Способ получения противолямблиозного и противоописторхозного средства из соссюреи солончаковой saussurea salsa (pall.) spreng.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОЛЯМБЛИОЗНОГО И ПРОТИВООПИСТОРХОЗНОГО СРЕДСТВА ИЗ СОССЮРЕИ СОЛОНЧАКОВОЙ Изобретение относится к области биоорганической химии, фармацевтической химии и технологии лекарств и касается способа получения из растительного сырья биологически активных веществ, обладающих противолямблиозным и противоописторхозным действием. Целью изобретения является способ получения экологически чистого экстракта из Saussurea salsa(соссюрея солончаковая),обладающего противолямблиозным и противоописторхозным действием, который может быть использован в медицине как фитопрепарат широкого действия. Технический результат заявляемого изобретения достигается тем, что используется экологически безопасный способ получения сухого экстракта соссюреи солончаковой с количественным содержанием действующего вещества - сесквитерпенового лактона цинаропикрина (2,2-2,61%).(96) KZ2011/005 (KZ) 2011.01.19 Исследование некоторых видов соссюреи(71)(73)(73) Заявитель, изобретатель и патентовладелец: как противопаразитного средства. Автореферат АДЕКЕНОВ СЕРГАЗЫ диссертации на соискание ученой степени МЫНЖАСАРОВИЧ (KZ) кандидата фармацевтических наук. Пермь,2000, с. 8-13, 18, 19 Мурзалиева Гульнара Тлеухановна. Технология и стандартизация субстанции и таблетированной формы противопаразитарного средства на основе Saussurea salsaID=444052 Драб А.И. и др. Противоописторхозное действие экстракта соссюреи солончаковой. Химико-фармацевтический журнал. Том 39, 8, Москва, Издательство ФОЛИУМ, 2005,с. 30-32 Изобретение относится к области биоорганической химии, фармацевтической химии и технологии лекарств и касается способа получения из растительного сырья биологически активных веществ, обладающих противолямблиозным и противоописторхозным действием. Задачей изобретения является способ получения экологически чистого экстракта из Saussurea salsa(Pall.) Spreng. (соссюрея солончаковая), обладающего противолямблиозным и противоописторхозным действием, обусловленного наличием сесквитерпенового лактона цинаропикрина (1), который может быть использован в медицине как лекарственный препарат широкого действия. Близкими аналогами по составу являются: экстракты соссюреи иволистной (Saussurea salicifolia (L.)DC), полученные с использованием различных растворителей: 0,5% хлороформно-водное извлечение и 40, 70 и 90%-этанольные экстракты, среди которых 70% спиртовый экстракт обладает сравнительно высокой противолямблиозной активностью (Федотова В.Е. Голубушка иволистная как противолямблиозное средство. Автореф. дисс. канд. мед. наук. - Новосибирск. - 1969, 156 с; Саратиков А.С., Федотова В.Е. Экстракт голубушки как противолямблиозное средство; Аптечное дело. - 1952. - 3. - Том XII. С. 26-28; Нурмухаметова К.А. Исследование некоторых видов соссюреи как противопаразитарного средства. Автореф. дисс. канд. фарм. наук. - Пермь. - 2000. - 23 с.). Недостатком известного способа получения является то, что жидкие экстракты готовят методом реперколяции, состоящий из трех периодов, продолжительность которых составляет несколько дней и месяцев. Другой недостаток в том, что хлороформ является токсичным органическим растворителем, запрещен по GMP (международные стандарты) к применению в фармацевтическом производстве. И самый основной недостаток - в полученных экстрактах отмечается низкое содержание действующего вещества - сесквитерпенового лактона цинаропикрина (от 0,8 до 1,4%). Известен аналог по назначению метронидазол - препарат, который выпускается в виде таблеток(метронидазол, трихопол, флагил, гинальгин, орвагил), влагалищных свечей (Клион Д, вагимид, метрофит). (Машковский М.Д. Лекарственные средства, М.: Медицина. - 1993. - Том 2. - Издание 12. - С.415417). Данный препарат имеет существенные недостатки: часто развивается устойчивость трихомонад к метронидазолу и сохраняются условия для рецидива болезни и реинфекции, а также отмечены случаи аллергической реакции на метронидазол. В качестве лекарственного сырья в предлагаемом нами способе используют надземную часть соссюреи солончаковой (Saussurea salsa (Pall.) Spreng.), которая широко распространена на территории Центрального Казахстана, плотность запаса сухой надземной массы составляет 255,417,9 г/м 2, а эксплуатационный запас сухой надземной массы составляет 5,7 т с объемом ежегодных заготовок 1,9 т сухого сырья. Технический результат заявляемого изобретения достигается тем, что используется экологически безопасный способ получения сухого экстракта соссюреи солончаковой с содержанием действующего вещества - сесквитерпенового лактона цинаропикрина (1) (2,2-2,61%), включающий экстракцию сырья смесью этилацетат-спирт в соотношении (4:1), упаривание жидкого экстракта, очистку густого экстракта от гидрофобных веществ смесью этиловый спирт - вода в соотношении (2:1), очистку экстракта от водорастворимых веществ этилацетатом, получение очищенного густого экстракта, последующую сублимационную сушку очищенного густого экстракта, получение субстанции препарата. Способ 1. Для удаления неполярных компонентов 5 кг травы соссюреи солончаковой загружают в экстрактор,после герметизации люка в экстрактор подают жидкий диоксид углерода CO2 при регулируемом давлении 150 атм. и температуре 60 С. Время экстракции 3 ч. Выход неполярной фракции составляет 1,1% в пересчете на воздушно-сухое сырье, содержание цинаропикрина 0,01% в пересчете на массу СО 2 экстракта. 4 кг сырья соссюреи солончаковой (после СО 2-экстракции) в 5 мешочках, сшитых из "бязи", по 0,8 кг в каждом, помещают в емкость для экстрагирования сырья, заливают 96% этиловым спиртом в количестве 60 кг и экстрагируют при температуре 60 С. После охлаждения жидкий экстракт сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза при тех же условиях. По истечении времени экстрагирования жидкий экстракт заливают в роторный испаритель. В роторном испарителе проводится процесс сгущения жидкого экстракта при температуре 60 С. Полученный густой экстракт массой 2,5 кг равномерно распределяется на четыре лотка, толщина слоя 5 мм, смачивается этиловым спиртом 96% в количестве 0,250 л. Лотки загружаются в сублиматор,температура понижается до -40 С, замораживание продолжается в течение 6 ч, давление в сублимацион-1 023377 ной камере составляет 510-2 мм рт.ст. Через 6 ч после начала сушки температуру постепенно повышают до +40 С, со скоростью 5 С в час. Досушивание при +40 С продолжается в течение 12 ч. На протяжении всего процесса сушки проводят постоянное наблюдение за давлением конденсата и давлением воды. Полученный сухой экстракт помещают в фарфоровую ступку и растирают до порошкообразного состояния. Количественное определение содержания действующего вещества цинаропикрина в субстанции препарата проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ высокого давления на приборе Hewlett PackardAgilent 1100 Series в изократическом режиме в следующих условиях: аналитическая колонка, заполненная сорбентом Zorbax SB-C18, 4,6150 мм, с размером частиц 5 мкм; состав подвижной фазы: метанол - вода в соотношении 1:1; детектирование при длине волны 204 нм; температура колонки - комнатная; скорость подвижной фазы 0,500 мл/мин; объем вводимой пробы 20 мкл. Обработку данных проводят с использованием программного обеспечения ChemStation. Выход субстанции препарата составляет 18,5% в пересчете на воздушно-сухое сырье после СО 2 экстракции. Содержание действующего вещества - цинаропикрина 0,15% в пересчете на субстанцию препарата. Способ 2. Для удаления неполярных компонентов 5 кг травы соссюреи солончаковой загружают в экстрактор,после герметизации люка в экстрактор подают жидкий СО 2 при регулируемом давлении 150 атм. и температуре 60 С. Время экстракции 3 ч. Выход неполярной фракции составляет 1,1% в пересчете на воздушно-сухое сырье, содержание цинаропикрина 0,01% в пересчете на массу СО 2-экстракта. 4 кг соссюреи солончаковой (после СО 2-экстракции) в 5 мешочках, сшитых из "бязи", по 0,8 кг в каждом, помещают в емкость для экстрагирования сырья, заливают 96% этиловым спиртом в количестве 60 кг и экстрагируют при температуре 60 С. После охлаждения жидкий экстракт сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза при тех же условиях. По истечении времени экстрагирования жидкий экстракт заливают в роторный испаритель. В роторном испарителе проводится процесс сгущения жидкого экстракта при температуре 60 С. Затем экстракт соссюреи солончаковой очищают от гидрофобных веществ. Полученный густой экстракт помещают в плоскодонную коническую колбу и при постоянном перемешивании растворяют в горячем 96%-ном этаноле при температуре 70 С и добавляют воды очищенной, нагретой до аналогичной температуры (соотношение масса густого экстракта - масса этилового спирта 1:3; соотношение массы этилового спирта - масса воды 2:1). Полученный раствор оставляют в темном месте на сутки до образования темно-зеленого коагулянта (осадка). Водно-спиртовый раствор экстракта фильтруют через бумажный фильтр. Полученный осадок (гидрофобный балласт: липиды, хлорофиллы и т.д.) повторно обрабатывают 2 раза. Далее проводят очистку экстракта от водорастворимых веществ этилацетатом. Для отделения водного слоя фильтрат помещают в делительную воронку объемом 2 л и обрабатывают 3 раза этилацетатом в соотношении фильтрат-этилацетат 3:1. Водный слой отделяют и утилизируют, а этилацетатно-спиртовый раствор отгоняется на роторном испарителе под вакуммом. Полученный густой экстракт массой 2,5 кг равномерно распределяется на четыре лотка, толщина слоя 5 мм, смачивается этиловым спиртом 96% в количестве 0,250 л. Лотки загружаются в сублиматор,температура понижается до -40 С, замораживание продолжается в течение 6 ч, давление в сублимационной камере составляет 510-2 мм рт.ст. Через 6 ч после начала сушки температуру постепенно повышают до +40 С, со скоростью 5 С в час. Досушивание при +40 С продолжается в течение 12 ч. На протяжении всего процесса сушки проводят постоянное наблюдение за давлением конденсата и давлением воды. Полученный сухой экстракт помещают в фарфоровую ступку и растирают до порошкообразного состояния. Количественное определение содержания действующего вещества цинаропикрина в субстанции препарата проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ высокого давления на приборе Hewlett PackardAgilent 1100 Series в изократическом режиме. Обработку данных проводят с использованием программного обеспечения ChemStation. Выход субстанции препарата составляет 13,4% в пересчете на воздушно-сухое сырье после СО 2 экстракции. Содержание действующего вещества цинаропикрина 0,21% в пересчете на субстанцию препарата. Способ 3. Для удаления неполярных компонентов 5 кг травы соссюреи солончаковой загружают в экстрактор,после герметизации люка в экстрактор подают жидкий СО 2 при регулируемом давлении 150 атм. и температуре 60 С. Время экстракции 3 ч. Выход неполярной фракции составляет 1,1% в пересчете на воздушно-сухое сырье, содержание цинаропикрина 0,01% в пересчете на массу CO2-экстракта. 4 кг сырья соссюреи солончаковой (после СО 2-экстракции) в 5 мешочках, сшитых из "бязи", по 0,8 кг в каждом, помещают в емкость для экстрагирования сырья, затем заливают заранее приготовленный экстрагент - смесь этилацетат - этиловый спирт (4:1) в количестве 60 кг, экстрагируют при температуре 60 С. После охлаждения жидкий экстракт сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза при тех же условиях. По истечении времени экстрагирования жидкий экстракт заливают в роторный испаритель. В роторном испарителе проводится процесс сгущения жидкого экстракта при температуре 60 С. Затем экстракт соссюреи солончаковой очищают от гидрофобных веществ. Полученный густой экстракт помещают в плоскодонную коническую колбу и при постоянном перемешивании растворяют в горячем 96%-ном этаноле при температуре 70 С и добавляют воды очищенной, нагретой до аналогичной температуры (соотношение масса густого экстракта - масса этилового спирта 1:3; соотношение массы этилового спирта - масса воды 2:1). Полученный раствор оставляют в темном месте на сутки до образования темно-зеленого коагулянта (осадок). Водно-спиртовый раствор экстракта фильтруют через бумажный фильтр. Полученный осадок (гидрофобный балласт: липиды, хлорофиллы и т.д.) повторно обрабатывают 2 раза. Далее проводят очистку экстракта от водорастворимых веществ этилацетатом. Для отделения водного слоя фильтрат помещают в делительную воронку объемом 2 л и обрабатывают этилацетатом в соотношении фильтрат-этилацетат (3:1) 3 раза. Водный слой отделяют и утилизируют, а этилацетатно-спиртовый раствор отгоняется на роторном испарителе. Полученный густой экстракт массой 2,5 кг равномерно распределяется на четыре лотка, толщина слоя 5 мм, смачивается этиловым спиртом 96% в количестве 0,250 л. Лотки загружаются в сублиматор,температура понижается до -40 С, замораживание продолжается в течение 6 ч, давление в сублимационной камере составляет 510-2 мм рт.ст. Через 6 ч после начала сушки температуру постепенно повышают до +40 С, со скоростью 5 С в час. Досушивание при +40 С продолжается в течение 12 ч. На протяжении всего процесса сушки проводят постоянное наблюдение за давлением конденсата и давлением воды. Полученный сухой экстракт помещают в фарфоровую ступку и растирают до порошкообразного состояния. Количественное определение содержания действующего вещества цинаропикрина в субстанции препарата проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ высокого давления на приборе Hewlett PackardAgilent 1100 Series в изократическом режиме. Обработку данных производят с использованием программного обеспечения ChemStation. Выход субстанции препарата составляет 1,87% в пересчете на воздушно-сухое сырье после СО 2 экстракции. Содержание действующего вещества цинаропикрина 2,24% в пересчете на субстанцию препарата. Способ 4. 4 кг травы соссюреи солончаковой в 10 мешочках, сшитых из "бязи", по 0,8 кг в каждом, помещают в емкость для экстрагирования сырья, затем заливают заранее приготовленный экстрагент - смесь этилацетат - этиловый спирт (4:1) в количестве 60 кг, экстрагируют при температуре 60 С. После охлаждения жидкий экстракт сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза при тех же условиях. По истечении времени экстрагирования жидкий экстракт заливают в роторный испаритель. В роторном испарителе проводится процесс сгущения жидкого экстракта при температуре 60 С. Затем экстракт соссюреи солончаковой очищают от гидрофобных веществ. Полученный густой экстракт помещают в плоскодонную коническую колбу и при постоянном перемешивании растворяют в горячем 96%-ном этаноле при температуре 70 С и добавляют дистиллированную воду нагретую до аналогичной температуры (соотношение масса густого экстракта - масса этилового спирта 1:3; соотношение массы этилового спирта - масса воды 2:1). Полученный раствор оставляют в темном месте на сутки до выпадения осадка с образованием темно-зеленого коагулянта. Водно-спиртовый раствор экстракта фильтруют через бумажный фильтр. Полученный осадок (гидрофобный балласт: липиды, хлорофиллы и т.д.) повторно обрабатывают 2 раза. Далее проводят очистку экстракта от водорастворимых веществ этилацетатом. Для отделения водного слоя фильтрат помещают в делительную воронку объемом 2 л и обрабатывают 3 раза этилацетатом в соотношении фильтрат-этилацетат = 3:1. Водный слой отделяют и утилизируют, а этилацетатно-спиртовый раствор отгоняется на роторном испарителе под вакуумом. Полученный очищенный густой экстракт массой 2,5 кг равномерно распределяется на четыре лотка,толщина слоя 5 мм, смачивается этиловым спиртом 96% в количестве 0,250 л. Лотки загружаются в суб-3 023377 лиматор, температура понижается до -40 С, замораживание продолжается в течение 6 ч, давление в сублимационной камере составляет 510-2 мм рт.ст. Через 6 ч после начала сушки температуру постепенно повышают до +40 С, со скоростью 5 С в час. Досушивание при +40 С продолжается в течение 12 ч. На протяжении всего процесса сушки проводят постоянное наблюдение за давлением конденсата и давлением воды. Полученный сухой экстракт помещают в фарфоровую ступку и растирают до порошкообразного состояния. Количественное определение содержания действующего вещества цинаропикрина в субстанции препарата проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ высокого давления на приборе Hewlett PackardAgilent 1100 Series в изократическом режиме. Обработку данных производят с использованием программного обеспечения ChemStation. Выход субстанции препарата составляет 2,92% в пересчете на воздушно-сухое сырье. Содержание действующего вещества цинаропикрина 2,61% в пересчете на субстанцию препарата. Оптимальным является применение способа 4, который позволяет получать сухой экстракт соссюреи солончаковой с количественным выходом 2,92% и количественным содержанием действующего вещества - сесквитерпенового лактона цинаропикрина 2,2-2,61%. Поставленная цель предлагаемого изобретения достигается экстракцией сырья соссюреи солончаковой смесью этилацетат-спирт в соотношении (4:1), упариванием жидкого экстракта, очисткой густого экстракта от гидрофобных веществ смесью этиловый спирт- вода в соотношении (2:1), очисткой экстракта от водорастворимых веществ этилацетатом. Данный способ обеспечивает количественное содержание целевого вещества - сесквитерпенового лактона цинаропикрина 2,2- 2,61% в пересчете на массу субстанции (таблица). Полученную субстанцию препарата взвешивают по 0,1 кг. и используют для получения таблетированной формы. Для получения таблетированной формы противолямблиозного и противоописторхозного препарата 0,7 г сухой экстракт соссюреи солончаковой смешивают со вспомогательными веществами: кислота винная, натрия бикарбонат, натрия крахмала гликолят, кальция стеарат. Таблетки содержат в своем составе: сухой экстракт соссюреи солончаковой - 0,12 г; кислота винная - 0,252 г; натрия бикарбонат - 0,25 г; натрия крахмала гликолят - 0,071 г; кальция стеарат - 0,007 г. Таблица 1. Влияние способа экстракции сырья соссюреи солончаковой на выход экстрактивных веществ и сесквитерпеновоголактона цинаропикрина ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения противолямблиозного и противоописторхозного цинаропикринсодержащего экстракта из соссюреи солончаковой Saussurea salsa (Pall.) Spreng., включающий трехкратную экстракцию смеси веществ из соссюреи солончаковой смесью этилацетат-этанол в соотношении 4:1 при 60 С; упаривание со сгущением жидкого экстракта на ротационном испарителе при 60 С; очистку густого экстракта от гидрофобных веществ смесью этанол-вода при 70 С в пропорции экстракт:этанол:вода, равной 1:3:1,5; выдерживание в темноте в течение суток с выпадением гидрофобного осадка, который повторно дважды обрабатывают смесью этанол-вода в тех же условиях; очистку экстракта этилацетатом от водораствори-4 023377 мых веществ в пропорции экстракт:этилацетат, равной 3:1; упаривание этилацетатной фракции очищенного экстракта на ротационном испарителе в вакууме; сублимационную сушку очищенного экстракта,растворенного в этаноле, в диапазоне температур от -40 до +40 С и при давлении 0,05 мм рт.ст.