Бис-платиновые комплексы с противоопухолевой активностью

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента Соединение общей формулы (I) где R выбран из группы, состоящей из С 3-алкила, С 5-алкила и С 7-алкила; n и m каждый представляет собой целое число от 5 до 6; р равен 1; А представляют собой -В-(СН 2)r-В-, где r равен 2 или 4,В представляет собой группу -N(R2)2+ 1/pQ-p, где R2 представляет собой водород; Q-p представляет собой анион, выбранный из нитрата и R3COO", где R3 имеет такие же значения как R, при условии что, если Q-p является нитратом, то R не является С 3-алкилом. 015619 Изобретение включает платиновые комплексы, обладающие противоопухолевой активностью, способ их получения, фармацевтические композиции, содержащие их, и их применения, включая получение лекарственного средства, полезного для лечения опухолей. Платиновые комплексы занимают место среди наиболее эффективных химиотерапевтических препаратов для лечения солидных опухолей. В частности, цисплатин [цис-дихлордиаминоплатина(М);CDDP] представляет собой один из наиболее широко применяемых и эффективных противоопухолевых агентов, даже, несмотря на то, что его введение вызывает тяжелые побочные эффекты. Опухоли, которые можно лечить с помощью этого лекарственного средства, включают опухоли яичка, яичника, пузыря и головы/шеи. Цисплатин с тех пор, как его включили в терапию, стал лекарственным средством, избираемым для лечебной терапии опухолей зародышевых клеток и для продления терапии, направленной на продолжительность жизни при опухолях яичника. Успешное лечение цисплатином ограничено, главным образом, тем, что некоторые опухолевые клетки становятся резистентными к лекарственному средству. Более того, большинство солидных опухолей (например, опухоли легкого, ободочной и прямой кишки и желудка) не чувствительны к цисплатину или другим химиотерапевтическим агентам (Е. Wong, CM.Giandomenico, Current Status of Platinum-Based Antitumor Drugs, Chem. Rev. 1999, 99, 2451-2466). В течение последних десятилетий с целью определения платиновых комплексов с пониженной токсичностью, широким спектром противоопухолевой активности и не имеющих перекрестной резистентности с цисплатином был изучен ряд аналогов. Эти попытки привели к платиновым комплексам второго поколения, которые при клинических исследованиях показали профиль противоопухолевой активности аналогичный цисплатину. Среди них - карбоплатин (второй платиновый комплекс, который появился на рынке), имеющий спектр противоопухолевой активности, аналогичный цисплатину, но не обладающий его токсичностью. Недавно в клиническую практику был включен платиновый комплекс третьего поколения, оксалиплатин. Другими комплексами, которые подвергают исследованиям, являются AMD0473 и сатраплатин. Тем не менее, ни один из этих аналогов, по-видимому, не преодолевает главные трудности терапии цисплатином, то есть ни один из них не расширил список чувствительных к лечению опухолей,и не понизил начало опухолевой резистентности. Наконец, другая проблема, связанная с платиновыми комплексами, которые в настоящее время применяют в терапии, состоит в том, что эти комплексы после внутривенного введения обладают тенденцией к необратимому связыванию с белками плазмы посредством ковалентных связей. Кинетика этого процесса зависит от времени контакта, и более чем 90% лекарственного средства связывается в течение нескольких часов после введения. Высокое необратимое связывание с белками плазмы может уменьшить эффективность соединений в отношении людей (S.S. Jacobs et al., Clinical Cancer Research,Vol. 11, 1669-1674, 2005 и приведенные ссылки). Жирорастворимые комплексы платины подобные цисплатину раскрыты в US 5117022 и в US 6613799. Соединения, раскрытые в US 5117022, можно включать в липосомы, в то время как комплексы,раскрытые в US 6613799, обладают высокой специфичностью и селективностью к клеткам опухоли при введении в контрастную среду, такую как липиодол. Бисплатиновые комплексы, полезные для лечения опухолей, характеризующиеся наличием диамино- или полиамино-лиганда, который связывает вместе два атома платины, раскрыты в US 4797393, US 5107007, US 6022892 и US 6596889. В частности, в US 6022892 и US 6596889 раскрыты бисплатиновые комплексы, характеризующиеся наличием полиамино-лиганда. Эти соединения обладают мощной цитотоксической активностью по отношению к клеточным линиям мышей и человека, резистентным к цисплатину, таким как линия лейкоза мышей L1210/CDDP и линия карциномы яичников человека A2780/CDDP. Также для этих соединений сообщалось об активности на экспериментальных опухолях, резистентных к цисплатину, in vivo. Заявитель настоящего изобретения обнаружил, что в присутствии плазмы человека бисплатиновые комплексы, раскрытые в US 6022892, также необратимо связываются с белками плазмы, что объяснялось выше. Более того, было обнаружено, что фракция лекарственного средства, которая свободна в плазменной воде и которая обратимо связывается с белками, подвергается быстрой и прогрессирующей деградации с образованием фармакологически неактивных частиц, образующихся при удалении платины из полиамино-лиганда. Полагают, что эти частицы образуются как результат химической нестабильности комплексов в плазме, вероятно вследствие их взаимодействия с эндогенными молекулами, содержащими тиоловые нуклеофилы, такие как, например, остатки цистеина или глутатиона. Высокий уровень связывания платиновых соединений с белками плазмы человека вероятно способствует этому взаимодействию. Быстрая деградация в плазме человека и высокое необратимое связывание с белками плазмы могут снизить эффективность соединений для людей. Поэтому существует потребность в бисплатиновых комплексах, у которых отсутствуют эти неблагоприятные свойства. Как здесь раскрыто для настоящего изобретения, неожиданно было обнаружено, что бисплатиновые комплексы, характеризующиеся присутствием в координационной сфере платины некоторых карбоксилато-лигандов, связывают белки плазмы в меньшей степени, чем бисплатиновые комплексы, упомянутые выше, демонстрируют лучшую стабильность в плазме по отношению к деплатинированию и способны ингибировать рост опухоли в различных экспериментальных моделях.-1 015619 Объектом изобретения является соединение, выбранное из тетрабути рата,-(1,5,10-триазадекан-N1,N10)бис[транс-диамино(бутирато-О)платины(II)] тетрабутирата. Соединения по изобретению охватываются общей структурной формулой (I)n и m каждый представляет собой целое число от 5 до 6; р равен 1; А представляют собой -В-(СН 2)r-В-, где r равен 2 или 4, В представляет собой группу -N(R2)2+ 1/pQpQ-p представляет собой анион, выбранный из нитрата и R3COO-, где R3 имеет такие же значения какR,при условии что, если Q-p является нитратом, то R не является С 3-алкилом,и могут быть получены путем взаимодействия соединения формулы (II) где А имеет такие же значения, как в соединениях формулы (I), где р равен 1, и Q-p представляет собой нитрат анион по меньшей мере с двумя эквивалентами нитрата серебра с получением промежуточного соединения, которое затем подвергают взаимодействию с по меньшей мере двумя эквивалентами соединения формулы (III) где R имеет такие же значения, как в формуле (I), и М представляет собой катион щелочного, щелочно-земельного металла или соли четвертичного аммония (например, тетраметиламмония, тетрабутиламмония), с получением соединения по изобретению, где Q-p представляет собой нитрат (NO3-) или карбоксилат (RCOO-) анион, где р равен 1, и R является таким, как определено в формуле (I). Взаимодействие соединений формулы (II) с нитратом серебра и последующее взаимодействие с соединениями формулы (III) обычно осуществляют в растворителе, таком как вода, диметилформамид или их смеси, работая при температуре в диапазоне от 10 до 60 С и в течение времени в диапазоне от 15 ч до 3 недель. Предпочтительно для каждого эквивалента соединения формулы II используют 2 эквивалента соединения формулы III, и реакцию обычно завершают за 2 суток. Соединения по изобретению, где Q-p представляет собой нитрат анион, могут быть получены путем-2 015619 взаимодействия соединения формулы II по меньшей мере с двумя эквивалентами карбоксилата серебра формулы (III') Реакцию обычно проводят в растворителе, таком как вода, диметилформамид или их смесях, работая при температуре в диапазоне от 10 до 60 С и в течение времени в диапазоне от 15 ч до 3 недель. Предпочтительно, используют молярный избыток (2 эквивалента) соединения формулы (III'), и реакцию обычно завершают за 2 суток. Соединения по изобретению, где Q-p представляет собой RCOO-, могут быть получены путем взаимодействия соединения формулы (II') где А является таким, как определено в формуле I, где р равен 1, и Q-p представляет собой хлорид, с карбоксилатом серебра формулы (III'). Реакцию обычно проводят в растворителе, таком как вода, диметилформамид или их смесях, работая при температуре в диапазоне от 10 до 60 С и в течение времени в диапазоне от 15 ч до 3 недель,предпочтительно с использованием молярного избытка 6 эквивалентов соединения формулы III'; реакцию обычно завершают за 2 суток. Способы получения соединений формулы (II) и (II') раскрыты в US 6022892 и US 6596889. Соединения формулы (III) имеются в продаже (например, от Sigma-Aldrich, St. Louis (МО), США) или могут быть получены известными способами из соответствующих карбоновых кислот формулы (V) где R является таким, как определено в формуле (I). Соединения формулы (III') могут быть получены в соответствии с US 5117022. Карбоновые кислоты формулы (V) имеются в продаже (например, от Sigma-Aldrich, St. Louis (МО),США) или могут быть получены известными способами. Платиновые комплексы по настоящему изобретению при инкубации в присутствии плазмы человека продемонстрировали более низкую активность связывания и лучшую стабильность по сравнению с платиновыми комплексами, раскрытыми в US 6022892. При введении людям или животным с опухолями, которые или поддаются обработке цисплатином,или резистентны к цисплатину, в дозах в диапазоне от 0,1 мг до 1,2 г на м 2 поверхности тела, соединения по изобретению вызывали регрессию указанных опухолей. Вообще, соединения по изобретению можно применять для лечения патологических состояний, которые поддаются обработке цисплатином, то есть для лечения опухолей и для увеличения чувствительности опухолей к радиотерапии [Douple et al., Cis-platin Current Status and Developments, and A.W.Prestayk et al., Academic Press, 125 (1980); Douple et al., Platinum Metals Res., 29; 118 (1985)], и для лечения паразитоза, такого как африканский трипаносомоз [Farrell et al., Biochem. Pharmacol., 33, 961 (1984)]. Поэтому настоящее изобретение также содержит способ лечения опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту соединения по изобретению в количестве, которое эффективно для лечения опухоли. Термин "лечение", используемый в данном описании изобретения, может включать одно или более чем одно из нижеследующего: остановку роста опухоли, уничтожение опухолевых клеток, предупреждение опухолевых клеток или увеличение продолжительности жизни. Дополнительное воплощение изобретения заключается в фармацевтических композициях, содержащих терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения по изобретению в смеси с традиционными носителями и эксципиентами. Эффективная доза соединений по изобретению может быть определена врачом-специалистом в данной области техники в соответствии с обычными способами. Соотношение между дозировками, применяемыми в отношении животных различных видов и размеров, и дозировками для человека (рассчитанными как мг/м 2 поверхности тела) описано Freirech et al. в Quantitative Comparison of Toxicity of Anticancer Agents in Mouse, Rat, Hamster, Dog, Monkey and Man, Cancer Chemother. Rep., 50, N.4, 219-244(1986). Однако пациент обычно будет принимать дозы комплекса в диапазоне 0,1-200 мг/кг массы тела при режиме дозирования, который меняется в зависимости от ряда факторов, хорошо известных врачамспециалистам в данной области техники. В соответствии с опухолью, предназначенной для лечения, и состояниями пациента можно установить подходящий режим лечения, что хорошо известно квалифицированным специалистам. Соединения по изобретению можно вводить парентеральным или пероральным путем.-3 015619 Фармацевтические композиции для парентерального применения включают стерильные солевые растворы, как определено выше, или стерильные порошки для немедленного приготовления растворов, а также масляные препараты для внутримышечного (в.м.) или внутрибрюшинного (в.б.) введения. Соединения по изобретению предпочтительно вводят в виде стерильных водных растворов, возможно содержащих хлорид натрия в подходящей концентрации (0,1-0,9 мг/мл). Предпочтительно растворы вводят внутривенным (в.в.) или внутриартериальным (в.а.) путем, хотя в особенных случаях можно применять другие формы введения. Фармацевтические композиции, пригодные для перорального введения, включают, например, сиропы или аналогичные жидкие формы, а также твердые формы, такие как таблетки, капсулы и тому подобное. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению получают традиционными способами,такими как способы, о которых сообщается в Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII Ed.,Mack Pub., N.Y., U.S.A. Иногда может быть благоприятным введение платиновых комплексов по настоящему изобретению в комбинации с одним или более агентами, которые увеличивают противоопухолевую активность или смягчают нежелательные побочные эффекты, которые могут ассоциироваться с терапией платиновыми комплексами. Например, платиновые комплексы по настоящему изобретению можно вводить вместе с восстановленным глутатионом, как описано в GB 2174905 и в US 4871528. Более того, может быть благоприятным введение платиновых комплексов по настоящему изобретению в комбинации с другими противоопухолевыми платиновыми комплексами. Следовательно, дополнительное воплощение настоящего изобретения заключается в фармацевтических композициях, содержащих по меньшей мере одно соединение по изобретению в комбинации с платиновым комплексом, обладающим противоопухолевой активностью. Дополнительное воплощение настоящего изобретения заключается в применении соединений по изобретению для получения лекарственных средств для лечения млекопитающих, пораженных опухолями, которые поддаются обработке цисплатином или резистентны к цисплатину. Далее изобретение иллюстрируют следующие примеры. Примеры Получение 1. Каприлат тетрабутиламмония К дисперсии каприловой кислоты (н-октановой кислоты) (1 мл, 6,184 ммоль) в Н 2 О (20 мл) добавляли 0,4 М раствор гидроксида тетрабутиламмония в Н 2 О (15,3 мл, 6,12 ммоль) по каплям и при перемешивании. Полученный раствор оставляли при перемешивании при комнатной температуре на 1 ч, и затем при пониженном давлении выпаривали растворитель с использованием толуола для удаления воды. Остаток сушили под вакуумом при 35 С с получением 2,416 г (выход 99%) прозрачного масла. 1 Н ЯМР (ДМСО-d6):3.18 (8 Н, t, J = 8,34 Гц); 1.73 (2 Н, t, J = 7,39); 1.58 (8 Н, m); 1.32 (10 Н, m); 1.22 0,4 М Раствор гидроксида тетрабутиламмония в Н 2 О (1 мл, 0,4 ммоль) добавляли по каплям и при перемешивании к суспензии додекановой кислоты (0,12 г, 0,6 ммоль) в MilliQ H2O (12 мл). Полученную суспензию оставляли при перемешивании при комнатной температуре на 1 ч; твердое вещество удаляли фильтрованием, и затем при пониженном давлении упаривали фильтрат до сухого состояния с использованием EtOH для удаления воды. Получали 0,17 г (выход 96%) желтого масла. 1 Н ЯМР (D2O):3.20 (8 Н, m); 2.18 (2 Н, t, J = 7,35 Гц); 1.66 (8 Н, m); 1.37 (8 Н, m); 1 29 (18 Н, m); 0.96(12 Н, t, J = 7,38); 0.87 (3 Н, m). Способами, аналогичными приведенным в получениях 1 и 2, были получены следующие соединения: капроат тетрабутиламмония. Пример 1. -(1,8,11,18-Тетраазаоктадекан-N1,N18)бис[транс-диамино(капроато-О)платины(II)] тетранитрат.-4 015619 Дисперсию капроновой кислоты (0,16 мл, 1,277 ммоль) в MilliQ Н 2 О (2 мл) по каплям и при перемешивании добавляли к 0,4 М раствору гидроксида тетрабутиламмония в Н 2 О (2,89 мл, 1,156 ммоль). Полученный раствор оставляли при перемешивании при комнатной температуре на 1 ч и затем использовали без дополнительной обработки. Реакции проводили без доступа света в атмосфере азота и в MilliQ H2O. К раствору -(1,8,11,18 тетраазаоктадекан-N1,N18)бис[транс-диамино(дихлоро)платины(II)] тетранитрата (0,2 г, 0,193 ммоль) в Н 2 О (12 мл) добавляли AgNO3 (0,0655 г, 0,386 ммоль), и полученную суспензию оставляли при перемешивании при комнатной температуре на 24 ч. Твердое вещество удаляли фильтрованием смеси (два раза) через двойной фильтр из микроволокна; фильтр промывали 1 мл Н 2 О, который объединяли с фильтратом. К фильтрату добавляли по каплям и при перемешивании раствор капроата тетрабутиламмония(0,414 г, 1,158 ммоль) в Н 2 О (5 мл); полученный раствор выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение ночи. Раствор упаривали до сухого состояния (35 С) при пониженном давлении, и маслянистый остаток превращали в твердое вещество путем обработки абсолютным EtOH (2 мл). Твердое вещество суспендировали в Et2O (8 мл) и оставляли при перемешивании на ночь, затем собирали, суспендировали в CH2Cl2 (6 мл), и смесь выдерживали при перемешивании в течение ночи. Твердое вещество собирали на воронке Бюхнера, промывали CH2Cl2 и сушили под вакуумом при 40 С с получением 0,055 г (выход 24%) белого порошка. МС (масс-спектр): 1159,1, [MH+C3F7COOH-4HNO3]+. 1 Н ЯМР (D2O):3.31 (4 Н, s); 3.03 (4 Н, t, J = 7,68 Гц); 2.62 (4 Н, m); 2.26 (4 Н, t, J = 7,53); 1.67 (8 Н,m); 1.52 (4 Н, m); 1.39 (8 Н, m); 1.26 (8 Н, m); 0.86 (6 Н, t, J = 7,03). Аналогичным способом были получены следующие соединения: Реакции проводили без доступа света и в MilliQ H2O. К раствору-(1,8,11,18-тетраазаоктадеканN1,N18)бис[транс-диамино(дихлоро)платины(II)] тетранитрата (0,2 г, 0,193 ммоль) в Н 2 О (18 мл) добавляли AgNO3 (0,0655 г, 0,386 ммоль), и полученную суспензию оставляли при перемешивании при комнатной температуре на 24 ч. Твердое вещество удаляли фильтрованием смеси (два раза) через двойной фильтр из микроволокна; фильтр промывали 1 мл Н 2 О, который объединяли с фильтратом. К фильтрату добавляли по каплям и при перемешивании раствор каприлата тетрабутиламмония из получения 1 (0,462 г, 1,198 ммоль) в Н 2 О (18 мл); полученную суспензию выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 23 ч. Из суспензии удаляли вязкий материал, и фильтрат концентрировали до небольшого объема при 35 С при пониженном давлении. Выпавшее в осадок твердое вещество собирали,сушили под вакуумом при 35 С и суспендировали в CHCl3 (5 мл); смесь оставляли при перемешивании на 1 ч, и твердое вещество собирали на воронке Бюхнера и промывали гексаном с получением 0,025 г МС: 1215,2, [MH+C3F7COOH-4HNO3]+. Н ЯМР (D2O):3.24 (4 Н, s); 2.99 (4 Н, m); 2.62 (4 Н, t, J = 7,64 Гц); 2.26 (4 Н, t, J = 7,53); 1.66 (8 Н,m); 1.52 (4 Н, m); 1.39 (8 Н, m); 1.27 (16 Н, m); 0.87 (6 Н, t, J = 6,82). Аналогичным способом были получены следующие соединения: Реакции проводили без доступа света и в MilliQ H2O. К раствору -(1,7,12,18-тетраазаоктадеканN1,N18)бис[транс-диамино(дихлоро)платины(II)] тетранитрата (0,2 г, 0,193 ммоль) в Н 2 О (18 мл) добавляли AgNO3 (0,0655 г, 0,386 ммоль), и полученную суспензию выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 48 ч. Твердое вещество промывали фильтрованием смеси (два раза) через двойной фильтр из микроволокна; фильтр промывали 1 мл Н 2 О, который объединяли с фильтратом. К фильтрату добавляли раствор бутирата натрия (0,127 г, 1,154 ммоль), и раствор выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель упаривали при 35 С при пониженном давлении, и твердый остаток сушили под вакуумом при 35 С. Твердое вещество суспендировали в изо-PrOH (20 мл), и суспензию выдерживали при перемешивании при комнатной температуре в течение 1 ч. Нерастворимый материал удаляли фильтрованием, и фильтрат упаривали под вакуумом (35 С) при комнатной температуре. Твердый остаток собирали на воронке Бюхнера, промывали Et2O и сушили под вакуумом при 35 С с получением 0,149 г (выход 62%) указанного в заголовке продукта в виде белого твердого вещества.(12 Н, m); 1.56 (12 Н, m); 1.43 (4 Н, m); 0.88, (18 Н, т). Аналогичным способом были получены следующие соединения:-(1,7,12,18-тетраазаоктадекан-N1 ,N18)бис[транс-диамино(бутирато-О)платины(II)] тетрабутират,-(1,5,10,14-тетраазатетрадекан-N1,N14)бис[транс-диамино(бутирато-О)платины(II)] тетрабутират,-(1,5,10-триазадекан-N1,N10)бис[транс-диамино(бутирато-О)платины(II)] тетрабутират. Пример 4. Фармакологическая оценка соединений по изобретению. Репрезентативные соединения по изобретению были протестированы в отношении их цитотоксического эффекта in vitro на различных линиях опухолевых клеток, среди которых лейкоз L1210 мышей,карцинома яичников А 2780 человека или соответствующие сублинии L1210/CDDP и A2780/CDDP, резистентные к цисплатину. Репрезентативные соединения по изобретению продемонстрировали цитотоксические эффекты и были способны преодолеть механизмы резистентности, которые ограничивают применение цисплатина. Кроме того, репрезентативные соединения по изобретению были протестированы в in vivo тестах, в которых линии опухолевых клеток человека, например А 2780 (яичников человека), A2780/CDDP (яичников человека, резистентные к цисплатину) или LoVo (ободочной кишки человека), подкожно инокулировали бестимусным мышам с мутацией nude с ослабленным иммунитетом. Соединения вводили внутривенно каждые четыре дня или каждые семь дней после инокуляции опухоли для трех циклов лечения. В этих экспериментальных моделях соединения по изобретению доказали высокий противоопухолевый эффект в переносимых дозах. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение, выбранное из тетрабути рата,-(1,5,10-триазадекан-N1,N10)бис[транс-диамино(бутирато-О)платины(II)] тетрабутирата. 2. Соединение по п.1, представляющее собой -(1,8,11,18-тетраазаоктадекан-N1,N18)бис[трансдиамино(капроато-О)платины(II)] тетранитрат. 3. Соединение по п.1, представляющее собой -(1,8,11,18-тетраазаоктадекан-N1,N18)бис[трансдиамино(каприлато-О)платины(II)] тетранитрат. 4. Соединение по п.1, представляющее собой -(1,7,12,18-тетраазаоктадекан-N1,N18)бис[трансдиамино(бутирато-О)платины(II)] тетрабутират. 5. Фармацевтические композиции, содержащие соединение по любому из пп.1-4 в смеси с подходящими носителями или эксципиентами. 6. Применение соединений по пп.1-4 для приготовления лекарственных средств с противоопухолевой активностью. 7. Способ лечения опухоли у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по любому из пп.1-4 в количестве, эффективном для лечения опухоли.