Лекарственное средство для лечения вирусных инфекций

ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ Ленева Ирина Анатольевна (RU)RU-C2-2262350 Анисимова O.C. и др. "Исследование метаболизма противовирусного препарата арбидол методами ТСХ, ВЭЖХ и Массспектрометрии". Химико-фармацевтический журнал, М.: Медицина, 1995, т. 29,2, с. 5-8 Зотова С.А. и др. "Синтез и противовирусная активность сульфидов индола и бензофурана". Химико-фармацевтический журнал, М.: Медицина, 1995, т. 29,1, с. 51-53US-А 1-20040062801 Энциклопедия лекарств под ред. Ю.Ф. Крылова, М., РЛС, 2000, с. 63, 791,797, 799-800 Изобретение относится к области медицины, а именно к поиску и разработке новых лекарственных средств для лечения и профилактики вирусных инфекций, преимущественно вирусов гриппа. Задачей изобретения является создание более эффективных и менее токсичных лекарственных средств за счет комбинации арбидола или его аналогов с противовирусным препаратом другого механизма действия. Такая комбинация усиливает эффективность низких доз препаратов, а также за счет снижения дозы позволяет уменьшить вероятность проявления побочных эффектов и возникновения резистентных штаммов вируса. Указанный результат достигается при совместном использовании арбидола или его аналогов и по крайней мере одного препарата, выбранного из следующей группы противовирусных препаратов: рибавирин, занамивир, осельтамивир, перамивир, амантадин или ремантадин.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "МАСТЕРКЛОН" (RU) 015132 Изобретение относится к области медицины, а именно к поиску и разработке новых лекарственных средств для лечения и профилактики вирусных инфекций, преимущественно вирусов гриппа. В настоящее время известно большое количество противовирусных препаратов. К первому поколению таких препаратов относятся препараты адамантанового ряда: амантадин и ремантадин. Противовирусный эффект этих препаратов обусловлен тем, что указанные препараты блокируют ионные каналы,образованные трансмембранной областью вирусного белка М 2. Молекулы амантадина и ремантадина,соответствующие по размерам диаметру этих ионных каналов, ингибируют перенос протонов, повышая тем самым рН внутри эндосом. Благодаря этому внутри вириона создаются условия, препятствующие выходу рибонуклеопротеида и транскрипции вирусного генома. Следствием этого процесса является подавление репродукции вируса. Однако препараты адамантанового ряда эффективны только в отношении вирусов гриппа А. Кроме того, их применение ограничено наличием серьезных побочных эффектов и быстрым возникновением и распространением резистентным к ним штаммов. Рибавирин - пуриновый аналог нуклеозидов, достаточно эффективен против вирусов гриппа А и В,но должен использоваться с осторожностью у пациентов с предшествующей анемией, диабетом или заболеванием коронарных артерий. Кроме того, рибавирин обладает тератогенным эффектом. К препаратам второго поколения относятся ингибиторы нейраминидазы: занамивир, озельтамивир и перамивир. Нейраминидаза - один из основных ферментов, участвующих в репликации вирусов гриппа А и В. При его ингибировании затрудняется высвобождение новых вирусных частиц из инфицированных клеток и дальнейшее распространение вируса в организме. К недостаткам этих лекарств относятся достаточно частые (около 10%) побочные эффекты в виде тошноты и рвоты при приеме озельтамивира, возникновение раздражения носоглотки при приеме занамивира. Кроме того, они весьма дороги. Использование ингибиторов нейраминидазы в настоящее время осложняется еще и тем, что недавно, в феврале 2005 г., был выделен вирус гриппа A, H5N1, устойчивый к озельтамивиру (Nature, 2005, vol. 437,20). Для него подтверждена возможность передачи от человека к человеку. Наиболее близким аналогом данного изобретения является гидрохлорид 1-метил-2-фенилтиометил 3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (арбидол), предназначенный для лечения и профилактики гриппа А и В у взрослых и детей (патент РФ 2008004). Механизм противовирусного действия этого препарата точно не установлен, предполагается, что арбидол препятствует слиянию липидной оболочки вируса с клеточными мембранами. Но данный препарат эффективен преимущественно на начальных стадиях заболевания. Учитывая изложенное, поиск новых препаратов для лечения вирусных инфекций остается весьма актуальным. Техническим результатом настоящего изобретения является создание более эффективных и менее токсичных лекарственных средств за счет комбинации арбидола или его структурных аналогов, обладающих доказанной противовирусной активностью, с противовирусным препаратом, имеющим иной механизм действия. Такая комбинация усиливает эффективность низких доз препаратов, а также за счет снижения дозы позволяет уменьшить вероятность проявления побочных эффектов и возникновения резистентных штаммов вируса. Указанный результат достигается при совместном использовании арбидола или его аналогов и по меньшей мере одного препарата, выбранного из следующих групп противовирусных препаратов: рибавирина; ингибиторов вирусной нейраминидазы, предпочтительно занамивира, озельтамивира или перамивира; блокаторов М 2-каналов, предпочтительно амантадина или ремантадина. В заявленном изобретении арбидол (или его аналоги) совместно с занамивиром, перамивиром,озельтамивиром, адамантином, ремантадином или рибавирином проявляют значительно более высокую активность, благодаря чему стало возможным уменьшить их содержание в препарате при достижении того же или даже более сильного лечебного эффекта. Активные аналоги арбидола, обладающие противовирусными свойствами, могут быть описаны при помощи формулы I где R1 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;R2 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;n=0-2; А - S, SO2, SO. Аналоги арбидола, соответствующие формуле I, в том числе их синтез и физико-химические свойства, описаны в литературе (Химико-фармацевтический журнал,1, 1995, с. 51-53, Химикофармацевтический журнал;2; 1995, с. 5-8; Химико-фармацевтический журнал,1, 1998, с. 565-569). Среди указанных аналогов автором было выявлено наиболее активное соединение - 1-метил-2 фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфон, имеющее следующую структурную формулу: В результате исследований было неожиданно обнаружено, что 1-метил-2-фенилтиометил-3- карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сульфон обладает значительно меньшей токсичностью, чем арбидол, в то время как достигаемый противовирусный эффект сравним и даже превосходит таковой у арбидола и других изученных аналогов арбидола. Данное соединение может применяться как самостоятельно для лечения вирусных инфекций, так и в комбинации с препаратами из указанных выше групп, что значительно повышает эффективность воздействия. В наиболее общем варианте настоящее изобретение раскрывает лекарственные средства, в качестве одного из компонентов содержащие эффективное количество соединения общей формулы I, а в качестве другого - эффективное количество противовирусного средства с другим механизмом действия, принадлежащего к одной из перечисленных выше групп лекарственных средств, а именно препаратам адамантанового ряда, предпочтительно амантадин или ремантадин; ингибиторам нейраминидазы, предпочтительно занамивир, озельтамивир или перамивир; или ремантадин. Наиболее предпочтительно такие композиции содержат гидрохлорид 1-метил-2-фенилтиометил-3 карбокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (арбидол) или 1-метил-2-фенилтиометил-3 карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сульфон (сульфон) или фармацевтически приемлемые соли этих соединений в комбинации с осельтамивиром. Указанные выше комбинации могут применяться в виде различных лекарственных форм, например в виде твердой лекарственной формы, предпочтительно в виде таблеток или капсул, а также в виде раствора для инъекций. При этом могут быть использованы фармацевтические носители, принятые в фармацевтической химии для приготовления средства доставки активного компонента в организм пациента. Кроме того, препараты могут дополнительно содержать наполнители, связующие, целевые добавки и т.п.(например, как указано в 2"d ed. London: The Pharmaceutical Press; 1994). Целевые добавки включают комплексообразующие агенты, такие как ЭДТА, аскорбиновую кислоту и другие антиоксиданты, углеводороды, такие как декстрин, гидроксиалкилцеллюлоза, гидроксиалкилметилцеллюлоза, стеариновая кислота и т.п. Помимо ингредиентов, упомянутых выше, препараты могут включать и другие традиционные добавки, например вкусовые, ароматические и т.п. Комбинации лекарственных препаратов согласно данному изобретению также пригодны для получения фармацевтических препаратов с регулируемым высвобождением, в которых высвобождение активных ингредиентов контролируется и регулируется для уменьшения частоты приема лекарственной дозы и улучшения фармакокинетического профиля. Эффективная доза активного компонента зависит от того, используется ли соединение профилактически (более низкие дозы) или для лечения вирусной инфекции. Кроме того, эффективная доза может зависеть также от веса, возраста, пола больного и наличия сопутствующих заболеваний. Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Действие арбидола и его аналогов в комбинации с ингибиторами вирусной нейраминидазы на репродукцию вируса гриппа А/Сингапур/1/57 в культуре клеток MDCK. Изучение противовирусной активности препаратов (во всех примерах) проводилось на культуре клеток MDCK методом иммуноферментного анализа. Процент ингибирования вирусной репродукции изучаемым препаратом определяли по формуле% ингибирования=100-(ОП 490 опыта-ОП 490 клеточного контроля)/(ОП 490 вирусного контроля в отсутствие соединения-ОП 490 клеточного контроля),где ОП 490 - оптическая плотность при соответствующей длине волны. Обозначения изучаемых соединений: А - арбидол, В - 1-метил-2-(4-метилфенилсульфометил)-3 карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдол, С - 1-метил-2-(4-оксиэтилфенилсульфометил)-3 карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдол. Соответствующие данным соединениям (А, В,С) проценты ингибирования приведены в табл. 1 через запятую. Из приведенной таблицы видно, что арбидол, добавленный к клеткам через 2 ч после их инфицирования, оказывает незначительное действие на репродукцию вируса. Аналогичным образом, и оба ингибитора вирусной нейраминидазы, взятые по отдельности, позволяют достичь лишь порядка 50% ингибирования. Однако совместное использование арбидола или его аналогов с ингибиторами нейраминидазы через 2 ч после инфицирования позволяет значительно усилить эффект обоих препаратов. Комбинация 3 мкг/мл арбидола и 3,3 мкг занамивира (озельтамивира) позволила достичь 90% ингибирования вируса,в то время как в 10 раз большее количество занамивира или озельтамивира без добавления арбидола подавляет репродукцию лишь на 50%. При использовании 10-12 мкг занамивира или озельтамира, чтобы достичь 100% подавления репродукции вируса, достаточно всего 1 мкг арбидола. Пример 2. Действие арбидола (А) и его аналога - 1-метил-2-(п-метилфенилсульфометил)-3-карбэтокси-4 диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (D) - в комбинации с блокаторами М 2-каналов на репродукцию вируса гриппа А/Сингапур/1/57 в культуре клеток MDCK. Соответствующие указанным соединениям (A, D) проценты ингибирования приведены в табл. 2 через запятую. Таблица 2 Комбинация арбидола с блокаторами М 2-каналов позволяет также достичь более высокого противовирусного эффекта, чем при использовании тех же препаратов по отдельности, но в данном случае нужны более высокие концентрации арбидола, чем в примере 1. В опытах с амантадином, как видно из табл. 2, наибольший синергетический эффект наблюдался при концентрации арбидола, начиная с 5 мкг/мл и концентрации амантадина 0,3-5 мкг/мл. Аналогичные данные были получены и при использовании ремантадина.-3 015132 Пример 3. Действие арбидола в комбинации с рибавирином на репродукцию вируса гриппа А/Сингапур/1/57 в культуре клеток MDCK. Таблица 3 Добавление к различным концентрациям арбидола рибавирина также увеличивало его ингибирующий эффект, но степень увеличения оказалась различной при разных концентрациях. Наиболее удачной оказалась комбинация: 10 мкг арбидола+10 мкг рибавирина. Пример 4. Противовирусное действие арбидола в комбинации с озельтамивиром на репродукцию вируса птичьего гриппа (H5N1) на экспериментальной модели (белые мыши). Животные: белые мыши массой от 15 до 20 г, поставленные из питомника Вирусологического центра НИИМ МО РФ (г. Сергиев Посад). Препараты вводили перорально. Оценка эффективности препаратов проводилась по снижению уровня смертности мышей. Таблица 4 Введение препаратов проводилось внутрижелудочно, период наблюдения за животными составлял 14 суток. Как видно из таблицы, 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфон оказался существенно менее токсичным, чем арбидол. Это подтверждается значениями ЛД 50. Для арбидола этот параметр составил 86050 мг/кг, а для сульфона - 3600180 мг/кг для мышей, т.е. в 4 раза больше. Тот же параметр для крыс соответственно 172070 мг/кг и 5350250 мг/кг, т.е. в 3 раза больше, чем у арбидола. Пример 6. Оценка противовирусной активности 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфона в сравнении с арбидолом на примере вируса гриппа A/PR/8/34 в культуре клеток MDCK Таблица 6 Эффективность препарата изучалась на примере вируса гриппа в культуре клеток MDCK стандартным методом иммуноферментного анализа. Результаты показали, что эффективность нового соединения превышает таковую для известного препарата арбидола. Изучение противовирусной активности на мышах, зараженных вирусом гриппа H3N2, проводилось с использованием трех схем: профилактической - препараты вводились за 24 ч и потом еще за 1 ч до инфицирования; лечебно-профилактической - препараты вводились за 24 ч, за 1 ч до инфицирования и спустя 8 ч после инфицирования; лечебной - препараты вводились спустя 8 ч после инфицирования, и потом каждые 8 ч на протяжении 14 суток. Результаты показали, что действие сульфона сравнимо с действием арбидола в тех же концентрациях. 1-Метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфон может применяться в различных лекарственных формах, в том числе с использованием фармацевтических носителей, принятых в фармацевтической химии для приготовления средства доставки активного компонента в организм пациента. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, включающая соединение формулы I где R1 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;R2 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;n=0-2; А - S, SO2, SO; или его фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит противовирусный агент блокатор М 2-каналов, выбранный из группы, включающей амантадин и ремантадин. 2. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, включающая соединение формулы I где R1 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;R2 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;n=0-2; А - S, SO2, SO; или его фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит противовирусный агент, выбранный из следующей группы: занамивир, озельтамивир и перамивир. 3. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, включающая соединение формулы I где R1 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;R2 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;n=0-2; А - S, SO2, SO; или его фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит противовирусный агент рибавирин. 4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что соединение общей формулы I представляет собой 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6 броминдол, или 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сульфон, или его фармацевтически приемлемые соли, и/или гидраты. 5. Способ лечения или профилактики вирусной инфекции, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.1-4.