Фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного начала жизнеспособные лактобациллы, способы их применения и препарат из микроинкапсулированных лактобацилл

1 Область, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в форме капсул,таблеток, кремов, пенообразующих средств,мазей, порошков, суппозиториев и т.д., содержащих микроинкапсулированные лактобациллы, для орального, местного и внутривагинального введения с целью лечения или профилактики спровоцированных антибиотиками диареи,кожных и вагинальных инфекций. Краткое описание предшествующего уровня техники Вызванная антибиотиками диарея представляет собой наиболее распространенный побочный эффект антибактериальной терапии широкого профиля и, по-видимому, является следствием изменения кишечной флоры, как результата лечения антибиотиками и, особенно, исчезновения лактобацилл из состава кишечной флоры. Это состояние может стать опасным для жизни пациента и очень трудноизлечимым, когда оно вызвано заражением бактериями Clostridium difficile. До этого предпринимались попытки терапии вызванной антибиотиками диареи оральным введением лактобацилл. В патенте США 4,332,790, а также в опубликованной французской заявке 2 443 247 описаны различные микроорганизмы, в том числе лактобациллы в капсулах, оболочка которых состоит из маслянистых веществ. Маслянистые вещества по своей природе не разлагаются под воздействием влаги. Однако было доказано, что такой подход имеет ограниченный успех из-за двух основных причин. Первая заключается в том, что вводимые орально лактобациллы, как показали предшествующие исследования, подвергаются разрушающему воздействию желудочного сока. Поэтому только неадекватно малое количество жизнеспособных лактобацилл достигают нижних отделов кишечника, где они необходимы для восстановления здоровой флоры, содержащей лактобациллы. Вторая причина заключается в том, что у лиц, страдающих диареей, вызванной применением антибиотиков, часто обнаруживается временная непереносимость лактозы. (Временная лактозная непереносимость является по мнению специалистов результатом утраты ворсинок щеточной каемки на клетках кишечника, вызванной антибиотиками). Более того, указанный тип преходящей лактозной непереносимости встречается даже у лиц, которые в других случаях при нормальных условиях ею не страдают и не имеют предшествующего опыта непереносимости молочных продуктов или лактозы. В соответствии с предшествующим уровнем техники препараты на основе молочнокислых бацилл обычно содержат следы питательной среды, в которой они выращивались, и потому включают лактозу, лактулозу и другие дисахариды. Они же, в свою очередь, достигая 2 нижних отделов кишечника у лиц, страдающих диареей, вызванной антибиотиками, усугубляют преходящую лактозную непереносимость. В свете вышесказанного имеют место предпосылки для улучшения существующего положения. Более конкретно, имеются возможности для улучшения фармацевтических композиций и способов лечения диареи, вызванной антибиотиками, а также лечения и профилактики определенных кожных и вагинальных инфекций. Настоящее изобретение обеспечивает эти улучшения. Краткое описание изобретения В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения более чем приблизительно 103 жизнеспособных микроинкапсулированных лактобацилл в каждой единичной дозе вводятся орально в качестве фармацевтической композиции или лекарственного средства лицам, страдающим вызванной антибиотиками диареей. Лактобациллы вводятся для терапии или профилактики диареи и такое лечение предпочтительно продолжается во время лечения антибиотиками и некоторое время спустя после лечения. Назначение микроинкапсулированных лактобацилл может сочетаться и с назначением метронидазола или других антибиотиков, уничтожающих Clostridium difficile. Микроинкапсулированные лактобациллы выживают в достаточных количествах при действии желудочного сока в процессе продвижения через желудок к нижним отделам кишечного тракта, где они помогают генерации и восстановлению здоровой бактериальной флоры и устраняют или смягчают симптомы диареи, вызванной антибиотиками. Другой аспект настоящего изобретения заключается в том, что фармацевтическая композиция, содержащая микроинкапсулированные лактобациллы, применяется местно на коже для предотвращения или лечения кожных инфекций, а для предотвращения или лечения вагинальных инфекций применяются вагинальные кремы, пенообразующие средства, мази или суппозитории. Огромное число лекарственных форм, таких как желатиновые капсулы, таблетки или жидкие дозированные формы, могут использоваться для орального введения микроинкапсулированных лактобацилл. Аналогично,огромное количество лекарственных форм, таких как кремы, пенки, мази, суппозитории или смеси с инертными порошками, например,крахмалом или тальком, могут быть использованы для местного и/или вагинального введения микроинкапсулированных лактобацилл пригодным для этого способом. Далее приводится подробное описание изобретения и обзор определенных экспериментов и результатов, которые демонстрируют эффективность изобретения. Подробное описание изобретения. Согласно изобретению, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus и другие виды молочнокислых бактерий, такие как L. bulgaricus, L. thermophilus и подобные им, используются для орального, местного (наружного) или вагинального применения для профилактики или лечения заболеваний или состояний, описанных ниже. Разнообразные виды лактобацилл в дальнейшем все вместе именуются именно таким образом, хотя, если конкретный вид описан, то далее он обозначается своим собственным, более определенным названием. В соответствии с настоящим изобретением установлено, что микроинкапсулированные бактерии обладают огромным преимуществом в плане терапевтического использования при сравнении в одних и тех же условиях с лечением или попытками лечения с помощью лактобацилл, не подвергнутых микроинкапсулированию. Вопервых, микроинкапсулирование существенно увеличивает "время полужизни" бактерий. Еще более важным, тем не менее, является то, что после применения по отношению к человеку или животному таких бактерий оральным, местным или внутривагинальным путем, оболочка микрокапсулы медленно растворяется и позволяет лактобациллам постепенно высвобождаться в окружающую среду, а именно, в нижние отделы кишечника, на кожу или в вагину, в зависимости от способа применения. Когда микроинкапсулированные лактобациллы используются для орального введения, микроинкапсулирование обеспечивает защиту лактобацилл от действия желудочного сока и позволяет жизнеспособным лактобациллам достигать нижних отделов кишечника, где они способны обеспечивать успешное лечебное воздействие. Поскольку для доставки микроинкапсулированных лактобацилл к предполагаемому месту действия могут использоваться различные способы (оральный для доставки в нижние отделы кишечника, аппликации на кожу или интравагинальный способ), необходимо, вообще говоря, чтобы, по меньшей мере, приблизительно 103 жизнеспособных лактобацилл содержалось в каждой единичной дозированной форме,будь то желатиновая капсула, крем, мазь, порошок-присыпка для кожи или вагинальный суппозиторий. В целом это означает, что в каждом грамме или миллилитре заявленной фармацевтической композиции содержится, по меньшей мере, 103 жизнеспособных микроинкапсулированных лактобацилл. Более предпочтительно,чтобы концентрация лактобацилл в доставляемом лекарственном средстве или фармацевтической композиции составляла приблизительно 103-1012 жизнеспособных бактерий на грамм или на миллилитр фармацевтической композиции,причем пределы 105-1012 особенно предпочтительны. В этом отношении отмечается, что 1012 4 бактерий на грамм или миллилитр, по существу,является самым высоким значением количества лактобацилл, которое может содержаться в грамме или миллилитре материала. В настоящее время наиболее предпочтительная концентрация лактобацилл для местного или орального использования составляет приблизительно 106107 жизнеспособных микроинкапсулированных бактерий на миллилитр или грамм композиции. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения бактерии относятся к видуLactobacillus rhamnosus. Хотя некоторые бактериологи относят Lacto bacillus rhamnosus к отдельному, но родственному виду по отношению к Lactobacillus acidophilus, L. rhamnosus все же следует считать простым вариантом L. аcidophilus. Как известно специалистам, и L.acidophilus, и Lactobacillus rhamnosus, а также и другие виды лактобацилл Lactobacillus являются симбиотическими и составляют нормальную интравагинальную бактериальную флору и также входят в состав здоровой кишечной флоры. Известно, что оба вида этих бактерий продуцируют бактерициды и перекись водорода, которые способствуют подавлению патогенных бактерий. Преимущества Lactobacillus rhamnosus перед вариантом L. acidophilus согласно настоящему изобретению заключаются в том, что вариант L. rhamnosus более плодовит (примерно в 8-10 раз) и способен к ферментированию большего числа углеводов (23 по сравнению с 12 у варианта L. acidophilus) и, кроме того, вариант L. rhamnosus продуцирует L+-молочную кислоту вместо рацемата молочной кислоты,продуцируемого вариантом L. acidophilus. Указанное является преимуществом, так как способность варианта L. rhamnosus расти на большем количестве углеводов делает его более стойким и способным к выживанию. Продуцирование L+-молочной кислоты также является преимуществом из-за того, что она является L+энантиомером, который проявляет существенное противогрибковое действие. Оба варианта бактерий, и Lactobacillus acidophilus, и Lactobacillus rhamnosus, используемые в предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения, могут быть приобретены коммерческим путем, либо могут быть получены из лабораторных штаммов. Вариант Lactobacillus rhamnosus, используемый в описанном ниже предпочтительном варианте осуществления изобретения, получен из Института Розелла, Montreal, Quebec, Canada. ВариантLactobacillus микроинкапсулируют в соответствии с настоящим изобретением и вводят в состав фармацевтической композиции, пригодной для орального, местного или вагинального применения. Некоторые способы или методики микроинкапсулирования указанных бактерий описываются ниже. Цель микроинкапсулирования бактерий - увеличить время их 5 числу жизнеспособных лактобацилл выживание, чтобы они могли достигнуть нижних отделов кишечника в случае орального введения, и обеспечить медленное и постепенное высвобождение в случае местного и интравагинального введения. Материал покрывающей бактерии капсулы выбирают, согласно настоящему изобретению, таким образом, что структура его теряет свою целостность пленки в кишечной или вагинальной среде или при применении на коже (с предварительным увлажнением) и высвобождает лактобациллы. Некоторые способы и процедуры микроинкапсулирования описываются ниже. Способы инкапсулирования Для инкапсулирования используют жизнеспособные лиофилизированные лактобациллы,которые лиофилизированы после удаления среды. Бактерии могут быть приобретены коммерческим путем или могут быть получены из лабораторных штаммов. Предпочтительные для осуществления настоящего изобретения бактерии Lactobacillus rhamnosus были куплены у Института Розелла, Montreal, Quebec, Canada. Микроорганизмы выращивают на питательной среде до log-фазы. Пригодными средами являются среда Тейера-Мартина, триптиказный соевый бульон, экстракт мозга и сердца или любая другая обогащенная среда, пригодная для культивирования указанных микроорганизмов. Единственными важными факторами являются жизнеспособность и количество микроорганизмов, которые определяют стандартными клиническими лабораторными методами разбавления,такими как количественное разведение бактерий на чашках с кровяным агаром или другими обогащенными средами, инкубирование при 37 С в течение 24-48 ч в атмосфере с 5-10% двуокиси углерода с последующим подсчетом колоний. Удаление питательной среды осуществляют центрифугированием при 14 000 g и 0-4 С, после чего бактерии промывают стерильным сбалансированным раствором солей и 5%-ным раствором глюкозы, по меньшей мере, три раза. Затем бактерии немедленно замораживают жидким азотом и лиофилизируют в глубоком вакууме. Способ инкапсулирования А Свежеприготовленные, промытые и лиофилизированные бактерии получают, как описано выше, и суспендируют в 10 мл 5% глюкозно-солевого раствора в таком объеме, который обеспечивает получение насыщенной бактериальной суспензии, содержащей от одного до десяти биллионов организмов в мл, при 0-4 С. Все указанные процедуры выполняют при 04 С, если не указано другое, для того, чтобы увеличить жизнеспособность лактобацилл, которые при комнатной температуре ее утрачивают. Суспензию бактерий быстро, но аккуратно перемешивают по мере добавления 0,2-0,4 мл раствора альгината натрия (1,5%, вес/объем). 6 Указанную смесь затем переносят в 4-литровую круглодонную колбу с помощью струи азота,выпускаемой через затупленную иглу 14-го калибра. 4-литровую круглодонную колбу предварительно промывают 5%-ным раствором альбумина и затем прогревают, по крайней мере, 10 ч при 65 С, при этом используемые иглу и трубку обрабатывают аналогичным образом. Затем указанную смесь под давлением пропускают через иглу 30-го калибра со многими скосами с использованием большого шприца и струи азота. На конце иглы образуются очень маленькие капельки, которые высыхают в струе азота и воздуха вокруг иглы 30-го калибра, и капельки собирают в водный раствор 1,3-2%ного хлорида кальция, где они переходят в гель. Затем капельки промывают, по крайней мере,три раза 0,08-0,13%-ным раствором 2-(Nциклогексиламино)этансульфоновой кислоты (CHES) и 1,01,5%-ным раствором хлорида кальция. Перешедшие в гель капельки или маленькие шарики затем промывают, по крайней мере, пятикратным избытком 0,1% CHES, 1,1%-ным хлоридом кальция и нормальным физиологическим раствором. Полученные в результате шарики затем мгновенно замораживают в жидком азоте и лиофилизируют. После этого инкапсулированные микроорганизмы могут быть использованы в составах, заявленных согласно данному изобретению. Способ инкапсулирования В Как усовершенствование способа инкапсулирования А, выполняют следующие стадии для того, чтобы придать бактериям большую устойчивость по отношению к катионным антимикробным агентам. Процедуры выполняют при 04 С. Так, после промывания, описанного выше(Способ инкапсулирования А), материал подвергают взаимодействию с раствором поли-Lлизина (Sigma) (0,05%, вес/объем) в течение 10 мин. Затем шарики промывают нормальным физиологическим раствором, рН которого доводят до 4,5 молочной кислотой. Полученные в результате шарики подвергают мгновенному замораживанию в жидком азоте и затем лиофилизируют. После указанных процедур инкапсулированные микроорганизмы могут быть использованы в составах, заявленных согласно данному изобретению. Способ инкапсулирования С При 0-4 С свежеполученные, промытые лиофилизированные бактерии перемешивают с гидроксипропилметилцеллюлозой до достижения весового отношения бактерий к гидроксипропилметилцеллюлозе 10/90, хотя оно может варьировать в пределах от 1/99 до 99/1 соответственно. Соотношение будет влиять на конечную массу и жизнеспособность инкапсулированных микроорганизмов. Следует понимать, что более высокое содержание целлюлозы будет защищать бактерии 7 в процессе инкапсулирования. Смесь лиофилизированных бактерий и гидроксипропилметилцеллюлозы инкапсулируют методом "раn"покрытия. Процесс осуществляют при использовании круглодонной колбы из нержавеющей стали, которую заранее покрывают 1%-ной суспензией стеарата магния в воде. Комбинация свободноводопроницаемого сополимера эфира акрилметакриловой кислоты и частично водопроницаемого сополимера эфира акрилметакриловой кислоты (EUDRAGIT RLTM и EUDRAGIT RSTM соответственно), полученную от фирмы Rohm Parm. Ltd., Germany, cуспендируют при 5-10%-ной концентрации в ацетонизопропанольной смеси (1:1), содержащей 1%(вес/объем) касторового масла. Соотношение двух сополимеров может колебаться от 1:1 до 1:10 и в предпочтительном случае составляет 1:2. Суспензию помещают в круглодонную колбу из нержавеющей стали. Поскольку в суспензии сополимеров бактерии быстро погибают,процесс необходимо вести быстро при высоком содержании гидроксипропилметилцеллюлозы по отношению к бактериям. Таким образом,смесь бактерий и целлюлозы добавляют в колбу из нержавеющей стали небольшими порциями,тщательно перемешивая содержимое в течение 3-10 мин, пока материал не высушится над струй азота. Способ инкапсулирования D Свежеполученные, промытые лиофилизированные бактерии добавляют при быстром, но осторожном перемешивании при 0-4 С к плотной суспензии поливинилпирролидона (коммерчески доступной от BASF, Germany), который может быть и может не быть перекрестносвязанным, в течение 2-12 ч с однопроцентным(1%) раствором дивинилбензола (Bio-Rad) в сбалансированном солевом растворе, содержащем 5% глюкозы при рН 5,0 (пределы 4,5-8,0). Материал затем мгновенно замораживают и лиофилизируют. Способ инкапсулирования Е Свежеполученные, промытые, лиофилизированные бактерии добавляют при быстром, но аккуратном перемешивании к суспензии поливинилпирролидона (Crospovidone). B частности,десять граммов лиофилизированных бактерий добавляют к суспензии 50 г поливинилпирролидона (Crospovidone) при 0-4 С. Инкапсулирование происходит при перемешивании в течение 30-60 мин, хотя можно использовать и более длительный период времени. Влагу удаляют из смеси под вакуумом в эксикаторе, либо материал мгновенно замораживают и лиофилизируют. Оральное введение микроинкапсулированных лактобацилл Микроинкапсулированные лактобациллы(согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления изобретения Микроинкапсу 000412 8 лированные Lactobacillus rhamnosus) назначают орально лицам, страдающим вызванной антибиотиками диареей или другими формами острой или хронической диареи и последовавшими за ней осложнениями. В соответствии с настоящим изобретением было установлено, что такое лечение микроинкапсулированными лактобациллами существенно корригирует или устраняет симптомы диареи, вызванной антибиотиками. Примеры антибиотиков, побочные эффекты при использовании которых, а именно диарея, были существенно снижены или устранены лечением, проведенным согласно настоящему изобретению, включают клиндамицин, ампициллин или тетрациклин. Специалистам будет понятно, что антибиотики вводили пациентам как средство, необходимое для лечения основной инфекции, и что лечение с помощью микроинкапсулированных лактобацилл, согласно изобретению, сопровождает лечение антибиотиками для устранения или снижения его побочных проявлений. В случае, если пациент страдает от инфекции, вызванной Clostridiumdifficile, рекомендуется лечение такими лекарственными средствами, как метронидазол, ванкомицин или другими пригодными для этого препаратами в соответствии с настоящим изобретением, поскольку эти лекарственные средства уничтожают бактерии Clostridium difficile. Многочисленные средства, известные в данной области, как подходящие для орального введения лекарств и фармацевтических препаратов, могут также использоваться и для орального введения микроинкапсулированных лактобацилл в соответствии с настоящим изобретением. Вообще говоря,оральная доза микроинкапсулированных лактобацилл для взрослого больного, страдающего вызванной антибиотиками или другой формой острой или хронической диареи, составляет примерно от 4 х 103 до 4 х 1012 жизнеспособных лактобацилл ежедневно, что предпочтительно разделить на четыре примерно равные дозы в течение дня. Еще более предпочтительно вводить оральным путем приблизительно 105-1012 жизнеспособных микроинкапсулированных бактерий примерно четыре раза в день. Дозы принимаемых оральным путем бактерий могут быть смешаны с фармацевтическими наполнителями, хорошо известными из уровня техники,для приготовления таблеток, порошков, орально дозируемых жидких средств, капель или же микроинкапсулированные бактерии могут быть заключены в капсулы и вводиться в капсулах,например, желатиновых. Дозы жидких и капельных средств должны быть, однако,недавно приготовленными, иначе жидкость нарушит целостность микроинкапсулирующей оболочки и отрицательно повлияет на жизнеспособность бактерий при воздействии желудочного сока. Сейчас предпочтительной формой орального введения микроинкапсулированных лактобацилл являются капсулы. В 9 соответствии с этим отмечается, что капсула,например желатиновая, служащая "упаковкой" для микроинкапсулированных лактобацилл для достижения целей данного изобретения, является, как установлено "фармацевтически пригодным носителем", поскольку она служит для доставки орально принятых доз "активного ингредиента", а именно, микроинкапсулированных лактобацилл. Другими фармацевтически пригодными носителями являются хорошо известные в данной области материалы, используемые для приготовления порошков, такие как крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, поддерживающие рН, и ароматизирующие и вкусовые добавки. Другие носители указываются ниже при описании средств направленного транспорта при местном (кожном) и интравагинальном способах применения. Несмотря на то, что в настоящее время это не является особо предпочтительным частным случаем использования,микроинкапсулированные лактобациллы могут быть также объединены в составе для орального приема с антибиотиком или иным лекарственным средством, которое назначено больному. Эффективность орально применяемых микроинкапсулированных лактобацилл для существенного уменьшения или устранения побочного эффекта антибиотиков, выражающегося в диарее, показана с помощью нижеследующих клинических тестов. Клиническое испытание орального применения Во время указанного эксперимента пяти пациентам с периодически возобновляющейся вызванной антибиотиками диареей были назначены инкапсулированные лактобациллы для предотвращения диареи, связанной с применением антибиотиков. Инкапсулированные лактобациллы были назначены четыре раза в день в начале антимикробной терапии и прием их продолжался спустя три дня после окончания лечения антибиотиками. Всем пациентам давали антибиотики по соответствующим медицинским показаниям, которые совершенно не зависели от данного эксперимента. Было получено устное согласие и детально разъяснены потенциальный риск и преимущества данного исследования. Пациенты получали по 106 инкапсулированных лактобацилл на дозу, приготовленных согласно способу инкапсулирования В на полилизиновой основе, которая безопасна с точки зрения орального использования. Препарат давали в желатиновой капсуле, заполненной инкапсулированными микроорганизмами в вышеуказанной дозе (приблизительно 106 жизнеспособных бактерий на капсулу). Таблица 1. Краткая характеристика пациентов с вызванной антибиотиками диареей Па- Пол Воз- Обычная про- Антибиотик Доза антицираст долж. диареи,биотика ент вызваннойN антибиот. согласно истории болезни 300 мг 1 ж 29 6-7 дней Клиндамицин Результаты оральной терапии инкапсулированными лактобациллами У всех наблюдавшихся пациентов не было проблем с диареей или другими изменениями состояния кишечника или симптомами. В этой группе пациентов не выявляли никаких неблагоприятных эффектов, связанных с терапией. Такой благоприятный результат лечения в этой группе мог единственно быть связан с оральной терапией инкапсулированными лактобациллами. Оральное введение микроинкапсулированных лактобацилл, согласно изобретению, можно применять для лечения не только людей, но и других млекопитающих. Клиническое испытание местного применения микроинкапсулированных лактобацилл для предотвращения кожных инфекций В этом опыте пяти пациентам с постоянно возобновляющимися кожными инфекционными заболеваниями назначали местное применение инкапсулированных лактобацилл для предотвращения кожных инфекций. Эти больные были отобраны потому, что они все находились в состоянии предрасположенности к хроническим,возобновляющимся заражениям кожи. От каждого из больных было получено устное согласие и подробно разъяснены риск и преимущества этого исследования. Микроинкапсулированные лактобациллы были местно применены на пораженном участке кожи трижды в день в течение шести месяцев. При каждой обработке использовали 106 инкапсулированных лактобацилл, которые получали спообом инкапсулирования D. Инкапсулированные микроорганизмы перемешивали с тальком для получения гомогенного порошка для использования на предназначенном участке кожи. Концентрация жизнеспособных бактерий в составе, который наносили на кожу, составляла приблизительно 106 бактерий на грамм, и в зависимости от обрабатываемой площади использовали от 1/2 до 1 грамма. Таблица 2. Местное использование инкапсулированных лактобацилл для подавления возобновляющихся грибковых инфекций кожи Паци- Воз- Предраспол. Пол и Место Выделенент раст факторы раса зараже- ные грибния ковые организмы Неправильное употребление Белый 1 31 Пах Т. r., T.v. анабол. стемужчина роидов Неправильное Черноупотребление кожая 2 33 Пах Т.г., T.v. анабол. стеженщироидов на Неправильное употребление Белый 3 27 Пах Т.г., Т.m. анабол. стемужчина роидов ПатологичеАбдоская полнота, Белая миналь 4 59 связанная с женщиC.а. ный на сахарным паннус диабетом Сахарный АбдоБелая диабет миналь 5 39 женщиС.а. ный на паннус С.а. - Candida albicans, T.r. - Trichophyton rubrum,T.v. - Trichophyton verrucosum, T.m. - Trichophyton mentagrophytes. Результаты местного применения инкапсулированных лактобацилл При исследовании больных, которым назначалось применение микроинкапсулированных лактобацилл местным путем трижды в день, ни у одного из них не наблюдалось заражений дрожжеподобными грибами в течение всего периода исследований. Не наблюдалось также никаких неблагоприятных реакций ни у одного из больных. В этом отношении следует понимать, что местное применение микроинкапсулированных лактобацилл, в соответствии с настоящим изобретением, не ограничивается участками кожи, которые были обработаны у пяти пациентов в вышеописанном тесте. Скорее, фармацевтическая композиция, полученная в соответствии с данным изобретением пригодна для лечения и профилактики кожных инфекционных заболеваний на практически любых участках кожи у людей и млекопитающих животных. Клиническое испытание интравагинального применения микроинкапсулированных лактобацилл для уменьшения опасности заражения Как единодушно полагают практикующие врачи и ученые (что отражено в обширной научной литературе), естественная вагинальная флора должна содержать соответствующие лактобациллы как доминирующий вид. Более того,желательно, чтобы лактобациллы этой флоры продуцировали и перекись водорода, и микробиоциды. Для того, чтобы продемонстрировать полезность местного вагинального применения микроинкапсулированных лактобацилл для предотвращения вагинальных инфекций, для 12 вагинальной терапии с использованием микроинкапсулированных лактобацилл было отобрано пятеро больных с более чем шестикратно возобновляющимися инфекциями и с предрасполагающими к этому факторами. Ото всех пациенток было получено устное согласие и подробно разъяснены потенциальный риск и преимущества этого опыта. Микроинкапсулированные лактобациллы применяли местно один раз в день, на ночь, в течение 6 месяцев. По этическим соображениям этот эксперимент проводили без плацебо, а в качестве контроля использовали предшествующую историю болезни пациенток. Всех пациенток в этом тесте лечили клотримазолом (торговая марка Mycelex-G 500,один 500-мг суппозиторий) на ночь в течение одной недели до начала данного исследования. Указанная терапия была необходима потому,что у этих больных были выявлены симптомы грибковых заболеваний, идентифицированные ниже в таблице 3, которые необходимо было элиминировать до начала исследования. Пациентки получили дозы по 106 инкапсулированных лактобацилл, приготовленных способом инкапсулирования С, который включает использование целлюлозной основы. Продукт,полученный согласно способу инкапсулирования С, может быть сформован в твердый или наполовину твердый объект, напоминающий по форме суппозиторий, который может быть легко помещен в вагину. Если необходимо, в состав суппозитория могут быть добавлены целлюлоза или лактоза или другие стандартные ингредиенты. В этом отношении следует отметить, что,вообще говоря, для местного и интравагинального путей применения могут использоваться различные средства доставки (составы), известные из уровня техники. Например, микроинкапсулированные лактобациллы могут быть смешаны с кукурузным крахмалом, тальком или другими пригодными порошкообразными материалами. Могут быть приготовлены кремы, мыло и мази, а также обычные суппозитории, в которых помимо активного ингредиента микроинкапсулированных лактобацилл, могут использоваться наполнители, такие как микрокристаллическая целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, стеарат С/магния, диоксид силикона и лактоза. Кроме того, другие необязательные компоненты или ингредиенты, которые могут быть включены в суппозитории, кремы,мыло, мази, порошки и другие составы, согласно изобретению, представляют собой отдушки,ментол, эвкалиптовое масло, метилсалицилат или аналогичные салицилаты в качестве местных успокаивающих агентов; гидрокортизон или родственные ему стероиды противовоспалительного действия (1-500 мг на суппозиторий) как противовоспалительные агенты; ЭДТА как увлажняющий и умеренно антимикробный агент; пропиленгликоль или другие фармацевтически приемлемые гликоли,метилпарабен или родственные парабеновые производные как увлажняющие и текстурирующие агенты; пара-ди-изо-бутилфеноксиполиэтоксиэтанол, ноноксинол-9 или монолаурат додекаэтиленгликоля как спермицидные и умеренно антимикробные агенты; тритионы и менфегол как спермицидные, умеренно антимикробные и увлажняющие агенты. Таблица 3. Интравагинальное использование инкапсулированных лактобацилл для уничтожения вагинальных инфекций Паци- Предраспол. фак- Кол-во ДоминиДоминиент,торы вагирующие рующие и вознальных микроор- микроорраст зараже- ганизмы ганизмы ний в до лечения после год до лечения лечения 1 33 г. Результаты вагинального применения инкапсулированных лактобацилл При исследовании больных, принимавших микроинкапсулированные лактобациллы на ночь местным, интравагинальным путем ни у одной из пациенток не наблюдалось заражений дрожжеподобными грибами в течение всего периода наблюдений. Не наблюдалось также никаких неблагоприятных реакций ни у одной из пациенток и после лечения было установлено, что доминирующими в вагинальной флоре микроорганизмами являются бактерии Lactobacillus acidophylus или Lactobacillus rhamnosus. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного начала жизнеспособные лактобациллы и фармацевтически приемлемый носитель для целенаправленной доставки лактобацилл, отличающаяся тем, что единичная доза указанной композиции содержит,по крайней мере, 103 лактобацилл, причем указанные лактобациллы микроинкапсулированы и 14 в результате этого сохраняют жизнеспособность в течение всего срока хранения композиции, а вещество, составляющее оболочку капсулы,обеспечивает высвобождение лактобацилл при продолжительном контактировании с влажной средой. 2. Фармацевтическая композиция по п.1,отличающаяся тем, что единичная доза композиции содержит, по крайней мере, около 105 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillusacidophylus или его варианта Lactobacillusrhamnosus. 3. Фармацевтическая композиция по п.1,отличающаяся тем, что лактобациллы представляют собой вариант Lactobacillus rhamnosus. 4. Фармацевтическая композиция по п.1,отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель обеспечивает оральное введение микроинкапсулированных лактобацилл человеку. 5. Фармацевтическая композиция по п.4,отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель представлет собой желатиновую капсулу. 6. Фармацевтическая композиция по п.5,отличающаяся тем, что единичная доза композиции в составе капсулы содержит, по крайней мере, около 105 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillus acidophylus или его вариантаLactobacillus rhamnosus. 7. Фармацевтическая композиция по п.1,отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель обеспечивает местное применение микроинкапсулированных лактобацилл на коже человека. 8. Фармацевтическая композиция по п.7,отличающаяся тем, что 1 г или 1 мл данной композиции содержит, по крайней мере, около 106 жизнеспособных лактобацилл видаLactobacillus rhamnosus. 9. Фармацевтическая композиция по п.8,отличающаяся тем, что указанная фармацевтическая композиция представляет собой порошок. 10. Фармацевтическая композиция по п.1,отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель обеспечивает интравагинальное введение микроинкапсулированных лактобацилл человеку. 11. Фармацевтическая композиция по п.10,отличающаяся тем, что представляет собой вагинальный суппозиторий. 12. Фармацевтическая композиция по п.11,отличающаяся тем, что каждый суппозиторий содержит, по крайней мере, около 106 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillusacidophilus или его варианта Lactobacillusrhamnosus. 13. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного начала жизнеспособные лактобациллы и фармацевтически при 15 емлемый носитель для целенаправленной доставки лактобацилл, приспособленная для орального введения человеку, отличающаяся тем, что единичная доза указанной композиции содержит, по крайней мере, 103 лактобацилл, причем указанные лактобациллы микроинкапсулированы и в результате этого сохраняют жизнеспособность в течение всего срока хранения композиции, а вещество, составляющее оболочку микрокапсулы, обеспечивает высвобождение лактобацилл при продолжительном контактировании с влажной средой, преимущественно с влажной средой нижних отделов кишечника. 14. Фармацевтическая композиция по п.13,отличающаяся тем, что единичная доза композиции заключена в желатиновую капсулу. 15. Фармацевтическая композиция по п.14,отличающаяся тем, что желатиновая капсула содержит, по крайней мере, около 105 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillusacidophylus или его варианта Lactobacillusrhamnosus. 16. Фармацевтическая композиция, которая приспособлена для местного применения на коже человека, причем единичная доза композиции содержит, по крайней мере, 103 лактобацилл, которые микроинкапсулированы и в результате этого сохраняют жизнеспособность в течение всего срока хранения композиции, а вещество, составляющее оболочку микрокапсулы, обеспечивает высвобождение лактобацилл при продолжительном контактировании с влажной средой. 17. Фармацевтическая композиция по п.16,отличающаяся тем, что 1 г или 1 мл данной композиции содержит, по крайней мере, около 106 жизнеспособных лактобацилл видаLactobacillus rhamnosus. 18. Фармацевтическая композиция, которая приспособлена для внутривагинального введения человеку, причем единичная доза композиции содержит, по крайней мере, 103 лактобацилл, которые микроинкапсулированы и в результате этого сохраняют жизнеспособность в течение всего срока хранения композиции, а вещество, составляющее оболочку микрокапсулы, обеспечивает высвобождение лактобацилл при продолжительном контактировании с влажной средой влагалища. 19. Фармацевтическая композиция по п.18,отличающаяся тем, что представляет собой вагинальный суппозиторий. 20. Фармацевтическая композиция по п.19,отличающаяся тем, что каждый суппозиторий содержит, по крайней мере, около 105 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillusacidophilus или его варианта Lactobacillusrhamnosus. 21. Способ лечения или предотвращения обусловленной приемом антибиотиков или дру 16 гой причиной острой или хронической диареи у млекопитающих, в том числе у человека, путем орального введения фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала жизнеспособные лактобациллы, отличающийся тем, что указанному млекопитающему вводят фармацевтическую композицию по любому из пп.13-15. 22. Способ по п.21, отличающийся тем, что человеку вводят, по крайней мере, около 4 х 103 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillusacidophilus или его варианта Lactobacillusrhamnosus ежедневно. 23. Способ по п.21, отличающийся тем, что жизнеспособные микроинкапсулированные лактобациллы заключены в желатиновую капсулу. 24. Способ по п.23, отличающийся тем, что каждая капсула содержит, по крайней мере,около 105 жизнеспособных лактобацилл видаLactobacillus rhamnosus и человеку ежедневно вводят приблизительно 4 капсулы. 25. Способ лечения или предотвращения кожных инфекций у млекопитающих, в том числе у человека, на участке кожи с возобновляющимися инфекционными поражениями, заключающийся в том, что указанный участок локально обрабатывают фармацевтической композицией по любому из пп.16-17. 26. Способ по п.25, отличающийся тем, что в случае лечения или предотвращения кожных инфекций у человека единичная доза указанной композиции содержит, по крайней мере, около 105 жизнеспособных лактобацилл видаLactobacillus rhamnosus. 27. Способ по п.26, отличающийся тем, что указанная композиция представляет собой порошок. 28. Способ лечения или предотвращения заражения дрожжеподобными грибами млекопитающих женского пола, в том числе человека,заключающийся в интравагинальном введении фармацевтической композиции по любому из пп.18-20. 29. Способ по п.28, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция представляет собой вагинальный суппозиторий, содержащий,по крайней мере, около 105 жизнеспособных лактобацилл вида Lactobacillus acidophilus. 30. Препарат из микроинкапсулированных лактобацилл, содержащий, по крайней мере,около 103 жизнеспособных лактобацилл, причем вещество, составляющее оболочку микрокапсулы, обеспечивает высвобождение лактобацилл при продолжительном контактировании с влажной средой. 31. Препарат по п.30, отличающийся тем,что лактобациллы относятся к виду Lactobacillusacidophilus или его варианту Lactobacillus