Изолированные моноклональные антитела, которые связываются с erbb3, наборы и композиции, их содержащие, и их применение

В изобретении предлагаются изолированные моноклональные антитела или их антигенсвязывающие части, которые связываются с ErbB3. В одном воплощении антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающий SEQ ID NO:7; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающий SEQ ID NO:8; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающий SEQ ID NO:9; CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающийSEQ ID NO:10; CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающий SEQ ID NO:11; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающий SEQ ID NO:12. Изобретение также обеспечивает нуклеиновые кислоты, кодирующие указанное антитело, экспрессионные векторы, клетки-хозяева и трансгенные животные, не являющиеся человеком, и растения. Также обеспечены набор и композиция для ингибирования передачи сигнала ErbB3, содержащие указанное антитело, и способы получения такой композиции. Изобретение также относится к способу ингибирования передачи сигнала ErbB3 и способам диагностирования и лечения рака. Сведения о предшествующем уровне техники Подсемейство полипептидных рецепторов фактора роста ErbB/HER включает рецептор (EGFR,ErbB1/HER1) эпидермального фактора роста (EGF), новый продукт онкогена (ErbB2/HER2) и идентифицированные совсем недавно белки рецептора ErbB3/HER3 и ErbB4/HER4 (см., например, Hynes et. al.(1994), Biochim. Biophys. Acta Rev. Cancer. 1198, 165-184). Предполагается, что каждый из этих рецепторов состоит из экстраклеточного лигандсвязующего домена, перекрывающего мембрану домена, домена тирозинкиназного цитозольного белка (PTK) и домена С-концевого фосфорилирования (см., например,Kim et al. (1998), Biochem. J. 334, 189-195). Эксперименты в лабораторных условиях (in vitro) показали, что белковая тирозинкиназная активность белка ErbB3 значительно ослабевает относительно белка других представителей семействаErbB/HER, и такое ослабление объясняется отчасти возникновением неконсервативных заменителей аминокислоты в прогнозируемом каталитическом домене ErbB3 (см., например, Guy et al. (1994), Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 91, 8132-8136; Sierke et al. (1997), Biochem. J. 322, 757-763). Однако было установлено, что белок ErbB3 фосфорилируется в различных клеточных содержимых. Например, ErbB3 конститутивно фосфорилируется на остатках тирозина в субпопуляции клеточных линий рака молочной железы у человека, сверхсинтезирующих этот белок (см., например, Kraus et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90, 2900-2904 и Kim et al. выше; см. также Schaefer et al. (2006), Neoplasia 8(7):613-22 и Schaefer et al.Cancer Res. (2004), 64(10):3395-405). Несмотря на то что исследования значения ErbB3 для рака проводились (см., например, Horst et al.(2005), 115, 519-527; Xue et al. (2006), Cancer Res. 66, 1418-1426), ErbB3 как цель для клинического вмешательства остается в значительной степени недооцененным. Современные виды иммунотерапии прежде всего направлены на ингибирование действия ErbB2 и, в частности, гетеродимеризацию комплексовErbB2/ErbB3 (см., например, Sliwkowski et al. (1994), J. Biol. Chem. 269(20):14661-14665 (1994. Соответственно, целью настоящего изобретения является разработка усовершенствованных видов иммунотерапии, которые эффективно ингибируют передачу сигналов ErbB3 и могут использоваться для лечения и диагностирования различных раковых опухолей. Сущность изобретения В настоящем изобретении предлагается новый класс моноклональных антител, которые связываются с ErbB3 и ингибируют различные функции ErbB3. Например, антитела, описание которых приведено здесь, способны связываться с ErbB3 и ингибировать опосредованное EGF-подобными лигандами фосфорилирирование рецептора. В соответствии с настоящим описанием EGF-подобные лиганды включаютEGF, TGF-, бета-целлюлин, гепаринсвязывающий эпидермальный фактор роста, бирегулин и амфирегулин, которые связываются с EGFR и стимулируют димеризацию EGFR с ErbB3. Данная димеризация, в свою очередь, вызывает фосфорилирование ErbB3 и активизирует передачу сигналов через рецептор. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением моноклональные антитела пригодны для лечения и диагностирования различных раковых опухолей, ассоциированных с ErbB3-опосредованной клеточной передачей сигналов. Соответственно, в одном из примеров осуществления настоящего изобретения предлагаются моноклональные антитела (и их антигенсвязывающие части), которые связываются сErbB3 и ингибируют опосредованное EGF-подобными лигандами фосфорилирование рецептора ErbB3. В одном примере моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с ErbB3, содержат CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, включающий SEQ ID NO:7; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, включающий SEQ ID NO:8; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, включающий SEQ ID NO:9; CDR1 вариабельной области легкой цепи, включающийSEQ ID NO:10; CDR2 вариабельной области легкой цепи, включающий SEQ ID NO:11; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, включающий SEQ ID NO:12. В другом примере осуществления изобретения изолированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с ErbB3, содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, где вариабельная область тяжелой цепи включает SEQ ID NO:1. В другом примере осуществления изобретения изолированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связываются с ErbB3, содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, где вариабельная область легкой цепи включает SEQ ID NO:2. В еще одном примере осуществления изобретения изолированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связывается с ErbB3, содержат вариабельную область тяжелой цепи, включающую SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, включающую SEQ ID NO:2. Антитела в соответствии с настоящим изобретением включают все известные формы антител. Например, антитело может быть человеческим антителом, гуманизированным антителом, биспецифическим антителом, химерным антителом. Антитело также может представлять собой Fab, Fab'2, ScFv или доменное антитело. Антитело также может иметь любой из следующих изотипов: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4,IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD и IgE. В одном из примеров осуществления антитело представляет собой антитело IgG2. В следующем примере осуществления настоящего изобретения также предложены композиции для ингибирования передачи сигнала ErbB3, включающие комбинации антител или антигенсвязывающих частей, описание которых приведено здесь, разработанные с приемлемым носителем и/или стимулятором. В конкретном примере состав включает два или несколько антител, которые связывают различные эпитопы на ErbB3, или антитела, описание которых приведено здесь, в соединении с противоопухолевыми антителами, которые не связывают ErbB3. В отдельном примере осуществления композиция представляет собой стерильный водный раствор или дисперсию, пригодные для инъекции или инфузии, или представляет собой стерильный порошок для приготовления ex tempore стерильного водного раствора или дисперсии, пригодных для инъекции или инфузии. Также предусмотрен способ получения таких композиций в форме стерильного водного раствора. В другом примере осуществления настоящего изобретения предлагаются изолированные нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела и их антигенсвязывающие части, описание которых приводится здесь. В конкретных примерах осуществления нуклеиновая кислота кодирует V-область тяжелой цепи,включающую нуклеотидную последовательность, которая как минимум на 90% (например, 90, 95, 96, 97,98 или 99%) идентична ей или которая скрещивается в строгих условиях с SEQ ID NO:25; или V-область легкой цепи, включающую нуклеотидную последовательность, которая как минимум на 90% (например,90, 95, 96, 97, 98 или 99%) идентична ей или которая скрещивается в строгих условиях с SEQ ID NO:26; или комбинации таких тяжелых и легких V-областей. Кроме того, настоящее изобретение предлагает экспрессионные векторы, содержащие изолированные нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела и их антигенсвязывающие части, описание которых приводится здесь. Настоящее изобретение также обеспечивает трансгенные, не относящиеся к человеку млекопитающие, клетки-хозяева и трансгенные растения, которые экспрессируют и/или производят антитела и их антигенсвязывающие части, описание которых приведено в настоящем документе. Более того, в изобретении представлены наборы, включающие одно или несколько изолированных моноклональных антител или их антигенсвязывающих частей, описание которых приведено здесь, и, при желании, инструкции по применению в лечении или диагностировании болезни, ассоциированной сErbB3-зависимой передачей сигналов, такой как раковые опухоли. Антитела и их антигенсвязывающие части в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться в самых различных терапевтических и диагностических применениях, особенно онкологических. Соответственно, с другой стороны, изобретение предлагает способ ингибирования передачи сигнала ErbB3 у субъекта путем введения одного или нескольких антител или их антигенсвязывающих частей,описание которых приведено здесь, в количестве, достаточном для того, чтобы ингибировать передачу сигнала ErbB3. Изобретение также предлагает способы лечения различных онкологических заболеваний субъекта, включая, но не ограничиваясь этим, меланому, рак молочной железы, рак яичников, рак почки,рак желудочно-кишечного тракта/рак толстой кишки, рак легких, светлоклеточную карциному и рак предстательной железы, путем введения одного или нескольких антител или их антигенсвязывающих частей, упомянутых в данном описании, в количестве, достаточном для лечения рака. Антитела или их антигенсвязывающие части могут вводиться отдельно или в комбинации с другими терапевтическими средствами, такими как противоопухолевые препараты или другие антитела или их антигенсвязывающие части. В других примерах осуществления настоящего изобретения предлагаются способы диагностирования и прогнозирования болезней (например, рака), ассоциированных с ErbB3. В одном из примеров осуществления это достигается путем контакта антител или антигенсвязывающих частей по изобретению(например, ex vivo или in vivo) с клетками, взятыми у субъекта, и путем измерения уровня связывания сErbB3 на клетках, в котором чрезмерно высокие уровни связывания с ErbB3 указывают, что у субъекта имеется рак, ассоциированный с ErbB3. Другие особенности и преимущества изобретения будут очевидны из следующего подробного описания и из формулы изобретения. Краткое описание чертежей На фиг. 1 А и 1 В представлены гистограммы, отображающие связывание различных анти-ErbB3 кандидатов антитела (Fab, именуемый здесь как Ab) с ErbB3, экспрессированным на MALME-3M клетках меланомы, с использованием козьего, не относящегося к человеку вторичного антитела Alexa 647. На фиг. 2A-2D показаны графики, иллюстрирующие значения KD различных анти-ErbB3 кандидатов антитела. На фиг. 2 А и 2 В показаны графики, иллюстрирующие значение KD антитела 6 (далее по текстуAb 6) и антитела 3 (далее по тексту Ab 3) соответственно, измеренные с помощью технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR). На фиг. 2 С и 2D даны графики, иллюстрирующие значения KD антител Ab 6 и Ab 3 соответственно, измеренные с помощью анализа связывания клетки с использованием MALME-3M меланомных клеток. На фиг. 3 представлен график, изображающий специфичность связывания анти-ErbB3 антитела(Ab 6) с ErbB3 с использованием ELISA. EGFR, BSA и TGF- использовались как контрольные. На фиг. 4 дан график, изображающий способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) снижать общие уровни ErbB3 в меланомных клетках MALME-3M in vitro при измерении с помощью ELISA. На фиг. 5 А и 5 В показаны графики, отображающие способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) подавлять рецепторы ErbB3 на клетках MALME-3M при измерении с помощью FACS анализа. На фиг. 5 А представлены результаты с применением IgG1 изотипа антитела. На фиг. 5 В представлены результаты с применением IgG2 изотипа антитела. На фиг. 6A-6D представлены графики, отображающие период действия опосредованного антителомErbB3 понижения регуляции (Ab 6) при измерении с помощью FACS анализа. На фиг. 7 показана гистограмма, отображающая способность разнообразных анти-ErbB3 антител подавлять ErbB3 в меланомных клетках in vivo. На фиг. 8 представлена гистограмма, отображающая способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) подавлять ErbB3 в ксенотрансплантате ADRr in vivo. На фиг. 9 показан график, отображающий способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) ингибировать пролиферацию MALME-3M клеток в анализе Cell Titer Glow Assay. На фиг. 10 показан график, отображающий способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) ингибировать пролиферацию клетки в яичниковой клеточной линии, ADRr. На фиг. 11 представлен график, отображающий способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) ингибировать пролиферацию ACHN клеток. На фиг. 12 показана гистограмма, отображающая способность анти-ErbB3 антитела(Ab 6) ингибировать ErbB3 пролиферацию в ADRr ксенотрансплантатах in vivo. На фиг. 13A-13 С представлены графики, отображающие способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) инигибировать бета-целлюлин- и херегулин-опосредованное фосфорилирование ErbB3 в ADRr клетках. На фиг. 14 А, 14 В показаны графики, отображающие способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6 IgG2 изотип) ингибировать ErbB3 фосфорилирование в клеточных линиях опухоли яичника OVCAR 5 иErbB1, как показано, недостатком связывания с ErbB1 отрицательных MALME-3 М клеток (фиг. 17 А); связывание с ErbB1 положительных ADRr клеток при концентрациях 10 нМ (фиг. 17 В) и 200 нМ(фиг. 17 В) соответственно и ингибирование такого связывания с помощью Erbitux. На фиг. 16A, 16 В представлены графики, отображающие способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6AKT в MALME-3M клетках. На фиг. 17A-17D показаны графики, отображающие способность анти-ErbB3 антитела (Ab 6) ингибировать рост опухоли (А) яичника (ADRr клетки), (В) предстательной железы Du145 cells), (С) яичника (OvCAR8 клетки) и (D) поджелудочной железы (Colo-357 клетки) путем исследований ксенотрансплантата. На фиг. 18 А и 18 В показаны графики, отображающие способность Ab 6 (фиг. 18 А) и Fab для Ab 3(фиг. 18 В) ингибировать херегулин, связывающийся с ErbB3 на MALME-3 М клетках, при измерении с помощью FACS анализа. На фиг. 19 А и 19 В представлены графики, отображающие способность Ab 6 ингибировать связывание эпирегулина с ErbB3 на ADRr клетках. Фиг. 19 А представляет связывание эпирегулина с ADRr клетками. Фиг. 19 В представляет способность как Erbitux, так и Ab 6 ингибировать связывание эпирегулина с ADRr клетками. На фиг. 20 А и 20 В представлены графики, отображающие способность гепаринсвязывания эпидермального фактора роста (HB-EGF) связывать ErbB на ADRr клетках (фиг. 20 А) и неспособность антиErbB3 антитела (Ab 6) инигибировать такое связывание (фиг. 20 В). На фиг. 21A-21 С показаны аминокислотные последовательности V-областей тяжелой и легкой цепей антител: Ab 6, Ab 3, Ab 14, Ab 17 и Ab 19. На фиг. 22A, 22 В показаны нуклеотидные последовательности V-областей тяжелой и легкой цепей антител: Ab 6, Ab 3 и Ab 14. На фиг. 23 показаны аминокислотные последовательности V-областей легкой цепи антител: Ab 6,Ab 17 и Ab 19, которые возвращены к соответствующей аминокислотной последовательности зародышевой линии. Изменения аминокислотного остатка выделены. На фиг. 24A-24 С представлены графики, отображающие способность Ab 6 ингибировать VEGF секрецию опухолевых клеток. На фиг. 25 показан график, отображающий влияние Ab 6 на перемещение клетки. На фиг. 26A-26 С представлены графики, показывающие (А) ингибирование шаровидного роста вErbB3. На фиг. 29 А и 29 В продемонстрировано влияние Ab 6 на фосфорилирование (А) pErbB1 и pErbB3 и (В) HRG-индуцированное комплексообразование ErbB2/3. На фиг. 30 представлен график, показывающий, как Ab 6 связывает аминокислотные остатки 20-202 ErbB3. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Для лучшего понимания настоящего изобретения в первую очередь приводятся определения некоторых терминов. Дополнительные определения излагаются по всему подробному описанию.I. Определения. Термины "ErbB3", "HER3", "ErbB3 рецептор" и "HER3 рецептор", используемые как взаимозаменяемые в данном документе, относятся к белку человека ErbB3 в соответствии с описанием, представленном в патенте США 5480968 и Plowman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:4905-4909 (1990); см. также Kani et al., Biochemistry, 44:15842-857 (2005), Cho и Leahy, Science, 297:1330-1333 (2002). Термин "EGF-подобный лиганд" в соответствии с его использованием в настоящем описании касается лигандов рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), включая эпидермальный фактор роста(EGF) и близкородственные белки, такие как трансформирующий фактор роста(TGF-), бетацеллюлин (BTC), гепаринсвязывающий эпидермальный фактор роста (HB-EGF), бирегулин (BIR) и амфирегулин (AR), которые связываются с EGFR на поверхности клеток и стимулируют тирозинкиназную активность внутреннего белка рецептора. В частности, EGF-подобные лиганды вызывают формированиеEGFR (также именуемые как ErbB1) и белкового комплекса ErbB3 (см., например, Kim et al. (1998),Biochem J., 334:189-195), что приводит к фосфорилированию остатков тирозина в комплексе. Антитела и их антигенсвязывающие части в соответствии с настоящим изобретением ингибируют опосредованное EGF-подобными лигандами фосфорилирование ErbB3 и в некоторых примерах демонстрируют одно или несколько следующих дополнительных свойств: (i) ингибирование передачи сигнала,опосредованной одним или несколькими херегулином, эпирегулином, эпигеном и бирегулином (BIR),через ErbB3; (ii) ингибирование пролиферации клеток, экспрессирующих ErbB3; (iii) способность снижать уровни ErbB3 на поверхностях клеток; (iv) ингибирование VEGF секреции клеток, экспрессирующих ErbB3; (v) ингибирование перемещения клеток, экспрессирующих ErbB3; (vi) ингибирование шаровидного роста клеток, экспрессирующих ErbB3; и/или (vii) связывание с эпитопом, расположенным на домене I ErbB3, например эпитоп, который включает или перекрывает остатки 20-202 аминокислотной последовательности ErbB3. Термин "ингибирование" в соответствии с его использованием в настоящем описании относится к любому статистически значимому снижению биологической активности, включая полную блокировку активности. Например, "ингибирование" может относиться к снижению приблизительно на 10, 20, 30, 40,50, 60, 70, 80, 90 или 100% биологической активности. Соответственно, фраза "ингибирование опосредованного EGF-подобными лигандами фосфорилирования ErbB3" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или антигенсвязывающей части статистически значимо снижать фосфорилирование ErbB3, вызванного EGF-подобным лигандом, относительно фосфорилированию в необработанной (контрольной) клетке. Клетка, которая экспрессирует ErbB3, может быть естественной клеткой или клеточной линией или может быть рекомбинантно образована путем ввода нуклеиновой кислоты, кодирующей ErbB3, в клетку-хозяин. В одном из примеров осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть ингибируют опосредованное EGF-подобными лигандами фосфорилирование ErbB3 как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100%, как задано, например, с помощью вестерн-блоттинга, затем зондированием анта-фосфотирозин антителом, как описано в Kim et al. (1998), Biochem J., 334:189-195 и примерах ниже. Фраза "ингибирование херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин-опосредованной передачи сигнала через ErbB3" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать опосредованную ErbB3 лигандом передачу сигнала (например, херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) через ErbB3, относительно передачи сигнала при отсутствии антитела (контроль). ErbB3-лиганды также именуются здесь как "херегулин-подобные лиганды". Это означает, что при наличии антитела или его антигенсвязывающей части сигнал, опосредованный в экспрессирующей ErbB3 клетке одним или несколькими херегулином, эпирегулином, эпигеном и бирегулином, относительно контроля (антитело отсутствует) статистически значимо снижается. Опосредованный ErbB3-лигандом сигнал можно измерить путем анализа уровня или активности ErbB3 субстрата и/или белка, который присутствует в клеточном каскаде, включающемErbB3. В одном из примеров антитело или его антигенсвязывающая часть снижают уровень или активность ErbB3 субстрата и/или белка в клеточном каскаде, включающем ErbB3, как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100% относительно уровня или активности при отсутствии такого антитела или его антигенсвязывающей части (контроль). Такую опосредованную ErbB3-лигандом передачу сигналов можно измерить с помощью известных технологий, которые измеряют уровень или активность субстрата ErbB3 (например,SHC или PI3K) или белка в клеточном каскаде, включающем ErbB3 (например, AKT), используя пробы киназы для таких белков (см., например, Horst et al. выше, Sudo et al. (2000), Methods Enzymol., 322:38892 и Morgan et al. (1990), Eur. J. Biochem., 191:761-767). В конкретном примере антитело или его антигенсвязывающая часть ингибируют опосредованнуюErbB3 ингибированием связывания ErbB3-лиганда (например, одним или несколькими из: херегулин,эпирегулин, эпиген или бирегулин) с ErbB3. Некоторые лиганды (например, бирегулин или BIR) выполняют функцию и как EGF-подобных лигандов (т.е. связываются с EGFR/ErbB1), и как ErbB3-подобных лигандов (т.е. связываются с ErbB3). Фраза "ингибирование связывания херегулина, эпирегулина, эпигена или бирегулина с ErbB3" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать связывание ErbB3 лиганда (например, одного или несколько из: херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) с ErbB3, относительно связывания при отсутствии антитела (контроль). Это означает, что при наличии антитела или его антигенсвязывающей части количество ErbB3-лиганда (например, херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин), которое связывается с ErbB3 относительно контрольного (антитело отсутствует) статистически значимо снижается. Количество ErbB3 лиганда, которое связывается с ErbB3, может уменьшаться при наличии антитела или его антигенсвязывающей части в соответствии с изобретением как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100% относительно количества при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части (контроль). Снижение связывания ErbB3-лиганда можно измерить с помощью известных технологий измерения уровня связывания меченого ErbB3-лиганда (например, меченный радиоизотопом херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) с экспрессирующими ErbB3 клетками при наличии или отсутствии (контроль) антитела или его антигенсвязывающей части. Фраза "ингибирование пролиферации клеток, экспрессирующих ErbB3" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать пролиферации клетки, экспрессирующей ErbB3, относительно пролиферации при отсутствии антитела. В одном из примеров пролиферация экспрессирующей ErbB3 клетки(например, раковой клетки) может быть снижена как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100%, когда клетки контактируют с антителом или его антигенсвязывающей частью в соответствии с настоящим изобретением относительно пролиферации, измеренной при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части(контроль). Клеточную пролиферацию можно проанализировать с помощью известных в этой области технологий измерения скорости цитокинеза, фракции клеток в пределах клеточной популяции, подвергающейся цитокинезу, и/или скорости потери клеток из клеточной популяции вследствие конечной дифференцировки или некроза клеток (например используя анализ cell titer glow assay или тимидин инкорпорацию). Фраза "способность снижать уровни ErbB3 на поверхности клеток" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать количество ErbB3, обнаруженное на поверхности клетки, которое подверглось воздействию антитела, относительно необработанной (контрольной) клетки. Например, снижение уровней ErbB3 на поверхности клеток может происходить в результате повышенной интернализацииErbB3 (или повышенного ErbB3 эндоцитоза). В одном из примеров антитело или его антигенсвязывающая часть снижают экспрессию ErbB3 на поверхности клетки как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100% и/или увеличивает интернализацию ErbB3 рецептора как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100% относительно экспрессии на поверхности клетки или интернализации при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части (контроль). Уровни ErbB3 на поверхностях клеток и/или интернализацию ErbB3 рецептора при отсутствии и наличии антитела или его антигенсвязывающей части можно легко измерить с помощью известных технологий, таких как описано в Horst et al., упомянутой выше, и в примерах, которые приводятся здесь. Фраза " ингибирование VEGF секреции клеток, экспрессирующих ErbB3", в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать VEGF секрецию при отсутствии антитела. В одном из примеровVEGF секреция клетки, экспрессирующей ErbB3 (например, раковая клетка), может быть снижена как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100%, когда клетки контактируют с антителом или его антигенсвязывающей частью по настоящему изобретению, относительно VEGF секреции, измеренной при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части (контроль). Фраза "ингибирование перемещения клеток, экспрессирующих ErbB3" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать перемещение экспрессирующей ErbB3 клетки относительно перемещения клетки при отсутствии антитела. В одном из примеров перемещение экспрессирующей ErbB3 клетки(например, раковая клетка) может быть снижено как минимум на 10%, или как минимум на 20%, или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%, или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100%, когда клетки контактируют с антителом или его антигенсвязывающей частью по настоящему изобретению, относительно перемещения клетки, измеренного при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части (контроль). Перемещение клетки можно анализировать с помощью известных технологий, например, описанных здесь. Фраза "ингибирование шаровидного роста клеток, экспрессирующих ErbB3" в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к способности антитела или его антигенсвязывающей части статистически значимо снижать перемещение экспрессирующей ErbB3 клетки относительно перемещения клетки при отсутствии антитела. В одном из примеров перемещение экспрессирующей ErbB3 клетки (например, раковой клетки) может быть снижено как минимум на 10%, или как минимум на 20%,или как минимум на 30%, или как минимум на 40%, или как минимум на 50%, или как минимум на 60%,или как минимум на 70%, или как минимум на 80%, или как минимум на 90%, или на 100% когда клетки контактируют с антителом или его антигенсвязывающей частью по настоящему изобретению, относительно перемещения клетки, измеренного при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части(контроль). Перемещение клетки можно анализировать с помощью известных технологий, например,описанных здесь. Термин "антитело" или "иммуноглобулин" в соответствии с вариантом его использования здесь включает полные антитела и любой антигенсвязывающий фрагмент (т.е. "антигенсвязывающая часть") или его одиночные цепи. "Антитело" включает как минимум две тяжелые (Н) цепи и две легкие(L) цепи, взаимосвязанные дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из V-области тяжелой цепи (используемое здесь сокращение VH) и C-области тяжелой цепи. C-область тяжелой цепи состоит из трех доменов, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь состоит из V-области легкой цепи (используемое здесь сокращение VL) и C-области легкой цепи. C-область легкой цепи состоит из одного домена, CL. Области VH и VL можно дополнительно подразделить на области гипервариабильности, называемые гипервариабельные участки (CDR), с вплетением участков, более консервативных, именуемых "каркасные области" (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, распределенных от аминоконцевой до карбоксиконцевой области в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. V-области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, взаимодействующий с антигеном. C-области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с питающими тканями или факторами, включая разнообразные клетки иммунной системы (например, клетка-эффектор) и первый компонент (Clq) классической системы комплемента. Типичные антитела по изобретению включают антитела 1, 3 и 14 и их антигенсвязывающие части. Термин "антигенсвязывающая часть" антитела (или просто "часть антитела") в соответствии с его использованием в настоящем описании относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохранили способность специфически связываться с антигеном (например, ErbB3). Было установлено, что антигенсвязывающая функция антитела может выполняться фрагментами антитела полной длины. Примеры связывающих фрагментов, на которые распространяется термин "антигенсвязывающая часть" антитела, включают (i) Fab-фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (ii) F(ab')2-фрагмент, бивалентный фрагмент, включающий два Fab-фрагмента, связанных дисульфидной связью в шарнирной области; (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и CH1; (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; (v) dAb, включающий домены VH и VL;(vi) dAb фрагмент (Ward et al. (1989), Nature, 341, 544-546), который состоит из VH домена; (vii) dAb, который состоит из домена VH или VL; и (viii) изолированный гипервариабельный участок (CDR) или (ix) комбинацию двух или более изолированных CDR, которые могут по желанию соединяться синтетическим линкером. Кроме того, хотя два домена Fv фрагмента, VL и VH, кодированы изолированными генами, они могут соединяться с использованием рекомбинантных методов синтетическим линкером, который позволяет выполнить их в виде одиночной белковой цепи, в которой VL и VH области объединяются в пары с образованием одновалентных молекул (известные как одиночная цепь Fv (scFv); см., например,Bird et al. (1988), Science, 242, 423-426 и Huston et al. (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 5879-5883). На такие антитела одиночной цепи также распространяется термин "антигенсвязанная часть" антитела. Эти фрагменты антитела получены с применением обычных технологий, известных специалистам в этой об-6 020465 ласти, и фрагменты фильтруются на пригодность таким же образом, как и интактные антитела. Антигенсвязанные части можно получить с помощью технологий рекомбинантных ДНК или ферментативным,или химическим дроблением интактных иммуноглобулинов. Термин "моноклональное антитело" в соответствии с его использованием в настоящем описании относится к антителу, полученному из популяции, по существу, гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, содержащие популяцию, идентичны, за исключением естественных мутаций, которые могут присутствовать в небольших количествах. Моноклональные антитела очень специфичны, будучи направленными против одной области детерминанты. Кроме того, в отличие от обычных способов приготовления (поликлональных) антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против единственной детерминанты на антигене. Моноклональные антитела можно приготовить с помощью технологий, известных в данной области техники, и тех, описание которых приведено здесь, например метод гибридомы, как указано в Kohler et al. (1975), Nature, 256:495, трансгенное животное, как описано, например, в Lonberg,et al. (1994), Nature, 368(6474):856-859), методы рекомбинантной ДНК (см., например, патент США 4816567), или с помощью библиотек антитела фага с применением технологий, описанных, например,в Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) и Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991). Моноклональные антитела включают химерные антитела, антитела человека и гуманизированные антитела и могут быть естественными или их можно получать рекомбинантно. Термин "рекомбинантное антитело" относится к антителам, которые приготовлены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными средствами, например: (а) антитела, выделенные из животного (например, мышь), которое является трансгенным или трансхромосомным для иммуноглобулиновых генов (например, иммуноглобулиновые гены человека), или гибридома, приготовленная из них;(b) антитела, выделенные из клетки-хозяина, видоизмененной для экспрессирования антитела, например из трансфектомы; (с) антитела, выделенные из библиотеки рекомбинантных, комбинаторных антител(например, содержащей последовательности антител человека) с использованием фагового дисплея; и(d) антитела, приготовленные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими средствами, которые включают сплайсинг последовательностей иммуноглобулинового гена (например, иммуноглобулиновые гены человека) к другим последовательностям ДНК. Такие рекомбинантные антитела могут иметь V-области и C-области, полученные из иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии человека. В некоторых примерах, однако, такие рекомбинантные антитела человека могут подвергаться in vitro мутагенезу, и, таким образом, аминокислотные последовательности VH и VL областей рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, если получены из VH иVL последовательностей эмбриональной линии человека и относятся к ним, не могут естественным образом существовать в спектре эмбриональной линии антитела человека in vivo. Термин "химерный иммуноглобулин" или антитело относится к иммуноглобулину или антителу,V-области которых получают из первых препаратов и C-области которых получают из вторых препаратов. Химерные иммуноглобулины или антитела могут быть созданы, например, с помощью генной инженерии, из сегментов иммуноглобулинового гена, принадлежащих различным препаратам. Термин "человеческое антитело" в соответствии с его использованием в настоящем описании подразумевает включение антител, имеющих V-области, в которых и каркас, и CDR области получены из иммуноглобулиновых последовательностей эмбриональной линии человека, как описано, например, вKabat et al. (см. Kabat, et al. (1991), Sequences of proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. - Последовательности белков иммунологического значения, U.S. Department of Health and Human Services, NIHPublication No. 91-3242). Кроме того, если антитело содержит C-область, то C-область также получена из последовательностей иммуноглобулина эмбриональной линии человека. Человеческие антитела могут включать аминокислотные остатки, не кодированные последовательностями иммуноглобулина эмбриональной линии человека (например, мутации, введенные неспецифическим или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo). Однако "человеческое антитело", по использованию здесь, не подразумевает включение антител, в которых CDR-последовательности, полученные из эмбриональной линии препаратов других млекопитающих, таких как мышь, были пересажены на каркасные последовательности человека. Человеческое антитело может иметь как минимум одну или несколько аминокислот, замещенных аминокислотным остатком, например усиливающим активность аминокислотным остатком, который не кодируется последовательностью иммуноглобулина эмбриональной линии человека. Как правило, человеческое антитело может иметь до 20 позиций, замещенных аминокислотными остатками, которые не входят в состав последовательности иммуноглобулина эмбриональной линии человека. В конкретном примере эти замены происходят в CDR-областях, подробное описание которых приводится ниже. Термин "гуманизированный иммуноглобулин" или "гуманизированное антитело" относится к иммуноглобулину или антителу, которые включают как минимум одну цепь гуманизированного иммуноглобулина или антитела (т.е. как минимум одну легкую или тяжелую цепь). Термин "цепь гуманизированного имууноглобулина" или "цепь гуманизированного антитела" (т.е. "легкая цепь гуманизированного иммуноглобулина" или "тяжелая цепь гуманизированного иммуноглобулина") относится к цепи им-7 020465 муноглобулина или антитела (т.е. легкой или тяжелой цепи соответственно), имеющей V-область, которая включает вариабельную каркасную область в основном из человеческого иммуноглобулина или антитела и гипервариабельные участки (CDR) (например, как минимум один CDR, предпочтительно дваCDR, еще предпочтительнее три CDR), в основном из не принадлежащего человеку иммуноглобулина или антитела, а также включает C-области (например, как минимум одну C-область или ее часть в случае легкой цепи и предпочтительно три C-области в случае тяжелой цепи). Термин "гуманизированнаяV-область" (например, "гуманизированная V-область легкой цепи" или "гуманизированная V-область тяжелой цепи") относится к V-области, которая включает вариабельную каркасную область, в основном из человеческого иммуноглобулина или антитела и гипервариабельные участки (CDR) в основном из не принадлежащего человеку иммуноглобулина или антитела."Биспецифическое" или "бифункциональное антитело" - это искусственное гибридное антитело,имеющее две разные пары тяжелой/легкой цепи и два разных участка связывания. Биспецифические антитела можно получать различными способами, включая слияние гибридом или связываниеet al. (1992), J. Immunol. 148, 1547-1553. В конкретном примере биспецифическое антитело по настоящему изобретению включает места связывания как для ErbB3, так и для IGF1-R (т.е. рецептор инсулинподобного фактора роста 1). В другом примере биспецифическое антитело по настоящему изобретению включает места связывания как для ErbB3, так и для c-МЕТ. В других примерах биспецифическое антитело включает место связывания для ErbB3 и место связывания для ErbB2, ERbB3, ErbB4, EGFR,Lewis Y., MUC-1, EpCAM, CA125, простатический специфический мембранный антиген, PDGFR-,PDGFR-, c-KIT или любой из FGF рецепторов. Используемый в тексте описания термин "гетерологическое антитело" определяется в связи с трансгенным, не принадлежащим человеку организмом или растением, производящим такое антитело. Термин "изолированное антитело" в соответствии с его использованием в настоящем описании подразумевает антитело, в основном не содержащее других антител, имеющих разные антигенные специфичности (например, изолированное антитело, в частности связанное с ErbB3, в основном не содержит антител, которые, в частности, связывают другие антигены, кроме ErbB3). Кроме того, изолированное антитело обычно в основном не содержит другой клеточный материал и/или другие химические вещества. В одном из примеров осуществления изобретения комбинации "изолированных" моноклональных антител с разными антигенными специфичностями объединяются во вполне определенный состав. Используемый в описании термин "изотип" относится к классу антитела (например, IgM или IgG1),который кодируется генами C-области тяжелой цепи. В одном из примеров антитело или его антигенсвязывающая часть - это изотип, выбранный из изотипа антитела IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2,IgAsec, IgD или IgE. В некоторых примерах моноклональное антитело по изобретению - это IgG1 изотип. В других примерах моноклональное антитело по изобретению - это IgG2 изотип. Используемый в описании термин "переключение изотипа" относится к феномену, с помощью которого класс или изотип, антитела переходит из одного Ig класса в один из других Ig классов. Используемый в описании термин "непереключаемый изотип" относится к изотипному классу тяжелой цепи, который создается, когда переключение изотипа не происходит; CH ген, кодирующий непереключаемый изотип, - это обычно первый CH ген сразу после функционально реаранжированного VDJ гена. Переключение изотипа классифицировано как классическое или неклассическое переключение. Классическое переключение изотипа происходит за счет явлений рекомбинации, которые включают как минимум одну область переключения последовательности в гене, кодирующем антитело. Неклассическое переключение изотипа может происходить, например, гомологичной рекомбинацией междучеловека ичеловека (-ассоциированная делеция). Среди других могут встречаться альтернативные неклассические механизмы переключения, такие как межтрансгеннная и/или межхромосомная рекомбинация, выполняющие переключение изотипа. Используемый в описании термин "класс-свич последовательность=последовательность на этапе переключения" относится к последовательностям ДНК, которые отвечают за класс-свич рекомбинацию(рекомбинацию на этапе переключения). Последовательность "донор-переключатель", обычнообласть переключения, составит 5' (т.е. выше по потоку) от конструкционной области, подлежащей удалению во время рекомбинации на этапе переключения. Область "акцептора-переключателя" будет находиться между удаляемой конструкционной областью и C-областью замещения (например, , , etc.). Поскольку отсутствует активный центр, где всегда происходит рекомбинация, по конструкции обычно нельзя предсказать окончательную генную последовательность."Антиген" - это объект (например, напоминающий белок объект или пептид), с которым связываются антитело или его антигенсвязывающая часть. В различных примерах осуществления настоящего изобретения антиген - это ErbB3 или ErbB3-подобная молекула. В конкретном примере согласно изобретению антиген - это ErbB3 человека. Термин "эпитоп" или "антигенная детерминанта" относится к сайту на антигене, с которым реально связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитопы могут быть сформированы из заменимых или не-8 020465 заменимых аминокислот, размещенных рядом с помощью третичной укладки белка. Эпитопы, образованные из заменимых аминокислот, обычно сохраняются под воздействием денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные третичной укладкой, обычно погибают при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп обычно включает как минимум 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в одной пространственной конформации. Способы определения пространственной конформации эпитопов включают известные в этой области технологии и описанные здесь технологии, например, рентгенокристаллографию и 2-мерный ядерный магнитный резонанс. См., например, EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology. - Протоколы картирования эпитопов в технологии в молекулярной биологии, vol. 66, G.E. Morris, Ed. (1996). Настоящее изобретение также рассматривает и антитела, которые связывают такой же или перекрывающий эпитоп, что и антитела по настоящему изобретению, т.е. антитела, конкурирующие за связывание с ErbB3, или связывают эпитопы, перекрывающиеся с эпитопами, связанными антителами, описанными здесь, т.е. эпитоп, расположенный на домене I ErbB3. Антитела, которые распознают аналогичный эпитоп, можно идентифицировать с помощью обычных технологий, таких как иммунологический анализ, например демонстрируя способность одного антитела блокировать связывание другого антитела с антиген-мишенью, т.е. конкурентно-связывающий анализ. Конкурентное связывание определяется при анализе, в котором иммуноглобулин при испытании ингибирует специфическое связывание эталонного антитела с общим антигеном, таким как ErbB3. Известны разные типы конкурентно-связывающего анализа, например твердофазный прямой или непрямой радиоиммунный анализ (RIA), твердофазный прямой или непрямой иммуноферментный анализ (EIA), конкурентный сэндвич-анализ (см., Stahli et al.,(1983), Methods in Enzymology. - Методика в ферментологии 9:242); твердофазный прямой биотинавидин EIA (см. Kirkland et al. (1986), J. Immunol. 137:3614). Твердофазный прямой анализ на основе меток, твердофазный прямой сэндвич-анализ на основе меток (см., Harlow и Lane (1988), Antibodies. - Антитела: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); твердофазный прямой RIA на основе меток с использованием 1-125 метки (см. Morel et al. (1988), Mol. Immunol. 25(1):7); твердофазный прямой биотинавидин EIA (Cheung et al. (1990), Virology, 176:546) и прямой RIA на основе меток (Moldenhauer et al.(1990), Scand. J. Immunol. 32:77). Как правило, в таком анализе используется очищенный антиген (например, ErbB3), связанный с твердой поверхностью или клетками, содержащими один из: немеченый испытательный иммуноглобулин и меченый эталонный иммуноглобулин. Конкурентное ингибирование измеряется путем определения количества метки, связанной с твердой поверхностью или клетками при наличии испытательного иммуноглобулина. Обычно испытательный иммуноглобулин присутствует в избытке. Обычно, когда конкурирующее антитело присутствует в избытке, оно будет ингибировать специфическое связывание эталонного антитела с общим антигеном как минимум на 50-55%, 55-60%,60-65%, 65-70%, 70-75% или более. Используемые в описании термины "специфическое связывание", "специфически связывается", "селективное связывание" и "селективно связывается" означают, что антитело или его антигенсвязывающая часть обнаруживают заметное сродство к конкретному антигену или эпитопу и, в общем, не проявляют достоверной перекрестной реактивности с другими антигенами и эпитопами. "Заметное" или предпочтительное связывание включает связывание со значениями сродства как минимум 106, 107, 108, 109 или 1010 М-1. Более предпочтительны значения сродства свыше 107 М-1, лучше свыше 108 М-1. Также подразумевается, что средние из сформулированных здесь значений входят в объем настоящего изобретения, и предпочтительное сродство к связыванию можно обозначить как диапазон значений сродства, например от 106 до 1010 М-1, предпочтительно от 107 до 1010 М-1, лучше всего от 108 до 1010 М-1. Антитело, которое"не обнаруживает достоверной перекрестной реактивности", - это антитело, которое не будет заметно связываться с нежелательным объектом (например, нежелательным напоминающим белок объектом). Например, в одном из примеров осуществления изобретения антитело или его антигенсвязывающая часть, которые определенно связываются с ErbB3, будут, в частности, связываться с молекулой этогоErbB3, но не будут достоверно вступать в реакцию с молекулами других ErbB и не-ErbB белками или пептидами. Специфическое или селективное связывание можно определить по любой известной методике для определения такого связывания, включая, например, Scatchard анализ и/или конкурентносвязывающие анализы. Термин "KD", используемый в тексте описания, подразумевает константу диссоциативного равновесия особого взаимодействия антитело-антиген или сродство антитела к антигену. В одном из примеров антитело или его связывающая часть по настоящему изобретению связывают антиген (например, ErbB3) со сродством (KD) 50 нМ или лучше (т.е. или меньше) (например, 40, или 30, или 20, или 10 нМ, или меньше), при измерении с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса или анализа клеточного связывания. В конкретном примере антитело или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению связывает ErbB3 со сродством (KD) 8 нМ или лучше (например, 7, 6, 5, 4, 2, 1.5, 1.4, 1.3,1 нМ или меньше) при измерении с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса или анализа клеточного связывания. В других примерах антитело или его антигенсвязывающая часть связывают антиген (например, ErbB3) со сродством (KD) приблизительно менее 10-7 М, а именно приблизительно менее 10-8, 10-9 или 10-10 М или еще меньше при определении с помощью технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR), прибор BIACORE 3000, с использованием рекомбинантного ErbB3 в качестве анализируемого вещества (аналита) и антитела в качестве лиганда и связывается с заданным антигеном со сродством, которое как минимум в два раза больше его сродства к связыванию с неспецифическим антигеном (например, BSA, казеин), за исключением заданного антигена или близкородственного антигена. Термин "Koff", используемый в данном описании, подразумевает отношение к константе скорости диссоции для диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген. Термин "ЕС 50", используемый в тексте описания, относится к концентрации антитела или его антигенсвязывающей части, вызывающей ответную реакцию, либо in vitro, либо in vivo анализа, что составляет 50% максимальной реакции, т.е. находится посередине между максимальной реакцией и исходным уровнем. Используемый в документе термин "структура гликозилирования" определяется как структура углеводных единиц, которые ковалентно присоединены к белку, более определенно к белку иммуноглобулина. Термин "естественный", используемый в тексте применительно к объекту, относится к факту того,что объект можно найти в природе. Например, полипептидная или полинуклеотидная последовательность, которая присутствует в организме (включая вирусы), которую можно выделить из источника в природе и которая не была специально модифицирована человеком в лаборатории, является естественной. Термин "реаранжированный", используемый в описании, относится к конфигурации локуса иммуноглобулина тяжелой или легкой цепи, в котором V-сегмент располагается непосредственно рядом с сегментом D-J или J в конформации, кодирующей в основном весь VH или VL домен соответственно. Реаранжированный локус иммуноглобулинового гена можно идентифицировать путем сравнения с зародышевой ДНК; реаранжированный локус будет иметь как минимум один рекомбинированный семизвенный/девятизвенный гомологический элемент. Термин "нереаранжированный" или "зародышевая конфигурация", используемый в тексте описания в применении к V сегменту, относится к конфигурации, в которой V-сегмент не рекомбинирован настолько, чтобы он находился непосредственно рядом с D или J сегментом. Термин "молекула нуклеиновой кислоты", используемый в описании, подразумевает, что он включает молекулы ДНК и молекулы РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть однонитевой или двунитевой, но предпочтительно двунитевой ДНК. Термин "изолированная молекула нуклеиновой кислоты", используемый в тексте описания применительно к нуклеиновым кислотам, кодирующим антитела или части антитела (например, VH, VL, CDR3),которые связываются с ErbB3, относится к молекуле нуклеиновой кислоты, в которой нуклеотидные последовательности, кодирующие антитело или часть антитела, не содержат другие нуклеотидные последовательности, кодирующие антитела, связывающиеся с антигенами, исключая ErbB3, другие последовательности могут свободно примыкать к нуклеиновой кислоте в человеческой геномной ДНК. Термин "модифицирование" или "модификация", по использованию здесь, подразумевает изменение одной или более аминокислот в антителах или их антигенсвязывающих частях. Изменение может быть достигнуто добавлением, замещением или удалением аминокислоты в одной или более позициях. Изменение может быть достигнуто путем применения известных технологий, таких как PCR мутагенез. Например, в некоторых примерах антитело или его антигенсвязывающая часть, идентифицированные с помощью методов по изобретению, могут быть модифицированы и, таким образом, модифицировать сродство к связыванию антитела или его антигенсвязывающей части с ErbB3. Настоящее изобретение также рассматривает "консервативные замещения аминокислоты" в последовательностях антител по изобретению, т.е. модификации нуклеотидной и аминокислотной последовательности, которые не отменяют связывание антитела, кодированного нуклеотидной последовательностью или содержащего аминокислотную последовательность, с антигеном, т.е. ErbB3. Консервативные замещения аминокислоты включают замещение аминокислоты в одном классе аминокислотой того же класса, где класс определяется общими физико-химическими свойствами боковой цепи аминокислоты и высокими концентрациями замещения в гомологических белках, обнаруженных в природе, как определено, например, с помощью стандартной частотообменной диаграммой Дайхоффа или диаграммой BLOSUM. Классифицировано шесть общих классов аминокислотных цепей, которые включают: Класс I(Ile, Leu, Val, Met) и Класс VI (Phe, Tyr, Trp). Например, замещение Asp на остаток другого класса III,такого как Asn, Gln или Glu, является консервативным замещением. Таким образом, предсказанный остаток заменимой аминокислоты в анти-ErbB3 антителе предпочтительно заменяется другим аминокислотным остатком из того же класса. Способы идентификации нуклеотидных и аминокислотных консервативных замещений, которые не исключают антигенсвязывания, хорошо известны (см., например,Brummell et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999) и Burks Термин "неконсервативные замещения аминокислоты" относится к замещению аминокислоты в одном классе аминокислотой из другого класса; например, замещение Ala, остаток класса II, остатком класса III, например Asp, Asn, Glu или Gln. Наоборот, в другом примере мутации (консервативные или неконсервативные) можно вводить беспорядочно на всей или на части последовательности, кодирующей анти-ErbB3 антитело, такие как мутагенез насыщенности, и получаемые в результате модифицированные анти-ErbB3 антитела можно профильтровать по активности связывания."Согласованная последовательность" - это последовательность, образованная из наиболее часто встречающихся аминокислот (или нуклеотидов) в семействе связанных последовательностей (см., например, Winnaker, From Genes to Clones. - От генов к клонам) (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987). В семействе белков каждая позиция в согласованной последовательности занята аминокислотой,наиболее часто встречающейся в этой позиции в семействе. Если две аминокислоты встречаются одинаково часто, любая из них может быть включена в согласованную последовательность. "Согласованный каркас" иммуноглобулина относится к каркасной области в согласованной иммуноглобулиновой последовательности. Аналогичным образом согласованную последовательность для CDR-участков можно получить оптимальным совмещением CDR аминокислотных последовательностей ErbB3 антител по настоящему изобретению. Для нуклеиновых кислот термин "существенная гомология" показывает, что две нуклеиновые кислоты или их обозначенные последовательности при оптимальном совмещении и сравнении идентичны с присущими нуклеотидными вставками нуклеотида или исключениями как минимум приблизительно в 80% нуклеотидов, обычно как минимум приблизительно в 90-95% и более предпочтительно как минимум приблизительно в 98-99,5% нуклеотидов. Альтернативно, существенная гомология встречается, когда сегменты скрещиваются в условиях селективной гибридизации с комплементом нити. Процентное сходство двух последовательностей - это функция количества идентичных позиций,общих для последовательностей (т.е. % гомология = количество идентичных позиций/суммы количества позиций 100), с учетом количества пропусков=гэпов и длины каждого пропуска, которые необходимо ввести для оптимального совмещения этих двух последовательностей. Сравнить последовательности и определить процентное сходство двух последовательностей можно с помощью математического алгоритма, как описано в примерах ниже, которые этим не ограничиваются. Процентное сходство двух нуклеотидных последовательностей можно определить с помощью программы GAP в программном обеспечении GCG, с применением NWSgapdna. CMP матрица и значение пропуска 40, 50, 60, 70 или 80 и значение длины 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Процентное сходство двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей можно также определить с помощью алгоритма Е. Мейерса и В. Миллера (Е. Meyers and W. Miller) (CABIOS, 4:11-17 (1989, который включен в ALIGN программу (версия 2.0), с применением таблицы остатка значения РАМ 120, штраф за длину пропуска в последовательности 12 и штраф за пропуск в последовательности 4. Кроме того, процентное сходство двух аминокислотных последовательностей можно определить с помощью алгоритма Нидлмана и Вунша(Needleman и Wunsch) (J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970, который включен в GAP программу в пакете программ GCG, с применением либо Blossum 62 матрицы, либо РАМ 250 матрицы, значение пропуска 16,14, 12, 10, 8, 6 или 4 и значение длины 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Нуклеиново-кислотные и белковые последовательности в соответствии с настоящим изобретением можно, кроме того, использовать как "запросную последовательность" для поиска по общей базе данных,например, чтобы идентифицировать сходные последовательности. Такие исследования можно выполнять с помощью программ NBLAST и XBLAST (версия 2.0), Altschul, et al. (1990), J. Mol. Biol. 215:403-10.BLAST поиски нуклеотида можно выполнять с помощью программы NBLAST, оценка = 100, длина слова = 12 для получения нуклеотидной последовательности, гомологичной молекулам нуклеиновой кислоты по изобретению. BLAST поиски белка можно выполнять с помощью программы XBLAST, оценка = 50, длина слова = 3 для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных молекулам белка согласно изобретению. Чтобы получить совмещения с разрывами в целях сравнения, можно использовать Gapped BLAST, как описано в Altschul. et al. (1997), Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402. При применении программ BLAST и Gapped BLAST можно использовать значения параметров по умолчанию соответствующих программ (например, XBLAST и NBLAST). Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в целых клетках, в клеточном лизате или в частично очищенной или в основном чистой форме. Нуклеиновая кислота "изолированная", или "считающаяся в основном чистой", если она очищена от других клеточных компонентов или других загрязнителей, например других клеточных нуклеиновых кислот или белков, с помощью стандартных технологий, включая щелочную обработку/обработку додецилсульфатом натрия (SDS), CsCl связывание, колоночную хроматографию, электрофорез в агарозном геле и др., известные в этой области технологии. См., F. Составы нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению, находясь часто в природной последовательности (за исключением модифицированных сайтов рестрикции и т.п.), из ДНК, геномной или их смесей могут видоизменяться, в соответствии со стандартными технологиями для создания генных последовательностей. Для кодирующих последовательностей эти мутации могут действовать на аминокислотную последовательность по мере необходимости. В частности, рассматриваются последовательности ДНК, существенно гомологичные к или полученные из нативной (природной) константы V, D, J,переключателей и других подобных последовательностей, описание которых приведено здесь (где "полученные" означает, что последовательность идентична другой последовательности или модифицирована из нее). Термин "оперативно связанный" относится к нуклеиново-кислотной последовательности, находящейся в функциональном отношении с другой нуклеиново-кислотной последовательностью. Например,ДНК для предпоследовательности или секреторной лидерной последовательности оперативно связана с ДНК для полипептида, если она экспрессирована как предбелок, который участвует в секреции полипептида; промотор или энхансер оперативно связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности; или участок связывания рибосомы оперативно связан с кодирующей последовательностью, если он размещен так, чтобы упростить трансляцию. В общем, "оперативно связанный" означает, что связываемые последовательности ДНК смежны и в случае секреторной лидерной последовательности смежны и находятся в фазе считывания. Однако энхансеры не должны быть смежными. Сцепление достигается сшиванием на удобных сайтах рестрикции. Если такие сайты не существуют, используются синтетические олигонуклеотидные держатели или сшивающие агенты в соответствии с обычной практикой. Нуклеиновая кислота "оперативно связана", когда она находится в функциональном отношении с другой нуклеиново-кислотной последовательностью. Например, промотор или энхансер оперативно связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности. Относительно регулирующих транскрипцию последовательностей термин "оперативно связанный" означает, что связываемые последовательности ДНК смежны и, когда необходимо присоединить две кодирующие белок области, смежны и находятся в рамке считывания. Для последовательностей переключения оперативно связанный означает, что последовательности способны к осуществлению рекомбинации на этапе переключения. Термин "вектор", по использованию здесь, относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Один тип вектора - это "плазмида", относящийся к круговой двунитевой петле ДНК, в которую могут быть лигированы дополнительные сегменты ДНК. Другой тип вектора - это вирусный вектор, в котором дополнительные сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Некоторые векторы способны к независимой репликации в клетке-хозяине, в которую они введены (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный репликатор и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомальные векторы млекопитающих) могут объединяться сгеномом клетки-хозяина после введения в клетку-хозяин и,таким образом, воспроизводятся вместе с геномом хозяина. Кроме того, некоторые векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они оперативно связаны. Такие векторы называются здесь"векторы рекомбинантной экспрессии" (или просто "векторы экспрессии"). В общем, векторы экспрессии в применении в технологиях рекомбинантных ДНК часто находятся в форме плазмид. Термины"плазмида" и "вектор" могут использоваться попеременно. Однако изобретение рассчитано на включение и других подобных форм векторов экспрессии, таких как вирусные векторы (например, дефективные ретровирусы репликации, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), которые выполняют эквивалентные функции. Термин "рекомбинантная клетка-хозяин" (или просто "клетка-хозяин"), по использованию здесь,относится к клетке, в которую введен вектор рекомбинантной экспрессии. Следует понимать, что такие термины относятся не только к конкретной клетке-объекту, но и потомству такой клетки. Поскольку некоторые модификации могут встречаться в последующих поколениях вследствие мутации или экологических воздействий, такое потомство не может быть, в действительности, идентично материнской клетке, но еще включено в рамки термина "клетка-хозяин", используемого в тексте настоящего описания. Термины "лечить" и "лечение", используемые в описании, относятся к терапевтическим или профилактическим мерам, описание которых приводится здесь. В методах "лечения" используется введение субъекту антитела или его антигенсвязывающую часть в соответствии с настоящим изобретением, например субъекту, имеющему болезнь или нарушение, ассоциированное с ErbB3-зависимой передачей сигнала, или предрасположенному к наличию такой болезни или нарушению, с целью предотвращения,излечения, замедления, уменьшения тяжести заболевания или улучшения одного или более симптомов болезни или нарушения или повторяющейся болезни или нарушения, или чтобы продлить выживание субъекта сверх ожидаемого при отсутствии такого лечения. Термин "ассоциированный с болезнью с ErbB3-зависимой передачей сигнала" или "ассоциированный с нарушением с ErbB3-зависимой передачей сигнала", по использованию здесь, включает болезненное состояние и/или симптомы, ассоциированные с болезненным состоянием, когда обнаружены повышенные уровни ErbB3 и/или активация клеточных каскадов, содержащих ErbB3. Само собой разумеется,- 12020465 что ErbB3 гетеродимеризируется с другими ErbB белками, такими как EGFR и ErbB2, когда обнаружены повышенные уровни ErbB3. Соответственно, термин "ассоциированный с болезнью с ErbB3-зависимой передачей сигнала" также включает болезненные состояния и/или симптомы, ассоциированные с болезненными состояниями, когда обнаружены повышенные уровни EGFR/ErbB3 и/или ErbB2/ErbB3 гетеродимеров. В общем, термин "ассоциированный с болезнью с ErbB3-зависимой передачей сигнала" относится к любому нарушению, началу, развитию или стойкости симптомов, для которых требуется участиеErbB. Типичные ErbB3-опосредованные нарушения включают, но не ограничиваются этим, например,рак. Термины "рак" и "раковый" относятся к физиологическому состоянию или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым ростом клетки. Примеры рака включают, но не ограничены, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные примеры таких злокачественных опухолей включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, рак желудка, панкреатический рак (поджелудочной железы),опухоли глиальных клеток, такие как глиобластома и нейрофиброматоз, рак шейки матки, рак яичников,рак печени, рак мочевого пузыря, гепатома, рак молочной железы, рак толстой кишки, меланома, колоректальный рак, эндометриальный рак, рак слюнной железы, рак почек, ренальный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, рак печени и различные типы рака шеи и головы. В конкретном примере рак, лечение или диагностирование которого проводится с помощью методов по настоящему изобретению, выбирается из группы, включающей меланому, рак молочной железы, рак яичников, ренальный рак, рак желудочно-кишечного тракта/рак толстой кишки, рак легкого и рак предстательной железы. Термин "эффективное количество", используемый в описании, относится к такому количеству антитела или его антигенсвязывающей части, связывающего ErbB3, которого достаточно для осуществления лечения, прогнозирования или диагностирования болезни, ассоциированной с ErbB3-зависимой передачей сигналов, согласно приведенному здесь описанию, при введении субъекту. Терапевтически эффективное количество будет изменяться в зависимости от субъекта и состояния болезни, веса и возраста субъекта, степени тяжести заболевания, способа введения и т.п., что может быть легко определено любым специалистом. Дозировки для введения могут варьироваться, например, от приблизительно 1 нг до приблизительно 10000 мг, от приблизительно 5 нг до приблизительно 9500 мг, от приблизительно 10 нг до приблизительно 9000 мг, от приблизительно 20 нг до приблизительно 8500 мг, от приблизительно 30 нг до приблизительно 7500 мг, от приблизительно 40 нг до приблизительно 7000 мг, от приблизительно 50 нг до приблизительно 6500 мг, от приблизительно 100 нг до приблизительно 6000 мг, от приблизительно 200 нг до приблизительно 5500 мг, от приблизительно 300 нг до приблизительно 5000 мг, от приблизительно 400 нг до приблизительно 4500 мг, от приблизительно 500 нг до приблизительно 4000 мг, от приблизительно 1 мкг до приблизительно 3500 мг, от приблизительно 5 мкг до приблизительно 3000 мг,от приблизительно 10 мкг до приблизительно 2600 мг, от приблизительно 20 мкг до приблизительно 2575 мг, от приблизительно 30 мкг до приблизительно 2550 мкг, от приблизительно 40 мкг до приблизительно 2500 мг, от приблизительно 50 мкг до приблизительно 2475 мг, от приблизительно 100 мкг до приблизительно 2450 мг, от приблизительно 200 мкг до приблизительно 2425 мг, от приблизительно 300 мкг до приблизительно 2000 мг, от приблизительно 400 мкг до приблизительно 1175 мг, от приблизительно 500 мкг до приблизительно 1150 мг, от приблизительно 0,5 до приблизительно 1125 мг, от приблизительно 1 до приблизительно 1100 мг, от приблизительно 1,25 до приблизительно 1075 мг, от приблизительно 1,5 до приблизительно 1050 мг, от приблизительно 2 до приблизительно 1025 мг, от приблизительно 2,5 до приблизительно 1000 мг, от приблизительно 3 до приблизительно 975 мг, от приблизительно 3,5 до приблизительно 950 мг, от приблизительно 4 до приблизительно 925 мг, от приблизительно 4,5 до приблизительно 900 мг, от приблизительно 5 до приблизительно 875 мг, от приблизительно 10 до приблизительно 850 мг, от приблизительно 20 до приблизительно 825 мг, от приблизительно 30 до приблизительно 800 мг, от приблизительно 40 до приблизительно 775 мг, от приблизительно 50 до приблизительно 750 мг, от приблизительно 100 до приблизительно 725 мг, от приблизительно 200 до приблизительно 700 мг, от приблизительно 300 до приблизительно 675 мг, от приблизительно 400 до приблизительно 650 мг, от приблизительно 500 или приблизительно 525 до приблизительно 625 мг антитела или его антигенсвязывающей части согласно настоящему изобретению. Регламенты дозирования можно регулировать для обеспечения оптимальной терапевтической реакции. Эффективное количество - это также количество, при котором любые токсические или вредные эффекты (т.е. побочные эффекты) антитела или его антигенсвязывающей части сводятся к минимуму и/или компенсируются полезными эффектами. Термин "пациент" включает человеческие и другие млекопитающие субъекты, которым предоставляется профилактическое или терапевтическое лечение. Используемый в настоящем описании термин "субъект" означает любого человека или живой организм помимо человека. Например, методы и составы в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться для лечения субъекта, болеющего раком. В конкретном примере субъект - это человек. Термин "не принадлежащий человеческому роду живой организм" включает всех позвоночных животных, например млекопитающих и немлекопитающих, таких как приматы, исключая человека, овцы, со- 13020465 баки, коровы, куры, земноводные, рептилии и т.д. Термин "образец" относится к ткани, жидкости организма или клетке, взятой у пациента или субъекта. Обычно ткань или клетку берут у пациента, но диагноз in vivo также рассматривается. В случае наличия солидной опухоли образец ткани можно брать из хирургически удаленной опухоли и подготовить для исследования, используя обычные технологии. В случае наличия лимфом и лейкозов можно брать лимфоциты, лейкозные клетки или ткани лимфы и соответственно их подготовить. Другие образцы пациента, включая мочу, слезы, серологическую, цереброспинальную жидкость, экскременты, мокроту,экстракты клетки и т.п., могут быть также пригодны для специфических опухолей. Термины "противоопухолевый препарат" и "антибластомное средство" относится к препаратам, которые используются для лечения злокачественных новообразований, например раковых опухолей. Лекарственная терапия может использоваться самостоятельно или в сочетании с другими методами лечения, такими как хирургическое вмешательство или лучевая терапия. В лечении рака могут использоваться несколько классов препаратов, в зависимости от характера затронутого органа. Например, рак молочной железы обычно стимулируется эстрогенами, и его можно лечить препаратами, которые инактивируют половые гормоны. Таким же образом рак предстательной железы можно лечить препаратами, которые инактивируют андрогены, мужской половой гормон. Противоопухолевые препараты по настоящему изобретению включают, среди прочих, следующие средства. Один или несколько антираковых препаратов можно вводить либо одновременно, либо перед или после введения антитела или его антигенсвязывающей части согласно настоящему изобретению. В последующих подразделах приводится подробное описание различных особенностей изобретения.II. Способы получения антител в соответствии с изобретением.(i) Моноклональные антитела. В соответствии с настоящим изобретением моноклональные антитела можно получить разными известными способами, такими как стандартная технология гибридизации соматических клеток, описание которой дано Kohler и Milstein (1975), Nature, 256:495, вирусная или онкогенная трансформация В-лимфоцитов или технология фагового дисплея с использованием библиотеки генов антитела человека. В конкретных примерах осуществления настоящего изобретения антитела - это полностью моноклональные антитела человека. Соответственно, в одном из примеров используется метод гибридомы для получения антитела, которое связывает ErbB3. В данном методе мышь или другое соответствующее животное-хозяин может быть иммунизировано подходящим антигеном для выявления лимфоцитов, производящих или способных производить антитела, которые определенно свяжутся с антигеном, используемым для иммунизации. В качестве варианта лимфоциты могут быть иммунизированы in vitro. Лимфоциты могут затем сливаться с миеломными клетками с помощью пригодного, вызывающего слияние клеток фактора, такого как полиэтиленгликоль, с образованием клетки гибридомы (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles andPractice, p.59-103 (Academic Press, 1986. Питательная среда, в которой растут клетки гибридомы, анализируется на получение моноклональных антител, направленных против антигена. После идентификации клеток гибридомы, производящих антитела нужной специфичности, аффинности и/или активности, клоны могут быть подклонированы с помощью ограничения разведения и выращены стандартными способами (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, p. 59-103 (Academic Press, 1986. Подходя- 19020465 щие для этой цели питательные среды включают, например, питательную среду D-MEM или RPMI-1640. Кроме того, клетки гибридомы могут быть выращены in vivo как опухоли асцита у животного. Моноклональные антитела, выделенные субклонами, можно выделить из питательной среды, жидкости асцита или сыворотки обычными процедурами очистки иммуноглобулина, такими, например, как использование белка A-сефароза, гидроксиапатитовая хроматография, электрофорез в геле, диализ или аффиная хроматография. В другом примере осуществления антитела и части антитела, которые связываются с ErbB3, можно выделить из библиотек фагов антитела с помощью технологий, описанных, например, в McCafferty et al.,Nature, 348:552-554 (1990). Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991), Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581597 (1991) и Hoet et al. (2005), Nature Biotechnology, 23, 344-348; патент США 5223409; 5403484 и 5571698, Ladner et al.; патент США 5427908 и 5580717, Dower et al.; патент США 5969108 и 6172197, McCafferty et al. и патент США 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915 и 6593081,Griffiths et al. Кроме того, можно использовать получение человеческих антител (пМ диапазон) высокой аффинности (подобия) путем перетасовки цепи (Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992, а также комбинаторную инфекцию и рекомбинацию in vivo как стратегию создания больших фаговых библиотек(Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res., 21:2265-2266 (1993. В конкретном примере осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, связывающиеся с ErbB3, получают с помощью технологии фагового дисплея, изложенной в Hoetet al., выше. В эту технологию входит генерация Fab-библиотеки человека с уникальной комбинацией иммуноглобулиновых последовательностей, выделенных у человеческих доноров и имеющих синтетическое разнообразие в CDR тяжелой цепи. Затем библиотека сортируется по Fab, которые связываются сErbB3. В еще одном из примеров осуществления моноклональные антитела человека, направленные против ErbB3, можно генерировать с помощью трансгенных или трансхромосомных мышей, носителей частей иммунной системы человека, вместо системы мыши (см., например, Lonberg, et al. (1994), Nature,368(6474):856-859; Lonberg, N. et al. (1994), выше; рассмотренный в Lonberg, N. (1994), Handbook ofExperimental Pharmacology. - Руководство no экспериментальной фармакологии, 113:49-101; Lonberg, N. и Huszar, D. (1995), Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 и Harding, F. и Lonberg, N. (1995), Ann. NY. Acad. Sci. 764:536-546. См. также патенты США 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429; авторы всех публикаций Lonberg и Kay; патент США 5545807,Surani et al.; PCT публикацииWO 92/03918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97/13852, WO 98/24884 иWO 99/45962, авторы всех публикаций Lonberg и Kay и PCT публикацияWO 01/14424, Korman et al.). В другом примере осуществления человеческие антитела согласно изобретению можно индуцировать с помощью мыши, являющейся носителем человеческих иммоглобулиновых последовательностей на трансгенах и трансхромосомах, таких как мышь, являющаяся носителем человеческого трансгена тяжелой цепи и человеческой трансхромосомы легкой цепи (см., например, РСТ публикации WO 02/43478,Ishida et al.). Далее, альтернативные трансгенные системы животного, экспрессирующие человеческие иммуноглобулиновые гены, доступны в этой области и могут использоваться для увеличения анти-ErbB3 антител в соответствии с настоящим изобретением. Например, можно использовать альтернативную трансгенную систему, получившую название Xenomouse (Abgenix, Inc); такие мыши описаны, например, в патенте США 5939598; 6075181; 6114598; 6150584 и 6162963, Kucherlapati et al. Кроме того, альтернативная трансхромосомная система животного, экспрессирующая иммуноглобулиновые гены человека, доступна в этой области и может использоваться для увеличения анти-ErbB3 антител согласно изобретению. Например, могут использоваться мыши, содержащие как трансхромосому тяжелой цепи человека, так и трансхромосому легкой цепи человека; как описано в Tomizuka et al.(2000), Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97:722-727. Более того, имеются описания коров, являющихся носителем человеческой трансхромосомы тяжелой и легкой цепей (Kuroiwa et al. (2002), Nature Biotechnology,20:889-894), и их можно использовать для увеличения анти-ErbB3 антител в соответствии с настоящим изобретением. В следующем примере антитела согласно настоящему изобретению можно приготовить с помощью трансгенного растения и/или клеток культивируемых растений (таких как, например, табак, кукуруза и ряска), которые вырабатывают такие антитела. Например, листья трансгенного табака, экспрессирующие антитела или их антигенсвязывающие части, можно использовать для получения таких антител, например применяя индуцибельный промотор (см., например, Cramer et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 240:95-118 (1999. Также можно использовать трансгенную кукурузу для экспрессии таких антител или их антигенсвязывающих частей (см., например, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999. Антитела можно также получать в больших количествах из семян трансгенного растения, включая части антитела, такие как антитела одиночной цепи (scFv's), например используя семена табака и клубни картофеля (см., например, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998. Способы получения антител или их антигенсвязывающих частей можно также найти, например, в Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. 109:341-6 (1995);Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994) и патентах США 6040498 и 6815184. Специфичность связывания моноклональных антител или их частей, которые связывают ErbB3,приготовленный по любой технологии, включая технологии, описание которых дано здесь, можно определить иммунопреципитацией или анализом связывания in vitro, таким как радиоиммуноанализ (RIA) или энзим-связанный иммуноадсорбентный анализ (ELISA). Сродство к связыванию моноклонального антитела или его части также можно определить с помощью анализа Scatchard, Munson et al., Anal.Biochem., 107:220 (1980). В некоторых примерах осуществления изобретения антитело ErbB3 или его часть, полученные любым из описанных выше способов, можно дополнительно изменять или оптимизировать для достижения желаемой специфичности связывания и/или сродство к связыванию с помощью известных технологий,таких как, например, описаны здесь. В одном из примеров осуществления частичные последовательности антитела, полученные из антитела ErbB3, можно использовать для получения структурно и функционально родственных антител. Например, антитела взаимодействуют с антиген-мишенями преимущественно через аминокислотные остатки, которые расположены в шести гипервариабельных участках (CDR) тяжелой и легкой цепей. Поэтому аминокислотные последовательности в пределах CDR-участков в большей мере различны между отдельными антителами, чем между последовательностями вне CDR-участков. Поскольку CDR последовательности отвечают за большинство взаимодействий антитело-антиген, можно экспрессировать рекомбинантные антитела, имитирующие свойства специфических естественных антител, построением векторов экспрессии, которые включают CDR-последовательности из специфического естественного антитела,пересаженного на каркасные последовательности из другого антитела с другими свойствами (см., например, Riechmann, L. et al., 1998, Nature, 332:323-327; Jones, P. et al., 1986, Nature, 321:522-525 и Queen,С. et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:10029-10033). Такие каркасные последовательности можно получать из общих баз данных ДНК, содержащих последовательности гена антитела эмбрионального типа. Таким образом, один или более структурных признаков анти-ErbB3 антитела согласно изобретению, таких как, например, CDR, можно использовать для создания структурно родственных анти-ErbB3 антител, которые сохраняют как минимум одно функциональное свойство антител в соответствии с настоящим изобретением, например ингибирование опосредованного EGF-подобным лигандом фосфорилирования ErbB3; ингибирование передачи сигналов, опосредованной одним или несколькими из: херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин, через ErbB3; ингибирование пролиферации или клеток, экспрессирующих ErbB3; и/или снижение уровней ErbB3 на поверхностях клеток. В конкретном примере осуществления один или более CDR-участков, отобранных из последовательностей SEQ ID NO:7-12, SEQ ID NO:13-18, SEQ ID NO:19-24, SEQ ID NO:39-44 и SEQ ID NO:45-50,объединены рекомбинантно с известными человеческими каркасными областями и CDR-участками для создания дополнительных рекомбинантно-сконструированных анти-ErbB3 антител по изобретению. Вариабельные каркасные области тяжелой и легкой цепей можно получать из одних и тех же различных последовательностей антитела. Специалистам в этой области хорошо известно, что CDR3-домены тяжелой и легкой цепей антитела играют особо важную роль в специфичности/сродстве к связыванию антитела относительно антигенаChem. Soc., 116:2161-2162 (1994); Ditzel et al., J. Immunol., 157:739-749 (1996. Соответственно, в некоторых примерах генерированы антитела, включающие CDR3-участки тяжелой и/или легкой цепи специфических антител, описанных здесь (например, SEQ ID NO:9, 15, 21, 41, 47 и/или SEQ ID NO:12, 18, 24,44, 50). Антитела могут дополнительно включать CDR1 и/или CDR2 участки тяжелой и/или легкой цепи антител согласно настоящему изобретению (например, SEQ ID NO:7, 8 и/или SEQ ID NO:10, 11;(например, CDR-участки Ab 6, Ab 3, Ab 14, Ab 17 или Ab 19, представленные в SEQ ID NO:7-12,13-18, 19-24, 39-44 и 45-50 соответственно). Однако рядовой специалист в этой области поймет, что некоторое отклонение от точных CDR-последовательностей возможно с сохранением способности антитела эффективно связываться с ErbB3 (например, консервативные замещения аминокислоты). Соответственно, в другом примере осуществления сконструированное антитело может состоять из одного или более CDR-участков, составляющих, например, 90, 95, 98, 99 или 99,5%, идентично одному или болееCDR-участков Ab 6, Ab 3 или Ab 14. В другом примере один или более остатков CDR могут быть изменены с целью модификации связывания для достижения более предпочтительной скорости ассоциации связывания. С помощью этой стратегии можно получить антитело со сверхвысоким сродством к связыванию, например 1010 М-1 или более. Можно применять хорошо известные технологии "созревания аффинности" и описанные здесь технологии для изменения CDR-участка(ов) с последующей фильтрацией получаемых молекул связывания для желаемого изменения связывания. Соответственно, по мере изменения CDR-участков изменения сродства к связыванию, а также иммуногенность можно контролировать и оценивать таким образом,чтобы получить антитело, оптимизированное для наилучшего связывания, и низкую иммуногенность. В дополнение к или вместо модификаций в пределах CDR-участков модификации можно также выполнять в пределах одного или более каркасных участков, FR1, FR2, FR3 и FR4, V-областей тяжелой и/или легкой цепи антитела, пока эти модификации не элиминируют сродство к связыванию антитела. В другом примере осуществления антитело дополнительно модифицируется относительно эффекторной функции, чтобы повысить эффективность антитела, например, при лечении рака. Для примера, в область Fc может(ут) вводиться остаток(и) цистеина, чем обеспечивается возможность образования межцепной дисульфидной связи в этой области. Полученное таким образом гомодимерное антитело может иметь улучшенную способность интернализации и/или комплемент-зависимый клеточный лизис и антитело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC). См. Caron et al., J. Exp. Med. 176:1191-1195 (1992) и Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992). Гомодимерные антитела с усиленной противоопухолевой активностью можно также приготовить с помощью гетеробифункциональных перекрестно сшивающих агентов, описанных в Wolff et al. Cancer Research, 53:2560-2565 (1993). В качестве примера, можно спроектировать антитело, имеющее сдвоенные Fc-области, которые тем самым могут иметь повышенный лизис комплимента и ADCC способности. См. Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230 (1989). Настоящее изобретение также рассматривает биспецифические антитела и иммуноконъюгаты, описание которых приводится ниже.(ii) Биспецифические антитела. В соответствии с настоящим изобретением биспецифические антитела включают как минимум одну специфичность связывания для ErbB3 и как минимум одну специфичность связывания для другого антигена, как, например, продукт онкогена. Биспецифические антитела можно приготовить в виде антител полной длины или фрагментов антитела (например, F(ab')2 биспецифические антитела). Способы создания биспецифических антител хорошо известны (см., например, WO 05/117973 иWO 06/091209). Например, получение биспецифических антител полной длины может быть основано на коэкспрессии двух иммуноглобулиновых пар тяжелой цепи-легкой цепи, где две цепи имеют разные специфичности (см., например, Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983. Дополнительные сведения о создании биспецифических антител можно найти, например, в Suresh al., Methods in Enzymology, 121:210(1986) и в Brennan al., Science, 229:81 (1985), в которых описан процесс химический связи для создания биспецифических антител. Также есть описания разных способов создания и выделения фрагментов биспецифических антител непосредственно из рекомбинантной клеточной культуры. Например, биспецифические антитела получены с помощью лейциновых застежек (см., например, Kostelny et al., J. Immunol.,148(5):1547-1553 (1992. Существуют публикации о другой стратегии создания фрагментов биспецифических антител при помощи одноцепных Fv (sFv) димеров (см., например, Gruber et al., J. Immunol.,152:5368 (1994. В конкретном примере биспецифическое антитело включает первое антитело или его связывающую часть, которая связывается с ErbB3, и второе антитело или его связывающую часть, которая связывается с ErbB2, ERbB3, ErbB4, EGFR, IGF1-R, c-МЕТ, Lewis Y, MUC-1, EpCAM, CA125, специфическим мембранным антигеном предстательной железы, PDGFR-, PDGFR-, c-KIT или любым из FGF-рецепторов.(iii) Иммуноконъюгаты. В соответствии с настоящим изобретением иммуноконъюгаты можно сформировать путем соединения антител или их антигенсвязывающих частей, описанных здесь, с другим терапевтическим средством. Пригодными средствами являются, например, цитотоксическое средство (например, химиотерапевтическое средство, токсин (например, ферментативно активный токсин бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения или его фрагменты) и/или радиоактивный изотоп (т.е. радиоконъюгат). Химиотерапевтические средства, используемые при создании таких иммуноконъюгатов, описаны выше. Ферментативно активные токсины и их фрагменты, которые можно использовать, включают дифтерийную A-цепь, несвязывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, экзотоксинную Aцепь (из синегнойной пневмонии), рициновую A-цепь, абриновую A-цепь, модесиновую A-цепь, альфасарцин, белки Aleurites fordii, диантин белки, белки Phytolaca americana (PAPI, PAPII и PAP-S), ингибитор момордики харантской, курцин, кротин, ингибитор сапаонарии целебной, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трикотесины. Существует целый ряд радиоизотопов для получения радиоконъюгатных анти-ErbB3 антител. Среди примеров 212Bi, 131I, 131In, 90Y и 186Re. В соответствии с настоящим изобретением иммуноконъюгаты можно создать с помощью разнообразных бифункциональных белок-связывающих средств,например(например, диметиладипинамид HCL), активные сложные эфиры (например, дисукцинимидил суберат),альдегиды (например, глутаральдегид), бис-азидо соединения (например, бис-(р-азидобензоил)- 22020465 гександиамин), производные бис-диазония (например, бис-(р-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (например, толиэн 2,6-диизоцианат) и соединения бис-активного фтора (например, 1,5-дифторо 2,4-динитробензол). Например, рециновый иммунотоксин можно приготовить по способу, описанному вVitetta et al., Science, 238:1098 (1987). Углерод-14-меченая 1-изоцианатобензил-3-метилдиэтилен триамин эпентауксусная кислота (MX-DTPA) является примером хелирующего агента для конъюгации радионуклеотида к антителу (см., например, WO 94/11026).III. Способы скрининга антител в соответствии с изобретением. После создания антител или антигенсвязывающих частей, которые связываются с ErbB3, такие антитела или их части можно определять по различным свойствам, например, описанным здесь, с помощью ряда известных в этой области анализов. В одном из примеров осуществления изобретения антитела или их антигенсвязывающие части определяются по способности ингибировать опосредованное EGF-подобным лигандом фосфорилированиеErbB3. Это можно выполнить путем обработки клеток, экспрессирующих ErbB3, EGF-подобным лигандом при наличии и отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части. После этого клетки можно лизировать, а необработанные лизаты центрифунгировать для удаления нерастворимого вещества. Фосфорилирование ErbB3 можно измерить, например, вестерн-блоттингом с последующим зондированием антифосфотирозиновым антителом, как описано в Kim et al. выше и в примерах ниже. В других примерах осуществления изобретения антитела и антигенсвязывающие части дополнительно определяются по одному или нескольким из следующих свойств: (1) ингибирование опосредованной ErbB3-лигандом (например, херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) передачи сигналов через ErbB3; (2) ингибирование пролиферации клеток, экспрессирующих ErbB3; (3) способность снижать уровни ErbB3 на поверхности клети (например, вызывая интернализацию ErbB3); (4) ингибирование VEGF секреции клеток, экспрессирующих ErbB3; (5) ингибирование перемещения клеток, экспрессирующих ErbB3; (6) ингибирование шаровидного роста клеток, экспрессирующих ErbB3; и/или (7) связывание с эпитопом, расположенным на домене I ErbB3, каждый из которых может быть легко измерен с помощью известных технологий и технологий, рассмотренных здесь. Ингибирование опосредованной одним херегулином, эпирегулином, эпигеном или бирегулином или их совокупностью передачи сигнала через ErbB3 можно легко измерить с помощью стандартных анализов, описание которых дано в Horst et al. выше. Например, способность антитела или его антигенсвязывающей части ингибировать опосредованную херегулином, эпирегулином, эпигеном или бирегулином передачу сигнала через ErbB3 можно измерить с помощью анализов киназной активности для известных субстратов ErbB3, таких, например, как SHC и PI3K, что описано, например, в Horst et al. выше,Sudo et al. (2000), Methods Enzymol., 322:388-92 и Morgan et al. (1990), Eur. J. Biochem., 191:761-767, после стимуляции одного херегулина, эпирегулина, эпигена или бирегулина или их совокупностью. Соответственно, клетки, экспрессирующие ErbB3, могут стимулироваться одним херегулином, эпирегулином,эпигеном или бирегулином или их совокупностью и культивироваться антителом-кандидатом или его антигенсвязывающей частью. Клеточные лизаты, приготовленные впоследствии из таких клеток, могут образовывать иммунопреципитат с антителом для субстрата ErbB3 (или белок в клеточном пути метаболизма, включающем ErbB3), например анти-JNK-1 антитело, и подвергаться анализу на активность киназы (например, активность JNK-киназы или активность PI3-киназы) с применением известных технологий. Уменьшение или полная потеря уровня или активности (например, активности киназы) ErbB3 субстрата или белка на пути, включающем ErbB3, при наличии антитела или его антигенсвязывающей части, относительно уровня или активности при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части,является индикатором антитела или его антигенсвязывающей части, которое ингибирует передачу сигналов, опосредованную одним херегулином, эпирегулином, эпигеном или бирегулином или их совокупностью. В некоторых примерах антитело или его антигенсвязывающая часть ингибируют опосредованнуюErbB3-лигандом (например, херегулином, эпирегулином, эпигеном или бирегулином) передачу сигналов уменьшением связывания одного херегулина, эпирегулина, эпигена или бирегулина или их совокупности, с ERbB3. Для выбора тех антител или их антигенсвязывающих частей, которые ингибируют связывание одного херегулина, эпирегулина, эпигена или бирегулина или их совокупности с ErbB3, клетки, экспрессирующие ErbB3 (например, MALME-3M клетки, как описано в примерах ниже), могут контактировать с меченым ErbB3-лигандом (например, меченный радиоизотопом херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) при отсутствии (контроль) или наличии анти-ErbB3 антитела или его антигенсвязывающей части. Если антитело или его антигенсвязывающая часть ингибируют херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин, связанный с ErbB3, то будет наблюдаться статистически значимое уменьшение количества восстановленной метки (например, меченный радиоизотопом херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) относительно количества при отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части. Антитело или его антигенсвязывающая часть могут ингибировать связывание ErbB3-лиганда (например, херегулин, эпирегулин, эпиген или бирегулин) любым механизмом. Например, антитело или его антигенсвязывающая часть могут ингибировать связывание ErbB3 лиганда (например, один херегулин,- 23020465 эпирегулин, эпиген или бирегулин или их совокупность) с ErbB3 за счет связывания с тем же участком или перекрывающимся участком на ErbB3, как ErbB3 лиганд. В качестве варианта антитело или его антигенсвязывающая часть могут ингибировать связывание ErbB3 лиганда за счет изменения или деформирования конформации ErbB3 так, что он становится неспособен связываться с ErbB3 лигандом. Антитела и их антигенсвязывающие части, которые снижают уровни ErbB3 на поверхности клеток,можно идентифицировать их способностью осуществлять понижающую регуляцию ErbB3 на опухолевых клетках. В некоторых примерах антитела или их антигенсвязывающие части снижают ErbB3 экспрессию клеточной поверхности, вызывая интернализацию (или увеличивая эндоцитоз) ErbB3. Чтобы проверить это, ErbB3 можно биотинилировать и легко определить количество молекул ErbB3 на поверхности клетки, например, измерением количества биотина на монослое клеток в культуре при наличии или отсутствии антитела или его антигенсвязывающей части, например, как описано, например, вWaterman et al., J. Biol. Chem. (1998), 273:13819-27, с последующей иммунопреципитацией ErbB3 и зондированием стрептавидином. Уменьшение детекции биотинилированного ErbB3 через какое-то время,при наличии антитела или антигенсвязывающей части, является индикатором антитела, которое уменьшает уровни ErbB3 на поверхностях клетки. В соответствии с настоящим изобретением антитела или их антигенсвязывающие части можно также проверять на их способность ингибировать пролиферацию клеток, экспрессирующих ErbB3, например опухолевых клеток, с помощью известных технологий, таких как анализ Cell Titer Glow Assay, описанный в примерах ниже (см. также, например, Macallan et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (1998), 20; 95(2):70813; Perez et al. (1995), Cancer Research, 55, 392-398). В другом примере осуществления антитела или их антигенсвязывающие части определяются по способности ингибировать VEGF секрецию клеток, экспрессирующих ErbB3. Это можно выполнить с помощью хорошо известных анализов, таких как набор для VEGF ELISA фирмы RD Systems(Minneapolis, MN, Cat.DY293B). Подобным образом антитела или части можно определять по способности ингибировать перемещение клеток, экспрессирующих ErbB3 (например, клетки MCF-7) с помощью транс-луночного анализа (Millipore Corp., Billerica, MA, Cat.ECM552), как описано здесь. В другом примере осуществления антитела или их антигенсвязывающие части определяются по способности ингибировать шаровидный рост клеток, экспрессирующих ErbB3. Это выполняется с помощью анализа, который почти соответствует условиям развивающегося опухолевого роста (см., например,Herman et al. (2007), Journal of Biomolecular Screening Electronic publication. - Журнал электронного издания биомолекулярного скрининга), как описано здесь. Антитела или их антигенсвязывающие части, которые связываются с теми же или перекрывающимися эпитопами, как одно или несколько антител в соответствии с настоящим изобретением можно также идентифицировать, используя стандартные технологии, известные в этой области и описанные здесь. Например, для скрининга антител, которые связываются с тем же или перекрывающимся эпитопом наErbB3, связанным представляющим интерес антителом, можно выполнять анализ поперечной букетировки, как, например, описанный в Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed.IV. Фармацевтические составы. С другой стороны, в настоящем изобретении предлагается состав, например фармацевтический состав, содержащий одно или комбинацию моноклональных антител или его (их) антигенсвязывающую(ие) часть(и) в соответствии с настоящим изобретением, рецептура которого разработана вместе с фармацевтически приемлемым носителем. В одном из примеров составы включают комбинацию многослойных(например, два или более) изолированных антител согласно изобретению, которые связывают разные эпитопы на ErbB3. В соответствии с его использованием в настоящем описании "фармацевтически приемлемый носитель" включает все и любые растворители, диспергенты, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и замедляющие всасывание средства и подобные физиологически совместимые средства. Предпочтительно, чтобы носитель был пригоден для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, путем инъекции или вливания). В зависимости от способа введения активное соединение, т.е. антитело, биспецифическая и мультиспецифическая молекула, может быть покрыто веществом для защиты соединения от воздействия кислот и других естественных условий, которые могут инактивировать соединение."Фармацевтически приемлемая соль" относится к соли, которая сохраняет нужную биологическую активность исходного соединения и не оказывает какое-либо нежелательное токсикологическое воздействие (см., например, Berge, S.M., et al. (1977), J. Pharm. Sci. 66:1-19). Примеры таких солей включают соли присоединения кислоты и соли присоединения основания. Соли присоединения кислоты включают соли, полученные из нетоксичных неорганических кислот, таких как соляная, азотная, фосфорная, серная, гидробромистая, йодисто-водородная, фосфористая кислоты и т.п., а также из нетоксичных органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидрооксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты и т.п. Соли присоединения основания включают соли, полученные из щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, магний, кальций и т.п., а также из нетоксичных органических аминов,таких как N,N'-дибензилэтилендиамин, N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, новокаин и т.п. Фармацевтические составы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно вводить отдельно или в комбинированной терапии, т.е. в сочетании с другими средствами. Например, комбинированная терапия может включать состав в соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами, такими как противораковые средства,описание которых приводится ниже. Фармацевтические составы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно также вводить совместно с лучевой терапией и/или хирургическими вмешательствами. Состав в соответствии с настоящим изобретением можно вводить самыми разными известными способами. По выбору специалиста в этой области путь и/или способ введения будет зависеть от желаемых результатов. Активные соединения можно приготовить с носителями, которые обеспечат защиту соединения от быстрого высвобождения, такими как состав контролируемого высвобождения, включая имплантаты, трансдермальные пластыри и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые, биологически совместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы приготовления таких составов запатентованы или, как правило, известны специалистам в этой области. См., например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems. - Системы доставки лекарств с замедленным и регулируемым высвобождением, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978. Чтобы ввести соединение, предлагаемое в изобретении, с помощью определенных способов введения, может потребоваться покрыть соединение веществом или ввести соединение совместно с веществом, чтобы предотвратить его инактивацию. Например, соединение можно вводить субъекту в пригодном носителе, например в липосомах или разбавителе. Фармацевтически приемлемые разбавители включают солевой раствор и водные буферные растворы. Липосомы включают водно-жировые-водные CGF эмульсии, а также обычные липосомы (Strejan et al. (1984), J. Neuroimmunol. 7:27). Фармацевтически приемлемые носители включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки с целью приготовления для немедленного приема стерильных инъецируемых растворов или дисперсии. Применение таких средств и агентов для фармацевтически активных веществ известно в этой области. За исключением того, насколько любое обычное средство или агент несовместимы с активным соединением, рассматривается его применение в фармацевтических составах согласно изобретению. Эти составы могут быть также дополнены другими активными соединениями. Терапевтические составы обычно должны быть стерильными и устойчивыми в условиях изготовления и хранения. Рецептура состава может быть приготовлена в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, пригодной для высокой концентрации лекарственного препарата. Носителем может быть растворитель или диспергент, содержащий, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их пригодные смеси. Должную текучесть можно поддерживать, например, при помощи покрытия, такого как лецитин, путем сохранения требуемого размера частиц в случае дисперсии и с помощью сурфактантов. Во многих случаях предпочтительным будет включение в состав изотонических средств, например сахаров, полиспиртов,таких как маннитол, сорбит или хлористый натрий. Пролонгированное всасывание впрыскиваемых составов может быть вызвано включением в состав средства, задерживающего всасывание, например соли моностеарата и желатин. Стерильные впрыскиваемые растворы можно приготовить, включая активное соединение в нужном количестве в пригодный растворитель с одним компонентом или комбинацией компонентов, перечисленных выше, при необходимости, с последующей стерилизующей микрофильтрацией. Вообще, дисперсии готовят путем включения активного соединения в стерильный наполнитель, который содержит основной диспергент и другие необходимые компоненты из числа приведенных выше. В случае применения стерильных порошков для приготовления стерильных впрыскиваемых растворов предпочтительными методами приготовления являются вакуумная сушка и сублимационная сушка (лиофилизация), которые дают порошок активного компонента плюс любой дополнительный необходимый компонент из его раствора, предварительно стерильно отфильтрованного. Режимы дозирования регулируются для обеспечения оптимальной желаемой реакции (например,эффективности лекарства). Например, можно вводить один болюс, можно вводить несколько разделенных доз через определенное время или дозу можно пропорционально уменьшать или увеличивать, насколько определяет острая необходимость терапевтической ситуации. Например, человеческие антитела согласно изобретению можно вводить один или два раза в неделю подкожным впрыскиванием или один или два раза в месяц подкожным впрыскиванием. Особенно выгодно создавать парентеральные составы в дозированной форме для упрощения введения и равномерности дозирования. Дозированная лекарственная форма=одноразовая форма в соответствии с ее использованием в настоящем описании относится к физически обособленным устройствам, пригодным для применения в виде однократных доз субъектам, проходящим лечение; каждое устройство содержит заданное количество активного соединения, рассчитанного на получение желаемого терапев- 25020465 тического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Спецификация на дозированные формы изобретения диктуется и непосредственно зависит от (а) индивидуальных характеристик активного соединения и конкретного достигаемого терапевтического эффекта и (b) ограничений, свойственных искусству составления такого активного соединения, для лечения восприимчивости у отдельных лиц. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, цистеин гидрохлорид, бисульфат натрия, метабисульфит натрия,сульфит натрия и т.п.; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВНА), бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропилгаллат, альфатокоферол и т.п.; и (3) металлохелирующие агенты, такие как лимонная кислота, этилендиамин тетрауксусная кислота (EDTA), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т.п. Для терапевтических составов препараты в соответствии с настоящим изобретением включают составы, пригодные для перорального, назального, местного (включая пероральное и сублингвальное), ректального, вагинального и/или парентерального введения. Препараты можно представить в виде удобной дозированной лекарственной форме, их можно приготовить любыми способами, известными в фармацевтике. Количество активного компонента, которое можно соединять с материалом носителя для получения одной лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от субъекта, который проходит лечение, и конкретного способа введения. Количество активного компонента, которое можно соединять с материалом носителя для получения отдельной лекарственной формы, в большинстве случаев будет то количество состава, которое дает терапевтический эффект. Как правило, исходя из 100%, это количество составит от приблизительно 0,001 до приблизительно 90% активного компонента, предпочтительно от приблизительно 0,005 до приблизительно 70%, в наиболее предпочтительном случае от приблизительно 0,01 до приблизительно 30%. Составы в соответствии с настоящим изобретением, пригодные для вагинального введения, также включают пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или спреи, содержащие носители, известные в этой области как пригодные для этой цели. Лекарственные формы для местного или трансдермального введения составов в соответствии с настоящим изобретением включают порошки, спреи, мази, пасты,кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и летучие препараты. Активное соединение можно смешивать в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любыми консервантами, буферными растворами или распыляющими веществами, которые могут потребоваться. В соответствии с настоящим изобретением фразы "парентеральное применение" и "применяемый парентерально" означают способы введения, за исключением энтерального и местного введения, обычно инъекцией и включают, без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, внутриоболочечную, внутрикапсулярную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, транстрахейную, подкожную, подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсулярную,субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и надчревную инъекцию и вливание. Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно применять в фармацевтических составах в соответствии с настоящим изобретением, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.) и их пригодные смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и впрыскиваемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Должную текучесть можно поддерживать, например, при помощи покрывающих материалов, таких как лецитин,сохранением требуемого размера частиц в случае дисперсии и при помощи сурфактантов. Эти составы могут также содержать адъюванты, такие как консерванты, увлажняющие средства,эмульгирующие вещества и диспергирующие вещества. Конкретные примеры адъювантов, хорошо известных в этой области, включают, например, неорганические адъюванты (такие как алюминиевые соли,например ортофосфат алюминия и оксид алюминия), органические адъюванты (например, сквален),адъюванты на основе масла, виросомы (например, виросомы, которые содержат мембраносвязанный гемагглютинин и нейраминидазу, полученную из вируса гриппа). Профилактика наличия микроорганизмов может быть обеспечена как процедурами стерилизации,упомянутыми выше, так и введением различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парааминобензойной кислоты, хлорбутанола, фенол-сорбиновой кислота и т.п. Можно также по желанию включить в составы изотонические средства, такие как сахара, хлористый натрий и т.п. Кроме того, пролонгированное всасывание впрыскиваемой фармацевтической формы может быть вызвано включением средств, которые задерживают всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин. Когда составы в соответствии с настоящим изобретением вводятся как фармацевтические составы людям и животным, их можно давать отдельно или в виде фармацевтического соединения, содержащего,например, 0,001-90% (более предпочтительно 0,005-70%, например 0,01-30%) активного компонента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Независимо от выбранного способа введения соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые можно использовать в пригодной гидратированной форме, и/или фармацевтические составы в соответствии с настоящим изобретением разработаны в виде фармацевтически приемлемых лекарственных форм обычными способами, известными специалистам в этой области. Фактические уровни дозирования активных компонентов в фармацевтических составах в соответствии с настоящим изобретением можно изменять с целью получения количества активного компонента,эффективного для достижения желаемой терапевтической реакции у конкретного пациента, состава и способа введения, не токсичного для пациента. Выбранный уровень дозирования будет зависеть от различных фармакокинетических факторов, включая активность конкретных применяемых составов в соответствии с настоящим изобретением или сложный эфир, его соль или амид, путь введения, время введения, скорость выведения конкретного используемого соединения, продолжительность лечения, другие лекарственные препараты, соединения и/или вещества, используемые в комбинации с конкретными применяемыми составами, возрастом, полом, весом, режимом, общим состоянием здоровья и предшествующей историей болезни пациента, лечение которого проводится, и подобные факторы, известные в медицинской практике. Врач или ветеринар, имеющий обычный опыт в этой области, может легко определить и предписать эффективное количество необходимого фармацевтического состава. Например, врач или ветеринар может начать с уровней доз соединений в соответствии с настоящим изобретением, применяемых в фармацевтическом составе, ниже требуемых для получения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно увеличивать дозировку до достижения желаемого эффекта. В общем, подходящей суточной дозой состава в соответствии с настоящим изобретением будет то количество соединения, которое является самой низкой дозой, эффективной для достижения терапевтического эффекта. Такая эффективная доза, как правило, будет зависеть от факторов, описанных выше. Предпочтительно, чтобы введение было внутривенным, внутримышечным, внутрибрюшинным, или подкожным, предпочтительно как можно ближе к местонахождению мишени. По желанию, эффективная суточная доза терапевтического состава может вводиться в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или больше поддоз, вводимых отдельно через соответствующие интервалы в течение дня, по желанию, в стандартных лекарственных формах. Если есть возможность вводить соединение в соответствии с настоящим изобретением отдельно,предпочтительно вводить это соединение в виде фармацевтического препарата (состава). Терапевтические составы можно вводить с помощью известных медицинских устройств. Например,в предпочтительном примере терапевтический состав согласно изобретению можно вводить с помощью безыгольного подкожного инъектора, такого как устройства, раскрытые в патенте США 5399163,5383851, 5312335, 5064413, 4941880, 4790824 или 4596556. Примеры широко известных имплантатов и модулей, пригодных для использования в настоящем изобретении, включают патент США 4487603,который раскрывает имплантируемый микроинфузионный насос для распределения лекарства с регулируемой скоростью; патент США 4486194, который раскрывает терапевтическое устройство для введения лекарств через кожу; патент США 4447233, который раскрывает инфузионный насос для вливаний лекарств, обеспечивающий доставку лекарства с определенной скоростью вливания; патент США 4447224, который раскрывает имплантируемый инфузионный прибор переменного расхода для непрерывной доставки лекарственного средства; патент США 4439196, который раскрывает осмотическую систему доставки лекарств с многокамерными отсеками; и патент США 4475196, который раскрывает осмотическую систему доставки лекарств. Специалистам в этой области известно много других подобных имплантатов, систем доставки и модулей. В некоторых примерах осуществления моноклональные антитела согласно изобретению могут быть разработаны для обеспечения должного распределения in vivo. Например, гематоэнцефалический барьер(ВВВ) исключает многие высокогидрофильные соединения. Для гарантии того, что терапевтические соединения согласно изобретению перекрещиваются с ВВВ (по желанию), их рецептуру можно разработать, например, в липосомах. Способы производства липосом, см., например, в патентах США 4522811; 5374548 и 5399331. Липосомы могут включать одну или более частей, которые выборочно транспортируются в определенные клетки или органы, таким образом усиливая целенаправленную доставку лекарственного средства (см., например, V.V. Ranade (1989), J. Clin. Pharmacol. 29:685). Примеры целенаправленности частей включают фолат или биотин (см., например, патент США 5416016, Low et(P.G. Bloeman et al. (1995), FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995), Antimicrob. Agents Chemother. 39:180); сурфактант протеин А рецептор (Briscoe et al. (1995), Am. J. Physiol. 1233:134), в различные образцы которых могут быть включены препараты в соответствии с настоящим изобретением, а также компоненты изобретенных молекул; р 120 (Schreier et al. (1994), J. Biol. Chem. 269:9090); см. такжеV. Способы применения антител согласно изобретению. В настоящем изобретении также предлагаются способы использования антител и их антигенсвязанных частей, которые связываются с ErbB3, в различных ex vivo и in vivo диагностических и терапевтических применениях. Например, антитела в соответствии с настоящим изобретением можно применять для лечения болезни, ассоциированной с ErbB3-зависимой передачей сигналов, включая различные виды рака. В одном из примеров осуществления изобретения предлагается способ лечения болезни, ассоциированной с ErbB3-зависимой передачей сигналов, путем введения субъекту антитела или его антигенсвя- 27020465 зывающей части в соответствии с настоящим изобретением в количестве, эффективном для лечения болезни. Такие болезни включают, например, различные виды рака, включая, но не ограничиваясь этим,меланому, рак молочной железы, рак яичников, рак почки, рак желудочно-кишечного тракта, рак толстой кишки, рак легкого и рак предстательной железы. Антитело можно вводить отдельно или с другим терапевтическим средством, которое действует в сочетании или синергично с антителом для лечения болезни, ассоциированной с ErbB3-опосредованной передачей сигналов. Такие терапевтические средства включают, например, противоопухолевые препараты, указанные ниже (например, цитотоксины, химиотерапевтические вещества, малые молекулы и облучение). В другом примере осуществления изобретения предлагается способ диагностирования болезни (например, рака), ассоциированной с ErbB3 повышающей регуляцией у субъекта за счет контакта антител или их антигенсвязывающих частей в соответствии с изобретением (например, ex vivo или in vivo) с клетками от субъекта и за счет измерения уровня связывания с ErbB3 на клетках. Чрезмерно высокие уровни связывания с ErbB3 указывают на то, что субъект болен болезнью, ассоциированной с ErbB3 повышающей регуляцией. Кроме того, в объем настоящего изобретения входят наборы, включающие антитела и их антигенсвязывающие части в соответствии с настоящим изобретением, в которые, по желанию, включаются инструкции по применению во время лечения или диагностирования болезни, ассоциированной сErbB3 повышающей регуляцией и/или с ErbB3-зависимой передачей сигналов. В наборы может входить этикетка, показывающая назначение содержимого набора. Этикетка с указанием срока действия включает любые письменные, рекламные материалы или зарегистрированный материал, поставляемый с набором или иным образом прилагаемый к набору. Описания других вариантов осуществления настоящего изобретения приведены в нижеследующих примерах. Настоящее изобретение иллюстрируется примерами, которые не должны рассматриваться как ограничивающие само изобретение. Содержание перечня последовательностей, фигуры и все противопоставленные материалы, патенты и опубликованные патентные заявки, на которые даны ссылки в тексте данного описания, включены в данный документ путем ссылки. Примеры Материалы и способы. Во всех примерах, если не указано иначе, использовались следующие материалы и способы. В целом, при практическом применении настоящего изобретения используются, если не указано иначе, обычные технические приемы химии, молекулярной биологии, технологии рекомбинантной ДНК,иммунологии (особенно, например, технология антител) и стандартные технические приемы приготовления полипептидов. См., например, Sambrook, Fritsch и Maniatis, Molecular Cloning. - Молекулярное клонирование: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); Antibody Engineering Protocols. - Протоколы инженерии антител (Methods in Molecular Biology. - Технологии молекулярной биологии), 510, Paul,S., Humana Pr (1996); Antibody Engineering: A Practical Approach. - Практический подход (PracticalApproach Series, 169), McCafferty, Ed., Irl Pr (1996); Antibodies: A Laboratory Manual. - Антитела: Лабораторный справочник, Harlow et al., C.S.H.L. Press, Pub. (1999) и Current Protocols in Molecular Biology. Текущие протоколы молекулярной биологии, eds. Ausubel et al., John WileySons (1992). Модели систем in vitro и in vivo для анализа биологии HCV [вирус гепатита С] описаны, например, в Cell culturemodels and animal models of viral hepatitis. Part II: hepatitis С. - Модели клеточной культуры и экспериментальные модели вирусного гепатита на животных. Часть II: гепатит С, Lab. Anim. (NY); 34(2):39-47(2005) и в The chimpanzee model of hepatitis С virus infections. - Модель на шимпанзе вирусной инфекции гепатита C, ILAR J.; 42(2):117-26 (2001). Клеточные линии. Все клеточные линии, использованные в экспериментах, описание которых дано ниже, были получены из Национального института рака или подготовлены исследователями, как указано. Клеточные линии:MCF7 - АТСС кат.НТВ-22,T47D - АТСС кат.НТВ-133,Colo-357 - эти клетки были получены у научного исследователя и описаны в Kolb et al. (2006), Int. J.Cancer, 120:514-523,Du145 - АТСС кат.HTB-81,OVCAR 8 - источник, описание которого уже дано в предварительной заявке,H1975 АТСС кат.CRL-5908. Пульверизация опухолевых клеток. Для пульверизации опухолей использовали криопульверизатор (Covaris Inc). Опухоли хранили в специальных мешках (предварительно взвешенных перед тем, как поместить туда опухоль) и помещали в жидкий азот во время их обработки. Для небольших опухолей сначала в мешок с опухолью добавили 200 мкл лизирующего буфера, заморозили в жидком азоте и затем пульверизировали, чтобы упростить извлечение опухоли из мешка. Пульверизованные опухоли перенесли в 2-мл пробирки Эппендорфа и поместили в жидкий азот до готовности к дальнейшей обработке. Лизис опухолевых клеток. Опухоли были лизированы в лизирующем буфере с добавлением ингибиторов протеазы и фосфатазы. Лизирующий буфер добавили к аликвотам = определенным количествам опухоли в конечной концентрации приблизительно 62,5 мг/мл. Образцы опухоли были гомогенизированы путем интенсивного перемешивания в течение 30 с и инкубированы на льду приблизительно в течение 30 мин. Лизаты сформовали в течение приблизительно 10 мин в колонках Qiagen Qiashredder для последующей гомогенизации образцов. Осветленные лизаты были расфасованы в новые пробирки для последующей обработки. ВСА анализ (количественный анализ содержания белков). Анализ ВСА (Pierce) проводился по регламентированной процедуре производителя на всех образцах опухоли. Полная белковая концентрация (в мг/мл) каждого образца опухоли позже использовалась в нормализации результатов ELISA.ELISA анализ (твердофазный иммуноферментный анализ). Все реагенты ELISA для общих и фосфо-ErbB3 ELISA-анализов были приобретены в RD Systems в виде Duoset наборов. 96-луночные планшеты Nunc Maxisorb покрыли антителом в количестве 50 мкл и оставили на ночь на инкубацию при комнатной температуре. На следующее утро планшеты трижды промыли в 1000 мкл/лунку в устройстве для отмывки планшетов BioTek с PBST (0,05% Твин-20). Затем планшеты блокировали приблизительно в течение 1 ч при комнатной температуре 2% BSA в PBS (фосфатно-буферный солевой раствор). Планшеты трижды промыли с дозой раствора 1000 мкл/лунку в устройстве для отмывки планшетов BioTek с PBST (0,05% Твин-20). 50 мкл клеточных лизатов и стандартные образцы, разбавленные 50% лизирующим буфером и 1% BSA, использовали в двух экземплярах для последующей обработки. Образцы инкубировали в течение 2 ч при 4C на планшетном шейкере и промыли трижды с дозой раствора 1000 мкл/лунку в устройстве для отмывки планшетов BioTek с PBSTPBST и инкубировали приблизительно в течение 1 ч при комнатной температуре. Для фосфор-ErbB3 антитело детекции непосредственно конъюгировали с пероксидазой хрена (HRP) и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшет промыли трижды с дозой раствора 1000 мкл/лунку в устройстве для отмывки планшетов BioTek с PBST (0,05% Твин-20). Добавили приблизительно 50 мкл стрептавидина-HRP и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре (за исключением pErbB3). Планшеты промыли трижды PBST (0,05% Твин-20) с дозой раствора 1000 мкл/лунку в устройстве для отмывки планшетов BioTek. Добавили приблизительно 50 мкл субстрата Supersignal Pico ELISA и считали планшет с помощью Fusion планшет-ридера. Данные проанализировали с помощью программыEXCEL. Двойные образцы осреднили и использовали планки погрешностей для представления стандартного отклонения между двумя репликами. Пример 1. Получение антител с помощью фагового дисплея. Для получения анти-ErbB3 антител человека, именуемых здесь как Ab 6, Ab 3, Ab 14, Ab 17 иAb 19, библиотеку человеческого Fab-фага, включающую уникальную комбинацию иммуноглобулиновых последовательностей, полученных от человеческих доноров (Hoet et al., полностью указано выше и включено в данное описание путем ссылки) сначала проверили на наличие ErbB3 связующие. При использовании очищенного ErbB3 и клеточной линии яичника китайского хомячка, экспрессирующей поверхность клетки ErbB3, были идентифицированы 73 уникальных Fab последовательностей из библиотеки. Эти 73 клона были затем перестроены как Fab только без фага. С помощью высокопроизводительных способов эти Fab были экспрессированы в маленьком масштабе и тестированы на связываниеELISA-анализом и Flexchip методом, который представляет собой высокопроизводительную технологию поверхностного плазмонного резонанса (SPR). 73 Fab без фага были неравномерно нанесены на поверхность чипа, а затем были измерены кинетика связывания и блокада эпитопа по отношению к ErbB3-his слитому белку-мишени или ErbB3-Fc протеину (RD Systems). На основании полученных данных была рассчитана константа равновесного связывания и скорости ассоциации/диссоциации для Fab. Далее было проведено исследование связывания разных Fab с MALME-3M клетками с помощью приблизительно 500 нМ Fab и 1:750 раствора козьего античеловеческого Alexa 647 вторичного антитела. Как представлено на фиг. 1 А и 1 В, несколько Fab-кандидатов показали значительное окрашиваниеMALME-3M клеток. Пример 2. Оптимизация анти-ErbB3 Fab. После идентификации Fab, которые блокировали связывание ErbB3 лиганда, херегулина, с ErbB3,VH и VL последовательности Fab были кодон-оптимизированы следующим образом. В частности, были преобразованы VH и VL области с использованием конструкций экспрессии для экспрессии в виде IgG1 или IgG2 изотипа. Конструкции включали Selexis остов, который имел кассету,предназначенную для замещения соответствующих последовательностей тяжелой и легкой цепей. Selexis векторы включали CMV промотор и согласующийся поли-А сигнал. Нуклеиново-кислотные последовательности для кодон-оптимизированных VH и VL антитела Ab 6 изложены в последовательностях SEQ ID NO:25 и 26 соответственно, а антитела Ab 3 - в последова- 29