Способы

Способ рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно неочищенного пищевого масла), включающий стадии а) смешивания приблизительно 0,1-5% мас./мас. воды с пищевым маслом (предпочтительно неочищенным пищевым маслом) и липидацилтрансферазой;b) перемешивания этой смеси в течение от приблизительно 10 до приблизительно 180 мин при температуре от приблизительно 45 до приблизительно 90 С и с) разделения масляной фазы и смоляной фазы. Предпочтительно указанная липидацилтрансфераза представляет собой полипептид, обладающий липидацилтрансферазной активностью, где полипептид получают экспрессией нуклеотидной последовательности, показанной как SEQ ID No. 49, или нуклеотидной последовательности, которая имеет 70% или большую идентичность с ней; и/или получают экспрессией нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях средней жесткости с нуклеиновым зондом, содержащим нуклеотидную последовательность, показанную какSEQ ID No. 49; и/или представляет собой полипептид, имеющий липидацилтрансферазную активность, где полипептид включает аминокислотную последовательность, показанную какSEQ ID No. 68, или аминокислотную последовательность, которая имеет 70% или большую идентичность с ней. В одном варианте воплощения липидацилтрансферазу предпочтительно используют в комбинации с фосфолипазным С ферментом. Также описан способ модифицирования смоляной фазы рафинированного масла с использованием липидацилтрансферазы. Се Йорн Борк (DK), Браун Анне Виктория (US) Веселицкая И.А., Пивницкая Н.Н.,Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б.,Каксис Р.А., Комарова О.М., Белоусов Ю.В. (RU)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ДЮПОН НЬЮТРИШН БАЙОСАЙЕНСИЗ АПС (DK) Ссылки на родственные заявки Ссылка сделана на следующие родственные заявки: US 2002-0009518, US 2004-0091574,WO 2004/064537, WO 2004/064987, WO 2005/066347, WO 2005/066351, заявка США под серийным номером 60/764430, поданная 2 февраля 2006 г., WO 2006/008508, международная патентная заявка под номером PCT/IB 2007/000558 и заявка США под серийным номером 11/671953. Каждая из этих заявок и каждый из документов, которые цитируются в этих заявках ("цитируемые в заявках документы"), а также каждый документ, упомянутый или цитируемый в документах, цитируемых в заявках, или в тексте, или в процессе рассмотрения этих заявок, а также все аргументы в поддержку патентоспособности, выдвинутые в процессе рассмотрения, введены в данное описание в качестве ссылок. Различные документы также цитируются в данном тексте ("цитируемые в данном описании документы"). Каждый из цитируемых в данном описании документов либо упомянутый в цитируемых в данном описании документах полностью введен в данное описание в качестве ссылки. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к способу рафинирования пищевого масла (предпочтительно растительного масла), используя липидацилтрансферазу. Далее настоящее изобретение относится к способу обработки пищевого масла (предпочтительно неочищенного пищевого масла) (например, растительного масла) и/или смоляной фазы пищевого масла (предпочтительно растительного масла), используя липидацилтрансферазу. Предпосылки создания настоящего изобретения Липидацилтрансферазы являются известными как такие, которые обладают преимуществами в пищевой промышленности. Липидацилтрансферазы, как было обнаружено, обладают значительной ацилтрансферазной активностью в пищевых продуктах. Эта активность обладает весьма преимущественным применением в способах получения продуктов питания. Например, WO 2004/064537 раскрывает способ для in situ получения эмульгатора при использовании липидацилтрансферазы и преимущества, связанные с этим. Международная патентная заявка под номером РСТ/IB 2001/000558 демонстрирует экспрессию липидацилтрансферазы в (гетерологичной) хозяйской клетке и является введенной в данное описание в качестве ссылки. Цель рафинирования пищевого масла заключается в том, чтобы удалить нежелательные примеси,которые влияют на качество (например, вкус, запах и внешний вид) и стабильность при хранении. Из-за большого разнообразия этих примесей - свободные жирные кислоты, ионы металлов, красящие соединения, ароматизирующие вещества, смолы и т.д. - для рафинирования применяют целый ряд способов химической и физической природы (см., например, Bailey's Industrial Oil and Fat Products - 2006,John WileySons, Sixth Edition). Как правило, для рафинирования масла применяют два способа, которые представляют собой способы физического рафинирования и химического рафинирования. В так называемом химическом рафинировании почти вс содержание свободных жирных кислот удаляют путм начальной обработки большим избытком NaOH. Также содержание фосфолипидов снижают до уровня фосфора, как правило, ниже 10 ppm. Далее масло осветляют и дезодорируют. Так называемое физическое рафинирование в основном заключается в стадии рафинирования гидратацией, которую сопровождают рафинированием кислотой, нейтрализацией, осветлением, отгонкой с помощью водяного пара для удаления свободных жирных кислот и дезодорированием. Вместо применения рафинирования кислотой при физических способах очищения было принято использовать ферментативное рафинирование. Способ ферментативного рафинирования был разработан на основе применения фосфолипазы поджелудочной железы. Поскольку данный фермент некошерный, фосфолипазу со временем заменили микробной фосфолипазой Al (Lecitase Ultra - Novozymes, Denmark) (Oil Mill Gazetteer, vol. 111, July 2005,p. 2-4). Ферментативный способ имеет некоторые преимущества относительно химического или физического способов рафинирования гидратацией, включая снижение себестоимости, повышенный выход и процесс, более благоприятный для окружающей среды. Способ ферментативного рафинирования масла основывается на добавлении фосфолипазы к маслу,которое уже прошло рафинирование гидратацией. В WO 2006/008508 описано, что липидацилтрансферазы применяют в ферментативном рафинировании пищевых масел. В WO 2006/008508 раскрыто добавление липидацилтрансферазы к рафинированному гидратацией маслу или добавление липидацилтрансферазы к неочищенному маслу без необходимости подвергать это масло процессу рафинирования гидратацией."Рафинированное гидратацией масло", как правило, может быть получено с помощью обычного"способа рафинирования гидратацией", который включает смешивание 1-2% мас./мас. горячей мягкой воды с тплым (70-90 С) сирым маслом (AOCS Introduction to the Processing of Fats and Oils - Table 8 Degumming Processes - http://www.aocs.org/meetings/education/mod3sample.pdf). Практическое правило заключается в том, что количество воды, добавляемой к неочищенному маслу, как правило, приблизи-1 020035 тельно равно количеству фосфолипидов в неочищенном масле. Обычные периоды обработки составляют 30-60 мин. Стадия рафинирования гидратацией удаляет фосфатиды и клейкие смолы, которые становятся нерастворимыми в масле при гидрировании. Гидратированные фосфатиды и смолы могут быть отделены от масла путм осаждения, фильтрования или центрифугирования - на практике центрифугирование более распространено. Главная цель в указанном процессе рафинирования гидратацией заключается в отделении гидратированных фосфатидов от масла. Смешивание горячей воды с маслом, описанной выше, в данном описании должно пониматься в широком смысле как смешивание водного раствора с маслом в соответствии со стандартными процедурами рафинирования гидратацией в данной области техники. В общепринятом способе рафинирования гидратацией основную часть фосфатидов удаляют в высококипящую смоляную фазу. В конце способа рафинирования гидратацией масляную фазу отделяют от смоляной фазы. Хотя смоляная фаза может быть дополнительно переработана в коммерческие продукты,по сути, она рассматривается как побочный продукт рафинирования масла. Именно масляная фаза является коммерчески важной. Однако, так как фосфатиды могут быть хорошими эмульгаторами, некоторое количество масла неизменно теряется в смоляной фазе в процессе рафинирования гидратацией. Это ведт к сниженным выходам масла в масляной фазе после рафинирования гидратацией. С повышением цены на масло и увеличением необходимости в растительном масле для биодизельного топлива важно оптимизировать переработку пищевых масел для получения более высоких выходов масла. Краткое изложение аспектов настоящего изобретения Аспекты настоящего изобретения представлены в пунктах формулы изобретения и в следующих комментариях. Неожиданно было найдено, что добавлением одной или большего количества липидацилтрансфераз к неочищенному пищевому маслу в процессе или до проведения способа рафинирования гидратацией выход масла в масляной фазе может быть существенно увеличен. Другими словами, потери масла в смоляной фазе могут быть существенно снижены. Кроме того, неожиданно было найдено, что при добавлении одной или большего количества липидацилтрансфераз к неочищенному пищевому маслу в процессе или до проведения способа рафинирования гидратацией полученная смоляная фаза является значительно менее вязкой. Это может обеспечить более удобные параметры для центрифугирования. Также неожиданно было найдено, что при добавлении одной или большего количества липидацилтрансфераз к неочищенному пищевому маслу в процессе или до проведения способа рафинирования гидратацией смоляная фаза, полученная из этого способа, может инкубироваться или храниться и (благодаря остаточной активной липидацилтрансферазе) может наблюдаться дополнительный гидролиз фосфолипидов в смоляной фазе. Затем изобретатели обнаружили, что далее можно выделить масляную фазу, содержащую свободные жирные кислоты (кислое масло) и остаточные триглицериды в смоляной фазе. Это кислое масло может продаваться за большую цену, чем нормальная смоляная фаза, которую добавляют в еду. Кроме того, неожиданно было найдено, что оставшаяся тврдая фаза (после отделения кислого масла) имеет более высокий уровень фосфора, чем нормальная смола и, таким образом,может быть использована как источник органического фосфора. Также неожиданно было найдено, что комбинирование ферментов одной или большего количества липидацилтрансфераз и одной или большего количества фосфолипаз С (PLC) приводит к синергетическим эффектам при применении в рафинировании пищевых масел (например, растительных масел). Детальные аспекты настоящего изобретения В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения обеспечивается способ рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно неочищенного пищевого масла), который включает следующие стадии: а) смешивание приблизительно 0,1-5% мас./мас. воды с пищевым маслом (предпочтительно неочищенным пищевым маслом) и липидацилтрансферазой;b) энергичное перемешивание смеси в течение от приблизительно 10 до 180 мин при температуре от приблизительно 45 до приблизительно 90 С и с) разделение масляной фазы и смоляной фазы. В соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения обеспечивается применение липидацилтрансферазы в процессе рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно в процессе рафинирования гидратацией неочищенного пищевого масла) для увеличения выхода масла в масляной фазе после завершения процесса рафинирования гидратацией. В соответствии с третьим аспектом настоящего изобретения обеспечивается применение липидацилтрансферазы в процессе рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно в процессе рафинирования гидратацией неочищенного пищевого масла) для уменьшения вязкости смоляной фазы после завершения процесса рафинирования гидратацией. Увеличение в выходе и/или уменьшение в вязкости происходит в сравнении с масляной фазой и/или смоляной фазой сравниваемого масла, рафинированного (или рафинированного гидратацией или ферментативно рафинированного гидратацией) баз применения липидацилтрансферазы. В соответствии с четвртым аспектом настоящего изобретения обеспечивается способ рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно неочищенного пищевого масла), который включает следующие стадии: а) смешивание приблизительно 0,1-5% мас./мас. воды с пищевым маслом (предпочтительно неочищенным пищевым маслом) и липидацилтрансферазой;b) энергичное перемешивание смеси в течение от приблизительно 10 до 180 мин при температуре от приблизительно 45 до приблизительно 90 С; с) разделение масляной фазы и смоляной фазы;d) инкубирование смоляной фазы, включающей активный липидацилтрансферазный фермент в течение от минимум приблизительно 2 ч до максимум 7 дней (предпочтительно до приблизительно 1-2 дней) и е) отделение (например, путм центрифугирования) масла от смоляной фазы. Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способ обработки смоляной фазы (предпочтительно получаемой или полученной после рафинирования, например рафинирования гидратацией или ферментативного рафинирования или их комбинации, пищевого масла), где смоляную фазу инкубируют с одним или большим количеством (активных) липидацилтрансферазных ферментов (отдельно или в комбинации с одним или большим количеством фосфолипазных С ферментов) в течение от минимум приблизительно 2 ч до максимум 7 дней (предпочтительно до приблизительно 1-2 дней) и отделяют (например, путм центрифугирования) масло от смоляной фазы. Настоящее изобретение ещ дополнительно обеспечивает применение липидацилтрансферазы (отдельно или в комбинации с фосфолипазой С) в инкубировании смоляной фазы (получаемой или полученной после рафинирования, например рафинирования гидратацией или ферментативного рафинирования или их комбинации, пищевого масла) для увеличения выхода масла и/или производства тврдой фазы (после отделения кислого масла) с более высоким уровнем фосфора, чем в нормальной смоле. Применение фермента(ов) увеличивает ценность кислого масла в сравнении со смолой, так как кислое масло может быть использовано для получения жирных кислот. Жирная кислота имеет более высокую ценность, чем смола, которую в противном случае добавляют в еду. Улучшения и/или увеличения наблюдаются в сравнении со смоляной фазой, которая не была обработана липидацилтрансферазой (отдельно или в комбинации с фосфолипазой С). Подходяще один или большее количество липидацилтрансферазных ферментов в смоляной фазе могут иметь остаточный активный фермент, который может быть перенесн в смоляную фазу после ферментативного рафинирования пищевого масла. Альтернативно, к смоляной фазе может быть добавлен липидацилтрансферазный фермент, липидацилтрансфераза, где фермент может быть добавлен в начале или в процессе инкубации смоляной фазы. В особенности масло в конце процесса в четвртом аспекте (и других обработок смоляной фазы) представляет собой "кислое масло". Это кислое масло может продаваться за большую цену, чем нормальная смоляная фаза, которую добавляют в еду. Оставшуюся смоляную фазу (после отделения кислого масла) иногда называют тврдой фазой. Неожиданно было найдено, что оставшаяся тврдая фаза (после отделения кислого масла) имеет более высокий уровень фосфора, чем нормальная смола и, таким образом, может быть использована как источник органического фосфора. Предпочтительно смоляная фаза может быть инкубирована с липидацилтрансферазой (или отдельно, или с одним или большим количеством фосфолипазных С ферментов) при температуре от приблизительно 30 до приблизительно 10 С, предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 60 С,предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 50 С, предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 45 С. Предпочтительно смоляная фаза, полученная из ферментативного рафинирования гидратацией неочищенного масла с липидацилтрансферазой, может быть инкубирована при температуре от приблизительно 30 до приблизительно 70 С, предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 60 С,предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 50 С, предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 45 С. Преимущественно липидацилтрансфераза представляет собой такую, которая классифицирована Номенклатурной классификацией ферментов (Е.С. 2.3.1.43). В одном варианте воплощения предпочтительно липидацилтрансферазу используют в комбинации с фосфолипазой С (Е.С. 3.1.4.3). В одном предпочтительном варианте воплощения липидацилтрансферазу (Е.С. 2.3.1.43) используют в комбинации с фосфолипазой С (Е.С. 3.1.4.3). Поэтому в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения обеспечивается способ рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно неочищенного пищевого масла), который включает следующие стадии: а) смешивание приблизительно 0,1-5% мас./мас. воды с пищевым маслом (предпочтительно неочищенным пищевым маслом) и комбинацией липидацилтрансферазы и фосфолипазы С;b) энергичное перемешивание смеси в течение от приблизительно 10 до приблизительно 180 мин при температуре от приблизительно 45 до приблизительно 90 С и с) разделение масляной фазы и смоляной фазы. Не желая связываться теорией, неожиданно было найдено, что липидацилтрансфераза может использовать диглицерид (полученный с помощью реакции фосфолипазы С) как акцепторную молекулу для получения триглицерида. Таким образом, когда липидацилтрансферазу используют в комбинации с фосфолипазой С, взаимодействие между этими ферментами приводит к синергичному повышению количества триглицерида в масле, содержащем оба фермента, в сравнении с маслом, содержащим только один любой фермент, или в сравнении с маслом, не содержащим никакого фермента. Предпочтительно,когда липидацилтрансферазу используют в комбинации с фосфолипазой С, взаимодействие между этими ферментами приводит к синергичному уменьшению количества диглицерида в масле, содержащем оба фермента, в сравнении с маслом, содержащим только один любой фермент, или в сравнении с маслом, не содержащим никакого фермента. Когда липидацилтрансферазу используют в комбинации с фосфолипазой С, взаимодействие между этими ферментами приводит к синергичному увеличению выхода масла в масле, содержащем оба фермента, в сравнении с маслом, содержащим только один любой фермент, или в сравнении с маслом, не содержащим никакого фермента. Применение комбинации этих ферментов имеет значительные преимущества перед применением только фосфолипазы С, так как накопление диглицеридов в масле (которое может происходить, когда используют только фосфолипазу С) может быть вредным для масла, потому что это может иметь негативное влияние на "температуру образования копоти" масла и/или может иметь негативное влияние на кристаллизационные свойства источников более насыщенных жиров. Следовательно, в настоящем изобретении другое преимущество применения липидацилтрансфераз(в частности, в комбинации с фосфолипазой С) заключается в том, что количество диглицерида в масле может быть уменьшено по сравнению с аналогичным маслом без липидацилтрансферазы и/или особенно по сравнению с аналогичным маслом, обработанным только фосфолипазой С. В другом аспекте настоящего изобретения обеспечивается применение липидацилтрансферазы в комбинации с фосфолипазой С в процессе рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно в процессе рафинирования гидратацией неочищенного пищевого масла) для увеличения выхода масла и/или для увеличения уровней триглицеридов в масляной фазе после завершения процесса рафинирования гидратацией и/или для уменьшения уровня диглицеридов в масляной фазе после завершения процесса рафинирования гидратацией. В соответствии с ещ одним другим аспектом настоящего изобретения обеспечивается применение липидацилтрансферазы в комбинации с фосфолипазой С в процессе рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно в процессе рафинирования гидратацией неочищенного пищевого масла) для уменьшения вязкости смоляной фазы после завершения процесса рафинирования гидратацией. Эти увеличения и/или уменьшения наблюдаются при сравнении со сравниваемым рафинированным пищевым маслом, которое не было обработано липидацилтрансферазой в комбинации с фосфолипазой С. В основном увеличения и/или уменьшения, обговоренные выше, наблюдаются при сравнении со сравниваемым способом или сравниваемым маслом, которое не было обработано липидацилтрансферазой (или только ею или в комбинации с фосфолипазой С). В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения обеспечивается способ рафинирования гидратацией пищевого масла (предпочтительно неочищенного пищевого масла), который включает следующие стадии: а) смешивание приблизительно 0,1-5% мас./мас. воды с пищевым маслом (предпочтительно неочищенным пищевым маслом) и липидацилтрансферазы в комбинации с фосфолипазой С;b) энергичное перемешивание этой смеси в течение от приблизительно 10 до приблизительно 180 мин при температуре от приблизительно 45 до приблизительно 90 С; с) разделение масляной фазы и смоляной фазы;d) инкубирование смоляной фазы, содержащей активную липидацилтрансферазу, в течение от минимум приблизительно 2 ч до максимум 7 дней (предпочтительно до приблизительно 1-2 дней) и е) отделение (например, путм центрифугирования) масла от смоляной фазы. Когда фермент, разлагающий фосфолипиды (предпочтительно липидацилтрансферазу), используют в комбинации с фосфолипазой С, фосфолипаза С может быть добавлена до, в то же время или после добавления липидацилтрансферазного фермента. В одном варианте воплощения предпочтительно фосфолипазу С добавляют к липидацилтрансферазе. Неожиданно было найдено, что применение комбинации липидацилтрансферазы и фосфолипазы С значительно увеличивает выход масла в масляной фазе после завершения процесса рафинирования гидратацией. Не желая связываться теорией, предполагают, что фосфолипаза С гидролизует фосфолипид (например, фосфатидилхолин) до диглицерида (например, 1,2-диацилглицерин) и фосфатного остатка (например, холинфосфат) и липидацилтрансфераза затем переносит жирную кислоту на диглицерид, образованный с помощью фосфолипазы С, таким образом образуя больше триглицеридов и увеличивая вы-4 020035 ход масла. Этот эффект приводит к синергетическому (т.е. предпочтительно больше, чем к аддитивному) увеличению выхода масла. В одном варианте воплощения предпочтительно способ рафинирования пищевого масла и/или применение в соответствии с настоящим изобретением могут быть выполнены при температуре в интервале приблизительно 45-90 С, предпочтительно приблизительно 45-70 С. В другом варианте воплощения предпочтительно способ рафинирования пищевого масла и/или применение в соответствии с настоящим изобретением могут быть выполнены при температуре выше приблизительно 44 С, более предпочтительно выше приблизительно 45 С, более предпочтительно выше приблизительно 50 С. В другом варианте воплощения предпочтительно способ и/или применение в соответствии с настоящим изобретением могут быть выполнены при температуре ниже приблизительно 60 С, предпочтительно ниже приблизительно 65 С, предпочтительно ниже приблизительно 70 С. В одном варианте воплощения предпочтительно способ и/или применение в соответствии с настоящим изобретением могут быть выполнены при температуре в интервале приблизительно 45-70 С,предпочтительно в интервале приблизительно 45-68 С, более предпочтительно в интервале приблизительно 50-65 С. Соответственно, температура масла и/или воды может составлять желательную температуру реакции при смешивании с ферментом. Масло и/или вода могут быть нагреты и/или охлаждены до желательной температуры до и/или в процессе добавления фермента. Поэтому в одном варианте воплощения предполагают, что дополнительная стадия способа в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой охлаждение и/или нагревание масла и/или воды. Предпочтительно содержание воды для способа в соответствии с настоящим изобретением может составлять приблизительно 0,1-4% мас./мас., более предпочтительно приблизительно 0,1-3% мас./мас.,более предпочтительно приблизительно 0,5-3% мас./мас. В одном варианте воплощения содержание воды для способа в соответствии с настоящим изобретением может составлять приблизительно 1-3% мас./мас. В одном варианте воплощения содержание воды для способа в соответствии с настоящим изобретением может составлять меньше чем приблизительно 3% мас./мас., предпочтительно меньше чем приблизительно 2%. В одном варианте воплощения содержание воды для этого способа может составлять меньше чем 1%. Уменьшение количества воды меньше чем приблизительно до 1% может приводить к значительному финансовому преимуществу в способе рафинирования гидратацией. Поэтому возможность уменьшения количества воды меньше чем приблизительно до 1% может привести к значительным сокращениям затрат. Соответственно, время реакции (т.е. период времени, в течение которого смесь перемешивают) может составлять от приблизительно 10 до приблизительно 180 мин, предпочтительно от приблизительно 15 до приблизительно 180 мин, более предпочтительно от приблизительно 15 до 60 мин, даже более предпочтительно от приблизительно 15 до приблизительно 35 мин. В одном варианте воплощения предпочтительно время реакции может составлять от приблизительно 30 до приблизительно 180 мин, предпочтительно от приблизительно 30 до приблизительно 60 мин. В одном варианте воплощения способ предпочтительно выполняют при выше приблизительно рН 4,5, при выше приблизительно рН 5 или при выше приблизительно рН 6. Предпочтительно способ выполняют при рН от приблизительно 4,6 до приблизительно 10,0, более предпочтительно от приблизительно 5,0 до приблизительно 10,0, более предпочтительно от приблизительно 6,0 до приблизительно 10,0, более предпочтительно от приблизительно 5,0 до приблизительно 7,0,более предпочтительно от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,5 и даже более предпочтительно от приблизительно 5,5 до 6,0. В одном варианте воплощения способ может быть выполнен при рН от приблизительно 5,3 до 8,3. В одном варианте воплощения способ может быть выполнен при рН от приблизительно 6 до 6,5,предпочтительно приблизительно при 6,3. Предпочтительно рН может быть нейтральным (рН приблизительно 5,0-7,0) в способах и/или применениях настоящего изобретения. Предпочтительно обработка ферментом происходит в процессе рафинирования без корректировки рН масла и/или воды. Поэтому, как правило, рН будет составлять приблизительно 5,5-7,5. Это приводит к значительному преимуществу по сравнению со способами предыдущего уровня техники, используя фосфолипазные А ферменты, которые, как правило, являются высокоактивными только в кислых рН условиях, т.е. рН 4-5. Поэтому, как правило, в способах предыдущего уровня техники (например, используя фосфолипазные А ферменты) рН масла должен быть доведен до более кислых условий. Кроме того, применение липидацилтрансферазы с фосфолипазным С ферментом имеет значительное преимущество по сравнению с применением указанной фосфолипазы А с фосфолипазным С ферментом, так как оптимальный рН для липидацилтрансфераз, как правило, совпадает значительно лучше с оптимальным рН для фосфолипазных С ферментов. Поэтому в основном не происходит никакого "рНконфликта", когда липидацилтрансферазы применяют в комбинации с фосфолипазными С ферментами. Это резко контрастирует с применением фосфолипазных А ферментов в комбинации с фосфолипазными С ферментами. Поэтому применение липидацилтрансфераз в комбинации с фосфолипазными С ферментами обеспечивает значительное улучшение, так как оба фермента могут работать в их оптимальном рН интервале или одновременно. Разделение масляной фазы и смоляной фазы может быть выполнено с помощью любого общепринятого способа разделения. Предпочтительно разделение проводят с помощью центрифугирования. Одно значительное преимущество применения липидацилтрансфераз (или отдельно, или предпочтительно в комбинации с фосфолипазным С ферментом) заключается в том, что ферментативная обработка дает возможность настроить центрифугу для контролирования количества фосфора в конечном масле. Не желая связываться теорией, это достижимо, потому что вязкость масла значительно снижена в сравнении с маслом, не обработанным липидацилтрансферазой (или отдельно, или предпочтительно в комбинации с фосфолипазным С ферментом). Это значительное преимущество по сравнению со способами предыдущего уровня техники. Как правило, в общепринятых способах рафинирования центрифугирование приводит к получению уровня фосфора в масле приблизительно 50 ppm. Фактически, технические характеристики для уровня фосфора в пищевом масле регламентируют, что он должен быть меньше чем 200 ppm. В действительности, оптимально иметь масла с уровнем фосфора как можно более близким к уровню 200 ppm. Применение липидацилтрансферазы (или отдельно, или предпочтительно в комбинации с фосфолипазным С ферментом) приводит к получению масла, которое может быть центрифугировано до уровня фосфора от приблизительно 100 до 200 ppm, предпочтительно приблизительно 170-190 ppm, более предпочтительно приблизительно 180 ppm. Установка центрифуги для получения этих уровней фосфора до настоящего изобретения была очень сложной и обеспечивает значительное улучшение настоящего изобретения. Соответственно, вода может быть смешана с пищевым маслом, до или во время смешивания с ферментом. Альтернативно, пищевое масло и фермент могут быть смешаны до смешивания с водой. В одном варианте воплощения масло, воду и фермент можно прокачивать в потоке одновременно или по сути одновременно через миксер и в бак выдержки. Предпочтительно фермент может быть инактивирован в течение и/или в конце способа. Фермент может быть инактивирован до или после разделения масляной фазы и смоляной фазы. Предпочтительно фермент может быть инактивирован теплом путм нагревания в течение 10 мин при 75-85 С или при температуре выше 92 С. В одном варианте воплощения предпочтительно фермент может быть не инактивирован в смоляной фазе. Таким образом, когда смоляную фазу собирают и инкубируют, фермент может дополнительно разлагать фосфолипиды в смоляной фазе. После продолжительной инкубации смоляной фазы может быть выполнено дополнительное разделение (например, с помощью центрифугирования) для того, чтобы получить ещ больше масла из смоляной фазы. Это ещ больше может увеличить выход масла. Не желая связываться теорией, считают, что фермент разлагает фосфолипиды до свободных жирных кислот в смоляной фазе, таким образом высвобождая триацилглицерид, который до этого был эмульсирован с фосфолипидами. Это снижает вязкость смоляной фазы и позволяет разделить триацилглицериды и свободные жирные кислоты, например, с помощью центрифугирования. В одном варианте воплощения предпочтительно способ настоящего изобретения может быть выполнен без добавления щлочи, такой как, например, NaOH. В другом варианте воплощения предпочтительно способ настоящего изобретения может быть выполнен в присутствии щлочи, такой как, например, NaOH. Когда добавляют NaOH, предпочтительно е не добавляют в количестве, которое превышает приблизительно 0,2 мл (4% раствор) NaOH на 100 г масла. Ферменты, подходящие для применения в способах и/или применениях данного изобретения, могут иметь липидацилтрансферазную активность, что определяют, используя "Исследование трансферазы(холестерин:фосфолипид) (TrU)", описанное ниже. Определение трансферазной активности "Исследование трансферазы (холестерин:фосфолипид)"(TrU). Субстрат: 50 мг холестерина (Sigma C8503) и 450 мг соевого фосфатидилхолина (PC),Avanti441601, растворяют в хлороформе и хлороформ выпаривают при 40 С в вакууме. 300 мг РС:холестерин 9:1 диспергируют при 40 С в 10 мл 50 мМ HEPES буфера рН 7. Ферментация: 250 мкл субстрата добавляют в стакан с крышкой при 40 С. 25 мкл раствора фермента добавляют и инкубируют при энергичном перемешивании в течение 10 мин при 40 С. Добавленный фермент должен эстерифицировать 2-5% холестерина в данном исследовании. Также анализируют контрольную пробу с 25 мкл воды вместо раствора фермента. Через 10 мин добавляют 5 мл гексан:изопропанол 3:2. Количество эстера холестерина анализируют с помощью ВЭТСХ, используя холестеринстеарат(Sigma C3549), стандарт для калибрования. Трансферазную активность рассчитывают как количество образования эстера холестерина в минуту при условиях исследования. Одна трансферазная единица (TrU) определяется как мкмоль эстера холестерина, получаемого в минуту при 40 С и рН 7 в соответствии с исследованием трансферазы, представленным выше. Предпочтительно липидацилтрансфераза, используемая в способе и применениях настоящего изобретения, будет иметь специфическую трансферазную единицу (TrU) на 1 мг фермента по крайней мере 25 TrU/мг ферментного белка. Преимущественно липидацилтрансфераза для применения в настоящем изобретении может дозироваться в количестве от 0,05 до 50 TrU на 1 г масла, предпочтительно в количестве от 0,5 до 5 TrU на 1 г масла. Более предпочтительно ферменты, подходящие для применения в способах и/или применениях настоящего изобретения, обладают липидацилтрансферазной активностью, как определено с помощью протокола ниже. Протокол для определения % ацилтрансферазной активности. Пищевое масло, к которому добавляют липидацилтрансферазу в соответствии с настоящим изобретением, может быть экстрагировано после ферментативной реакции с CHCl3:CH3OH 2:1 и органическую фазу, содержащую липидный материал, выделяют и анализируют с помощью ГЖХ и ВЭЖХ в соответствии с процедурой, детально описанной ниже. Из ГЖХ и ВЭЖХ анализов определяют количество свободных жирных кислот и одного или большего количества эстеров стерина/станола. Контрольное пищевое масло, к которому не добавляют никакого фермента в соответствии с настоящим изобретением, анализируют тем же способом. Расчты. Из результатов ГЖХ и ВЭЖХ анализов может быть рассчитано увеличение в свободных жирных кислотах и эстерах стерина/станола:% жирной кислоты = % жирной кислоты (фермент) - % жирной кислоты (контроль);Mv жирной кислоты = средняя молекулярная масса жирных кислот; А =% эстера стерина/Mv эстера стерина (где% эстера стерина = % эстера стерина/станола(фермент) - % эстера стерина/станола (контроль) и Mv эстера стерина = средняя молекулярная масса эстеров стерина/станола). Трансферазную активность рассчитывают как процент от общей ферментативной активности: Если количество свободных жирных кислот в пищевом масле увеличивается, оно не увеличивается предпочтительно существенно, т.е. в значительной степени. Под этим авторы имеют в виду, что увеличение в количестве свободных жирных кислот не влияет негативно на качество пищевого масла. Пищевое масло, используемое для исследования ацилтрансферазной активности, предпочтительно представляет собой соевое масло, дополненное растительным стерином (1%) и фосфатидилхолином(2%), используя способ. Растительный стерин и фосфатидилхолин растворяют в соевом масле путм нагревания до 95 С при перемешивании. Затем это масло охлаждают до 40 С и добавляют ферменты. Воду добавляют до общей концентрации 5% масляной фазы. Этот образец поддерживают при 40 С с перемешиванием на магнитной мешалке и образцы отбирают через 4 и 20 ч и анализируют с помощью ТСХ. Для этого исследования используемая доза фермента составляет предпочтительно 0,2 TIPU-K/г масла, более предпочтительно 0,08 TIPU-K/г масла, предпочтительно 0,01 TIPU-K/г масла. Уровень фосфолипидов, присутствующих в масле, и/или % превращения стерина предпочтительно определяют через 0,5, 1, 2, 4 и 20 ч, более предпочтительно через 20 ч. Когда используемый фермент представляет собой липидацилтрансферазный фермент, предпочтительно время инкубирования является эффективным для обеспечения по крайней мере 5% трансферазной активности, предпочтительно по крайней мере 10% трансферазной активности, предпочтительно по крайней мере 15, 20, 25, 26, 28, 30, 40, 50, 60 или 75% трансферазной активности.% трансферазной активности (т.е. трансферазная активность как процент от общей ферментативной активности) может быть определн протоколом, заданным выше. В некоторых аспектах настоящего изобретения термин "без существенного увеличения количества свободных жирных кислот", как использовано в данном описании, означает, что количество свободной жирной кислоты в пищевом масле, обработанном с помощью липидацилтрансферазы в соответствии с настоящим изобретением, меньше, чем количество свободной жирной кислоты, полученное в пищевом масле, когда используют фермент, другой, чем липидацилтрансфераза, в соответствии с настоящим изобретением, например, в сравнении с количеством свободной жирной кислоты, полученным, когда ис-7 020035 пользуют обычный фосфолипазный фермент, например Lecitase Ultra (Novozymes A/S, Denmark). Кроме того, или вместо, может быть использовано оценивание % трансферазной активности в масле (выше), для определения липидацилтрансферазных ферментов, наиболее предпочтительных для использования в способах данного изобретения следуя исследованию, озаглавленному как "Протокол для определения липидацилтрансферазы для использования в настоящем изобретении". Протокол для определения липидацилтрансферазы. Липидацилтрансфераза в соответствии с настоящим изобретением представляет собой такую, которая приводит к:(1%) и фосфатидилхолином (2%) (используя способ: Растительный стерин и фосфатидилхолин растворяют в соевом масле путм нагревания до 95 С при перемешивании. Затем это масло охлаждают до 40 С и добавляют ферменты. Этот образец поддерживают при 40 С с перемешиванием на магнитной мешалке и образцы отбирают через 0,5, 1, 2, 4 и 20 ч и анализируют с помощью ТСХ); и/илиii) превращению (% превращения) добавленного стерина в эстер стерина (используя способ, раскрытый в i) выше). Может быть использован способ ГЖХ для определения уровня стерина и эстера стерина, как описано в примере 2. Для этого исследования используемая доза фермента может составлять предпочтительно 0,2 TIPU-K/г масла, более предпочтительно 0,08 TIPU-K/r масла, предпочтительно 0,01 TIPU-K/г масла. Уровень фосфолипидов, присутствующих в масле, и/или превращение (% превращения) стерина предпочтительно определяют через 0,5, 1, 2, 4 и 20 ч, более предпочтительно через 20 ч. В протоколе для определения липидацилтрансфераз, после ферментативной обработки, предпочтительно добавляют 5% воды и тщательно перемешивают с маслом. Затем это масло разделяют на масляную и водную фазу, используя центрифугирование (см. "Enzyme-catalyzed degumming of vegetable oils"Buchold, H. и Laurgi A.-G., Fett Wissenschaft Technologie (1993), 95(8), 300-4, ISSN: 0931-5985), и потом масляная фаза может быть проанализирована на содержание фосфора, используя следующий протокол("Исследование содержания фосфора"). Исследование содержания фосфора. Уровень фосфолипидов, присутствующих в масле после рафинирования гидратацией, определяют первым получением образца масла в соответствии с получением образца, раскрытым в AOAC OfficialMicrowave Digestion, First Action 1999 NMKL-AOAC Method). Количество фосфолипидов в масле затем измеряют путм анализирования содержания фосфора в образце масла после рафинирования в соответствии с АОАС Official Method Ca 20-99: Analysis Phosphorus in oil by inductively Coupled Plasma OpticalEmission Spectroscopy. Количество фосфора, присутствующего в масляной фазе после использования настоящего изобретения, как правило, не значительно отличается от содержания фосфора в масляной фазе после обычного рафинирования гидратацией (т.е. без фермента). Выход масла, используя настоящее изобретение, в масляной фазе, используя настоящее изобретение, существенно повышается в сравнении с масляной фазой после использования обычного способа рафинирования гидратацией (т.е. без фермента). Предпочтительно способ и/или применение в соответствии с настоящим изобретением улучшают выход приблизительно на 0,25-7%, например приблизительно на 0,25-3%, или приблизительно 0,5-2%, или приблизительно 1-2% в сравнении с тем же маслом, которое подвергли тому же способу рафинирования гидратацией без добавления фермента. Неожиданно было найдено, что добавление фермента в способ в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает значительно более высокий выход масла в масляной фазе без обязательного значительного уменьшения содержания фосфора в масляной фазе в сравнении со сравниваемой масляной фазой, полученной с использованием сравнительного способа рафинирования гидратацией, но без добавления фермента. Соответственно, количество фосфора в масляной фазе, когда масло обработано в соответствии со способом или применением настоящего изобретения, может составлять на 0-80%, предпочтительно 050%, предпочтительно 0-10%, предпочтительно 0-1% меньше, чем содержание фосфора в масляной фазе,полученной с использованием сравнительного способа рафинирования гидратацией, но без добавления фермента. В частности, масляная фаза, полученная в способе в соответствии с настоящим изобретением, может быть дополнительно рафинирована для удаления фосфатидов и/или фосфолипидов. Например, масляная фаза может подвергаться или ферментативному рафинированию и/или кислотному рафинированию.% превращения стерина, присутствующего в масле, составляет по крайней мере 1%,предпочтительно по крайней мере 5%,предпочтительно по крайней мере 10%,предпочтительно по крайней мере 20%, предпочтительно по крайней мере 30%,предпочтительно по крайней мере 40%, предпочтительно по крайней мере 50%,предпочтительно по крайней мере 60%, предпочтительно по крайней мере 70%,-8 020035 предпочтительно по крайней мере 80%, предпочтительно по крайней мере 90%,предпочтительно по крайней мере 95%. В одном варианте воплощения % превращения стерина, присутствующего в масле, составляет по крайней мере 5%, предпочтительно по крайней мере 20%. В некоторых аспектах липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может включать GDSX мотив и/или GANDY мотив. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза характеризуется как фермент, который обладает ацилтрансферазной активностью и который включает аминокислотный мотив GDSX, где X представляет собой один или более из следующих аминокислотных остатков: L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M или S. Предпочтительно нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу или липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения,может быть получаемой, предпочтительно полученной, из организмов, выбранных из одного или более следующих родов: Aeromonas, Streptomyces, Saccharomyces, Lactococcus, Mycobacterium, Streptococcus,Lactobacillus, Desulfitobacterium, Bacillus, Campylobacter, Vibrionaceae, Xylella, Sulfolobus, Aspergillus,Schizosaccharomyces, Listeria, Neisseria, Mesorhizobium, Ralstonia, Xanthomonas и Candida. Предпочтительно липидацилтрансфераза является получаемой, предпочтительно полученной, из организма родаAeromonas. В некоторых аспектах настоящего изобретения нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения,кодирует липидацилтрансферазу, которая включает остаток аспарагиновой кислоты в положении, соответствующем N-80 в аминокислотной последовательности липидацилтрансферазы Aeromonassalmonicida, которая представлена как SEQ ID No. 35. В некоторых аспектах настоящего изобретения липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая включает остаток аспарагиновой кислоты в положении, соответствующем N-80 в аминокислотной последовательности липидацилтрансферазы Aeromonas salmonicida, которая представлена какSEQ ID No. 35. В дополнение или в качестве альтернативы, нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения,кодирует липидацилтрансферазу, которая может включать аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 16, или аминокислотную последовательность, которая обладает 75% или более гомологией по отношению к ней. Предпочтительно нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу, кодирует липидацилтрансферазу, которая может включать аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 16. В дополнение или в качестве альтернативы, нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения, кодирует липидацилтрансферазу, которая может включать аминокислотную последовательность,которая представлена как SEQ ID No. 68, или аминокислотную последовательность, которая обладает 75% или более гомологией по отношению к ней. Предпочтительно нуклеотидная последовательность,кодирующая липидацилтрансферазу, кодирует липидацилтрансферазу, которая может включать аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 68. В одном воплощении липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения имеет аминокислотную последовательность, представленную вSEQ ID No. 16 или SEQ ID No. 68, или имеет аминокислотную последовательность, которая обладает по крайней мере 75%-ной идентичностью с ней, предпочтительно по крайней мере 80%, предпочтительно по крайней мере 85%, предпочтительно по крайней мере 95%, предпочтительно по крайней мере 98% идентичностью с ней. В одном варианте воплощения предпочтительно липидацилтрансфераза для применения в любом из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая экспрессируется в Bacillus licheniformis путм трансформирования указанного В.licheniformis нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No. 1, или нуклеотидной последовательностью,имеющей по крайней мере 75% идентичность с ней (более предпочтительно по крайней мере 80%, более предпочтительно по крайней мере 85%, более предпочтительно по крайней мере 95%, более предпочтительно по крайней мере 98% идентичность с ней); культивирования указанного В.licheniformis и выделения липидацилтрансферазы (липидацилтрансфераз), полученной в нм. Термин "пищевое масло", как использовано в данном описании, может включать растительные масла. Предпочтительно пищевое масло до обработки в соответствии с настоящим изобретением представляет собой пищевое масло, которое включает негидратируемый фосфор с содержанием приблизительно 50-3000 ppm, более предпочтительно приблизительно 50-1400 ppm, более предпочтительно приблизительно 200-1400 ppm и даже более предпочтительно приблизительно 400-1200 ppm. В одном аспекте неочищенное пищевое масло, до проведения способа настоящего изобретения,-9 020035 имеет содержание фосфора выше 350 ppm, более предпочтительно выше 400 ppm, ещ более предпочтительно выше 500 ppm и наиболее предпочтительно выше 600 ppm. Предпочтительно пищевое масло представляет собой растительное масло. Масла, охватываемые способом в соответствии с настоящим изобретением, могут включать, но не ограничиваются указанными, одно или большее количество из таких как соевое масло, масло канолы,кукурузное масло, хлопковое масло, пальмовое масло, кокосовое масло, рисовое масло, арахисовое масло, оливковое масло, сафлоровое масло, пальмоядровое масло, рапсовое масло и подсолнечное масло. Предпочтительно масло представляет собой одно или большее количество из таких как соевое масло, кукурузное масло, подсолнечное масло и рапсовое масло (иногда называется маслом канолы). Более предпочтительно масло представляет собой одно или большее количество из таких как соевое масло, подсолнечное масло или рапсовое масло. Наиболее предпочтительно масло представляет собой соевое масло. Как использовано в данном описании, "неочищенное масло" (также называется в данном описании нерафинированным маслом) может представлять собой выжатое или экстрагированное масло или их смесь. Содержание фосфатидов в сиром масле может изменяться от 0,5 до 3% мас./мас., что соответствует содержанию фосфора в интервале 200-1200 ppm, более предпочтительно в интервале 250-1200 ppm. Помимо фосфатидов, неочищенное масло также может содержать небольшие концентрации углеводородов, соединения сахаров и металл/фосфатидные кислотные комплексы Са, Mg и Fe. Преимущественно способ и применения настоящего изобретения могут рафинировать пищевые масла в средах с низким уровнем воды (5%, предпочтительно меньше чем 2%, более предпочтительно меньше чем 1%). Поэтому рафинирование гидратацией может быть проведено с добавлением меньшего количества воды, чем при использовании обычного способа рафинирования гидратацией. Дополнительное преимущество настоящего изобретения заключается в выработке эстеров стерина в масляной фазе. Предпочтительно фермент может быть дозирован в интервале приблизительно 0,01-10 TIPU-K/r масла, предпочтительно фермент может быть дозирован в интервале приблизительно 0,05-1,5 TIPU-K/r масла, более предпочтительно 0,2-1 TIPU-K/r масла. Когда фермент представляет собой липидацилтрансферазу, предпочтительно она может быть дозирована в интервале от приблизительно 0,01 до 5 TIPU-K единиц/г масла. В одном варианте воплощения липидацилтрансфераза может быть дозирована в интервале от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 TIPU-K единиц/г масла, более предпочтительно липидацилтрансфераза может быть дозирована в интервале от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,5 TIPU-K единиц/г масла, более предпочтительно липидацилтрансфераза может быть дозирована в интервале от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,3 TIPU-K единиц/г масла. Когда фермент представляет собой фосфолипазу, предпочтительно она может быть дозирована в интервале приблизительно 0,5-10 TIPU-K единиц/г масла. В одном варианте воплощения фосфолипаза может быть дозирована в интервале приблизительно 0,5-5 TIPU-K единиц/г масла, предпочтительно фосфолипаза может быть дозирована в интервале приблизительно 0,5-1,5 TIPU-K единиц/г масла. Предпочтительно фосфолипаза может быть дозирована в интервале приблизительно 1,0-3 TIPU-K единиц/г масла. Фосфолипазная активность, TIPU-K. Субстрат: 1,75% L-растительного фосфатидилхолина 95% (441601, Avanti Polar Lipids), 6,3% Тритона Х-100 Т 9284, Sigma) и 5 мМ CaCl2 растворяют в 0,05 мМ HEPES буфере рН 7,0. Процедура исследования: Образцы, калибровочные растворы и контроль разводят в 10 мМ HEPES рН 7,0, 0,1% Тритона Х-100 ( Т 9284, Sigma). Анализ проводят, используя автоанализатор Конелаба(Konelab Autoanalyzer) (Thermo, Finland). Исследование проводят при 30 С. 34 мкл субстрата термостатируют в течение 180 с перед добавлением 4 мкл образца. Ферментация длится 600 с. Количество свободной жирной кислоты, высвобожденной в процессе ферментации, измеряют, используя NEFA С набор(999-75406, WAKO, Germany). 56 мкл NEFA А добавляют и смесь инкубируют в течение 300 с. После этого 113 мкл NEFA В добавляют и смесь инкубируют в течение 300 с. Затем измеряют ОП (оптическая плотность) 520 нм. Ферментную активность (мкмоль FFA/минмл) расчитывают в пересчте на стандартный ферментный препарат. Ферментную активность TIPU-K рассчитывают как микромоли свободной жирной кислоты (FFA),полученные в минуту в условиях исследования. В настоящем изобретении способ предпочтительно не представляет собой способ щелочной нейтрализации (т.е. не способ кислотного рафинирования гидратацией и/или не способ кислотно-щелочного рафинирования). Другими словами, способ предпочтительно не включает добавление кислот (таких как фосфорная, лимонная, аскорбиновая, серная, фумаровая, малеиновая, соляная и/или уксусная кислоты) или щелочей (таких как KOH и NaOH) или не включает добавление существенных количеств кислот или щелочей. Другими словами, если в способе настоящего изобретения добавляют кислоты и/или щлочи,их добавляют менее чем при 0,004%. Для удобства поиска, эти и дополнительные аспекты настоящего изобретения далее раскрыты под соответствующими заголовками разделов. Однако информация в каждом разделе не обязательно ограничивается каждым определнным разделом. Фосфолипаза С. Как описано выше, фермент, разлагающий фосфолипиды (предпочтительно липидацилтрансфераза), может быть использован в комбинации с фосфолипазой С (Е.С. 3.1.4.3). Фосфолипаза С может представлять собой любой доступный фосфолипазный С фермент и может быть выбрана из одного или больше из следующих фосфолипазных С ферментов: Purifine (имеется в наличии у Verenium, US); фосфолипаза С из Clostridium perfringens (такая как фосфолипаза С, имеющаяся в наличии у Sigma, Ref Р 7633); фосфолипаза С из Bacillus cereus (такая как фосфолипаза С, имеющаяся в наличии у Sigma, Ref P6621); фосфолипазный С фермент, описанный в WO 2008/036863 (включнном в данное описание путм ссылки). Преимущества. Одно преимущество настоящего изобретения заключается в том, что в конце способа рафинирования гидратацией получают повышенный выход масла. Повышение в выходе масла сравнивают с аналогичным способом рафинирования гидратацией, но без добавления фермента в соответствии с настоящим изобретением. Не желая связываться теорией, повышенный выход может быть благодаря уменьшенному эмульгирующему эффекту, что вызывается удалением фосфолипидов в смоляную фазу. Фосфолипиды являются хорошими эмульгаторами и могут быть эмульгированы с триацилглицеридами, таким образом, когда фосфолипиды удаляют в смоляную фазу, некоторое количество масла в форме триацилглицерида (масло) также удаляют. Уменьшение в вязкости смоляной фазы благодаря деградации фосфолипидов помогает предотвратить потерю масла в смоляной фазе (так как разделение смоляной фазы и масла значительно проще). Кроме того или альтернативно (не желая связываться теорией), когда липидацилтрансферазу используют в соответствии с настоящим изобретением, эстеры стерина образуют путм переноса остатка жирной кислоты от фосфолипидов к стерину. Этот остаток жирной кислоты, эстерифицированный до стерина с помощью липидацилтрансферазной ферментной реакции, найден в масляной фазе и не выявляется в смоляной фазе. В обычных способах рафинирования гидратацией (без добавления липидацилтрансферазы) эти остатки жирной кислоты теряются, переходя в смоляную фазу. Дополнительное преимущество настоящего изобретения заключается в том, что, когда используют липидацилтрансферазу, нет необходимости корректировать рН в способе рафинирования гидратацией(от приблизительно рН 5,0 или 5,5 до приблизительно рН 6,5 или 7). Этот рН приводит к получению высокой реакционной способности липидацилтрансферазы. Другое преимущество настоящего изобретения при применении липидацилтрансферазы заключается в том, что жирная кислота от фосфолипидов переносится на стерин с образованием эстеров стерина. Это само по себе может способствовать получению от 0,1 до 0,15% увеличения в выходе в масляной фазе. Дополнительное преимущество настоящего изобретения (в частности, при применении липидацилтрансферазы) заключается в том, что смоляная фаза является менее вязкой в сравнении со смоляной фазой из аналогичного способа рафинирования гидратацией, но без добавления фермента в соответствии с настоящим изобретением. Более низкая вязкость в смоляной фазе приводит к тому, что она легче отделяется от масляной фазы, т.е. путм центрифугирования. Кроме того, смоляная фаза может иметь более низкое содержание воды, следовательно, она может быть легче высушена. Ещ одно дополнительное преимущество настоящего изобретения заключается в том, что получается сниженная концентрация триглицеридов в смоляной фазе. Способ настоящего изобретения может приводить к уменьшенному засорению отложениями на оборудовании для переработки. Это означает, что очищение оборудования может быть легче. Не желая связываться теорией, неожиданно было найдено, что липидацилтрансфераза может использовать диглицерид (полученный реакцией фосфолипазы С) как акцепторную молекулу для получения триглицерида. Таким образом, когда липидацилтрансферазу используют в комбинации с фосфолипазой С, взаимодействие между этими ферментами приводит к синергетичному увеличению количества триглицерида в масле, содержащем оба фермента, в сравнении с аналогичным маслом, содержащим только любой фермент, или с аналогичным маслом, не содержащим никакого фермента. Когда липидацилтрансферазу используют в комбинации с фосфолипазой С, взаимодействие между этими ферментами приводит к синергетичному увеличению выхода масла в масле, содержащем оба фермента, в сравнении с аналогичным маслом, содержащим только любой фермент, или с аналогичным маслом, не содержащим никакого фермента. Применение комбинации этих ферментов имеет значительные преимущества по сравнению с применением только фосфолипазы С, так как накопление диглицеридов в масле (которое может происходить, когда используют только фосфолипазу С) может быть вредным для масла, потому что это может иметь негативный эффект на "температуру образования копоти" масла и/или может иметь негативный эффект на кристаллизационные свойства источников более насыщенных жиров. Следовательно, в настоящем изобретении другое преимущество применения липидацилтрансфераз(в частности, в комбинации с фосфолипазой С) заключается в том, что количество диглицерида в масле может быть уменьшено по сравнению с аналогичным маслом без липидацилтрансферазы и/или особенно по сравнению с аналогичным маслом, обработанным только фосфолипазой С. Применение фермента(ов) в соответствии с настоящим изобретением может уменьшить количество воды, необходимой в способе, меньше чем приблизительно до 1%. Это может привести к значительному финансовому преимуществу в способе рафинирования гидратацией. Поэтому возможность уменьшения количества воды меньше чем приблизительно до 1% может привести к значительным сокращениям затрат. Предпочтительно обработка ферментом происходит в процессе рафинирования без корректировки рН масла и/или воды. Это приводит к значительному преимуществу по сравнению со способами предыдущего уровня техники, используя фосфолипазные А ферменты, которые, как правило, являются высокоактивными только в кислых рН условиях. Поэтому, как правило, в способах предыдущего уровня техники (например, используя фосфолипазные А ферменты) рН масла должен быть доведен до и/или при проведении процесса рафинирования. В настоящем изобретении в этом нет необходимости. Кроме того, применение липидацилтрансферазы в комбинации с фосфолипазным С ферментом имеет значительное преимущество по сравнению с применением указанной фосфолипазы А с фосфолипазным С ферментом, так как оптимальный рН для липидацилтрансфераз, как правило, совпадает значительно лучше с оптимальным рН для фосфолипазных С ферментов. Поэтому в основном не происходит никакого "рН-конфликта", когда липидацилтрансферазы применяют в комбинации с фосфолипазными С ферментами. Это резко контрастирует с применением фосфолипазных А ферментов в комбинации с фосфолипазными С ферментами. Поэтому применение липидацилтрансфераз в комбинации с фосфолипазными С ферментами обеспечивает значительное улучшение, так как оба фермента могут работать в их оптимальном рН интервале или одновременно. В особенности в способе, который включает обработку смоляной фазы с помощью липидацилтрансферазы (или отдельно, или в комбинации с фосфолипазой С), "кислое масло", полученное в конце этого способа, может продаваться за более высокую цену, чем нормальная смоляная фаза,которую добавляют в еду. Кроме того, неожиданно было найдено, что оставшаяся смоляная фаза (после отделения кислого масла) имеет более высокий уровень фосфора, чем нормальная смоляная фаза и, таким образом, может быть использована как источник органического фосфора. Хозяйская клетка. Хозяйский организм может представлять собой прокариотический или эукариотический организм. В одном воплощении настоящего изобретения липидацилтрансфераза в соответствии с настоящим изобретением экспрессируется в хозяйской клетке, например бактериальных клетках, таких как Bacillusspp., например в хозяйской клетке Bacillus licheniformis. Альтернативные хозяйские клетки могут представлять собой, например, грибы, дрожжи или растения. Было обнаружено, что применение хозяйской клетки Bacillus licheniformis приводит к повышенной экспрессии липидацилтрансферазы по сравнению с другими организмами, такими как Bacillus subtilis. Липидацилтрансфераза из Aeromonas salmonicida была встроена в ряд традиционных экспрессионных векторов, предназначенных для оптимальной экспрессии в Bacillus subtilis, Hansenula polymorpha,Schizosaccharomyces pombe и Aspergillus tubigensis соответственно. Однако очень низкие уровни определялись также в Hansenula polymorpha, Schizosaccharomyces pombe и Aspergillus tubigensis. Уровни экспрессии были ниже 1 мкг/мл, и не было возможности отобрать клетки, которые вырабатывают достаточное количество белка для начала коммерческого получения (результаты не представлены). В отличие от этого, Bacillus licheniformis является способным продуцировать уровни белка, которые являются привлекательными для экономически рентабельного производства. В частности, было обнаружено, что экспрессия в В.licheniformis является приблизительно в 10 раз большей, чем экспрессия в В.subtilis под контролем aprE промотора, или является приблизительно в 100 раз большей, чем экспрессия в S.lividans под контролем промотора А 4 и слитого с целлюлозой (результаты не представлены в данном описании). Хозяйская клетка может представлять собой клетку Bacillus, отличную от В.subtilis. Предпочтительно, когда указанная хозяйская клетка Bacillus принадлежит к одному из следующих видов: Bacilluslicheniformis; В.alkalophilus; В.amyloliquefaciens; В.circulans; В.clausii; В.coagulans; В.firmus; В.lautus; В.lentus; В.megaterium; В.pumilus или В.stearothermophilus. Термин "хозяйская клетка" в отношении настоящего изобретения включает любую клетку, которая включает либо нуклеотидную последовательность, кодирующую липидацилтрансферазу, как определено в данном описании, либо экспрессионный вектор, как определено в данном описании и который используется в рекомбинантном получении липидацилтрансферазы, обладающей специфическими свойствами,как определено в данном описании. Предпочтительно хозяйская клетка может быть дефектной по протеазе или представлять собой штамм протеаза минус и/или быть дефектной по -амилазе или представлять собой штамм -амилаза минус. Термин "гетерологичный", как используется в данном описании, означает последовательность, которая имеет происхождение от отличного генетического источника или видов. Гетерологичная последовательность представляет собой нехозяйскую последовательность, модифицированную последовательность, последовательность из отличного штамма хозяйской клетки или гомологичную последовательность из другого участка хромосомы хозяйской клетки."Гомологичная" последовательность представляет собой последовательность, которая обнаружена в том же генетическом источнике или видах, т.е. является существующей в природе в релевантных видах хозяйской клетки. Термин "рекомбинантная липидацилтрансфераза", как используется в данном описании, означает,что липидацилтрансфераза была получена с помощью генетической рекомбинации. Например, нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу, встраивали в клонирующий вектор, что приводило к получению клетки В.licheniformis, характеризующейся присутствием гетерологичной липидацилтрансферазы. Регуляторные последовательности. В некоторых применениях последовательность липидацилтрансферазы для использования в способах и применениях настоящего изобретения может быть получена путем оперативного связывания нуклеотидной последовательности, кодирующей ту же регуляторную последовательность, которая является способной обеспечить экспрессию нуклеотидной последовательности, что и выбранной хозяйской клеткой (такой клетки, как В.licheniformis). В качестве примера, может использоваться вектор, включающий нуклеотидную последовательность настоящего изобретения, оперативно связанную с такой регуляторной последовательностью, т.е. вектор,который представляет собой экспрессионный вектор. Термин "оперативно связанный" относится к размещенным рядом компонентам, где описанные компоненты находятся во взаимосвязи, позволяющей им функционировать в соответствии с предназначенным способом. Регуляторная последовательность, "оперативно связанная" с кодирующей последовательностью, лигируется таким образом, что экспрессия кодирующей последовательности достигается при условиях, совместимых с контрольными последовательностями. Термин "регуляторные последовательности" включает промоторы и энхансеры, а также другие сигналы регуляции экспрессии. Термин "промотор" используется в обычном смысле, как принято в данной области техники, например, сайт связывания РНК-полимеразы. Улучшенная экспрессия нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент, обладающий специфическими свойствами, как определено в данном описании, может также быть достигнута с помощью селекции регуляторных участков, например промотора, лидерных и терминаторных участков секреции, которые не являются регуляторными участками для нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент в природе. Предпочтительно нуклеотидная последовательность настоящего изобретения может быть оперативно связана, по крайней мере, с промотором. Предпочтительно нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу, может быть оперативно связанной с нуклеотидной последовательностью, кодирующей последовательность терминатора. Примеры приемлемых последовательностей терминатора для использования в каком-либо из векторов, хозяйских клеток, способов и/или применений настоящего изобретения включают: последовательность терминатора -амилазы (например, CGGGACTTACCGAAAGAAACCATCAATGATGGTTTCTTTTTTGTTCATAAA - SEQ ID No. 64),последовательность терминатора щелочной протеазы(например,CAAGACTAAAGACCGTTCGCCCGTTTTTGCAATAAGCGGGCGAATCTTACATAAAAATA - SEQ ID No. 65),последовательность терминатора, специфического для глутаминовой кислоты (например,ACGGCCGTTAGATGTGACAGCCCGTTCCAAAAGGAAGCGGGCTGTCTTCGTGTATTATTGT(например,TCTTTTAAAGGAAAGGCTGGAATGCCCGGCATTCCAGCCACATGATCATCGTTT - SEQ ID No. 67) и последовательность терминатора субтилина Е (например, GCTGACAAATAAAAAGAAGCAGGTATGGAGGAACCTGCTTCTTTTTACTATTATTG). Предпочтительно нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу, может быть оперативно связана с терминатором -амилазы, таким как терминатор -амилазы В.licheniformis. Промотор. Последовательность промотора, которая используется в соответствии с настоящим изобретением,может быть гетерологичной или гомологичной последовательности, кодирующей липидацилтрансфера- 13020035 зу. Последовательность промотора может представлять собой последовательность промотора, способную направлять экспрессию липидацилтрансферазы в выбранной хозяйской клетке. Предпочтительно последовательность промотора может быть гомологичной для видов Bacillus, например В.licheniformis. Предпочтительно последовательность промотора является гомологичной выбранной хозяйской клетке. Предпочтительно последовательность промотора может быть гомологичной хозяйской клетке. "Гомологичная хозяйской клетке" означает такую, которая имеет происхождение от хозяйского организма; т.е. последовательность промотора, которая обнаружена в природе в хозяйском организме. Предпочтительно последовательность промотора может быть выбрана из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, кодирующей промотор -амилазы, промотор протеазы, промотор субтилизина, промотор протеазы, специфической для глутаминовой кислоты, и промотор левансахаразы. Предпочтительно последовательность промотора может представлять собой нуклеотидную последовательность, кодирующую LAT (например, промотор -амилазы из В.licheniformis, также известный как AmyL), AprL (например, промотор субтилизина Карлсберга), EndoGluC (например, промотор, специфический для глутаминовой кислоты из В.licheniformis), AmyQ (например, промотор -амилазы из В.amyloliquefaciens) и SacB (например, промотор левансахаразы В.subtilis). Другие примеры промоторов, приемлемых для направления транскрипции последовательности нуклеиновой кислоты в способах настоящего изобретения, включают промотор гена щелочной протеазыBacillus lentus (aprH); промотор гена -амилазы Bacillus subtilis (amyE); промотор гена мальтогенной амилазы Bacillus stearothermophilus (amyM); промотор гена пенициллиназы Bacillus licheniformis (penP); промоторы генов xylA и xylB Bacillus subtilis и/или промотор гена CryIIIA Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis. В предпочтительном воплощении последовательность промотора представляет собой промотор амилазы (такой как промотор -амилазы Bacillus licheniformis). Предпочтительно, когда последовательность промотора включает от -35 до -10 последовательность промотора -амилазы В.licheniformis - см. фиг. 53 и 55."Последовательность от -35 до -10" описывает положение относительно сайта начала транскрипции. Как "-35", так и "-10" представляют собой блоки, т.е. некое количество нуклеотидов, каждый из которых включает 6 нуклеотидов, и эти блоки разделены 17 нуклеотидами. Эти 17 нуклеотидов часто называют "спейсером". Это иллюстрируется на фиг. 55, где блоки -35 и -10 подчеркнуты. Во избежание неоднозначного трактования, там где "последовательность от -35 до -10" используется в данном описании, это относится к последовательности от начала -35 блока до конца -10 блока, т.е. включая как -35 блок, так и спейсер длиной 17 нуклеотидов и -10 блок. Сигнальный пептид. Липидацилтрансфераза, которая вырабатывается хозяйской клеткой путем экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующей липидацилтрансферазу, может секретироваться или может содержаться внутри клетки в зависимости от используемой последовательности и/или вектора. Сигнальная последовательность может использоваться для непосредственной секреции кодирующих последовательностей через определенную клеточную мембрану. Сигнальные последовательности могут быть природными или чужеродными по отношению к последовательности, кодирующей липидацилтрансферазу. Например, последовательность, кодирующая сигнальный пептид, может быть получена из гена амилазы или протеазы из видов Bacillus, предпочтительно из Bacillus licheniformis. Приемлемые последовательности, кодирующие сигнальный пептид, могут быть получены из одного или более из следующих генов: гена мальтогенной -амилазы, гена субтилизина, гена бет-лактамазы,гена нейтральной протеазы, prsA гена и/или гена ацилтрансферазы. Предпочтительно, когда сигнальный пептид представляет собой сигнальный пептид -амилазы В.licheniformis, ацилтрансферазу Aeromonas (например, mkkwfvcllglialtvqa - SEQ ID No. 21), субтилизин В.subtilis (например, mrskklwisllfaltliftmafsnmsaqa - SEQ ID No. 22) или субтилизин В.licheniformis (например, mmrkksfwfgmltafmlvftmefsdsasa -SEQ ID No. 23). Предпочтительно сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид -амилазы В.licheniformis. Однако может использоваться любая последовательность, кодирующая сигнальный пептид, способная направлять экспрессированную липидацилтрансферазу по секреторному пути выбранной хозяйской клетки Bacillus (предпочтительно хозяйской клетки В.licheniformis). В некоторых воплощениях настоящего изобретения нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнальный пептид, может быть оперативно связана с нуклеотидной последовательностью, кодирующей выбранную липидацилтрансферазу. Выбранная липидацилтрансфераза может экспрессироваться в хозяйской клетке, как определено в данном описании, в виде слитого белка. Экспрессионный вектор. Термин "экспрессионный вектор" означает конструкцию, способную к in vivo или in vitro экспрессии. Предпочтительно, когда экспрессионный вектор встраивается в геном организма, такого как хозяйская клетка В.licheniformis. Термин "встроенный" предпочтительно охватывает стабильное встраивание в геном. Нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу, как определено в данном описании, может быть представлена в векторе, в котором нуклеотидная последовательность является оперативно связанной с регуляторными последовательностями, так, что регуляторные последовательности являются способными обеспечивать экспрессию нуклеотидной последовательности приемлемым хозяйским организмом (таким как В.licheniformis), т.е. вектор представляет собой экспрессионный вектор. Векторы в соответствии с настоящим изобретением могут быть трансформированы в хозяйскую клетку так, как описано выше, для обеспечения экспрессии полипептида, обладающего липидацилтрансферазной активностью, как определено в данном описании. Выбор вектора, например плазмиды, космиды, вирусного или фагового вектора, геномной вставки,часто зависит от хозяйской клетки, в которую он встраивается. Настоящее изобретение может охватывать разные формы экспрессионных векторов, которые служат для осуществления эквивалентных функций, которые являются известными в области техники. Трансформированный в выбранную хозяйскую клетку вектор может реплицироваться и функционировать независимо от генома хозяйской клетки или может быть интегрированным в геном сам по себе. Векторы могут содержать один или более генов селектируемых маркеров, таких как ген, который придает устойчивость к антибиотикам, например устойчивость к ампициллину, канамицину, хлорафениколу или тетрациклину. Альтернативно, селекция может осуществляться путем совместной трансформации (как описано в WO 91/17243). Векторы могут использоваться in vitro, например, для получения РНК или использоваться для трансфекции или трансформации хозяйской клетки. Вектор может дополнительно включать нуклеотидную последовательность, позволяющую вектору реплицироваться в рассматриваемой хозяйской клетке. Примеры таких последовательностей представляют собой точки начала репликации плазмид pUC19, pACYC177, pUB110, рЕ 194, pAMB1 и pIJ702. Липидацилтрансфераза. Нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения, может кодировать природную липидацилтрансферазу или вариант липидацилтрансферазы. Липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может быть природной липидацилтрансферазой или вариантом липидацилтрансферазы. Например, нуклеотидная последовательность, кодирующая липидацилтрансферазу для использования в настоящем изобретении, может быть одной из тех, что описаны в WO 2004/064537,WO 2004/064987, WO 2005/066347 или WO 2006/008508. Эти документы введены в данное описание в качестве ссылки. Термин "липидацилтрансфераза", как используется в данном описании, предпочтительно означает фермент, который обладает ацилтрансферазной активностью (который обычно классифицируется как Е.С. 2.3.1.x, например 2,3,1,43), где фермент является способным к переносу ацильной группы из липида на один или более акцепторных субстратов, таких как один или более из приведенных далее: стерин,станол; углевод; белок; белковая субъединица; сахарный спирт, такой как аскорбиновая кислота, и/или глицерин, предпочтительно глицерин и/или стерин, такой как холестерин. Предпочтительно, когда липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая является способной к переносу ацильной группы из фосфолипида (как определено в данном описании) на сахарный спирт, такой как аскорбиновая кислота, и/или глицерин, и/или стерин, предпочтительно глицерин или стерин, наиболее предпочтительно стерин (например, холестерин). В некоторых аспектах "акцептор ацила" в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой соединение, включающее гидроксигруппу (-ОН), такое как, например, поливалентные спирты, включая глицерин; стерины; станолы; углеводы; гидроксикислоты, включая фруктовые кислоты,лимонную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту и аскорбиновую кислоту; белки или их субъединицы, такие как аминокислоты, белковые гидролизаты и пептиды (частично гидролизованный белок),например; и их смеси, а также их производные. Предпочтительно, когда "акцептор ацила" в соответствии с настоящим изобретением не является водой. Акцептор ацила предпочтительно не является моноглицеридом. В одном варианте выполнения акцептор ацила может представлять собой диглицерид. В одном аспекте липидацилтрансфераза для использования в способах и/или применениях настоящего изобретения является способной переносить группу ацила из липида на стерин и/или станол. В другом аспекте липидацилтрансфераза для использования в способах и/или применениях настоящего изобретения является способной переносить группу ацила из липида на стерин и/или станол, дополнительно может переносить группу ацила из липида на одно или более из следующих соединений: углевод, белок, белковая субъединица, глицерин, жирный спирт. Предпочтительно акцептор ацила естественно может быть найден в масле. Альтернативно, акцептор ацила может быть добавлен к маслу (например, акцептор ацила может быть инородным для масла). Например, в некоторых вариантах воплощения стерин и/или станол могут быть добавлены к маслу до или в процессе рафинирования. Это особенно важно, если количество акцептора ацила является ограничивающим скорость ацилтрансферазной реакции. Добавление акцептора ацила может приводить к уменьшениям в количествах свободных жирных кислот и/или большему образованию эстера акцептора ацила в сравнении с маслом, к которому не добавляли дополнительного акцептора ацила. Предпочтительно, когда липидный субстрат, на основе которого действует липидный ацил, представляет собой один или более из следующих липидов: фосфолипид, такой как лецитин, например фосфатидилхолин и/или фосфатидилэтаноламин. Этот липидный субстрат может называться в данном описании "донор липидного ацила". Термин"лецитин", как используется в данном описании, охватывает фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин,фосфатидилинозитол, фосфатидилсерин и фосфатидилглицерин. Предпочтительные липидацилтрансферазы для применения в настоящем изобретении определяются как такие, которые имеют высокую активность, например высокую фосфолипидгидролитическую активность или высокую фосфолипид-трансферазную активность на фосфолипиды в масляной среде, наиболее предпочтительно липидацилтрансферазы для применения в настоящем изобретении имеют высокую трансферазную активность от фосфолипида до стерина. Как детально описано выше, другие ацилтрансферазы, подходящие для применения в способах данного изобретения, могут быть определены путм идентифицирования присутствия GDSX, GANDY и НРТ блоков или путм выравнивания pFam00657 консенсусной последовательности (SEQ ID No. 1) и/или выравнивания к GDSX ацилтрансферазе, например SEQ ID No. 28. Для того чтобы оценить их пригодность для рафинирования, т.е. определить те ферменты, которые имеют трансферазную активность по крайней мере 5%, более предпочтительно по крайней мере 10%, более предпочтительно по крайней мере 20%, более предпочтительно по крайней мере 30%, более предпочтительно по крайней мере 40%, более предпочтительно 50%, более предпочтительно по крайней мере 60%, более предпочтительно по крайней мере 70%, более предпочтительно по крайней мере 80%, более предпочтительно по крайней мере 90% и более предпочтительно по крайней мере 98% от общей ферментной активности, такие ацилтрансферазы тестируют, используя исследование "Протокол для определения % ацилтрансферазной активности", детально раскрытый в данном описании выше. Для некоторых аспектов является предпочтительным, когда липидацилтрансфераза для способов и применений в соответствии с настоящим изобретением представляет собой липидацилтрансферазу, которая является не способной или существенно не способной воздействовать на триглицерид, и/или 1-моноглицерид, и/или 2-моноглицерид. Для некоторых аспектов является предпочтительным, когда липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая не демонстрирует активности триацилглицеринлипазы (Е.С. 3.1.1.3) или не демонстрирует значительной активности триацилглицеринлипазы (Е.С. 3.1.1.3). Способность к гидролизу триглицерида (Е.С. 3.1.1.3 активность) может быть определена с помощью липазной активности, определяемой в соответствии с Кодексом пищевых химикатов (3-е изд., 1981,стр. 492-493), модифицированной для подсолнечного масла и рН 5,5 вместо оливкового масла и рН 6,5. Липазная активность измеряется как LUS (липазные единицы подсолнечника), где 1 LUS определяется как количество фермента, который может высвобождать 1 мкмоль жирных кислот в минуту из подсолнечного масла при указанных выше условиях анализа. Альтернативно, может использоваться LUT анализ, как определено в WO 9845453. Это упоминание введено в данное описание в качестве ссылки. Липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может быть липидацилтрансферазой, которая является существенно не способной воздействовать на триглицерид, и может иметь значение LUS/мг менее чем 1000, например менее чем 500, такое как менее чем 300, предпочтительно менее чем 200, более предпочтительно менее чем 100, более предпочтительно менее чем 50, более предпочтительно менее чем 20, более предпочтительно менее чем 10, такое как менее чем 5, менее чем 2, более предпочтительно менее чем 1 LUS/мг. Альтернативно, активностьLUT/мг является меньшей чем 500, такой как менее чем 300, предпочтительно менее чем 200, более предпочтительно менее чем 100, более предпочтительно менее чем 50, более предпочтительно менее чем 20, более предпочтительно менее чем 10, такой как менее чем 5, менее чем 2, более предпочтительно менее чем 1 LUT/мг. Липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая является существенно не способной воздействовать на моноглицерид. Это может быть определено при использовании моноолеата (М 7765 1- 16020035 олеил-rac-глицерина 99%) вместо подсолнечного масла в LUS анализе. 1 MGHU определяется как количество, которое может высвобождать 1 мкмоль жирной кислот в минуту из моноглицерида при указанных выше условиях анализа. Липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая предпочтительно является существенно не способной воздействовать на триглицерид и может иметь значение менее чем 5000, например менее чем 1000, например менее чем 500, такое как менее чем 300, предпочтительно менее чем 200, более предпочтительно менее чем 100, более предпочтительно менее чем 50, более предпочтительно менее чем 20, более предпочтительно менее чем 10, такое как менее чем 5, менее чем 2, более предпочтительно менее чем 1 MGHU/мг. Предпочтительно, когда липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая дополнительно к своей липидацилтрансферазной активности также может демонстрировать одну или более из следующих активностей фосфолипазы: активность фосфолипазы А 2 (Е.С. 3.1.1.4) и/или активность фосфолипазы A1(E.C. 3.1.1.32). Липидацилтрансфераза может также обладать активностью фосфолипазы В (Е.С 3.1.1.5). Предпочтительно для некоторых аспектов липидацилтрансфераза может быть способной к переносу группы ацила из фосфолипида на станол и/или стерин, предпочтительно холестерин. Для некоторых аспектов является предпочтительным, когда липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения кодирует липидацилтрансферазу,которая является способной к переносу группы ацила из фосфолипида на стерин и/или станол с образованием, по крайней мере, эстера стерина и/или эстера станола. Таким образом, в одном воплощении "акцептор ацила" в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой растительный стерин/станол. Предпочтительно, когда фермент липидацилтрансфераза может быть охарактеризован при использовании следующих критериев: фермент обладает ацилтрансферазной активностью, которая может быть определена как активность переноса эстера, посредством чего ацильная часть исходной связи эстера донора липидного ацила переносится на акцептор ацила, с образованием нового эстера; и фермент включает аминокислотный мотив GDSX, где X представляет собой один или более из следующих аминокислотных остатков: L, А, V, I, F, Y, Н, Q, T, N, М или S. Предпочтительно, когда X мотив GDSX представляет собой L или Y. Более предпочтительно, когдаX мотив GDSX представляет собой L. Таким образом, предпочтительно фермент в соответствии с настоящим изобретением включает аминокислотный мотив GDSL.GDSX мотив состоит из четырех консервативных аминокислот. Предпочтительно, когда серин в мотиве представляет собой серин фермента липидацилтрансферазы. Предпочтительно, когда серинGDSX мотива может находиться в положении, соответствующем Ser-16 в ферменте липидацилтрансферазы Aeromonas hydrophila, как описывается у BrumlikBuckley (Journal of Bacteriology. Apr. 1996,vol. 178, No. 7, p. 2060-2064). Для определения того, что белок имеет GDSX мотив в соответствии с настоящим изобретением, последовательность предпочтительно сравнивают с профилями скрытой марковской модели (НММ профили) базы данных pfam в соответствии с процедурами, описанными в WO 2004/064537 илиWO 2004/064987, которые введены в данное описание в качестве ссылки Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза может подвергаться выравниванию при использовании pfam00657 консенсусной последовательности (для полного объяснения см. WO 2004/064537 илиWO 2004/064987). Предпочтительно, когда позитивное соответствие профилю скрытой марковской модели (НММ профиль) семейства домена pfam00657 свидетельствует о присутствии GDSL или GDSX домена в соответствии с настоящим изобретением. Предпочтительно, когда соответствующая pfam00657 консенсусная последовательность липидацилтрансферазы для использования в способах или применениях в соответствии с изобретением будет иметь по крайней мере один, предпочтительно более чем один, предпочтительно более двух из следующих: GDSX блок, GANDY блок, НРТ блок. Предпочтительно липидацилтрансфераза может иметьGDSX блок и GANDY блок. Альтернативно, фермент может иметь GDSX блок и НРТ блок. Предпочтительно, когда фермент включает, по крайней мере, GDSX блок. См. WO 2004/064537 илиWO 2004/064987 для дополнительной информации. Предпочтительно, когда остатки GANDY мотива выбирают из GANDY, GGNDA, GGNDL, более предпочтительно GANDY. Предпочтительно, когда соответствующая pfam00657 консенсусная последовательность фермента для использования в способах или применениях в соответствии с настоящим изобретением имеет по крайней мере 1, предпочтительно более 1, предпочтительно более 2, предпочтительно более 3, предпочтительно более 4, предпочтительно более 5, предпочтительно более 6, предпочтительно более 7, предпочтительно более 8, предпочтительно более девяти, предпочтительно более 10, предпочтительно более 11, предпочтительно более 12, предпочтительно более 13, предпочтительно более 14 следующих аминокислотных остатков при сравнении со стандартной полипептидной последовательностью А.hydrophilia, в частности SEQ ID No. 1: 28hid, 29hid, 30hid, 31hid, 32gly, 33Asp, 34Ser, 35hid, 130hid, 131Gly, 132Hid,133Asn, 134Asp, 135hid, 309His. Домен pfam00657 GDSX представляет собой уникальный идентификатор, который отличает белки,обладающие этим доменом от других ферментов.pfam00657 консенсусная последовательность представлена на фиг. 3 как SEQ ID No. 2. Она получена путем идентификации pfam семейства 00657, версии базы данных 6, которая также называется какpfam00657,6 в данном описании. Консенсусная последовательность может быть обновлена при использовании последующих выпусков pfam базы данных (например, см. WO 2004/064537 или WO 2004/064987). В одном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая может быть охарактеризована при использовании следующих критериев:(i) фермент обладает ацилтрансферазной активностью, которая может быть определена как активность переноса эстера, посредством чего ацильная часть связи исходного эстера донора липидного ацила переносится на акцептор ацила с образованием нового эстера;(ii) фермент включает аминокислотный мотив GDSX, где X представляет собой один или более из следующих аминокислотных остатков: L, А, V, I, F, Y, H, Q, T, N, М или S;(iii) фермент включает His-309 или включает остаток гистидина в положении, соответствующемHis-309 в ферменте липидацилтрансферазе Aeromonas hydrophila, показанном на фиг. 2 и 4 (SEQ ID No. 1 или SEQ ID No. 3). Предпочтительно аминокислотный остаток GDSX мотива представляет собой L. В SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1 первые 18 аминокислотных остатков образуют сигнальную последовательность. His-309 последовательности полной длины, т.е. белка, включающего сигнальную последовательность, приравнивается к His-291 зрелой части белка, т.е. последовательности, не содержащей сигнальной последовательности. В одном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в любом из способов и применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая включает следующую каталитическую триаду: Ser-34, Asp-306 и His-309 или включает остаток серина, остаток аспарагиновой кислоты и остаток гистидина соответственно в положениях, соответствующих Ser-34, Asp-306 и His-309 в ферменте липидацилтрансферазы Aeromonas hydrophila, показанном на фиг. 4 (SEQ ID No. 3) или фиг. 2 (SEQ ID No. 1). Как указано выше, в последовательности, показанной в SEQ ID No. 3 илиSEQ ID No. 1, первые 18 аминокислотных остатков образуют сигнальную последовательность. Ser-34,Asp-306 и His-309 последовательности полной длины, т.е. белка, включающего сигнальную последовательность, приравнивается к Ser-16, Asp-288 и His-291 зрелой части белка, т.е. последовательности, не содержащей сигнальной последовательности. В pfam00657 консенсусной последовательности, как представлено на фиг. 3 (SEQ ID No. 2), остатки активного сайта соответствуют Ser-7, Asp-345 и His-348. В одном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая может быть охарактеризована при использовании следующих критериев: фермент обладает ацилтрансферазной активностью, которая может быть определена как активность переноса эстера, посредством чего ацильная часть исходной связи эстера первого донора липидного ацила переносится на акцептор ацила с образованием нового эстера; и фермент включает, по крайней мере, Gly-32, Asp-33, Ser-34, Asp-134 и His-309 или включает остатки глицина, аспарагиновой кислоты, серина, аспарагиновой кислоты и гистидина в положениях, соответствующих Gly-32, Asp-33, Ser-34, Asp-306 и His-309 соответственно, в ферменте липидацилтрансферазеAeromonas hydrophila, представленном в SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1. Предпочтительно, когда фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может кодироваться одной из следующих нуклеотидных последовательностей:(a) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 36 (см. фиг. 29);(b) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 38 (см. фиг. 31);(c) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 39 (см. фиг. 32);(d) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 42 (см. фиг. 35);(e) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 44 (см. фиг. 37);(f) нуклеотидная последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 46 (см. фиг. 39);(g) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 48 (см. фиг. 41);(h) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 49 (см. фиг. 57);(i) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 50 (см. фиг. 58);(j) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 51 (см. фиг. 59);(k) нуклеотидной последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 52 (см. фиг. 60);(l) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 53 (см. фиг. 61);(m) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 54 (см. фиг. 62);(n) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 55 (см. фиг. 63);(о) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 56 (см. фиг. 64);(р) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 57 (см. фиг. 65);(q) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 58 (см. фиг. 66);(r) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 59 (см. фиг. 67);(s) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 60 (см. фиг. 68);(t) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 61 (см. фиг. 69);(u) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 62 (см. фиг. 70);(v) нуклеотидной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 63 (см. фиг. 71); или(w) нуклеотидной последовательностью, которая обладает 70% или более, предпочтительно 75% или более идентичностью с одной или более последовательностей, которые представлены какSEQ ID No. 36, SEQ ID No. 38, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 46,SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53,SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59,SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62 или SEQ ID No. 63. Предпочтительно нуклеотидная последовательность может обладать 80% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более и даже более предпочтительно 95% или более идентичностью с одной или более последовательностями, которые представлены какSEQ ID No. 36, SEQ ID No. 38, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 46,SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53,SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59,SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62 или SEQ ID No. 63. В одном воплощении нуклеотидная последовательность, кодирующая фермент липидацилтрансферазу для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения, представляет собой нуклеотидную последовательность, которая обладает 70% или более, предпочтительно 75% или более идентичностью с одной или более последовательностями, представленными как SEQ ID No. 49,SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 62 и SEQ ID No. 63. Предпочтительно нуклеотидная последовательность может иметь 80% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более и даже более предпочтительно 95% или более идентичность с одной или более последовательностями, представленными как SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 62 иSEQ ID No. 63. В одном воплощении нуклеотидная последовательность, кодирующая фермент липидацилтрансферазу для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения, представляет собой нуклеотидную последовательность, которая обладает 70% или более, 75% или более, 80% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более и даже более предпочтительно 95% или более идентичностью с последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 49. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает одну или более из следующих аминокислотных последовательностей:(i) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 68;(ii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 3;(iii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 4;(iv) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 5;(v) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 6;(vi) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 7;(vii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 8;(viii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 9;(ix) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 10;(х) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 11;(xi) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 12;(xii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 13;(xiii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 14;(xiv) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 1;(xv) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 15;(xvi) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 16:(xvii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 17;(xviii) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 18;(xix) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 34;(хх) аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 35 или аминокислотную последовательность, которая обладает 75, 80, 85, 90, 95, 98% или более идентич- 19020035 ностью с одной или более последовательностями, которые представлены как SEQ ID No. 68,SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8,SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14 илиSEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 34 или SEQ ID No. 35. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает либо аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 68, или какSEQ ID No. 34, или SEQ ID No. 35, или включает аминокислотную последовательность, которая обладает 75% или более, предпочтительно 80% или более, предпочтительно 85% или более, предпочтительно 90% или более, предпочтительно 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью,которая представлена как SEQ ID No. 68, или аминокислотной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 3, или аминокислотной последовательностью, которая представлена какSEQ ID No. 4, или аминокислотной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 1, или аминокислотной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 15, или аминокислотной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 16, или аминокислотной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 34, или аминокислотной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 35. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает аминокислотную последовательность, которая обладает 80% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более и даже более предпочтительно 95% или более идентичностью с одной или более последовательностями, которые представлены как SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 3,SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10,SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15,SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 34 или SEQ ID No. 35. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает одну или более из следующих аминокислотных последовательностей:(a) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 1-100 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1;(b) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 101-200 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1;(c) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 201-300 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1; или(d) аминокислотную последовательность, которая обладает 75% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более, даже более предпочтительно 95% или более идентичностью с любой одной из аминокислотных последовательностей, определенных в (а)-(с), как указано выше. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза для использования в способах и применениях настоящего изобретения может включать одну или более из следующих аминокислотных последовательностей:(a) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 28-39 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1;(b) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 77-88 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1;(c) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 126-136 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1;(d) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 163-175 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1;(e) аминокислотную последовательность, которая представлена как аминокислотные остатки 304-311 SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 1; или(f) аминокислотную последовательность, которая обладает 75% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более, даже более предпочтительно 95% или более идентичностью с любой одной из аминокислотных последовательностей, определенных в (а)-(е), как указано выше. В одном аспекте фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая может представлять собой липидацилтрансферазу из Candida parapsilosis, описанную в ЕР 1275711. Таким образом,в одном аспекте липидацилтрансфераза для использования в способе и применениях настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, включающую одну из аминокислотных последовательностей, показанных в SEQ ID No. 17 или SEQ ID No. 18. Еще более предпочтительно когда фермент липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая может являться липидацилтрансферазой, включающей аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 16, или аминокислотную последовательность, которая обладает 75% или более, предпочтительно 85% или более, более предпочтительно 90% или более, даже более предпочтительно 95% или более, даже более предпочтительно 98% или более или даже более предпочтительно 99% или более идентичностью с SEQ ID No. 16. Такой фермент может рассматриваться в качестве варианта фермента. В одном аспекте фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая может являться лецитин:холестерин ацилтрансферазой (LCAT) или ее вариантом (например, вариантом, полученным с помощью молекулярной эволюции). Приемлемые LCAT являются известными в области техники и могут быть получены из одного или более следующих организмов, например: млекопитающих, крыс, мышей, кур, Drosophila melanogaster,растений, включая Arabidopsis и Oryza sativa, нематод, грибов и дрожжей. В одном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая может являться липидацилтрансферазой, получаемой, предпочтительно полученной, из штаммов Е.coli TOP 10, которые несут pPet12aAhydro и pPet12aASalmo, депонированных Danisco A/S,Langebrogade 1, DK-1001Copenhagen K, Denmark в соответствии с Будапештским договором о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры при Национальной коллекции промышленных, морских и пищевых бактерий (NCIMB) 23 St. Machar Street, Aberdeen Scotland, GB 22 декабря 2003 г. под депозитными номерами NCIMB 41204 и NCIMB 41205 соответственно. Фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой фосфолипид глицеринацилтрансферазу. Фосфолипид глицеринацилтрансферазы включают те, что изолированы из Aeromonas spp., предпочтительно изAeromonas hydrophila или А.salmonicida, наиболее предпочтительно из A.salmonicida или их варианты. Наиболее предпочтительно липидацилтрансферазы для использования в настоящем изобретении кодируются SEQ ID No. 1, 3, 4, 15, 16, 34 и 35. При этом специалисту в данной области техники будет понятно, что является предпочтительным, когда сигнальные пептиды ацилтрансферазы были вырезаны во время экспрессии трансферазы. Сигнальный пептид последовательностей SEQ ID No. 1, 3, 4, 15 и 16 представляет собой аминокислоты 1-18. Таким образом, наиболее предпочтительные участки представляют собой аминокислоты 19-335 для SEQ ID No. 1 и SEQ ID No. 3 (A.hydrophilia) и аминокислоты 19336 для SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 15 и SEQ ID No. 16. (A.salmonicida). При использовании для определения гомологии или идентичности аминокислотных последовательностей является предпочтительным,чтобы при выравниваниях, как описано в данном изобретении, использовалась зрелая последовательность. В одном воплощении липидацилтрансфераза для использования в настоящем изобретении предпочтительно включает (или состоит из) аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID No. 16,или включает (или состоит из) аминокислотную последовательность, которая обладает по крайней мере 70%, по крайней мере 75%, по крайней мере 85%, по крайней мере 90%, по крайней мере 95%, по крайней мере 98% идентичностью с SEQ ID No. 16. В одном воплощении липидацилтрансфераза для использования в настоящем изобретении предпочтительно кодируется нуклеотидной последовательностью, кодирующей аминокислотную последовательность, включающую (или состоящую из) аминокислотную последовательность, показанную вSEQ ID No. 68, или включающей (или состоящей из) аминокислотную последовательность, которая обладает по крайней мере 70%, по крайней мере 75%, по крайней мере 85%, по крайней мере 90%, по крайней мере 95%, по крайней мере 98% идентичностью с SEQ ID No. 68. Таким образом, наиболее предпочтительные участки для определения (идентичности) представляют собой аминокислоты 19-335 для SEQ ID No. 1 и 3 (A.hydrophilia) и аминокислоты 19-336 дляSEQ ID No. 4, 15 и 16 (A.salmonicida). Последовательности SEQ ID No. 34 и 35 представляют собой последовательности зрелого белка липидацилтрансферазы из A.hydrophilia и A.salmonicida соответственно,которые могут подвергаться или могут не подвергаться дальнейшей посттрансляционной модификации. Фермент липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая также может быть изолирована из Thermobifida, предпочтительно Т.fusca, наиболее предпочтительно ту, которая кодируетсяSEQ ID No. 28. Приемлемые липидацилтрансферазы для использования в соответствии с настоящим изобретением и/или в способах настоящего изобретения могут включать любую из следующих аминокислотных последовательностей и/или кодируются следующими нуклеотидными последовательностями:a) нуклеиновой кислотой, которая кодирует полипептид, демонстрирующий липидцилтрансферазную активность и является по крайней мере на 70% идентичным (предпочтительно по крайней мере на 80%, более предпочтительно по крайней мере на 90% идентичным) полипептидной последовательности,показанной в SEQ ID No. 16, или полипептиду, показанному в SEQ ID No. 68;b) (изолированный) полипептид, включающий (или состоящий из) аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID No. 16 или SEQ ID No. 68, или аминокислотную последовательность, которая явяется по крайней мере на 70% идентичной (предпочтительно по крайней мере на 80% идентичной,более предпочтительно по крайней мере на 90% идентичной) последовательности SEQ ID No. 16 илиc) нуклеиновой кислотой, кодирующей липидацилтрансферазу, где нуклеиновая кислота включает(или состоит из) нуклеотидную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 49, или нуклеотидную последовательность, которая является по крайней мере на 70% идентичной (предпочтительно по крайней мере на 80%, более предпочтительно по крайней мере на 90% идентичной) нуклеотидной последовательности, которая представлена как SEQ ID No. 49;d) нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется при условиях средней и высокой жесткости с образцом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 49 и кодирует полипептид, демонстрирующий липидацилтрансферазную активность;e) нуклеиновой кислотой, которая представляет собой фрагмент последовательностей нуклеиновой кислоты, указанных в а), с) или d); илиf) полипептид, который представляет собой фрагмент полипептида, указанного в b). Фермент липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая также может быть изолированной из Streptomyces, предпочтительно S.avermitis, наиболее предпочтительно такую, которая кодируется SEQ ID No. 32. Другие возможные ферменты из Streptomyces для использования в настоящем изобретении включают такие, которые кодируются последовательностями SEQ ID No. 5, 6, 9, 10, 11, 12,13, 14, 31 и 33. Фермент для использования в данном изобретении может также быть изолированным изSEQ ID No. 29. Предпочтительно фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает какую-либо из аминокислотных последовательностей, которые представлены как SEQ ID No. 37, 38,40, 41, 43, 45 или 47, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью, или может кодироваться какой-либо из нуклеотидных последовательностей, которые представлены как SEQ ID No. 36, 39, 42, 44, 46, или 48, или нуклеотидной последовательностью, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью. В одном воплощении нуклеотидная последовательность, кодирующая фермент липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения, выбирается из группы, которая состоит из:b) нуклеиновой кислоты, которая является родственной с нуклеотидной последовательностьюSEQ ID No. 36 с учетом вырожденности генетического кода;c) нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, которая обладает по крайней мере 70% идентичностью с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No. 36. В одном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения представляет собой липидацилтрансферазу, которая включает аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID No. 37, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 60% идентичностью. В дополнительном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает одну или более аминокислотных последовательностей, которые представлены какSEQ ID No. 37, 38, 40, 41, 43, 45 или 47, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью, или может кодироваться одной или более из нуклеотидных последовательностей, которые представлены как SEQ ID No. 39, 42, 44, 46 или 48, или нуклеотидной последовательностью, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85,90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью. В дополнительном воплощении фермент липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает одну из аминокислотных последовательностей, которые представлены какSEQ ID No. 38, 40, 41, 45 или 47, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью, для применений, описанных в данном изобретении. В дополнительном воплощении липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает одну из аминокислотных последовательностей, которые представлены как SEQ ID No. 38, 40 или 47, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85,90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью, для применений, описанных в данном изобретении. Более предпочтительно в одном воплощении липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу,которая включает аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 47, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96,97 или 98% идентичностью. В другом воплощении липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, включающую аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 43 или 44, или аминокислотную последовательность, которая обладает с ней по крайней мере 80, 85, 90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью. В другом воплощении липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая включает аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 41, или аминокислотную последовательность, которая обладает по крайней мере 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97 или 98% идентичностью с ней. В одном воплощении липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может кодироваться нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из:a) нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, показанную вb) нуклеиновой кислоты, которая является родственной с нуклеотидной последовательностьюSEQ ID No. 36 с учетом вырожденности генетического кода; иc) нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, которая обладает по крайней мере 70% идентичностью с нуклеотидной последовательностью, показанной в SEQ ID No. 36. В одном воплощении липидацилтрансфераза в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой липидацилтрансферазу, получаемую, предпочтительно полученную, из штаммовStreptomyces L130 или L131, депонированных Danisco A/S of Langebrogade 1, DK-1001 Copenhagen K,Denmark в соответствии с Будапештским договором о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры при Национальной коллекции промышленных, морских и пищевых бактерий (NCIMB) 23 St. Machar Street, Aberdeen Scotland, GB 25 июня 2004 г., под депозитными номерами NCIMB 41226 и NCIMB 41227 соответственно. Приемлемые нуклеотидные последовательности, кодирующие липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения, могут представлять собой полинуклеотид, кодирующий липидацилтрансферазу (SEQ ID No. 16 или SEQ ID No. 68); или могут кодировать аминокислотную последовательность липидацилтрансферазы (SEQ ID No. 16 или SEQ ID No. 68). Приемлемые липидацилтрансферазы для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения могут представлять собой аминокислотную последовательность, которая может быть идентифицирована путем выравнивания с L131 (SEQ ID No. 37) последовательностью при использовании Align X, Clustal W алгоритма попарного выравнивания Vector NTI при использовании параметров по умолчанию. Выравнивание L131 и гомологов из S.avermitilis и Т.fusca иллюстрирует, что сохранение GDSX мотива (GDSY в L131 и S.avermitilis и Т.fusca), GANDY блока, который представляет собой либо GGNDA,либо GGNDL, и НРТ блока (считается консервативным каталитическим гистидином). Эти три консервативных блока являются выделенными на фиг. 42. При выравнивании или с pfam pfam00657 консенсусной последовательностью (как описано вWO 04/064987) и/или с L131 последовательностью, раскрытой в данном описании (SEQ ID No. 37), является возможным идентифицировать три консервативных участка, GDSX блок, GANDY блок и НТР блок(см. WO 04/064987 для дополнительной информации). При выравнивании или с pfam pfam00657 консенсусной последовательностью (как описано вi) липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая содержит GDSX мотив, более предпочтительно GDSX мотив, выбранный из GDSL или GDSY мотива; и/илиii) липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая содержит GANDY блок, более предпочтительно GANDY блок, включающий амино GGNDx, более предпочтительно GGNDA илиiii) липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая содержит предпочтительно НТР блок; предпочтительноiv) липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая содержит предпочтительноGGNDL, и НТР блок (консервативный гистидин). В одном варианте выполнения фермент в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно не является ферментом фосфолипазой, таким как фосфолипаза А 1, классифицированная как Е.С. 3.1.1.32, или фосфолипаза А 2, классифицированная как Е.С. 3.1.1.4. Вариант липидацилтрансферазы. В предпочтительном воплощении нуклеотидная последовательность,кодирующая липидацилтрансферазу для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения, может кодировать липидацилтрансферазу, которая представляет собой вариант липидацилтрансферазы. Могут использоваться варианты, которые обладают повышенной активностью по отношению к фосфолипидам, такой как повышенная гидролитическая активность и/или повышенная трансферазная активность, предпочтительно повышенная трансферазная активность по отношению к фосфолипидам. Предпочтительно вариант липидацилтрансферазы получают с помощью одной или более модификаций аминокислот липидацилтрансфераз, как определено в данном описании выше. Предпочтительно липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой липидацилтрансферазу, которая может быть вариантом липидацилтрансферазы, в случае чего фермент может быть охарактеризован тем, что фермент включает аминокислотный мотив GDSX, в данном описании X представляет собой один или более из следующих аминокислотных остатков: L, А, V, I, F, Y, H, Q, T, N, М или S, и в данном описании вариант фермента включает одну или более модификаций аминокислот по сравнению с исходной последовательностью в каком-либо одном или более аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7 (как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже). Например, вариант липидацилтрансферазы может быть охарактеризован тем, что фермент включает аминокислотный мотив GDSX, в данном описании X, который представляет собой один или более из следующих аминокислотных остатков: L, А, V, I, F, Y, H, Q, T, N, М или S, и в данном описании вариант фермента включает одну или более модификаций аминокислот по сравнению с исходной последовательностью в каком-либо одном или более аминокислотных остатках, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7 (как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже), идентифицированном с помощью указанной исходной аминокислотной последовательности, являющейся структурно выровненной со структурной моделью Р 10480, определенной в данном описании, которая является предпочтительно полученной с помощью структурного выравнивания Р 10480 координат кристаллической структуры с 1IVN.PDB и/или 1DEO.PDB, как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже. В дополнительном воплощении липидацилтрансфераза для использования в одном из способов и/или применений настоящего изобретения может представлять собой вариант липидацилтрансферазы,который может быть охарактеризован тем, что фермент включает аминокислотный мотив GDSX, в данном описании X представляет собой один или более из следующих аминокислотных остатков: L, А, V, I,F, Y, H, Q, Т, N, M или S, и в данном описании вариант фермента включает одну или более модификаций аминокислот по сравнению с исходной последовательностью в каком-либо одном или более аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, идентифицированном тогда, когда указанная исходная последовательность является выровненной с pfam консенсусной последовательностью (SEQ ID No. 2,фиг. 3) и модифицированной в соответствии со структурной моделью Р 10480 для обеспечения наибольшего соответствия перекрывания, как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже. Предпочтительно липидацилтрансфераза для использования в любом из способов или применений настоящего изобретения может представлять собой вариант фермента липидацилтрансферазы, который может включать аминокислотную последовательность, где аминокислотная последовательность представляет собой такую, которая представлена как SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 34,SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9,SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1,SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29,SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 или SEQ ID No. 35, за исключением одной или более модификаций аминокислот в одном или более аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7 (как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже),идентифицированном с помощью выравнивания последовательности с SEQ ID No. 34. Альтернативно, липидацилтрансфераза может представлять собой вариант фермента липидацилтрансферазы, включающий аминокислотную последовательность, где аминокислотная после- 24020035 довательность представляет собой такую, которая представлена как SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3,SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10,SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15,SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30,SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33 или SEQ ID No. 35, за исключением одной или более модификаций аминокислот в одном или более аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7, как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже, идентифицированном с помощью структурного выравнивания указанной исходной последовательности со структурной моделью Р 10480, определенной в данном описании, которая является предпочтительно полученной с помощью структурного выравнивания координат кристаллической структуры Р 10480 с 1IVN.PDB и/или 1DEO.PDB, как описывается в WO 2005/066347 и в данном описании ниже. Альтернативно, липидацилтрансфераза может представлять собой вариант фермента липидацилтрансферазы, включающий аминокислотную последовательность, где аминокислотная последовательность представляет собой такую, которая представлена как SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3,SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10,SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15,SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30,SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 68 или SEQ ID No. 35, за исключением одной или более модификаций аминокислот в одном или более аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, идентифицированном тогда, когда указанная исходная последовательность выравнивается с pfam консенсусной последовательностью (SEQ ID No. 2) и модифицируется в соответствии со структурной моделью Р 10480 для обеспечения наибольшего соответствия перекрывания, как определено вWO 2005/066347 и в данном описании ниже. Предпочтительно исходный фермент представляет собой фермент, который включает или является гомологичным, аминокислотную последовательность, которая представлена как SEQ ID No. 34 и/илиSEQ ID No. 15 и/или SEQ ID No. 35. Предпочтительно липидацилтрансфераза может представлять собой вариант фермента, который включает аминокислотную последовательность, где аминокислотная последовательность представляет собой такую, которая представлена как SEQ ID No. 34 или SEQ ID No. 35, за исключением одной или более модификаций аминокислот в любом одном или более аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7, как определено в WO 2005/066347 и в данном описании ниже. Определение наборов. Аминокислотный набор 1. Аминокислотный набор 1 (примечание: эти аминокислоты представляют собой таковые в 1IVN фиг. 53 и 54): Высококонсервативные мотивы, такие как GDSX и каталитические остатки, отсеивали из набора 1(остатки подчеркнуты). Во избежание сомнений, набор 1 определяет аминокислотные остатки в пределах 10 центрального атома углерода глицерина в активном сайте 1IVN модели. Аминокислотный набор 2. Аминокислотный набор 2 (примечание: нумерация аминокислот относится к аминокислотам в зрелой последовательности Р 10480): Таблица выбранных из набора 1 остатков по сравнению с набором 2. Аминокислотный набор 3. Аминокислотный набор 3 является идентичным набору 2, но относится к кодирующей последовательности Aeromonas salmonicida (SEQ ID No. 4), т.е. номера аминокислотных остатков являются на 18 выше в наборе 3, поскольку это отражает отличие между нумерацией аминокислот в зрелом белке(SEQ ID No. 34) по сравнению с белком, включающим сигнальную последовательность (SEQ ID No. 25). Зрелые белки Aeromonas salmonicida GDSX (SEQ ID No. 4) и Aeromonas hydrophila GDSX(SEQ ID No. 34) отличаются пятью аминокислотами. Таковые представляют собой Thr3Ser, Gln182Lys,Glu309Ala, Ser310Asn и Gly318-, где salmonicida остаток указывается первым, a hydrophila остаток указывается последним. Белок hydrophila имеет длину только 317 аминокислот и не содержит остатка в положении 318. Aeromonas salmonicida GDSX имеет в значительной степени более высокую активность на полярных липидах, таких как субстраты на основе галактолипида, чем белок Aeromonas hydrophila. Сканирование сайтов осуществляли во всех пяти аминокислотных положениях. Аминокислотный набор 4. Аминокислотный набор 4 представляет собой S3, Q182, Е 309, S310 и -318. Аминокислотный набор 5:(SEQ ID No. 25) - соответствующие аминокислоты в других каркасных последовательностях могут быть определены с помощью гомологичного выравнивания и/или структурного выравнивания до Р 10480 и/или 1IVN. Аминокислотный набор 7. Аминокислотный набор 7 представляет собой(где X является выбранным из А, С, D, E, G, Н, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, Т, V или W), Y226X (где X является выбранным из А, С, D, E, G, Н, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, Т, V или W), Y230X (где X является выбранным из А, С, D, E, G, Н, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, Т, V или W), S18 Х (где X является выбранным из А,С, D, E, F, Н, I, К, L, M, N, P, Q, R, T, W или Y), D157X (где X является выбранным из А, С, Е, F, G, Н, I,K, L, M, P, Q, R, S, Т, V, W или Y). Нумерация аминокислот в наборе 6 относится к аминокислотным остаткам в Р 10480(SEQ ID No. 25) - соответствующие аминокислоты в других каркасных последовательностях могут быть определены с помощью гомологичного выравнивания и/или структурного выравнивания до Р 10480 и/или 1IVN. Предпочтительно вариант фермента включает одну или более из следующих модификаций аминокислот по сравнению с исходным ферментом:-318Y, Н, S или Y, предпочтительно Y. Предпочтительно X GDSX мотив представляет собой L. Таким образом, предпочтительно исходный фермент включает аминокислотный мотив GDSL. Предпочтительно указанная первая исходная липидацилтрансфераза может включать любую из следующих аминокислотных последовательностей: SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4,SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11,SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 25,SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 32,SEQ ID No. 33 или SEQ ID No. 35. Предпочтительно указанная вторая родственная липидацилтрансфераза может включать любую из следующих аминокислотных последовательностей: SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 4,SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11,SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 25,SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 32,SEQ ID No. 33 или SEQ ID No. 35. Вариант фермента должен включать по крайней мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с исходным ферментом. В некоторых воплощениях вариант фермента может включать по крайней мере 2, предпочтительно по крайней мере 3, предпочтительно по крайней мере 4, предпочтительно по крайней мере 5, предпочтительно по крайней мере 6, предпочтительно по крайней мере 7, предпочтительно по крайней мере 8, предпочтительно по крайней мере 9, предпочтительно по крайней мере 10 модификаций аминокислот по сравнению с исходным ферментом. При ссылке на специфические аминокислотные остатки в данном описании представляет собой такую, полученную из выравнивания вариантной последовательности со стандартной последовательностью, которая представлена как SEQ ID No. 34 или SEQ ID No. 35. В одном аспекте вариант фермента предпочтительно включает одну или более из следующих замен аминокислот: В дополнение к этому или альтернативно к этому, может существовать одно или более Стерминальных удлинений. Предпочтительно, когда дополнительное С-терминальное удлинение состоит из одной или более алифатических аминокислот, предпочтительно полярной аминокислоты, более предпочтительно I, L, V или G. Таким образом, настоящее изобретение дополнительно обеспечивает вариант фермента, включающий одно или более из следующих С-терминальных удлинений: 318I, 318L, 318V,318G. Предпочтительные варианты ферментов могут обладать сниженной гидролитической активностью в отношении фосфолипида, такого как фосфатидилхолин (ФХ), они могут также обладать повышенной трансферазной активностью из фосфолипида. Предпочтительные варианты ферментов могут обладать трансферазной активностью из фосфолипида, такого как фосфатидилхолин (ФХ), таковые могут также обладать повышенной гидролитической активностью в отношении фосфолипида. Модификация одного или более из следующих остатков может приводить к получению варианта фермента, обладающего повышенной абсолютной трансферазной активностью против фосфолипида:S3, D157, S310, E309, Y179, N215, K22, Q289, M23, H180, M209, L210, R211, Р 81, V112, N80, L82,N88, N87. Специфические предпочтительные модификации, которые могут обеспечивать вариант фермента,обладающего улучшенной трансферазной активностью из фосфолипида, могут быть выбраны из одного или более из следующих: