Способ подавления образования спаек у млекопитающего

006202 Область изобретения Данное изобретение относится к использованию антагонистов витронектиновых рецепторов для подавления образования спаек у млекопитающего. Предпосылки создания изобретения Интегрины представляют собой суперсемейство рецепторов клеточной адгезии, которые связывают внутриклеточные цитоскелетные элементы с внеклеточными матриксными молекулами. Эти клеточные рецепторы поверхностной адгезии включают v3 (витронектиновые рецепторы). Витронектиновые рецепторы v3 экспрессируются рядом клеток, включая эндотелиальные клетки,клетки гладких мышц, остеокласты и опухолевые клетки, и, таким образом, они обладают различными функциями. Рецепторы v3, экспрессируемые на мембране клеток остеокластов, опосредуют адгезию остеокластов на костном матриксе, ключевую стадию в процессе резорбции кости. Ross, et al., J. Biol.Chem., 1987, 262, 7703. Рецепторы v3, экспрессируемые на клетках гладких мышц человеческой аорты,опосредуют их миграцию на неоинтиму - процесс, который может приводить к рестенозу после чрескожной коронарной ангиопластики. Brown, et al., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. Кроме того, Okada,et al., Am. J. Pathol., 1996, 149(1), 37, предполагают, что v3 играют роль в сосудистой интеграции и реконструировании после фокальной ишемии в области инфаркта. Неожиданно было обнаружено, что антагонисты витронектиновых рецепторов были бы пригодны для подавления возникновения адгезии. В частности, соединения данного изобретения пригодны для лечения послеоперационных спаек. Краткое изложение изобретения Данное изобретение представляет новый способ подавления образования спаек у млекопитающего,в частности у человека, который включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества антагониста витронектиновых рецепторов. Детальное описание изобретения Данное изобретение относится к терапевтическому способу подавления образования спаек и способу лечения послеоперационных спаек. В данном способе используется группа антагонистов, которые были получены и которым дана оценка как эффективным антагонистам витронектиновых рецепторов. Примеры подходящих антагонистов витронектиновых рецепторов включают, но не ограничиваются этим, следующие: бензазепиновые простые эфиры формулы (I), которые описаны в заявке РСТPCT/US97/18001,поданной 1 октября 1997, опубликованной как WO 98/14192 9 апреля, 1998. Соединениями формулы (I), используемыми при способе данного изобретения, являются (S)-3 оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-(2,2,2-трифторэтил)-2,3,4,5-тетрагидро-1 Н-2-бензазепин 4-уксусная кислота и (S)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1-этокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифторэтил)2,3,4,5-тетрагидро-1H-2-бензазепин-4-уксусная кислота или их фармацевтически приемлемые соли. В соответствии с данным изобретением было обнаружено, что введение антагониста витронектиновых рецепторов оперируемому больному подавляет или снижает образование послеоперационных спаек. Хирургическое вмешательство включает разрез тканей пациента, чтобы осуществить лечение. Одним из нежелательных результатов хирургического лечения является образование послеоперационных спаек. Термин адгезия, как он использован здесь, относится к спайке (склеиванию), процессу слипания или соединения двух поверхностей или частей. Сообщалось, что развитие спаек является главным источником послеоперационных осложнений и смертности. При терапевтическом использовании для подавления образования спаек антагонист витронектиновых рецепторов включается в стандартные фармацевтические композиции. Его можно вводить перорально, парентерально, ректально, местно или трансдермально. Фармацевтические композиции с антагонистом витронектиновых рецепторов могут быть изготовлены в виде растворов или лиофилизированных порошков для парентерального введения. Из порошков могут быть воссозданы лекарственные формы добавлением подходящего растворителя или другого фармацевтически приемлемого носителя перед использованием. Жидкий препарат может быть забуференным, изотоническим водным раствором. Примерами подходящих растворителей являются нормальный изотонический физиологический раствор, стандартный 5% раствор декстрозы в воде или буферный раствор ацетата натрия или аммония. Такой препарат особенно пригоден для парентерального введения, но может также использоваться для перорального введения или может содержаться в отмеренной дозе ингалятора или распылителя для вдыхания. Может быть желательно добавлять эксципиенты, такие как поливинилпирролидон, желатин, гидроксицеллюлоза, камедь акации, полиэтиленгликоль, маннит, хлорид натрия или цитрат натрия. Альтернативно, антагонист витронектиновых рецепторов может быть инкапсулирован, таблетирован или приготовлен в виде эмульсии или сиропа для перорального введения. Фармацевтически приемлемые твердые или жидкие носители могут быть добавлены для улучшения качества или стабилизации композиции или для облегчения изготовления композиции. Твердые носители включают крахмал, лактозу, дигидрат сульфата кальция, белую глину, стеарат магния или стеариновую кислоту, тальк, пектин, камедь акации, агар или желатин. Жидкие носители включают сироп, арахисовое масло, оливковое масло, фи-1 006202 зиологический раствор и воду. Носитель может также включать материал для длительного высвобождения, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, отдельно или с воском. Количество твердого носителя меняется, но, предпочтительно, будет находиться между примерно 20 мг и примерно 1 г на стандартную дозу. Фармацевтические препараты изготавливают согласно традиционным методам фармации, включая измельчение, смешивание, гранулирование и прессование, когда необходимо, для таблетированных форм; или измельчение, смешивание и заполнение для форм в виде твердых желатиновых капсул. Когда используется жидкий носитель, препарат будет в форме сиропа, эликсира, эмульсии или водной или неводной суспензии. Такой жидкий препарат можно вводить непосредственно перорально или заполнять им мягкие желатиновые капсулы. Для ректального введения соединения данного изобретения могут также сочетаться с эксципиентами, такими как масло какао, глицерин, желатин или полиэтиленгликоли, и формоваться в суппозитории. Данное соединение вводят пациенту или перорально или парентерально таким образом, чтобы концентрация была достаточной для того, чтобы быть эффективной. Фармацевтическую композицию, содержащую данное соединение, вводят перорально в дозе между примерно 0,1 и примерно 50 мг/кг способом, согласующимся с состоянием пациента. Предпочтительная доза для перорального приема должна составлять от примерно 0,5 до примерно 20 мг/кг. Для острой терапии предпочтительно парентеральное введение. Внутривенное вливание пептида в 5% растворе декстрозы в воде, или нормальном физиологическом растворе, или подобном препарате с подходящими эксципиентами является наиболее эффективным, хотя также пригодна внутримышечная болюсная инъекция. Обычно доза для парентерального введения будет составлять от примерно 0,01 до примерно 100 мг/кг; предпочтительно, находится между 0,1 и 20 мг/кг. Данные соединения вводят от 1 до 4 раз в день при таком уровне, чтобы достичь общей суточной дозы, равной от примерно 0,4 до примерно 400 мг/кг/сутки. Точный уровень и способ, при которых вводят данные соединения, легко определит специалист в данной области путем сравнения уровня вещества в крови с концентрацией, необходимой для того, чтобы получить терапевтический эффект. Никаких неприемлемых токсикологических эффектов не ожидается, когда эпросартан вводят в соответствии с данным изобретением. Материалы и методы Соединения данного изобретения испытывают на известных моделях образования спаек. Эти системы для испытаний включают модель образования спаек на боковой стенке кроликов, которая описана вRogers, et al., J. Invest. Surg., 9:388-391 (1996) и Rodgers, et al., Fertility and Surgery, 69(3): 403-408 (1998); модель образования спаек у крыс, которая описана в Harris, et al., Surgery, 117:663-669 (1995); и модель на кроликах, используемая для изучения предотвращения спаек после лапароскопии. Также для испытания использования данных подавляющих витронектин соединений в качестве ингибиторов образования спаек можно использовать модель на маточных рогах кроликов. Детали экспериментов и результаты с использованием данной модели подробно описаны ниже. Методика Животные. Новозеландские белые кролики, 2,4-2,7 кг, были закуплены и выдержаны в карантине в течение, по меньшей мере, 2 дней перед использованием. Кроликов по случайной выборке разделяли на соответствующую контрольную группу и группу, получающую лечение (см. схемы экспериментов, ниже). Кроликов содержали при цикле освещение:темнота 12:12 с пищей и водой, доступными по желанию. Каждая группа, получающая лечение, во всех исследованиях состояла из 8-10 животных. Материалы. Шовными материалами, которые использовали для того, чтобы зашить брюшную полость и кожу,были 4-0 викриловая нить (Ethicon, Somerville, NJ). Соединение 1 представляет собой (S)-3-оксо-8-[3(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-(2,2,2-трифторэтил)-2,3,4,5-тетрагидро-1 Н-2-бензазепин-4 уксусную кислоту. Модель спаек. Животные, которые получали соединение 1 или носитель в соответствии с планом эксперимента(ниже). Кролики, которые получали плацебо при хирургическом вмешательстве, получали две дозы носителя перорально. Кроликам делали анестезию смесью 55 мг/кг кетамина гидрохлорида и 5 мг/кг ромпума внутримышечно. После подготовки для стерильного хирургического вмешательства выполняли лапаротомию по средней линии. Маточные рога временно выводили наружу и травмировали путем выскабливания серозной поверхности с помощью марли до тех пор, пока не возникало точечное кровотечение. Ишемию обоих маточных рогов вызывали путем прекращения коллатерального кровоснабжения. Остаточное кровоснабжение маточных рогов происходило по восходящим ветвям маточно-вагинального кровоснабжения миометрия. Разрез мышц и кожи по средней линии зашивали. Через 7 или 14 дней кроликов забивали и оценивали спайки на месте и по общему состоянию кролика. Конкретно, определяли процент площади рогов, спаянных с разными органами. Кроме того, оценивали прочность спаек, используя следующую систему:-2 006202 0 - нет спаек 1 - слабые, легко рассекаемые спайки 2 - умеренные спайки; не рассекаемые, не повреждают орган 3 - плотные спайки; не рассекаемые, повреждают орган при удалении Общую оценку, в которой учитывали все вышеприведенные данные, давали каждому кролику. Использовали следующую систему оценок: 0 - нет спаек 0,5+ - легкие, пленочные тазовые спайки, захватывающие только один орган, обычно только 1 или 2 небольшие спайки 1,0+ - легкие, пленочные спайки, непротяженные, хотя слегка более протяженные, чем 0,5 1,5+ - спайки слегка более плотные и более протяженные, чем при оценке 1 2,0+ - более плотные спайки, немного более протяженные, маточные рога обычно имеют спайки как с кишечником, так и с мочевым пузырем 2,5+ - то же, что и при 2, за исключением того, что спайки являются обычно непленочными в любом месте и более протяженными 3,0+ - более плотные спайки, чем при 2, более протяженные, оба рога спаяны с кишечником и мочевым пузырем, возможно некоторое движение матки 3,5+ - то же, что и при 3, но спайки слегка более протяженные и более плотные 4,0+ - жесткие спайки, оба рога спаяны с кишечником и мочевым пузырем, невозможно двигать матку без разрыва спаек Кроликов оценивали два независимых наблюдателя, которые не знали о предшествующем лечении животного. Если существовало расхождение в отношении оценки, которая дана по отдельному животному, давалась более высокая оценка. Статистический анализ. Прочность и общие оценки анализировали с помощью анализа по порядку оценки и анализа расхождения рядов оценок. Площадь в процентах рогов, связанных с другими органами, сравнивали по критерию Стъюдента. Планы экспериментов. Две ударные дозы, равные 60 мг/кг соединения 1, полученные после операции, перорально перед хирургическим вмешательством. В конце этой процедуры животные или ничего не получали (хирургический контроль), или 12 мл плацебо (10% КМЦ) (карбоксиметилцеллюлоза), или одну из двух доз (1 мг/мл или 0,1 мг/мл) соединения 1 в место хирургического повреждения. Изучение местной доставки. С помощью осмотического мини-насоса - первоначальное оценочное исследование. Доза: 0,1 и 1,0 мМ(10 мкл/ч в течение 7 дней). Соединение 1 вводили локально в место повреждения матки с помощью мини-осмотического насоса Альзета (Alzet). Полиэтиленовый катетер (полиэтиленовая трубка Clay Adams РЕ-60 ВД (внутренний диаметр) 0,76 мм (0,030"), НД (наружный диаметр) 1,22 мм (0,048" вводили в брюшную полость и пришивали к боковой стенке с помощью 5-0 Ethilon сразу после повреждения матки. Затем катетер подсоединяли к насосу и разрез мышц по средней линии закрывали вокруг катетера. Насос заполняли 0,1 или 1,0 мМ соединения 1 (поставляемого со скоростью 10 мкл/ч в течение 7 дней) и помещали в подкожное пространство. Носитель, использованный для введения лекарства, представлял собой 8% циклодекстрин для высокой дозы и 0,8% для низкой дозы. 8% циклодекстрин использовали в мининасосах, имплантированных контрольным животным. Животных умерщвляли на 7 день для оценки спаек. Изучение при пероральном введении. Перед хирургическим вмешательством кролики получали две ударные дозы соединения 1 (60 мг/кг,5 мг/мл в 0,1 N NaOH) перорально за 24 и 48 ч перед хирургическим вмешательством. Непосредственно перед операцией кролики получали одну дополнительную дозу 60 мг/кг. Затем животные получали 60 мг/кг соединения 1 ежедневно до вскрытия трупа на 14 день после хирургического вмешательства на матке. Контрольные кролики получали носитель в том же режиме. Изучение при пероральном и местном применении. Две ударные дозы соединения 1 (60 мг/кг, перорально) вводили перорально перед операцией. После операции вводили 12 мл вязкого раствора, содержащего SB 267268 (1 или 0,1 мг/мл в 10% КМЦ) в место хирургического вмешательства перед закрытием раны. Кролики, которые получали плацебо при хирургическом вмешательстве, получали две дозы носителя перорально с последующим введением 12 мл плацебо (10% КМЦ) в место хирургического вмешательства. Контроли хирургического вмешательства не получали лечения перед операцией или после операции. Животных умерщвляли на 7 и 14 день.-3 006202 Результаты Пример данных, представленных по изучению перорального введения + применения геля соединения 1. Таблица 1 Данные по контрольным животным, время вскрытия через 2 недели Таблица 2 Данные по контрольным животным, получавшим плацебо, время вскрытия через 2 недели Таблица 3 Данные по животным, получавшим лечение 1 мг/мл соединения 1, время вскрытия через 2 недели Таблица 4 Данные по животным, получавшим лечение, 0,1 мг/мл соединения 1, время вскрытия через 2 недели Таблица 5 Данные по контрольным животным, время вскрытия через 1 неделю Таблица 6 Данные по контрольным животным, получавшим плацебо, время вскрытия через 1 неделю-5 006202 Таблица 7 Данные по животным, получавшим лечение, 1 мг/мл соединения 1, время вскрытия через 1 неделю Таблица 8 Данные по животным, получавшим лечение, 0,1 мг/мл соединения 1, время вскрытия через 2 недели Таблица 9 Обобщение данных по появлению спаекУчастки без спаек% участков без спаек 8 10,0 17 21,25 45 56,25 31 38,75 4 5,0 13 16,25 36 45,0 34 42,5 Должно быть понятно, что данное изобретение не ограничивается иллюстрирующим осуществлением, представленным выше, и права сохраняются в отношении иллюстрирующего воплощения и всех модификаций, входящих в объем следующей формулы изобретения. Различные ссылки на журналы, патенты и другие цитированные публикации представляют состояние данной отрасли техники и включены в виде ссылки, как представленные полностью.-6 006202 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ подавления образования спаек, который включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества (S)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-(2,2,2-трифторэтил)2,3,4,5-тетрагидро-1 Н-2-бензазепин-4-уксусной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли. 2. Применение (S)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-(2,2,2-трифторэтил)-2,3,4,5 тетрагидро-1 Н-2-бензазепин-4-уксусной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного препарата для подавления образования спаек.