Антитела к склеростину, композиции, их содержащие, и их применение

В изобретении описаны антитела к склеростину, композиции и способы применения указанных антител для лечения заболевания, связанного с аномалиями в костной ткани, такого как остеопороз. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к антителам к склеростину и композициям и способам применения указанных антител для лечения патологического нарушения, опосредуемого склеростином, или связанного с аномалиями в костной ткани заболевания, такого как остеопороз. Предпосылки создания изобретения Ген SOST кодирует белок склеростин, который представляет собой состоящий из 213 аминокислот секретируемый гликопротеин. Склеростин является представителем надсемейства факторов, включающих "цистеиновый узел". Склеростин родственен семейству белков ДАН/Церберус (DAN/Cerberus), которые оказывают непосредственное воздействие на передачу сигналов BMP путем ингибирования связывания BMP с рецепторами и, как следствие, ингибирования каскада передачи сигналов (AvsianKretchmer, Mol. Endocrinol., 18(1), 2004, c. 1-12). Экспрессия мРНК склеростина выявлена у взрослых людей главным образом в костной ткани и почке. Белок склеростин обнаружен главным образом в костной ткани. В костной ткани его экспрессия ограничена зрелыми и полностью дифференцированными формирующими кость клетками, т.е. остеоцитами. Склеростин представляет собой эффективный негативный регулятор формирования кости у человека и мышей. Отсутствие экспрессии гена SOST приводит к склеростеозу (Balemans и др., Hum Mol.Genet., 10(5), 2001, c. 537-543; Brunkow и др., Am J. Hum Genet, 68(3), 2001, c. 577-589). Пациенты на протяжении всей жизни страдают разрастанием костной ткани, что приводит к повышенной минеральной плотности и прочности костной ткани. У них не выявлено никаких других эндокринологических аномалий - все осложнения, имеющие место в течение их жизни, связаны с аномальным накоплением костной ткани. У индивидуумов, являющихся гетерозиготными носителями этого рецессивного нарушения, также обнаружена повышенная костная масса (Gardner и др., J. Clin. Endocrinol Metab., 90(12), 2005, c. 63926395). Этот фенотип можно рекапитулировать у мышей с дефицитом гена SOST и его сверхэкспрессия приводит к остеопении. Кроме того, известно, что болезнь ван Бухема [MIM 239100] - фенотипическая копия склеростеоза - вызывается нарушенной регуляцией гена SOST, связанной с геномной делецией костного энхансера дальнего действия (Balemans и др., J. Med. Gene, 39(2), 2002, c. 91-97; Loots и др.,Genome Res, 15(7), 2005, c. 928-935). И, наконец, SOST подвергается в процессе формирования кости негативной регуляции гормоном паращитовидной железы (РТН), фактором формирования кости, роль которого доказана клинически, что позволяет предположить, что анаболическое действие РТН частично может быть обусловлено SOST (Keller и Kneissel Bone, 37(2), 2005, c. 148-158). Склеростин связывает BMP (белки, участвующие в остеогенезе) и может действовать в качестве антагониста BMP in vitro (Winkler и др., ЕМВО J., 22(23), 2003, c. 6267-6276). Склеростин действует также в качестве негативного регулятора канонического пути передачи сигналов wnt (Wingless) либо непосредственно путем связывания с LRP5/LRP6 (Li и др., J. Biol. Chem., 20, 2005, с. 280(20); Semenov, J. Biol.(Winkler и др., J. Biol. Chem., 28, 2005, 280(4), c. 2498-2502). Отсутствие экспрессии склеростина приводит к избыточному образованию костной ткани, при этом резорбция кости не нарушается (склеростеоз, болезнь ван Бухема) (Balemans и др., 2001; Brunkow и др.,Am J. Hum Genet, 68(3), 2001, c. 577-589, Balemans и др., 2006; Loots и др., Genome Res, 15(7), 2005, c. 928-935). Лишь немногие из применяемых в настоящее время путей лечения, связанных со скелетом нарушений, могут приводить к повышению плотности костной ткани, большинство доступных в настоящее время путей лечения направлены, прежде всего, на ингибирование дополнительной резорбции кости, а не на стимуляцию формирования новой костной ткани. Одним из примеров медикаментозных средств, применяемых для лечения потери костной ткани,является эстроген. Однако не ясно, обладает ли эстроген какими-либо длительными благоприятными действиями. Кроме того, эстроген может приводить к риску повышения возникновения различных типов опухолей, таких как рак молочной железы и эндометрия. Другие современные терапевтические подходы к лечению остеопороза включают применение бисфосфонатов (например, Fosamax, Actonel, Bonviva, Zometa, олпадронат, неридронат, скелид, бонефос), гормон паращитовидной железы, кальцилитических средств, кальцимиметиков (например, цинакальцет), статинов, анаболических стероидов, солей лантана и стронция и фторида натрия. Однако с указанными терапевтическими средствами часто связаны нежелательные побочные действия. Краткое изложение сущности изобретения Одним из вариантов осуществления изобретения является антитело или функциональный белок,содержащий антигенсвязывающий участок антитела, мишенью которого является полипептид склеростина (SEQ ID NO: 155), отличающееся/отличающийся тем, что антитело или функциональный белок специфически связывается с полипептидом склеростина и может повышать у млекопитающего по меньшей мере одну из следующих характеристик: образование костной ткани, минеральную плотность костной ткани, содержание минерала в костной ткани, костную массу, качество костной ткани и прочность-1 018756 костной ткани. В одном из вариантов осуществления изобретения антитела, предлагаемые в изобретении, обладают способностью аннулировать ингибирование склеростином минерализации костной ткани in vitro. В родственном варианте осуществления изобретения они обладают способностью аннулировать ингибирование склеростином опосредуемого wnt-1 пути передачи сигналов. В другом родственном варианте осуществления изобретения они могут нарушать способность склеростина связывать LRP6 и могут блокировать ингибирующее действие, которое склеростин при его применении в высоких дозах оказывает на индуцируемое BMP фосфорилирование Smad1. В другом варианте осуществления изобретения антитела,предлагаемые в изобретении, связываются с областью склеростина между аминокислотами 112 и 126 включительно SEQ ID NO: 155 (т.е. указанная область состоит из аминокислот 112-126 SEQ ID NO: 155) и/или областью между аминокислотами 160-174 включительно SEQ ID NO: 155 (т.е. указанная область состоит из аминокислот 160-174 SEQ ID NO: 155) и более конкретно связываются с областью, которая содержит как ARLLPNAIGRGKWWR (SEQ ID NO: 156), так и RLVASCKCKRLTRFH (SEQ ID NO: 157). Склеростин ингибирует опосредуемую wnt-1 активацию STF (SuperTopFlash, репортер-индикатор канонической передачи сигналов wnt) в HEK293-клетках. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела, предлагаемые в изобретении, восстанавливают репортер-индикатор передачи сигналаwnt с высокой степенью воспроизводимости. Установлено, что выявленная с помощью анализа репортера ингибирующая активность антител,предлагаемых в изобретении, в отношении воздействия склеростина на передачу сигналов wnt в неостеобластных клетках проявляется в индукции ответов в виде формирования кости в результате ингибирования склеростина in vivo. Так, эксперименты in vivo, проведенные на взрослых грызунах, продемонстрировали, что антитела, предлагаемые в изобретении, значительно усиливают костный анаболизм. Повышение костной массы по эффективности соответствовало уровню, достигаемому при лечении, включающем введение с интервалом в один день очень высоких доз гормона паращитовидной железы (который применяли в качестве положительно контроля). Таким образом, следующим предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются антитела, предлагаемые в изобретении, аффинность которых к склеростину характеризуется значениями,находящимися в нижнем пикомолярном диапазоне, и которые ингибируют воздействие склеростина на передачу сигналов wnt, что характеризуется значениями IC50 около 10 нМ. Более предпочтительно следующим предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются антитела, предлагаемые в изобретении, которые связываются с областью склеростина между аминокислотами 112 и 126 включительно SEQ ID NO: 155 (т.е. указанная область состоит из аминокислот 112-126 SEQ ID NO: 155) и/или областью между аминокислотами 160-174 включительно SEQ ID NO: 155 (т.е. указанная область состоит из аминокислот 160-174 SEQ ID NO: 155) и более конкретно связывается с областью, которая перекрывает, по меньшей мере, следующие полипептиды:ARLLPNAIGRGKWWR (SEQ ID NO: 156), так и RLVASCKCKRLTRFH (SEQ ID NO: 157) соответственно, и аффинность которых к склеростину характеризуется значениями, находящимися в нижнем пикомолярном диапазоне, и которые ингибируют воздействие склеростина на передачу сигналов wnt, что характеризуется значениями IC50 около 10 нМ. При оценке на созданной на мышах модели установлено, что указанные антитела обладают способностью повышать костную массу в осевом и добавочном скелете с эффективностью, соответствующей уровню, достигаемому при лечении, включающем подкожное введение с интервалом в один день очень высокой анаболической дозы гормона паращитовидной железы (положительный контроль), и поэтому их можно применять для лечения заболеваний, связанных с аномалиями костной ткани, такими как остеопороз. Другими вариантами осуществления изобретения являются композиции, содержащие антитела,предлагаемые в изобретении, в сочетании с альтернативными терапевтическими средствами, предназначенными для лечения остеопороза, такими как бисфосфонаты, гормон паращитовидной железы, рилизинг-факторы гормона паращитовидной железы (кальцилитики), нейтрализующие LRP4 антитела и нейтрализующие DKK-1 антитела. Краткое описание чертежей На чертежах показано: на фиг. 1 - воздействие MOR05813IgG2 лямбда при анализе wnt-1; на фиг. 2 - воздействие MOR05813IgG2 лямбда на индуцируемую ВМР-2 минерализацию в МС 3 Т 3-1b-клетках; на фиг. 3 - воздействие MOR05813IgG2 лямбда при оценке взаимодействия LRP6-SOST с помощьюELISA; на фиг. 4 - воздействие MOR05813IgG2 лямбда при анализе фосфорилирования Smad1; на фиг. 5 - А - воздействие "выключения" LRP4 (si-РНК) на ингибирующую активность SOST при анализе wnt-1 с использованием HEK293-клеток (черными номерами обозначены относительные уровни активности STF в отсутствии SOST, жирными черными номерами обозначены относительные уровни активности STF в присутствии/отсутствии SOST); Б - специфичность воздействия сверхэкспрессии LRP4 на значения IC50 для SOST и значения IC50 для DKK1 при анализе wnt-1 с использованием HEK293-2 018756 клеток; В - специфичность воздействия сверхэкспрессии LRP4 на ингибирующую активность SOST иLRP4 (si-РНК) на ингибирующую активность SOST и DKK1 при анализе wnt-1 с использованиемHEK293-клеток; Д - модуляция активности MOR05813 с помощью LRP4; на фиг. 6 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT (периферическая количественная компьютерная томография) - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает общее содержание минерала в проксимальном метафизе больше берцовой кости; на фиг. 7 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает общую минеральную плотность костной ткани в проксимальном метафизе большеберцовой кости; на фиг. 8 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT- обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает толщину кортикального слоя кости в проксимальном метафизе большеберцовой кости; на фиг. 9 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT- обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает объем губчатого вещества кости в проксимальном метафизе большеберцовой кости; на фиг. 10 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT- обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает толщину губчатой кости в проксимальном метафизе большеберцовой кости; на фиг. 11 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT - обработка в течение 5 недель MOR05813 дополнительно повышает общую минеральную плотность костной ткани в проксимальном метафизе большеберцовой кости; на фиг. 12 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT - обработка в течение 5 недель MOR05813 дополнительно повышает минеральную плотность костной ткани в большеберцовой кости; на фиг. 13 - результаты опытов на мышах, ex vivo DEXA (двухэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия) - обработка в течение 5 недель MOR05813 дополнительно повышает минеральную плотность костной ткани в бедренной кости; на фиг. 14 - результаты опытов на мышах, ex vivo DEXA - обработка в течение 5 недель MOR05813 дополнительно повышает минеральную плотность костной ткани в позвоночнике; на фиг. 15 - результаты опытов на мышах, ex vivo гистоморфометрия - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает скорость формирования кости в добавочном скелете (дистальный метафиз бедренной кости); на фиг. 16 - результаты опытов на мышах, ex vivo гистоморфометрия - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает скорость аппозиции (присоединение новых слоев) в добавочном скелете (дистальный метафиз бедренной кости); на фиг. 17 - результаты опытов на мышах, ex vivo гистоморфометрия - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает минерализацию поверхности в добавочном скелете (дистальный метафиз бедренной кости); на фиг. 18 - результаты опытов на мышах, ex vivo гистоморфометрия - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 повышает скорость формирования кости в осевом скелете (поясничный позвонок); на фиг. 19 - результаты опытов на мышах, ex vivo гистоморфометрия - обработка в течение 2,5 недель MOR05813 не влияет на резорбцию кости в добавочном скелете (дистальный метафиз бедренной кости) при оценке на поверхности остеокластов; на фиг. 20 - результаты, полученные с помощью ELISA, демонстрирующие воздействиеMOR05813IgG2 лямбда на связывание SOST с LRP6. В каждом случае применяли 0,9 нМ SOST; на фиг. 21 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT, полученные для варианта, включающего совместную обработку MOR05813 и золедроновой кислотой: А - общая минеральная плотность костной ткани, Б - общее содержание минерала в костной ткани, В - толщина кортикального слоя кости и Г - минеральная плотность губчатого вещества кости; на фиг. 22 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT, полученные для варианта, включающего обработку MOR05813 и предварительную обработку алендронатом (alen): А - общая минеральная плотность костной ткани, Б - общее содержание минерала в костной ткани, В - толщина кортикального слоя кости и Г - минеральная плотность губчатого вещества кости; на фиг. 23 - результаты опытов на мышах, in vivo pQCT, полученные для варианта, включающего анаболическую совместную обработку MOR05813 и (I) антителом к DKK1 или (II) РТН: А - общая минеральная плотность костной ткани, Б - общее содержание минерала в костной ткани, В - толщина кортикального слоя кости и Г - минеральная плотность губчатого вещества кости. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к выделенным антителам, прежде всего человеческим антителам,которые специфически связываются со склеростином и ингибируют функциональные свойства склеростина. В конкретных вариантах осуществления изобретения антитела, предлагаемые в изобретении, выводят из конкретных последовательностей тяжелых и легких цепей и/или они несут конкретные структурные характеристики, такие как CDR-участки, которые имеют конкретные аминокислотные последовательности. Изобретение относится к выделенным антителам, способам получения указанных антител,иммуноконъюгатов и мультивалентных или мультиспецифических молекул, которые содержат указан-3 018756 ные антитела, и к фармацевтическим композициям, содержащим антитела, иммуноконъюгаты или биспецифические молекулы, предлагаемые в изобретении. Изобретение относится также к способам применения антител для ингибирования нарушения или состояния, ассоциированного с наличием экспрессии склеростина, например для лечения патологического нарушения, которое опосредуется склеростином или которое ассоциировано с повышенным уровнем склеростина; например, связанного с костной тканью заболевания, такого как остеопороз. С целью лучшего понимания настоящего изобретения сначала приведены определения некоторых понятий. Дополнительные понятия будут разъяснены при подробном описании изобретения. Под понятие "содержащий" подпадает понятие "включающий", а также "состоящий", например композиция "содержащая" X может состоять только из X или может включать нечто дополнительное,например включает X + Y. Понятие "примерно" касательно численного значенияозначает, например 10%. Слово "практически" не исключает "полностью", например композиция, которая "практически свободна" от Y, может быть полностью свободна от Y. При необходимости слово "практически" может быть упущено при определении понятия в изобретении. Понятие "иммунный ответ" относится к действию, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитов, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых указанными выше клетками или печенью (включая антитела, цитокины и комплемент), результатом которого является избирательное повреждение, деструкция или элиминация из организма-хозяина внедряющихся патогенов,клеток или тканей, зараженных патогенами, раковых клеток, или, как в случае аутоиммунитета или патологического воспаления, здоровых человеческих клеток или тканей. Понятие склеростин относится к человеческому склеростину, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 155, рекомбинантный человеческий склеростин можно получать от фирмы RDSystems (Миннеаполис, шт. Миннесота, США; 2006 каталожный 1406-ST-025). Кроме того, рекомбинантный мышиный склеростин/SOST доступны на коммерческой основе от фирмы RD Systems (Миннеаполис, шт. Миннесота, США; 2006 каталожный 1589-ST-025). В US 6395511 и 6803453 и публикациях патентов США 20040009535 и 20050106683 описаны антитела к склеростину в целом. Понятие "антитело" в контексте настоящего описания включает полные антитела и любой антигенсвязывающий фрагмент (т.е. "антигенсвязывающий участок") или их одноцепочечные варианты. Встречающееся в естественных условиях "антитело" представляет собой гликопротеин, который содержит по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращенно обозначена в контексте настоящего описания как VH) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, т.е. CH1, CH2 и СН 3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (сокращенно обозначена в контексте настоящего описания как VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, т.е. CL. VH- и VLобласти можно дополнительно подразделять на области гиперварибельности, которые называют гипервариабельными участками (CDR), которые перемежаются с более консервативными участками, которые называют каркасными участками (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, которые в направлении от аминоконца к карбоксильному концу расположены в следующем порядке: FR1, CDR1,FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, в том числе с различными клетками иммунной системы (например, эффекторными клетками) и первым компонентом (Clq) классической системы комплемента. Понятие "антигенсвязывающий участок" антитела (или просто "антигенный центр" ("область детерминанты") в контексте настоящего описания относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, склеростином). Было установлено, что антигенсвязывающую функцию антитела можно осуществлять с помощью фрагментов полноразмерного антитела. Примерами связывающихся фрагментов, подпадающих под понятие"антигенсвязывающий участок" антитела, являются Fab-фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из VL-, VH-, Cl- и CH1-доменов; F(ab)2-фрагмент, двухвалентный фрагмент, состоящий из двух Fabфрагментов, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; Fd-фрагмент, состоящий из VH- иCH1-доменов; Fv-фрагмент, состоящий из VL- и VH-доменов одного плеча антитела; dAb-фрагмент (Ward и др., Nature, 341, 1989, c. 544-546), который состоит из VH-домена; и выделенный гипервариабельный участок (CDR). Кроме того, несмотря на то, что два домена Fv-фрагмента, т.е. VL и VH, кодируются различными генами, их можно соединять с помощью методов рекомбинации синтетическим линкером, который позволяет создавать из них одну белковую цепь, в которой пара VL- и VH-областей формирует одновалентные молекулы (известные под названием одноцепочечный Fv-фрагмент (scFv); см., например, Bird и др., Science 242, 1988, c. 423-426; и Huston и др., Proc. Natl. Acad. Sci., 85, 1988, c. 5879-5883). Такие одноцепочечные антитела также подпадают под понятие "антигенсвязывающий участок" антитела. Указанные-4 018756 фрагменты антитела получают с помощью общепринятых методов, известных специалистам в данной области, и фрагменты подвергают скринингу в отношении возможности их применения, аналогичного применению интактных антител. Понятие "выделенное антитело" в контексте настоящего описания относится к антителу, которое практически свободно от других антител с другой антигенной специфичностью (например, выделенное антитело, которое специфически связывается со склеростином, практически свободно от антител, которые специфически связываются с антигенами, отличными от склеростина). Однако выделенное антитело,которое специфически связывается со склеростином, может давать перекрестную реакцию с другими антигенами, такими как молекулы склеростина из других видов. Кроме того, выделенное антитело может быть практически свободно от другого клеточного материала и/или химических веществ. Понятие "моноклональное антитело" или "композиция моноклонального антитела" в контексте настоящего описания относится к получению молекул антител одинакового молекулярного состава. Композиция моноклональных антител обладает одинаковой специфичностью связывания и аффинностью в отношении конкретного эпитопа. Подразумевается, что понятие "человеческое антитело" в контексте настоящего описания относится к антителам, несущим вариабельные области, в которых как каркасные, так и CDR-участки выводят из последовательностей, имеющих человеческое происхождение. Кроме того, если антитело содержит константную область, то константную область также выводят из таких человеческих последовательностей,например последовательностей человеческой зародышевой линии или мутантных версий последовательностей человеческой зародышевой линии, или антитела, содержащего консенсусные каркасные последовательности, выведенные на основе анализа человеческих каркасных последовательностей, который описан у Knappik и др., J. Mol. Biol., 296, 2000, c. 57-86. Человеческие антитела, предлагаемые в изобретении, могут включать также аминокислотные остатки, которые не кодируются человеческими последовательностями (например, в результате мутаций,интродуцированных путем случайного или сайт-направленного мутагенеза in vitro или соматической мутации in vivo). Однако в контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "человеческое антитело" не относится к антителам, в которых последовательности CDR, выведенные из зародышевой линии других млекопитающих, таких как мышь, трансплантированы в человеческие последовательности каркасных участков. Понятие "человеческое моноклональное антитело" относится к антителам, обладающим одинаковой специфичностью связывания, которые имеют вариабельные области, в которых как каркасные, так иCDR-участки выводят из человеческих последовательностей. В одном из вариантов осуществления изобретения человеческие моноклональные антитела получают с помощью гибридомы, которая включает Вклетку, полученную из трансгенного животного, кроме человека, например трансгенной мыши, в геноме которой содержится трансген человеческой тяжелой цепи и трансген человеческой легкой цепи, слитый с иммортализованной клеткой. Понятие "рекомбинантное человеческое антитело" в контексте настоящего описания относится ко всем человеческим антителам, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют с помощью методов рекомбинации, например, к антителам, выделенным из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным благодаря интродукции генов человеческого иммуноглобулина или которые получены из гибридом, к антителам, выделенным из клетки-хозяина, трансформированной с целью экспрессии человеческого антитела, например, с использованием трансфектомы, к антителам, выделенным из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител, и к антителам, полученным, экспрессированным, созданным или выделенным любыми другими путями, которые включают сплайсинг всего гена человеческого иммуноглобулина или его части посредством лигирования с другими последовательностями ДНК. Указанные рекомбинантные человеческие антитела несут вариабельные области, в которых каркасные и CDR-участки выводят из последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Однако в некоторых вариантах осуществления изобретения указанные рекомбинантные человеческие антитела можно подвергать мутагенезу in vitro (или, когда для получения человеческих последовательностей Ig используют трансгенных животных, соматическому мутагенезу in vivo), и в результате аминокислотные последовательности VH- и VL-областей рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые хотя и выведены и являются родственными последовательностям VH и VL человеческой зародышевой линии, могут не встречаться в естественных условиях в популяции антител человеческой зародышевой линии in vivo. В контексте настоящего описания понятие "изотип" относится к классу антител (например, IgM,IgE, IgG, такому как IgG1, IgG2 или IgG4), который кодируется генами константной области тяжелой цепи. Фраза "антитело, распознающее антиген" и "антитело, специфическое в отношении антигена" в контексте настоящего описания применяют взаимозаменяемо с понятием "антитело, которое связывается специфически с антигеном". В контексте настоящего описания подразумевается, что антитело, которое "специфически связывается с полипептидом склеростина", представляет собой антитело, связывание которого с полипептидом-5 018756 склеростина характеризуется значением KD, составляющим 110-8 М или менее, 110-9 М или менее или 110-10 М или менее. Антитело, которое "дает перекрестную реакцию с антигеном, отличным от склеростина", означает антитело, связывание которого с антигеном характеризуется значением KD, составляющим 0,510-8 М или менее, 510-9 М или менее или 210-9 М или менее. Антитело, которое "не дает перекрестную реакцию с конкретным антигеном", представляет собой антитело, связывание которого с указанным антигеном характеризуется значением KD, составляющим 1,510-8 М или более, или значениемKD, составляющим от 510-8 М до 1010-8 М или 110-7 М или более. В конкретных вариантах осуществления изобретения те антитела, которые не дают перекрестную реакцию с антигеном, характеризуются практически не выявляемым связыванием с этими белками при оценке с помощью стандартных анализов связывания. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt" относится к антителу, которое восстанавливает индуцируемую wnt передачу сигналов в присутствии склеростина при оценке с помощью клеточного (репортерного) анализа SuperTopFlash (STF), что характеризуется значениями IC50 менее примерно 1 мМ, 100, 20, 10 нМ или менее. Указанный STF-анализ описан более подробно ниже в примерах. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации" относится к антителу, которое восстанавливает индуцируемую ВМР 2 минерализацию в присутствии склеростина при оценке с помощью клеточного анализа, что характеризуется значениями IC50 менее примерно 1 мМ,500, 100, 10, 1 нМ или менее. Указанный анализ описан более подробно ниже в примерах. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью анализа фосфорилирования Smad1" относится к антителу, которое восстанавливает индуцируемое ВМР 6 фосфорилирование Smad1 в присутствии склеростина при оценке с помощью клеточного анализа, что характеризуется значениями IC50 менее примерно 1 мМ, 500, 100, 10, 1 нМ или менее. Указанный анализ описан более подробно ниже в примерах. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое ингибирует связывание склеростина с LRP-6" относится к антителу, которое ингибирует связывание склеростина сLRP-6, что характеризуется значениями IC50 менее примерно 1 мМ, 500, 100, 10, 5, 3, 1 нМ или менее. Указанный анализ описан более подробно ниже в примерах. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность" относится к антителу, которое обладает способностью усиливать формирование кости, повышать ее массу и плотность на уровне, характерном для обработки с интервалом в один день с использованием высокой анаболической дозы РТН, что описано в примере 10. Понятие "Kassoc" или "Ka" в контексте настоящего описания относится к скорости ассоциации взаимодействия конкретного антитела-антигена, а понятие "Kdis" или "Kd" в контексте настоящего описания относится к скорости диссоциации взаимодействия конкретного антитела-антигена. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "KD" относится к константе диссоциации, которую получают из соотношения Kd к Ka (т.е. Kd/Ka) и выражают в молярной концентрации (М). Значения KD для антител можно определять с помощью методов, хорошо известных в данной области. Метод определения значения KD антитела представляет собой метод, основанный на резонансе поверхностного плазмона,или метод, основанный на применении биосенсорной системы, такой как система Biacore. В контексте настоящего описания понятие "аффинность" относится к силе взаимодействия между антителом и антигеном в индивидуальных антигенных сайтах. В каждом антигенном сайте вариабельная область "плеча" антитела взаимодействует посредством слабых нековалентных сил с антигеном в многочисленных сайтах; причем чем больше взаимодействий, тем сильнее аффинность. В контексте настоящего описания понятие "авидность" относится к информативному критерию общей стабильности или силе комплекса антитело-антиген. Она контролируется тремя основными факторами: аффинностью антитела к эпитопу; валентностью и антигена, и антитела; и структурной организацией взаимодействующих участков. В конечном счете, эти факторы определяют специфичность антитела, т.е. вероятность того, что конкретное антитело связывается с определенным антигенным эпитопом. Для получения зонда, обладающего большей авидностью, можно конструировать димерный конъюгат, создавая тем самым обладающие низкой аффинностью взаимодействия (как в случае зародышевой линии антитела), которые легче выявлять с помощью FACS. Кроме того, другие методы повышения авидности антигенного связывания предусматривают создание димеров, тримеров или мультимеров любой из представленных в настоящем описании конструкций антител к склеростину. Указанные мультимеры можно создавать, осуществляя ковалентное связывание между индивидуальными модулями, например, путем имитации встречающегося в естественных условиях связывания С-конца с N-концом или путем имитации димеров антител, которые объединяются друг с другом через их константные области. Связи, создаваемые на границе раздела Fc/Fc, могут быть ковалентными или нековалентными. Кроме-6 018756 того, в гибридах склеростина можно использовать партнеры для димеризации или мультимеризации,отличные от Fc, для создания структур более высокого порядка. Например, можно использовать домены для мультимеризации, такой как домен для тримеризации, описанный у Borean (WO 2004/039841), или домен для пентамеризации, описанный в опубликованной заявке WO 98/18943. В контексте настоящего описания понятие "перекрестная реактивность" относится к антителу или популяции антител, которые связываются с эпитопами на других антигенах. Это может быть обусловлено либо низкой авидностью или низкой специфичностью, либо наличием множества различных антигенов, которые имеют одинаковые или очень сходные эпитопы. Иногда перекрестная реактивность является желательной, когда существует потребность в общем связывании с родственной группой антигенов или при попытке осуществления мечения скрещивающихся видов (кросс-видов), когда последовательность антигенного эпитопа в процессе эволюции не приобретает высокую консервативность. В контексте настоящего описания понятие "высокая аффинность" или "высокая специфичность" касательно антитела изотипа IgG относится к антителу, для которого значение KD в отношении антигенамишени составляет 10-8 М или менее, 10-9 М или менее или 10-10 М или менее. Однако "высокая аффинность" связывания может быть иной для других изотипов антител. Например, "высокая аффинность" связывания касательно изотипа IgM относится к антителу, для которого значение KD составляет 10-7 М или менее или 10-8 М или менее. В контексте настоящего описания понятие "индивидуум" относится к любому человеку или животному, кроме человека. Понятие "животное, кроме человека" включает всех позвоночных животных, например млекопитающих и животных, не относящихся к млекопитающим, в том числе относится к приматам, кроме человека, овцам, собакам, кошкам, лошадям, коровам, курам, амфибиям, рептилиям и т.д. В контексте настоящего описания понятие "оптимизированная" означает, что нуклеотидная последовательность изменена с позиции кодирования аминокислотной последовательности с помощью кодонов, предпочтительных для продуктивных клеток или организмов, как правило, эукариотической клетки,например клетки Pichia или Trichoderma, клетки яичника китайского хомячка (СНО) или человеческой клетки. Оптимизированную нуклеотидную последовательность создают так, чтобы она полностью или максимально возможно сохраняла способность кодировать аминокислотную последовательность и количество остатков, которые кодируются первоначально исходной нуклеотидной последовательностью, которую называют также "родительской" последовательностью. В контексте настоящего описания оптимизированные последовательности создают так, чтобы они имели кодоны, предпочтительные для клеток млекопитающих, однако предусматривается также оптимизированная экспрессия этих последовательностей в других эукариотических клетках. Аминокислотные последовательности, кодируемые оптимизированными нуклеотидными последовательностями, обозначают также как оптимизированные. Различные объекты изобретения описаны более подробно в приведенных ниже подразделах. Стандартные анализы, предназначенные для оценки способности к связыванию антител с склеростином различных видов, известны в данной области и включают, например, ELISA, вестерн-блоттинг и РИА. Приемлемые анализы описаны подробно в примерах. Кинетические характеристики связывания(например, аффинность к связыванию) антител также можно определять с помощью стандартных анализов, известных в данной области, таких как Biacore-анализ. Анализы, предназначенные для оценки воздействий антител на функциональные свойства склеростина (например, связывание с рецептором, предупреждение или облегчение остеолиза), описаны более подробно в примерах. Таким образом, следует понимать, что антитело, которое "ингибирует" одну или несколько из видов функциональной активности склеростина (например, биохимическую, иммунохимическую, клеточную,физиологическую или другие виды биологической активности или т.п.), что определяют на основе методик, известных в данной области и представленных в настоящем описании, статистически значимо снижает конкретный вид активности по сравнению с вариантом без антитела (или, например, когда присутствует контрольное антитело с несоответствующей специфичностью). Антитело, которое ингибирует активность склеростина, вызывает статистически значимое снижение оцениваемого параметра по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 50, 80 или 90% и в конкретных вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, может ингибировать более чем на 95, 98 или 99% функциональную активность склеростина. Понятия "перекрестно блокирует", "перекрестно блокированный" и "перекрестная блокада" в контексте настоящего описания используют взаимозаменяемо, и они относятся к способности антитела или другого связывающего агента оказывать воздействие на связывание других антител или связывающих агентов со склеростином при оценке с помощью стандартного анализа конкурентного связывания. Способность или степень, с которой антитело или другой связывающий агент может оказывать воздействие на связывание другого антитела или связывающей молекулы со склеростином и, следовательно,можно ли это отнести к перекрестному блокированию согласно изобретению, можно определять с помощью стандартных анализов конкурентного связывания. Одним из приемлемых анализов является применение технологии Biacore (например, с использованием устройства типа BIAcore 3000 (фирмаBiacore, Уппсала, Швеция, с помощью которого можно оценивать степень взаимодействий на основе метода резонанса поверхностного плазмона. Другим анализом, который применяют для оценки перекре-7 018756 стного связывания, является подход, основанный на применении ELISA. Оба метода более подробно описаны в примерах. Согласно изобретению перекрестно блокирующее антитело или другой связывающий агент, предлагаемый в изобретении, связывается со склеростином при анализе перекрестной блокады с помощьюBIAcore таким образом, что обнаруженное связывание комбинации (смеси) антител или связывающих агентов составляет от 80 до 0,1% (например, от 80 до 4 от максимального теоретического связывания, в частности от 75 до 0,1% (например, от 75 до 4%) от максимального теоретического связывания, и более конкретно от 70 до 0,1% (например, от 70 до 4%) и еще более предпочтительно от 65 до 0,1% (например,от 65 до 4%) от максимального теоретического связывания (как указано выше) двух антител или связывающих агентов, входящих в комбинацию. Антитело рассматривается как перекрестно блокирующее при анализе с помощью ELISA, который описан в примерах, если присутствующее в растворимой фазе антитело к склеростину обладает способностью вызывать снижение на уровне от 60 до 100%, в частности от 70 до 100%, и более конкретно от 80 до 100% сигнал обнаружения склеростина (т.е. количество склеростина, связанного сенсибилизированным антителом) по сравнению с сигналом обнаружения склеростина, обнаруженным в отсутствие присутствующего в растворимой фазе антитела к склеростину (т.е. в лунках, применяемых в качестве положительного контроля). Моноклональные антитела. Антитела, предлагаемые в изобретении, представляют собой человеческие моноклональные антитела, например, выделенные согласно описанным в примерах методам. Аминокислотные последовательности VH выделенных антител, предлагаемых в изобретении, представлены в SEQ ID NO: 69-77. Аминокислотные последовательности VL выделенных антител, предлагаемых в изобретении, представлены в SEQID NO: 80-88 соответственно. Соответствующие предпочтительные полноразмерные аминокислотные последовательности тяжелых цепей антител, предлагаемых в изобретении, представлены в SEQ ID NO: 113-121. Соответствующие предпочтительные полноразмерные аминокислотные последовательности легких цепей антител, предлагаемых в изобретении, представлены в SEQ ID NO: 124-132 соответственно. Другие антитела, предлагаемые в изобретении, включают мутантные аминокислоты, при этом их последовательности еще идентичны по меньшей мере на 60, 70, 80, 90 или 95% в CDR-участках, где последовательности CDR-участков представлены выше. В некоторых вариантах осуществления изобретения изобретение относится к мутантным аминокислотным последовательностям, в которых не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот в CDR-участках изменены в результате мутаций по сравнению с CDR-участками, последовательности которых описаны выше. Кроме того, родительские нуклеотидные последовательности вариабельных областей тяжелых цепей представлены в SEQ ID NO: 89-90. Родительские нуклеотидные последовательности вариабельных областей тяжелых цепей представлены в SEQ ID NO: 100-101. Полноразмерные нуклеотидные последовательности легких цепей, оптимизированные для экспрессии в клетках млекопитающих, представлены вSEQ ID NO: 146-154. Полноразмерные нуклеотидные последовательности тяжелых цепей, оптимизированные для экспрессии в клетках млекопитающих, представлены в SEQ ID NO: 135-143. Полноразмерные аминокислотные последовательности легких цепей, кодируемые оптимизированными нуклеотидными последовательностями легких цепей, представлены в SEQ ID NO: 124-132. Полноразмерные аминокислотные последовательности тяжелых цепей, кодируемые оптимизированными нуклеотидными последовательностями тяжелых цепей, представлены в SEQ ID NO: 113-121. Другие антитела, предлагаемые в изобретении, включают мутантные аминокислоты или нуклеиновые кислоты, последовательности которых еще идентичны по меньшей мере на 60, 70, 80, 90 или 95% или более описанным выше последовательностям. В некоторых вариантах осуществления изобретения изобретение относится к мутантным аминокислотным последовательностям, в которых не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот в вариабельных областях изменены в результате мутаций по сравнению с вариабельными областями, последовательности которых описаны выше, сохраняя при этом практически такую же терапевтическую активность. Поскольку каждое их этих антител может связываться со склеростином, то последовательности VH,VL, полноразмерной легкой цепи и полноразмерной тяжелой цепи (нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности) могут быть "смешаны и совмещены (соответствующим образом подобраны друг к другу)" для создания других связывающих молекул антител к склеростину, предлагаемых в изобретении. Связывание склеростина с указанными "смешанными и совмещенными" антителами можно оценивать с помощью анализов связывания, которые описаны выше и в примерах (например,ELISA). Когда указанные цепи смешивают и совмещают, то VH-последовательность из конкретной парыVH/VL можно заменять структурно подобной VH-последовательностью. Аналогично этому последовательность полноразмерной тяжелой цепи из конкретной пары полноразмерная легкая цепь/полноразмерная тяжелая цепь можно заменять структурно подобной последовательностью полноразмерной тяжелой цепи. Аналогично этому VL-последовательность из конкретной пары VH/VL можно заменять структурно схожей VL-последовательностью. Аналогично этому последовательность полноразмерной легкой цепи из конкретной пары полноразмерная тяжелая цепь/полноразмерная легкая цепь можно заменять структурно подобной последовательностью полноразмерной легкой цепи. Таким обра-8 018756 зом, одним из объектов изобретения является выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, которое/который содержит вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 69-77; и вариабельную область легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 80-88; где антитело специфически связывается со склеростином. Другим объектом изобретения является:(I) выделенное моноклональное антитело, содержащее полноразмерную тяжелую цепь, которая включает аминокислотную последовательность, оптимизированную для экспрессии в клетке млекопитающего, которую выбирают из группы, включающей SEQ ID NO: 113-121; и полноразмерную легкую цепь, которая включает аминокислотную последовательность, оптимизированную для экспрессии в клетке млекопитающего, которую выбирают из группы, включающей SEQ ID NO: 124-132; или(II) функциональный белок, который содержит его антигенсвязывающий участок. Другим объектом изобретения является:(I) выделенное моноклональное антитело, содержащее полноразмерную тяжелую цепь, которая включает нуклеотидную последовательность, оптимизированную для экспрессии в клетке млекопитающего, которую выбирают из группы, включающей SEQ ID NO: 135-143; и полноразмерную легкую цепь,которая включает нуклеотидную последовательность, оптимизированную для экспрессии в клетке млекопитающего, которую выбирают из группы, включающей SEQ ID NO: 146-154; или(II) функциональный белок, который содержит его антигенсвязывающий участок. Еще одним объектом изобретения являются антитела, которые содержат CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелых цепей и легких цепей, или их комбинации. Аминокислотные последовательности CDR1 VH антител представлены в SEQ ID NO: 1-11. Аминокислотные последовательности CDR2 VH антител представлены в SEQ ID NO: 12-22. Аминокислотные последовательности CDR3 VH антител представлены в SEQID NO: 23-33. Аминокислотные последовательности CDR1 VL антител представлены в SEQ ID NO: 34-44. Аминокислотные последовательности CDR2 VL антител представлены в SEQ ID NO: 45-55. Аминокислотные последовательности CDR3 VL антител представлены в SEQ ID NO: 56-66. CDR-участки описывают по системе Кэбота (Kabat E.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд., изд-воU.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991). С учетом того, что каждое из указанных антител может связываться со склеростином и что специфичность к связыванию с антигеном обеспечивается, прежде всего, CDR1-, 2- и 3-участками, последовательности CDR1, 2 и 3 VH и последовательности CDR1, 2 и 3 VL можно "смешивать и совмещать" (т.е. можно смешивать и совмещать CDR из различных антител, хотя каждое антитело должно содержатьCDR1, 2 и 3 VH и CDR1, 2 и 3 VL для создания других направленных против склеростина связывающих молекул, предлагаемых в изобретении. Связывание склеростина с такими "смешанными и совмещенными антителами" можно тестировать с использованием анализов связывания, которые описаны выше и в примерах (например, ELISA). Когда смешивают и совмещают CDR-последовательности VH, то последовательности CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VH следует замещать структурно сходной(ими)CDRпоследовательности VL смешивают и совмещают, то последовательности CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VL следует замещать структурно сходной(ими) CDRпоследовательностью(ями). Как должно быть очевидно обычному специалисту в данной области, новые последовательности VH и VL можно создавать путем замены одной или нескольких последовательностейCDR-участка VH и/или VL структурно сходными последовательностями из CDR-последовательностей,описанных для моноклональных антител, предлагаемых в настоящем изобретении. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок содержат CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 1-11; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 12-22; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 23-33; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 34-44; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 45-55; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 56-66; где антитело специфически связывается со склеростином. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 3; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 14; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 25; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 36; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 47; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 58.-9 018756 В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 4; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 15; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 26; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 37; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 48; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 59. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 5; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 16; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 27; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 38; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 49; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 60. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 6; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 17; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 28; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 39; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 50; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 61. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 7; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 18; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 29; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 40; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 51; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 62. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 8; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 19; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 30; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 41; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 52; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 63. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 9; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 20; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 31; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 42; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 53; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 64. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 10; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 21; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 32; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 43; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 54; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 65. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 11; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 22; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 33; CDR1 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 44; CDR2 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 55; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 66. В контексте настоящего описания человеческое антитело содержит вариабельные области тяжелой или легкой цепи или полноразмерные тяжелые или легкие цепи, которые являются "продуктом" или "выведены из" конкретной последовательности зародышевой линии, если вариабельные области или полноразмерные цепи получают из системы, в которой в качестве источника последовательностей используют гены иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Для создания одной из таких систем осуществляют иммунизацию трансгенной мыши, несущей человеческие гены иммуноглобулинов, представляю- 10018756 щим интерес антигеном или осуществляют скрининг фаговой дисплейной библиотеки человеческих генов иммуноглобулинов представляющим интерес антигеном. Человеческое антитело, которое "является продуктом" или "выведено из" последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии,можно идентифицировать индивидуально путем сравнения аминокислотной последовательности человеческого антитела и аминокислотных последовательностей иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии и отбора последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, которая является наиболее близкой по последовательности (т.е. имеет самый высокий % идентичности) с последовательностью человеческого антитела. Человеческое антитело, которое "является продуктом" или "выведено из" конкретной последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, может иметь различия в аминокислотах по сравнению с последовательностью зародышевой линии, например, в результате встречающихся в естественных условиях соматических мутаций или искусственных сайтнаправленных мутаций. Однако аминокислотная последовательность отобранного человеческого антитела, как правило, по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, и содержит аминокислотные остатки, которые свидетельствуют о том, что человеческое антитело является человеческим, при сравнении с аминокислотными последовательностями иммуноглобулинов зародышевых линий других видов (например,последовательности мышиной зародышевой линии). В определенных случаях аминокислотная последовательность человеческого антитела может быть по меньшей мере на 60, 70, 80, 90% или по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии. Как правило, последовательности человеческого антитела, выведенные из конкретной последовательности человеческой зародышевой линии, должны иметь не более 10 аминокислотных различий по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. В определенных случаях человеческое антитело может отличаться не более чем на 5 или даже не более чем на 4, 3, 2 или 1 аминокислоту от аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии выбирают из группы, включающей последовательности вариабельных областей тяжелых цепей, которые представлены в SEQ ID NO: 67-68 соответственно, последовательности вариабельных областей легких цепей, которые представлены в SEQ ID NO: 78-79 соответственно. Гомологичные антитела Согласно еще одному варианту осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении,имеет аминокислотные последовательности полноразмерной тяжелой и легкой цепи, нуклеотидные последовательности полноразмерной тяжелой и легкой цепи или вариабельные области тяжелой и легкой цепи, аминокислотные последовательности которых гомологичны аминокислотным и нуклеотидным последовательностям представленных в настоящем описании антител, и при этом антитела сохраняют требуемые функциональные свойства антител к склеростину, предлагаемых в изобретении. Например, в изобретении предложено выделенное моноклональное антитело (или его функциональный белок, который содержит его антигенсвязывающий участок), которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, при этом вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 67-77; вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 78-88; антитело специфически связывается со склеростином и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональный свойств: антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt, антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации или блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке фосфорилирования Smad1, или антитело ингибирует связывание склеростина с LRP-6, или антитело усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность. Другим вариантом осуществления изобретения является выделенное моноклональное антитело (или его функциональный белок, который содержит его антигенсвязывающий участок), которое содержит полноразмерную тяжелую цепь и полноразмерную легкую цепь, при этом полноразмерная тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 111-121; полноразмерная легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 122-132; антитело специфически связывается со склеростином и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональный свойств: антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt, антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации или блокирует ингибирующее действие- 11018756 склеростина при оценке фосфорилирования Smad1, или антитело ингибирует связывание склеростина сLRP-6, или антитело усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность. Другим вариантом осуществления изобретения является выделенное моноклональное антитело (или его функциональный белок, который содержит его антигенсвязывающий участок), которое содержит полноразмерную тяжелую цепь и полноразмерную легкую цепь, при этом полноразмерная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 133-143; полноразмерная легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 144-154; антитело специфически связывается со склеростином и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональный свойств: антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt, антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации или блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке фосфорилирования Smad1, или антитело ингибирует связывание склеростина сLRP-6, или антитело усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность. В различных вариантах осуществления изобретения антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя из описанных выше функциональных свойств. Антитело может представлять собой, например, человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело. В других вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть идентичны на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% указанным выше последовательностям. В других вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть идентичны за исключением аминокислотной замены не более чем в 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных положениях. Антитело, имеющее VH- и VL-области, имеющие высокую (т.е. 80% или более) степень идентичности с VH- и VL-областями, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 67-77 иSEQ ID NO: 89-99 и 100-110 соответственно, с последующей оценкой кодируемого измененного антитела в отношении сохранения у него функциональной активности (т.е. указанных выше функций) с использованием функциональных анализов, представленных в настоящем описании. В других вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности полноразмерной тяжелой цепи и/или полноразмерной легкой цепи могут быть на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны представленным выше последовательностям. Антитело, имеющее полноразмерную тяжелую цепь и полноразмерную легкую цепь, последовательности которых имеют высокую (т.е. 80% или более) степень идентичности с последовательностями полноразмерных тяжелых цепей, которые представлены в любой из SEQ ID NO: 111-121, и с последовательностями полноразмерных легких цепей,которые представлены в любой из SEQ ID NO: 122-132 соответственно, можно получать с помощью мутагенеза (например, сайт-направленного или ПЦР-опосредуемого мутагенеза) молекул нуклеиновых кислот, которые кодируют SEQ ID NO: 133-134 и 144-154 соответственно, с последующей оценкой кодируемого измененного антитела в отношении сохранения у него функциональной активности (т.е. указанных выше функций) с использованием функциональных анализов, представленных в настоящем описании. В других вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности полноразмерной тяжелой цепи и/или полноразмерной легкой цепи могут быть идентичны на 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97,98 или 99% последовательностям, представленным в настоящем описании. В других вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и/или полноразмерной легкой цепи могут быть идентичны на 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% последовательностям, представленным в настоящем описании. Согласно настоящему описанию процент идентичности двух последовательностей является функцией количества идентичных положений в последовательностях (т.е. % идентичности = количество идентичных положений/общее количество положений 100), принимая во внимание количество брешей и длину каждой бреши, которую необходимо интродуцировать для оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности двух последовательностей можно осуществлять с помощью математического алгоритма, который описан ниже в примерах, которые не ограничивают объем изобретения. Процент идентичности двух аминокислотных последовательностей можно определять с помощью алгоритма Е. Meyers и W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4, 988, c. 11-17), который включен в программуALIGN (версия 2.0), с использованием таблицы взвешенных остатков РАМ 120, штрафа за длину бреши 12 и штрафа за брешь 4. Кроме того, процент идентичности двух аминокислотных последовательностей можно определять с помощью алгоритма Needleman и Wunsch (J. Mol. Biol., 48, 1970, c. 444-453), который включен в программу GAP, входящую в пакет программ GCG (которая доступна на сайтеhttp://www.gcg.com), с использованием матрицы Blossom 62 или матрицы РАМ 250 и веса бреши 16, 14,12, 10, 8, 6 или 4 и веса длины 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В другом или дополнительном варианте белковые по- 12018756 следовательности, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять также в качестве "запрашиваемой последовательности" при осуществлении поиска в доступных научной общественности базах данных, например, в отношении идентичности с родственными последовательностями. Такой поиск можно осуществлять с использованием программы XBLAST (версия 2.0), разработанной Altschul и др., J.Mol. Biol. 215, 1990, c. 403-410. BLAST-поиск белков можно осуществлять с помощью программыXBLAST, в которой балл = 50, длина слова = 3, для установления уровня гомологии аминокислотных последовательностей с аминокислотными последовательностями молекул антител, предлагаемых в изобретении. Для создания содержащих бреши линеаризированных последовательностей для целей сравнения можно использовать программу Gapped BLAST, описанную у Altschul и др., Nucleic Acids Res.,25(17), 1997, c. 3389-3402. При применении программ BLAST и Gapped BLAST можно использовать принимаемые по умолчанию параметры, которые применяются в соответствующих программах (например, XBLAST и NBLAST) (см. http:Ilwww.ncbi.nhn.nih.gov). Антитела с консервативными модификациями. В конкретных вариантах осуществления антитело, предлагаемое в изобретении, имеет вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где одна или нескольких указанных последовательностей CDR представляет собой специфические аминокислотные последовательности, характерные для антител, предлагаемых в настоящем изобретении, или их консервативные модификации, и где антитела сохраняют требуемые функциональные свойства антител к склеростину,предлагаемых в изобретении. Таким образом, в изобретении предложено выделенное моноклональное антитело или функциональный белок, которое/который содержит антигенсвязывающий участок, состоящий из варибельной области тяжелой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3,и вариабельной области легкой, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где аминокислотные последовательности CDR1 вариабельной области тяжелой цепи выбраны из группы, включающей SEQ ID NO: 1-11 и их консервативные модификации; аминокислотные последовательностиCDR2 вариабельной области тяжелой цепи выбраны из группы, включающей SEQ ID NO: 12-22 и их консервативные модификации; аминокислотные последовательности CDR3 вариабельной области тяжелой цепи выбраны из группы, включающей SEQ ID NO: 23-33 и их консервативные модификации; аминокислотные последовательности CDR1 вариабельной области легкой цепи выбраны из группы, включающей SEQ ID NO: 34-44 и их консервативные модификации; аминокислотные последовательностиCDR2 вариабельной области легкой цепи выбраны из группы, включающей SEQ ID NO: 45-55 и их консервативные модификации; аминокислотные последовательности CDR3 вариабельной области легкой цепи выбраны из группы, включающей SEQ ID NO: 56-66 и их консервативные модификации; и антитело специфически связывается со склеростином и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональный свойств: антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt, антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации или блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке фосфорилирования Smad1, или антитело ингибирует связывание склеростина с LRP-6, или антитело усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность. В различных вариантах осуществления изобретения антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя или более из описанных выше функциональных свойств. Антитела могут представлять собой, например, человеческие антитела, гуманизированные антитела или химерные антитела. В других вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, оптимизированное для экспрессии в клетке, имеет последовательность полноразмерной тяжелой цепи и последовательность полноразмерной легкой цепи, где одна или несколько из указанных последовательностей имеют специфические аминокислотные последовательности, характерные для представленных в настоящем описании антител, или их консервативные модификации, и где антитела сохраняют требуемые функциональные свойства антител к склеростину, предлагаемых в изобретении. Таким образом, в изобретении предложено выделенное моноклональное антитело, оптимизированное для экспрессии в клетке млекопитающего, состоящее из полноразмерной тяжелой цепи и полноразмерной легкой цепи, где аминокислотная последовательность полноразмерной тяжелой цепи выбрана из группы, включающей SEQID NO: 111-121 и их консервативные модификации; и аминокислотная последовательность полноразмерной легкой цепи выбрана из группы, включающей SEQ ID NO: 122-132, и их консервативные модификации; антитело специфически связывается со склеростином и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональный свойств: антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt, антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации или блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке фосфорилирования Smad1, или антитело ингибирует связывание склеростина с LRP-6, или антитело усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность. В различных вариантах осуществления изобретения антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя или более из описанных выше функциональных свойств. Антитела мо- 13018756 гут представлять собой, например, человеческие антитела, гуманизированные антитела или химерные антитела. В контексте настоящего описания понятие "консервативные модификации последовательностей" относится к аминокислотным модификациям, которые не оказывают существенного влияния или не существенно изменяют характеристики связывания антитела, которое содержит указанную аминокислотную последовательность. Указанные консервативные модификации включают аминокислотные замены,добавления или делеции. Модификации можно интродуцировать в антитело, предлагаемое в изобретении, с помощью стандартных методов, известных в данной области, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредуемый мутагенез. Консервативные аминокислотные замены представляют собой замены, при которых аминокислотный остаток замещают аминокислотным остатком, который имеет сходную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков со сходными боковыми цепями известны в данной области. Эти семейства включают аминокислотные остатки с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин,пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин,изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или несколько аминокислотных остатков в CDR-участках антитела, предлагаемого в изобретении, можно заменять на другие аминокислотные остатки из одного и того же семейства боковых цепей, и измененное антитело можно оценивать в отношении сохранения им функции с помощью представленных в настоящем описании функциональных анализов. Антитела, которые связываются с тем же эпитопом, что и антитела к склеростину, предлагаемые в изобретении. Другим вариантом осуществления изобретения являются антитела, которые связываются с тем же эпитопом, что и различные специфические антитела к склеростину, предлагаемые в изобретении и представленные в настоящем описании. При создании изобретения неожиданно было установлено, что все антитела, описанные в примерах, которые обладают способностью:(I) блокировать ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt;(II) блокировать ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации;(III) ингибировать связывание склеростина с LRP-6; и,(IV) усиливать формирование кости, повышть ее массу и плотность,связываются с одним и тем же эпитопом в склеростине с высокой аффинностью, где эпитоп представляет собой конформационный эпитоп, который включает аминокислоты, представленные как в SEQID NO: 156, так и в SEQ ID NO: 157. Вне зависимости от какой-либо конкретной модели можно предположить, что аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 156 и SEQ ID NO: 157 описывают одну область конформационного эпитопа в полипептиде склеростина, которая распознается антителами, предлагаемыми в изобретении. Таким образом, дополнительные антитела можно идентифицировать на основе их способности перекрестно конкурировать (например, конкурентно ингибировать связывание статистически значимым образом) с другими антителами, предлагаемыми в изобретении, при оценке с помощью стандартных анализов связывания склеростина. Способность тестируемого антитела ингибировать связывание антител,предлагаемых в настоящем изобретении, с человеческим склеростином демонстрирует, что тестируемое антитело может конкурировать с этим антителом за связывание с человеческим склеростином; не вдаваясь в какую-либо теорию, можно предположить, что такое антитело связывается с таким же или родственным (например, структурно сходным или находящимся в пространственной близости) эпитопом на человеческом склеростине, что и антитело, с которым оно конкурирует. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело, которое связывается с тем же эпитопом на человеческом склеростине,что и антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, представляет собой человеческое моноклональное антитело. Такие человеческие моноклональные антитела можно получать и выделять согласно методам, описанным в примерах. Сконструированные и модифицированные антитела. Антитело, предлагаемое в изобретении, можно получать также с использованием антитела, которое имеет одну или несколько указанных в настоящем описании последовательностей VH и/или VL, в качестве исходного материала для создания модифицированного антитела, где модифицированное антитело может иметь измененные свойства по сравнению с исходным антителом. Антитело можно создавать путем модификации одного или нескольких остатков в одной или обеих вариабельных областях (т.е. VH и/или VL), например, в одном или нескольких CDR-участках и/или в одном или нескольких каркасных участках. В дополнительном или альтернативном варианте антитело можно создавать путем модификации остатков в константной(ых) области(ях), например, для изменения эффекторной(ых) функции(ий)- 14018756 антитела. Для осуществления одного из типов конструирования вариабельной области можно применять трансплантацию CDR. Антитела взаимодействуют с антигенами-мишенями в основном посредством аминокислотных остатков, локализованных в шести гипервариабельных участках (CDR) тяжелой и легкой цепи. По этой причине между аминокислотными остатками в CDR индивидуальных антител имеются более существенные различия, чем между последовательностями, локализованными вне CDR. Поскольку последовательности CDR ответственны за большую часть взаимодействий антитело-антиген,можно экспрессировать рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства конкретных встречающихся в естественных условиях антител, путем конструирования экспрессионных векторов, которые содержат последовательности CDR из конкретного встречающегося в естественных условиях антитела,полученные путем трансплантации в последовательности каркасных участков из других антител с другими свойствами (см., например, Riechmann L. и др., Nature, 332, 1998, c. 323-327; Jones P. и др., Nature,321, 1986, c. 522-525; Queen С. и др., Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A., 86, 1989, c. 10029-10033; US 5225539 на имя Winter и US 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 на имя Queen с соавт.). Таким образом, следующим объектом изобретения является выделенное моноклональное антитело или функциональный белок, которое/который содержит антигенсвязывающий участок, содержащий последовательности CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 1-11; последовательности CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 12-22; последовательности CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ IDNO: 23-33 соответственно; и последовательности CDR1 вариабельной области легкой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 34-44; последовательности CDR2 вариабельной области легкой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 45-55; и последовательности CDR3 вариабельной области легкой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 56-66 соответственно. Таким образом, указанные антитела содержат последовательности CDR VH и VL моноклональных антител, кроме того, они могут содержать различные последовательности каркасных участков указанных антител. Указанные последовательности каркасных участков, которые содержат последовательности генов антител зародышевой линии, можно получать из публичных баз данных ДНК или опубликованных ссылок. Например, последовательности ДНК человеческой зародышевой линии генов вариабельных областей тяжелых и легких цепей можно найти в базе данных последовательностей человеческой зародышевой линии "Vbase" (доступной в сети Интернет на сайте www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), а также у Kabat E.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 15-e изд., изд-во U.S. Department of Healthand Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991; Tomlinson I.M. и др., J. Mol. Biol., 227, 1992, c. 776-798 и Cox J.P.L. и др., Eur. J. Immunol., 24, 1994, c. 827-836; содержание каждой из которых специально включено в настоящее описание в качестве ссылки. Примерами последовательностей каркасных участков, предназначенных для применения в антителах, предлагаемых в изобретении, являются последовательности, структурно подобные последовательностям каркасных участков, которые входят в отобранные антитела, предлагаемые в изобретении, например консенсусные последовательности и/или последовательности каркасных участков, которые входят в моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении. Последовательности CDR1, 2 и 3 VH и последовательности CDR1, 2 и 3 VL можно трансплантировать в каркасные участки, которые имеют последовательность, идентичную с последовательностью гена иммуноглобулина зародышей линии, из которого выведена последовательность каркасного участка, или последовательности CDR можно трансплантировать в каркасные участки, которые содержат одну или несколько мутаций по сравнению с последовательностями зародышевой линии. Например, было установлено, что в определенных случаях целесообразно изменять посредством мутации остатки в каркасных участках для поддержания или повышения способности антитела связываться с антигеном (см., например, US 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 на имя Queen с соавт.). Другим типом модификации вариабельной области является мутация аминокислотных остатков вCDR1, CDR2 и/или CDR3 VH- и/или VL-областей, которая повышает тем самым одну или несколько способностей к связыванию (например, аффинность) представляющего интерес антитела, что называют "созреванием аффинности". Для интродукции мутации(й) и осуществления воздействия на связывание антитела или на другое представляющее интерес функциональное свойство можно применять сайтнаправленный мутагенез или ПЦР-опосредуемый мутагенез, что можно оценивать с помощью анализовin vitro или in vivo, описанных ниже в примерах. Можно интродуцировать консервативные модификации(указанные выше). Мутации могут представлять собой аминокислотные замены, добавления или делеции. Кроме того, как правило, изменяют не более 1, 2, 3, 4 или 5 остатков в CDR-участке. Таким образом, другим вариантом осуществления изобретения являются выделенные моноклональные антитела к склеростину или функциональный белок, которые содержат антигенсвязывающий- 15018756 участок, состоящий из вариабельной области тяжелой цепи, которая имеет CDR1 VH-области, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 1-11, или аминокислотной последовательности, которая имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 1-11; CDR2 VH-области, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 12-22, или аминокислотной последовательности, которая имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению сSEQ ID NO: 12-22; CDR3 VH-области, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 23-33, или аминокислотной последовательности, которая имеет 1, 2, 3,4 или 5 аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 23-33; CDR1 VLобласти, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ IDNO: 34-44, или аминокислотной последовательности, которая имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 34-44; CDR2 VL-области, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 45-55, или аминокислотной последовательности, которая имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 45-55; CDR3 VL-области, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 56-66, или аминокислотной последовательности,которая имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с SEQ IDNO: 56-66. Трансплантация антигенсвязывающих доменов в альтернативные остовы или каркасы. Широкое разнообразие остовов или каркасов антител/иммуноглобулинов можно применять, если образовавшийся полипептид включает по меньшей мере один связывающий участок, который специфически связывается со склеростином. Такие остовы или каркасы включают 5 основных идиотипов человеческих иммуноглобулинов или их фрагментов (которые представлены в настоящем описании) и включают иммуноглобулины других видов животных, которые предпочтительно имеют гуманизированные аспекты. Одноцепочечные антитела, например, идентифицированные в представителях верблюжьих,являются наиболее предпочтительными в этом плане. Специалисты в данной области продолжают открывать и создавать новые остовы, каркасы и фрагменты. Одним из объектов изобретения является создание антител на основе неиммуноглобулиновых остовов с использованием неиммуноглобулиновых каркасов, в которые можно трансплантировать CDR,предлагаемые в изобретении. Можно применять известные или открытые в будущем неиммуноглобулиновые остовы и каркасы, если они содержат связывающий участок, специфический для белка-мишени,последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 155. Указанные соединения обозначены в настоящем описании как "полипептиды, содержащие специфический для мишени связывающий участок". Примеры неиммуноглобулиновых остовов дополнительно описаны в разделах ниже (верблюжьи антитела и каркасы, отличные от характерных для антител каркасов). Верблюжьи антитела. Белки антител, полученные из представителей семейства двугорбых и одногорбых верблюдов(Camelus bactrianus и Calelus dromaderius), включая представителей животных Нового Света, таких как различные виды лам (Lama paccos, Lama glama и Lama vicugna), охарактеризованы в отношении их размера, структурной комплексности и антигенности в отношении человека. Установлено, что некоторые антитела типа IgG из этого семейства млекопитающих в естественных условиях лишены легких цепей и поэтому отличаются по структуре от типичной состоящей из четырех цепей четвертичной структуры с двумя тяжелыми и двумя легкими цепями, характерной для антител из организма других животных (см. РСТ/ЕР 93/02214 (WO 94/04678, опубликована 3 марта 1994 г Участок верблюжьего антитела, представляющий собой небольшую индивидуальную вариабельную область, обозначенную как VH, можно создавать с помощью генной инженерии с получением небольшого белка, обладающего высокой аффинностью к мишени, что приводит к образованию низкомолекулярного выведенного из антитела белка, обозначенного как "верблюжье нанотело" (см. US 5759808,выданный 2 июня 1998 г.; см. также Stijlemans В. и др., J. Biol. Chem, 279, 2004, c. 1256-1261; DumoulinM. и др., Nature, 424, 2003, c. 783-788; Pleschberger M. и др., Bioconjugate Chem, 14, 2003, c. 440-448; Cortez-Retamozo V. и др., Int J. Cancer, 89, 2002, c. 456-462 и Lauwereys М. и др., EMBO J. 17, 1998, c. 35123520). Созданные библиотеки верблюжьих антител и фрагментов антител доступны на коммерческой основе, например, от фирмы Ablynx, Рент, Бельгия. Аналогично другим антителам, полученным из видов, кроме человека, аминокислотную последовательность верблюжьего антитела можно изменять рекомбинантно с получением последовательности, в большей степени напоминающей человеческую последовательность, т.е. нанотело можно "гуманизировать". Таким путем можно дополнительно понижать естественную низкую антигенность верблюжьих антител для людей. Верблюжье нанотело имеет молекулярную массу, составляющую примерно 1/10 от молекулярной массы человеческого IgG, а физический диаметр белка составляет лишь несколько нанометров. Одной из связанных с малым размером особенностей является способность верблюжьих нанотел связываться с антигенными сайтами, которые являются функционально незаметными для более крупных белковых антител, т.е. верблюжьи нанотела можно применять в качестве реагентов, выявляющих антигены, которые- 16018756 остаются скрытыми при использовании классических иммунологических методов, и возможно в качестве терапевтических агентов. Таким образом, другой, связанной с малым размером особенностью верблюжьего нанотела, является способность ингибировать связывание со специфическим сайтом в бороздке или узкой расщелине белка-мишени, и поэтому их можно применять в качестве субстанции, более напоминающей по своей функции классическое низкомолекулярное лекарственное средство, чем классическое антитело. Небольшая молекулярная масса и компактный размер обусловливает также очень высокую термостабильность, стабильность при экстремальных значениях рН и стабильность к протеолитическому расщеплению и низкую антигенность верблюжьих нанотел. Еще одним следствием указанных особенностей является то, что верблюжьи нанотела легко проникают из кровеносной системы в ткани и даже проникают через гематоэнцефалический барьер и их можно применять для лечения заболеваний, поражающих нервную ткань. Нанотела могут облегчать также транспорт лекарственных средств через гематоэнцефалический барьер (см. заявку на патент США 20040161738, опубликованную 19 августа 2004 г.). Эти особенности в сочетании с низкой антигенностью в отношении людей свидетельствуют об их большом терапевтическом потенциале. Кроме того, эти молекулы можно полностью экспрессировать в прокариотических клетках, таких как Е. coli, и экспрессировать в виде слитых белков с бактериофагом, и они являются функционально активными. Таким образом, отличительным признаком настоящего изобретения является верблюжье антитело или нанотело, обладающее высокой аффинностью к склеростину. В конкретных вариантах осуществления изобретения верблюжье антитело или нанотело получают в естественных условиях в животном из семейства верблюжьих, т.е. оно продуцируется в организме представителя верблюжьих после иммунизации склеростином или его пептидным фрагментом при применении методов, описанных для других антител. В другом варианте верблюжье нанотело к склеростину конструируют, т.е. получают путем отбора,например, из фаговых дисплейных библиотек соответствующим образом мутированных белком верблюжьих нанотел с помощью метода пэннинга с использованием в качестве мишени склеростина, как описано в приведенных в настоящем описании примерах. Сконструированные нанотела можно дополнительно усовершенствовать с помощью генной инженерии таким образом, чтобы время их полужизни в реципиенте составляло от 45 мин до 2 недель. В конкретном варианте осуществления изобретения верблюжье антитело или нанотело получают путем трансплантации последовательностей CDR тяжелой или легкой цепи человеческих антител, предлагаемых в изобретении, в нанотело или в последовательности каркасных участков однодоменного антитела согласно методу, описанному, например, в РСТ/ЕР 93/02214 (WO 94/04678). Нехарактерные для антител каркасы. Известные неиммуноглобулиновые остовы или каркасы включают (но не ограничиваясь только ими) аднектины (фибронектин) (фирма Compound Therapeutics, Inc., Уолтем, шт. Массачусетс), анкирин(фирма Molecular Partners AG, Цюрих, Швейцария), домены антител (фирма Domantis, Ltd. (Кэмбридж,шт. Массачусетс) и аблинкс (Ablynx nv) (Цвинаарде, Бельгия, липокалин (антикалин) (фирма Pieris Proteolab AG, Фрейзинг, Германия), небольшие модульные иммунологические фармацевтические агенты(фирма Trubion Pharmaceuticals Inc., Сиэтл, шт. Вашингтон), макситела (фирма Avidia, Inc. (МаунтинВью, шт. Калифорния), белок А (фирма Affibody AG, Швеция) и аффилин (гамма-кристаллин или убикитин) (фирма Scil Proteins GmbH, Галле, Германия), миметики белковых эпитопов (фирма Polyphor Ltd.,Аллшвиль, Швейцария).I. Аднектины - фирма Compound Therapeutics. Основой аднектиновых каркасов является домен фибронектина типа III (например, десятый модуль фибронектина типа III (домен 10 Fn3). Домен фибронектина типа III несет 7 или 8 бета-цепей, которые распределены между двумя бета-складками, которые сами упакованы друг напротив друга с образованием ядра белка, и дополнительно содержат петли (аналоги CDR), которые соединяют бета-цепи друг с другом и являются доступными для растворителя. Известно по меньшей мере три такие петли на каждом крае бета-складчатого сэндвича, при этом край является границей белка, перпендикулярной к направлению бета-цепей (US 6818418). Эти каркасы, основой которых является фибронектин, не представляют собой иммуноглобулин, хотя общая укладка очень похожа на укладку наименьшего обладающего функциональной активностью фрагмента антитела, т.е. вариабельной области тяжелой цепи, который содержит полный распознающий антиген компонент в IgG представителей верблюжьих и лам. Благодаря указанной структуре антитело,не представляющее собой иммуноглобулин, имитирует антигенсвязывающие свойства, которые напоминают по природе и аффинности свойства антител. Эти каркасы можно применять для стратегии рандомизации петель и перестановки in vitro, подобной процессу созревания аффинности антител in vivo. Такие молекулы, основой которых является фибронектин, можно применять в качестве каркасов, в которых области петель молекулы можно заменять на CDR, предлагаемые в изобретении, с помощью стандартных методов клонирования.II. Анкирин - фирма Molecular Partners. Технология основана на применении белков, несущих выведенные из анкирина повторяющиеся модули в качестве каркасов для вариабельных областей, которые можно использовать для связывания с различными мишенями. Повторяющийся анкириновый модуль представляет собой состоящий из 33 аминокислот полипептид, который содержит две антипараллельные -спирали и -петли. Связывание вариабельных областей максимально оптимизируют на основе доступности для рибосом.III. Макситела/авимеры - фирма Avidia. Авимеры получают из встречающегося в естественных условиях содержащего А-домен белка, такого как LRP-1. Эти домены используются в естественных условиях для взаимодействий типа белок-белок,и у человека структурной основой более чем 250 белков являются А-домены. Авимеры состоят из нескольких различных мономеров "А-домена" (2-10), сцепленных с помощью аминокислотных линкеров. Можно создавать авимеры, которые могут связываться с антигеном-мишенью, с использованием методологии, описанной, например, в 20040175756; 20050053973; 20050048512 и 20060008844.IV. Белок А - фирма Affibody. Обладающие аффинностью лиганды Affibody представляют собой небольшие простые белки, состоящие из трехспирального пучка, основой которого является каркас одного из IgG-связывающих доменов белка А. Белок А представляет собой поверхностный белок бактерии Staphylococcus aureus. Этот каркасный домен состоит из 58 аминокислот, 13 из которых произвольно использовали для создания библиотек Affibody с большим количеством вариантов лиганда (см., например, US 5831012). МолекулыAffibody напоминают антитела, их молекулярная масса составляет 6 кДа, для сравнения молекулярная масса антител составляет 150 кДа. Несмотря на небольшой размер, сайт связывания молекул Affibody подобен сайту связывания антитела.Anticalins представляют собой продукты, разработанные компанией Pieris ProteoLab AG. Их получают из липокалинов, широко распространенной группы небольших и эффективных белков, которые,как правило, принимают участие в физиологическом транспорте или хранении чувствительных к химическим агентам или нерастворимых соединений. Несколько встречающихся в естественных условиях липокалинов обнаружено в тканях или общей воде организма человека. Их белковая архитектура напоминает структуру иммуноглобулинов с гипервариабельными петлями на вершине жесткого остова. Однако в отличие от антител или их рекомбинантных фрагментов липокалины состоят из одной полипептидной цепи, содержащей 160-180 аминокислотных остатков, т.е. несколько более крупной, чем один домен иммуноглобулина. Набор из четырех петель, которые образуют связывающий карман, обладает выраженной структурной пластичностью и допускает широкое разнообразие боковых цепей. Таким образом, при использовании соответствующего процесса сайту связывания можно придавать новую форму, предназначенную для распознавания с высокой аффинностью и специфичностью заранее определенных молекул-мишеней различной формы. Один из белков семейства липокалинов, а именно связывающий билин белок (ВВР) из Pieris brassicae (капустная белянка), использовали для создания антикалинов путем мутагенеза, затрагивающего четыре петли. Одной из заявок на патент, в которых описаны "антикалины", приведенной в качестве примера, является РСТ WO 199916873.VI. Аффилин (Affilin) - белки фирмы Scil Proteins. Молекулы Affilin представляют собой небольшие неиммуноглобулиновые белки, которые разработаны с целью достижения специфических аффинностей к белкам и небольшим молекулам. Новые молекулы Affilin можно очень быстро отбирать из двух библиотек, основой каждой из которых являются различные полученные из человеческого организма белки-каркасы. Молекулы Affilin не обладают какой-либо структурной гомологией с белками иммуноглобулинов. На фирме Scil Proteins применяют два Affilin-каркаса, одним из которых является гаммакристаллин, человеческий структурный белок хрусталика глаза, а другим являются белки суперсемейства "убикитина". Оба человеческих каркаса имеют очень малый размер, характеризуются высокой температуростойкостью и практически устойчивы к изменениям значений рН и действию денатурирующих агентов. Указанная высокая стабильность главным образом является результатом расширенной бетаскладчатой конформации белков. Примеры выведенных из гамма-кристаллина белков описаны в WO 200104144, а примеры "убкитиноподобных" белков описаны в WO 2004106368.VII. Миметики белковых эпитопов (РЕМ). РЕМ представляют собой имеющие средний размер, циклические, напоминающие пептиды молекулы (ММ 1-2 кДа), которые имитируют вторичные структуры белков типа бета-"шпителек", т.е. основную вторичную структуру, участвующую во взаимодействиях типа белок-белок. В более общем случае любой полипептид, имитирующий 3-мерную структуру эпитопа описанных антител, является частью настоящего изобретения. Предпочтительными вариантами являются полипептиды, состоящие из 30-100 аминокислот, которые содержат, по меньшей мере, такие полипептиды, как E1-L-Е 2, где Е 1 обозначает SEQ IDNO: 156 и Е 2 обозначает SEQ ID NO: 157 и L обозначает полипептидный линкер, который позволяет Е 1 и Е 2 воспроизводить 3-мерную структуру области, распознаваемой антителами, предлагаемыми в изобретении. В предпочтительном варианте осуществления изобретения L обозначает линкер, состоящий из 10-20 аминокислот, выбранный из глицининовых и сериновых остатков. Предпочтительно линкер L содержит пептид GGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO: X/SEQ ID NO: 158) или GGGGSGGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:Y/SEQ ID NO: 159), более предпочтительно линкер L практически состоит из SEQ ID NO: X или SEQ ID NO:Y. Указанные полипептиды должны сохранять высокую аффинность к антителам, предлагаемым в изобретении. Эти полипептиды целесообразно также использовать в качестве иммуногенов для получения антител к склеростину. Указанные полипептиды можно применять также в качестве антагонистов или агонистов склеростина, и поэтому они могут найти применение, подобное применению, которое указано для антител,предлагаемых в настоящем изобретении. Полипептиды с одной или несколькими аминокислотными заменами или делециями, предпочтительно затрагивающими не менее 1, 2 или 3 аминокислот заменами или делециями в последовательности Е 1 и/или Е 2, также являются частью изобретения. Эти полипептиды можно также конструировать так,чтобы они обладали удлиненным временем полужизни или улучшенной стабильностью. Прежде всего,слитые конструкции этих полипептидов с сывороточными белками, такими как Fc-фрагменты IgG или человеческий сывороточный альбумин, можно создавать таким образом, чтобы они обладали удлиненным временем полужизни, подобно созданию Fc, что описано в следующем параграфе для молекул фрагментов антител, предлагаемых в изобретении. Конструирование каркасных участков или Fc. К сконструированным антителам, предлагаемым в изобретении, относятся антитела, в которых сделаны модификации в остатках каркасных участков в VH и/или VL, например, с целью улучшения свойств антитела. Как правило, такие модификации каркасных участков осуществляют для снижения иммуногенности антитела. Например, один из подходов представляет собой "обратное мутирование" одного или нескольких остатков каркасного участка с получением соответствующей последовательности зародышевой линии. Более конкретно, антитело, которое было подвергнуто соматической мутации, может содержать остатки каркасного участка, отличающиеся от последовательности зародышевой линии, из которой выведено антитело. Такие остатки можно идентифицировать путем сравнения последовательностей каркасных участков антитела с последовательностями зародышевой линии, из которой выведено антитело. Для возвращения последовательностей каркасного участка к исходной конфигурации зародышей линии соматические мутации можно подвергать "обратному мутированию" с получением последовательности зародышевой линии, например, с помощью сайт-направленного мутагенеза или ПЦР-опосредуемого мутагенеза. Такие антитела с "обратными мутациями" подпадают также под объем настоящего изобретения. Другой тип модификации каркасного участка включает изменение путем мутации одного или нескольких остатков в каркасном участке или даже в одном или нескольких CDR-участках для удаления Тклеточных эпитопов с целью снижения потенциальной иммуногенности антитела. Этот подход обозначают также как "деиммунизация", и он описан более подробно в опубликованном US 20030153043 на имя Carr с соавт. В дополнительном или альтернативном варианте, помимо модификаций в каркасных участках, CDR антитела, предлагаемые в изобретении, могут включать модификации в Fc-фрагменте, как правило, для изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела, таких как время полужизни в сыворотке, фиксация комплемента, связывание Fc-рецептора и/или антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность. Кроме того, антитело, предлагаемое в изобретении, можно модифицировать химически (например, к антителу можно присоединять один или несколько химических фрагментов) или можно модифицировать для изменения его гликозилирования, и в этом случае с целью изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела. Каждый из указанных вариантов осуществления изобретения будет дополнительно описан ниже. Нумерация остатков в Fc-фрагменте соответствует нумерации EU по Кэботу. В одном из вариантов осуществления изобретения модифицируют шарнирную область СН 1 так,чтобы изменять, например увеличивать или снижать, количество цистеиновых остатков в шарнирной области. Этот подход описан также в US 5677425 на имя Bodmer с соавт. Количество цистеиновых остатков в шарнирной области СН 1 изменяют, например, для облегчения сборки легких и тяжелых цепей или для повышения или снижения стабильности антитела. В другом варианте осуществления изобретения шарнирную область Fc-фрагмента антитела можно изменять с помощью мутации для снижения биологического времени полужизни антитела. Более конкретно, интродуцируют одну или несколько аминокислотных мутаций в область контакта СН 2-СН 3 доменов шарнирной области Fc-фрагмента для ухудшения связывания антитела с белком А золотистого стафилококка Staphylococcyl (SpA) по сравнению со связыванием нативной шарнирной области Fcфрагмента с SpA. Этот подход описан более подробно в US 6165745 на имя Ward с соавт.- 19018756 В другом варианте осуществления изобретения антитело модифицируют для удлинения биологического времени полужизни. При этом возможно применение различных подходов. Например, можно интродуцировать одну или несколько из следующих мутаций: T252L, T254S, T256F, описанных в US 6277375 на имя Ward. В другом варианте для удлинения биологического времени полужизни можно изменять антитело в СН 1- или CL-области путем интродукции связывающегося с рецептором-"спасателем" эпитопа, полученного из двух петель СН 2-домена Fc-фрагмента IgG, как описано в US 5869046 и US 6121022 на имя Presta с соавт. В других вариантах осуществления изобретения Fc-фрагмент изменяют путем замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка на другой аминокислотный остаток для изменения эффекторных функций антитела. Например, один или несколько аминокислотных остатков можно заменять на другой аминокислотный остаток так, чтобы у такого антитела изменялась аффинность к эффекторному лиганду,но сохранялась антигенсвязывающая способность родительского антитела. Эффекторный лиганд, аффинность к которому изменяют, может представлять собой, например, Fc-рецептор или С 1-компонент комплемента. Этот подход описан более подробно в US 5624821 и US 5648260, оба на имя Winter с соавт. В другом варианте осуществления изобретения один или несколько аминокислотных остатков аминокислотной последовательности можно заменять другим аминокислотным остатком так, чтобы антитело имело измененную способность к C1q-связыванию и/или пониженную комплементзависимую цитотоксичность (CDC) или чтобы у него отсутствовала CDC. Этот подход описан более подробно в US 6194551 на имя Idusogie с соавт. В другом варианте осуществления изобретения один или несколько аминокислотных остатков модифицируют, изменяя тем самым способность антитела к фиксации комплемента. Этот подход описан также в опубликованной заявке РСТ WO 94/29351 на имя Bodmer с соавт. В еще одном варианте осуществления изобретения Fc-фрагмент модифицируют для повышения способности антитела вызывать антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (ADCC) и/или для повышения аффинности антитела к Fc-рецептору посредством модификации одной или нескольких аминокислот. Этот подход описан более подробно в опубликованной заявке РСТ WO 00/42072 на имя Presta. Кроме того, были картированы сайты связывания человеческого IgG1 с FcRl, FcRII,FcRIII и FcRn и описаны варианты с улучшенной способностью к связыванию (см. Shields R.L. и др., J.Biol. Chen., 276, 2001, c. 6591-6604). В следующем варианте осуществления изобретения модифицируют гликозилирование антитела. Например, можно создавать агликозилированное антитело (т.е. антитело, в котором отсутствует гликозилирование). Гликозилирование можно изменять, например, для повышения аффинности антитела к"антигену". Такие углеводные модификации можно осуществлять путем, например, изменения одного или нескольких сайтов гликозилирования в последовательности антитела. Например, можно осуществлять одну или несколько аминокислотных замен, которые приводят к элиминации одного или нескольких сайтов гликозилирования каркасного участка вариабельной области, устраняя тем самым гликозилирование в этом сайте. Указанное агликозилирование может повышать аффинность антитела к антигену. Этот подход описан более подробно в US 5714350 и US 6350861 на имя Со с соавт. В дополнительном или альтернативном варианте можно создавать антитело с измененным типом гликозилирования, например гипофукозилированное антитело, которое имеет пониженное количество фукозильных остатков, или антитело с повышенным содержанием разделяющих пополам GlcNacструктур. Было продемонстрировано, что такие измененные схемы гликозилирования повышают ADCCактивность антител. Указанные углеводные модификации можно осуществлять, например, путем экспрессии антитела в клетке-хозяине с измененным механизмом гликозилирования. Клетки с измененным механизмом гликозилирования известны в данной области, и их можно применять в качестве клетокхозяев, в которых экспрессируют рекомбинантные антитела, предлагаемые в изобретении, для получения тем самым антител с измененным гликозилированием. Например, в ЕР 1176195 на имя Hang с соавт. описана линия клеток с функционально нарушенным геном FUT8, который кодирует фукозилтрансферазу, в результате чего экспрессируемые в такой клеточной линии антитела характеризуются гипофукозилированием. В опубликованной заявке РСТ WO 03/035835 на имя Presta описан вариант линии СНОклеток, Lecl3-клетки, с пониженной способностью присоединять фукозу к связанным с Asn(297) углеводам, что приводит также к гипофукозилированию антител, экспрессируемых в этой клетке-хозяине (см. также Shields R.L. и др., J. Biol. Chem., 277, 2002, c. 26733-26740). В опубликованной заявке РСТ WO 99/54342 на имя Umana с соавт. описаны линии клеток, сконструированные для экспрессии модифицирующих гликопротеин гликозилтрансфераз (например, бета(1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III(GnTIII, в результате чего антитела, которые экспрессируются в сконструированных линиях клеток,характеризуются повышенным содержанием разделяющих пополам GlcNac-структур, что приводит к повышенной ADCC-активности антител (см. также Umana и др., Nat. Biotech., 17, 1999, c. 176-180). Другой модификацией антител, подпадающей под объем изобретения, является пэгилирование. Антитело можно пэгилировать, например, для удлинения биологического (например, в сыворотке) времени полужизни антитела. Для пэгилирования антитела, как правило, антитело или его фрагмент подвергают- 20018756 взаимодействию с полиэтиленгликолем (ПЭГ), таким как реакционноспособный сложный эфир или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, при которых одна или несколько ПЭГ-групп присоединяется к антителу или фрагменту антитела. Пэгилирование можно осуществлять с помощью реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой ПЭГ (или аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "полиэтиленгликоль" относится к любым формам ПЭГ, которые используют для дериватизации других белков, таким как моно(С 1-С 10)алкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или полиэтиленгликольмалеимид. В конкретных вариантах осуществления изобретения антитело, подлежащее пэгилированию,представляет собой агликолизированное антитело. Методы пэгилирования белков известны в данной области, и их можно применять к антителам, предлагаемым в изобретении (см., например, ЕР 0154316 на имя Nishimura с соавт. и ЕР 0401384 на имя Ishikawa с соавт.). Другой модификацией антител, подпадающей под объем изобретения, является конъюгат или слитый белок, содержащий, по меньшей мере, антигенсвязывающий участок антитела, предлагаемого в изобретении, с сывороточным белком, таким как человеческий сывороточный альбумин или его фрагмент, с целью удлинения времени полужизни образовавшейся молекулы. Такой подход описан, например, у Ballance с соавт. в ЕР 0322094. Другим возможным вариантом является слияние по меньшей мере одного антигенсвязывающего участка антитела, предлагаемого в изобретении, с белками, которые могут связываться с сывороточными белками, такими как человеческий сывороточный альбумин, удлиняя время полужизни образовавшейся молекулы. Такой подход описан у Nygren с соавт. в ЕР 0486525. Методы создания измененных антител. Как указано выше, антитела к склеростину, которые имеют последовательности VH и VL или последовательности полноразмерной тяжелой и легкой цепи, представленные в настоящем описании, можно применять для создания новых антител к склеростину путем модификации последовательностей полноразмерной тяжелой цепи и/или легкой цепи, последовательностей VH и/или VL или присоединенных к ним константных областей. Таким образом, согласно другому объекту изобретения структурные особенности антитела к склеростину, предлагаемого в изобретении, используют для создания структурно родственных антител к склеростину, которые сохраняют по меньшей мере одно из функциональных свойств антител, предлагаемых в изобретении, таких как связывание с человеческим склеростином, а также ингибирование одного или нескольких функциональных свойств склеростина (например, связывание с рецептором, предупреждение или снижение остеолиза). Например, один или несколько CDR-участков антител, предлагаемых в настоящем изобретении,или их мутантов можно объединять рекомбинантно с известными каркасными участками и/или другимиCDR для создания дополнительных, созданных с использованием рекомбинантной ДНК антител к склеростину, предлагаемых в изобретении, с помощью указанных выше методов. Другие типы модификаций включают модификации, описанные в предыдущем разделе. Исходным материалом для конструирования является одна или несколько последовательностей VH и/или VL, представленных в настоящем описании,или один или несколько из их CDR-участков. Для создания сконструированного антитела не является необходимым фактическое получение (т.е. экспрессия в виде белка) антитела, которое имеет одну или несколько из последовательностей VH и/или VL, представленных в настоящем описании, или одного или нескольких их CDR-участков. Предпочтительно информацию, содержащуюся в последовательности(ях),используют в качестве исходного материала для создания последовательности(ей) "второго поколения",выведенной(ых) из исходной(ых) последовательности(ей), и затем получают последовательность(и) второго поколения и экспрессируют в виде белка. Таким образом, еще одним вариантом осуществления изобретения является способ получения антитела к склеростину, состоящего из последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела,которая содержит последовательность CDR1, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 1-11, последовательность CDR2, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 12-22, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 23-33; последовательности вариабельной области легкой цепи антитела, которая содержит последовательность CDR1, выбранную из группы,включающей SEQ ID NO: 34-44, последовательность CDR2, выбранную из группы, включающей SEQNO: 45-55, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 56-66; заключающийся в том, что изменяют по меньшей мере один аминокислотный остаток в последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела и/или вариабельной области легкой цепи антитела для создания по меньшей мере одной измененной последовательности антитела; и экспрессируют измененную последовательность антитела в виде белка. Таким образом, другим вариантом осуществления изобретения является способ получения антитела к склеростину, оптимизированного для экспрессии в клетке млекопитающего, которое состоит из полноразмерной последовательности тяжелой цепи антитела, которая имеет последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 111-121; полноразмерной последовательности легкой цепи антитела, которая имеет последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 122-132; заключающийся в том, что изменяют по меньшей мере один аминокислотный остаток в полноразмерной по- 21018756 следовательности тяжелой цепи антитела и/или в полноразмерной последовательности легкой цепи антитела для создания по меньшей мере одной измененной последовательности антитела; и экспрессируют измененную последовательность антитела в виде белка. Измененную последовательность антитела можно создавать также путем скрининга библиотек антител, которые имеют фиксированные последовательности CDR3, выбранные из группы, включающейSEQ ID NO: 23-33, или минимальные имеющие решающие значения связывающие детерминанты, описанные в US 20050255552, и разнообразные последовательности CDR1 и CDR2. Скрининг можно осуществлять с использованием любого метода скрининга, пригодного для скрининга антител из библиотек антител, такого как технология фагового дисплея. Для получения и экспрессии измененной последовательности антитела можно применять стандартные методы молекулярной биологии. Антитело, кодируемое измененной(ыми) последовательностью(ями), представляет собой антитело, которое сохраняет одну, несколько или все функциональные свойства антител к склеростину, представленных в настоящем описании, где функциональные свойства представляют собой (но не ограничиваясь только ими) специфическое связывание с человеческим склеростином; и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональных свойств: антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа передачи сигнала wnt, антитело блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке с помощью клеточного анализа минерализации или блокирует ингибирующее действие склеростина при оценке фосфорилирования Smad1, или антитело ингибирует связывание склеростина с LRP-6, или антитело усиливает формирование кости, повышает ее массу и плотность. Измененное антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя или более из указанных выше функциональных свойств. Функциональные свойства измененных антител можно оценивать с помощью стандартных анализов, известных в данной области и/или представленных в настоящем описании, таких как описанные в примерах (например, ELISA). В конкретных вариантах способов создания антител, предлагаемых в изобретении, мутации можно интродуцировать произвольно или избирательно во всю или в часть кодирующей последовательности антитела к склеростину и полученные в результате модифицированные антитела к склеростину можно подвергать скринингу в отношении связывающей активности и/или других описанных выше функциональных свойств. Методы интродукции мутаций известны в данной области. Например, в опубликованной заявке РСТ WO 02/092780 на имя Short описаны методы создания и скрининга мутаций антител с помощью насыщающего мутагенеза, синтетической сборки лигированием или с помощью комбинации этих методов. В опубликованной заявке РСТ WO 03/074679 на имя Lazar с соавт. описаны альтернативные методы, основанные на вычислительном скрининге для оптимизации физико-химических свойств антител. Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела, предлагаемые в изобретении. Следующим объектом изобретения являются молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют антитела, предлагаемые в изобретении. Примерами родительских нуклеотидных последовательностей полноразмерной легкой цепи являются последовательности, представленные в SEQ ID NO: 144-145. Примерами родительских нуклеотидных последовательностей полноразмерной тяжелой цепи являются последовательности, представленные в SEQ ID NO: 133-134. Примерами родительских нуклеотидных последовательностей полноразмерной легкой цепи, оптимизированных для экспрессии в клетке млекопитающего, являются последовательности, представленные в SEQ ID NO: 146-154. Примерами родительских нуклеотидных последовательностей полноразмерной тяжелой цепи, оптимизированных для экспрессии в клетке млекопитающего, являются последовательности, представленные в SEQ ID NO: 135143. Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в целых клетках, в клеточных лизатах или могут представлять собой нуклеиновые кислоты в частично очищенной или практически чистой форме. Нуклеиновую кислоту "выделяют" или "получают ее в практически очищенном виде", когда ее очищают от других клеточных компонентов или других загрязнителей, например других присутствующих в клетке нуклеиновых кислот или белков, с помощью стандартных методов, включая обработку щелочью/ДСН, CsClбэндинг, хроматографию на колонках, электрофорез в агарозном геле и других методов, хорошо известных в данной области (см. Current Protocols in Molecular Biology, под ред. F. Ausubel и др., изд-во GreenePublishing and Wiley Interscience, New York, 1987). Нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении,может представлять собой, например, ДНК или РНК и может содержать интронные последовательности или не содержать их. В одном из вариантов осуществления изобретения нуклеиновая кислота представляет собой молекулу кДНК. Нуклеиновая кислота может присутствовать в векторе, таком как фаговый дисплейный вектор или рекомбинантный плазмидный вектор. Нуклеиновые кислоты, предлагаемые в изобретении, можно получать с помощью стандартных методов молекулярной биологии. Для антител, экспрессируемых гибридомами (например, гибридомами,полученными из трансгенных мышей, которые несут гены человеческих иммуноглобулинов, что будет описано ниже), кДНК, которые кодируют легкие и тяжелые цепи антитела, созданные с использованием- 22018756 гибридомы, можно получать с помощью стандартных методов ПЦР-амплификации или клонирования кДНК. Для антител, которые получают из библиотеки генов иммуноглобулинов (например, с помощью метода фагового дисплея), нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, можно выделять из различных фаговых клонов, которые являются компонентами библиотеки. После получения ДНК-фрагментов, кодирующих VH- и VL-области, эти ДНК-фрагменты можно подвергать дополнительной обработке с помощью стандартных методов рекомбинантной ДНК, например, для превращения генов вариабельной области в гены полноразмерной цепи антитела, в гены Fabфрагмента или в ген scFv-фрагмента. При осуществлении этого процесса ДНК-фрагмент, кодирующийVL или VH, функционально связывают с другой молекулой ДНК или фрагментом, кодирующей/кодирующим другой белок, такой как константная область антитела или гибкий линкер. Понятие"функционально связанный" в контексте настоящего описания означает, что два ДНК-фрагмента соединяют функциональным образом, в результате чего аминокислотные последовательности, кодируемые двумя ДНК-фрагментами, сохраняются в рамке считывания, или в результате чего белок экспрессируется под контролем требуемого промотора. Выделенную ДНК, кодирующую VH-область, можно превращать в ген полноразмерной тяжелой цепи путем функционального связывания ДНК, которая кодирует VH, с другой молекулой ДНК, которая кодирует константные области тяжелой цепи (CH1, CH2 и СН 3). Последовательности генов константной области тяжелой цепи известны в данной области (см., например, Kabat E.A. и др., Sequences of ProteinsNo. 91-3242, 1991), и ДНК-фрагменты, включающие эти области, можно получать с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константная область может представлять собой константную область IgG1,IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM или IgD. Предпочтительно константную область тяжелой цепи выбирают среди IgG2-изотипов. В случае гена Fab-фрагмента тяжелой цепи ДНК, кодирующую VH, можно функционально связывать с другой молекулой ДНК, которая кодирует только константную область СН 1 тяжелой цепи. Выделенную ДНК, кодирующую VL-область, можно превращать в ген полноразмерной легкой цепи(а также в ген легкой цепи Fab-фрагмента) путем функционального связывания ДНК, кодирующей VL, с другой молекулой ДНК, которая кодирует константную область легкой цепи, т.е. CL. Последовательности человеческих генов константной области легкой цепи известны в данной области (см., например,Kabat E.A. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 15-e изд., изд-во U.S. Department of Healthand Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991), и ДНК-фрагменты, включающие эти области,можно получать с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константная область легкой цепи может представлять собой константную область каппа- или лямбда-цепи. Для создания гена scFv ДНК-фрагменты, которые кодируют VH и VL, функционально связывают с другим фрагментом, который кодирует гибкий линкер, например который кодирует аминокислотную последовательность (Gly4-Ser)3, в результате чего последовательности VH и VL можно экспрессировать в виде смежного одноцепочечного белка, в котором VL- и VH-области соединены гибким линкером (см.,например, Bird и др., Science, 242, 1988, c. 423-426; Huston и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 1988, c. 5879-5883; McCafferty и др., Nature, 348, 1990, c. 552-554). Создание моноклональных антител, предлагаемых в изобретении. Моноклональные антитела (МАт) можно получать с помощью различных методов, включая общепринятые методы получения моноклональных антител, например, с помощью стандартного метода гибридизации соматических клеток, описанного у Kohler и Milstein, Nature, 256, 1975, с. 495. Для получения моноклональных антител можно применять многочисленные методики, например трансформацию Влимфоцитов вирусами или онкогенами. Применяемая для получения гибридом система животного происхождения представляет собой систему, основанную на использовании мышей. Создание гибридомы в мыши является хорошо известной процедурой. Протоколы иммунизации и методы выделения иммунизированных спленоцитов, предназначенных для слияния, хорошо известны в данной области. Компоненты, участвующие в слиянии (например, клетки мышиной миеломы), и процедуры слияния также хорошо известны. Химерные или гуманизированные антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получать на основе последовательности мышиного моноклонального антитела, полученного согласно описанному выше методу. ДНК, кодирующую тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов, можно получать из представляющей интерес мышиной гибридомы и создавать так, чтобы она содержала немышиные(например, человеческие) последовательности иммуноглобулинов, с помощью стандартных методов молекулярной биологии. Например, для создания химерного антитела мышиные вариабельные области можно связывать с человеческими константными областями с использованием известных в данной области методов (см., например, US 4816567 на имя Cabilly с соавт.). Для создания гуманизированного антитела мышиные CDR-участки можно встраивать в человеческий каркасный участок с помощью известных в данной области методов (см., например, US 5225539 на имя Winter и US 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 на имя Queen с соавт.). В конкретном варианте осуществления изобретения антитела, предлагаемые в изобретении, пред- 23018756 ставляют собой человеческие моноклональные антитела. Такие человеческие моноклональные антитела к склеростину можно создавать с использованием трансгенных или трансхромосомных мышей, несущих фрагменты человеческой, а не мышиной иммунной системы. К этим трансгенным и трансхромосомным мышам относятся мыши, обозначенные в контексте настоящего описания как HuMAb-мыши и KMмыши соответственно, и мышей обеих указанных линий обозначают в контексте настоящего описания как "мыши, несущие человеческий Ig". Мыши линии HuMAb (HuMAb mouse, фирма Medarex, Inc.) содержат минилокусы гена человеческого иммуноглобулина, который кодирует неперегруппированные последовательности человеческой тяжелой ( и ) и легкой -цепи иммуноглобулина, в сочетании с целевыми мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы - и -цепи (см., например, Lonberg и др., Nature, 368(6474), 1994, c. 856859). Таким образом, у мыши снижена способность экспрессировать мышиный IgM или -цепь, и в ответ на иммунизацию интродуцированные трансгены человеческой тяжелой и легкой цепи подвергаются переключению класса и соматическому мутированию с образованием обладающего высокой аффинностью человеческого моноклонального IgG (Lonberg N. и др., 1994, выше; обзорная статья Lonberg N., Handbook of Experimental Pharmacology, 113, 1994, c. 49-101; Lonberg N. и Huszar D., Intern. Rev. Immunol., 13,1995, c. 65-93 и Harding F. и Lonberg N., Ann. N. Y. Acad. Sci. 764, 1995, c. 536-546). Получение и применение мышей линии HuMAb и геномные модификации, которые несут такие мыши, описаны также уTaylor L. и др., Nucleic Acids Research, 20, 1992, c. 6287-6295; Chen J. и др., International Immunology 5,1993, c. 647-656; Tuaillon и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 1993, c. 3720-3724; Choi и др., Nature Genetics 4, 1993, c. 117-123; Chen J. и др., EMBO J., 12, 1993, c. 821-830; Tuaillon и др., J. Immunol., 152, 1994, c. 2912-2920; Taylor L. и др., International Immunology, 1994, c. 579-591 и Fishwild D. и др., Nature Biotechnology, 14, 1996, c. 845-851, содержание всех публикаций специально полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки (см. также US 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429; все на имя Lonberg и Kay; US 5545807 на имя Surani с соавт.; опубликованные заявки РСТ WO 92103918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97113852, WO 98/24884 иWO 99/45962, все на имя Lonberg и Kay; и опубликованную заявку РСТ WO 01/14424 на имя Korman с соавт.). В другом варианте осуществления изобретения человеческие антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать с использованием мыши, которая несет последовательности человеческого иммуноглобулина на трансгенах и трансхромосомах, например мыши, которая несет трансген человеческой тяжелой цепи и трансхромосому человеческой легкой цепи. Такие мыши, обозначенные в контексте настоящего описания как "KM-мыши", описаны подробно в публикации РСТ WO 02/43478 на имя Ishida с соавт. В данной области известны также другие системы на основе трансгенных животных, экспрессирующих гены человеческого иммуноглобулина, и их можно применять для получения антител к склеростину, предлагаемых в изобретении. Например, можно использовать другую трансгенную систему, обозначенную как Xenomouse (фирма Abgenix, Inc.); такие мыши описаны, например, в US 5939598; 6075181; 6114598; 6150584 и 6162963 на имя Kucherlapati с соавт. Кроме того, в данной области известны также другие транхромосомные системы, созданные на основе животных, для экспрессии генов человеческого иммуноглобулина, и их можно применять для получения антител к склеростину, предлагаемых в изобретении. Например, можно использовать мышей, несущих как трансхромосому человеческой тяжелой цепи, так и трансхромосому человеческой легкой цепи, которые обозначены как "ТС-мыши"; такие мыши описаны, например, у Tomizuka и др. Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 97, 2000, c. 722-727. Кроме того, в данной области известны коровы, несущие трансхромосомы человеческой тяжелой и легкой цепи (Kuroiwa и др., Nature Biotechnology, 20, 2002, c. 889-894) и их можно применять для получения антител к склеростину, предлагаемых в изобретении. Человеческие моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать также с использованием методов фагового дисплея для скрининга библиотек генов человеческих иммуноглобулинов. В данной области разработаны такие методы фагового дисплея для выделения человеческих антителDower с соавт.; US 5969108 и 6172197 на имя McCafferty с соавт. и US 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915 и 6593081 на имя Griffiths с соавт.). Человеческие моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать также с использованием SCID-мышей (мыши с тяжелым комбинированным иммунодефицитом), в которых восстанавливали человеческие иммуноциты с тем, чтобы при иммунизации можно было получать человеческий гуморальный иммунный ответ. Такие мыши описаны, например, в US 5476996 и 5698767 на имяWilson с соавт. Создание гибридом, продуцирующих человеческие моноклональные антитела. Для создания гибридом, которые продуцируют человеческие моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении, можно выделять спленоциты и/или клетки лимфатических узлов из иммунизированных мышей и сливать с соответствующей иммортализованной линий клеток, такой как линия клеток- 24018756 мышиной миеломы. Образовавшиеся гибридомы можно подвергать скринингу в отношении производства специфических для антигена антител. Например, суспензии индивидуальных клеток селезеночных лимфоцитов из иммунизированных мышей можно сливать в количестве, составляющем одну шестую часть от количества клеток несекретирующейся мышиной миеломы линии P3X63-Ag8.653 (ATCC, CRL 1580) с помощью 50% ПЭГ. Клетки высевают примерно из расчета 2105/лунку в плоскодонные титрационные микропланшеты, затем инкубируют в течение 2 недель в среде для селекции, содержащей 20% фетальной сыворотки (Clone), кондиционированной среды "653", 5% оригена (фирма IGEN), 4 мМ Lглутамин, 1 мМ пируват натрия, 5 мМ HEPES, 0,055 мМ 2-меркаптоэтанол, 50 ед./мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина, 50 мкг/мл гентамицина и 1 ГАТ (фирма Sigma; ГАТ добавляют через 24 ч после слияния). Примерно через 2 недели клетки можно культивировать в среде, в которой ГАТ заменен на ГТ. Затем индивидуальные лунки можно подвергать скринингу с помощью ELISA в отношении человеческих моноклональных антител в виде IgM и IgG. После достижения интенсивного роста гибридом осуществляют мониторинг среды, как правило, через 10-14 дней. Гибридомы, секретирующие антитела,можно пересевать, вновь подвергать скринингу, и если все еще сохраняется позитивная реакция в отношении человеческого IgG, то человеческие моноклональные антитела можно субклонировать, по меньшей мере, дважды с использованием ограничивающего разведения. Затем стабильные субклоны можно культивировать in vitro для получения небольших количеств антител в среде для культуры ткани с целью дальнейшей характеризации. Для очистки человеческих моноклональных антител отобранные гибридомы можно выращивать в 2-литровых вращающихся колбах с целью очистки моноклональных антител. Супернатанты можно фильтровать и концентрировать перед осуществлением аффинной хроматографии с использованием белка А-сефарозы (фирма Pharmacia, Пискатавей, шт. Нью-Джерси). Элюированный IgG можно проверять с помощью гель-электрофореза и жидкостной хроматографии высокого разрешения для гарантии чистоты. Буферный раствор можно заменять на ЗФР и концентрацию определять на основе ОП 280 c использованием коэффициента экстинкции 1,43. Моноклональные антитела можно разделять на аликвоты и хранить при -80 С. Создание трансфектом, продуцирующих моноклональные антитела. Антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать также в трансфектоме клетки-хозяина с использованием, например, комбинации методов рекомбинантной ДНК и методов генной трансфекции,которые хорошо известны в данной области (см., например, Morrison S., Science, 229, 1985, с. 1202). Например, для экспрессии антител или фрагментов антител ДНК, которые кодируют частичные или полноразмерные легкие и тяжелые цепи, можно получать с помощью стандартных методов молекулярной биологии (например, с помощью ПЦР-амплификации или клонирования кДНК с использованием гибридом,которые экспрессируют представляющее интерес антитело), и ДНК можно встраивать в экспрессионные векторы таким образом, чтобы гены были функционально связаны с контролирующими транскрипцию и трансляцию последовательностями. В этом контексте подразумевается, что понятие "функционально связанный" означает, что ген антитела встраивают путем лигирования в вектор таким образом, чтобы присутствующие в векторе контролирующие транскрипцию и трансляцию последовательности выполняли свойственные им функции регуляции транскрипции и трансляции гена антитела. Выбранные экспрессионный вектор и контролирующие экспрессию последовательности должны быть совместимы с применяемой для экспрессии клеткой-хозяином. Ген легкой цепи антитела и ген тяжелой цепи антитела можно встраивать в различные векторы или, как правило, оба гена встраивают в один и тот же экспрессионный вектор. Гены антитела встраивают в экспрессионный вектор стандартными методами (например, встраивают путем лигирования комплементарных сайтов рестрикции на фрагменте гена антитела и вектора,или путем лигирования "затупленных" концов, если отсутствуют какие-либо сайты рестрикции). Вариабельные области легких и тяжелых цепей антител, предлагаемых в изобретении, можно использовать для создания полноразмерных генов антител любых изотипов путем встраивания их в экспрессионные векторы, которые уже кодируют константные области тяжелой цепи и константные области легкой цепи требуемого изотипа таким образом, чтобы VH-область была функционально связана с СНсегментом(ами) в векторе, а VL-область функционально связана с CL-областью в векторе. В другом или дополнительном варианте осуществления изобретения рекомбинантный экспрессионный вектор может кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела из клетки-хозяина. Ген цепи антитела можно клонировать в векторе так, чтобы сигнальный пептид был связан в рамке считывания сN-концом гена цепи антитела. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (т.е. сигнальный пептид из белка, не относящегося к иммуноглобулинам). Помимо генов цепи антитела рекомбинантные экспрессионные векторы, предлагаемые в изобретении, несут регуляторные последовательности, которые контролируют экспрессию генов цепи антитела в клетке-хозяине. Подразумевается, что понятие "регуляторная последовательность" относится к промоторам, энхансерам и другим контролирующим экспрессию элементам (например, сигналы полиаденилирования), которые контролируют транскрипцию или трансляцию генов цепи антитела. Указанные регуля- 25018756 торые последовательности описаны, например, у Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, изд-во Academic Press, San Diego, CA 1990). Специалистам в данной области должно быть очевидно, что создание экспрессионного вектора, включая выбор регуляторных последовательностей,может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяина для трансформации, требуемый уровень экспрессии белка и т.д. Регуляторные последовательности для экспрессии в клетках млекопитающих включают вирусные элементы, которые обеспечивают высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры, выведенные из цитомегаловируса (CMV), обезьяньего вируса 40 (SV40), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса (AdMLP и вируса полиомы. В альтернативном варианте можно использовать невирусные регуляторные последовательности, такие как промотор убикитина или промотор Р-глобина. Кроме того, можно применять регуляторные элементы, состоящие из полученных из разных источников последовательностей, такие как промоторная система Sra, которая содержит последовательности раннего промотора SV40 и длинный концевой повтор вируса типа 1 человеческого Т-клеточного лейкоза (Takebe Y, и др., Mol. Cell, Biol. 8, 1988, c. 466-472). Помимо генов цепи антитела и регуляторных последовательностей рекомбинантные экспрессионные векторы, предлагаемые в изобретении, могут нести дополнительные последовательности, например последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, сайты инициации репликации) и гены селектируемых маркеров. Гены селектируемых маркеров облегчают отбор клеток-хозяев, в которые интродуцирован вектор (см., например, US4399216, 4634665 и 5179017, все на имя Axel с соавт.). Например, как правило, ген селектируемого маркера обусловливает устойчивость клетки-хозяина, в которую интродуцирован вектор, к лекарственным средствам, таким какG418, гигромицин или метотрексат. К генам селектируемых маркеров относятся ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (для применения в dhfr-клетках-хозяевах при селекции/амплификации в присутствии метотрексата) и ген neo (для отбора в присутствии G418). Для экспрессии легких и тяжелых цепей экспрессионным(ыми) вектором(ами), кодирующим(ими) тяжелые и легкие цепи, трансфектируют клетку-хозяина с помощью стандартных методов. Под различные формы понятия "трансфекция" подпадает широкое разнообразие методов, обычно применяемых для интродукции экзогенной ДНК в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяина, например электропорация, осаждение фосфатом кальция, трансфекция с использованием ДЭАЭ диэтиламино)этилцеллюлоза)-декстрана и т.п. Теоретически можно экспрессировать антитела, предлагаемые в изобретении, как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах. Считается, что следует осуществлять экспрессию в эукариотических клетках, прежде всего в клетках-хозяевах млекопитающих,поскольку указанные эукариотические клетки и, прежде всего, клетки млекопитающих с большей вероятностью, чем прокариотические клетки, могут обеспечивать сборку и секрецию имеющего правильную укладку и обладающего иммунологической активностью антитела. Установлено, что экспрессия генов антител в прокариотических хозяевах не может эффективно обеспечивать высокие уровни производства активного антитела (Boss M.А. и Wood С.R., Immunology Today, 6, 1985, c. 12-13). Клетки-хозяева млекопитающих, предназначенные для экспрессии рекомбинантных антител, предлагаемых в изобретении, представляют собой клетки яичника китайского хомячка (СНО-клетки) (включая СНО-клетки с дефицитом dhfr (dhfr-), описанные у Urlaub и Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77,1980, c. 4216-4220, которые применяют в сочетании с селектируемым маркером DHFR, например, как описано у R.J. Kaufman и P.A. Sharp, Mol. Biol., 159, 1982, c. 601-621, клетки миеломы линии NSO, COSклетки и SP2-клетки. В частности, для применения в сочетании с клетками миеломы NSO используют другую экспрессионную систему, представляющую собой экспрессионную систему GS-гена, как описано в WO 87/04462, WO 89/01036 и ЕР 338841. Когда рекомбинантные экспрессионные векторы, кодирующие гены антитела, интродуцируют в клетки-хозяева млекопитающих, то антитела получают путем культивирования клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для осуществления экспрессии антитела в клетке-хозяине или секреции антитела в культуральную среду, в которой выращивают клеткихозяева. Антитела можно выделять из культуральной среды с помощью стандартных методов очистки белков. Биспецифические молекулы. Следующим объектом настоящего изобретения являются биспецифические молекулы, содержащие антитело к склеростину или его фрагмент, предлагаемое/предлагаемый в изобретении. Антитело, предлагаемое в изобретении, или его антигенсвязывающие участки можно дериватизировать или связывать с другой функционально активной молекулой, например с другим пептидом или белком (например, с другим антителом или лигандом рецептора), с получением биспецифической молекулы, которая связывается по меньшей мере с двумя различными сайтами связывания или молекулами-мишенями. Антитело, предлагаемое в изобретении, фактически можно дериватизировать или связывать более чем с одной другой функционально активной молекулой с образованием мультиспецифических молекул, которые связываются более чем с двумя различными сайтами связывания и/или молекулами-мишенями; подразумевается,что в контексте настоящего описания указанные мультиспецифические молекулы также подпадают под понятие "биспецифическая молекула". Для создания биспецифической молекулы, предлагаемой в изо- 26018756 бретении, антитело, предлагаемое в изобретении, можно функционально связывать (например, путем химического сочетания, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) с одной или несколькими другими связывающими молекулами, такими как другое антитело, фрагмент антитела,пептид или связывающий миметик, с получением биспецифической молекулы. Таким образом, настоящее изобретение относится к биспецифическим молекулам, которые имеют по меньшей одну первую специфичность, обладающую способностью к связыванию со склеростином, и вторую специфичность, обладающую способностью к связыванию со вторым эпитопом-мишенью. Например, второй эпитоп-мишень представляет собой второй эпитоп склеростина, отличный от первого эпитопа-мишени. Другим примером является биспецифическая молекула, которая содержит по меньшей мере одну первую специфичность, обладающую способностью к связыванию со склеростином, и вторую специфичность, обладающую способностью к связыванию с эпитопом внутри DKK1. Еще одним примером является биспецифическая молекула, которая содержит по меньшей мере одну первую специфичность, обладающую способностью к связыванию со склеростином, и вторую специфичность, обладающую способностью к связыванию с эпитопом внутри LRP4. Кроме того, согласно варианту осуществления изобретения, в котором биспецифическая молекула является мультиспецифической, молекула может дополнительно включать третью специфичность, обладающую способностью к связыванию, в дополнение к первому и второму эпитопу-мишени. В одном из вариантов осуществления изобретения биспецифические молекулы, предлагаемые в изобретении, содержат в качестве специфичности, обладающей способностью к связыванию, по меньшей мере одно антитело или фрагмент антитела, например Fab, Fab', F(ab')2, Fv или одноцепочечный Fv. Антитело может представлять собой также димер легких цепей или тяжелых цепей или любой его минимальный фрагмент, такой как Fv, или одноцепочечную конструкцию, описанную у Ladner и др., US4946778, содержание которого специально включено в настоящее описание в качестве ссылки. К другим антителам, которые можно применять в биспецифических молекулах, предлагаемых в изобретении, относятся мышиные, химерные и гуманизированные моноклональные антитела. Биспецифические молекулы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получать путем конъюгации компонентов, представляющих собой обладающие способностью к связыванию специфичности, с помощью методов, известных в данной области. Например, каждую обладающую способностью к связыванию специфичность биспецифической молекулы можно создавать по отдельности и затем конъюгировать друг с другом. Когда обладающие способностью к связыванию специфичности представляют собой белки или пептиды, для ковалентной конъюгации можно использовать целый ряд агентов для связывания или перекрестного сшивания. Примерами перекрестно сшивающих агентов являются белок А, карбодиимид, N-сукцинимидил-S-ацетилтиоацетат (SATA), 5,5'-дитио-бис-(2-нитробензойная кислота) (DTNB), о-фенилендималеимид (oPDM), N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP) и сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-l-карбоксилат (сульфо-SMCC) (см., например,Karpovsky и др., J. Exp. Med., 160, 1984, с. 1686; Liu М.А. и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 1985, с. 8648). Другие методы представляют собой методы, описанные у Paulus, Behring Ins. Mitt. No. 78, 1985, c. 118-132; Brennan и др., Science, 229, 1985, c. 81-83) и Glennie и др., J. Immunol., 139, 1987, c. 2367-2375). Такие предназначенные для конъюгации агенты, как SATA и сульфо-SMCC, оба поступают в продажу от фирмы Pierce Chemical Co. (Рокфорд, шт. Иллинойс). Когда обладающие способностью к связыванию специфичности представляют собой антитела, то их можно конъюгировать с помощью сульфгидрильной связи С-концевых шарнирных областей двух тяжелых цепей. В конкретном варианте осуществления изобретения шарнирную область модифицируют так, чтобы она до конъюгации содержала нечетное количество сульфгидрильных остатков, например один. В альтернативном варианте обе обладающие способностью к связыванию специфичности можно кодировать в одном и том же векторе и экспрессировать и собирать в одной и той же клетке-хозяине. Этот метод является наиболее целесообразным, когда биспецифическая молекула представляет собой слитый белок, такой как МАтМАт, МАтFab, FabF(ab')2 или лигандFab. Биспецифическая молекула, предлагаемая в изобретении, может представлять собой одноцепочечную молекулу, которая содержит одноцепочечное антитело и связывающую детерминанту, или одноцепочечную биспецифическую молекулу, которая содержит две связывающие детерминанты. Биспецифические молекулы могут содержать по меньшей мере две одноцепочечные молекулы. Методы получения биспецифических молекул описаны, например, в US 5260203; 5455030; 4881175; 5132405; 5091513; 5476786; 5013653; 5258498 и 5482858. Связывание биспецифических молекул с их специфическими мишенями можно подтверждать, например, твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA), радиоиммуноанализом (РИА), FACSанализом, биологическим анализом (например, ингибирование роста) или анализом методом вестернблоттинга. Каждый из указанных анализов позволяет выявлять присутствие конкретных представляющих интерес комплексов белок-антитело при использовании меченого реагента (например, антитела),специфического в отношении представляющего интерес комплекса.- 27018756 Многовалентные антитела. Следующим объектом настоящего изобретения являются многовалентные соединения, содержащие по меньшей мере два идентичных или различных антигенсвязывающих участка антител, предлагаемых в изобретении, которые связываются со склеростином. Предпочтительно с учетом тримерной природы склеростина соединения, предлагаемые в изобретении, содержат по меньшей мере три или четыре антигенсвязывающих участка антител. Антигенсвязывающие участки можно соединять вместе путем белкового слияния или ковалентной или нековалентной связи. В другом варианте можно применять методы связывания, описанные для биспецифических молекул. Четырехвалентные соединения можно получать, например, путем перекрестного сшивания антител,предлагаемых в изобретении, с антителом, которое связывается с константными областями антител,предлагаемых в изобретении, например с Fc или шарнирной областью. Тримеризованный домен описан, например, в патенте на имя Borean ЕР 1012280 В 1. Пентамеризованные модули описаны, например, в РСТ/ЕР 97/05897. Фармацевтические композиции. Следующим объектом настоящего изобретения является композиция, например фармацевтическая композиция, содержащая одно или комбинацию моноклональных антител или их антигенсвязывающий(ие) участок(ки), предлагаемые в настоящем изобретении, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Такие композиции могут включать одно или комбинацию (например, два или большее количество различных) антител или иммуноконъюгатов или биспецифических молекул, предлагаемых в изобретении. Например, фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, может содержать комбинацию антител, которые связываются с различными эпитопами на антигене-мишени или которые обладают дополнительным видом активности. Фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, можно применять также для совместной терапии, т.е. в сочетании с другими средствами. Например, для совместной терапии можно применять антитело к склеростину, предлагаемое в настоящем изобретении, в сочетании по меньшей мере с одним другим противовоспалительным или антиостеопорозным средством. Примеры терапевтических средств, которые можно применять в совместной терапии, более подробно описаны ниже в разделе, посвященном применению антител, предлагаемых в изобретении. Композиции предпочтительно приготавливают таким образом, чтобы они имели физиологическое значение рН. В контексте настоящего описания понятие "фармацевтически приемлемый носитель" включает каждый и все растворители, дисперсионные среды, материалы для нанесения покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, агенты, придающие изотоничность, и замедляющие абсорбцию агенты и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Носитель должен быть пригодным для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, путем инъекции или инфузии). В зависимости от пути введения на действующее вещество, т.е. антитело, иммуноконъюгат или биспецифическую молекулу, можно наносить покрытие из материала, защищающего соединение от воздействия кислот и других факторов окружающей среды, которые могут инактивировать соединение. Фармацевтические соединения, предлагаемые в изобретении, могут включать одну или несколько фармацевтически приемлемых солей. Понятие "фармацевтически приемлемая соль" относится к соли,которая сохраняет требуемую биологическую активность родительского соединения и не вызывает никаких нежелательных токсикологических действий (см., например, Berge S.M., и др., J. Pharm. Sci., 66,1977, c. 1-19). Примерами таких солей являются кислотно-аддитивные соли и соли присоединения оснований. К кислотно-аддитивным солям относятся соли, образованные из нетоксичных неорганических кислот, таких как соляная, азотная, фосфорная, серная, бромисто-водородная, йодисто-водородная, фосфористая кислота и т.п., а также из нетоксичных органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, замещенные фенилом алкановые кислоты, оксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты и т.п. Соли присоединения оснований включают соли, образованные со щелочно-земельными металлами, такими как натрий, калий, магний, кальций и т.п., а также с нетоксичными органическими аминами, такими как N,N'дибензилэтилендиамин, N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и т.п. Фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, может содержать также фармацевтически приемлемый антиоксидант. Примерами фармацевтически приемлемых антиоксидантов являются водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т.п.; жирорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВГА), бутилированный гидрокситолуол (БГТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и т.п.; металлхелатирующие агенты, такие как лимонная кислота,этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т.п. Примерами приемлемых водных и неводных носителей, которые можно применять в фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении, являются вода, этанол, полиолы (такие как глицерин,- 28018756 пропиленгликоль, полиэтителенгликоль и т.п.) и их приемлемые смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и пригодные для инъекций сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Требуемую текучесть можно поддерживать, например, с помощью применяемых для нанесения покрытий материалов, таких как лецитин, сохраняя требуемый размер частиц в случае дисперсий, и с помощью поверхностно-активных веществ. Указанные композиции могут содержать также адъюванты, такие как консерванты, смачивающие агенты, эмульгаторы и диспергирующе вещества. Отсутствие микроорганизмов можно гарантировать как с помощью описанных выше процессов стерилизации, так и включением различных антибактериальных и противогрибковых средств, таких, например, как парабен, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота и т.п. Может оказаться желательным включать в композиции, придающие изотоничность, агенты, такие как сахара, хлорид натрия и т.п. Кроме того, можно получать инъецируемую фармацевтическую форму с пролонгированной абсорбцией, например, путем включения агентов, которые замедляют абсорбцию,таких как моностеарат алюминия и желатин. Фармацевтически приемлемые носители представляют собой стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления при необходимости стерильных инъецируемых растворов или дисперсии. Применение таких сред и агентов для фармацевтических действующих веществ известно в данной области. За исключением случая, когда любые из общепринятых сред или агентов не совместимы с действующим веществом, предусматривается их применение в фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении. В композиции можно включать также дополнительные действующие вещества. Терапевтические композиции, как правило, должны быть стерильными и стабильными в условиях приготовления и хранения. Композиция может иметь форму раствора, микроэмульсии, липосомы или иметь другую упорядоченную структуру, пригодную для включения лекарственного средства в высокой концентрации. Носитель может представлять собой растворитель или диспергирующую среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их приемлемые смеси. Требуемую текучесть можно поддерживать, например, с помощью применяемых для нанесения покрытий материалов, таких как лецитин, сохраняя требуемый размер частиц в случае дисперсий, и с помощью поверхностно-активных веществ. Во многих случаях можно включать придающие изотоничность агенты, такие как сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит, или хлорид натрия и т.п. Кроме того, можно получать инъецируемую фармацевтическую форму с пролонгированной абсорбцией, например, путем включения агентов, которые замедляют абсорбцию,таких как моностеараты и желатин. Стерильные предназначенные для инъекций растворы можно получать путем включения действующего вещества в требуемом количестве в соответствующий растворитель либо индивидуально, либо при необходимости в сочетании с указанными выше ингредиентами, с последующей стерилизацией микрофильтрацией. Как правило, дисперсии получают включением действующего вещества в стерильный наполнитель, который содержит основную дисперсионную среду и требуемые другие вышеперечисленные ингредиенты. Методы получения стерильных порошков, предназначенных для приготовления стерильных инъецируемых растворов, представляют собой вакуумную сушку и сушку вымораживанием(лиофилизация), с помощью которых получают порошок действующего вещества в сочетании с любым другим требуемым ингредиентом из предварительно стерилизованного фильтрацией раствора. Количество действующего вещества, которое можно объединять с носителем для получения формы в виде однократной дозы, должно варьироваться в зависимости от индивидуума, подлежащего обработке, и конкретного пути введения. Количество действующего вещества, которое можно объединять с носителем для получения формы в виде однократной дозы, как правило, представляет собой количество композиции, которое обладает терапевтическим действием. Как правило, количество за исключением случая, когда оно составляет сто процентов, представляет собой количество, составляющее от примерно 0,01 до примерно 99% действующего вещества, от 0,1 до примерно 70% или от примерно 1 до примерно 30% действующего вещества в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Схему приема лекарственного средства регулируют для получения оптимального требуемого ответа(например, терапевтического ответа). Например, можно применять однократную болюсную инъекцию,можно вводить несколько разделенных доз в течение определенного промежутка времени или дозу можно пропорционально понижать или повышать в зависимости от конкретной терапевтической ситуации. Наиболее целесообразно приготавливать композиции для парентерального введения в виде стандартных доз лекарственного средства, что облегчает их применение и однородность доз. Под стандартной дозой лекарственного средства в контексте настоящего описания понимают физически дискретные единицы,предназначенные для введения стандартных доз индивидууму, подлежащему лечению; каждая единица содержит предварительно определенное количество действующего вещества, которое согласно расчету должно обладать желаемым терапевтическим действием, в сочетании с требуемыми фармацевтическим носителем. Специфические особенности форм в виде стандартных доз, предлагаемых в изобретении, определяются и непосредственно зависят от индивидуальных характеристик действующего вещества и конкретного терапевтического действия, которое необходимо достигать, и ограничениями, известными в