Антисмысловые олигонуклеотиды к ил-8 и рецептору ил-8 и способ лечения злокачественных опухолей.

1 Область изобретения Областью данного изобретения является терапия олигонуклеотидами, и, в частности,использование олигонуклеотодов для модуляции экспрессии ИЛ-8 и/или ИЛ-8 рецептора для контроля роста, метастаз и/или ангиогенеза при опухолях. Предпосылки изобретения ИЛ-8 Интерлейкин-8 (ИЛ-8, нейтрофил активирующий белок-1 или NAP-1) является членом СХ-С хемокинного семейства родственных цитокинов, которые широко вовлечены в воспалительные ответы, повреждение ткани, регуляцию роста и клеточную адгезию. Cerretti, D.P., et al.,Molecular Characterization of Receptors for Human lnterleukin-8, GRO/Melanoma GrowthStimulatory Activity and Neutrophil Activating(1995). Также было показано, что ИЛ-8 оказывает сильный стимулирующий эффект на ангиогенез, Koch, A.E., lnterleukin-8 as a MacrophageDerived Mediator of Angiogenesis, Sciense, 258,1798-1800 (1992). Известно, что ИЛ-8 продуцируется рядом нормальных соматических клеток человека,включая моноциты/макрофаги, дермальные фибробласты,сосудистые эндотелиальные клетки, кератиноциты и мезангиальные клетки.Gene, J. of Biological Chemistry, 267(31), 2250611 (1992). Очевидно, что такие клетки продуцируют ИЛ-8 только при стрессовых условиях, а не при условиях нормального роста и гомеостаза. Факторы, которые индуцируют продуцирование ИЛ-8, включают воспаление, ИЛ-1, ФНО,ЛПС и тромбин. Также известно, что ИЛ-8 обычно секретируется опухолевыми клетками. Опухоль обозначает здесь неконтролируемое и прогрессирующее увеличение числа клеток, включая доброкачественные опухоли и все формы неоплазм и рака. В одной работе было показано, что ИЛ-8 присутствует в 80% клеточных линий карциномы и в 83,3% изученных раковых тканей. Также было показано, что ИЛ-8 является фактором роста для злокачественных опухолей и антиИЛ-8 антитела и антисмысловые последовательности к ИЛ-8 рецептору эффективны для ослабления роста раковых клеток in vitro.in Vitro Is an Essential Autocrine Grouth Factor,J.lmmunol., 151 (5), 2667-2674 (1993). Из-за его действия на рост клеток, предполагается, что ИЛ-8 играет значительную роль в метастатическом распространении меланомы и других видов злокачественных опухолей.Schadendorf, D., et al., Supra. Например, было показано, что ИЛ-8 непосредственно вовлечен в механизм метастазирования при меланомеPrimary Cutaneous Melanoma via Induction of Interleukin 8, Cancer Res., 55, 3669-3674, 1995),также как и при раке легкого (Greenspoon, S.A.,et al., The expression of IL-8 during Tumorgenesislung cancer/SCID mouse chimera, Clinical Research, 42, 404A, 1994). Также было обнаружено,что ИЛ-8 играет роль в неоваскуляризации опухоли, например при чешуйчатых клеточных карциномах головы и шеи. Cohen R.F., et al.,Arch Otolaryngol. Head Neck Surg., 121, 202-209,1995. Таким образом ИЛ-8 играет важную роль при росте опухоли, метастазе и ангиогенезе. Рецептор ИЛ-8 ИЛ-8 является лигандом для клеточного мембранного ИЛ-8 рецептора и считается, что для действия ИЛ-8 необходимо взаимодействие между ИЛ-8 и ИЛ-8 рецептором. К настоящему моменту индентифицированы 2 гена ИЛ-8 рецептора, ИЛ-8 рецептор типа А и типа В. Оба гена принадлежат к так называемому семействуG-белоксвязанных рецепторов с семью трансмембранными доменами. Было показано, что рецептор А активируется ИЛ-8, а рецептор В активируется как ИЛ-8, так и другими цитокинами, принадлежащими к С-Х-С семейству,включая стимулятор активности роста меланомы (MGSA). Считается, что рецептор В замечателен своей неразборчивостью, связываясь с продуктом гена регулятора роста (GRO) (также известным как стимулятор активности роста меланомы (MGSA, нейтрофил активирующим пептидом-2(NAP-2) и нейтрофилактивирующим пептидом-1 (САР-1), которые все находятся в кластере 4q13-q21 хромосом человека. Ahuja, S.K., Molecular Evolution of theMGSA на нейтрофилы, включают мобилизацию кальция, индукцию дыхательного взрыва, дегранулирование секреторных везикул и возрастание как GTP-азной активности так и GTP связывания. ИЛ-8 рецептор В был обнаружен не только на нейтрофилах и других клетках кроветворной линии, но также на некроветворных клетках. ИЛ-8 рецептор В был обнаружен, например, на клетках, чувствительных к MGSA, фактору некроза опухоли и к опухолевым промоторам, 3 включая клеточные линии плаценты и почки.(1993). Роль и функция рецептора В ИЛ-8, присутствующего на раковых и других опухолевых клетках, полностью не выяснены. Существует,однако, доказательство того, что активация ИЛ 8R В (1) вовлечена в механизм регуляции роста меланомы и онкогенных фибробластов; (2) ассоциирована с трансформацией легочных клеток асбестом, и (3) коррелирует со скрытыми метастазами при меланоме. кДНК, кодирующие, по меньшей мере, два ИЛ-8 рецептора, были выделены и картированы на 2q35 хромосоме. Morris, S.W., et al., Assignment of the Genes Encoding Human Interleukin-8Encoding a Functional Human lnterleukin-8 Receptor, Sciense, 253, 1280-1283 (1991). Биохимически было определено два дополнительных ИЛ-8 рецептора, которые могут соответствовать ранее определенной кДНК. Moser, et al., Expression of Transcrips for Two Interleukin Receptors inCells, Biochem. 294, 285-292 (1993). При данном, стимулирующем рост, действии ИЛ-8 на клетки, чувствительные к различным факторам роста опухоли, было бы полезно использовать антисмысловые олигонуклеотиды,модулирующие экспрессию как ИЛ-8, так и ИЛ 8 рецептора при различных типах раковых опухолей in vivo. В частности, было бы полезно применять нуклеотиды, являющиеся эффективными против рака легкого и меланомы, так как при каждой из указанных форм рака продуцируются собственные факторы роста. Существует, по меньшей мере, два главных типа рака легкого, мелкоклеточная легочная карцинома (SCLC) и немелкоклеточная легочная карцинома (NSCLC). SCLC составляет примерно одну четвертую от общего числа случаев, экспрессирует нейроэндокринные маркеры, и, главным образом, на ранних стадиях метастазирует в лимфатические узлы, мозг, кости,легкие и печень. NSCLC охватывает большинство оставшихся типов легочных опухолей и включает аденокарциному,чешуйчатоклеточную карциному и крупноклеточную карциному. NSCLC характеризуется экспрессией эпителиальноподобных факторов роста и рецепторов и является локально инвазивной. Клетки меланомы в отличие от нормальных меланоцитов могут пролиферировать в отсутствие экзогенных факторов роста. Эта независимость, очевидно, отражает продуцирование 4 фактора роста и цитокинов для аутокринной стимуляции роста, включая TGF-, TGF-, цепи факторов роста А и В из тромбоцитов, основной фактор роста фибробластов, ИЛ-8, ИЛ-6, ИЛ-1,колониестимулирующий фактор гранулоцитов/макрофагов и MGSA. Guo Y, et al., IngibitionRes., 54, 1561-1565 (1994). К настоящему времени сообщается о некотором успехе в применении антисмысловых олигонуклеотидов в концентрации 20 мкМ для снижения экспрессии ИЛ-8 рецептора и ингибирования роста клеток при раке легкого (Ishiko,Т., et al., Supra) и злокачественной меланоме(Schadendorf, D., et al., Supra). Эти сообщения,однако, касаются работ in vitro, и не совсем ясно, будут ли те же олигонуклеотиды эффективны in vivo. Даже применительно к работам invitro, по меньшей мере, один из исследователей доложил об успехе только с измененными фосфоротиатными антисмысловыми олигонуклеотидами. Bargou, R.C., Regulation of ProliferationBlackwell Science, Inc. ISBN 0-86542-254-0. Таким образом, все еще существует необходимость в олигонуклеотидах, которые ингибируют рост, метастаз и/или ангиогенез меланомы и рака легкого in vivo, препятствуя экспрессии ИЛ-8 и/или ИЛ-8 рецептора. Более того, с тех пор как оказалось, что ИЛ-8 и ИЛ-8 рецептор широко вовлечены в механизмы роста опухоли,метастазирования и ангиогенеза, феноменов,которые являются характерными для большинства типов раковых опухолей, необходимо сделать акцент на них или соответствующие гены при лечении раковых и других опухолей. Краткое описание изобретения Предложен олигонуклеотид, имеющий последовательность 5' СТТ ССТ GTC TGA TGG СТТ СТ 3' (SEQ ID NO:4), ингибирующий активность рецептора ИЛ-8, а также олигонуклеотид, имеющий последовательность 5' GAA AGTTTG TGC CTT ATG GA 3' (SEQ ID NO:2), ингибирующий активность ИЛ-8. В заявленных олигонуклеотидах, по меньшей мере, часть основы может быть модифицирована по сравнению с обычной фосфодиэфирной конфигурацией, либо, по меньшей мере,один из сахаров может быть модифицирован по сравнению с конфигурацией нормальной рибозы, либо одновременно, по меньшей мере, часть основы модифицирована по сравнению с обычной фосфодиэфирной конфигурацией и, по меньшей мере, один из сахаров модифицирован по сравнению с конфигурацией нормальной рибозы. Предложен также способ лечения злокачественных опухолей, которые, по меньшей мере, 5 частично опосредованы активностью рецептора ИЛ-8, заключающийся в том, что получают фармацевтическое средство, содержащее олигонуклеотид, имеющий последовательность 5' СТТ ССТ GTC TGA TGG СТТ СТ 3' (SEQ IDNO:4), и вводят пациенту эффективное количество указанного фармацевтического средства. Также предложен способ лечения злокачественных опухолей, которые, по меньшей мере,частично опосредованы активностью ИЛ-8, заключающийся в том, что получают фармацевтическое средство, содержащее олигонуклеотид,имеющий последовательность 5' GAA AGT TTGTGC СТТ ATG GA 3' (SEQ ID NO:2), и вводят пациенту эффективное количество указанного фармацевтического средства. В заявленных способах фармацевтическое средство может быть введено путем внутриопухолевой инъекции или путем внутривенной инъекции. Краткое описание графических материалов Новые признаки, характеризующие данное изобретение, сгруппированы и распределены по пунктам в прилагаемой формуле изобретения. Данное изобретение в соответствии с предпочтительными воплощениями и примерами осуществления вместе с его дальнейшими преимуществами более подробно представлено в следующем подробном описании, сопровождающемся графическими материалами. Фиг. 1 представляет собой столбики диаграммы, показывающей ингибирующее рост действие контрольного олигонуклеотида ICN 131, ИЛ-8 олигонуклеотида ICN-70 (SEQ IDID NO:3) в концентрации 0,1 мкМ на клетки меланомы (АТСС НТВ 140), легочной карциномы (АТСС НТВ 177), рака простаты (АТСС НТВ 81) и клетки рака груди (T47D) в течение 72 ч обработки. Использованы следующие обозначения указанных олигонуклеотидов: фиг. 2 представляет собой столбики диаграммы, показывающей ингибирующее рост действие ИЛ-рецептор В олигонуклеотида ICN247 (SEQ ID NO:5), ICN-107 (SEQ ID NO:4) иICN-247 (SEQ ID NO:5) в концентрации 0,1 мкМ на клетки меланомы (АТСС НТВ 140), немелкоклеточной легочной карциномы (АТСС НТВ 177), рака простаты (АТСС НТВ 81) и клетки рака груди (T47D) в течении 72 ч обработки. Использованы следующие обозначения указанных олигонуклеотидов: 6 фиг. 3 представляет собой таблицу, показывающую кинетику роста подкожной меланомы у balb/c nude/nude мышей, выраженную как наклон, полученный в результате применения линейного регрессионного анализа для необработанных мышей и мышей, обработанных 1CN 131 и ICN-70 (SEQ ID N0:2); фиг. 4 представляет собой таблицу, показывающую кинетику роста подкожного рака легкого у balb/c nude/nude мышей, выраженную как наклон, полученный в результате применения линейного регрессионного анализа для необработанных мышей и мышей, обработаныхICN 131 и ICN-70 (SEQ ID NO:2). Подробное описание изобретения Синтез олигонуклеотидов Ниже описано получение различных олигонуклеотидных последовательностей и тестирование данных последовательностей на эффективность их воздействия на клетки рака легкого и/или меланомы. Все тестированные последовательности были синтезированы на автоматическом ДНК-синтезаторе (Applied Biosystems модель 394) в форме фосфодиэфирных олигонуклеотидов с использованием стандартной методики химии фосфодиэфиров. Полученные олигонуклеотиды были очищены с помощью HPLC при использовании полупреперативной С 8 колонки с обращенной фазой (АВI) в линейном градиенте 5%-ого ацетонитрила в 0,1 М триэтиламмоний ацетате и ацетонитриле. Чистота указанных продуктов проверялась с помощьюHPLC при использовании аналитической С 18 колонки (Beckman). Тестирование in vitro Тестирование указанных олигонуклеотидных последовательностей проводилось на линии крупноклеточной легочной карциномы АТСС НТВ 177, клетках меланомы АТСС НТВ 140,рака простаты АТСС НТВ 81 и клетках рака груди T47D. Эти клетки выращивались обычным способом в культуре в термостате в условиях влажности при 37 С (5% CO2, 95% воздуха) при атмосферном давлении. Обе клеточные линии выращивались как прикрепленные культуры в 90% RPMI 1640, с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. Клетки были внесены в 96-луночные плaншeты для микротитрования пo 2000 клеток на лунку и далее один раз обработаны антисмысловыми и контрольными олигонуклеотидами в концентрации 0,1 мкМ. После 72 ч культивирования все клетки были импульсно помечены 1 мкКи/лунка 200 мкл [3 Н] тимидина, дополнительно культивированы в течение 2 ч, собраны автоматическим устройством [Harvester 96(Tomtec)], и далее включение [3 Н] было определено -счетчиком. Для гарантии точности результатов все эксперименты проводились в трех вариантах и повторялись, по меньшей мере, три раза. Результаты представлены на фиг. 1 и 2. 7 Тестирование in vivo Эксперименты in vivo, результаты которых представлены на фиг. 3 и 4, были выполнены наbalb/c nude/nude мышах, дефицитных по Т лимфоцитам, но достаточным по В лимфоцитам илиNK клеткам. Согласно протоколу 2,5 миллиона клеток меланомы (АТСС НBТ 140) в сбалансированном солевом растворе Хэнкса инъецировали подкожно. 10 дней спустя измеряли размер опухоли, и в этот же день внутрь опухоли инъецировали олигонуклеотиды в концентрации 0,1 мкМ в 100 мкл сбалансированного солевого раствора Хэнкса. Инъекции повторяли дважды в день в течение 14 дней. Размер опухоли измеряли в мм 2 на 7, 10, и 14 дни обработки. В последний день обработки (14 день) животных убивали для сбора опухолевых тканей и иx гистопатологического aнaлизa и для оценки уровня экспрессии ген/белок. В случае рака легкого, вводили 0,25 миллиона клеток (АТСС НВТ 177). Далее животные подвергались обработке, как описано выше. Фармацевтические препараты олигонуклеотидов Как и другие олигонуклеотиды, олигонуклеотиды по данному изобретению могут быть адаптированы для введения в организмpaзличными способами, включая оральный,внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, местный и подобные. Кроме одного или более одного различных олинуклеотидов фармацевтические препараты могут содержать один или более биологически не активных компонентов, например наполнителей, таких как стабилизаторы (способствующие длительному хранению), эмульгаторы, связывающие агенты,сгущающие агенты, соли, консерванты и тому подобные. Способы доставки олигонуклеотидов хорошо известны в данной области для широкого ряда животных, включая млекопитающих, и, в частности, человека. Например, в книге DeliveryStrategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics, CRC press (Saghir Akhtar, ed. 1995) детально описаны многие подобные способы и стратегии доставки, что подкреплено ссылками. Только лишь в качестве примера можно указать главу 5,которая раскрывает введение традиционным внутривенным, внутрибрюшинным и подкожным способами наряду с неповреждающими способами, такими как назальный, глазной,трансдермальный и ионофоретический способы(там же, с. 71-83), которые все применимы для данного изобретения. Глава 6 этой же книги описывает способы модификации, благодаря которым олигонуклеотидные терапевтические средства становятся устойчивыми к нуклеазам,и термины нуклеотид(ы), олигонуклеотид(ы) и основание(я) нуклеиновых кислот, как они использованы, включают описанные модификации и все другие консервативно модифицированные варианты природных форм таких соеди 000841 8 нений (там же, с. 85-104). Заявленные олигонуклеотиды могут так же быть связаны с липидным или другим соединением, которое активно транспортируется через клеточную мембрану,как с линкером, так и без него, и могут быть введены орально как описано в патенте США 5,411,947, который включен здесь в качестве ссылки. Более того, олигонуклеотиды данного изобретения могут быть введены сами по себе,инкапсулированными, связанными с везикулами, липосомами, шариками, микросферами, в виде коньюгатов, и как аэрозоль непосредственно в легкие, с использованием, например, продукта IСN Biomedicals No. SPAG 2. Таким образом, заявленные олигонуклеотиды могут быть введены по существу всеми известными для олигонуклеотидов способами при использовании всех принятых для получения нуклеотидных аналогов и пролекарств модификаций и всех подходящих связующих веществ и наполнителей лекарственных форм и схем обработки. Олигонуклеотиды могут применяться в общепринятых дозах и количествах для обсуждаемых биологически активных соединений, но адаптированных для более эффективного всасывания, транспорта и клеточного захвата. Указанные дозы могут вводиться единовременно или могут быть разделены на ряд меньших доз,которые затем вводятся через варьирующие промежутки времени. В настоящее время наиболее предпочтительное введение олигонуклеотидов по данному изобретению включает внутривенное введение дозы от 0,1 до 100 мг олигонуклеотида на кг веса пациента, 1-14 раз в неделю в течение приблизительно 40 дней. Эта схема основана на определенном времени полужизни подобных олигонуклеотидов in vivo,составляющем от нескольких минут до нескольких часов, наряду с тем наблюдением, что влияние на белковый синтез может сохраняться до 48 или 72 ч. Специфическая схема лечения,предлагаемая каждому индивидуальному пациенту, будет, конечно, зависеть от опыта врача в оценке конкретного заболевания, здоровья и чувствительности пациента, побочных эффектов и многих других хорошо известных для врачей факторов. Например, большие или меньшие дозовые уровни и схемы лечения, охватывающие большие или меньшие периоды времени,будут зависеть от заключения лечащего врача и могут включать периоды отдыха, в течение которых обработка олигонуклеотидами временно приостанавливается. Эта обработка может также комбинироваться с другим подходящим противораковым и паллиативным лечением. Прогресс/ремиссия заболевания, которое лечат, может определяться размером опухоли после начала лечения, распространением метастаз и другими факторами, определяемыми с помощью радиологического анализа и другими хорошо известными в данной области средствами, а наличие и степень побочных эффектов может оп 9 ределяться функционированием печени и/или почек после начала лечения и состоянием кровообращения после начала лечения, например,определяемым с помощью ЭКГ, что опять же хорошо известно в данной области. Олигонуклеотиды могут вводиться любым удобным способом, таким как оральный, внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный, или подкожный или другими известными способами. Тем не менее, для многих из этих способов, могут быть использованы преимущественно модифицированные олигонуклеотиды,включая модификацию основы и/или сахара нуклеотида, как указано в заявках на патент США 08/333,895 и 08/333,545, соответственно,для увеличения времени полужизни олигонуклеотидов. Для орального применения олигонуклеотиды могут вводиться с инертным растворителем или усваиваемым съедобным носителем,или олигонуклеотиды могут быть непосредственно включены в пищу. Орально вводимые олигонуклеотиды могут быть включены с наполнителями и использоваться в форме принимаемых внутрь таблеток, защчных таблеток,пастилок, капсул, элексиров, суспендированных сиропов, вафель и тому подобное. Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и тому подобное могут также содержать следующее: сшиватель, такой как смола трагаканта,аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин; наполнители, такие как дикальций фосфат; разрыхлители, такие как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и подобные; смазывающие вещества,такие как стеарат магния; и подслащивающие агенты, такие как сахароза, лактоза или сахарин; ароматические, агенты, такие как мята, масло гаултерии, вишневая эссенция. Когда разовая доза представляет собой капсулу, она может содержать в добавление к материалам выше указанного типа жидкий носитель. Могут быть использованы различные другие материалы в качестве оболочки или для того, чтобы модифицировать физическую форму разовой дозы другим образом. Например, таблетки, пилюли, или капсулы, могут быть покрыты шеллаком, сахаром или ими обоими. Сироп или элексир может содержать сахарозу в качестве подслащивающего агента, метил или пропил парабены в качестве консерванта, красящие вещества и ароматизирующие добавки, такие как вишневая или апельсиновая эссенция. Такие дополнительные материалы должны быть в основном нетоксичны в используемых количествах. Более того,олигонуклеотиды могут быть включены в препараты и лекарственные формы с замедленным высвобождением. Формы для парентерального введения могут включать стерильные водные растворы или дисперсии, и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов для инъекций или дисперсий. Указанные рас 000841 10 творы или дисперсии также могут содержать буферы, растворители и другие подходящие добавки и могут быть созданы так, чтобы усиливать захват олигонуклеотидов клетками, например олигонуклеотиды могут быть инкапсулированы в подходящие липосомы. Растворы и дисперсии для парентерального введения должны быть предпочтительно стерильными и достаточно текучими для надлежащего введения,достаточно стабильными от производства до использования и предохранены от заражения микроорганизмами, такими как бактерии и грибы. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например,воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропилен гликоль и жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное), их подходящие смеси и растительные масла. Необходимая текучесть может поддерживаться, например, путем использования оболочки, такой как лецитин, путем сохранения требуемого размера частицы в случае дисперсий, и путем использования поверхностно-активных веществ. Стерильные растворы для инъекций приготавливаются путем включения активных соединений в требуемом количестве в соответствующий растворитель и с одним или более различными другими ингредиентами, описанными выше, с последующей стерилизацией. Дисперсии могут быть приготовлены путем включения различных стерилизованных ингредиентов в стерильный носитель, содержащий основную дисперсионную среду и другие требуемые ингредиенты, из перечисленного выше списка. В случае стерильных порошков, используемых для приготовления стерильных растворов для инъекций, предпочтительными методами приготовления являются технологии вакуумной сушки и сушки вымораживанием, которые на выходе дают порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный требуемый ингредиент из предварительно простерилизованных фильтрованием растворов. Фармацевтические формы для местного введения могут быть особенно полезны в сочетании с некоторыми биоактивными соединениями для местного лечения. Формы для местной обработки включают в себя мази, ингаляторы, гели, суспензии, лосьоны, крема и тому подобное. Формы для местного введения могут включать в добавление к указанным олигонуклеотидам известные носители, такие как изопропанол, глицерин, парафин, стеариловый спирт, полиэтиленгликоль и так далее. Фармацевтически приемлемый носитель может также включать какой-либо известный химический усилитель абсорбции. Примерами таких усилителей абсорбции являются диметилацетамид(Патент США 3,472,931), трихлорэтанол или трифторэтанол (Патент США 3,891,757), некоторые спирты и их смеси (Патент Англии 11 1,001,949) и описание к патенту Англии 1,464,975. Растворы олигонуклеотидов могут храниться и/или вводиться в виде свободных оснований или фармацевтически приемлемых солей и преимущественно могут быть приготовлены в воде, подходящим образом смешанной с поверхностно-активными веществами, такими как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии могут также быть приготовлены в глицерине, жидком полиэтиленгликоле, и в их смесях и в маслах. Эти композиции и препараты могут преимущественно содержать консерванты для предохранения от роста микроорганизмов. Предохранение от заражения микроорганизмами может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тмерозала и т.д. Во многих случаях будет предпочтительно включать изотонические агенты, такие как хлорид натрия. Пролонгированное действие инъекционных композиций может быть достигнуто использованием агентов, которые задерживают абсорбцию, таких как моностеарат алюминия и желатин. Описанные композиции и препараты предпочтительно содержат, по меньшей мере, 0,1% активного олигонуклеотида. Процентное содержание в композициях и препаратах может, конечно, варьировать и находиться между 2 и 60% по массе от введенного количества. Количество активных соединений в таких терапевтически полезных композициях и препаратах таково, что будет достигнута подходящая доза. Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает любой и все растворители, дисперсионные среды, оболочки, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты и тому подобное. Использование таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в этой области. Однако если какая-либо традиционная среда или агент является несовместимой с терапевтически активными ингредиентами, ее использование в терапевтических композициях и препаратах нежелательно. В композиции и препараты также могут быть встроены дополнительные активные ингредиенты. В дополнение к терапевтическим использованиям данных олигонуклеотидов, эти олигонуклеотиды могут быть также использованы в лабораторных целях для изучения абсорбции,распределения, клеточного захвата и эффективности. Ссылочный материал Все патенты, заявки на патенты и цитируемые публикации включены в настоящее описание в качестве ссылок. 12 Эквиваленты Таким образом, в материалах заявки показана эффективность антисмысловых олигонуклиотидов в контроле экспрессии ИЛ-8 рецептора в клетках не мелкоклеточного рака легкого и меланомы. Также раскрыты процедуры для применения этих олигонуклеотидов в клинической практике. Несмотря на то, что представлены и описаны конкретные воплощения и применения заявленных изобретений, специалистам в данной области очевидно, что возможны дополнительные модификации, не выходящие за рамки данного изобретения. Настоящее изобретение, таким образом, не должно быть ограничено ничем, кроме как прилагаемой формулой изобретения. В описании и формуле изобретения, если не указано иное, понятия "включать, содержать", "включающие, содержащие" означают включение указанного элемента или стадии или группы элементов или стадий, но не исключение любого другого элемента или стадии или группы элементов или стадий. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Олигонуклеотид, имеющий последовательность 5' СТТ ССТ GTC TGA TGG СТТ СТ 3' (SEQ ID NО:4), ингибирующий активность рецептора ИЛ-8. 2. Олигонуклеотид, имеющий последовательность 5' GAA AGT TTG TGC CTT ATG GA 3' (SEQ ID NО:2), ингибирующий активность ИЛ-8. 3. Олигонуклеотид по любому из пп.1-2, в котором, по меньшей мере, часть основы модифицирована по сравнению с обычной фосфодиэфирной конфигурацией. 4. Олигонуклеотид по любому из пп.1-2, в котором, по меньшей мере, один из сахаров модифицирован по сравнению с конфигурацией нормальной рибозы. 5. Олигонуклеотид по любому из пп.1-2, в котором, по меньшей мере, часть основы модифицирована по сравнению с обычной фосфодиэфирной конфигурацией и, по меньшей мере,один из сахаров модифицирован по сравнению с конфигурацией нормальной рибозы. 6. Способ лечения злокачественных опухолей, которые, по меньшей мере, частично опосредованы активностью рецептора ИЛ-8,заключающийся в том, что получают фармацевтическое средство, содержащее олигонуклеотид по п.1, и вводят пациенту эффективное количество указанного фармацевтического средства.7. Способ по п.6, отличающийся тем, что фармацевтическое средство вводят путем внутриопухолевой инъекции. 8. Способ по п.6, отличающийся тем, что фармацевтическое средство вводят путем внутривенной инъекции. 9. Способ лечения злокачественных опухолей, которые, по меньшей мере, частично опосредованы активностью ИЛ-8, заключающийся в том, что получают фармацевтическое средство, содержащее олигонуклеотид по п.2, и вводят пациенту эффективное количество указанного фармацевтического средства. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что фармацевтическое средство вводят путем внутриопухолевой инъекции. 11. Способ по п.9, отличающийся тем, что фармацевтическое средство вводят путем внутривенной инъекции. Эффект ингибирования роста опухоли ICN олигонуклеотидами к IL-8 в концентрации 0,1 M в течение 72 ч при лечении рака легкого, меланомы, рака простаты и груди Кинетика роста подкожной меланомы у Balb/cNude/Nude мышей, выраженная как наклон, полученный в результате применения линейного регрессионного анализа неспаренный t-тест параметр необработанные ICN131 ICN70 среднее 3,34 2,63 Фиг. 1 Эффект ингибирования роста опухоли ICN олигонуклеотидами к IL-8 рецептору в концентрации 0,1 М в течение 72 ч при лечении рака легкого, меланомы,рака простаты и груди Кинетика роста подкожного рака легкого у Balb/cNude/Nude мышей, выраженная как наклон, полученный в результате применения линейного регрессионного анализа неспаренный t-тест параметр необработанные ICN131 ICN70 среднее 26,41 16,96 12,84 кол-во мышей 5 5 5 станд. откл. 8,36 7,63 6,77 станд. ошибка 3,85 3,41 3,02 минимум 16,10 9,08 6,90 максимум 38,00 26,98 24,04 медиана 22,96 16,11 12,37