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что данное соединение вносится в среду выведения меньше чем через 10 ч, предпочтительно меньше чем через 8 ч, более предпочтительно меньше чем через 6 ч и наиболее предпочтительно меньше чем через 5 ч после начала инкубирования в ней цист. 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что данное соединение вносится в среду выведения практически одновременно с цистами, в частности, будучи смешанным с цистами или нанесенным на них. 8. Набор для аквакультуры, содержащий порцию цист одного или нескольких видов Artemia, предназначенных для инкубации в среде выведения для получения свободно плавающих личинок и проявляющих степень выводимости Х% от общего числа полноценных цист при выведении их в среде выведения в отсутствие соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, отличающийся тем, что указанный кормовой продукт дополнительно содержит такое количество по меньшей мере одного соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, которое достаточно для повышения выводимости этой порции цист с Х% до более высокой степени чем Х% при внесении этого количества данного соединения в среду выведения. 9. Набор по п.8, отличающийся тем, что количество указанного соединения составляет по меньшей-7 017048 мере 1 мг/г сухого вещества цист, предпочтительно по меньшей мере 2 мг/г сухого вещества цист, более предпочтительно по меньшей мере 3 мг/г сухого вещества цист и наиболее предпочтительно по меньшей мере 5 мг/г сухого вещества цист. 10. Набор по п.8 или 9, отличающийся тем, что продукт включает такое количество находящихся в диапаузе цист, что при внесении оптимального количества указанного соединения в среду выведения выводимость может повыситься с Х% до максимальной выводимости М%, а количество указанного соединения таково, что при выведении этой порции цист в его присутствии выводимость будет по меньшей мере равна Х%+0,4(М-Х)%, предпочтительно по меньшей мере равна Х%+0,6(М-Х)%. 11. Набор по любому из пп.8-10, отличающийся тем, что у указанного соединения структура-(ОН)С=С(ОН)- является частью ароматической субструктуры этого соединения, которое предпочтительно выбрано из группы, включающей полифенолы и/или флавоноиды, более предпочтительно полифенолы и/или флавоноиды, содержащие структуру катехола и/или галлола. 12. Набор по любому из пп.8-11, отличающийся тем, что он содержит указанное соединение в упаковке, отделяющей его от цист. 13. Набор по п.12, отличающийся тем, что указанное соединение смешано с цистами или нанесено на них. 14. Применение соединения, содержащего по меньшей мере одну структуру -С(ОН)=С(ОН)- для увеличения процента выводимости цист одного или более видов Artemia, более предпочтительно порции цист, содержащей диапаузные цисты.