Антитело, способное связывать тимусный стромальный лимфопоэтин, нуклеиновая кислота, его кодирующая, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин, гибридома, способ получения антитела и его применение

АНТИТЕЛО, СПОСОБНОЕ СВЯЗЫВАТЬ ТИМУСНЫЙ СТРОМАЛЬНЫЙ ЛИМФОПОЭТИН, НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, ЕГО КОДИРУЮЩАЯ,ЭКСПРЕССИРУЮЩИЙ ВЕКТОР, КЛЕТКА-ХОЗЯИН, ГИБРИДОМА, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Настоящее изобретение относится к изолированному антителу, специфически связывающему полипептид тимусного стромального лимфопоэтина (TSLP) и включающему: а) вариабельный домен легкой цепи,включающий: i) последовательность CDR1 лгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:13; ii) последовательность CDR2 лгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:60; и iii) последовательность CDR3 лгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:105; и b) вариабельный домен тяжелой цепи,включающий: i) последовательность CDR1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:145; ii) последовательность CDR2 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; и iii) последовательность CDR3 тяжелой цепи,содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; или а) вариабельный домен легкой цепи, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной SEQ ID NO:363; ii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:362; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется при умеренно строгих условиях с полинуклеотидом,комплементарным полинуклеотиду, состоящему из SEQ ID NO:362; и b) вариабельный домен тяжелой цепи,имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: i) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной SEQ ID NO:361; ii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:360; и iii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется при умеренно строгих условиях с полинуклеотидом,комплементарным полинуклеотиду, состоящему из SEQ ID NO:360; или вариабельный домен легкой цепи,включающий последовательность SEQ ID NO:363, и вариабельный домен тяжелой цепи, включающий последовательность SEQ ID NO:361. Настоящее изобретение также включает выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, рекомбинантный экспрессирующий вектор, клетку-хозяина, содержащую такой вектор, гибридому, продуцирующую антитело, а также способ получения антитела и его применение,включая фармацевтическую композицию для лечения и предупреждения связанных с TSLP воспалительных и фиброзных расстройств. Область, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к композициям антигенсвязывающих белков, включающих антитела, способные связывать человеческий тимусный стромальный лимфопоэтин, а также к связанным с ними методам. Предпосылки создания изобретения Распространнность аллергических заболеваний, таких как астма, ринит, атопический дерматит и пищевая аллергия, по-видимому, в последние годы увеличивается, в особенности, в развитых странах,поражая вс большую часть населения (Kay, N. Engl. J. Med. 344: 30-37 (2001. Тимусный стромальный лимфопоэтин (TSLP) представляет собой цитокин, продуцируемый эпителиальными клетками в ответ на провоспалительные раздражители. Обнаружено, что TSLP стимулирует аллергические воспалительные реакции, главным образом, за счт своей активности в отношении дендритных и тучных клеток (SoumelisTSLP обнаруживаются в концентрированной жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BAL) больных астмой и других пациентов, страдающих аллергическими расстройствами. Также повышенные уровни белка и мРНК TSLP обнаруживаются в поражнной коже пациентов с атопическим дерматитом (AD). Поэтому антагонисты TSLP могут применяться при лечении воспалительных расстройств. Кроме того, найдено, что TSLP стимулирует фиброз, как сообщалось в патентной заявке США регистрационный номер 11/344379. Если в процессе восстановления тканей фазе фиброза ничто не препятствует, то фиброзное заболевание приводит к обширному ремоделированию ткани и образованию покрытой постоянными рубцами ткани (Wynn, Nature Rev. Immunol. 4, 583 (2004. По оценкам до 45% смертей в Соединнных Штатов может быть вызвано фибропролиферативными заболеваниями, которые могут действовать на многие ткани и системы органов (Wynn, см. выше, 595 (2004. В настоящее время для лечения фиброзных заболеваний применяют противовоспалительные лекарственные средства, так как фиброз является общим для многих стойких воспалительных заболеваний,таких как идиопатический лгочный фиброз, прогрессирующее почечное заболевание и цирроз печени. Однако механизмы, участвующие в регуляции фиброза, по-видимому, отличаются от механизмов воспаления, и противовоспалительные терапевтические средства не всегда эффективно уменьшают или предупреждают фиброз (Wynn, см. выше). Следовательно, остатся потребность в разработке лекарственных средств для уменьшения и предупреждения фиброза. Поэтому можно было бы ожидать, что антагонисты TSLP будут полезны при лечении воспалительных и фиброзных расстройств. Настоящее раскрытие включает такие лекарственные средства и способы лечения. Сущность изобретения В одном аспекте настоящее изобретение относится к изолированному антителу, включающему Аa) вариабельный домен легкой цепи, включающийi) последовательность CDR1 лгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQii) последовательность CDR2 лгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQiii) последовательность CDR3 лгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQb) вариабельный домен тяжелой цепи, включающийi) последовательность CDR1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQa) вариабельный домен легкой цепи, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей изi) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной SEQ ID NO:363;ii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:362; иiii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется при умеренно строгих условиях с полинуклеотидом, комплементарным полинуклеотиду, состоящему из SEQ ID NO:362; иb) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей изi) аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной SEQ ID NO:361;ii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO:360; иiii) аминокислотной последовательности, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется при умеренно строгих условиях с полинуклеотидом, комплементарным полинуклеотиду, состоящему из SEQ ID NO:360; или С вариабельный домен легкой цепи, включающий последовательность SEQ ID NO:363, и вариабельный домен тяжелой цепи, включающий последовательность SEQ ID NO:361; причем антитело согласно подпунктам А, В или С специфически связывает полипептид тимусного стромального лимфопоэтина (TSLP), заданный аминокислотами 29-159 последовательности SEQ IDNO:2. В одном из воплощений изолированное антитело включает а) вариабельный домен легкой цепи,включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:363; или b) вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361; или с) вариабельный домен легкой цепи согласно (а) и вариабельный домен тяжелой цепи согласно (b). В еще одном из воплощений антитело содержит вариабельный домен легкой цепи согласно (а) и вариабельный домен тяжелой цепи согласно (b). В еще одном из воплощений антитело содержит а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:365. В следующем воплощении антитело а) связывается с TSLP, по существу, с таким же значением Kd,что и эталонное антитело, и/или b) ингибирует активность TSLP в соответствии со способом анализа остеопротегерина (OPG) с первичными клетками с тем же значением IC50, что и эталонное антитело; где указанное эталонное антитело содержит а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи,включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ IDNO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2, включающий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:365. В еще одном из воплощений антитело выбирают из группы, состоящей из человеческого антитела,гуманизированного антитела, химерного антитела, моноклонального антитела, поликлонального антитела, рекомбинантного антитела, антигенсвязывающего фрагмента антитела, одноцепочечного антитела,мономерного антитела, диатела, триатела, тетратела, фрагмента Fab, фрагмента F(fa')x, доменного антитела, IgD антитела, IgE антитела, IgM антитела, IgG1 антитела, IgG2 антитела, IgG3 антитела, IgG4 антитела и IgG4 антитела, имеющего по меньшей мере одну мутацию в шарнирной области, которая снижает тенденцию к образованию дисульфидных связей внутри тяжелой цепи. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения связанного с TSLP воспалительного состояния или связанного с TSLP фиброзного расстройства, содержащей эффективное количество любого из описанных выше антител. В одном из воплощений фармацевтическая композиция содержит эффективное количество антитела, содержащего а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:365. В еще одном из воплощений фармацевтической композиции воспалительное состояние выбирают из группы, состоящей из аллергической астмы, аллергического риносинусита, аллергического конъюнктивита и атопического дерматита. В еще одном из воплощений фармацевтической композиции фиброзное расстройство выбирают из группы, состоящей из склеродермии, интерстициального заболевания лгких, идиопатического лгочного фиброза, фиброза, вызванного хроническим гепатитом В или С, фиброза, вызванного облучением, и фиброза, возникающего при заживлении ран. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельный домен лгкой цепи, вариабельный домен тяжлой цепи, или оба этих домена любого из описанных выше антител; или где полинуклеотид кодирует аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO:363, SEQ IDNO:361 или обе эти последовательности. В одном из воплощений полинуклеотидная последовательность кодирует лгкую цепь или тяжелую цепь, или лгкую цепь и тяжелую цепь антитела, содержащего а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:365. В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к рекомбинантному экспрессирующему вектору, содержащему описанную выше нуклеиновую кислоту. В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей описанный выше экспрессирующий вектор, за исключением трансформированной человеческой клетки-хозяина,находящейся в организме человека. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к гибридоме, способной продуцировать антитело, содержащее а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2, включающий аминокислотную последовательность SEQ IDNO:365. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к способу получения любого описанного выше антитела, включающему инкубацию описанной выше клетки-хозяина в условиях, которые позволяют ей экспрессировать антитело. В одном из воплощений способа антитело представляет собой антитело, содержащее а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи, включающий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2,включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:365. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к применению любого из указанных выше антител в изготовлении лекарственного средства для лечения связанного с TSLP воспалительного состояния у субъекта, нуждающегося в таком лечении, или связанного с TSLP фиброзного расстройства у субъекта, нуждающегося в таком лечении. В одном из воплощений антитело представляет собой антитело, содержащее а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ IDNO:363, и константный домен легкой цепи лямбда, включающий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO:369; и b) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:361, и константный домен тяжелой цепи IgG2, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:365. В следующем воплощении воспалительное состояние выбирают из группы, состоящей из аллергической астмы, аллергического риносинусита, аллергического конъюнктивита и атопического дерматита. Краткое описание фигур Фиг. 1 А-1F. На этих фигурах представлена аминокислотная последовательность областей CDR1,CDR2 и CDR3 лгкой цепи Al-A27. Кроме того, представлена типичная нуклеотидная последовательность, кодирующая каждую область CDR. Фиг. 2 А-2F. На этих фигурах представлена аминокислотная последовательность областей CDR1,CDR2 и CDR3 тяжлой цепи Al-A27. Кроме того, представлена типичная нуклеотидная последовательность, кодирующая каждую область CDR. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к антигенсвязывающим агентам, включая антигенсвязывающие белки, которые специфически связываются с цитокином - человеческим тимусным стромальным лимфопоэтином(TSLP), включая антигенсвязывающие белки, которые ингибируют связывание и передачу сигнала TSLP, такие как антагонистические антитела к TSLP, фрагменты антител и производные антител. Антигенсвязывающие агенты применимы для ингибирования или блокирования связывания TSLP с его рецептором и для лечения воспалительных заболеваний, фиброзных заболеваний и других родственных состояний. Кроме того, настоящее изобретение включает композиции, наборы и способы, относящиеся к антигенсвязывающим белкам, которые связываются с TSLP. Также охватываются нуклеотидные молекулы и их производные и фрагменты, содержащие последовательность полинуклеотидов, которые кодируют полный полипептид или часть полипептида, который связывается с TSLP, таких как нуклеиновая кислота, которая кодирует полное антитело или часть антитела против TSLP, фрагмент антитела и производное антитела Помимо этого, настоящее изобретение включает векторы и плазмиды, содержащие такие нуклеиновые кислоты, и клетки или линии клеток, содержащие такие нуклеиновые кислоты и/или векторы и плазмиды. Охватываемые способы включают, например, способы получения, идентификации или выделения антигенсвязывающих белков,которые связываются с человеческим TSLP, такие как антитела против TSLP, способы определения, связыва-3 022796 ется ли антигенсвязывающий белок с TSLP, способы приготовления композиций, таких как фармацевтические композиции, содержащие антигенсвязывающий белок, который связывается с TSLP, и способы введения антигенсвязывающего белка, который связывается с TSLP, субъекту, например, способы лечения состояния,опосредованного TSLP, и для модуляции биологической активности, ассоциированной с передачей сигнала отTSLP Тимусный стромальный лимфопоэтин (TSLP) относится к цитокину с "узлом" из четырх альфаспиралей типа I, который является членом семейства IL-2, но более тесно связан с (более близок) IL-7. Цитокины представляют собой низкомолекулярные регуляторные белки, секретируемые в ответ на определнные раздражители (стимулы), которые действуют на рецепторы на мембране клеток-мишеней. Цитокины регулируют различные клеточные реакции. Цитокины, в целом, описаны в ссылочных материалах (см. Cytokines. A.TSLP первоначально клонировали, используя линию мышиных тимусных стромальных клеток (Sims etal. J. Exp. Med 192 (5), 671-680 (2000, и нашли, что он поддерживает раннее развитие В и Т клеток. Позже клонировали человеческий TSLP и нашли, что он на 43% идентичен аминокислотной последовательности мышиного гомолога (Quentmeier et al. Leukemia 15, 1286-1292 (2001), и патент США 6555520, который вводится в данное описание в качестве ссылки). Полинуклеотидная и аминокислотная последовательности человеческого TSLP представлены SEQ ID NO:1 и 2 соответственно. Было найдено, что TSLP связывается с низкой аффинностью с цепью рецептора из семейства рецепторов гемопоэтинов, называемого TSLP рецептором (TSLPR), который описан в патентной заявке США 09/895945 ( публикации 2002/0068323) (SEQ IDID NO:3 настоящей заявки, а аминокислотная последовательность представлена как SEQ ID NO:4 настоящей заявки соответственно. Растворимый домен TSLPR представляет собой домен примерно от аминокислоты 25 до аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO:4. TSLP связывается с высокой аффинностью с гетеродимерным комплексом TSLPR и рецептором альфа интерлейкина 7 IL-7R (Park et al., J. Exp. Med 192: 5(2000), патентная заявка США 09/895945, номер публикации США 2002/0068323). Последовательность рецептора IL-7 показана на фиг. 2 в патенте США 5264416, который вводится в данное описание в качестве ссылки. Последовательность растворимого домена IL-7 рецепторапредставляет собой последовательность аминокислот от 1 до 219 на фиг. 2 в патенте США 5264416. Термин "TSLP полипептиды" по данному описанию относится к различным формам TSLP, применимым в качестве иммуногенов. Эти TSLP полипептиды включают TSLP, экспрессируемые в модифицированной форме, в которой сайт расщепления фурином удалн за счт модификации аминокислотной последовательности, как описано в опубликованной патентной заявке РСТ WO 03/032898. Модифицированный TSLP сохраняет активность, но полноразмерная последовательность легче экспрессируется в клетках млекопитающих, таких как клетки СНО. Примеры TSLP полипептидов включают SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:373 и SEQ IDTSLP продуцируется в человеческих эпителиальных клетках, включая эпителиальные клетки кожи,бронхов, трахеи и дыхательных путей, кератиноцитах, стромальных и тучных клетках, клетках гладких мышц, фибробластах лгких и дермальных фибробластах, как определено количественным анализом мРНКTSLP активность включает пролиферацию клеток BAF, экспрессирующих человеческий TSLPR(BAF/HTR), как описано в опубликованной патентной заявке РСТ WO 03/032898. В BAF/HTR биоанализе используют линию мышиных В пролимфоцитов, которые трансфецированы человеческим TSLP рецептором. Клетки BAF/HTR зависят от huTSLP для роста и пролиферируют в ответ на активный huTSLP,добавленный в тест-образцы. После инкубационного периода количественно определяют пролиферацию клеток, добавляя краситель Alamar Blue I или третированный тимидин. Пролиферацию можно также количественно определять, используя продажный набор, такой как набор для анализа клеточной пролиферации CYQUANT (Invitrogen). Дополнительные анализы huTSLP активности включают, например, количественное определение индукции роста Т-клеток из костного мозга человека с помощью TSLP, как описано в патенте США 6555520. Другой TSLP активностью является способность активировать STAT5, как описано в ссылочном материале Levin et al., J. Immunol. 162: 677-683 (1999) и РСТ патентной заявке WO 03/032898. Другие анализы включают индуцированное TSLP продуцирование CCL17/TARC при использовании первичных человеческих моноцитов и дендритных клеток, как описано в опубликованной патентной заявке США 2006/0039910 (регистрационный номер 11/205909). Клеточные анализы, применимые для количественного определения TSLP активности, описаны в приведнных ниже примерах. Эти анализы включают анализ пролиферации BAF клеток, описанный выше, а также анализ первичных клеток, описанный ниже, в котором измеряют индуцированное TSLP продуцирование остеопротегерина (OPG) при использовании первичных человеческих дендритных клеток, а также анализ с применением мононуклеарных клеток периферической крови обезьяны циномолгус, также описанный ниже. Помимо этого, TSLP активность включает in vivo активность. Эту активность можно количественно определять на мышиных моделях, например, таких как описанные Zhou et al., Nat Immunol 6(10), 10471053 (2005), и Yoo et al., J Exp Med. 202(4), 541-549 (2005). Например, показано, что антитело против мышиного TSLP понижает BALF целлюлярность и уровни IL-5 и IL-13 BALF на Ova (овальбумин)индуцированной модели астмы (Zhou et al.) Definitions. Полинуклеотидная и полипептидная последовательности показаны с использованием стандартных одно-или трхбуквенных сокращений. Если не указано иначе, аминоконцы полипептидных последовательностей расположены слева, а их карбоксиконцы - справа, а 5' конец одноцепочечных нуклеотидных последовательностей и верхней нити двухцепочечных нуклеотидных последовательностей расположены слева, а их 3' концы - справа. Конкретную полипептидную или полинуклеотидную последовательность можно также описать, объясняя, чем она отличается от эталонной последовательности. Полинуклеотидная и полипептидная последовательности вариабельных доменов конкретной лгкой и тяжлой цепи обозначаются L1 ("вариабельный домен лгкой цепи 1"), H1 ("вариабельный домен тяжлой цепи 1") и т.д. Антитела, содержащие лгкую цепь и тяжлую цепь, показаны путм объединения названия вариабельных доменов лгкой и тяжлой цепи. Например, обозначение "L4H7" показывает, что антитело содержит вариабельный домен лгкой цепи L4 и вариабельный домен тяжлой цепи Н 7. Если не указано иначе, научные и технические термины, применяемые в связи с настоящим изобретением, имеют общепринятые значения, понятные рядовым специалистам в данной области техники. Кроме того, если контекст не указывает иначе, термины, относящиеся к единичному, включают множественное, а термины, относящиеся к множественному, включают единичное. Как правило, применяемые терминология и методы, относящиеся к культуре клеток и тканей, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетике и химии и гибридизации белков и нуклеиновых кислот по данному описанию, являются общеизвестными и общеупотребительными в уровне техники. Если не указано иначе,способы и методики по настоящему изобретению обычно осуществляются в соответствии с традиционными методами, хорошо известными в уровне техники и описанными в общих и более специальных ссылочных материалах, которые цитируются и обсуждаются по ходу настоящего описания (см., например,Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, N.Y. (1990), которые вводятся в данное описание в качестве ссылки). Ферментативные реакции и методы очистки осуществляют в соответствии с инструкциями производителя, методами,обычно применяемыми в уровне техники или представленными в данном описании. Применяемая терминология, относящаяся к лабораторным способам и методикам аналитической химии, синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии по данному описанию, является хорошо известной и общеупотребительной в уровне техники. Можно применять стандартные методы химического синтеза, химического анализа, приготовления и доставки фармацевтических препаратов или лечения пациентов. Если не указано иначе, следует понимать, что следующие термины имеют нижеприведнные значения. Термин "выделенная молекула" (где молекула обозначает, например, полипептид, полинуклеотид или антитело) обозначает молекулу, которая вследствие своего происхождения или источника получения(1) не ассоциирована со связанными с ней в природе компонентами, которые сопутствуют ей в е нативном состоянии, (2) практически не содержит других молекул того же вида, (3) экспрессируется клеткой другого вида или (4) не встречается в природе. Так, молекула, синтезированная химическим синтезом или экспрессирующаяся в клеточной системе, отличной от клетки, являющейся е естественным источником, является "выделенной, изолированной" от естественно связанных компонентов. Можно сделать так, что молекула практически не будет содержать естественно связанных компонентов, выделяя е с помощью методов очистки, хорошо известных в уровне техники. Чистоту молекулы, или гомогенность,можно оценивать различными методами, хорошо известными в уровне техники. Например, чистоту образца полипептида можно оценивать, используя электрофорез в полиакриламидном геле и окрашивание геля для визуализации полипептида общеизвестными в уровне техники методами. Для некоторых целей можно применять более высокое разрешение, используя ВЭЖХ или другие методы очистки, хорошо известные в уровне техники. Термины "ингибитор TSLP" и "антагонист TSLP" применяются взаимозаменяемо. Каждый из этих терминов обозначает молекулу, которая детектируемо ингибирует передачу сигнала от TSLP. Например,клеточный анализ, описанный ниже, в примере 4, представляет собой анализ, применимый для определения ингибирования передачи сигнала от TSLP. Каждый из терминов "пептид", "полипептид" и "белок" относится к молекуле, содержащей два или более аминокислотных остатка, соединнных друг с другом пептидными связями. Эти термины охватывают, например, нативные и искусственные белки, фрагменты белков и полипептидные аналоги (такие как мутеины, варианты и слитые белки) белковой последовательности, а также белки, модифицированные по ковалентной или нековалентной связи посттрансляционно, или иным способом. Пептид, полипептид или белок может быть мономерным или полимерным. Термин "полипептидный фрагмент" по данному описанию относится к полипептиду, имеющему аминоконцевую и/или карбоксиконцевую делецию по сравнению с соответствующим полноразмерным белком. Фрагменты могут иметь в длину 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 50, 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот. Фрагменты могут также иметь в длину не больше 1000, 750, 500, 250, 200, 175, 150,125, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 14, 13, 12, 11 или 10 аминокислот. Кроме того, фрагмент может содержать на любом конце или на обоих концах одну или более дополнительных аминокислот, например последовательность аминокислот из другого естественного белка (например, Fc или домен лейциновой застжки-молнии) или искусственную аминокислотную последовательность (например, искусственную линкерную последовательность). Полипептиды по изобретению включают полипептиды, модифицированные любым способом и с любой целью, например, чтобы (1) понизить чувствительность к протеолизу, (2) понизить чувствительность к окислению, (3) изменить аффинность связывания для образования белковых комплексов, (4) изменить аффинность связывания и (5) придать или модифицировать другие физико-химические свойства Аналоги включают мутеины полипептидов. Например, можно ввести единичные или множественные аминокислотные замены (например, консервативные аминокислотные замены) в природную (естественную) последовательность (например, на участке полипептида за пределами домена (доменов), участвующего (их) в межмолекулярных контактах). "Консервативная аминокислотная замена" представляет собой замену, которая практически не меняет структурные характеристики исходной последовательности (например, заменяющая аминокислота не должна способствовать разрушению спирали, содержащейся в исходной последовательности, или разрушению вторичной структуры другого типа, которая характеризует исходное соединение или необходима для его функциональности). Примеры общепризнанных в уровне техники вторичных и третичных структур приводятся в Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W.H. Freeman and Company, New York (1984); Introduction to Protein Structure (G.(1991), каждый из этих ссылочных материалов вводится в данное описание в качестве ссылки."Вариант" полипептида представляет собой аминокислотную последовательность, в которой один или более аминокислотных остатков вводится в аминокислотную последовательность, делегируется из аминокислотной последовательности и/или заменяется на аминокислотную последовательность в относительно другой полипептидной последовательности. Варианты по изобретению включают слитые белки. Варианты антител по данному описанию включают также варианты, которые являются результатом процессинга. Такие варианты включают варианты, имеющие одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь,восемь, девять, десять или более дополнительных аминокислот на N-конце лгкой или тяжлой цепи,например, в результате малоэффективного отщепления сигнальной последовательности. Такие варианты включают также варианты, в которых недостат одной или более аминокислот на N- или С-конце лгкой или тяжлой цепи."Производное" полипептида представляет собой полипептид (например, антитело), который модифицирован химическими методами, например конъюгацией с другим химическим агентом, например полиэтиленгликолем, альбумином (например, альбумином из человеческой сыворотки), фосфорилированием и гликозилированием. Если не указано иначе, термин "антитело" включает, помимо антител, содержащих две полноразмерных тяжлых цепи и две полноразмерных лгких цепи, их производные, ва-6 022796 рианты, фрагменты и мутеины, примеры которых приводятся в данном описании."Антигенсвязывающий белок" по настоящему раскрытию обозначает белок, способный связываться с антигеном, и, необязательно, его остовной ("скаффолд") или скелетный участок, способствующий тому, что антигенсвязывающий участок принимает конформацию, которая стимулирует связывание антигенсвязывающего белка с антигеном. В одном варианте изобретения антигенсвязывающий белок по настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну область CDR. Примеры антигенсвязывающих белков включают антитела, фрагменты антител (например, антигенсвязывающий участок антитела), производные антител и аналоги антител. Антигенсвязывающий белок может содержать, например, скаффолд альтернативного белка или искусственный скаффолд (остов) с привитыми CDR или CDR-производными. Такие скаффолды (неизменные части) включают, но без ограничения, скаффолды антител, содержащие мутации, введнные, например, с целью стабилизировать трхмерную структуру антигенсвязывающего белка, а также полностью синтетические скаффолды, содержащие, например, биосовместимый полимер(см., например, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics. Volume 53. Issue 1: 121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20: 639-654). Кроме того, можно использовать пептидымиметики антител ("РАМ"), а также скаффолды на основе миметиков антител, использующих в качестве скаффолда фибронектин. Например, антигенсвязывающий белок может иметь структуру природного иммуноглобулина."Иммуноглобулин" представляет собой тетрамерную молекулу. В природном иммуноглобулине каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причм каждая пара имеет одну "лгкую" (около 25 кДа) и одну "тяжлую" цепь (около 50-70 кДа). Аминоконцевой участок каждой цепи включает вариабельную область примерно из 100-110 или более или более аминокислот, в первую очередь отвечающих за распознавание антигена. Карбоксиконцевой участок каждой цепи определяет константную область, в первую очередь отвечающую за распознавание антигена. Человеческие лгкие цепи классифицируют как каппа и лямбда лгкие цепи. Тяжлые цепи классифицируются как мю, дельта,гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. Внутри лгкой и тяжлой цепей вариабельные и константные области соединены областью "J" примерно из 12 или более аминокислот, причм тяжлая цепь включает также область "D" примерно из 10 или более аминокислот (см., в целом, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y.(1989 (вводится в данное описание во всей полноте для всех целей). Вариабельные области каждой пары лгкая/тяжлая цепь образуют сайт связывания антитела, так что каждый иммуноглобулин имеет два сайта связывания. Цепи природных иммуноглобулинов имеют одну и ту же общую структуру относительно консервативных каркасных областей (FR), соединнных тремя гипервариабельными областями, также называемыми CDR (области определения комплементарности). От N-конца до С-конца как лгкая, так и тяжлая цепи содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Отнесение аминокислот к каждому домену делают в соответствии с определениями Kabat et al. в Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991. Интактные антитела включают поликлональные, моноклональные, химерные, гуманизированные или полностью человеческие, имеющие полноразмерные тяжлые и лгкие цепи. Если не указано иначе, термин "антитело" относится к интактному иммуноглобулину или к его антигенсвязывающему участку, который конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание. Антигенсвязывающие участки можно получать методами рекомбинантной ДНК или ферментативным или химическим расщеплением интактных антител. Антигенсвязывающие участки включают Fab,Fab', F(ab')2, Fd, Fv и доменные антитела (dAbs), и фрагменты гипервариабельных областей (CDR), одноцепочечные антитела (scFv), диатела (diabodies), триатела (triabodies), тетратела (tetrabodies) и полипептиды, которые содержат, по меньшей мере, участок иммуноглобулина, достаточный для того, чтобы сообщить полипептиду специфическое связывание с антигеном. Фрагмент Fab представляет собой одновалентный фрагмент, имеющий домены VL, VH, CL и CH1; фрагмент F(ab')2 представляет собой двухвалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанные в шарнирной области дисульфидным мостиком; фрагмент Fd имеет домены VH и CH1; фрагмент Fv имеет домены VL и VH одного плеча антитела; и фрагмент dAb имеет домен VH, домен VL или антигенсвязывающий фрагмент домена VH или домена VL (патенты США 6846634, 6696245, опубликованные заявки США 05/0202512, 04/0202995, 04/0038291, 04/0009507, 03/0039958, Ward et al., Nature 341: 544546, 1989). Одноцепочечное антитело (scFv) представляет собой антитело, в котором область VL и область VH соединены линкером (например, синтетической последовательностью аминокислотных остатков) с образованием непрерывной белковой цепи, причм линкер является достаточно длинным для того, чтобы белковая цепь могла "загнуться" обратно на себя и образовать одновалентный антигенсвязывающий сайт(см., например, Bird et al., 1988, Science 242: 423-26 и Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-83). Диатела и двухвалентные (бивалентные) антитела содержат две полипептидные цепи, где каждая полипептидная цепь содержит домены VH и VL, соединнные линкером, слишком коротким для того,чтобы было возможно объединение двух доменов одной и той же цепи, что делает возможным конъюга-7 022796 цию каждого домена с комплементарным доменом на другой полипептидной цепи (см., например,Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-48, и Poljak et al., 1994, Structure 2: 1121-23). Если две полипептидные цепи диатела идентичны, то диатело, полученное в результате такой конъюгации,будет иметь два идентичных антигенсвязывающих сайта. Полипептидные цепи, имеющие отличающиеся последовательности, можно использовать для получения диатела с двумя различными антигенсвязывающими сайтами. Аналогично, триатела и тетратела представляют собой антитела, содержащие три и четыре полипептидных цепи соответственно и образующие соответственно три или четыре антигенсвязывающих сайта, которые могут быть одинаковыми или различными. Гипервариабельные области (CDR) и каркасные области (FR) данного антитела можно идентифицировать, используя систему, описанную Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5thEd., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991). С помощью ковалентного или нековалентного связывания в молекулу можно ввести одну или более областей CDR,чтобы сделать е антигенсвязывающим белком. Антигенсвязывающий белок может включать область(и)CDR как часть более длинной полипептидной цепи, может ковалентно связывать область(и) CDR с другой полипептидной цепью или может включать область(и) CDR за счт нековалентного связывания. Области CDR способствуют специфическому связыванию антигенсвязывающего белка с конкретным представляющим интерес антигеном. Антигенсвязывающий белок может иметь один или более сайтов связывания. Ели имеется более одного сайта связывания, сайты связывания могут быть идентичными друг другу или могут быть различными. Например, естественный человеческий белок, как правило, имеет два идентичных сайта связывания, тогда как "биспецифическое" или "бифункциональное" антитело имеет два различных сайта связывания. Термин "человеческое антитело" включает все антитела, которые имеют одну или более вариабельных и константных областей из последовательностей человеческих иммуноглобулинов. В одном варианте изобретения все вариабельные и константные домены образованы из человеческих иммуноглобулиновых последовательностей (полностью человеческое антитело). Эти антитела можно получать различными способами, примеры которых представлены ниже, включая иммунизацию представляющим интерес антигеном мыши, которое генетически модифицировано с целью экспрессировать антитела, образованные с применением генов, кодирующих человеческую тяжелую и/или лгкую цепь. Гуманизированное антитело имеет последовательность, которая отличается от последовательности антитела, образованного из отличного от человеческого вида с помощью одной или более аминокислотных замен, делеций и/или добавлений, так что при введении человеку гуманизированное антитело с меньшей вероятностью вызывает иммунный ответ и/или вызывает менее серьзный иммунный ответ по сравнению с антителом вида, отличного человека. В одном варианте изобретения осуществляют мутацию некоторых аминокислот в каркасе и константных доменах тяжлой и/или лгкой цепей антитела вида, отличного от человека, получая гуманизированное антитело. В другом варианте изобретения константный(е) домен(ы) сливают с вариабельным(и) доменом(ами) нечеловеческого вида В другом варианте изобретения один или более аминокислотных остатков в одной или более CDR последовательностей нечеловеческого антитела изменяют, чтобы понизить вероятную иммуногенность нечеловеческого антитела при введении человеку, причм изменнные аминокислотные остатки либо не являются очень важными для иммуноспецифического связывания антитела с его антигеном, либо сделанные изменения в аминокислотной последовательности являются изменениями консервативных участков, так что связывание гуманизированного антитела с антигеном не становится заметно хуже, чем связывание нечеловеческого антитела с антигеном. Примеры того, как получать гуманизированные антитела, можно найти в патентах США 6054297, 5886152 и 5877293. Термин "химерное антитело" относится к антителу, которое содержит одну или более областей из одного антитела и одну или более областей из одного или более других антител. В одном варианте изобретения одна или более областей CDR происходят из человеческого антитела против TSLP. В другом варианте изобретения все области CDR происходят из человеческого антитела против TSLP. В другом варианте изобретения CDR из более чем одного человеческого антитела против TSLP смешивают и сочетают в химерном антителе. Например, химерное антитело может содержать CDR1 лгкой цепи первого человеческого антитела против TSLP, CDR2 и CDR3 лгкой цепи второго человеческого антитела противTSLP, и области CDR тяжлой цепи из третьего антитела против TSLP. Далее, каркасные области могут быть из тех же самых антител против TSLP, из одного или более различных антител, таких как человеческое антитело, или из гуманизированного антитела. В одном примере химерного антитела часть тяжлой и/или лгкой цепи идентична, гомологична антителу конкретного вида, или образована из антитела конкретного вида, или антитела, относящегося к конкретному классу или подклассу антител, тогда как остальная часть цепи (цепей) идентичны(ы), гомологична(ы) антителу конкретного вида или образована из антитела (антител) другого вида, или антитела (антител), относящегося (относящихся) к другому классу или подклассу антител. Также включаются фрагменты таких антител, которые проявляют заданную биологическую активность (т.е. способность специфически связывать человеческий TSLP рецептор). Специалисты в данной области техники могут легко получать фрагменты или аналоги антител, сле-8 022796 дуя указаниям в данном описании и применяя методы, хорошо известные в уровне техники. Предпочтительные амино- и карбоксиконцы фрагментов или аналогов находятся близ границ функциональных доменов. Структурные и функциональные домены можно идентифицировать, сравнивая данные для нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности со сведениями о соответствующей последовательности в базах данных. Для идентификации мотивов в последовательности или предсказанных белковых конформационных доменов, которые встречаются в других белках с известной структурой и/или функцией, можно использовать методы компьютерного сравнения. Известны методы идентификации белковых последовательностей, которые укладываются в известную трехмерную структуру (см., например, Bowie et al., 1991, Science 253: 164)."CDR-привитое антитело" представляет собой антитело, содержащее одну или более областей CDR из антитела конкретного вида или изотипа и каркас другого антитела того же самого или другого вида или изотипа."Мультиспецифическое антитело" обозначает антитело, которое распознат более одного эпитопа на одном или более антигенов. Подклассом этого типа антитела является "биспецифическое антитело",которое распознат два различных эпитопа на одном и том же или на разных антигенах. Антигенсвязывающий белок, включающий антитело, "специфически связывается" с антигеном, таким как TSLP, если он связывается с антигеном с высокой аффинностью связывания, определяемой величиной Kd (или соответствующей Kb по определению ниже) 10-7 M или менее."Антигенсвязывающий домен", "антигенсвязывающая область" или "антигенсвязывающий сайт" представляет собой участок антигенсвязывающего белка, который содержит аминокислотные остатки(или другие фрагменты), которые взаимодействуют с антигеном и вносят вклад в специфичность антигенсвязывающего белка и аффинность его к антигену. В случае антитела, которое специфически связывается со своим антигеном, этот участок включает по меньшей мере часть по меньшей мере одного из его CDR доменов."Процент идентичности" двух полинуклеотидных или двух полипептидных последовательностей определяют сравнением последовательностей с помощью компьютерной программы GAP (часть программного обеспечения GCG Wisconsin Package версия 10.3 (Accelrys, San Diego, CA), используя е параметры по умолчанию. Термины "полинуклеотид", "олигонуклеотид" и "нуклеиновая кислота" применяются взаимозаменяемо по всему описанию и включают молекулы ДНК (например, кДНК или геномную ДНК), молекулы РНК (например, мРНК), аналоги ДНК или РНК, полученные с применением аналогов нуклеотидов (например, пептиднуклеиновых кислот и неприродных аналогов нуклеотидов) и их гибриды. Нуклеотидные молекулы могут быть однонитевыми или двухнитевыми. В одном варианте изобретения нуклеотидные молекулы по изобретению содержат непрерывную открытую рамку считывания, кодирующую антитело или его фрагмент, производное, мутеин или вариант по изобретению. Два однонитевых (одноцепочечных) полинуклеотида являются "комплементом" друг друга, если их последовательности можно выравнивать в антипараллельной ориентации таким образом, что каждый нуклеотид в одном полинуклеотиде находится напротив своего комплементарного нуклеотида в другом полинуклеотиде, при отсутствии гэпов и неспаренных нуклеотидов на 5' и 3' конце каждой последовательности. Полинуклеотид является "комплементарным" другому полинуклеотиду, если два полинуклеотида могут гибридизоваться в умеренно жстких (строгих) условиях. Таким образом, полинуклеотид может быть комплементарным другому полинуклеотиду, не будучи его комплементом."Вектор" представляет собой нуклеиновую кислоту, которую можно использовать для введения в клетку связанной с ней другой нуклеиновой кислоты. Одним типом вектора является "плазмида", этот термин относится к линейной или кольцевой двухнитевой молекуле ДНК, к которой могут быть лигированы дополнительные нуклеотидные сегменты. Другим типом вектора является вирусный вектор (например, ретровирусы, дефектные по репликации, аденовирусы и адено-ассоциированные вирусы), отличающиеся тем, что дополнительные сегменты ДНК могут вводиться в вирусный геном. Некоторые векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они вводятся (например, бактериальные векторы, содержащие бактериальный ориджин репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомальный векторы млекопитающих) интегрируются в геном клетки-хозяина при введении их в клетку-хозяина и в силу этого реплицируются наряду с геномом."Экспрессирующий (экспрессионный) вектор", "экспрессионный вектор", вектор экспрессии представляет собой тип вектора, который может управлять экспрессией выбранного полинуклеотида. Нуклеотидная последовательность "функционально связана" с регуляторной последовательностью,если регуляторная последовательность влияет на экспрессию (например, на уровень, регулирование по времени или локализацию экспрессии) нуклеотидной последовательности. "Регуляторная последовательность" обозначает нуклеиновую кислоту, которая влияет на экспрессию (например, на уровень, регулирование по времени или локализацию экспрессии) нуклеиновой кислоты, с которой она функционально связана. Регуляторная последовательность может, например, проявлять сво действие на регулируемую нуклеиновую кислоту либо непосредственно, либо действуя через одну или более других молекул вой кислотой). Примеры регуляторных последовательностей включают промоторы, энхансеры и другие элементы, контролирующие экспрессию (например, сигналы полиаденилирования). Другие примеры регуляторных последовательностей описаны, например, в Goeddel, 1990, Gene Expression Technology:Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA and Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23: 3605-06. "Клетка-хозяин" представляет собой клетку, которую можно использовать для экспрессии нуклеиновой кислоты, например нуклеиновой кислоты по изобретению. Клетка-хозяин может являться клеткой прокариот, например Е. coli, или она может являться клеткой эукариот (например, дрожжей или других грибов), растительной клеткой (например, растительной клеткой табака или томата), животной клеткой (например, человеческой клеткой, клеткой обезьяны, клеткой хомяка, клеткой крысы или мыши или клеткой насекомого) или гибридомой. Типичные клетки-хозяева включают линии клеток яичника китайского хомячка (СНО) или их производные, в том числе СНО линию DXB-11, дефицитную по DHFRDXB-11 СНО клеток и AM-1/D клетки (описанные в патенте США 6210924). Другие СНО клеточные линии включают СНО-K1 (АТСС CCL-61), EM9 (АТСС CRL-1861) и TJV20 (АТСС CRL-1862). Примеры других клеток-хозяев включают линию обезьяньих почечных клеток COS-7 (АТСС CRL 1651) (см.Gluzman et al., 1981, Cell 23: 175), L клетки, С 127 клетки, 3 Т 3 клетки (АТСС CCL 163), HeLa клетки, линии клеток BHK (АТСС CRL 10), линию клеток CV1/EBNA, образованную из линии почечных клетокCV1 африканской зелной мартышки (АТСС CCL 70) (см. McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821), человеческие эмбриональные почечные клетки, такие как 293, 293 EBNA или MSR 293, человеческие эпидермальные клетки А 431, человеческие клетки Colo205, другие трансформированные линии клеток приматов, нормальные диплоидные клетки, клеточные штаммы, полученные из in vitro культуры первичной ткани, первичных эксплантатов, клетки HL-60, U937, HaK или Jurkat. Обычно клетка-хозяин представляет собой культивированную клетку, которая может быть трансформирована или трансфецирована кодирующей полипептид нуклеиновой кислотой, которую можно затем экспрессировать в клетке-хозяине. Выражение "рекомбинантная клетка-хозяин" можно употреблять для обозначения клетки-хозяина, которая трансформирована или трансфецирована нуклеиновой кислотой, подлежащей экспрессии. Клеткахозяин также может представлять собой клетку, которая содержит нуклеиновую кислоту, но не экспрессирует е на заданном уровне, если регуляторная последовательность не введена в клетку-хозяина таким образом, чтобы она стала функционально связанной с нуклеиновой кислотой. Понятно, что термин клетка-хозяин относится не только к конкретной испытуемой клетке, но к потомству или потенциальному потомству такой клетки. Так как в последующих поколениях могут происходить определнные модификации, например, вследствие мутации или воздействия окружающей среды, на самом деле такое потомство может не быть идентичным родительской клетке, но вс равно охватывается термином по данному описанию. Антигенсвязывающие белки В одном аспекте настоящее раскрытие включает антигенсвязывающие белки, такие как антитела, фрагменты антител, производные антител, мутеины антител и варианты антител, которые связываются с человеческим TSLP. Антигенсвязывающие в соответствии с настоящим раскрытием включают антигенсвязывающие белки, которые связываются с человеческим TSLP и тем самым снижают активность TSLP. Например, антигенсвязывающие белки могут препятствовать связыванию TSLP со своим рецептором и тем самым снижают активность TSLP. В одном варианте настоящее изобретение включает антигенсвязывающий белок, который содержит одну или более CDR последовательностей, которые отличаются от CDR последовательности, показанной на фиг. 1A-1F или фиг. 2A-2F не более чем на 5, 4, 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков. В другом варианте изобретения по меньшей мере одна из CDR3 последовательностей представляет собой последовательность, представленную на фиг. 1 А-1F или фиг. 2A-2F. В другом варианте изобретения последовательность лгкой цепи области CDR3 антигенсвязывающего белка представляет собой последовательность лгкой цепи от A1 до А 27, а последовательность тяжлой цепи области CDR3 антигенсвязывающего белка представляет собой последовательность тяжлой цепи от A1 до А 27. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит 1, 2, 3, 4 или 5 CDR последовательностей, каждая из которых, независимо, отличается на 5, 4, 3, 2, 1 или 0 одиночных аминокислотных добавлений, замен и/или делеций от CDR последовательности А 1-А 27. Лгкая цепь области CDR типичных антигенсвязывающих белков А 1-А 27 и тяжлая цепь CDR типичных антигенсвязывающих белков А 1-А 27 показаны на фиг. 1 А-1F и на фиг. 2 А-2F соответственно. Также показаны полинуклеотидные последовательности, которые кодируют аминокислотные последовательности областейCDR. Кроме того, ниже приводятся консенсусные последовательности CDR последовательностей.CDR вариабельной области лгкой цепи Группа 1 а Х 21 обозначает остаток G (глицина) или остаток R (аргинина); Х 22 обозначает остаток S (серина) или остаток Т (треонина); Х 23 обозначает остаток А (аланина) или остаток D (аспарагиновой кислоты). В табл. 2 (см. ниже) приводятся нуклеотидные (ДНК) последовательности, кодирующие вариабельные домены тяжлой цепи (Н) и вариабельные домены лгкой цепи (L), аминокислотные последовательности вариабельных доменов тяжлой и лгкой цепи для типичных TSLP-антигенсвязывающих белков А 1-А 27 соответственно. Области CDR 1, 2 и 3 для каждого вариабельного домена даются последовательно от начала к концу каждой последовательности. Каркасные (Fr) области подчркнуты. Каркасные участки 1, 2, 3 и 4 для каждого вариабельного домена даются последовательно от начала к концу каждой последовательности (например, первый подчркнутый участок последовательности представляет собой Fr1, второй представляет собой Fr2, третий представляет собой Fr3 и последний представляет собой Fr4 в каждой последовательности). Таблица 2 Конкретные варианты антигенсвязывающих белков по настоящему изобретению содержат одну или более аминокислотных последовательностей, идентичных аминокислотным последовательностям одной или более областей CDR, и, помимо этого, могут содержать одну или более областей FR, проиллюстрированных выше. В одном варианте изобретения антигенсвязывающий белок содержит последовательность CDR1 лгкой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок содержит последовательность CDR2 лгкой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок содержит последовательность CDR3 лгкой цепи,проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок содержит последовательность CDR1 тяжлой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок содержит последовательность CDR2 тяжлой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок содержит последовательность CDR3 тяжлой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR1 лгкой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR2 лгкой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR3 лгкой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR4 лгкой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR1 тяжлой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR2 тяжелой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR3 тяжлой цепи, проиллюстрированную выше. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок дополнительно содержит последовательность FR4 тяжлой цепи, проиллюстрированную выше. В одном варианте настоящее раскрытие включает антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен лгкой цепи, содержащий последовательность аминокислот, отличающуюся от последовательности вариабельного домена лгкой цепи, выбранной из группы, состоящей из последовательностей L1-L27, только в 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0 остатках, причм каждое такое отличие последовательности, независимо, представляет собой либо делецию, инсерцию, либо добавление аминокислотного остатка. В другом варианте изобретения вариабельный домен лгкой цепи содержит последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентична последовательности вариабельного домена лгкой цепи, выбранного из группы, состоящей из L1L27. В другом варианте изобретения вариабельный домен лгкой цепи содержит последовательность аминокислот, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, по меньшей мере на 70, 75, 80,85, 90, 95, 97 или 99% идентичной нуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельный домен лгкой цепи, выбранный из группы, состоящей из L1-L27. В другом варианте изобретения вариабельный домен лгкой цепи содержит последовательность аминокислот, кодированную полинуклеотидом, который гибридизуется в умеренно жстких условиях с комплементом полинуклеотида, кодирующим вариабельный домен лгкой цепи, выбранный из группы, состоящей из L1-L27. В другом варианте изобретения вариабельный домен лгкой цепи содержит последовательность аминокислот, кодированную полинуклеотидом, который гибридизуется в очень жстких условиях с комплементом полинуклеотида, кодирующего вариабельный домен тяжлой цепи, выбранный из группы, состоящей из L1-L27. В другом варианте настоящее раскрытие включает антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен тяжлой цепи, содержащий последовательность аминокислот, отличающуюся от последовательности вариабельного домена тяжлой цепи, выбранной из группы, состоящей из последовательностей Н 1-Н 27, только в 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0 остатке (остатках), причм каждое такое отличие последовательности, независимо, представляет собой либо делецию, инсерцию, либо добавление аминокислотного остатка. В другом варианте изобретения вариабельный домен тяжлой цепи содержит последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентична последовательности вариабельного домена тяжлой цепи, выбранного из группы, состоящей из H1-H27. В другом варианте изобретения вариабельный домен тяжлой цепи содержит последовательность аминокислот, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентичной нуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельный домен тяжлой цепи, выбранный из группы, состоящей из H1-H27. В другом варианте изобретения вариабельный домен тяжлой цепи содержит последовательность аминокислот, кодированную полинуклеотидом, который гибридизуется в умеренно жстких условиях с комплементом полинуклеотида, кодирующим вариабельный домен тяжлой цепи, выбранный из группы, состоящей из Н 1-Н 27. В другом варианте изобретения вариабельный домен тяжлой цепи содержит последовательность аминокислот, кодированную полинуклеотидом, который гибридизуется в очень жстких условиях с комплементом полинуклеотида, кодирующего вариабельный домен тяжлой цепи, выбранный из группы, состоящей из Н 1-Н 27. В некоторых вариантах изобретения, приведнных выше, в табл. 2, две лгкие цепи, ассоциирую- 21022796 щиеся с единственной тяжлой цепью, идентифицированы, например, как L-12.1, L-12.2 и т.д. Каждая из этих альтернативных лгких цепей связана с единственной тяжлой цепью. В этих вариантах изобретения комбинацию лгкой цепи и тяжлой цепи можно проанализировать как описано ниже и можно выбрать комбинацию лгкой цепи и тяжлой цепи, которая обеспечивает более высокую TSLP нейтрализующую активность. Дополнительные варианты изобретения включают антигенсвязывающие белки, содержащие комбинации L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6, L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12, L13H13,L14H14, L15H15, L16H16, L17H17, L18H18, L19H19, L20H20, L21H21, L22H22, L23H23, L24H24,L25H25, L26H26 и L27H27. Помимо этого антигенсвязывающие белки (например, антитела, фрагменты антител и производные антител) по изобретению могут содержать любую константную область, известную в уровне техники. Константная область лгкой цепи может представлять собой, например, константную область лгкой цепи каппа-или лямбда-типа, например, константную область человеческой лгкой цепи каппа-или лямбда-типа. Константная область тяжлой цепи может представлять собой, например, константные области тяжлой цепи альфа-, дельта, эпсилон-, гамма-или мю-типа, например, константную область человеческой тяжлой цепи альфа-, дельта, эпсилон-, гамма-или мю-типа. В одном варианте изобретения константная область представляет собой фрагмент, производное, вариант или мутеин естественной константной области. В одном варианте изобретения антигенсвязывающие белки представляют собой IgG, такие какIgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Существуют методы получения антитела отличного подкласса или изотипа из антитела, представляющего интерес, т.е. переключения подкласса. Так, например, IgG антитела можно получать из IgM антитела и наоборот. Такие методы позволяют получать новые антитела, которые обладают антигенсвязывающими свойствами данного антитела (родительского, исходного антитела), но проявляют также биологические свойства, ассоциированные с изотипом или подклассом антитела, отличным от изотипа или подкласса исходного антитела. Можно применять методы рекомбинантной ДНК. В таких методах можно применять клонированную ДНК, кодирующую конкретное полипептиды антитела, например,ДНК, кодирующую константный домен антитела заданного изотипа (см. также Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178: 303-16). В одном варианте изобретения антигенсвязывающий белок по изобретению содержит константный домен тяжлой цепи IgG1 или фрагмент домена тяжлой цепи IgG1. В одном варианте изобретения антигенсвязывающий белок по изобретению дополнительно содержит константные домены лгкой цепи каппа или лямбда или их фрагменты. Константные области лгкой цепи и кодирующие их полинуклеотиды представлены ниже в табл. 3. В другом варианте изобретения антигенсвязывающий белок по изобретению дополнительно содержит константный домен тяжлой цепи или его фрагмент, такой как константная область тяжлой цепи IgG2, показанная ниже, в табл. 3. Нуклеиновая кислота (ДНК), кодирующая константный домен тяжлой цепи и константный домен лгкой цепи, и аминокислотные последовательности доменов тяжлой и лгкой цепи приводятся ниже. Вариабельные домены лгкой цепи лямбда можно связывать (конъюгировать) с константными доменами лгкой цепи каппа, а вариабельные домены лгкой цепи каппа можно связывать (конъюгировать) с константными доменами лгкой цепи каппа. Таблица 3. ДНК, кодирующая константный домен тяжлой цепи IgG2 (SEQ ID NO:364) Антигенсвязывающие белки по настоящему изобретению включают антигенсвязывающие белки,содержащие, например, комбинации вариабельных доменов L1H1, L2H2, L3H3, L4H4, L5H5, L6H6,L7H7, L8H8, L9H9, L10H10, L11H11, L12H12, L13.1H13, L13.2H13, L14.1H14, L14.2H14, L15.1H15,L15.2H15, L16.1H16, L16.2H16, L17H17, L18.1H18, L18.2H18, L19.1H19, L19.2H19, L20.1H20, L20.2H20,L21H21, L22H22, L23H23, L24H24, L25H25, L26H26 и L27H27, имеющие заданный изотип (например,IgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgE и IgD), а также их фрагменты Fab или F(ab')2. Кроме того, если требуется IgG4, может потребоваться ввести точковую мутацию в шарнирную область, как описано в Bloomet al., 1997, Protein Science 6: 407 (вводится в данное описание в качестве ссылки), чтобы уменьшить тенденцию к образованию внутри-Н-цепных дисульфидных связей, которые могут привести к гетерогенности IgG4 антител. Антитела и фрагменты антител Термин "антитело" по данному описанию относится к интактному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, описанному в разделе определения. Антитело может представлять собой молекулу полного антитела (включая поликлональный, моноклональный, химерный, гуманизированный или человеческий варианты, имеющие полноразмерные тяжлую и/или лгкую цепи) или его антигенсвязывающий фрагмент. Фрагменты антитела включают фрагменты F(ab')2, Fab, Fab', Fv, Fc и Fd и могут быть включены в однодоменные антитела, одновалентные антитела, одноцепочечные антитела, максиантитела(максибоди), миниантитела, интрабоди, диатела (диабоди), триатела (триабоди), тетратела (тетрабоди), vNAR и бис-scFv (см., например, Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136). Полипептиды антител раскрываются также в патенте США 6703199, включая моноантитела (monobodies)(монободи) полипептидов фибронектина. Другие полипептиды антител раскрываются в опубликованной патентной заявке США 2005/0238646, они представляют собой одноцепочечные полипептиды. Одновалентные (моновалентные) фрагменты антител раскрываются в опубликованной патентной заявке США 20050227324. Антигенсвязывающие фрагменты антитела можно получать, например, протеолитическим гидролизом антитела, например расщеплением полных антител с помощью пепсина или папаина обычными методами. Например, фрагменты антитела можно получать ферментативным расщеплением антител пепсином с образованием 5S фрагмента, называемого F(ab')2. Этот фрагмент можно далее расщеплять агентом,восстанавливающим тиольную группу, с образованием одновалентных фрагментов 3.5S Fab'. Необязательно, реакцию расщепления можно осуществлять, используя группу, блокирующую сульфгидрильные группы, образующиеся при расщеплении дисульфидной связи. Альтернативный вариант - ферментативное расщепление папаином дат непосредственно два моновалентных (одновалентных) фрагмента Fab и фрагмент Fc. Эти методы описаны, например, в Goldenberg, патент США 4331647, Nisonoff et al., Arch.al., eds), John WileySons, New York (2003), с. 2.8.1-2.8.10 и 2.10A.1-2.10A.5. Могут также применяться другие методы расщепления антител, такие как разделение тяжлых цепей с образованием одновалентных фрагментов лгкой-тяжлой цепей (Fd), дальнейшее расщепление фрагментов, или другие ферментативные, химические или генетические методы, до тех пор, пока фрагменты связываются с антигеном,который узнатся интактным антителом. Фрагмент антитела может также быть любым синтетическим или генно-инженерным белком. На- 23022796 пример, фрагменты антитела включают выделенные фрагменты, состоящие из вариабельной области лгкой цепи, фрагментов "Fv", состоящих из вариабельных областей тяжлой и лгкой цепи, рекомбинантных одноцепочечных полипептидных молекул, в которых вариабельные области лгкой и тяжлой цепи связаны пептидным линкером (scFv белки). Другой формой фрагмента антитела является пептид, содержащий одну или более гипервариабельных областей (CDRs) антитела CDRs (также называемые "минимальными распознающими (антиген) элементами" или "гипервариабельной областью"), можно получать, конструируя полипептиды, которые кодируют представляющую интерес область CDR. Такие полипептиды получают, например, применяя полимеразную цепную реакцию для синтеза вариабельной области с использованием помощью мРНК антителопродуцирующих клеток в качестве матрицы (см., например, Larrick et al., Methods: A CompanionMonoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), p. 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995. Так, в одном варианте связывающий агент содержит по меньшей мере одну область CDR по данному описанию. Связывающий агент может содержать по меньшей мере две, три, четыре, пять или шесть областей CDR по данному описанию. Связывающий агент может далее содержать по меньшей мере один вариабельный домен антитела по данному описанию. Участок вариабельного домена может быть любого размера или любого аминокислотного состава и обычно содержит по меньшей мере одну CDR последовательность, отвечающую за связывание с TSLP, например CDR1, CDR2, CDR3 тяжлой цепи и/или области CDR лгкой цепи, конкретно представленные в данном описании и прилегающие к или находящиеся в рамке считывания с одной или более каркасных последовательностей. В общих чертах участок вариабельного (V) домена может иметь любое подходящее расположение вариабельных доменов тяжлой (VH) и/или лгкой (VL) цепи иммуноглобулина. Так, например, V доменный участок может быть мономерным и может представлять собой VH или VL домен, способный независимо связывать человеческийTSLP с аффинностью, по меньшей мере, равной 110-7 М или ниже по данному описанию. Или же область V домена (V-доменный участок) может быть димерной и содержать димеры VH-VH, VH-VL или VLVL. Димер V области содержит по меньшей мере одну VH и по меньшей мере одну VL цепь, которые могут быть связаны нековалентной связью (далее в данном описании Fv). При желании цепи можно связывать ковалентной связью либо непосредственно, например дисульфидной связью между двумя вариабельными доменами, либо с помощью линкера, например пептидного линкера, с образованием одноцепочечной Fv (scFv). Область вариабельного домена может представлять собой любой естественный вариабельный домен или его сконструированный (генно-инженерный) вариант. Под сконструированным (генноинженерным) вариантом понимают область вариабельного домена, созданную методами рекомбинантной ДНК. Такие сконструированные (созданные) варианты включают варианты, созданные, например, из вариабельного домена специфического антитела с помощью инсерций, делеций или замен в аминокислотных последовательностях специфического антитела. Конкретные примеры включают созданные (генно-инженерные) области вариабельных доменов, содержащие по меньшей мере одну область CDR и,необязательно, одну или более аминокислот из каркасной области первого антитела, а остальную часть области вариабельного домена из второго антитела Область вариабельного домена может быть ковалентно связана по С-концевой аминокислоте по меньшей мере с одним другим доменом антитела или его фрагментом. Так, например, VH домен в области вариабельного домена может быть связан с иммуноглобулиновым СН 1 доменом или его фрагментом. Аналогично, VL домен может быть связан с CK доменом или с его фрагментом. Таким образом, например, антитело может представлять собой Fab фрагмент, в котором антигенсвязывающий домен содержит ассоциированные VH и VL домены, ковалентно связанные по С-концам с СН 1 и CK доменом соответственно. СН 1 домен можно удлинять с помощью дополнительных аминокислот, например, чтобы включить шарнирную область или участок шарнирной области, найденной в Fab' фрагменте, или включить другие домены, такие как домены СН 2 и СН 3 антитела. Производные антигенсвязываюших белков Нуклеотидные последовательности, показанные на фиг. 1A-1F, фиг. 2A-2F и в табл. 2, см. выше,можно изменять, например, случайным мутагенезом или сайт-направленным мутагенезом (например,олигонуклеотид-направленным сайт-специфическим мутагенезом), чтобы получить изменнный полинуклеотид, содержащий одну или более конкретных нуклеотидных замен, делеций или инсерций по сравнению с немутантным полинуклеотидом. Примеры методов осуществления таких изменений описаны в Walder et al., 1986, Gene 42: 133; Bauer et al., 1985, Gene 37: 73; Craik, BioTechniques, January 1985,12-19; Smith et al., 1981, Genetic Engineering: Principles and Methods, Plenum Press; и патентах США 4518584 и 4737462. Эти и другие методы можно, например, использовать для получения производныхTSLP-антигенсвязывающих белков, обладающих нужным свойством, например повышенной аффинностью, авидностью или специфичностью к TSLP, повышенной активностью или стабильностью in vivo или in vitro, или пониженными in vivo побочными эффектами по сравнению с недериватизированными антигенсвязывающими белками. Другие производные антигенсвязывающих белков против TSLP, включающие антитела в объеме настоящего изобретения, включают ковалентные или агрегированные конъюгаты антител против TSLP,или их фрагментов, с другими белками или полипептидами, полученные, например, экспрессией рекомбинантных слитых белков, содержащих гетерологичные полипептиды, связанные с N-концом или Сконцом полипептида антитела против TSLP. Например, конъюгированный пептид может быть гетерологичным сигнальным (или лидерным) полипептидом, например лидерной последовательностью дрожжевого альфа-фактора, или пептидом, таким как эпитопная метка. Содержащие антигенсвязывающий белок слитые белки могут содержать пептиды, добавленные для того, чтобы содействовать очистке или идентификации антигенсвязывающего белка (например, поли-His). Антигенсвязывающий белок может также связываться с FLAG пептидом, как описано в Норр et al., Bio/Technology 6: 1204, 1988, и патенте США 5011912. FLAG пептид является высокоантигенным и вводит эпитоп, обратимо связанный со специфическим моноклональным антителом (mAb), позволяющий быстро анализировать и легко очищать экспрессированный рекомбинантный белок. Реагенты, пригодные для получения слитых белков, в которыхFLAG пептид слит с данным полипептидом, являются продажными (Sigma, St. Louis, МО). Олигомеры, которые содержат один или более антигенсвязывающих белков, можно применять в качестве антагонистов TSLP. Олигомеры могут быть в форме димеров, триммеров или высших олигомеров, связанных ковалентной или нековалентной связью. Рассматривается применение олигомеров, содержащих два или более антигенсвязывающих белка, причм один из примеров является гомодимером. Другие олигомеры включают гетеродимеры, гомотримеры, гетеротримеры, гомотетрамеры, гетеротетрамеры и т.д. Один вариант изобретения относится к олигомерам, содержащим несколько антигенсвязывающих белков, связанных за счт ковалентных или нековалентных взаимодействий между пептидными фрагментами, слитыми с антигенсвязывающими белками. Такие пептиды могут представлять собой пептидные линкеры (спейсеры), или пептиды, обладающие свойством промотировать олигомеризацию. Среди пептидов, которые могут промотировать олигомеризацию связанных с ними антигенсвязывающих белков, лейциновые застжки-молнии и некоторые полипептиды, образованные из антител. В конкретных вариантах изобретения олигомеры содержат два-четыре антигенсвязывающих белка,способных связываться с TSLP. Антигенсвязывающие белки олигомера могут быть в любой форме, такой как любая из описанных выше форм, например, в виде вариантов или фрагментов. В одном варианте изобретения олигомер получают, используя полипептиды, полученные из иммуноглобулинов. Получение слитых белков, содержащих некоторые гетерологичные полипептиды, слитые с различными участками полипептидов из антител (включающие Fc домен), описаны (см., например,Ashkenazi et al., 1991, PNAS USA 88: 10535; Byrn et al., 1990, Nature 344: 677; и Hollenbaugh et al., 1992"Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, с. 10.19.110.19.11). Один вариант изобретения относится к димеру, содержащему два слитых белка, полученных слиянием фрагмента антитела против TSLP с Fc областью антитела. Димер можно получать, например,вставляя генное слияние, кодирующее слитый белок, в подходящий вектор экспрессии, экспрессирующий генное слияние в клетках-хозяевах, трансформированных рекомбинантным экспрессирующим вектором, и содействующее объединению (сборке) экспрессированного слитого белка подобно молекулам антитела, вследствие чего между Fc фрагментами возникают межцепные дисульфидные связи, образуется димер. Термин "Fc полипептид" по данному описанию включает нативные и мутантные формы полипептидов, образованные из Fc области антитела. Также включаются усечнные (процессированные) формы таких полипептидов, содержащие шарнирную область, которая промотирует (индуцирует) димеризацию. Преимущество слитых белков, содержащих Fc фрагменты (и образованные из них олигомеры), заключается в том, что их легко очищать аффинной хроматографией на колонках с белком А или белком G. Одним применимым Fc полипептидом является описанный в опубликованной заявке РСТ WO 93/10151 (вводимой ссылкой в данное описание) одноцепочечный полипептид протяжнностью от Nконцевой шарнирной области до нативного С-конца Fc области человеческого IgG1 антитела. Другой подходящий Fc полипептид представляет собой Fc мутеин, описанный в патенте США 5457035 и в Baumet al., 1994, EMBO J. 13: 3992-4001. Аминокислотная последовательность этого мутеина идентична аминокислотной последовательности нативной Fc последовательности, представленной в международной патентной заявке WO 93/10151, за исключением того, что аминокислота Leu в положении 19 заменена наAla. Мутеин проявляет пониженную аффинность к Fc рецепторам. В других вариантах изобретения вариабельный участок тяжлой и/или лгкой цепи антитела противTSLP может быть заменн на вариабельный участок тяжлой и/или лгкой цепи антитела. Или же олигомер представляет собой слитый белок, содержащий несколько антигенсвязывающих белков, с пептидными линкерами (спейсерными пептидами) или без них. Среди подходящих пептидных линкеров линкеры, описанные в патентах США 4751180 и 4935233. Другой метод получения олигомерных антигенсвязывающих белков включает применение лейциновой застжки-молнии. Домены лейциновой застжки-молнии представляют собой пептиды, которые стимулируют (промотируют) олигомеризацию белков, в которых они находятся. Лейциновые застжкимолнии первоначально были идентифицированы в некоторых ДНК-связывающих белках (Landschulz etal., 1988, Science 240: 1759) и с тех пор обнаружены во множестве различных белков. Среди известных лейциновых застжек-молний встречаются естественные пептиды и их производные, которые димеризуются или тримеризуются. Примеры доменов лейциновой застжки-молнии, пригодных для получения растворимых олигомерных белков, описаны в международной заявке РСТ WO 94/10308, а лейциновая застжка-молния из белка D лгочного сурфактанта (SPD) описана в статье Норре et al., 1994, FEBS Letters 344: 191, вводимой в данное описание в качестве ссылки. Применение модифицированной лейциновой застжки-молнии, которая способствует стабильной тримеризации слитого с ней гетерологичного белка, описано в Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6: 267-78. В одном методе рекомбинантные слитые белки, содержащие фрагмент или производное антитела против TSLP, слитые с пептидом лейциновой застжки-молнии, экспрессируются в подходящих клетках-хозяевах, и образующие их растворимые олигомерные фрагменты или производные антитела против TSLP выделяют из культурального супернатанта. Антитела по данному описанию содержат по меньшей мере одну область CDR. Например, одну или более областей CDR можно вводить в известные каркасные области антитела (IgG1, IgG2 и т.д.) или конъюгировать с подходящим носителем для увеличения периода полужизни. Подходящие носители включают, но без ограничения, Fc, полиэтиленгликоль (ПЭГ, PEG), альбумин, трансферрин и т.п. Эти и другие подходящие носители известны в уровне техники. Такие конъюгированные CDR пептиды могут быть в мономерной, димерной, тетрамерной или другой форме. В одном варианте изобретения один или более водорастворимых полимеров связан по одному или более специфических положений, например, по аминоконцу, связывающего агента. В некоторых предпочтительных вариантах изобретения антитело содержит одну или более связей с водорастворимым полимером, включая, но без ограничения, полиэтиленгликоль, полиоксиэтиленгликоль или полипропиленгликоль (см., например, патенты США 4640835, 44966896 4301144, 4670417,4791192 и 4179337). В некоторых вариантах изобретения производный связывающий агент содержит один из полимеров, таких как метоксиполиэтиленгликоль, декстран, целлюлозу или полимеры на основе других углеводов, сополимер поли(N-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимеры пропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин) и поливиниловый спирт, а также смеси таких полимеров. В некоторых вариантах изобретения один или более водорастворимый полимер, статистически связанные с одной или более боковых цепей. В некоторых вариантах изобретения ПЭГ может повышать терапевтическую функциональную активность связывающего агента, такого как антитело. Некоторые такие методы обсуждаются, например, в патенте США 6133426, который вводится в данное описание ссылкой для всех целей. Следует понимать, что антитело по настоящему изобретению может иметь по меньшей мере одну аминокислотную замену, делецию или одно аминокислотное добавление, обеспечивающие сохранение антителом специфичности связывания. Следовательно, в объм данного изобретения входят модификации в структуре антитела. Они могут включать аминокислотные замены, которые могут быть консервативными или неконсервативными, не нарушающими активность связывания антитела с человеческимTSLP. Консервативные аминокислотные замены могут охватывать неестественные аминокислотные остатки, которые обычно вводятся скорее химическим пептидным синтезом, нежели синтезом в биологических системах. Эти замены включают пептидомиметики и другие реверсированные или инвертированные формы аминокислотных фрагментов. Консервативная аминокислотная замена может включать замену нативного аминокислотного остатка на стандартный остаток, который оказывает слабый эффект,или не оказывает никакого эффекта, на полярность или заряд аминокислотного остатка в этом положении. Неконсервативные замены могут включать обмен члена одного класса аминокислот или миметиков аминокислот на другой класс с отличающимися физическими свойствами (например, такими как размер,полярность, гидрофобность, заряд). Такие замещенные остатки можно вводить в области человеческого антитела, гомологичные нечеловеческим антителам, или в негомологичные области молекулы. Кроме того, специалист в данной области техники может создать тест-варианты, содержащие единственную аминокислотную замену в каждом нужном аминокислотном остатке. Варианты можно затем подвергнуть скринингу методами анализа на активность, известными специалистам в уровне техники. Такие варианты можно использовать для сбора информации о подходящих вариантах. Например, если известно, что изменение в конкретном аминокислотном остатке приводит к нарушенной, пониженной в нежелательной степени или к неподходящей активности, вариантов с таким изменением следует избегать. Другими словами, на основании информации, собранной в ходе таких рутинных экспериментов,специалист в данной области техники сможет легко определить аминокислоты, в которых следует избегать дальнейших замен либо индивидуально, либо в комбинации с другими мутациями. Специалист в данной области техники способен определить подходящие варианты полипептида по данному описании, применяя общеизвестные методы. В некоторых вариантах изобретения специалист в данной области техники может идентифицировать подходящие участки молекулы, которые можно изменить, не нарушая активность, нацеливаясь на области, не являющиеся, как полагают, важными для активности. В некоторых вариантах изобретения можно идентифицировать остатки и участки молекул,являющиеся консервативными в аналогичных полипептидах. В некоторых вариантах изобретения даже области, которые могут быть важными для биологической активности или для структуры, могут быть целью для консервативных аминокислотных замен без нарушения биологической активности или без побочного вредного воздействия на структуру полипептида. Помимо этого, специалист в данной области техники может проанализировать работы по изучению зависимости структура-функция, в которых идентифицируются остатки в аналогичных полипептидах,важные для активности или структуры. На основании такого сравнения можно предсказать важность аминокислотных остатков в белке, которые соответствуют аминокислотным остаткам, важным для активности или структуры аналогичных белков. Специалист в данной области техники сможет выбрать сходные с химической точки зрения аминокислотные замены для таких прогнозируемо важных аминокислотных остатков. Специалист в данной области техники может также проанализировать трхмерную структуру и аминокислотную последовательность по отношению к этой структуре в аналогичных полипептидах. На основании этой информации специалист в данной области техники может предсказать выравнивание аминокислотных остатков антитела по этой трхмерной структуре. В некоторых вариантах изобретения специалист в данной области техники может выбрать не вносить радикальные изменения в аминокислотные остатки, предположительно (по прогнозам) находящиеся на поверхности белка, так как такие остатки могут участвовать в важных взаимодействиях с другими молекулами. Ряд научных публикаций посвящен предсказанию вторичной структуры (см. Moult J., Curr. Op. inBiotech., 7(4): 422-427 (1996), Chou et al., Biochemistry, 13(2): 222-245 (1974); Chou et al., Biochemistry,113(2): 211-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47: 45-148 (1978); Chou et al.,Ann. Rev. Biochem., 47: 251-276 и Chou et al., Biophys. J., 26: 367-384 (1979. Кроме того, в настоящее время имеются компьютерные программы, помогающие предсказывать вторичную структуру. Один метод предсказания вторичной структуры основан на моделировании по гомологии. Например, два полипептида или белка, имеющие идентичность последовательностей более 30%, или подобие более 40%,часто имеют сходную топологию структур. Увеличение размера базы данных белковых структур (PDB) за последнее время обеспечивает повышенную предсказуемость вторичной структуры, включая потенциальное число складок в структуре полипептида или белка (см. Holm et al., Nucl. Acid. Res., 27(1): 244247 (1999. Было предположено (Brenner et al., Curr. Op. Struct. Biol., 7(3): 369-376 (1997, что в данном полипептиде или белке имеется ограниченное число складок, и что если критическое число складов разрешено, предсказание структуры становится намного более точным. Другие методы предсказания вторичной структуры включают "протягивание нити (threading)"(см. Holm, supra (1999) и Brenner, supra (1997. Специалисту в данной области понятно, что некоторые белки, такие как антитела, могут претерпевать различные посттрансляционные модификации. Тип и степень таких модификаций часто зависит от линии клеток-хозяев, используемой для экспрессии белка, а также от условий культивирования. Такие модификации могут включать варианты гликозилирования, окисления метионина, образования дикетопиперазина, изомеризации аспартата и деамидирования аспарагина. Частой модификацией является утрата карбоксиконцевого основного остатка (такого как лизин или аргинин) под действием карбоксипептидаз (см. Harris, R.J. Journal of Chromatography 705: 129-134, 1995). В некоторых вариантах изобретения варианты антител включают варианты гликозилирования, в которых меняется число и/или тип сайта гликозилирования по сравнению с аминокислотной последовательностью исходного полипептида. В некоторых вариантах изобретения варианты содержат большее или меньшее число N-связанных сайтов гликозилирования, чем нативный белок. Или же замены, которые исключают эту последовательность, удаляют имеющуюся N-связанную углеводную цепь. Также предусматривается перегруппировка (перестройка) N-связанных углеводных цепей, в которых один или более N-связанных сайтов гликозилирования (обычно природных (естественных элиминируются и создатся один или более новых N-связанных сайтов гликозилирования. Другие предпочтительные варианты антител включают цистеиновые варианты, в которых один или более цистеиновых остатков удаляют или заменяют на другую аминокислоту (например, серин) по сравнению с исходной аминокислотной последовательностью. Цистеиновые варианты могут применяться, если антитела должны претерпеть рефолдинг (повторную укладку) в биологически активную конформацию, такую как после выделения нерастворимых телец включений. Цистеиновые варианты, как правило, содержат меньше цистеиновых остатков, чем нативный белок и обычно содержат чтное число, чтобы минимизировать взаимодействия,возникающие при наличии неспаренных цистеинов. Специалисты в данной области техники могут определить нужные аминокислотные замены (консервативные или неконсервативные) в то время, когда требуются такие замены. В некоторых вариантах изобретения аминокислотные замены можно использовать для идентификации важных остатков антител к человеческому TSLP, или для повышения или снижения аффинности антител к человеческому TSLP по данному описанию. Согласно некоторым вариантам изобретения предпочтительными аминокислотными заменами являются замены, которые (1) снижают чувствительность к протеолизу, (2) снижают чувствительность к окислению, (3) изменяют аффинность связывания с образованием белковых комплексов, (4) изменяют аффинность связывания и/или (4) придают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства таких полипептидов. Согласно некоторым вариантам изобретения одиночные или множественные аминокислотные замены (в некоторых вариантах изобретения консервативные аминокислотные замены) можно осуществлять в естественной (природной) последовательности (в некоторых вариантах изобретения на участке полипептида вне домена (доменов), образующего (образующих) межмолекулярные связи (участвующих в межмолекулярных контактах). В некоторых вариантах изобретения консервативная аминокислотная замена обычно может незначительно изменять структурные характеристики исходной последовательности (например, аминокислотная замена не стремится разрушить спираль, имеющуюся в исходной последовательности, или разрушить другие типы вторичной структуры,которые характеризуют исходную последовательность). Примеры признанных в уровне техники вторичных и третичных структур полипептидов описаны в Proteins, Structures and Molecular Principlesand J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991; и Thornton et al., Nature 354: 105 (1991), каждый из этих источников вводится в данное описание в качестве ссылки. Помимо этого, по другому варианту изобретения специалист в данной области техники понимает,что антигенсвязывающие белки могут включать одну или более областей CDR1, CDR2, CDR3 тяжлой цепи и/или CDR1, CDR2, CDR3 лгкой цепи, имеющих одну аминокислотную замену, при условии, что антитело сохраняет специфичность связывания незамещнной области CDR. He-CDR участок антитела может представлять собой небелковую молекулу, при этом связывающий агент перекрстно блокирует связывание антитела по данному описанию с человеческим TSLP и/или ингибирует TSLP активность.He-CDR участок антитела может представлять собой небелковую молекулу, в которой антитело показывает паттерн связывания с человеческими TSLP белками в анализе конкурентного связывания, подобный паттерну связывания, наблюдаемому по меньшей мере для одного из антител A1-A27, и/или нейтрализует активность TSLP. He-CDR участок антитела может состоять из аминокислот, отличающихся тем, что антитело является рекомбинантным связывающим белком или синтетическим пептидом, и рекомбинантный связывающий белок перекрстно блокирует связывание антитела по данному описанию с человеческим TSLP и/или нейтрализует TSLP in vitro или in vivo. He-CDR участок антитела может состоять из аминокислот, отличающихся тем, что антитело является антителом и рекомбинантное антитело показывает паттерн связывания с человеческими TSLP полипептидами в анализе конкурентного связывания,подобный паттерну связывания, наблюдаемому по меньшей мере для одного из антител А 1-А 27, и/или нейтрализует активность TSLP. Методы получения антигенсвязывающих белков, а именно, антител. Антигенсвязывающий белок, такой как антитело, содержащее одну или более областей CDR1,CDR2, CDR3 тяжлой цепи и/или CDR1, CDR2, CDR3 лгкой цепи по данному описанию, можно получать экспрессией при использовании клетки-хозяина, содержащей ДНК, кодирующую эти последовательности. ДНК, кодирующую последовательность каждой области CDR, можно определить исходя из аминокислотной последовательности CDR и синтезировать вместе с последовательностями ДНК каркасных участков вариабельной области и константной области, в зависимости от ситуации используя методы: олигонуклеотидный синтез, сайт-направленный мутагенез и полимеразную цепную реакцию (ПЦР). ДНК, кодирующие каркасные участки вариабельной области и константные области, общедоступны для специалистов в данной области техники из баз данных генетических последовательностей, таких какGenBank. Дополнительные варианты изобретения включают химерные антитела, например гуманизированные варианты нечеловеческих (например, мышиных) моноклональных антител. Такие гуманизированные антитела можно получать известными методами, их преимущество заключается в том, что они проявляют пониженную иммуногенность при введении их человеку. В одном варианте изобретения гуманизированное моноклональное антитело содержит вариабельный домен мышиного антитела (либо целый, либо часть его антигенсвязывающего сайта) и константный домен человеческого антитела. Или же фрагмент гуманизированного антитела может содержать антигенсвязывающий сайт мышиного моноклонального антитела и фрагмент вариабельного домена (без антигенсвязывающего сайта) человеческого антитела. Методы получения химерных и других генно-инженерных антител включают такие антитела, описанные в Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323, Liu et al., 1987, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84: 3439, Larrick et al.,1989, Bio/Technology 7: 934, и Winter et al., 1993, TIPS 14: 139. В одном варианте изобретения химерное антитело представляет собой CDR-привитое антитело. Методы получения гуманизированных антител обсуждаются, например, в патентах США 5869619, 5225539, 5821337, 5859205, 6881557, Padlan et al.,1995, FASEB J. 9: 133-39, и Tamura et al., 2000, J. Immunol. 164: 1432-41. Дополнительные методы получения гуманизированных антител включают такие методы, которые описаны в Zhang W. et al., MolecularImmunology. 42(12): 1445-1451, 2005; Hwang W. et al., Methods. 36(1): 35-42, 2005; Dall'Acqua W.F. et al.,Methods 36(1): 43-60, 2005; и Clark M., Immunology Today. 21(8): 397-402, 2000). Разработаны методы получения человеческих или частично человеческих антител в отличных от человека животных. Например, получали мышей, в которых различными методами инактивированы один или белее эндогенных генов иммуноглобулина. Гены человеческого иммуноглобулина вводили мышам, чтобы заменить инактивированные мышиные гены. Антитела, продуцированные в клетках животного, включают пептидные цепи человеческого иммуноглобулина, кодированные человеческим генетическим материалом, введнным животному. В одном варианте изобретения отличное от человека животное, такое как трансгенная мышь, иммунизируют белком TSLP, например, так, что генерируются антитела, специфические к различным TSLP полипептидам. Примеры подходящих иммуногенов приводятся в разделе примеры, см. ниже. Примеры методов получения и использования трансгенных животных для продуцирования человеческих или частично человеческих антител описаны в патентах США 5814318, 5569825 и 5545806, DavisNational Academy of Sciences USA 90: 3720-24, и Tuaillon et al., 1994, Journal of Immunology 152: 2912-20. В другом аспекте настоящее изобретение включает моноклональные антитела, которые связываются с человеческим TSLP. Моноклональные антитела можно получать различными методами, известными в уровне техники, например иммортализацией клеток селезнки, взятых у трансгенного животного по завершении схемы иммунизации. Клетки селезнки можно иммортализовать любым известным в уровне техники методом, например, слиянием их с клетками миеломы с образованием гибридом. Клетки миеломы для методов получения слияний с образованием гибридом, предпочтительно, не являются антителопродуцирующими, обладают высокой эффективностью слияния и являются фермент-дефицитными, что делает их неспособными к росту в некоторых селективных средах, которые поддерживают рост только заданных слитых клеток (гибридом). Примеры подходящих линий клеток для применения в слияниях мышиных клеток включают Sp-20, Р 3-X63/Ag8, Р 3-Х 63-Ag8.653, NS1/1.Ag4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U,MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 и S194/5XX0 Bul; примеры линий клеток, применяемых в слияниях клеток крыс, включают R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F и 4 В 210. Другими линиями клеток, применимыми для слияния клеток, являются U-266, GM1500-GRG2, UCR-LON-НМу 2 и UC729-6. В одном варианте изобретения продуцирование линии гибридомных клеток включает иммунизацию животного (например, трансгенного животного, несущего последовательности человеческого иммуноглобулина) иммуногеном TSLP; сбор клеток селезнки иммунизированного животного; слияние собранных клеток селезнки с линией клеток миеломы, тем самым генерация гибридомных клеток; установление линий гибридомных клеток при использовании клеток гибридомы и идентификацию линии гибридомных клеток, которая продуцирует антитело, связывающее TSLP полипептид. Такие линии гибридомных клеток и продуцируемые ими моноклональные антитела к TSLP охватываются настоящим изобретением. Моноклональные антитела, секретированные линией гибридомных клеток, можно очищать любым известным в уровне техники методом. Гибридомы или mAbs можно далее подвергать скринингу, чтобы идентифицировать mAbs с конкретными свойствами, такими как блокирование TSLP активности, такой как продуцирование остеопротегерина (OPG) первичными человеческими дендритными клетками. Примеры таких анализов приводятся ниже, в разделе примеры. Молекулярную эволюцию гипервариабельных областей (CDR) в центре сайта связывания антитела применяли также для выделения антител с повышенной аффинностью, например, как описано Schier et