Векторы и конструкции для доставки гриппозного антигена

ВЕКТОРЫ И КОНСТРУКЦИИ ДЛЯ ДОСТАВКИ ГРИППОЗНОГО АНТИГЕНА Изобретение относится к фторуглеродным векторам для доставки гриппозных антигенов к иммунологически реактивным клеткам-мишеням. Оно относится также к конструкциям "векторгриппозный антиген" и к применению указанных векторов, связанных с антигенами, в качестве вакцин и иммунотерапевтических агентов у животных, включая людей. Уровень техники Грипп представляет собой родовое название, обозначающее заболевания или инфекции, вызванные вирусом гриппа. Вирусы гриппа являются членами семейства вирусов Orthomyxoviridae и включают в себя два рода: вирусы гриппа А и В и вирус гриппа С. Вирусы гриппа А, В и С различают на основании их внутреннего нуклеопротеина и белков матрикса, которые являются специфичными для каждого вирусного типа. Вирусы гриппа А в естественных условиях способны инфицировать ряд видов животных,включая людей, свиней, птиц, тюленей и лошадей. Вирусы гриппа В, однако, инфицируют только людей,в то время как вирус гриппа С инфицирует людей и свиней. Вирусы гриппа А дополнительно классифицируют на подтипы, которые определяются антигенностью поверхностных гликопротеинов, гемагглютинина (Н) и нейраминидазы (N). Исторически, гриппозные А инфекции человека вызывались тремя подтипами гемагглютинина (H1,H2 и Н 3) и двумя подтипами нейраминидазы (N1 и N2); позднее сообщалось также о заражении людей подтипами Н 5, Н 7 и Н 9, которые ранее инфицировали только птиц. К настоящему времени идентифицировано всего 16 различающихся по гемагглютинину и 9 различающихся по нейраминидазе подтипов вируса гриппа А; все они превалируют у птиц. Свиньи и лошади, как и люди, ограничиваются гораздо более узким рядом подтипов. Вирионы гриппа А и В являются плейоморфными по своей структуре; сферические экземпляры имеют диаметр 80-120 нм, в то время как нитчатые формы могут иметь длину до 300 нм. На каждой частице имеется приблизительно 500 выступающих над поверхностью гликопротеинов (обычно в соотношении от 4 до 5 белков гемагглютининов на одну нейраминидазу), которые закреплены в полученной от хозяина липидной двухслойной мембране. Внутри мембраны имеет место белок трансмембранного ионного канала М 2, в то время как структурный белок M1 располагается под двойным слоем. Внутри ядра вируса одноцепочечная отрицательная смысловая РНК связана с шестью другими вирусными белками,экспрессированными из его генома: нуклеопротеином (NP), тремя транскриптазами (РВ 2, РВ 1 и РА) и двумя неструктурными белками (NS1 и NS2). Геном вируса гриппа состоит из восьми сегментов; черта,которая делает возможной повторную классификацию после перестановки генов. Гемагглютинин делает возможным связывание вируса с рецепторами клетки-хозяина и облегчает проникновение вируса в клетку, где он будет реплицироваться. Белок нейраминидаза ферментативно расщепляет терминальные остатки сиаловой кислоты и, как полагают, помогает транспорту вируса через муциновый слой, а также облегчает отпочковывание вируса-потомка от клетки-хозяина. Вирусы гриппа С, которые представляют собой намного меньший риск для здоровья людей, обладают единственным поверхностным белком, который сочетает в себе активность гемагглютинина, активность слияния и активность разрушения рецепторов. В силу склонности фермента РНК-полимеразы к ошибкам как белок гемагглютинин, так и белок нейраминидаза вируса гриппа подвержены точечным мутациям, которые необязательно влияют на способность вируса к репликации. Подобная мутация (или совпадающие мутации) на одном из сайтов, распознаваемых антительным ответом хозяина, может привести к неспособности антитела хозяина, индуцированного вакцинацией или предыдущей инфекцией, эффективно связываться с "новым" штаммом вируса, что позволяет инфекции персистировать. Поскольку штаммы вируса гриппа человека эволюционируют посредством указанных точечных мутаций, вирус способен избегать ограниченного антительного репертуара иммунного ответа человека и вызывать эпидемии. Регулярные "сезонные" вспышки гриппозных инфекций, таким образом, вызываются циркулирующими в популяции штаммами, претерпевающими антигенный дрейф. Во время сезонных эпидемий грипп может быстро распространяться по всему миру и наносить значительный экономический ущерб с точки зрения затрат лечебных учреждений и других расходов на здравоохранение и снижения производительности труда. Вирус передается с каплями по воздуху от человека к человеку и нацелен на эпителиальные клетки трахеи и бронхов верхних дыхательных путей. Вирус гриппа может быть также перенесен в рот с контаминированных поверхностей. Заболевание распространяется очень быстро, особенно в условиях большого скопления людей, через кашель и чихание. Стабильности вируса благоприятствует низкая относительная влажность и низкие температуры, и, как следствие, сезонные эпидемии в зонах с умеренным климатом имеют тенденцию возникать зимой. Более высокая заболеваемость и смертность наблюдается при инфицировании штаммами вируса гриппа А; грипп В обычно связан с более низкими коэффициентами заболеваемости и более мягким течением заболевания. Время от времени, однако, вирус гриппа В может вызывать эпидемии такой же тяжести, как и вирусы типа А. Вирус гриппа В представляет собой, главным образом, патоген, поражающий детей,обычно не демонстрирует такую же степень антигенной вариации, как тип А. Типичная неосложненная гриппозная инфекция характеризуется быстрым началом заболевания(головная боль, кашель, озноб) с последующей лихорадкой, болями в горле, значительными миалгиями,недомоганием и потерей аппетита. Другие симптомы включают в себя ринорею, заложенность в груди и глазные симптомы. Наиболее заметным признаком инфекции является лихорадка, которая обычно находится в пределах температуры 38-40 С. В то время как большинство людей выздоравливает от гриппозной инфекции в течение 1-2 недель без какого бы то ни было лечения, для некоторых членов популяции заболевание может представлять собой серьезный риск. В число указанных лиц входят очень молодые люди, люди старшего возраста и люди, страдающие такими заболеваниями, как болезни легких, диабет,рак, проблемы с почками или сердцем. В указанной популяции риска инфекция может вызывать тяжелые осложнения сопутствующих заболеваний, бактериальную пневмонию (вызываемую респираторными патогенами, такими как Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenzae и Staphylococcus aureus) и смерть. Клинические признаки гриппозной инфекции сходны с признаками у детей, хотя температура может быть выше и могут наблюдать фебрильные судороги. Кроме того, у детей чаще наблюдается рвота и боль в животе, а также средний отит, круп и миозит. По оценке Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) при ежегодной эпидемии гриппа 5-15% популяции имеет инфекции верхних дыхательных путей. Госпитализации и смерти наблюдаются в группах высокого риска (лица старшего возраста и лица с хроническими болезнями). Несмотря на трудности оценки, полагают, что указанные ежегодные эпидемии приводят к 3-5 млн случаев тяжелого заболевания и приблизительно к 250000-500000 смертей каждый год во всем мире. Свыше 90% смертей в настоящее время, связанных с гриппом в развитых странах, наблюдаются среди лиц старше 65 лет. В США, по оценке CDC, более 200000 человек в среднем госпитализируются каждый год вследствие осложнений,возникающих в связи с сезонной гриппозной инфекцией, и документируется превышение смертности приблизительно 36000. Иммунный ответ хозяина, который контролирует выздоровление от гриппозной инфекции, осуществляется посредством комбинации сывороточных антител, нацеленных на поверхностные белки, секреторных IgA антител слизистых оболочек и клеточно-опосредованных иммунных реакций. Приблизительно через 1-2 недели после первичной инфекции в сыворотке выявляют нейтрализующие, ингибирующие гемагглютинацию (HAI) антитела, а также антитела против нейраминидазы, содержание которых достигает пика приблизительно на 3-4 неделе. После реинфекции антительный ответ появляется быстрее. Антитела против вируса гриппа могут персистировать в течение месяцев и лет, хотя в некоторых группах риска уровни антител могут начать снижаться в течение нескольких месяцев после вакцинации. Секреторные IgA антитела достигают пика приблизительно через 14 дней после инфекции и могут выявляться в слюне, назальном секрете, мокроте и смывах из трахеи. Предваряя появление антителопродуцирующих клеток, появляются цитотоксические Т-лимфоциты со специфичностью в отношении вируса гриппа и служат для ограничения инфекции путем уменьшения максимальной вирусной нагрузки, в то же время опосредуя более быстрый клиренс вируса через индукцию антивирусных цитокинов и лизис инфицированных клеток. Помимо этого, мононуклеарные клетки инфильтрируют инфицированные дыхательные пути, обеспечивая антитело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность в отношении клеток, инфицированных вирусом гриппа. К настоящему времени подходы к вакцинированию против респираторных вирусных инфекций, таких как грипп, основываются, главным образом, на индукции антител, которые защищают от вирусной инфекции путем нейтрализации вирионов или блокирования проникновения вируса в клетки. Указанные гуморальные иммунные реакции нацелены на наружные вирусные поверхностные белки, которые являются эволюционно стабильными для данного штамма. Опосредованная антителами защита, таким образом, является эффективной в отношении гомологичных вирусных штаммов, но неадекватной против гетерологичных штаммов, имеющих серологически отличающиеся поверхностные белки. Указанные различия имеют значение, поскольку поверхностные белки многих вирусов способны быстро мутировать; например вакцина, основанная на эффективном гуморальном ответе, против одной формы вируса гриппа, может быть неэффективной против варианта следующего сезона. В настоящее время имеются два основных типа лицензированных вакцин против гриппа. Одна группа вакцин содержит гемагглютининовые и нейраминидазные поверхностные белки вируса в качестве активных иммуногенов. Она включает в себя вакцины из цельного инактивированного вируса, вакцины из расщепленного вируса, содержащие вирусные частицы, разрушенные обработкой детергентами,вакцины из субъединиц, содержащие практически очищенные поверхностные белки, из которых были удалены другие компоненты вируса, и виросомы, в которых поверхностные белки представлены на липосомальной поверхности. Вторая группа включает в себя живые аттенуированные, адаптированные к холоду штаммы вируса. Для всех указанных вакцин требуется смесь поверхностных антигенов обычно от трех или четырех штаммов вируса; имеющиеся в настоящее время в продаже вакцины против гриппа содержат антигены от двух подтипов вируса A, H3N2 и H1N1, и одного вируса типа В. Каждый год, в сентябре и феврале соответственно, Глобальная программа ВОЗ по гриппу рекомендует композицию вакцины против гриппа для следующего сезона, который обычно начинается в мае-июне в южном полушарии и в ноябре-декабре в северном полушарии. Композиция основывается на данных наблюдения из всемирной сети национальных центров гриппа и сотрудничающих с ВОЗ центров и предпринимает попытку охватить вероятные штаммы, которые должны будут циркулировать девятью месяцами позже. По указанной причине производителей обязывают изменять состав противогриппозной вакцины на ежегодной основе, чтобы гарантировать точное совпадение с циркулирующими вирусными штаммами. Большинство инактивированных противогриппозных вакцин вводят внутримышечно в дельтовидную мышцу, за исключением детей, для которых рекомендуется переднебоковая поверхность бедра. Од-2 018765 нократная доза один раз в год является подходящей, за исключением ранее в нем вакцинированных детей дошкольного возраста с ранее существовавшими медицинскими состояниями, которые должны получать две дозы с интервалом по меньшей мере 1 месяц. Живая аттенуированная противогриппозная вакцина(LAIV) вводится интраназально. Последняя была доступна в России в течение ряда лет и недавно лицензирована для применения в США в педиатрических популяциях. Указанные вакцины способны вызывать локальные антительные и клеточно-опосредованные иммунные ответы на поверхности назального эпителия. Живая аттенуированная противогриппозная вакцина, однако, не лицензирована для применения в США в популяциях людей старшего возраста (старше 50 лет). Для повышения широты и интенсивности иммунного ответа на поверхностные белки вируса гриппа оценивались различные адъюванты и альтернативные иммунопотенцирующие агенты для включения в состав вакцины. В данном контексте адъювант представляет собой агент, который способен модулировать иммунный ответ, направленный на совместно введенный антиген, в то же время не оказывающий или оказывающий незначительные прямые эффекты при введении в отдельности. Недавние лицензированные разработки в области противогриппозных вакцин включают в себя MF-59, субмикронную эмульсию типа "масло в воде". Адъюванты, содержащие алюминий, также используются некоторыми производителями. Назначением указанных адъювантов является усиление сывороточного антительного ответа на введенные антигены. При условии хорошего антигенного соответствия между вакцинными штаммами и штаммами, циркулирующими в общей популяции, инактивированные противогриппозные вакцины предотвращают лабораторно подтвержденное заболевание приблизительно у 70-90% здоровых взрослых людей. ОднакоCDC подчеркивает, что эффективность вакцины у людей старшего возраста (старше 65 лет) может быть всего 30-40%. Указанному аспекту соответствует наблюдение, касающееся того, что старение у людей вызывает дефекты памяти Т-клеточных ответов, что снижает эффективность вакцин и повышает риск естественного инфицирования. Кроме того, клинические испытания на группе лиц показали, что клеточно-опосредованный иммунитет, а не гуморальный иммунитет, коррелировал с защитой от заболевания гриппом в группе людей старше 60 лет. Помимо этого, коэффициенты эффективности значительно снижаются, если вакцинный штамм антигенно отличается от циркулирующих штаммов. Исследования антигенных вариаций показали, что четыре или более аминокислотных замещений по меньшей мере в двух антигенных сайтах гемагглютинина вируса гриппа А приводят к дрейфовому варианту, достаточно отличающемуся, чтобы подорвать эффективность вакцины (Jin H., Zhou H., Liu H., Chan W., Adhilary L., Mahmood K. et al., "Two residues in hemagglutinin of A/Fujian/411/02-like influenza viruses are responsible for antigenic drift fromA/Panama/2007/99". Virology, 2005; 336:113-9). В случае контролируемого исследования с участием взрослых людей в возрасте 50-64 года с лабораторно подтвержденным гриппом в течение сезона 2003-2004 гг., когда вакцина и циркулирующие штаммы A/H3N2 не совпадали должным образом, эффективность вакцины оценивали как 52% среди взрослых индивидуумов и 38% среди индивидуумов, имеющих одно или более состояний высокого риска, согласно CDC. Вероятность несовпадения ограниченным окном для возможностей производителей; время от подтверждения штамма, через продукцию посевов, производство и очистку антигена и трехкратное смешивание и упаковку продукта, обычно должно занимать менее шести месяцев. Время от времени в популяции появляется новый штамм вируса гриппа, обладающий высокой патогенностью и антигенной новизной, что приводит к возникновению всемирной пандемии. Пандемический грипп является результатом антигенного сдвига в поверхностных белках и представляет серьезную угрозу глобальному здоровью, поскольку у индивидуумов нет развившегося ранее иммунитета. Пандемические штаммы характеризуются внезапным появлением в популяции и антигенной новизной. В течение двадцатого столетия наблюдалось четыре пандемии: в 1918 г. причинным штаммом был H1N1, в 1957 г. - H2N2, в 1968 г. - H3N2 и в 1977 г. - H1N1. Существуют три альтернативных объяснения возникновения антигенного сдвига. Во-первых, поскольку геном вируса гриппа сегментирован, возможен обмен генами между двумя штаммами вируса гриппа после совместной инфекции одного хозяина, например свиньи, что приводит к конструкции способного к репликации потомка, несущего генетическую информацию разных родительских вирусов. Указанный процесс, известный как генетический реассортимент, как полагают, являлся причиной пандемий 1957 и 1968 гг. Пандемия 1968 г. возникла, когда ген гемагглютинина Н 3 и один другой внутренний ген от донора-птицы реассортировались с нейраминидазой N2 и пятью остальными генами из человеческого штамма H2N2, который находился в циркуляции. Во-вторых, штамм вируса нечеловеческого гриппа приобретает способность инфицировать людей. Пандемия 1918 г. возникла, когда штамм вируса птичьего гриппа H1N1 мутировал и приобрел способность быстрой и эффективной передачи от человека к человеку. В-третьих, штамм, который ранее вызывал эпидемию, может остаться секвестрированным и неизмененных в человеческой популяции. В 1977 г. пандемический штамм H1N1, например, был практически идентичен штамму, который вызвал эпидемию за 27 лет до этого, и не выявлялся в резервуаре человека и животных в течение указанного промежутка времени. Пандемия гриппа угрожает, если имеются три главных критерия. 1. Появляется (или повторно появляется) вирус гриппа подтипа НА, не наблюдавшийся в человеческой популяции в течение по меньшей мере одного поколения. 2. Вирус эффективно инфицирует и реплицируется в организме человека, вызывая значительное заболевание. 3. Вирус легко и устойчиво передается от человека к человеку. Глобальные эпидемии могут поражать от 20 до 40% мировой популяции в течение одного года. Пандемия 1918-1919 гг., например, поразила 200 млн человек, причем во всем мире погибло более 30 млн человек. В Соединенных Штатах умерло более полумиллиона человек, что составляло 0,5% населения. Несмотря на то что здравоохранение с тех пор резко улучшилось, благодаря разработке вакцин и противовирусных лекарственных средств, по оценке CDC, современная пандемия приведет к смерти от 2 до 7 млн человек во всем мире. С 1999 г. три различных подтипа штаммов вируса гриппа (H5N1, H7N7 и H9N2) скрестились от птичьих видов на людей; все они приводят к смертности людей. 14 августа 2007 г. было зафиксировано в целом 320 случаев заражения людей высокопатогенным вирусом птичьего гриппа H5N1 (HPAIV); умерло 193 человека. В отличие от обычного сезонного гриппа, когда инфекция вызывает лишь легкие респираторные симптомы у наиболее здоровых людей, заболевание, вызванное H5N1, имеет необычно агрессивное клиническое течение, с быстрым ухудшением и высокой смертностью. Распространенными являются первичная вирусная пневмония и полиорганная недостаточность. Важно, что большинство случаев наблюдалось среди ранее здоровых детей и молодых людей в возрасте от 18 лет до 21 года. Инкубационный период H5N1 HPAIV до появления симптомов является более длительным, чем у других вирусов гриппа человека, в некоторых случаях - до восьми дней. В случаях внутрисемейных групп время между заболеваниями обычно варьировало от 2 до 5 дней, но также имелось сообщение о 17 днях. Первоначальные симптомы H5N1 HPAIV, чаще всего, включают в себя диарею и могут появляться за целую неделю до респираторных симптомов. Указанный признак в комбинации с выявлением вирусной РНК в анализах кала предполагает, что вирус может размножаться в желудочно-кишечном тракте. Симптомы со стороны нижних отделов дыхательных путей, такие как дыхательная недостаточность, появляются рано, в то время как симптомы со стороны верхних отделов дыхательных путей, такие как ринорея, встречаются реже. В настоящее время H5N1 HPAIV отвечает двум из условий пандемии; гемагглютинин Н 5 представляет собой новый для людей антиген. Ни у кого не будет иммунитета, если возникнет H5N1-подобный пандемический вирус. Помимо этого, вирус инфицировал более 300 человек, при кажущемся коэффициенте смертности свыше 60%. Все предпосылки для начала пандемии, таким образом, имеют место, за исключением одной: установления эффективной и устойчивой передачи вируса от человека к человеку. Существует риск, что вирус H5N1 приобретет указанную способность и будет персистировать до тех пор, пока имеются возможности для инфицирования людей. Это, как полагают, является реалистичной возможностью или посредством скачкообразной мутации, или посредством реассортимента с адаптированным к человеку штаммом. С точки зрения науки, одно или более изменений в вирусном фенотипе являются необходимыми,чтобы вирусный штамм мог приобрести легкую передачу от человека к человеку и стать пандемическим. Однако ряд недавних наблюдений, включая специфические мутации, обнаруженные в недавних изолятах от людей в Турции, возрастающая патогенность циркулирующего вируса для млекопитающих, расширение круга хозяев H5N1 HPAIV до других млекопитающих, таких как тигры и кошки, которые, как полагали ранее, являются резистентными к инфекции вирусами птичьего гриппа, показывают, что вирусH5N1 продолжает развивать способности, которые, в конечном итоге, могут облегчить передачу от человека к человеку. Другие вирусы гриппа, обладающие, возможно, еще большим пандемическим потенциалом, также могут появиться. Указанные вирусы включают в себя ряд вирусных штаммов Н 9 и Н 7, которые в последние годы также передавались людям. Вирусы Н 9 в настоящее время являются эндемичными среди домашней птицы в Азии и также эффективно перекрещиваются с популяциями свиней в юго-восточном и восточном Китае. Вызывает озабоченность тот факт, что штаммы H9N2 имеют типичную, сходную с человеческой, специфичность рецепторов и широкий круг хозяев. В начале 2003 г. вспышка H7N7 HPAIV среди домашней птицы была зафиксирована в Нидерландах. Передача вируса H7N7 от птицы к человеку наблюдалась по меньшей мере в 82 случаях. Конъюнктивит представлял собой наиболее распространенный симптом заболевания у людей, инфицированных штаммом Н 7, и только в семи случаях наблюдалось типичное гриппоподобное заболевание. Вирус не оказался высокопатогенным для людей, и имел место лишь один смертельный случай. Другими вирусами с пандемическим потенциалом являются вирусы подтипа Н 2, поскольку в прошлом он представлял собой пандемический вирус, а также Н 6, поскольку он часто встречается у различных видов птиц в Азии и Северной Америке. Это показывает, что угроза новой пандемии гриппа среди людей не связана однозначным образом с появлением HPAIV H5N1. Для того чтобы подготовиться к пандемии гриппа, был проведен ряд клинических испытаний с вакцинами-кандидатами против гриппа H5N1. Испытания постоянно показывают, что, для того чтобы вырабатывался потенциально защищающий сывороточный антительный ответ, требуется множество доз, содержащих или намного большее количество антигена, чем обычно используется в сезонной вакцине, или включение в их состав адъюванта. Это является прямым отражением иммунологической "наивности" популяции в отношении гемагглютинина Н 5. К настоящему моменту единственными опциями для вакцины против пандемического гриппа являются, таким образом, или вакцины с очень высоким содержанием НА, что будет очень жестко ограничивать количество доз, которые можно изготовить, или применение адъюванта, который в настоящее время не лицензирован в большинстве стран. Следует понимать также, что для изготовления вакцины, которая соответствует пандемическому штамму, потребуется много месяцев с момента его первого выделения от людей; резервная вакцина, изготовленная заблаговременно, до возникновения пандемии, не будет, наиболее вероятно, антигенно идентичной и, следовательно, будет обеспечивать лишь ограниченную защиту, если вообще будет обеспечивать. Свидетельства антигенного дрейфа уже очевидны в самых последних вспышках H5N1. Если суммировать, имеет место четкое требование к вакцинам как против сезонного, так и против пандемического гриппа, которые следует улучшить. 1. Существуют очевидные ограничения их эффективности, в частности, у непримированных индивидуумов. Это вызывает особую озабоченность, если принимать во внимание перспективы пандемии гриппа, возникающие в результате антигенного дрейфа. 2. Зависимость от способности точно прогнозировать штаммы вируса гриппа, которые, по всей вероятности, будут циркулировать в следующих осенне-зимних сезонах. Несовпадение между вакцинными штаммами и штаммами, в реальности вызывающими инфекции, сделает значительную часть популяции уязвимой для гриппа. 3. Необходимость ревакцинации групп риска на ежегодной основе, поскольку вирус претерпевает антигенный дрейф. 4. Ограниченность производственных мощностей, поскольку во всем мире существует лишь ограниченное количество заводов, производящих биологические препараты. 5. Защита, предоставленная старшей возрастной группе, ограничена обычными вакцинами. Улучшенный класс вакцин против гриппа должен, таким образом, предпочтительно быть синтетическим, стабильным, эффективным против всех штаммов гриппа А (включая потенциально пандемические штаммы), с повышенной эффективностью в старших возрастных группах (группах риска). Роль Т-клеток в защите от заболевания гриппом. В то время как технологии обычных вакцин против гриппа фокусируются, главным образом, на антительных ответах на поверхностные белки вирусов, последние являются субъектом для антигенного сдвига и дрейфа, который подрывает эффективность и создает описанную материально-техническую уязвимость. Напротив, Т-клетки, которые опосредуют клеточные иммунные ответы, могут иметь своей целью белки с более высокой консервативностью среди гетерологичных вирусных штаммов и кладов. Указанное свойство обеспечивает вакцины, которые индуцируют защитные клеточные иммунные ответы, потенциал для защиты от гетерологичных вирусных штаммов и кладов (гетеросубтипический иммунитет). В случае вируса гриппа консервация белков РВ 1, РВ 2, PA, NP, M1, М 2, NS1 и NS2 и персистирование соответствующих антиген-специфичных Т-клеток CD4+ и CD8+ делает указанные белки привлекательными мишенями для вакцин. Защитный антивирусный клеточно-опосредованный иммунитет состоит из индукции ответа 1 типа,поддерживаемого лимфоцитами Т-хелперами CD4+ 1 типа (Th1), приводящего к активации иммунных эффекторных механизмов, включая индукцию и сохранение цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), а также иммуностимулирующих цитокинов, таких как IFN- и IL-2. Клетки Т-хелперы CD4+, прежде всего, являются ответственными за помощь другим иммунным клеткам через межклеточные взаимодействия или посредством секреции цитокинов после распознавания антигенных Т-клеточных пептидных эпитопов, связанных с молекулами главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса II. Цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) обычно экспрессируют CD8 и индуцируют лизис или апоптоз клеток, на которых они распознают чужеродные антигены, представленные молекулами МНС класса I, что обеспечивает защиту от внутриклеточных патогенов, таких как вирусы. Указанная связь фенотипа и функции не является абсолютной, поскольку клетки CD4+ могут проявлять цитолитическую активность, в то время как клетки CD8+ секретируют антивирусные цитокины, особенно интерферон- (IFN-) и фактор некроза опухолей. В самом деле, было высказано предположение о том, что активность CTL CD4+ представляет собой другой иммунный механизм для борьбы с острой и хронической вирусной инфекцией у людей.CTL CD4+ могут контролировать распространение вируса посредством прямого антивирусного цитолитического эффекта и могут осуществлять прямую антивирусную активность посредством выработки антивирусных цитокинов, таких как IFN-. Известно, что IFN- оказывает прямое ингибирующее, а не ци-5 018765 толитическое действие на продукцию вируса. Клетки Т-хелперы CD4+ также играют важную роль в определении В-клеточного антительного ответа и переключении класса, а также в максимизации бактерицидной активности фагоцитов, таких как макрофаги. Клеточные иммунные ответы, как полагают, играют важную роль в борьбе с гриппозной инфекцией, улучшении признаков заболевания и ускорении выздоровления. Специфичный для гриппа клеточный иммунитет возникает после естественного заражения, и несколько вирусных белков были идентифицированы в качестве мишеней для гетеросубтипических Т-клеточных ответов иммунологической памяти у человека, включая нуклеопротеин (NP), полимеразу (РВ 1, РВ 2 и РА), белки M1 и М 2 и неструктурный белок-1 (NS1). NS2 также может участвовать. Указанные внутренние белки содержат высококонсервативные и иммунодоминантные области, что делает их идеальными мишенями для Т-клеток. В частности,экспериментальные исследования показали, что NP гриппа А представляет собой важный антигенмишень как для специфичных для подтипа, так и перекрестно-реагирующих CTL у мышей и людей. Это контрастирует с гемагглютинином (НА) и нейраминидазой (NA), которые являются неудобными мишенями в силу их высокой вариабельности последовательностей внутри подтипа гриппа или между ними. Более конкретно, клеточно-опосредованный иммунитет активно участвует в защите от заболевания гриппом, включая высокопатогенные штаммы. Т-клетки памяти CD4+ и CD8+ представлены в легочных путях, и появляются свидетельства того, что указанные клетки играют роль в пульмонарном иммунитете при гриппозной антигенной стимуляции, опосредуя фиксирование патогена во входных воротах инфекции, если патогенная нагрузка является низкой. Истощение Т-клеток CD8+ уменьшает способность примированных мышей отвечать на гриппозную инфекцию, что подчеркивает роль Т-клеток CD8+ в защитном вторичном ответе. Поскольку репликация вируса ограничивается клетками эпителия дыхательных путей, Т-клетки CD8+ осуществляют свои эффекторные функции в указанной области, продуцируя антивирусные цитокины и лизируя клетки-мишени, презентирующие вирусные детерминанты, для которых они несут специфичный Т-клеточный рецептор. Лизис инфицированных эпителиальных клеток опосредуется гранулами экзоцитоза, содержащими перфорин и гранзим, а также механизмами Fas (Thomas P.G.,Keating R., Hulse-Post D.J., Doherty P.С. "Cell-mediated protection in influenza infection". Emerg. Infect. Dis.,2006, Jan; 12 (1): 48-54). Мощные ответы Т-клеток CD4+ на гриппозную инфекцию начинаются в дренируемом лимфатическом узле, а затем в селезенке, и они достигают пика в легких и бронхоальвеолярном секрете на 6-7 день после заражения. Указанный первичный ответ Т-клеток CD4+ на гриппозную инфекцию, хотя и более слабый, чем ответ CD8+, как было показано, включает в себя сильную экспансию CD4+, дифференцировку Th-1 и их миграцию в область проникновения инфекции. Клетки Т-хелперы CD4+ также необходимы для продолжительной и эффективной памяти CD8 в отношении гриппозной инфекции. CD4 эффекторные ответы и ответы памяти Т-клеток вносят свой вклад в иммунитет против гриппа через многочисленные механизмы, включая их классический вклад в качестве хелперов во время генерации специфичных в отношении гриппа ответов CTL CD8+, их способность управлять IgG2a для нейтрализации инфективных вирусных частиц, а также посредством их прямой антивирусной активности через секрецию IFN-гамма. Было показано, что Т-клеточные эпитопы как CD4+, так и CD8+ способствуют клиренсу вируса и обеспечивают защиту мышам от гриппозной антигенной стимуляции. Мышиные модели для вируса гриппа А обеспечивают экспериментальную систему для анализа иммунитета, опосредованного Т-клетками. В частности, Т-клеточный иммунный ответ на гриппозную инфекцию хорошо изучен на мышах C57BL/6 (Н 2b) и Balb/C (H2d) и их гибридах. Plotnicky et al. (Plotnickyimmunodominant influenza matrix T cell epitope recognized in human induces influenza protection in HLAA2/K(b) transgenic mice". Virology, 2003, May 10; 309 (2):320-9) продемонстрировали защитную эффективность эпитопа 58-66 гриппозного матриксного белка (M1) при летальном контрольном заражении трансгенных мышей. Защита опосредовалась Т-клетками, поскольку она уничтожалась после in vivo истощения Т-клеток CD8+ и/или CD4+. Выживание мышей коррелировало с M1-специфичными Тклетками в легких, которые были непосредственно цитотоксичными в отношении инфицированных вирусом гриппа клеток после контрольного заражения вирусом гриппа. Woodland et al. (Crowe S.R., MillerS.C., Woodland D.L. "Identification of protective and non-protective T cell epitopes in influenza". Vaccine,2006, Jan. 23; 24(4):452-6) также показали, что единственный эпитоп НА (211-225) Т-клеток CD4+ может обеспечивать частичный контроль вирусной инфекции у вакцинированных мышей. В то время как мишени для Т-клеток склонны к менее частому мутированию, чем В-клеточные эпитопы поверхностных белков вируса гриппа, эпитопы Т-клеток CD8+ или CD4+ также со временем будут мутировать под защитным иммунным давлением (Berkhoff E.G., de Wit E., Geelhoed-Mieras M.M., Boon А.С, Symons J., Fouchier R.A., Osterhaus A.D., Rimmelzwaan G.F. "Fitness costs limit escape from cytotoxic Tlymphocytes by influenza A viruses". Vaccine, 2006, Nov. 10; 24(44-46): 6594-6). Указанное спасение, вероятно, происходит в результате конфронтации между вирусом и высокополиморфными белками человеческого лейкоцитарного антигена (HLA) класса I и II, который определяет процессинг антигена и презентацию эпитопа Т-клеткам хозяина CD8+ и CD4+ соответственно. Указанный механизм спасения вируса был более четко установлен для ВИЧ и HCV, и, как известно, (придает) формирует эволюцию вируса. Следовательно, отбор высококонсервативных пептидных последовательностей с присущей им низкой вариабельностью (энтропией) представляет собой важный фактор, который следует принимать во внимание при разработке Т-клеточных вакцин, которые могут специфичным образом противостоять антигенному сдвигу и дрейфу. Указанные методы описаны Berkhoff et al. (Berkhoff E.G., de Wit E., GeelhoedMieras M.M., Boon A.C., Symons J., Fouchier R.A., Osterhaus A.D., Rimmelzwaan G.F. "Functional constraints of influenza A virus epitopes limit escape from cytotoxic T lymphocytes". J. Virol., 2005, Sep; 79(17): 11239-46). В настоящее время приблизительно 90% всей связанной с гриппом смертности приходится на взрослых людей в возрасте старше 65 лет. Также в указанной группе риска современные вакцины являются наименее эффективными. У людей старение, как представляется, связано со снижением способности генерировать Т-клеточные эффекторы из субпопуляций памяти. Повышенная частота центральных Т-клеток памяти CD4+ и пониженная частота эффекторных Т-клеток памяти CD4+ наблюдается у людей старшего возраста после вакцинации, что может быть связано с пониженными уровнями сывороточногоIL-7. У людей старшего возраста наблюдается также Т-клеточный ответ притупленного типа-1 на вакцинацию против гриппа, который прямо коррелирует с ответами IgG1. Кроме того, у мышей также наблюдается связанное с возрастом ухудшение эпитоп-специфичной активности CTL CD8+ во время первичного заражения гриппом А. Это связано, скорее, с дефектом экспансии CTL CD8+, чем с эффекторной активностью специфичных для гриппа Т-клеток CD8+ (Mbawuike I.N., Acuna С., Caballero D., PhamNguyen K., Gilbert В., Petrobon P., Harmon M. "Reversal of age-related deficient influenza virus-specific CTLresponses and IFN-gamma production by monophosphoryl lipid A". Cell Immunol., 1996, Oct. 10; 173(1):6478). Поскольку важный элемент Т-клеточного ответа нацелен на клиренс инфицированных клеток, Тклеточную вакцину можно использовать профилактически, для генерации активизации иммунологической памяти, а также в терапевтических целях после заражения для усиления естественного клеточноопосредованного иммунитета хозяина. Т-клеточную вакцину также можно использовать в комбинации с обычной генерирующей антитела (на основе гуморального ответа) вакциной против гриппа, как совместным введением, так и раздельным введением. Подходы к Т-клеточной вакцине. Обзор информации по Т-клеточным и противогриппозным вакцинам освещает ряд критических моментов, с которыми приходится сталкиваться при разработке защитной Т-клеточной вакцины с широким перекрестным охватом. Во-первых, Т-клеточная вакцина должна быть способна примировать и повторно иммунизировать память и эффекторные функции Т-клеток CD4+ HTL и CD8+ CTL у большой процентной части реципиентов вакцины. Подобная вакцина должна также адресоваться к вирусному генетическому многообразию, и к происходящей мутации, а также к проявлению человеческого генетического многообразия на уровне аллельного полиморфизма МНС. Предложенное изобретение добивается осуществления указанных вопросов разработки путем комбинирования новой фторпептидной системы доставки вакцины с высококонсервативными пептидами вируса гриппа. Пептиды предпочтительно представляют собой антигены, которые, как известно, содержат один или более эпитопов, в частности Тклеточных эпитопов. Традиционные подходы к Т-клеточным вакцинам на основе пептидов были основаны на эпитопах и сфокусированы на минимальных CTL (8-11 ак) или Т-хелперных (13 ак) эпитопах, доставленных в виде отдельных эпитопов или воссозданных искусственных последовательностей. Последовательности неприродного происхождения могут столкнуться с ограничениями неэффективного процессинга антигенов,а также потенциально вызывать образования неродственных неоэпитопов. Длинные, натурально консервативные пептидные последовательности, содержащие перекрывающиеся Т-клеточные эпитопы, кластерные Т-клеточные эпитопы или беспорядочные Т-клеточные эпитопы в одной пептидной последовательности, позволяют осуществляться натуральному процессингу антигенов, в то же время достигая широкого популяционного охвата. Более того, использования множества указанных длинных натуральных пептидов в одной вакцине, вероятно, предлагает еще больший популяционный охват. Прецеденты показывают, что длинные пептиды (20-35 ак), включающие в себя эпитопы Т-клетокCD4+ и CD8+, обладают способностью индуцировать мультиэпитопные ответы у животных и людей(Coutsinos Z., Villefroy P., Gras-Masse H., Guillet J.G., Bourgault-Villada I., Gahery-Segard H., Pialoux G.,Figueiredo S., Igea C, Surenaud M., Gaston J., Gras-Masse H., Levy J.P., Guillet J.G. "Long-term specific immune responses induced in humans by a human immunodeficiency virus type 1 lipopeptide vaccine: characterization of CD8+-T-cell epitopes recognized". J. Virol., 2003, Oct; 77(20): 1120-31). Для эффективного антивирусного ответа CTL (управляемого Т-клетками CD8) требуется соответствующее Th-1 цитокиновое окружение (гарантируемое клетками CD4); таким образом, можно прогнозировать, что сопутствующая доставка эпитопов CD4 и CD8 будет усиливать клеточные ответы (Krowka, J.F., Singh, В., Fotedar, A.,Mosmann, Т., Giedlin, M.A., Pilarski, L.M. "A requirement for physical linkage between determinants recognized by helper molecules and cytotoxic T cell precursors in the induction of cytotoxic T cell responses". J. Immunol., 1986, May 15; 136(10):3561-6). Т-клетки CD4+ и CD8+ распознают короткие пептиды, получающиеся в результате внеклеточного и внутриклеточного процессинга чужеродных и собственных белков, представленных связанными со специфическими клеточными поверхностными молекулами, кодируемыми системой МНС. Существуют два отдельных класса молекул МНС: (i) МНС класса I презентирует эндогенные пептиды и (ii) МНС класса II презентирует экзогенные пептиды. Процесс презентации антигена МНС класса включает в себя деградацию белка, транспорт пептидов в эндоплазматическую сеть, связывание пептид-МНС и экспорт комплексов пептид-МНС на поверхность клетки для презентации Т-клетками CD8+. Пептиды связываются в специфической МНС-связывающей бороздке, форма и свойства которой приводят к связыванию специфических субпопуляций пептидов, имеющих общий мотив связывания. Т-клетки активируются, когда Тклеточный рецептор распознает специфический комплекс пептид-МНС, и таким способом идентифицирует клетки, инфицированные внутриклеточными паразитами или вирусами, или клетки, содержащие патологические белки (например, опухолевые клетки), и предпринимает соответствующие иммунные ответы против них. Пептиды, участвующие в специфических комплексах пептид-МНС, запускающих распознавание Т-клетками (Т-клеточные эпитопы), представляют собой важные инструменты для диагностики и лечения инфекционных, аутоиммунных, аллергических и неопластических заболеваний. Поскольку Т-клеточные эпитопы представляют собой субпопуляции МНС-связывающих пептидов, точная идентификация частей белков, которые могут связываться с молекулами МНС, является важной для конструирования вакцин и иммунотерапевтических агентов. Полиморфизм МНС является очень высоким в человеческой популяции с аллелями 580 HLA-A, 921 HLA-В, 312 HLA-C, 527 HLA-DR (бета), 127 HLADRQ(бета) и 86 HLA-DQ(бета), известными в настоящее время. Данная ситуация представляет собой проблему при разработке вакцины на основе Т-клеток с широким популяционным охватом. МНСсвязывающие пептиды содержат позиционно-специфические аминокислоты, которые взаимодействуют с бороздкой молекулы (молекул) МНС, внося свой вклад в связывание пептидов. Предпочтительные аминокислоты на каждой позиции мотива связывания могут варьировать между аллельными вариантами молекул МНС. Вычислительные модели облегчают идентификацию пептидов, которые связываются с различными молекулами МНС. Различные вычислительные способы, анализы связывания МНС, рентгеновская кристаллография и многочисленные другие методики, известные специалистам, позволяют идентифицировать пептиды, которые связываются с молекулами МНС. Новые методики идентификации антигенов in silico предлагают возможность быстро обрабатывать большие количества данных, участвующих в скрининге пептидных последовательностей на предмет мотивов связывания HLA, необходимых для описания вирусных последовательностей, пригодных для Т-клеточной вакцины. Биоинформационные подходы на основе HLA успешно применяются во многих областях иммунологии и делают возможным разрешать проблемы, связанные с генетическим разнообразием человеческой популяции,например Depil S., Morales О., Castelli F.A, Delhem N., Francois V., Georges B., Dufosse F., Morschhauser F.,Hammer J., Maillere B., Auriault C., Pancre V. "Determination of a HLA II promiscuous peptide cocktail asalleles". J. Immunol. 2000 Jul 15;165(2):1123-37. Пептиды, которые связываются более чем с одним аллельным вариантом МНС ("беспорядочные пептиды"), представляют собой главные мишени при разработке вакцин и иммунотерапевтических агентов, поскольку они имеют отношение к большей части человеческой популяции. Беспорядочные CD4+ Т-клеточные эпитопы также, как сообщается, связываются с многочисленными молекулами МНС классаEur J. Immunol. 1989 Dec; 19(12):2237-42. С другой стороны, некоторые беспорядочные CD8+ Тклеточные эпитопы, как описано ранее, обладают способностью связываться с многочисленными молекулами МНС класса I, имеющими общие характеристики связывания и образующими так называемый супертип (Frahm N., Yusim K., Suscovich T.J., Adams S., Sidney J., Hraber P., Hewitt H.S., Linde C.H.,Kavanagh D.G., Woodberry T., Henry L.M., Faircloth K., Listgarten J., Kadie C., Jojic N., Sango K., Brown дочных CD4+ и CD8+ T-клеточных эпитопов представляет собой важную стратегию при разработке вакцин для достижения широкого популяционного охвата. Проблемы полиморфизма МНС также решаются отбором пептидов, о которых известно или прогнозируется, что они содержат мотив связывания МНС,имеющий отношение к часто встречающимся в конкретной этнической группе или во многих этнических группах аллелям МНС. Путем отбора комбинации последовательностей, которые обеспечивают широкий популяционный охват и являются консервативными для ряда штаммов вирусов гриппа (идентифицированных с использованием, например, баз данных последовательностей гриппа Национального центра биотехнологической информации (NCBI) или Национальной лаборатории Лос-Аламоса (LANL возможно решить проблему генетического разнообразия вирусов и добиться защиты от большинства, если не от всех, соответствующих вирусных штаммов. Исторически, основные неудачи технологий Т-клеточных вакцин (ДНК- и вирусных векторных вакцин) заключались в низкой процентной доле вакцинированных субъектов, которые отвечали на вакцины, часто в низких уровнях иммуногенности и их способности обеспечивать бустерную амплификацию памяти и ответы эффекторных Т-клеток. Главной целью эффективной Тклеточной противогриппозной вакцины является возбуждение сильных ответов Т-клеточной памяти таким образом, чтобы после повторного воздействия антигена происходила быстрая экспансия эффекторных функций, которые контролируют вирусную нагрузку и способствуют клиренсу вируса из легких. Для достижения указанной цели требуются надежные вирус-специфичные Т-клеточные CD4+ и CD8+ центральные и эффекторные ответы памяти, направленные на Th-1. Для жизнеспособного коммерческого продукта указанный ответ должен возникать у большой процентной доли реципиентов вакцины(90%), и он должен быть способен генерировать долгосрочные ответы памяти, которые потребуются для восстановления памяти и последующей защиты от заболевания после заражения. Однако для того чтобы генерировать указанный тип стойкого иммунитета, вакцина должна также обеспечивать надежный бустерный амплифицирующий эффект при повторном воздействии вакцины. Современные иммунологические стратегии для улучшения клеточного иммунитета, индуцированного вакцинами и иммунотерапевтическими агентами, включают в себя разработку живых ослабленных версий патогена и использование живых векторов для доставки соответствующих антигенов или ДНКкодов указанных антигенов. Указанные подходы, которые неизменно не способны генерировать значимый бустерный ответ в неизбирательных популяциях, привели к созданию чрезмерно сложных примбустерных комбинаций и также ограничиваются соображениями безопасности в условиях окружения с все более жестким регулированием. Помимо этого, вопросы, возникающие в связи с масштабируемостью производственных процессов и чрезмерно высокими затратами, часто ограничивают коммерческую жизнеспособность продуктов биологического происхождения. В данном контексте синтетические пептиды представляют собой весьма привлекательные антигены, поскольку они хорошо описаны с химической точки зрения, являются высокостабильными и могут быть сконструированы таким образом, что будут содержать Т- и/или В-клеточные эпитопы. Для того чтобы стимулировать ответы Т-лимфоцитов in vivo, синтетические пептиды, содержащиеся в вакцине или иммунотерапевтическом продукте, должны предпочтительно усвоиться антигенпрезентирующими клетками и, особенно, дендритными клетками. Дендритные клетки (DC) играют ключевую роль в инициации первичных опосредованных Т-клетками иммунных ответов. Указанные клетки существуют в двух основных стадиях созревания, связанных с различными функциями. Незрелые дендритные клетки (iDC) находятся в большинстве тканей или в циркуляции и мигрируют в области воспаления. Они представляют собой высокоспециализированные захватывающие антигены клетки, которые экспрессируют большие количества рецепторов, участвующих в захвате и фагоцитозе антигенов. После захвата и процессинга антигенов iDC мигрируют к месту расположения Т-клеток в лимфатических узлах и селезенке. Во время указанного процесса DC утрачивают свою способность захватывать антигены,превращаясь в иммуностимулирующие зрелые DC (mDC). Дендритные клетки представляют собой эффективные презентирующие клетки, которые инициируют иммунный ответ хозяина на пептидный антиген, связанный с молекулами МНС класса I и класса II. Они способны примировать наивные Т-клетки CD4 и CD8. В соответствии с современными моделями путей процессинга и презентации антигенов экзогенные антигены усваиваются эндоцитозными компартментами антиген-презентирующих клеток, где они деградируют до пептидов, некоторые из которых связываются с молекулами МНС класса II. Зрелые комплексы МНС класса II/пептид затем транспортируются на поверхность клеток для презентации Т-лимфоцитам CD4. Напротив, эндогенный антиген деградирует в цитоплазме под действием протеосомы перед тем, как транспортироваться в цитоплазму, где он связывается с образующимися молекулами МНС класса I. Стабильные молекулы МНС класса I, комплексированные с пептидами, затем транспортируются на поверхность клеток для стимуляции CTL CD8. Экзогенный антиген может также презентироваться на молекулах МНС класса I профессиональными АРС в процессе, называемом перекрестной презентацией. Фагосомы, содержащие внеклеточный антиген,могут гибридизироваться с эндоплазматическим ретикулумом, и антиген может приобретать механизмы,необходимые для нагрузки пептидом молекул МНС класса I. В течение десятилетий оценивались многочисленные способы доставки, включая векторы, такие как Penetratin, TAT и его производные, ДНК, вирусные векторы, виросомы и липосомы. Однако указанные системы или вызывают очень слабые ответы CTL, неспособны генерировать бустерную амплификацию ответов памяти, связаны с проблемами токсичности, или являются сложными и затратными для производства в промышленных масштабах. Таким образом, существует признанная потребность в улучшенных векторах для направления внутриклеточной доставки антигенов при разработке вакцин и лекарственных средств, предназначенных для получения клеточного иммунного ответа. Вектор, в контексте иммунотерапевтических агентов или вакцин, представляет собой любой агент, способный транспортировать или направлять антиген к иммунологически реактивным клеткам хозяина. Было установлено, что фторированные поверхностно-активные агенты имеют низкие критические концентрации мицелл и, таким образом, самоорганизуются в мультимолекулярные мицелльные структуры при низких концентрациях. Указанное физико-химическое свойство связано с сильными гидрофобными взаимодействиями и с низкими взаимодействиями Ван-дер-Ваальса, связанными с фторированными цепями, что резко повышает тенденцию фторированных амфифилов к самосборке в воде и сосредотачиваться на границах раздела. Образование указанных структур облегчает их эндоцитозный захват клетками, например, антиген-презентирующими клетками (Reichel et al., J. Am. Chem. Soc., 1999, 121, 79897997). Помимо этого, гемолитическая активность сильно уменьшается и часто подавляется, когда фторированные цепи вводят в поверхностно-активный агент (Riess, J.G.; Расе, S.; Zarif, L. Adv. Mater., 1991, 3,249-251), что приводит к уменьшению клеточной токсичности. Настоящее изобретение предпринимает попытку решения проблемы доставки гриппозных антигенов к иммунологически реактивным клеткам путем использования фторуглеродного вектора с целью усиления их иммуногенности. Фторуглеродный вектор может включать в себя одну или более цепей,полученный из перфторуглеродных или смешанных фторуглеродных/углеводородных радикалов, и может быть насыщенным или ненасыщенным; каждая цепь имеет от 3 до 30 атомов углерода. Для того чтобы присоединить вектор к антигену посредством ковалентной связи, химически активную группу или лиганд инкорпорируют в качестве компонента вектора, например, включают -СО-, -NH-,S, О или любую другую подходящую группу; использование указанных лигандов для получения ковалентных связей хорошо известно специалистам. Химически активную группу можно помещать на любую позицию молекулы фторуглерода. Присоединение фторуглеродного вектора к антигену можно осуществлять через функциональные группы, такие как -ОН, -SH, -СООН, -NH2, исходно присутствующие или внедренные в любую область антигена. Подходящие связи могут содержать атом азота, кислорода или серы как в линейной, так и в циклической форме. Примеры связей, образованных сшивкой, могут включать в себя оксим, гидразон,дисульфид или триазол или любую подходящую ковалентную связь. В частности, фторуглеродную часть можно ввести через тиоэфирную связь для повышения иммуногенности пептида (Beeckman. N.J.C.M. etPeptide Res. 1997, 50, 357-364). Необязательно, спейсерный элемент (пептидный, псевдопептидный или непептидный) можно инкорпорировать, чтобы позволить антигену отщепляться от фторуглеродного элемента для процессинга внутри антиген-презентирующей клетки и оптимизации презентации антигена,как было показано ранее для липопептидов (Verheul, A. F.M.; Udhayakumar, V.; Jue, D.L.; Wohlhueter,R.M.; Lai, A.L. Monopalmitic acid-peptide conjugates induce cytotoxic T cell responses against malarial epitopes: importance of spacer amino acids. Journal of Immunological Methods 1995, vol. 182, p. 219-226). Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение относится к конструкции "фторуглеродный вектор/антиген", имеющей химическую структуру CmFn-CyHx-(Sp)-R, или ее производным, гдеm=равно 3-30, n2m+1, y=0-15, x2y, (m+y)=3-30 и Sp представляет собой необязательную химическую спейсерную часть, a R представляет собой антиген, полученный из вируса гриппа. В контексте настоящего изобретения "производные" относятся к относительно незначительным модификациям фторуглеродного соединения, таким, при которых соединение все еще способно доставлять антиген, как описано в настоящем документе. Так, например, ряд фторсодержащих частей можно заменять на другие галогенсодержащие части, такие как хлорсодержащие (С 1), бромсодержащие (Br) или йодсодержащих (I). Кроме того, возможно заменять ряд фторсодержащих частей метильными группами и все же сохранять свойства молекулы, как описано в настоящем документе. В частности, примером указанной выше формулы вектора может служить 2 Н, 2 Н, 3 Н, 3 Нперфторундекановая кислота следующей формулы: Так, во втором аспекте настоящее изобретение относится к конструкции "фторуглеродный вектор/антиген", имеющей структуру где Sp представляет собой необязательную химическую спейсерную часть, a R представляет собой антиген, полученный из вируса гриппа. Используемый в настоящем документе термин "антиген" относится к молекуле, обладающей способностью распознаваться иммунологическими рецепторами, такими как Т-клеточный рецептор (TCR) или В-клеточный рецептор (BCR или антитело). Антигены могут представлять собой белки, белковые субъединицы, пептиды, углеводы, липиды или их комбинации, натуральные или ненатуральные, при условии, что они презентируют по меньшей мере один эпитоп, например Т-клеточный и/или Вклеточный эпитоп. Указанные антигены могут быть получены выделением из нативного белка или могут быть изготовлены с использованием рекомбинантных технологий или химического синтеза. Способы получения антигенов хорошо известны специалистам. Помимо этого, антигены также включают в себя ДНК или олигонуклеотид, кодирующий антигенный пептид или белок. Антиген, связанный с вектором, может представлять собой любой гриппозный антиген, способный индуцировать иммунный ответ у животных, включая людей. Предпочтительно иммунный ответ будет оказывать благоприятное действие на хозяина. Гриппозный антиген может содержать один или более Т-клеточных эпитопов или В-клеточных эпитопов или комбинаций Т- и В-клеточных эпитопов. Т-клеточные эпитопы могут ограничиваться МНС класса I или класса II. Используемый в настоящем документе термин "эпитоп" включает в себя:(i) CD4+ Т-клеточные эпитопы, которые представляют собой пептидные последовательности, содержащие мотив связывания МНС класса II и обладающие способностью презентироваться на поверхности антиген-презентирующих клеток молекулами МНС класса II, и(ii) CD8+ Т-клеточные эпитопы, которые представляют собой пептидные последовательности, содержащие мотив связывания МНС класса I и обладающие способностью презентироваться молекулами МНС класса I на поверхности клеток, и(iii) В-клеточные эпитопы, которые представляют собой пептидные последовательности, обладающие аффинностью связывания в отношении В-клеточного рецептора. Антиген может включать в себя один или более эпитопов из белка гриппа типа А, белка гриппа типа В или белка гриппа типа С. Примеры белков вируса гриппа как от типа А, так и от типа В, включают в себя гемагглютинин, нейраминидазу, матриксный белок (M1), М 2, нуклеопротеин (NP), PA, PB1, РВ 2,NS1 или NS2 в любой комбинации. Так, в еще одном аспекте настоящее изобретение относится к конструкции "вектор/антиген", в которой антиген вируса гриппа представляет собой белок, белковую субъединицу, пептид, углевод или липид или их комбинации. Для того чтобы конструкция была иммунологически активной, антиген должен включать в себя один или более эпитопов. Предпочтительно антиген представляет собой пептидную последовательность, полученную из вируса гриппа. Пептиды или белки по настоящему изобретению предпочтительно содержат последовательность по меньшей мере из 7, более предпочтительно от 9 до 100 аминокислот и наиболее предпочтительно приблизительно от 15 до 40 аминокислот. Предпочтительно пептид, несущий аминокислотную последовательность эпитопа (эпитопов), выбирают для повышения растворимости молекулы в водных растворителях. Помимо этого, окончание пептида, которое не конъюгировано с вектором, можно изменять для улучшения растворимости конструкции посредством образования мультимолекулярных структур, таких как мицеллы, ламеллы, тубулы или липосомы. Например,положительно заряженную аминокислоту можно добавлять к пептиду, чтобы способствовать спонтанной сборке мицелл. Как N-конец, так и С-конец пептида можно присоединять к вектору для создания конструкции. Для облегчения широкомасштабного синтеза конструкции N- или С-концевые аминокислотные остатки пептида можно модифицировать. Когда желаемый пептид является особенно чувствительным к расщеплению пептидазами, обычную пептидную связь можно заменить на нерасщепляемый пептидный миметик; указанные связи и способы синтеза хорошо известны специалистам. Нестандартные, ненатуральные аминокислоты также можно инкорпорировать в пептидные последовательности при условии, что они не мешают способности пептида взаимодействовать с молекулами МНС и остаются перекрестно реагирующими с Т-клетками, распознающими натуральные последовательности. Ненатуральные аминокислоты можно использовать для повышения резистентности пептидов к протеиназам или химической стабильности. Примеры ненатуральных аминокислот включают в себя Dаминокислоты и модификации цистеина. Более одного антигена можно соединять между собой до прикрепления к фторуглеродному вектору. Одним указанным примером является использование слитых белков, в которых беспорядочный Т- 11018765 хелперный эпитоп может быть ковалентно связан с одним или множеством эпитопов CTL или одним или множеством В-клеточных эпитопов, который может представлять собой пептид, углевод или нуклеиновую кислоту. В качестве примера, беспорядочный Т-хелперный эпитоп может представлять собой пептид PADRE, пептид столбнячный анатоксин (830-843) или гриппозный гемагглютинин, НА (307-319). Альтернативно, пептидная последовательность может содержать два или более эпитопов, которые могут быть перекрывающимися, образуя, таким образом, кластер из плотно упакованных мультиспецифических эпитопов, или прилегающими друг к другу или разделенными участком из аминокислот. Так, в еще одном аспекте настоящее изобретение относится к конструкции "вектор/антиген", в которой R представляет собой более одного эпитопа или антигена, соединенных друг с другом. Эпитопы также могут линейно перекрываться, образуя, таким образом, кластер из плотно упакованных мультиспецифических эпитопов. Благодаря сильным нековалентным молекулярным взаимодействиям, характерным для фторуглеродов, антиген также может быть нековалентно связан с вектором и, тем не менее, достигать цели - благополучного захвата антиген-презентирующими клетками. Так, в еще одном аспекте настоящее изобретение относится к конструкции "вектор/антиген", в которой антиген нековалентно связан с фторуглеродным вектором. Антигены, несущие один или более В-клеточных эпитопов, также можно прикреплять к фторуглеродному вектору, с одним или более Т-клеточным эпитопов или без них. В-клеточные эпитопы можно прогнозировать с использованием подходов in silico (Bublil E.M., Freund N.T., Mayrose .I, Perm О., Roitburd-Berman A., Rubinstein N.D., Pupko T., Gershoni J.M. "Stepwise prediction of conformational discontinuous B-cell epitopes using the Mapitope algorithm". Proteins. 2007 Jul 1; 68 (1):294-304. Greenbaum J.A., Andersen P.H., Blythe M., Bui H.H., Cachau R.E., Crowe J., Davies M., Kolaskar A.S., Lund О., Morrison S.,Mumey B., Ofran Y., Pellequer J.L., Pinilla C., Ponomarenko J.V., Raghava G.P., van Regenmortel M.H., Roggen E.L., Sette A., Schlessinger A., Sollner J., Zand M., Peters B. "Towards a consensus on datasets and evaluation metrics for developing B-cell epitope prediction tools". J. Mol. Recognit. 2007 Mar-Apr; 20(2):75-82). Настоящее изобретение относится также к вакцинам и иммунотерапевтическим агентам, включающим в себя одну или более конструкций "фторуглеродный вектор/антиген". Многокомпонентные продукты указанного типа являются желательными, поскольку они, очевидно, являются более эффективными в достижении должных иммунных ответов у большего количества индивидуумов. Благодаря чрезвычайному полиморфизму HLA у людей, маловероятно, что один фторпептид будет индуцировать мультиэпитопный иммунный ответ у большой процентной доли данной популяции. Следовательно, для того чтобы вакцинный продукт был эффективным во всей популяции, может быть необходимо наличие ряда фторпептидов в вакцинной композиции, чтобы обеспечить широкий охват. Кроме того, оптимальная композиция противогриппозной вакцины или иммунотерапевтического агента может включать в себя ряд различных пептидных последовательностей, полученных из различных антигенов вирусов гриппа. В указанном случае пептиды могут быть связаны друг с другом и присоединены к одному фторуглеродному вектору, или каждый пептидный антиген может быть присоединен к предназначенному для него вектору. Многокомпонентный продукт может содержать одну или более конструкций "вектор/антиген", более предпочтительно, приблизительно от 2 до 20, более предпочтительно, приблизительно от 3 до 10. В частности, варианты многокомпонентной вакцины могут содержать 5, 6, 7 или 8 конструкций. Это является гарантией того, что будет получен мультиэпитопный Т-клеточный ответ с широким популяционным охватом (т.е. соответствующий многообразию HLA). Например, композиция из множества фторпептидов может состоять из пептидов, полученных только из вирусов гриппа А, из пептидов, полученных только из вирусов гриппа В, или из пептидов, полученных только из вирусов гриппа С, или из комбинаций типов гриппа, более предпочтительно, гриппа А и В. В одном варианте осуществления настоящего изобретения продукт включает в себя по меньшей мере две конструкции "вектор-антиген"; первая конструкция включает в себя пептидную последовательность вируса гриппа а вторая конструкция включает в себя пептидную последовательность вируса гриппа В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения продукт включает в себя 8 конструкций "вектор-антиген", которые включают в себя следующие пептидные последовательности вируса гриппа: Альтернативно, множество эпитопов можно инкорпорировать в композицию, чтобы добиться иммунитета против ряда патогенов, один из которых представляет собой вирус гриппа. Например, вакцина против респираторных инфекций может содержать антигены из вируса гриппа и респираторносинтициального вируса. Композиции по настоящему изобретению включают в себя фторуглеродные векторы, связанные с антигенами, необязательно, вместе с одним или более фармацевтически приемлемых носителей и/или адъювантов. Указанные адъюванты и/или фармацевтически приемлемые носители должны быть способны дополнительно потенцировать иммунный ответ, с точки зрения величины и/или профиля цитокинов,и могут включать в себя, без ограничения:(1) натуральные или полученные синтетическим путем очищенные продукты натуральных компонентов бактерий, такие как адъювант Фрейнда и его производные, производные мурамилдипептида(2) другие известные адъювантные или потенцирующие агенты, такие как сапонины, соли алюминия и цитокины;(3) способы составления композиций антигенов с инородными адъювантами или без них (см. (1) и(2) выше), такими как адъюванты типа "масло в воде", адъюванты типа "вода в масле", иммуностимулирующий комплекс (ISCOM), липосомы, помещенные в композиции нано- и микрочастицы;(5) другие подходящие адъюванты, хорошо известные специалистам. Выбор носителя, если он требуется, часто зависит от пути доставки композиции. В настоящем изобретении композиции можно изготавливать для любого подходящего пути и средств введения. Фармацевтически приемлемые носители или разбавители включают в себя носители и разбавители, подходящие для перорального, окулярного, ректального, назального, местного (включая буккальный и сублингвальный), вагинального или парентерального (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный,внутрикожный, чрескожный) введения. Композицию можно вводить в любой подходящей форме, например в виде жидкости, твердого препарата, аэрозоля или газа. Например, композиции для перорального введения могут иметь форму эмульсий, сиропов или растворов или таблеток или капсул, которые могут иметь энтеросолюбильное покрытие для защиты активного компонента от разложения в желудке. Композиции для назального введения могут представлять собой спреи или растворы. Композиции для чрескожного введения могут быть адаптированы для конкретной системы их доставки и могут представлять собой пластыри. Композиции для инъекций могут представлять собой растворы или суспензии в дистиллированной воде или другом фармацевтически приемлемом растворителе или суспендирующем агенте. Так, в еще одном аспекте, настоящее изобретение относится к профилактической или терапевтической композиции, включающей в себя конструкцию (конструкции) "вектор-антиген" с подходящим носителем и/или адъювантом или без него. Подходящая дозировка вакцины или иммунотерапевтического агента, которую следует вводить пациенту, будет определена в клинике. Однако, в качестве руководства, подходящая доза для человека,которая может зависеть от предпочтительного пути введения, может составлять от 1 до 1000 мкг. Множество доз может потребоваться для достижения иммунологического или клинического эффекта, которые, если потребуется, обычно будут вводиться с интервалом от 2 до 12 недель. В случаях, когда требуются повторные иммунизации с целью получения иммунного ответа, можно использовать повторные дозы с интервалом от 1 месяца до 5 лет. Композиция может объединять конструкцию "вектор-антиген" с другим активным компонентом для осуществления введения более одной вакцины или лекарственного средства. Синергический эффект также может наблюдаться в результате совместного введения двух или более активных агентов. Вакцинную композицию по настоящему изобретению, включающую в себя один или более фторпептидов, можно использовать в комбинации с противогриппозной вакциной на основе гуморального ответа, такой как Fluzone, Agrippal, Fluvax, Enzira, Fluarix, Flulaval, FluAd, Influvac, Fluvirin, FluBlok или любой другой вакциной, включающей в себя гемагглютинин в качестве активного компонента, или с живой ослабленной противогриппозной вакциной, включающей адаптированные к холоду штаммы, такой как Flumist. Введение можно осуществлять в виде комбинированной смеси или в виде отдельных вакцинных агентов, введенных одновременно или с интервалом. В еще одном аспекте противогриппозную вакцинную композицию можно вводить в комбинации с антивирусной терапевтической композицией, включая лекарственные средства, ингибирующие нейраминидазу, такие как аманидин, римантидин, занамивир или оселтамивир. Введение можно осуществлять одновременно или с интервалами. В других аспектах изобретение обеспечивает:i) применение иммуногенной конструкции, как описано в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания или его симптомов;ii) способ лечения посредством индукции иммунного ответа после введения композиции, описанной в настоящем документе. Далее изобретение будет описано с использованием следующих примеров. Указанные примеры описывают отличающиеся друг от друга Т-клеточные иммунные ответы, полученные присоединением фторуглеродного вектора к антигенам, по сравнению с соответствующими нефторированными антигенами. Восемь антигенов, представленных в примерах, были выбраны из списка гриппозных последовательностей, определенных в настоящем документе. В указанном предварительном отборе использовали патентованный алгоритм, охватывающий комбинацию параметров, включающий иммуноинформационный отбор, анализы связывания in vitro, анализы рестимуляции ex vivo с использованием человеческих РВМС, предварительно инфицированных гриппом, параметры производства и составления композиций. В конечном итоге, исследования на мышах подтвердили, что фторпептиды, отобранные таким образом,по отдельности или в комбинации являются иммуногенными, а полученные ответы превосходят ответы на нативные пептидные антигены. Отбор антигенов и желание использовать комбинацию антигенов для указанного прототипа вакцины таково, что в указанном рациональном дизайне вакцины учитывается как вирусное генетическое, так и человеческое HLA многообразие. Это являлось одним из главных недостатков в области пептидных вакцин. Пока возможно использование единственного антигена во фторпептидной вакцине, это будет ограничивать потенциал иммуногенности вакцины в неродственной популяции людей (или других), и, следовательно, отбор множества пептидов является существенным для вакцины с широкой эффективностью. Используемый в настоящем документе термин "фторпептиды" относится к фторуглеродным векторам (цепям), конъюгированным с антигенами на пептидной основе. Примеры относятся к фигурам, на которых показано следующее. Фиг. 1 показывает сравнение иммуногенности поливалентной фторпептидной вакцины и ее нативного пептидного эквивалента на мышах BALB/c и CBF6 после примирования или примирования/повторной иммунизации, по оценке ex vivo IFN- ELIspot. По 7 или 8 мышей в каждой группе иммунизировали подкожным введением фторпептидной вакцины (состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл) или эквивалентных нативных пептидов (состоявших из 8 помещенных в композицию нативных пептидов в дозе 1 нмоль на пептид в 100 мкл). Контрольная группа получала композицию, содержавшую только наполнитель. Через 10 дней после последней инъекции мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Анализы ELIspot мышиного IFN- (Mabtech,Швеция) осуществляли согласно инструкциям производителя. Клетки селезенки (5105) стимулировали в двух повторностях 8 отдельными нативными пептидами в концентрации 10 кг/мл на пептид в полной культуральной среде (RPMI с 10% фетальной бычьей сыворотки) в общем объеме 200 мкл в течение 18 ч при 37 С и 5% СО 2. Пятна подсчитывали с использованием ридера CTL-immunospot. Для каждой мыши суммировали общее количество пятен для всех 8 пептидов и величину контрольных лунок (только среда) вычитали 8 раз. Результаты соответствуют среднему количествустандартное отклонение образующих пятна клеток (SFC) на миллион внесенных клеток селезенки. Фиг. 2 показывает сравнение иммуногенности поливалентной фторпептидной вакцины и ее нативного пептидного эквивалента на мышах BALB/c и CBF6, после примирования или примирования/повторной иммунизации, по оценке ex vivo IFN- ELIspot. По 7 или 8 мышей в каждой группе иммунизировали подкожным введением фторпептидной вакцины (состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл) или эквивалентных нативных пептидов (состоявших из 8 помещенных в композицию нативных пептидов в дозе 1 нмоль на пептид в 100 мкл). Контрольная группа получала композицию, содержавшую только наполнитель. Через 10 дней после последней инъекции мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Анализы ELIspot мышиного IFN- (Mabtech,Швеция) осуществляли согласно инструкциям производителя. Клетки селезенки (5105) стимулировали в двух повторностях смесью 8 пептидов в концентрации 1 мкг/мл на пептид в полной культуральной среде(RPMI с 10% фетальной бычьей сыворотки) в общем объеме 200 мкл в течение 18 ч при 37 С и 5% CO2. Пятна подсчитывали с использованием ридера CTL-immunospot. Для каждой мыши суммировали общее количество пятен для всех 8 пептидов, и величину контрольных лунок (только среда) вычитали 8 раз. Результаты соответствуют среднему количествустандартное отклонение образующих пятна клеток(SFC) на миллион внесенных клеток селезенки. Фиг. 3 показывает сравнение индивидуальной пептидной иммуногенности фторпептидов и нативных пептидов на мышах BALB/c и CBF6 после примирования или примирования/повторной иммунизации, по оценке ex vivo IFN- ELIspot. По 7 или 8 мышей в каждой группе иммунизировали подкожным введением фторпептидной вакцины (состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл) или эквивалентных нативных пептидов (состоявших из 8 помещенных в композицию нативных пептидов в дозе 1 нмоль на пептид в 100 мкл). Контрольная группа получала композицию, содержавшую только наполнитель. Через 10 дней после последней инъекции мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Анализы ELIspot мышиного IFN- (Mabtech, Швеция) осуществляли согласно инструкциям производителя. Клетки селезенки (5105) стимулировали в двух повторностях 8 отдельными нативными пептидами в концентрации 10 мкг/мл на пептид в полной культуральной среде(RPMI с 10% фетальной бычьей сыворотки) в общем объеме 200 мкл в течение 18 ч при 37 С и атмосфере 5% СО 2. Пятна подсчитывали с использованием ридера CTL-immunospot. Для каждой мыши суммировали общее количество пятен для всех 8 пептидов, и величину контрольных лунок (только среда) вычитали 8 раз. Результаты соответствуют среднему количествустандартное отклонение образующих пятна клеток (SFC) на миллион внесенных клеток селезенки. Фиг. 4 показывает сравнение иммуногенности поливалентной фторпептидной вакцины и ее нативного пептидного эквивалента на мышах BALB/c и CBF6 после примирования/повторной иммунизации,по оценке профиля цитокинов. По 8 мышей в каждой группе иммунизировали подкожным введением фторпептидной вакцины (состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл) или эквивалентных нативных пептидов (состоявших из 8 помещенных в композицию нативных пептидов в дозе 1 нмоль на пептид в 100 мкл). Контрольным группам мышей инъецировали композицию, содержавшую только наполнитель. Мышей иммунизировали с 15-дневным интервалом. Через 10 дней после последней инъекции мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Спленоциты стимулировали смесью 8 нативных пептидов в концентрации 1 мкг/мл на пептид в полной культуральной среде (RPMI с 10% фетальной бычьей сыворотки) в общем объеме 200 мкл в течение 48 ч при 37 С и атмосфере 5% СО 2. Анализ концентрации цитокинов (интерлейкина-2 (IL-2), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-5 (IL-5), интерферона- (IFN-) и фактора некроза опухолей (TNF в культуральных надосадочных жидкостях стимулированных клеток осуществляли с использованием мышиного цитометрического набора для анализа массива данных (СВА; BD Biosciences, UK), согласно инструкциям производителя, и анализировали с использованием проточного цитометра FascCanto II. Стандартные кривые определяли для каждого цитокина в пределах 210-2500 пг/мл. Нижняя граница обнаружения для СВА, согласно инструкциям производителя, составляет 2,5-3,2 пг/мл, в зависимости от анализируемого вещества. Результаты соответствуют средним величинам и стандартному отклонению, рассчитанным для каждой группы мышей для каждого цитокина. Результаты выражены в виде концентрации цитокина в пг/мл. Фиг. 5 - Т-клетки CD4+ и Т-клетки CD8+ стимулировали фторпептидной вакциной у мышейBALB/c. По 4 мыши в каждой группе иммунизировали подкожным введением фторпептидной вакцины(состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл). Мыши получали 2 инъекции (примирование/повторная иммунизация) с 15-дневным интервалом. Через 10 дней после последней инъекции мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Клетки ресуспендировали в концентрации 0,5106 на лунку и стимулировали только средой или смесью из 8 нативных пептидов (вакциной) в течение 72 ч при 37 С и 5% СО 2. Культуры положительных контролей (PMA/I) получали 50 нг/мл РМА и 0,5 мкг/мл иономицина в течение последних 5 ч культивирования. Все культуры получали 10 мкл/мл Brefeldin А в течение последних 5 ч культивирования. Клетки окрашивали внеклеточно на CD4 и CD8 и внутриклеточно - IFN- и анализировали с использованием проточной цитометрии на цитометре BD FascCanto II. Результаты для отдельных мышей показаны как процентные доли Т-клетокCD4+ или CD8+, экспрессирующих внутриклеточный IFN-. Фиг. 6 показывает сравнение иммуногенности поливалентной фторпептидной вакцины и вакцины,эмульгированной в CFA, на мышах BALB/c после однократной иммунизации, по оценке профиля цитокинов. По 10 мышей в каждой группе иммунизировали подкожным введением фторпептидной вакцины(состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл) или фторпептидной вакцины, эмульгированной в полном адъюванте Фрейнда (CFA). Контрольной группе мышей инъецировали композицию, содержавшую только наполнитель. 10 дней спустя мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Спленоциты стимулировали смесью 8 нативных пептидов в концентрации 1 мкг/мл на пептид в полной культуральной среде (RPMI с 10% фетальной бычьей сыворотки) в общем объеме 200 мкл в течение 48 ч при 37 С и атмосфере 5% СО 2. Анализ концентрации цитокинов (интерлейкина-2 (IL-2), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-5 (IL-5), интерферона- (IFN-) и фактора некроза опухолей (TNF в культуральных надосадочных жидкостях стимулированных клеток осуществляли с использованием мышиного цитометрического набора для анализа массива данных (СВА; BD Biosciences,UK) согласно инструкциям производителя и анализировали с использованием проточного цитометраFascCanto II. Стандартные кривые определяли для каждого цитокина в пределах 2,5-2500 пг/мл. Нижняя граница обнаружения для СВА, согласно инструкциям производителя, составляет 2,5-3,2 пг/мл, в зависимости от анализируемого вещества. Результаты соответствуют средним величинамстандартная ошибка, рассчитанным для каждой группы мышей для каждого цитокина. Результаты выражены в виде средней концентрации цитокина в пг/мл. Фиг. 7 показывает сравнение подкожного и внутрикожного путей введения фторпептидной вакцины на мышах BALB/c, после однократной иммунизации: анализ ex vivo IFN- ELIspot. По десять мышей в каждой группе иммунизировали подкожным (п/к) или внутрикожным (в/к) введением фторпептидной вакцины (состоявшей из 8 помещенных в композицию фторпептидов в дозе 1 нмоль на фторпептид в 100 мкл). Контрольная группа получала композицию, содержавшую только наполнитель, подкожно. Спустя 10 дней мышей умерщвляли смещением шейных позвонков. Селезенки удаляли и изготавливали суспензии из одиночных клеток селезенки от каждой мыши. Анализы ELIspot мышиного IFN- (Mabtech, Швеция) осуществляли согласно инструкциям производителя. Клетки селезенки (5105) стимулировали в двух повторностях 8 отдельными нативными пептидами в концентрации 10 мкг/мл на пептид в полной культуральной среде (RPMI с 10% фетальной бычьей сыворотки) в общем объеме 200 мкл в течение 18 ч при 37 С и атмосфере 5% СО 2. Пятна подсчитывали с использованием ридера CTL-immunospot. Для каждой мыши суммировали общее количество пятен для всех 8 пептидов, и величину контрольных лунок(только среда) вычитали 8 раз. Результаты соответствуют среднему количествустандартная ошибка образующих пятна клеток (SFC) на миллион внесенных клеток селезенки. Пример 1. Примеры пептидов. Кандидаты для конъюгирования с фторуглеродным вектором для включения в профилактическую или терапевтическую вакцину против гриппа могут включать в себя один или более следующих пептидов или их фрагментов или гомологов (включая соответствующие согласованные, анцестральные последовательности или последовательности центрального дерева, как описано в базе данных последовательностей Национальной лаборатории гриппа в Лос-Аламосе (Macken, С., Lu, H., Goodman, J.,Boykin, L.,"The value of a database in surveillance and vaccine selection", в Options for the Control of Influenza IV.A.D.M.E. Osterhaus, N. CoxA.W. Harapson (изд.), 2001, 103-106), или в ресурсах вирусов гриппа NCBI) или их натуральных и ненатуральных вариантов, не обязательно исключительно. Конкретные примеры подходящих пептидов представлены ниже, с использованием стандартного однобуквенного кода. Гомологи имеют по меньшей мере 50% идентичность по сравнению со стандартной последовательностью. Предпочтительно гомолог имеет 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентичность с последовательностью, встречающейся в естественных условиях. Использование ненатуральных аминокислот не должно мешать способности пептида связываться с рецепторами МНС класса I или II. Фрагменты указанных последовательностей, которые содержат один или более эпитопов, также представляют собой пептиды-кандидаты для прикрепления к фторуглеродному вектору. Указанные последовательности были выбраны из согласованных последовательностей вируса гриппа А. Указан белок вируса гриппа и позиция пептида в указанном белке. Белковые последовательности были отобраны из ресурса вирусов гриппа. Следующие последовательности были выбраны из согласованных последовательностей вируса гриппа В. Указан белок вируса гриппа и позиция пептида в указанном белке. Белковые последовательности были отобраны из ресурса вирусов гриппа. Пептиды-кандидаты для включения в профилактическую или терапевтическую вакцину против гриппа могут представлять собой пептиды из любого из вирусных белков гемагглютинина, нейраминидазы, матриксного белка (M1), М 2, нуклеопротеина (NP), PA, PB1, РВ 2, NS1 или NS2 в любой комбинации. Синтез фторпептидов и нативных пептидов. 8 нативных пептидов и 8 фторпептидов (выбранных из списка пептидов, представленного в настоящем документе, SEQ ID NO:1-65) получали с использованием твердофазного синтеза пептидов(SPPS). Все пептиды синтезировали на амидной PEG смоле Rink с использованием стандартной группы 9-флуоренилнетоксикарбонила (Fmoc). Сборку пептидной цепи осуществляли на смоле путем повторяющегося удаления защитной группы Fmoc воздействием 20% пиперидина/N,N-диметилформамида в течение 30 мин и присоединения аминокислоты с использованием 1,3-диизопропилкарбодиимида/1 гидроксибензотриазола/N-метилморфолина в течение 120 мин. Нингидриновый тест осуществляли после каждого присоединения, для проверки эффективности присоединения. После добавления N-концевого остатка лизина блоки смолы расщепляли, чтобы осуществить (1) на первой половине смолы инкорпорацию фторуглеродной цепи 2 Н, 2 Н, 3 Н, 3 Н-перфторундекановой кислоты (C8F17 (СН 2)2 СООН) в эпсилонцепь N-концевого лизина для получения фторпептида, (2) на второй половине смолы ацетилирование эпсилон-цепи N-концевого лизина для получения нативного пептида. Смолы промывали и сушили, затем обрабатывали реагентом K для отщепления и удаления защитных групп боковых цепей. Чистоту оценивали с использованием ВЭЖХ-ОФ, и она превышала 92% для всех пептидов. Подвергнутые лиофильной сушке фторпептиды получали в атмосфере азота и хранили при -20 С. Стабильность фторпептидов в условиях хранения подтверждали с использованием ВЭЖХ-ОФ и LC-MS в течение 6 месяцев. Изготовление вакцинных доз. 8 лиофилизированных фторпептидов (фторпептид 1, фторпептид 2, фторпептид 3, фторпептид 4,фторпептид 5, фторпептид 6, фторпептид 7 и фторпептид 8) или 8 лиофилизированных эквивалентных нативных пептидов (пептид 1, пептид 2, пептид 3, пептид 4, пептид 5, пептид 6, пептид 7 и пептид 8) помещали в композицию для создания изомолярной композиции, с нейтральной, в общих чертах, величиной рН для парентеральной доставки. Последовательности пептидных частей гриппа в конструкциях были следующими:Harlan (UK). Инъекции делали подкожно с использованием 1 мл шприца и иголки 22G. Иммунизацию осуществляли таким образом, что мыши получали или одну иммунизацию (примирование) или две иммунизации (примирование/повторная иммунизация). Иммунизацию осуществляли с 14-дневным интервалом между инъекциями. Фторпептидная вакцина является сильно иммуногенной и превосходит нативные пептиды у мышейBALB/c и CB6F1. Иммуногенность фторпептидной вакцины (смеси 8 фторпептидов, описанной выше) сравнивали с нативным пептидным эквивалентом (смесью 8 немодифицированных пептидов, называемых нативными пептидами, как описано выше) на мышах BALB/c и CB6F1. В исследовании также сравнивали иммуногенность обеих композиций с использованием схемы примирования или примирования/повторной иммунизации. Обе композиции вводили подкожно, без адъюванта, мышам BALB/c и CBF6. Мышей иммунизировали дозой фторпептидной вакцины 1 нмоль/фторпептид (всего 8 нмоль для 8 фторпептидов) или нативного пептидного вакцинного эквивалента в дозе 1 нмоль/пептид (всего 8 нмоль для 8 нативных пептидов). Ни один вакцинный препарат не содержал адъювантов. Через 10 дней после последней иммунизации клетки селезенки повторно стимулировали каждым отдельным нативным пептидом в концентрации 10 мкг/мл и оценивали с использованием анализа IFN- ELIspot. Согласно анализам ELIspot exvivo (фиг. 1 и 2) иммуногенность фторпептидной вакцины превосходила иммуногенность только наполнителя и нативного пептидного вакцинного эквивалента после схемы примирования-повторной иммунизации (Р 0,001). Результаты также показывают большое увеличение количества образующих пятна клеток при использовании схемы примирования-повторной иммунизации по сравнению с лишь однократной иммунизацией фторпептидной вакциной (фиг. 1 и 2). Указанные результаты показывают собственные адъювантные свойства фторуглеродной цепи, соединенной с пептидными последовательностями. Фторпептидная вакцина индуцирует надежный мультиэпитопный Т-клеточный ответ у мышей BALB/c иCB6F1. Иммуногенность фторпептидной вакцины (смеси 8 фторпептидов, описанной выше) сравнивали с нативным пептидным эквивалентом (смесью 8 немодифицированных пептидов, называемых нативными пептидами, как описано выше) на мышах BALB/c и CB6F1. В исследовании также сравнивали иммуногенность обеих композиций с использованием схемы примирования и примирования/повторной иммунизации. Обе композиции вводили подкожно, без адъюванта, мышам BALB/c и CB6F1. Мышей иммунизировали дозой фторпептидной вакцины, содержавшей 1 нмоль/фторпептид (всего 8 нмоль для 8 фторпептидов), нативного пептидного вакцинного эквивалента в дозе 1 нмоль/пептид (всего 8 нмоль для 8 нативных пептидов). Ни один вакцинный препарат не содержал адъювантов. Контрольная группа состояла из мышей, иммунизированных только наполнителем. Через 10 дней после иммунизации клетки селезенки повторно стимулировали каждым отдельным нативным пептидом в концентрации 10 мкг/мл и оценивали с использованием анализа IFN- ELIspot. Фторпептидная вакцина индуцировала пептидспецифические ответы против 5 из 8 пептидов у мышей BALB/c и 7 из 8 пептидов у мышей CB6F1, которые превосходят ответы, индуцированные вакцинным эквивалентом (немодифицированными пептидами). Это показывает, что вакцинация фторпептидами может индуцировать иммунологический ответ,- 23018765 который как качественно, так и количественно превосходит ответ на ее нативный пептидный эквивалент. Фторпептидная вакцина индуцирует Th1 цитокиновый профиль, зависящий от испытуемого мышиного штамма. Иммуногенность фторпептидной вакцины (смеси 8 фторпептидов, описанной выше) сравнивали с нативным пептидным эквивалентом (смесью 8 немодифицированных пептидов, как описано выше) на мышах BALB/c и CB6F1. Композиции инъецировали подкожно, без адъюванта, мышам BALB/c иCB6F1. Мышей иммунизировали дозой фторпептидной вакцины, содержавшей 1 нмоль/фторпептид (всего 8 нмоль для 8 фторпептидов), нативного пептидного вакцинного эквивалента в дозе 1 нмоль/пептид(всего 8 нмоль для 8 нативных пептидов). Ни один вакцинный препарат не содержал адъювантов. Через 10 дней после последней иммунизации клетки селезенки повторно стимулировали смесью 8 нативных пептидов в концентрации 1 мкг/мл на пептид. Через 48 ч после стимуляции культуральные надосадочные жидкости оценивали на цитокины посредством мультиплексного анализа гранул (СВА). Результаты показывают, что цитокиновый профиль у мышей CBF6 подчиняется продукции IFN- и значительной продукции TNF-, выдвигающей на первый план Th1 профиль (фиг. 4). Указанный управляемый Th1 цитокиновый профиль был более выраженным по сравнению с мышами BALB/c благодаря более низкой интенсивности указанных ответов Th1 по сравнению с мышами CB6F1 (что также наблюдалось с использованием IFN- ELIspot, см. фиг. 1 и 2) и повышает цитокины Th2. Тем не менее, усиленный ответ Th1 наблюдался у мышей BALB/c, иммунизированных фторпептидами, по сравнению с их нативным пептидным эквивалентом. Фторпептидная вакцина стимулирует Т-клетки CD4+ и CD8+, продуцирующие IFNВнутриклеточное цитокиновое окрашивание на IFN- использовали для получения информации о частоте пептид-специфичных Т-клеток CD4+ и CD8+, продуцирующих IFN-. Мышей иммунизировали фторпептидной вакциной (смесью 8 фторпептидов, описанной выше) и оценивали спленоциты CD4+ илиCD8+ на внутриклеточное цитокиновое окрашивание, с использованием проточной цитометрии, после короткого периода стимуляции смесью 8 нативных пептидов (вакциной). Результаты показывают, что иммунизация мышей фторпептидной вакциной способна вызывать появление пептид-специфичных Тклеток CD4+ и CD8+, продуцирующих IFN-, с частотой 0,5-2,6% (фиг. 5). Это подтверждает, что фторпептиды затрагивают пептиды, осуществляющие процессинг антигенов МНС класса I и II, если пептиды содержат релевантные эпитопы МНС класса I и II. Пример 2. Иммунные ответы, вызванные фторпептидной вакцинацией, усиливаются комбинацией с адъювантом. Иммуногенность фторпептидной вакцины (смеси 8 фторпептидов, описанной выше) сравнивали с иммуногенностью фторпептидной вакцины в присутствии адъюванта, полного адъюванта Фрейнда(FCA). Фторпептидную вакцину (1 нмоль на пептид) и фторпептидную вакцину (1 нмоль на пептид),эмульгированную в CFA, использовали для иммунизации мышей BALB/c. Через 10 дней после иммунизации спленоциты стимулировали отдельными пептидами в концентрации 10 мкг/мл. Спустя 48 ч культуральные надосадочные жидкости собирали и тестировали на цитокины посредством мультиплексного анализа цитокинов (СВА). Результаты показывают, что использование CFA в качестве дополнительного адъюванта, может значительно усиливать продукцию цитокинов Th1 (IFN- и IL-2), не влияя на продукцию цитокинов Th2 (IL-4, IL-5) (фиг. 6). Таким образом, ответы Th1, индуцированные фторпептидной вакцинацией, предпочтительно усиливаются комбинацией с адъювантом во время иммунизации. Подкожный и внутрикожный пути введения фторпептидной вакцины могут индуцировать иммунные ответы Иммуногенность фторпептидной вакцины (смеси 8 фторпептидов, описанной выше) сравнивали при использовании внутрикожного или подкожного путей введения на мышах BALB/c. Через 10 дней после иммунизации спленоциты стимулировали отдельными пептидами в концентрации 10 мкг/мл и оценивали на ех vivo продукцию IFN- посредством ELISPOT. Результаты показывают, что подкожный и внутрикожный пути введения фторпептидов являются подходящими для индукции надежных антигенспецифичных ответов (фиг. 7). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Конструкция "фторуглеродный вектор/антиген", имеющая структуру CmFn-CyHx-(Sp)-R, или ее производные, в которой m=3-30, n2m+1, y=0-15, x2y, (m+y)=3-30, Sp представляет собой необязательную химическую спейсерную часть, a R представляет собой иммуногенный пептид вируса гриппа, выбранный из и их гомологов и комбинаций, где указанные гомологи имеют по меньшей мере 50% идентичностьNO:35. 2. Конструкция "фторуглеродный вектор/антиген" по п.1, где пептид выбран из SEQ ID NO:1, SEQ 4. Конструкция "фторуглеродный вектор/антиген" по п.1, в которой R включает множество эпитопов пептидов белка вируса гриппа и/или слитых белков белка вируса гриппа. 5. Фармацевтическая композиция, включающая одну или более конструкций "фторуглеродный вектор/антиген" по любому из пп.1-4, необязательно, вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами, разбавителями или адъювантами. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, составленная для парентерального, перорального, окулярного, ректального, назального, чрескожного, местного или вагинального введения. 7. Фармацевтическая композиция по п.5, имеющая форму жидкости, эмульсии, твердого препарата,аэрозоля или газа. 8. Фармацевтическая композиция по п.5, включающая адъювант, в которой адъювант выбран из:(1) натуральных или полученных синтетическим путем очищенных продуктов натуральных компонентов бактерий, таких как адъювант Фрейнда и его производные, производные мурамилдипептида(2) адъювантных или потенцирующих агентов, таких как сапонины, соли алюминия и цитокины;(4) бактериальных токсинов и анатоксинов. 9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-8, включающая от 2 до 20 конструкций "вектор-антиген" по любому из пп.1-4. 10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-9, которая включает по меньшей мере две конструкции "вектор-антиген", где первая конструкция включает пептидную последовательность вируса гриппа а вторая конструкция включает пептидную последовательность вируса гриппа 11. Фармацевтическая композиция по п.9 или 10, включающая 5, 6, 7 или 8 конструкций "векторантиген" по любому из пп.1-4. 12. Фармацевтическая композиция по п.11, включающая 5, 6, 7 или 8 конструкций "векторантиген", которые включают следующие пептидные последовательности вируса гриппа: 13. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.5-12 в производстве лекарственного средства для лечения гриппа или иммунизации. 14. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.5-12 в производстве лекарственного средства для стимуляции иммунного ответа у человека или животного. 15. Применение по п.13 или 14, где лекарственное средство предназначено для применения в комбинации с противогриппозным лекарственным средством или в комбинации с противогриппозной вакциной, содержащей гемагглютинин, путем одновременного или раздельного введения. 16. Применение по п.15, где противогриппозное лекарственное средство представляет собой ингибитор нейраминидазы. 17. Способ получения фармацевтической композиции по любому их пп.5-12, включающий комбинирование одной или более фторуглеродных конструкций по любому из пп.1-4 с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями, разбавителями или адъювантами.