Фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое моноклональное антитело к cd40, и их применение
Номер патента: 18301
Опубликовано: 30.07.2013
Авторы: Лю Сяофэн, Чэнь Баолю, Окхамафе Огастус, Арая Кидисти
Формула / Реферат
1. Стабильная жидкая фармацевтическая композиция, содержащая
антагонистическое моноклональное антитело к CD40 в качестве обладающего терапевтической или профилактической активностью компонента, где моноклональное антитело обладает способностью специфически связываться с человеческим антигеном CD40, экспрессируемым на поверхности человеческой В-клетки, и не обладает значительной агонистической активностью при связывании с антигеном CD40, экспрессируемым на поверхности В-клетки;
аргинин в его кислотной форме (аргинин-HCl) в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотонической; и
забуферивающий агент для поддержания значения рН композиции на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0, где забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты,
где моноклональное антитело к CD40 выбрано из группы, включающей
а) моноклональное антитело CHIR-12.12, полученное из линии клеток гибридомы ATCC No. PTA-5543;
б) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и где указанная тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:5;
в) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает вариабельную и константную области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO:2, и где указанная тяжелая цепь включает вариабельную и константную области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO:4 или в SEQ ID NO:5;
г) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, и где указанная тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:3; и
д) моноклональное антитело по любому из пп. а), б), в) и г), где указанное антитело получено рекомбинантным путем в линии клеток СНО,
где концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 до примерно 100 мМ и где композиция содержит аргинин-HCl в концентрации от примерно 50 до примерно 200 мМ.
2. Композиция по п.1, осмоляльность которой составляет от примерно 240 до примерно 360 ммолей/кг.
3. Композиция по п.1, в которой концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 до примерно 20 мМ.
4. Композиция по п.3, в которой концентрация забуферивающего агента составляет примерно 10 мМ.
5. Композиция по одному из пп.1-4, в которой забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты.
6. Композиция по п.5, которая имеет значение рН, составляющее примерно 5,5.
7. Композиция по п.1, содержащая аргинин-HCl в концентрации от примерно 100 до примерно 175 мМ.
8. Композиция по п.7, содержащая аргинин-HCl в концентрации примерно 150 мМ.
9. Композиция по п.3, в которой концентрация забуферивающего агента составляет примерно 10 мМ и которая имеет значение рН примерно 5,5.
10. Композиция по п.9, содержащая аргинин-HCl в концентрации примерно 150 мМ.
11. Композиция по п.1, которая дополнительно содержит поверхностно-активное вещество.
12. Композиция по п.11, в которой поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20.
13. Композиция по п.12, в которой концентрация полисорбата 20 составляет примерно 0,001 до примерно 1,0% (мас./об.).
14. Композиция по п.13, где концентрация полисорбата 20 составляет от примерно 0,025 до примерно 0,1% (мас./об.).
15. Композиция по п.1 или 11, дополнительно содержащая метионин в концентрации от примерно 0,5 до примерно 20,0 мМ.
16. Композиция по п.15, где концентрация метионина составляет от примерно 1,0 до примерно 20,0 мМ.
17. Композиция по п.16, где концентрация метионина составляет примерно 5,0 мМ.
18. Композиция по любому из пп.1-17, в которой антагонистическое моноклональное антитело к CD40 содержится в концентрации от примерно 0,1 до примерно 50,0 мг/мл.
19. Композиция по п.18, в которой антагонистическое моноклональное антитело к CD40 содержится в концентрации от примерно 1,0 до примерно 35,0 мг/мл.
20. Композиция по п.19, в которой антагонистическое моноклональное антитело к CD40 содержится в концентрации от примерно 10,0 до примерно 35,0 мг/мл.
21. Композиция по п.1, которая является стабильной при хранении при температуре от примерно 2°С до примерно 8°С в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 18 месяцев.
22. Композиция по п.1, которая является стабильной при хранении при температуре 25°С в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 3 месяца.
23. Композиция по п.2, которая содержит аргинин-HCl в концентрации примерно 150 мМ и забуферивающий агент в концентрации от примерно 5 до примерно 20 мМ, где композиция имеет значение рН от примерно 5,0 до примерно 6,0 и осмоляльность от примерно 250 до примерно 330 ммолей/кг.
24. Композиция по п.1, которая дополнительно содержит метионин или полисорбат 20, или метионин и полисорбат 20, где метионин, когда содержится в композиции, имеет концентрацию от примерно 0,5 до примерно 20,0 мМ, и где полисорбат 20, когда он содержится в композиции, имеет концентрацию от примерно 0,025 до примерно 0,1% (мас./об.).
25. Композиция по п.23 или 24, в которой антагонистическое моноклональное антитело к CD40 содержится в концентрации от примерно 10,0 до примерно 35,0 мг/мл.
26. Композиция по п.25, в которой антагонистическое моноклональное антитело к CD40 представляет собой моноклональное антитело CHIR-12.12, полученное из линии клеток гибридомы АТСС No. PTA-5543.
27. Способ лечения индивидуума, имеющего раковое или предраковое состояние, ассоциированное с клетками, экспрессирующими CD40, который заключается во введении указанному индивидууму терапевтически эффективного количества композиции по любому из пп.1-26.
28. Способ по п.27, согласно которому рак характеризуется неопластическим ростом В-клеток.
29. Способ по п.28, согласно которому рак выбран из группы, включающей неходжкинскую лимфому, хронический лимфоцитарный лейкоз, множественную миелому, В-клеточную лимфому, высокозлокачественную В-клеточную лимфому, В-клеточную лимфому промежуточной степени злокачественности, В-клеточную лимфому низкой степени злокачественности, острый лимфобластный В-клеточный лейкоз, болезнь Ходжкина, плазмацитому, фолликулярную лимфому, фолликулярную мелкоклеточную лимфому с расщепленными ядрами, фолликулярную крупноклеточную лимфому, фолликулярную лимфому смешанного типа с расщепленными ядрами, диффузную мелкоклеточную лимфому с расщепленными ядрами, диффузную мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, пролимфоцитарный лейкоз, лимфоплазмоцитарную лимфому, лимфому маргинальной зоны, лимфому лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми оболочками, моноцитоидную В-клеточную лимфому, лимфому селезенки, лейкемический ретикулёз, диффузную крупноклеточную лимфому, медиастинальную крупноклеточную В-клеточную лимфому, лимфоматоидный гранулематоз, интраваскулярный лимфоматоз, диффузную смешанно-клеточную лимфому, диффузную крупноклеточную лимфому, иммунобластную лимфому, лимфому Беркитта, СПИД-связанную лимфому, макроглобулинемию Вальденстрома, лимфому из клеток мантии и болезнь тяжелых цепей.
30. Способ по п.27, согласно которому рак представляет собой гематологическое злокачественное заболевание не-В-клеточной природы.
31. Способ по п.30, согласно которому злокачественное заболевание выбрано из группы, включающей острые лейкозы, миелобластные лейкозы, острые миелоцитарные лейкозы, промиелоцитарный лейкоз, миеломоноцитарный лейкоз, моноцитарный лейкоз, эритролейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз и истинную полицитенемию.
32. Способ по п.27, согласно которому рак представляет собой солидную опухоль, которая содержит неопластические клетки, экспрессирующие антиген CD40.
33. Способ по п.32, согласно которому солидная опухоль выбрана из группы, включающей карциному легкого, карциному молочной железы, карциному яичника, карциному кожи, карциному ободочной кишки, карциному мочевого пузыря, карциному печени, карциному желудка, карциному предстательной железы, почечно-клеточную карциному, носоглоточную карциному, плоскоклеточную карциному, папиллярную карциному щитовидной железы, карциному шейки матки и различные типы саркомы.
34. Способ по п.27, согласно которому предзлокачественное состояние представляет собой моноклональную гаммапатию неопределенного значения (МГНЗ).
35. Способ лечения индивидуума, имеющего воспалительное заболевание или аутоиммунное заболевание, которое ассоциировано с клетками, экспрессирующими CD40, включающий введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества композиции по любому из пп.1-26.
36. Способ по п.35, согласно которому воспалительное заболевание или аутоиммунное заболевание выбрано из группы, включающей системную красную волчанку (СКВ), дискоидную волчанку, люпус-нефрит, саркоидоз, юношеский артрит, ревматоидный артрит, псориатический артрит, синдром Рейтера, анкилозирующий спондилоартрит, подагрический артрит, отторжение трансплантата органа или ткани, заболевание "трансплантат против хозяина", рассеянный склероз, синдром гипер-IgE, нодозный полиартериит, первичный билиарный цирроз, воспалительное заболевание кишечники, болезнь Крона, глютеновую болезнь (глютен-чувствительная энтеропатия), аутоиммунный гепатит, пернициозную анемию, аутоиммунную гемолитическую анемию, псориаз, склеродерму, тяжелую псевдопаралитическую миастению, аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру, аутоиммунный тироидит, болезнь Грейвса, тироидит Хашимото, болезнь иммунного комплекса, синдром хронической усталости и иммунной дисфункции (CFIDS), полимиозит и дерматомиозит, криоглобулинемию, тромболиз, кардиомиопатию, пузырчатку обыкновенную, легочный интерстициальный фиброз, сахарный диабет типа I и типа II, гиперчувствительность типа 1, 2, 3 и замедленного типа 4, аллергию или аллергические нарушения, астму, синдром Черджа-Штросса (аллергический гранулёматоз), атопический дерматит, аллергический и воспалительный контактный дерматит, крапивницу, IgE-опосредуемую аллергию, атеросклероз, васкулит, идиопатические воспалительные миопатии, гемолитические заболевания, болезнь Альцгеймера и хроническую воспалительную демиелизирующую полиневропатию.
37. Способ повышения стабильности антагонистического моноклонального антитела к CD40 в жидкой фармацевтической композиции, включающий приготовление композиции путем объединения указанного моноклонального антитела к CD40, аргинина в его кислой форме (аргинин-HCl) в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотоничной, и забуферивающего агента для поддержания значения рН композиция на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0, где забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, причем указанное моноклональное антитело к CD40 выбрано из группы, включающей:
а) моноклональное антитело CHIR-12.12, полученное из линии клеток гибридомы АТСС No. PTA-5543;
б) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и где указанная тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или в SEQ ID NO:5;
в) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает вариабельную и константную области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO:2, и где указанная тяжелая цепь включает вариабельную и константную области тяжелой цепи SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:5;
г) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, и где указанная тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQIDNO:3; и
д) моноклональное антитело по любому из пп. а), б), в) и г), где указанное антитело получено рекомбинантным путем в линии клеток СНО,
где концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 до примерно 100 мМ и где композиция содержит аргинин-HCl в концентрации от примерно 50 до примерно 200 мМ.
38. Способ получения жидкой фармацевтической композиции, которая содержит антагонистическое моноклональное антитело к CD40, включающий объединение указанного моноклонального антитела к CD40, аргинина в его кислотной форме (аргинин-HCl) в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотоничной, и забуферивающего агента для поддержания значения рН композиция на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0, где забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, причем указанное моноклональное антитело к CD40 выбрано из группы, включающей:
а) моноклональное антитело CHIR-12.12, полученное из линии клеток гибридомы ATCCNo. PTA-5543;
б) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и где указанная тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:5;
в) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает вариабельную и константную области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO:2, и где указанная тяжелая цепь включает вариабельные и константные области тяжелой цепи последовательность SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:5;
г) моноклональное антитело, содержащее легкую и тяжелую цепи, где указанная легкая цепь включает аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, и где указанная тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:3; и
д) моноклональное антитело по любому из пп. а), б), в) и г), где указанное антитело получено рекомбинантным путем в линии клеток СНО,
где концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 до примерно 100 мМ и где композиция содержит аргинин-HCl в концентрации от примерно 50 до примерно 200 мМ.
39. Способ по п.37 или 38, согласно которому композиция имеет осмоляльность от примерно 240 до примерно 360 ммолей/кг.
40. Способ по п.37 или 38, согласно которому концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 до примерно 20 мМ, а концентрация аргинина-HCl составляет примерно 100 до примерно 175 мМ.
41. Способ по п.40, согласно которому концентрация забуферивающего агента составляет примерно 10 мМ, а концентрация аргинина-HCl составляет примерно 150 мМ.
42. Способ по любому из пп.37-41, в котором забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия.
43. Способ по п.42, согласно которому композиция имеет значение рН примерно 5.5.
44. Способ по п.37 или 38, согласно которому приготавливают композицию, которая дополнительно содержит метионин или полисорбат 20 или и метионин, и полисорбат 20, где метионин, когда он содержится в композиции, имеет концентрацию от примерно 0,5 до примерно 20,0 мМ, и где полисорбат 20, когда он содержится в композиции, находится в концентрации от примерно 0,025 до примерно 0,1% (мас./об.).
45. Способ по любому из пп.37-44, согласно которому антагонистическое моноклональное антитело к CD40 содержится в композиции в концентрации от примерно 0,1 до примерно 50,0 мг/мл.
46. Способ по п.45, согласно которому антагонистическое моноклональное антитело к CD40 содержится в композиции в концентрации от примерно 10,0 до примерно 35,0 мг/мл.
47. Стабильная жидкая фармацевтическая композиция, содержащая антагонистическое моноклональное антитело CHIR-12.12 к CD 40, полученное из линии клеток гибридомы АТСС No. PTA-5543, в качестве обладающего терапевтической или профилактической активностью компонента, аргинин в его кислотной форме (аргинин-HCl) в концентрации от примерно 50 до примерно 200 мМ, и забуферивающий агент для поддержания значения рН композиции на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0, где забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 до примерно 20 мМ.
48. Способ лечения индивидуума, имеющего раковое или предраковое состояние, которое ассоциировано с клетками, экспрессирующими CD40, заключающийся в том, что указанному индивидууму вводят терапевтически эффективное количество композиции по п.47.
49. Способ лечения индивидуума, имеющего воспалительное заболевание или аутоиммунное заболевание, которое ассоциировано с клетками, экспрессирующими CD40, заключающийся в том, что указанному индивидууму вводят терапевтически эффективное количество композиции по п.47.
50. Способ повышения стабильности антагонистического моноклонального антитела CHIR-12.12 к CD40, полученного из линии клеток гибридомы АТСС No. PTA-5543, в жидкой фармацевтической композиции, включающий приготовление композиции путем объединения указанного моноклонального антитела с аргинином в его кислотной форме (аргинин-HCl) в концентрации от примерно 50 до примерно 200 мМ, и забуферивающим агентом для поддержания значения рН композиции на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0, где забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 до примерно 20 мМ.
51. Способ получения жидкой фармацевтической композиции, содержащей антагонистическое моноклональное антитело CHIR-12.12 к CD40, полученное из линии клеток гибридомы АТСС No. PTA-5543, включающий объединение указанного моноклонального антитела с аргинином в его кислотной форме (аргинин-HCl) в концентрации от примерно 50 до примерно 200 мМ, и забуферивающим агентом для поддержания значения рН композиции на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0, где забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 до примерно 20 мМ.
Текст
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЕ МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО К CD40, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В патенте описаны стабильные жидкие фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое антитело к CD40 в качестве обладающего терапевтической или профилактической активностью компонента, и способы, которые можно применять для их получения. Эти композиции содержат антагонистическое антитело к CD40, забуферивающий агент для поддержания значения рН композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, аргинин-HCl в количестве, достаточном для того, чтобы сделать жидкую композицию практически изотонической. Предлагаемые в изобретении стабильные жидкие фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое антитело к CD40, можно применять в способах лечения пролиферативных заболеваний и заболеваний, которые имеют аутоиммунный и/или воспалительный компонент. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к фармацевтическим препаративным формам, более конкретно к стабильным жидким фармацевтическим композициям, содержащим антагонистические антитела к CD40,которые предназначены для пролиферативных заболеваний и заболеваний, имеющих аутоиммунный или воспалительный компонент. Предпосылки создания изобретения Благодаря достигнутым в настоящее время успехам в разработке технологии генной инженерии созданы различные биологически активные полипептиды в количествах, достаточно больших для их применения в качестве лекарственных средств. Однако полипептиды могут терять биологическую активность из-за физической нестабильности, в том числе из-за денатурации и образования растворимых и нерастворимых агрегатов, и из-за различных видов химической нестабильности, таких как гидролиз,окисление и деамидирование. На стабильность полипептидов в жидких фармацевтических препаративных формах могут оказывать воздействие, например, такие факторы, как значение рН, ионная сила, температура, повторяющиеся циклы замораживания-оттаивания и механические сдвиговые усилия, возникающие, например, в процессе обработки. Образование агрегатов и потеря биологической активности могут являться также результатом физического перемешивания и взаимодействий молекул полипептидов в растворе и на поверхностях раздела жидкость-воздух в сосудах для хранения. Другие конформационные изменения могут происходить в полипептидах, адсорбированных на поверхностях раздела воздухжидкость и поверхностях раздела твердое вещество-жидкость в процессе сокращения-удлинения поверхностей раздела в результате перемешивания в процессе транспортировки или других процессов. Такое перемешивание может приводить к "запутыванию", агрегации, образованию частиц белка и, в конце концов, к его осаждению с другими адсорбированными белками. Общий обзор данных о стабильности белковых фармацевтических агентов приведен, например, у Manning и др., Pharm. Res. 6, 1989, cc. 903918, и у Wang и Hanson, J. Parenteral Sci. Tech. 42, 1988, с. 14. Нестабильность содержащих полипептиды жидких фармацевтических препаративных форм привела к тому, что эти препаративные формы упаковывают в лиофилизированном виде вместе с жидкой средой, пригодной для восстановления. Хотя лиофилизация повышает стабильность при хранении композиции, у многих полипептидов обнаружена пониженная активность либо в процессе их хранения в высушенном состоянии (Pikal, Biopharm. 27, 1990, сс. 26-30), либо из-за образования агрегатов или потери каталитической активности при восстановлении в жидкую форму (см., например, Carpenter и др., Develop. Biol. Standard 74, 1991, cc. 225-239; Broadhead и др., Drug Devel. Ind. Pharm. 18, 1992, cc. 1169-1206;Roser, Biopharm. 4, 1991, cc. 47-53). Хотя применение аддитивов повышает стабильность высушенных белков, многие повторно гидратированные препаративные формы все еще включают неприемлемые или нежелательные количества неактивного агрегированного белка (см., например, Townsend и DeLuca, J.Pharm. Sci. 80, 1983, cc. 63-66; Hora и др., Pharm. Res. 9, 1992, cc. 33-36; Yoshiaka и др., Pharm. Res, 10,1993, сc. 687-691). Кроме того, необходимость в восстановлении является неудобной, и она сопряжена с возможностью неправильной дозировки. К фармацевтически приемлемым полипептидам относятся полученные рекомбинантно моноклональные антитела. Среди этого класса терапевтических агентов антагонистические антитела к CD40,мишенью для которых служит представитель семейства TNF-рецепторов CD40, являются наиболее перспективными для лечения связанных с В-клетками злокачественных заболеваний и негематологических злокачественных заболеваний, а также болезней, которые имеют аутоиммунный и/или воспалительный компонент. Рецептор CD40 представляет собой расположенный на клеточной поверхности антиген с молекулярной массой 50-55 кДа, который присутствует на поверхности как здоровых, так и неопластических человеческих В-клеток, дендритных клеток, моноцитов, макрофагов, CD8+-Т-клеток, эндотелиальных клеток, моноцитов и эпителиальных клеток, некоторых эпителиальных карцином и многих плотных опухолей, включая рак легкого, молочной железы, яичника, мочевого пузыря и ободочной кишки. Антиген CD40 экспрессируется также на активированных Т-клетках, активированных тромбоцитах, воспаленных клетках гладких мышц сосудов, эозинофилах, синовиальных мембранах при ревматоидном артрите, кожных фибробластах и других нелимфоидных типах клеток. В зависимости от типа клеток, экспресирующих CD40, лигирование может индуцировать внутриклеточную адгезию, дифференцировку,активацию и пролиферацию. Например, связывание CD40 с родственным лигандом, т.е. CD40L (который обозначают также какCD154), стимулирует пролиферацию и дифференцировку В-клеток в плазматические клетки, производство антител, переключение изотипа и создание В-клеточной памяти. В процессе В-клеточной дифференцировки CD40 экспрессируется на пре-В-клетках, но отсутствует после диффренцировки в плазматические клетки. Экспрессия CD40 на антигенпрезентирующих клетках (АПК) играет важную костимулирующую роль в активации этих клеток. Например, установлено, что агонистические моноклональные антитела к CD40 (МАт) имитируют воздействия Т-клеток-хелперов при В-клеточной активации. В случае присутствия на прикрепленных клетках, экспрессирующих FcRII, эти антитела индуцируют Вклеточную пролиферацию (Banchereau и др., Science 251, 1989, с. 70). Кроме того, агонистические МАт кCD40 могут заменять сигнал Т-клеток-хелперов, который приводит к секреции IgM, IgG и IgE в присутствии IL-4 (Gascan и др., J. Immunol. 147, 1991, с. 8). Кроме того, агонистические МАт к CD40 могут предупреждать запрограммированную гибель клеток (апоптоз) В-клеток, выделенных из лимфатических узлов. Эти и другие данные подтверждают современную теорию о том, что взаимодействие CD40 и CD40L играет основную роль в регуляции как гуморальных, так и клеточно-опосредованных иммунных ответов. В проведенных в последние годы исследованиях выявлена более широкая роль взаимодействияCD40/CD40L в разнообразных физиологических и патологических процессах. Так, связывание CD40 с CD40L и последующая активация передачи сигнала CD40 представляют собой необходимые стадии иммунных ответов; однако нарушение регуляции передачи сигнала CD40 может приводить к заболеванию. Установлено, что путь передачи сигнала CD40 принимает участие в аутоиммунном заболевании (Ichikawa и др., J. Immunol. 169, 2002, сс. 2781-2787 и Moore и др., J. Autoimmun. 19, 2002, сс. 139-145). Кроме того, взаимодействие CD40/CD40L играет важную роль в воспалительных процессах. Например, обнаружена сверхэкспрессия как CD40, так и CD40L в повреждениях при атеросклерозе в организме человека и при вызванном экспериментальным путем атеросклерозе. Стимуляция CD40 индуцирует экспрессию разрушающих матрикс ферментов и экспрессию тканевых факторов в ассоциированных с атеросклеротической бляшкой типах клеток, таких как эндотелиальные клетки,гладкомышечные клетки и макрофаги. Кроме того, стимуляция CD40 индуцирует производство провоспалительных цитокинов, таких как IL-1, IL-6 и IL-8, и адгезионных молекул, таких как ICAM-1 (фактор межклеточной адгезии-1), Е-селектин и VCAM (молекулы адгезии сосудистого эндотелия). Ингибирование взаимодействия CD40/CD40L предупреждает атерогенез на созданных с использованием животных моделях. На моделях, созданных с использованием трансплантатов, установлено, что блокирование взаимодействия CD40/CD40L предупреждает воспаление. Было установлено, что связывание CD40/CD40L обладает синергетическим действием с пептидом амилоида-бета при болезни Альцгеймера, усиливая активацию микроглии, что приводит к нейротоксичности. У пациентов, страдающих ревматоидным артритом (РА), уровень экспрессии CD40 повышается в хондроцитах суставов, таким образом, передача сигнала CD40, по-видимому, принимает участие в производстве вызывающих повреждение цитокинов и матриксных металлопротеиназ (см., Gotoh и др., J. Rheumatol. 31, 2004, сс. 1506-1512). Аналогично этому злокачественные В-клетки из опухолевых типов В-клеточной зародышевой линии экспрессируют CD40 и, вероятно, их выживание и пролиферация зависят от передачи сигнала CD40. Трансформированные клетки пациентов, страдающих В-клеточными лимфомами с низкой степенью злокачественности и высокозлокачественными В-клеточными лимфомами, острым В-клеточным лимфобластным лейкозом, множественной миеломой, хроническим лимфоцитарным лейкозом, макроглобулинемией Вальденстрема и болезнью Ходжкина, экспрессируют CD40. Экспрессия CD40 обнаружена также в 2/3 случаев острого миелобластного лейкоза и в 50% случаев связанных со СПИДом лимфом. Для целого ряда карцином и сарком также характерны высокие уровни экспрессии CD40, хотя роль передачи сигнала CD40 в сочетании с экспрессией CD40 на этих типах раковых клеток менее хорошо изучена. К экспрессирующим CD40 карциномам относится карцинома мочевого пузыря (Paulie и др., J.Immunol. 142, 1989, сс. 590-595; Braesch-Andersen и др., J. Immunol. 142, 1989, сс. 562-567), карцинома молочной железы (Hirano и др., Blood 93, 1999, сс. 2999-3007; Wingett и др., Breast Cancer Res. Treat. 50,1998, сс. 27-36); рак предстательной железы (Rokhlin и др., Cancer Res. 57, 1997, сс. 1758-1768), почечноклеточная карцинома (Kluth и др., Cancer Res. 57, 1997, сс. 891-899), недифференцированная носоглоточная карцинома (UNPC) (Agathanggelou и др., Am. J. Pathol. 147, 1995, сс. 1152-1160), плоскоклеточная карцинома (SCC) (Amo и др., Eur. J. Dermatol. 10, 2000, сс. 438-442; Posner и др., Clin. Cancer Res. 5, 1999,сс. 2261-2270), папиллярная карцинома щитовидной железы (Smith и др., Thyroid 9, 1999, сс. 749-755),кожная злокачественная меланома (van den Oord и др., Am. J. Pathol. 149, 1996, сс. 1953-1961), карцинома желудка (Yamaguchi и др. Int. J. Oncol. 23(6), 2003, сс. 1697-1702) и карцинома печени (см., например,Sugimoto и др., Hepatology 30(4), 1999, сс. 920-926, в указанной публикации обсуждается человеческая печеночно-клеточная карцинома). Данные о экспрессирующих CD40 саркомах представлены, например,у Lollini и др., Clin. Cancer Res. 4(8), 1998, сс. 1843-849, в указанной публикации обсуждается человеческая остеосаркома и саркома Юинга. С учетом потенциальных терапевтических благоприятных воздействий антагонистических антител к CD40 на регуляцию опосредуемой CD40L передачи сигнала CD40 при различных видах рака и аутоиммунных/воспалительных заболеваниях и недостатков препаративных форм этих полипептидов существует необходимость в создании стабильных фармацевтических композиций, содержащих эти антитела. Краткое изложение сущности изобретения Предложены стабильные жидкие фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое антитело к CD40 в качестве обладающего терапевтической или профилактической активностью компонента, и способы, пригодные для их получения. Указанные композиции содержат антагонистическое антитело к CD40, забуферивающий агент для поддержания значения рН композиции на уровне от примерно 5,0 до примерно 7,0 и аргинин-HCl в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотонической. В некоторых вариантах осуществления изобретения забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, антагонистическое антитело кCD40 представляет собой антагонистическое антитело к CD40 CHIR-12.12 или CHIR-5.9 или его антигенсвязывающий фрагмент, композиция содержит аргинин-HCl в качестве придающего изотоничность агента и композиция содержит также неионогенное поверхностно-активное вещество и/или L-метионин в качестве дополнительного стабилизатора. Стабильные жидкие содержащие антагонистическое антитело к CD40 фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, находят применение в способах лечения пролиферативных заболеваний и заболеваний, имеющих аутоиммунный и/или воспалительный компонент. Краткое описание некоторых аспектов, представленных на чертеже(ах) На чертежах показано: на фиг. 1 - воздействие различных буферов на чистоту МАт CHIR-12.12 в препаративных формах,которые хранили при 25 С в течение 3 месяцев или 5 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 2 - воздействие различных буферов на образование агрегатов в различных препаративных формах МАт CHIR-12.12, которые хранили при 25 С в течение 3 месяцев или 5 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 3 - воздействие различных буферов на фрагментацию в различных препаративных формах МАт CHIR-12.12, которые хранили при 25 С в течение 3 месяцев или 5 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 4 - воздействие различных буферов на чистоту МАт CHIR-12.12 в препаративных формах,которые хранили при 40 С в течение 3 месяцев или 5 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 5 - воздействие различных буферов на образование агрегатов в различных препаративных формах МАт CHIR-12.12, которые хранили при 40 С в течение 3 месяцев или 5 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 6 - воздействие различных буферов на фрагментацию в различных препаративных формах МАт CHIR-12.12, которые хранили при 40 С в течение 3 месяцев или 5 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 7 - полученные с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии термограммы МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, содержащих либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности; на фиг. 8 - содержание (в %) мономерной формы МАт CHIR-12.12, сохранившейся в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 25 С в течение 2, 4 или 6 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 9 - количество агрегатов (в %) МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 25 С в течение 2, 4 или 6 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 10 - количество фрагментов (в %) МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 25 С в течение 2, 4 или 6 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 11 - содержание (в %) мономерной формы МАт CHIR-12.12, сохранившейся в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 40 С в течение 2 или 4 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВРанализа; на фиг. 12 - количество агрегатов (в %) МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 40 С в течение 2 или 4 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 13 - количество фрагментов (в %) МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 40 С в течение 2 или 4 месяцев, оцененное с помощью ГФ-ЖХВР-анализа; на фиг. 14 - чистота (в %) МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либоNaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 25 С в течение 2, 4 или 6 месяцев, оцененное с помощью CIEX-ЖХВР-анализа; на фиг. 15 - содержание (в %) кислотных вариантов МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 25 С в течение 2, 4 или 6 месяцев, оцененное с помощью СШХ-ЖХВР-анализа; на фиг. 16 - содержание (в %) основных вариантов МАт CHIR-12.12 в препаративных формах, которые содержали либо NaCl, либо L-аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности, при их хранении при 25 С в течение 2, 4 или 6 месяцев, оцененное с помощью СШХ-ЖХВР-анализа. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение более подробно описано ниже со ссылкой на прилагаемые чертежи, на которых представлены некоторые, но не все варианты осуществления изобретения. Естественно, что заявляемые признаки могут иметь различные формы, а изобретение не ограничено представленными вариантами осуществления изобретения; указанные варианты осуществления изобретения представлены таким образом, чтобы настоящее описание удовлетворяло принятым юридическим требованиям. Многие модификации и другие варианты осуществления изобретения, представленные в настоящем изобретении, как должно быть очевидно специалистам в области, к которой относится настоящее изобретение, обладают ценными свойствами, которые представлены в приведенном ниже описании и прилагаемых чертежах. Таким образом, следует понимать, что объем изобретения не ограничен конкретными описанными вариантами осуществления изобретения, и подразумевается, что модификации и другие варианты осуществления изобретения подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения. Хотя в настоящем описании применяют специфические понятия, их используют только в обычном и соответствующем смысле, а не с целью ограничения. Настоящее изобретение относится к стабильным жидким фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одно антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент в качестве обладающего терапевтической или профилактической активностью компонента, и к способам, пригодным для их получения. Для целей настоящего изобретения подразумевается, что понятие"жидкий" касательно фармацевтических композиций или препаративных форм включает понятие "водный". Под понятием "обладающий терапевтической или профилактической активностью компонент" подразумевается, что антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент специально включены в композицию для получения требуемого терапевтического или профилактического ответа при осуществлении лечения, предупреждения или диагностики заболевания или состояния у индивидуума, когда фармацевтическую композицию вводят этому индивидууму. Под понятием "стабильные" понимают, что фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, обеспечивают физическую и/или химическую стабильность антагонистическому антителу к CD40 или его антигенсвязывающему фрагменту. Это означает, что антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент практически сохраняет физическую и/или химическую стабильность и обладает требуемой биологической активностью, т.е. одним или несколькими видами антагонистической активности, указанной в настоящем описании, включая (но, не ограничиваясь только ими): ингибирование секреции иммуноглобулина здоровыми человеческими периферическими В-клетками, стимулированными Т-клетками; ингибирование выживания и/или пролиферации здоровых человеческих периферических В-клеток, стимулированных Т-клетками линии Jurkat; ингибирование выживания и/или пролиферации здоровых человеческих периферических В-клеток, стимулированных экспрессирующимиCD40L клетками или растворимым лигандом CD40 (sCD40L); ингибирование антиапоптозных внутриклеточных сигналов "выживания" в любых клетках, стимулированных sCD40L или твердофазнымCD40L; ингибирование трансдукции сигнала CD40 в любой клетке при лигировании с sCD40L или твердофазным CD40L; ингибирование пролиферации человеческих злокачественных В-клеток; снижение чувствительности, придание нечувствительности (анергии) и/или переносимости индукции несущимCD40 клеткам-мишеням или клеткам, несущим родственные лиганды CD40, включая (но, не ограничиваясь только ими) Т-клетки и В-клетки; индукция экспансии или активации СО 4+СО 25+-регуляторных Тклеток (см., например, данные об отторжении донорской аллоантигенспецифической ткани при взаимодействии CD40-CD40L, van Maurik и др., J. Immunol. 169, 2002, cc. 5401-5404); цитотоксичность посредством любого механизма (включая (но, не ограничиваясь только ими) антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (ADCC), комплементзависимую цитотоксичность (CDC), понижающую регуляцию пролиферации и/или апоптоз клеток-мишеней); модуляцию секреции цитокинов клеткоймишенью и/или экспрессии молекулы на клеточной поверхности; и их комбинации. Методы мониторинга стабильности белков хорошо известны в данной области (см., например,Jones, Adv. Drug Delivery Rev. 10, 1993, cc. 29-90; Peptide and Protein Drug Delivery, под ред. Lee, изд-воMarcel Dekker, Inc., New York, New York, 1991; и анализы стабильности, приведенные в настоящем описании). В целом, стабильность белков оценивают при выбранной температуре в течение определенного периода времени. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения стабильная содержащая антитело фармацевтическая композиция обеспечивается стабильность антагонистического антитела кCD40 или его антигенсвязывающего фрагмента при хранении при комнатной температуре (примерно 25 С) в течение по меньшей мере 1 месяца, по меньшей мере 3 месяцев или по меньшей мере 6 месяцев,и/или стабильность при хранении примерно при 2-8 С в течение по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев, по меньшей мере 24 месяца. Считается, что белок, такой как антитело, при приготовлении на его основе фармацевтической композиции сохраняет физическую стабильность в данный момент времени, если не обнаружено визуальных признаков (т.е. изменения цвета или потери прозрачности) или измеряемых признаков (например, при использовании гель-фильтрации (ГФ) или рассеяния в УФ-лучах) осаждения, агрегации и/или денатурации в указанной фармацевтической композиции. Касательно химической стабильности считается, что белок, такой как антитело, при приготовлении на его основе фармацевтической композиции, сохраняет химическую стабильность в данный момент времени, если оценка химической стабильности свидетельствует о том, что белок (т.е. антитело) сохраняет представляющую интерес биологическую активность в указанной фармацевтической композиции. Методы мониторинга изменений химической стабильности хорошо известны в данной области и включают (но, не ограничиваясь только ими) методы выявления химически измененных форм белка в результате расщепления, например, с помощью ДСН-ПААГ, ГФ и/или времяпролетной масс-спектрометрии с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией; и расщепления, ассоциированного с изменениями молекулярного заряда (например, ассоциированного с деамидированием), с использованием, например, ионообменной хроматографии (см.,например, методы, приведенные ниже в настоящем описании). Считается, что антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент при приготовлении на его основе фармацевтической композиции сохраняет в данный момент времени требуемую биологическую активность, если отклонение требуемой биологической активности в данный момент от требуемой биологической активности в момент приготовления фармацевтической композиции составляет примерно 30%, предпочтительно примерно 20% по результатам пригодного анализа для определения требуемой биологической активности. Методы анализа для оценки требуемой биологической активности антагонистических антител к CD40 представлены в настоящем описании, а анализы активности их антигенсвязывающих фрагментов можно осуществлять согласно методам, описанным в предварительных заявках, которые озаглавлены "Antagonist Anti-CD40 Monoclonal Antibodies and Methods forTheir Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), поданных 4 ноября 2003 г., 26 ноября 2003 г. и 27 апреля 2004 г., и переуступленных заявок на патент США 60/517337 (досье у патентного поверенногоРР 20107.001 (035784/258442, 60/525579 (досье у патентного поверенногоРР 20107.002 (035784/271525 и 60/565710 (досье у патентного поверенногоРР 20107.003 (035784/277214 соответственно; и международной заявке на патент PCT/US2004/037152(досье у патентного поверенногоРР 20107.004 (035784/282916, которая озаглавлена также "Antagonist Anti-CD40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), поданной 4 ноября 2004 г. и опубликованной как WO 2005/044854; содержание каждого из документов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки (см. также анализы, описанные в предварительной заявке, озаглавленной "Methods for Diagnosisand Treatment of Proliferative Disorders Mediated by CD40 Signaling", "Способы диагностики и лечения пролиферативных заболеваний, опосредуемых передачей сигнала CD40", поданной 9 декабря 2005 г., и переуступленной заявке на патент США 60/749285 (досье у патентного поверенного . РР 028035.0002(035784/304312 и соответствующей международной заявке на патент PCT/US2006/ 019414 (досье у патентного поверенногоРР 028035.0003 (035784/311611, поданной 18 мая 2006 г. и опубликованной какWO 2006/125143; и в предварительной заявке, озаглавленной "Methods for Diagnosis and Treatment of Diseases Having an Autoimmune and/or Inflammatory Component", ("Способы диагностики и лечения заболеваний, имеющих аутоиммунный и/или воспалительный компонент"), поданной 9 декабря 2005 г., переуступленной заявке на патент США 60/749336 (досье у патентного поверенного . РР 028062.0002(035784/304311, и соответствующей международной заявке на патент PCT/US2006/019325 (досье у патентного поверенного . РР 028062.0003 (035784/311608, поданной 18 мая 2006 г., и опубликованной как WO 2006/125117; содержание каждого из документов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Анализы описаны также у Schultze и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 1998, cc. 82008204; Denton и др., Pediatr. Transplant. 2, 1998, cc. 6-15; Evans и др., J. Immunol. 164, 2000, cc. 688-697;Coligan и др., Current Protocols in Immunology 13, 1991, с 12; Kwekkeboom и др., Immunology 79, 1993, cc. 439-444; и US 5674492 и 5847082; содержание которых включено в качестве ссылки. Антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент, на основе которых приготавливают препаративную форму с помощью способов, предлагаемых в настоящем изобретении,можно получать с помощью любого метода, известного в данной области, включая методы, представленные в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент получают рекомбинантно в линии клеток СНО согласно описанному ниже методу. После получения и очистки антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент можно включать в препаративную форму в виде жидкой фармацевтической композиции с помощью описанного ниже способа. Если антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент следует хранить до приготовления на его основе препаративой формы, его можно замораживать, например, при температуре -20 С, а затем подвергать оттаиванию при комнатной температуре для дальнейшего приготовления препаративной формы на его основе. Жидкие фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, содержат антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент в терапевтически или профилактически эффективном количестве. Количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, присутствующее в прерпаративной форме, зависит от пути введения и требуемого объема дозы. Таким образом, в состав фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении,антагонистическое антитело к CD40, например, антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент входят в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 0,5 мг/мл до примерно 40,0 мг/мл, от примерно 1,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, от примерно 1,0 мг/мл до примерно 30,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 25,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до при-5 018301 мерно 20,0 мг/мл, от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 15,0 мг/мл до примерно 25,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения в состав жидких фармацевтических композиций антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент входят в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 5,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 10,0 мг/мл, от примерно 10,0 мг/мл до примерно 15,0 мг/мл, от примерно 15,0 мг/мл до примерно 20,0 мг/мл,от примерно 20,0 мг/мл до примерно 25,0 мг/мл, от примерно 25,0 мг/мл до примерно 30,0 мг/мл, от примерно 30,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, от примерно 35,0 мг/мл до примерно 40,0 мг/мл, примерно от 40,0 мг/мл до примерно 45,0 мг/мл или от примерно 45,0 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл. В других вариантах осуществления изобретения в состав жидких фармацевтических композиций антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент входят в концентрации примерно 15,0 мг/мл,примерно 16,0 мг/мл, примерно 17,0 мг/мл, примерно 18,0 мг/мл, примерно 19,0 мг/мл, примерно 20,0 мг/мл, примерно 21,0 мг/мл, примерно 22,0 мг/мл, примерно 23,0 мг/мл, примерно 24,0 мг/мл, примерно 25,0 мг/мл, примерно 26,0 мг/мл, примерно 27,0 мг/мл, примерно 28,0 мг/мл, примерно 29,0 мг/мл, примерно 30,0 мг/мл, примерно 31,0 мг/мл, примерно 32,0 мг/мл, примерно 33,0 мг/мл, примерно 34.0 мг/мл или примерно 35,0 мг/мл. Согласно настоящему изобретению на основе антагонистического антитела к CD40, например моноклонального антитела CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающего фрагмента приготавливают препаративную форму с добавлением буфера, который поддерживает значение рН фармацевтической композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, и аргинин в кислотной форме,обозначенный в контексте настоящего описания как аргинин-HCl, в количестве, достаточном для того,чтобы сделать композицию практически изотонической. Под понятием "практически изотоническая" подразумевают, что водная препаративная форма имеет осмоляльность от примерно 240 ммолей/кг до примерно 360 ммолей/кг, предпочтительно от примерно 240 до примерно 340 ммолей/кг, более предпочтительно от примерно 250 до примерно 330 ммолей/кг, еще более предпочтительно от примерно 260 до примерно 320 ммолей/кг, еще более предпочтительно от примерно 270 до примерно 310 ммолей/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения осмоляльность жидкой фармацевтической композиции составляет примерно 295 ммолей/кг. Методы определения изотоничности раствора известны специалистам в данной области (см., например, Setnikar и др., J. Am. Pharm. Assoc. 48, 1959, с. 628). Аргинин-HCl служит не только в качестве агента для придания изотоничности, но также служит для стабилизации антитела от конформационных изменений, образования агрегатов, фрагментации и/или деамидирования в процессе хранения жидких фармацевтических композиций, предлагаемых в изобретении. Под понятием "в процессе хранения" подразумевают, что жидкую фармацевтическую композицию или препаративную форму после приготовления не сразу вводят индивидууму. Вместо этого после приготовления ее упаковывают для хранения либо в жидкой форме, либо в замороженном состоянии, либо в высушенной форме для последующего восстановления с получением жидкой формы или другой формы,пригодной для введения индивидууму. Под понятием "высушенная форма" подразумевают, что жидкую фармацевтическую композицию или препаративную форму сушат либо сушкой вымораживанием (т.е. подвергают лиофилизации; см., например, Williams и Polli, J. Parenteral Sci. Technol. 38, 1984, сс. 48-59),распылительной сушкой (см. Masters, в: Spray-Drying Handbook, 5-ое изд., изд-во Longman Scientific andTechnical, Essez, U.K., 1991, cc. 491-676; Broadhead и др., Drug Devel. Ind. Pharm. 18, 1992, cc. 1169-1206; и Mumenthaler и др., Pharm. Res. 11, 1994, cc. 12-20), либо сушкой на воздухе (Carpenter и Crowe, Cryobiology 25, 1988, cc. 459-470; и Roser, Biopharm. 4, 1991. cc. 47-53). Конформационные изменения, образование агрегатов, фрагментация и/или деамидирование антитела в процессе хранения жидких фармацевтических композиций может оказывать неблагоприятное воздействие на биологическую активность антитела, приводя к снижению терапевтической эффективности фармацевтической композиции. Кроме того, образование агрегатов может вызывать другие проблемы, такие как блокада трубок, мембран или насосов, когда содержащую антитело фармацевтическую композицию вводят с помощью системы для инфузии. Любой стереоизомер (т.е., L-, D- или DL-изомер) аргинина или комбинации стереоизомеров могут присутствовать в фармацевтических композициях, предлагаемых к изобретении, если аргинин находится в кислотой форме, т.е. в виде аргинина-HCl. Предпочтительно применяют L-стереоизомер. В состав композиций, предлагаемых в изобретении, могут входить также аналоги этой аминокислоты. Под понятием"аналог аминокислоты" подразумевают производное встречающейся в естественных условиях аминокислоты, которое обладает примерно аналогичным требуемым действием в том плане, что делает композицию практически изотонической, а также снижает образование агрегатов, фрагментацию и/или деамидирование полипептида в процессе хранения жидких фармацевтических композиций, предлагаемых в изобретении. Приемлемыми аналогами аргинина являются, например, аминогуанидин и N-моноэтил-Lаргинин. Также как и аргинин, аминокислотные аналоги включают в композиции в кислой форме. Концентрация аргинина-HCl в фармацевтической композиции должна зависеть от вклада в создание тоничности других компонентов. В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация аргинина-HCl составляет от примерно 50 мМ до примерно 300 мМ, от примерно 50 мМ до примерно 250 мМ, от примерно 50 мМ до примерно 200 мМ, от примерно 50 мМ до примерно 175 мМ, от примерно 50 мМ до примерно 150 мМ, от примерно 75 мМ до примерно 175 мМ, от примерно 75 мМ до примерно 150 мМ, от примерно 100 мМ до примерно 175 мМ, от примерно 100 мМ до примерно 200 мМ, от примерно 100 мМ до примерно 150 мМ, от примерно 125 мМ до примерно 175 мМ, от примерно 125 мМ до примерно 150 мМ, от примерно 130 мМ до примерно 170 мМ, от примерно 130 мМ до примерно 160 мМ, от примерно 135 мМ до примерно 155 мМ, от примерно 140 мМ до примерно 155 мМ или от примерно 145 мМ до примерно 155 мМ. В одном из таких вариантов осуществления изобретения концентрация аргинина-HCl составляет примерно 125 мМ, примерно 150 мМ или примерно 175 мМ. Значение рН жидкой содержащей антитело фармацевтической композиции влияет на стабильность входящего в ее состав антитела, прежде всего, оказывая воздействие на образование агрегатов. Таким образом, количество забуферивающего агента, присутствующего в фармацевтических композициях,предлагаемых в изобретении, должно варьироваться в зависимости от значения рН, оптимального для стабильности конкретного представляющего интерес антагонистического антитела к CD40. Определение оптимального значения рН можно осуществлять с помощью методов, общепринятых для данной области, включая, например, дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC), которую применяют для оценки конформационной стабильности; ДСН-ПААГ и гель фильтрацию (ГФ-ЖХВР), которую применяют для оценки агрегации и фрагментации; и анализы с использованием катионообменной ЖХВР(CIEX-ЖХВР), которые применяют для оценки расщепления, связанного с изменением заряда. Предпочтительными значениями рН жидких фармацевтических композиций, предлагаемых в изобретении, являются значения рН, составляющие примерно 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4,6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0 и другие значения в диапазоне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0. В некоторых вариантах осуществления изобретения забуферивающий агент поддерживает значение рН фармацевтической композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,5, от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 5,5, от примерно рН 5,5 до примерно 7,0, от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,5 или от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,0. Любой приемлемый забуферивающий агент, который поддерживает значение рН жидкой фармацевтической композиции, содержащей антагонистическое антитело к CD40, на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, можно применять в препаративной форме, если при этом сохраняются указанные выше физико-химическая стабильность и требуемая биологическая активность антитела. Приемлемыми забуферивающими агентами являются (но, не ограничиваясь только ими) общепринятые кислоты и их соли, в которых противоион может представлять собой, например, натрий, калий, аммоний, кальций или магний. Примерами общепринятых кислот и их солей, которые можно применять для забуферивания жидкой фармацевтической композиции являются (но, не ограничиваясь только ими) лимонная кислота или цитрат, янтарная кислота или сукцинат, уксусная кислота или ацетат, винная кислота или тартрат,фосфорная кислота или фосфат, глюконовая кислота или глюконат, глутаминовая кислота или глутамат,аспарагиновая кислота или аспартат, малеиновая кислота или малеат и яблочная кислота или малеат и буферы на основе яблочной кислоты или малата. Известно, что забуферивающий агент может представлять собой смесь кислоты и соли кислоты, например, смесь лимонной кислоты и цитрата (обозначена в контексте настоящего описания как буфер на основе цитрата/лимонной кислоты), смесь янтарной кислоты и сукциата (обозначена в контексте настоящего описания как буфер на основе сукцината/янтарной кислоты), смесь уксусной кислоты и ацетата (обозначена в контексте настоящего описания как буфер на основе ацетата/уксусной кислоты), и т.п. для каждой из вышеуказанных пар кислота/соль кислоты. Концентрация забуферивающего агента может составлять от примерно 1 мМ до примерно 50 мМ, в том числе примерно 1 мМ, 2 мМ, 5 мМ, 8 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ или иметь другие такие значения в диапазоне от примерно 1 мМ до примерно 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ, в том числе примерно 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ или иметь другие значения в диапазоне от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит в требуемой концентрации (т.е., от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, как указано выше) антагонистическое антитело к CD40, предлагаемое в изобретении, например, моноклональное антителоCHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент, аргинин-HCl в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотонической, и забуферивающий агент, представляющий собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, при этом концентрация забуферивающего агента является такой, что забуферивающий агент поддерживает значение рН фармацевтической композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, предпочтительно от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,5, в том числе примерно рН 5,0, 5,5, 6,0, и 6,5. Под "цитратным" буфером подразумевают буфер, содержащий соль лимонной кислоты. В предпочтительном варианте осуществления изобретения противоион цитрата представляет собой катион натрия, и таким образом, компонентом цитратного буфера является цитрат натрия. Однако ожидается, что эффективным может быть любой катион. Другими возможными катионами цитрата являются (но, не ограничиваясь только ими) калий, аммоний, кальций и магний. Как указано выше, буфер на основе цитрата/лимонной кислоты содержит смесь кислоты (т.е. лимонной кислоты) и солевой формы кислоты (т.е. цитрат), при этом противоион солевой формы кисло-7 018301 ты может представлять собой любой приемлемый катион. В одном из вариантов осуществления изобретения противоион солевой формы кислоты представляет собой катион натрия и поэтому забуферивающий агент представляет собой смесь лимонной кислоты и цитрата натрия. Как указано выше, концентрация буфера на основе цитрата/лимонной кислоты может составлять от примерно 1 мМ до примерно 50 мМ, в том числе примерно 1 мМ, 2 мМ, 5 мМ, 8 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ или иметь другие значения в диапазоне от примерно 1 мМ до примерно 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация буфера на основе цитрата/лимонной кислоты составляет от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ, в том числе 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ или примерно 15 мМ. В других вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например, моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 10,0 мг/мл до примерно 20,0 мг/мл; аргинин-HCl в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотонической, и забуферивающий агент, представляющий собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, в концентрации от примерно 1 мМ до примерно 20 мМ, от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ, предпочтительно примерно 10 мМ. В других вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например, моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 10,0 мг/мл до примерно 20,0 мг/мл; аргинин-HCl в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотоничной, и забуферивающий агент, представляющий собой буфер на основе цитрата натрия /лимонной кислоты, в концентрации от примерно 1 мМ до примерно 20 мМ, от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ,предпочтительно примерно 10 мМ. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например, моноклональное антитело CHIR12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент; забуферивающий агент для поддержания значения рН фармацевтической композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7.0; и аргинин-HCl в концентрации от примерно 100 мМ до примерно 200 мМ. В некоторых из этих вариантов осуществления изобретения забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ, жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например, моноклональное антителоCHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент, и значение рН фармацевтической композиции составляет от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,5 или от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,0. В других вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например, моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, в той числе примерно 10,0 мг/мл, примерно 15,0 мг/мл, примерно 20,0 мг/мл, примерно 25,0 мг/мл, примерно 30,0 мг/мл или примерно 35,0 мг/мл; примерно 150 мМ аргинин-HCl; и забуферивающий агент представляет собой примерно 10 мМ буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты; при этом значение рН препаративной формы составляет примерно 5,5. Расщепление белка из-за замораживания-оттаивания или механических сдвиговых воздействий при приготовлении жидких фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, можно ингибировать путем включения поверхностно-активных веществ в препаративную форму для уменьшения поверхностного натяжения на поверхности раздела раствор-воздух. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент; забуферивающий агент для поддержания значения рН фармацевтической композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0; аргинин-HCl в количестве, достаточном для того,чтобы сделать композицию практически изотонической; а также содержит поверхностно-активное вещество. В других вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент; забуферивающий агент для поддержания значения рН фармацевтической композиции на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0; аргинин-HCl в концентрации от примерно 50 мМ до примерно 300 мМ, или от примерно 100 мМ до примерно 200 мМ; а также содержит поверхностно-активное вещество. Типичные применяемые поверхностно-активные вещества представляют собой неионогенные поверхностно-активные вещества, в том числе сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитола, такие как полисорбат 80 (Твин 80) и полисорбат 20 (Твин 20); сложные эфиры полиоксипропилена-полиоксиэтилена,такие как Pluronic F68; полиоксиэтиленовые спирты, такие как Brij 35; симетикон; полиэтиленгликоль,-8 018301 такой как ПЭГ 400; лизофосфатидилхолин; и полиоксиэтилен-пара-трет-октилфенол, такой как Triton Х 100. Классическая стабилизация фармацевтических средств поверхностно-активными веществами или эмульгаторами описана, например, у Levine и др., J. Parenteral Sci. Technol. 45(3), 1991, cc. 160-165, публикация включена в настоящее описания в качестве ссылки. Предпочтительным поверхностно-активным веществом, применяемым при воплощении на практике настоящего изобретения, является полисорбат 20 или полисорбат 80. Когда в композицию включают поверхностно-активное вещество, то его, как правило, добавляют в количестве от примерно 0,001% до примерно 1,0%, от примерно 0,001% до примерно 0,5%, от примерно 0,001% до примерно 0,4%, от примерно 0,001% до примерно 0,3%, от примерно 0,001% до примерно 0,2%, от примерно 0,005% до примерно 0,5%, от примерно 0,005% до примерно 0,2%, от примерно 0,01% до примерно 0,5%, от примерно 0,01% до примерно 0,2%, от примерно 0,03% до примерно 0,5%, от примерно 0,03% до примерно 0,3%, от примерно 0,05% до примерно 0,5% или от примерно 0,05% до примерно 0,2%, при этом проценты представляют собой массовые/объемные проценты (мас./об.) Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент; забуривающий агент, который представляет собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, например, буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты, в концентрации от примерно 1 мМ до примерно 50 мМ, от примерно 5 мМ до примерно 25 мМ или от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ; значение рН композиции находится на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,5 или от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,0; аргинин-HCl присутствует в концентрации от примерно 50 мМ до примерно 300 мМ, от примерно 100 мМ до примерно 200 мМ или от примерно 50 мМ до примерно 150 мМ; и фармацевтическая композиция содержит также поверхностно-активное вещество, например, полисорбат 20, в количестве от примерно 0,001% до примерно 1,0% (мас./об.) или от примерно 0,001% до примерно 0,5% (мас./об.). В других вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, в том числе примерно 10,0 мг/мл, примерно 15,0 мг/мл, примерно 20,0 мг/мл, примерно 25,0 мг/мл, примерно 30,0 мг/мл или примерно 35,0 мг/мл; аргинин-HCl в концентрации от примерно 50 мМ до примерно 200 мМ,включая примерно 150 мМ аргинин-HCl; забуферивающий агент, представляющий собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты, в концентрации от примерно 5 мМ до примерно 20 мМ, в том числе примерно 10 мМ; и фармацевтическая композиция необязательно содержит поверхностно-активное вещество, например, полисорбат 20, в количестве от примерно 0,001% до примерно 1,0% (мас./об.), в том числе от примерно 0,001% до примерно 0,5% (мас./об.), от примерно 0,01% до примерно 0,25% (мас./об.),от примерно 0,025% до примерно 0,2% (мас./об.), от примерно 0,025% до примерно 0,1% (мас./об.) или от примерно 0,05% до примерно 0,2% (мас./об.); при этом значение рН жидкой фармацевтической композиции находится на уровне от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 5,5, от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,5, от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,0 или примерно рН 5,5. Жидкая фармацевтическая композиция может практически не содержать любые консерванты и другие носители, эксципиенты или стабилизаторы. В другом варианте фармацевтическая композиция необязательно может включать один или несколько консервантов, например антибактериальных агентов, фармацевтически приемлемых носителей, эксципиентов или стабилизаторов, представленных в настоящем описании, при условии, что они не оказывают неблагоприятного воздействия на физико-химическую стабильность антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента. Примерами приемлемых носителей, эксципиентов и стабилизаторов являются (но, не ограничиваясь только ими) дополнительные забуферивающие агенты, сорастворители, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин, хелатирующие агенты, такие как ЭДТК, комплексы с металлами (например, комплексы Zn-белок) и биоразложимые полимеры, такие как сложные полиэфиры. Обсуждение составов и выбор фармацевтически приемлемых носителей, стабилизаторов и агентов для придания изотоничности можно почерпнуть в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е изд., изд-во MackPublishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990, включенном в настоящее описание в качестве ссылки. Таким образом, в одном из вариантов осуществления изобретения содержащие антагонистические антитела к CD40 жидкие фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, содержат также аминокислоту метионин для ингибирования окисления окисляемых аминокислотных остатков в полипептидных цепях антител. Под понятием "ингибирование" подразумевают минимальное накопление окисленных видов в течение времени. Ингибирование окисления приводит к более длительному сохранению антагонистического антитела к CD40 в соответствующей молекулярной форме. Можно использовать любой стереоизомер метионина (L-, D- или DL-изомер) или их комбинации. Добавляемое количество должно представлять собой количество, достаточное для ингибирования окисления окисляемых аминокислотных остатков, в результате которого количество окисленных видов должно соответствовать количеству, установленному регулирующими органами. Как правило, это означает, что композиция содержит не более чем от примерно 10% до примерно 30% продуктов окисления. Обычно для достижения указанной цели добавляют метионин в таком количестве, чтобы соотношение добавленного метионина и остатков метионина составляло от примерно 1:1 до примерно 1000:1, наиболее предпочтительно от 10:1 до примерно 100:1. Предпочтительное добавляемое количество метионина можно легко определять эмпирически при приготовлении композиции, содержащей представляющее интерес антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент, используя различные концентрации метионина и определяя относительное воздействие на образование окисленных видов полипептида с помощью, например, хроматографического разделения видов молекул и идентификации с использованием стандартов молекулярной массы полипептидов, например, с помощью ОФ-ЖХВР или хроматографии, основанной на гидрофобном взаимодействии (HIC), которая описана в примере 1. Концентрация метионина, при использовании которой достигается максимальное ингибирование окисления окисляемых аминокислотных остатков, не оказывающая при этом неблагоприятного воздействия на связанное с аминокислотой ингибирование агрегации антитела, может представлять собой предпочтительное количество метионина, которое следует добавлять в композицию для дополнительного повышения стабильности антитела. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело к CD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент; забуферивающий агент, представляющий собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты, например, буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты, в концентрации от примерно 1 мМ до примерно 50 мМ, от примерно 5 мМ до примерно 25 мМ или от примерно 5 мМ до примерно 15 мМ; значение рН фармацевтической композиции составляет от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,5 или от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,0; аргинин-HCl присутствует в концентрации от примерно 50 мМ до примерно 300 мМ,от примерно 100 мМ до примерно 200 мМ или от примерно 50 мМ до примерно 150 мМ; в ней присутствует поверхностно-активное вещество, например полисорбат 20 или полисорбат 80, в количестве от примерно 0,001% до примерно 1,0% (мас./об.) или от примерно 0.001% до примерно 0,5% (мас./об.); и фармацевтическая композиция дополнительно содержит метионин в концентрации от примерно 0,5 мМ до примерно 20,0 мМ, от примерно 0,5 мМ до примерно 10,0 мМ, от примерно 1,0 мМ до примерно 20,0 мМ, от примерно 1,0 мМ до примерно 10,0 мМ, от примерно 1,0 мМ до примерно 7,0 мМ, от примерно 2,0 мМ до примерно 6,0 мМ или от примерно 2,5 мМ до примерно 5,0 мМ. В других вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит антагонистическое антитело кCD40, например моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9 или его антигенсвязывающий фрагмент, в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл, в том числе примерно 10,0 мг/мл,примерно 15,0 мг/мл, примерно 20,0 мг/мл, примерно 25,0 мг/мл, примерно 30,0 мг/мл или примерно 35,0 мг/мл; аргинин-HCl в концентрации от примерно 50 мМ до примерно 200 мМ, в том числе примерно 150 мМ аргинин-HCl; буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 мМ до примерно 20 мМ, в том числе примерно 10 мМ; необязательно поверхностно-активное вещество,например, полисорбат 20, в количестве от примерно 0,001% до примерно 1,0% (мас./об.), в том числе от примерно 0,001% до примерно 0,5% (мас./об.), от примерно 0,01% до примерно 0,25% (мас./об.), от примерно 0,025% до примерно 0,2% (мас./об.), от примерно 0,025% до примерно 0,1% (мас./об.) или от примерно 0,05% до примерно 0,2% (мас./об.); и необязательно метионин, например, в концентрации от примерно 0,5 мМ до примерно 10,0 мМ, от примерно 1,0 мМ до примерно 7,0 мМ, от примерно 2,0 мМ до примерно 6,0 мМ или от примерно 2,5 мМ до примерно 5,0 мМ, в том числе примерно 2,0 мМ, примерно 2,5 мМ, примерно 3,0 мМ, примерно 3,5 мМ, примерно 4,0 мМ, примерно 4,5 мМ, примерно 5,0 мМ или примерно 5,5 мМ; при этом значение рН жидкой фармацевтической композиции составляет от примерно рН 5,0 до примерно рН 7,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,0, от примерно рН 5,0 до примерно рН 5,5, от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,5, от примерно рН 5,5 до примерно рН 6,0 или примерно рН 5,5. В следующих вариантах осуществления изобретения жидкая фармацевтическая композиция содержит моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 50,0 мг/мл, от примерно 5,0 мг/мл до примерно 35,0 мг/мл или от примерно 10,0 мг/мл до примерно 35.0 мг/мл, в том числе примерно 10,0 мг/мл, примерно 15,0 мг/мл, примерно 20,0 мг/мл, примерно 25,0 мг/мл, примерно 30,0 мг/мл или примерно 35,0 мг/мл; аргинин-HCl в концентрации от примерно 100 мМ до примерно 200 мМ, в том числе примерно 150 мМ аргинин-HCl; буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 мМ до примерно 20 мМ, в том числе примерно 10 мМ; необязательно поверхностно-активное вещество, например полисорбат 20, в количестве от примерно 0,025% до примерно 0,1% (мac./об.); и необязательно метионин, например, в концентрации от примерно 2,0 мМ до примерно 5,5 мМ, в том числе примерно 5,0 мМ; при этом значение рН жидкой фармацевтической композиции составляет от примерно рН 5,0 до примерно рН 6,0, в том числе примерно рН 5,5. Помимо указанных выше агентов, другие стабилизаторы, такие как альбумин, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК) или одну из ее солей, например динатрий-ЭДТК, необязательно можно добавлять для дополнительного повышения стабильности жидких фармацевтических композиций. При необходимости можно добавлять альбумин в концентрации примерно 1,0% (мас./об.) или менее. ЭДТК действует в качестве поглотителя ионов металлов, которые, как известно, катализируют многие реакции окисления, представляя собой дополнительный стабилизирующий агент. При необходимости ЭДТК можно добавлять в концентрациях от примерно 0,1 до примерно 5,0 мМ. При необходимости в стабилизированные жидкие фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое антитело к CD40, предлагаемые в настоящем изобретении, можно добавлять сахара или сахарные спирты. Можно использовать любой сахар, такой как моно-, ди- или олисахариды, или водорастворимые гликаны, включая, например, фруктозу, глюкозу, маннозу, сорбозу, ксилозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, декстран, пуллулан, декстрин, циклодекстрин, растворимый крахмал, гидроксиэтилкрахмал и натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы. Сахароза является наиболее предпочтительной добавкой, представляющей собой сахар. К сахарным спиртам относятся соединения, состоящие С 4 С 8 углеводорода с -ОН-группой, и к ним относятся, например, маннит, сорбит, инозит, галактит, дульцит,ксилит и арабитолм, при этом маннит является наиболее предпочтительным в качестве представляющей собой сахарный спирт добавки. Указанные выше сахара или сахарные спирты можно применять индивидуально или в комбинации. Не существует фиксированного предела применяемого количества, если сахар или сахарный спирт растворим в жидком препарате и не оказывает неблагоприятного воздействия на стабилизирующее действие, достигаемое с помощью способов, предлагаемых в изобретении. Предпочтительно сахар или сахарный спирт применяют в концентрации от примерно 1,0% до примерно 15,0%(мac./об.), более предпочтительно от примерно 2,0% до примерно 10,0% (мac./об.). После получения жидкой фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, ее можно лиофилизировать для предупреждения расщепления. Методы лиофилизации жидких композиций известны обычным специалистам в данной области. Непосредственно перед применением композицию можно восстанавливать стерильным разбавителем (например, раствором Рингера, дистиллированной водой или стерильным физиологическим раствором), который может содержать дополнительные ингредиенты. После восстановления композицию предпочтительно вводят индивидууму с помощью методов, известных специалистам в данной области. Жидкие фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое антитело к CD40, предлагаемые в изобретении, являются стабильными и поэтому обладают повышенной стабильностью при хранении по сравнению с содержащими антагонистическое антитело к CD40 композициями, которые приготовлены в забуференных растворах, содержащих хлорид натрия в качестве придающего изотоничность агента. Не вдаваясь в теорию, можно предположить, что указанная повышенная стабильность при хранении будет присутствовать у жидкой препаративной формы, вне зависимости от того, хранится ли она в форме, непосредственно предназначенной для последующего применения, хранится ли она в замороженном состоянии и подлежит оттаиванию перед применением, или ее получают в высушенной форме, такой как лиофилизированная, высушенная на воздухе или высушенная распылением форма, предназначенная для последующего восстановления в жидкую форму или другую форму перед применением. Предпочтительно композиции, предлагаемые в изобретении, хранят непосредственно в виде жидкой формы, полностью реализуя преимущество, связанное с удобством наличия жидкой формы с повышенной стабильностью при хранении, простотой введения без восстановления и возможностью поставлять препаративную форму в предварительно заполненных готовых к употреблению шприцах или в виде содержащих несколько доз препаратов, если препаративная форма совместима с бактериостическими агентами. При создании изобретения установлено, что композиции, предлагаемые в изобретении, в которых применяют аргинин-HCl в качестве агента для придания изотоничности и смесь кислотной и солевой формы, такую как цитрат натрия/лимонная кислота, в качестве забуферивающего агента, представляют собой жидкую фармацевтическую композицию, содержащую антагонистическое антитело к CD40, которая обладает повышенной стабильностью при хранении относительно жидкой фармацевтической композиции, содержащей антагонистическое антитело к CD40, которую приготавливают с использованием хлорида натрия и соответствующего забуферивающего агента. Повышенная стабильность при хранении композиции достигается благодаря влиянию кислотной формы аргинина на стабильность обладающего терапевтической активностью антагонистического антитела к CD40, более конкретно влиянию на агрегацию, фрагментацию и деамидирование полипептида в процессе хранения жидких препаративных форм. Кроме того, включение аргинина-HCl в качестве придающего изотоничность агента в жидкую композицию, содержащую антагонистическое антитело к CD40, которая забуферена указанным образом,позволяет получать практически изотонические жидкие фармацевтические композиции без добавления дополнительных придающих изотоничность агентов, таких как хлорид натрия. Кислотная форма аргинина, включенная в стабильные жидкие фармацевтические композиции,предлагаемые в изобретении, защищает обладающее терапевтической активностью антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент от физических и химических изменений, по- 11018301 вышая тем самым стабильность антитела в процессе хранения композиции. Под "повышением стабильности" подразумевают, что один или несколько таких показателей, как образование агрегатов, фрагментация и деамидирование антитела, в процессе хранения жидкой фармацевтической композиции снижаются относительно показателей, обнаруженных при хранении жидкой фармацевтической композиции,которая содержит антагонистическое антитело к CD40 и аналогичные компоненты препаративной формы, за исключением отсутствия указанного конкретного придающего изотоничность и стабилизирующего агента. Воздействие аргинина-HCl на агрегацию антагонистического антитела к CD40 в процессе хранения жидкой композиции легко можно определять, оценивая изменение количества растворимого антитела кCD40 в растворе с течением времени. Уровень растворимого антитела к CD40 в растворе можно оценивать количественно с помощью ряда аналитических анализов, адаптированных к определению представляющего интерес антитела, такие анализы представляют собой, например, ЖХВР с обращенной фазой (ОФ)-ЖХВР гель-фильтрацию (ГФ)-ЖХВР и УФ-абсорбцию. Агрегацию можно оценивать также с помощью ДСН-ПААГ (см. также приведенные ниже примеры). Касательно агрегации эффективное количество аргинина-HCl для включения в предлагаемую в изобретении жидкую фармацевтическую композицию, содержащую антагонистическое антитело к CD40,для получения стабильных фармацевтических композиций, предлагаемых в изобретении, следует рассматривать как количество, которое приводит к снижению образования агрегатов в течение времени и,как следствие, повышает сохранение в растворе растворимого антагонистического антитела к CD40 в его неагрегированной биологически активной молекулярной форме. Так, например, если антагонистическое антитело к CD40 представляет собой моноклональное антитело CD40 CHIR-12.12, описанное ниже в примерах, эффективное количество аргинина-HCl, предназначенное для получения стабильной композиции, предлагаемой в изобретении, должно представлять собой количество, которое приводит к повышению сохранения антитела CHIR-12.12 в его мономерной молекулярной форме. Не вдаваясь в теорию, повышенная стабильность при хранении предлагаемой в изобретении стабильной жидкой композиции, содержащей антагонистическое антитело к CD40, может также быть связана с ингибирующим воздействием аргинина-HCl на фрагментацию и/или деамидирования в антителе остатков глутамина и/или аспарагина в процессе хранения обладающего терапевтической активностью антитела. Воздействие аргинина-HCl на фрагментацию антитела легко можно определять, оценивая изменения молекулярных видов в препаративной форме в течение времени, например, с помощью анализов на основе ДСН-ПААГ и/или ГФ-ЖХВР; см. ниже примеры. Воздействие аргинина-HCl на деамидирование полипептида антитела к CD40 в процессе хранения в жидкой композиции легко можно определять,оценивая в течение времени количество антагонистического антитела к CD40, присутствующего в его деамидированной форме. Методы оценки молекулярных видов, т.е. нативного или деамидированного вида, полипептида, присутствующих в фазе раствора, хорошо известны в данной области. Такие методы включают хроматографическое разделение молекулярных видов и их идентификацию на основе стандартов молекулярной массы полипептидов, например, с помощью ОФ-ЖХВР или катионообменной хроматографии (CIEX-ЖХВР), которые описаны ниже в примерах. Предлагаемые в изобретении стабильные жидкие фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое антитело к CD40, могут содержать другие соединения, которые повышают эффективность или усиливают требуемое качество представляющего интерес антагонистического антитела кCD40, которое служит в качестве терапевтически активного компонента, если они не оказывают неблагоприятное воздействие на первичное стабилизирующее действие, достигаемое с помощью аргининаHCl. Композиция должна быть безопасной при выбранном пути введения, она должна быть стерильной и должна сохранять требуемую терапевтическую активность. Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получать, например, путем предварительного смешения стабилизирующего и забуферивающего агентов и любых других эксципиентов до включения представляющего интерес антагонистического антитела к CD40. Любые дополнительные эксципиенты, которые можно вводить для дополнительной стабилизации композиций,предлагаемых в настоящем изобретении, не должны оказывать неблагоприятное воздействие на стабилизирующие эффекты первичного придающего изотоничность и стабилизирующего агента, т.е. аргининаHCl, также в сочетании с забуферивающим агентом, которые применяют для получения новых представленных в настоящем описании композиций. После добавления аргинина-HCl для придания практической изотоничности и достижения повышенной стабильности представляющего интерес антагонистического антитела к CD40, значение рН жидкой композиции регулируют с помощью забуферивающего агента,предпочтительно в указанном выше диапазоне, более предпочтительно до достижения оптимального для представляющего интерес антагонистического антитела к CD40 значения рН, например, до достижения значения рН, составляющего примерно от рН 5,0 до рН 7,0, предпочтительно до достижения значения рН, составляющего примерно 5,5, в случае моноклонального антитела CHIR-12.12. Хотя значение рН можно регулировать после добавления в композицию антагонистического антитела к CD40, предпочтительно его регулировать до введения указанного полипептида, поскольку это снижает риск денатурации полипептида. Затем для достижения соответствующего смешения компонентов применяют приемлемые механические устройства. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу повышения стабильности антагонистического антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента в жидкой фармацевтической композиции. Способ заключается в том, что объединяют антагонистическое антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент с забуферивающим агентом, который поддерживает значение рН фармацевтической композиции на уровне примерно от рН 5,0 до рН 7,0, и аргинин-HCl в количестве, достаточном для того, чтобы сделать композицию практически изотонической. В некоторых вариантах осуществления изобретения забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата/лимонной кислоты,концентрация забуферивающего агента составляет от примерно 5 мМ до примерно 50 мМ, а количество аргинина-HCl обеспечивает концентрацию этого придающего изотоничность агента аргинина-HCl в композиции от примерно 50 мМ до примерно 300 мМ. В других вариантах осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40 представляет собой антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9 или его антигенсвязывающий фрагмент; забуферивающий агент представляет собой буфер на основе цитрата натрия/лимонной кислоты в концентрации от примерно 5 мМ до примерно 25 мМ; концентрация аргининаHCl в композиции составляет примерно 150 мМ, и значение рН композиции составляет примерно 5,0,примерно 5,5, примерно 6,0 или примерно 6,5. Стабилизированную жидкую фармацевтическую композицию, содержащую представляющее интерес антагонистическое антитело к CD40, такое как моноклональное антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9,или его антигенсвязывающий фрагмент, можно приготавливать в виде стандартной дозы, и она может иметь предназначенную для инъекции или инфузии форму, такую как раствор, суспензия или эмульсия. Как отмечалось ранее, ее можно хранить в замороженной или высушенной форме, такой как лиофилизированный порошок, который можно восстанавливать с получением жидкого раствора, суспензии или эмульсии перед введением с помощью любого из различных методов, включая оральные или парентеральные пути введения. Предпочтительно ее хранят в виде жидкой препаративной формы, реализуя преимущество, связанное с повышенной стабильностью при хранении, для достижения которой используют описанные ниже способы, предлагаемые в настоящем изобретении. Стабилизированную фармацевтическую композицию предпочтительно стерилизуют фильтрацией через мембрану и хранят в контейнерах для стандартной дозы или нескольких доз, таких как закрытые пузырьки или ампулы. Дополнительные методы приготовления фармацевтической композиции, которые, как правило, известны в данной области, можно применять для дополнительного повышения стабильности жидких фармацевтических композиций, представленных в настоящем описании, если они не оказывают отрицательного влияния на благоприятные воздействия описанных выше предпочтительных стабилизирующих и забуферивающих агентов. Подробное обсуждение составов и выбора фармацевтически приемлемых носителей, стабилизаторов и т.д. можно почерпнуть в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е изд., изд-во MackPublishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990, включенном в настоящее описание в качестве ссылки. Таким образом, настоящее изобретение относится к изделию, представляющему собой контейнер,содержащий предлагаемую стабильную жидкую фармацевтическую композицию антагонистического антитела к CD40, и необязательно инструкцию по ее применению. Приемлемыми контейнерами являются, например, пузырьки, бутылки и шприцы. Контейнер может быть изготовлен из различных материалов, таких как пластик или стекло. В одном из вариантов осуществления изобретения контейнер представляет собой стеклянный одноразовый пузырек вместимостью 3-50 см 3. В другом варианте в случае готовой к применению препаративной формы контейнер может представлять собой, например, стеклянный пузырек вместимостью 3-100 см 3. Контейнер содержит препаративную форму и этикетку, нанесенную на него или прилагаемую к нему, контейнер может содержать указания по применению. Изделие может включать также другие материалы, необходимые с точки зрения производителя и потребителя, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и листовку-вкладыш в упаковке с инструкциями по применению. Антитела к CD40, применяемые в фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, содержат антитела кCD40, прежде всего антагонистические антитела к CD40 или их антигенсвязывающие фрагменты, мишенью которых является CD40-рецептор, модулирующий ADCC, взаимодействуют с путями передачи сигнала CD40, прежде всего путями передачи сигнала CD40, которые опосредуются взаимодействием CD40 с лигандом CD40 (CD40L), или обоими. Под "антигеном CD40", "находящемся на клеточной поверхности антигеном CD40", "CD40-рецептором" или "CD40" подразумевают трансмембранный гликопротеин,который принадлежит к семейству рецепторов фактора некроза опухоли (TNF) (см., например, US 5674492 и 4708871; Stamenkovic и др., ЕМВО 8, 1989, сс. 1403; Clark, Tissue Antigens 36, 1990, с. 33; Barclay и др., The Leucocyte Antigen Facts Book, 1997, 2-е изд.; изд-во Academic Press, San Diego). Идентифицированы два изоформы человеческого CD40, кодируемые вариантами транскрипта этого гена, полученными в результате альтернативного сплайсинга. Первая изоформа (которую называют также "длинной изоформой" или "изоформой 1") экспрессируется в виде состоящего из 277 аминокислот полипептидапредшственника (SEQ ID NO:12 (впервые описана в GenBank под регистрационным номером САА 43045 и идентифицирована как изоформа 1 в GenBank под регистрационным номером NP001241), кодируемая ную последовательность, состоящую из первых 19 остатков. Вторая изоформа (которую называют также"короткой изоформой" или "изоформой 2") экспрессируется в виде состоящего из 203 аминокислот полипептида-предшественника (SEQ ID NO:10 (GenBank, регистрационный номер NP690593), кодируемогоSEQ ID NO:9 (GenBank, регистрационный номер. NM152854, которая также имеет сигнальную последовательность, представленную первыми 19 остатками. Полипептиды-предшественники этих двух изоформ человеческого CD40 характеризуются наличием общих первых 165 остатков (т.е. остатков 1-165ID NO:10) кодируется вариантом транскрипта (SEQ ID NO:9), у которого отсутствует кодирующей сегмент, который приводит к сдвигу трансляции рамки считывания; образовавшаяся изоформа CD40 содержит более короткий С-конец (остатки 166-203 SEQ ID NO:10), отличающийся от С-конца в длинной изоформе CD40 (С-конец представлен остатками 166-277 SEQ ID NO:12). Для целей настоящего изобретения понятие "антиген CD40", "находящийся на клеточной поверхности антиген CD40", "СО 40-рецептор" или "CD40" относится как короткой, так и к длинной изоформам CD40. Антиген CD40 презентуется на поверхности различных типов клеток, что будет описано ниже. Под понятием "презентуется на поверхности" и "экспрессируется на поверхности" подразумевают, что весь или часть антигена CD40 находится снаружи клетки. Презентуемый или экспрессируемый антиген CD40 может быть полностью или частично гликозилированным. Понятие "агонистическая активность" относится к субстанции, которая функционирует в качестве агониста. Агонист связывается с рецептором на клетке и инициирует реакцию или активность, аналогичную или такую же как реакция или активность, инициируемая встречающимся в естественных условиях лигандом рецептора. Агонист CD40 индуцирует любой или все (но, не ограничиваясь только ими) следующие ответы: В-клеточную пролиферацию и дифференцировку, производство антител, межклеточную адгезию, создание В-клеток памяти, переключение изотипа, повышающую регуляцию экспрессии находящихся на клеточной поверхности молекул ГКГ класса II и CD80/86 и секрецию провоспалительных цитокинов, таких как IL-8, IL-12 и TNF. Под "антагонистической активностью" подразумевают, что субстанция функционирует в качестве антагониста. Антагонист CD40 препятствует или снижает индукцию любых ответов, которые индуцируются связыванием CD40-рецептора с лигандом-агонистом, прежде всего CD40L. Антагонист может снижать индукцию любого или всех ответов, обусловленных связыванием агониста, на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35%, предпочтительно на 40, 45, 50, 55, 60%, более предпочтительно на 70, 80, 85% и наиболее предпочтительно на 90, 95, 99 или 100%. Методы оценки специфичности связывания лиганда CD40 и антагонистической активности терапевтических агентов, направленных против CD40, например, антитела к CD40, известны в данной области и включают (но, не ограничиваясь только ими) стандартные анализы конкурентного связывания, анализы, предназначенные для мониторинга секреции иммуноглобулинов В-клетками, анализы В-клеточной пролиферации, анализы Вклеточной пролиферации, подобные разработанным Banchereau, анализы активности Т-клеток-хелперов в отношении производства антител, анализы костимуляции В-клеточной пролиферации и анализы повышающей регуляции маркеров В-клеточной активации (см., например, анализы, описанные в WO 00/75348 и US 6087329, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки). Указанные анализы описаны в также в заявках, озаглавленных "Antagonist Anti-CD40 Monoclonal Antibodies and Methodsfor Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), поданных 4 ноября 2003 г., 26 ноября 2003 г. и 27 апреля 2004 г., и переуступленных заявках на патент США 60/517337 (досье у патентного поверенного . РР 20107.001 (035784/258442, 60/525579 (досье у патентного поверенногоРР 20107.002 (035784/271525 и 60/565710 (досье у патентного поверенногоРР 20107.003 (035784/277214 соответственно и в международной заявке на патент PCT/US2004/ 037152 (досье у патентного поверенногоРР 20107.004 (035784/282916, которая озаглавлена "Antagonist Anti-CD40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), поданной 4 ноября 2004 г., и опубликованной как WO 2005/044854); содержание каждого из перечисленных документов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Под "существенной" агонистической активностью подразумевают агонистическую активность, которая по меньшей мере на 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100% выше, чем агонистическая активность, которая индуцируется нейтральной субстанцией или отрицательным контролем, при оценке В-клеточной реакции. Предпочтительно "существенная" агонистическая активность представляет собой агонистическую активность, которая по меньшей мере в 2 выше или по меньшей мере в 3 раза выше, чем агонистическая активность, которая индуцируется нейтральной субстанцией или отрицательным контролем, при оценке В-клеточной реакции. Так, например, если рассматриваемая В-клеточная реакция представляет собой В-клеточную пролиферацию, то "существенная агонистическая активность должна индуцировать уровень В-клеточной пролиферации, который по меньшей мере в 2 раза выше или по меньшей мере в 3 раза выше, чем уровень В-клеточной пролиферации, которая индуцируется нейтральной субстанцией или отрицательным контролем. В одном из вариантов осуществления изобретения неспецифический иммуноглобулин, например, IgG1, который не связывается с CD40, служит в качестве отрицательного контроля. Субстанция "не обладающая существенной агонистической активностью" должна обладать агонистической активностью не более чем примерно на 25% более высокой по сравнению с агонистической активностью, индуцируемой нейтральной субстанцией или отрицательным контролем,предпочтительно не более чем примерно на 20% более высокой, на 15% более высокой, на 10% более высокой, на 5% более высокой, на 1% более высокой, на 0,5% более высокой или даже не более чем примерно на 0,1% более высокой, чем агонистическая активность, которая индуцируется нейтральной субстанцией или отрицательным контролем, при оценке В-клеточной реакции. В некоторых вариантах осуществления изобретения стабильные жидкие фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, содержат антагонистическое антитело к CD40. Такие антитела не обладают существенной агонистической активностью, как она определена выше, при связывании с антигеном CD40 на человеческой клетке. В одном из вариантов осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40 не обладают существенной агонистической активностью при оценке одного из клеточных ответов. В другом варианте осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40 не обладают существенной агонистической активностью при оценке более одного из клеточных ответов(например, пролиферация и дифференцировка, или пролиферация, дифференцировка и, в случае Вклеток, производство антител). В некоторых вариантах осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40 представляет собой, например, полностью человеческое моноклональное антителоCHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент, описанные ниже. Любой из известных в данной области анализов можно применять для решения вопроса о том, действует ли антитело к CD40 как антагонист одного или нескольких В-клеточных ответов. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к CD40 действует в качестве антагониста по меньшей мере одного В-клеточного ответа, выбранного из группы, включающей В-клеточную пролиферацию, Вклеточную дифференцировку, производство антител, межклеточную адгезию, создание В-клеток памяти,переключение изотипа, повышающую регуляцию экспрессии находящихся на клеточной поверхности молекул ГКГ класса II и CD80/86 и секрецию провоспалительных цитокинов, таких как IL-8, IL-12 иTNF. Наибольший интерес представляют собой антагонистические антитела к CD40, которые не обладают существенной агонистической активностью в отношении В-клеточной пролиферации при связывании с человеческим антигеном CD40 на поверхности человеческой В-клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело к CD40 обладает антагонистической активностью в отношении В-клеточной пролиферации, которую оценивают с помощью анализа Вклеточной пролиферации, например, описанного в примере 4, ниже, и антагонистическое антитело кCD40 стимулирует В-клеточную пролиферацию на уровне, который не более чем примерно на 25% выше, чем В-клеточная пролиферация, которая индуцируется нейтральной субстанцией или отрицательным контролем предпочтительно не более чем примерно на 20% выше, на 15% выше, на 10% выше, на 5% выше, на 1% выше, на 0,5% выше или даже не более чем примерно на 0,1% выше, чем В-клеточная пролиферация, которая индуцируется нейтральной субстанцией или отрицательным контролем. В других вариантах антитело к CD40 обладает антагонистической активностью в отношении Вклеточной пролиферации, которая индуцируется другим антителом к CD40, например, антителом S2C6 кCD40, которую оценивают с помощью анализа В-клеточной пролиферации, например, описанного в примере 4, ниже, и уровень В-клеточной пролиферации, стимулируемый другим антителом к CD40 в присутствии антагонистического антитела к CD40 составляет не более чем примерно 25% от уровня Вклеточной пролиферации, которая индуцируется другим антителом к CD40 в отсутствии антагонистического антитела к CD40 (т.е. по меньшей мере 75%-ное ингибирование), предпочтительно не более чем примерно 20, 15, 10, 5, 1, 0,5%, или даже не более чем примерно 0,1% от уровня В-клеточной пролиферации, которая индуцируется другим антителом к CD40 в отсутствии антагонистического антитела кCD40. В следующих вариантах осуществления изобретения антитело к CD40 обладает антагонистической активностью в отношении В-клеточной пролиферации, которая индуцируется клеточной линией EL4B5,которую оценивают в с помощью анализа В-клеточной пролиферации, например, описанного в примере 4, ниже, и уровень В-клеточной пролиферации, стимулированный клеточной линией EL4B5 в присутствии в присутствии антагонистического антитела к CD40 составляет не более чем примерно 25% от уровня В-клеточной пролиферации, которая индуцируется этой клеточной линией в отсутствии антагонистического антитела к CD40 (т.е. по меньшей мере 75%-ное ингибирование), предпочтительно не более чем примерно 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0,5%, или даже не более чем примерно 0,1% от уровня В-клеточной пролиферации, которая индуцируется клетками линии EL4B5 в отсутствии антагонистического антитела к CD40. В следующих вариантах осуществления изобретения антитело к CD40 является антагонистом индуцированного человеческими Т-клетками производства антител человеческими В-клетками, которое оценивают с помощью анализа активности человеческих Т-клеток-хелперов в отношении производства антител В-клетками, который описан ниже в примере 4. В этом анализе уровень производства антитела изотипа IgG, антитела изотипа IgM или производство антитела и изотипа IgG, и изотипа IgM В-клетками,стимулированными Т-клетками, в присутствии антагонистического антитела к CD40 составляет не более чем примерно 50% от производства соответствующего антитела В-клетками, стимулированными Т- 15018301 клетками, в отсутствии антагонистического антитела к CD40 (т.е. по меньшей мере 75%-ное ингибирование), предпочтительно не более чем примерно 25, 20, 15, 10, 5, 1, 0,5%, или даже не более чем примерно 0,1% от уровня производства соответствующего антитела В-клетками, стимулированными Тклетками, в отсутствии антагонистического антитела к CD40. Под "лигандом CD40" подразумевают любой пептид, полипептид или белок, который связывается сCD40 и активирует один или несколько путей передачи сигнала CD40. Таким образом, "лиганды CD40" включают (но, не ограничиваясь только ими) полноразмерные белки-лигады CD40 и их варианты и фрагменты, которые сохраняют существенную функциональную активность в отношении связывания и стимуляции передачи сигнала CD40 на экспрессирующих CD40 клетках. Модификации нативного лиганда CD40, например, человеческого лиганда CD40 (CD40L; который обозначают также как CD 154),включают (но, не ограничиваясь только ими) замены, делеции, укорочения, удлинения, образование слитых белков, фрагментов, пептидомиметиков и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения анализ или оценка биологической активности антагонистического антитела к CD40 включает применение растворимого CD40L, например, растворимого рекомбинантного человеческого CD40L (фирмаAlexis Corporation, Бингем, Ноттингемшир, Великобритания), для стимуляции передачи сигнала CD40 на экспрессирующих CD40 клетках. Под "опосредуемой CD40L передачей сигнала CD40" подразумевают любой из видов биологической активности, которая является результатом взаимодействия находящего на клеточной поверхности рецептора CD40 с лигандом CD40. Примерами сигналов CD40 являются сигналы, которые приводят к пролиферации и выживанию экспрессирующих CD40 клеток и стимуляции одного или нескольких путей передачи сигнала CD40 в экспрессирующих CD40 клетках. Понятия "передача сигнала" или "путь трансдукции сигнала" CD40 относятся по меньшей мере к одной из биохимических реакций или группе биохимических реакций, которые являются результатом взаимодействия СО 40-рецептора с лигандом CD40,например CD40L, и которые генерируют сигнал, который, когда он передается через путь передачи сигнала, приводит к активации одной или нескольких молекул расположенных ниже по ходу каскада сигнала. Пути трансдукции сигнала включают ряд молекул трансдукции сигнала, которые обеспечивают передачу сигнала от находящегося на клеточной поверхности CD40-рецептора через плазматическую мембрану клетки и через одну или несколько молекул в серии молекул трансдукции сигнала, через цитоплазму и в некоторых случаях в ядро клетки. Пути трансдукции сигнала CD40 включают, например, путь передачи сигнала АКТ, который приводит к активации АКТ и в конце концов к активации NF-В через путь передачи сигнала NF-В; и пути передачи сигнала активируемой митогеном протеинкиназы(МАРК), включая путь передачи сигнала MEK/ERK и путь передачи сигнала МЕК/р 38, которые приводят к активации ERK и р 38 соответственно. Определенный баланс между активацией и блокадой этих путей передачи создает предпочтение либо для выживания, либо для апоптоза клеток. В некоторых вариантах осуществления изобретения стабильные фармацевтические композиции,предлагаемые в изобретении, содержат антагонистические антитела к CD40, которые блокируют опосредуемую CD40L передачу сигнала CD40. Более подробное описание роли антагонистических антител кCD40 в блокаде опосредуемой CD40L передаче сигнала CD40 см., например, в предварительных заявках на патент, озаглавленных "Antagonist Anti-CD40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), поданных 4 ноября 2003 г., 26 ноября 2003 г. и 27 апреля 2004 г., и переуступленных заявках на патент США 60/517337 (досье у патентного поверенного . РР 20107.001 (035784/258442, 60/525579 (досье у патентного поверенногоРР 20107.002 (035784/271525 и 60/565710 (досье у патентного поверенногоРР 20107.003(035784/277214 соответственно и в международной заявке на патент PCT/US2004/037152 (досье у патентного поверенногоРР 20107.004 (035784/282916, которая озаглавлена "Antagonist Anti-CD40Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), поданной 4 ноября 2004 г., и опубликованной как WO 2005/044854); содержание каждого из перечисленных документов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Их роль описана также в предварительной заявке, озаглавленной "Methods for Diagnosis andTreatment of Proliferative Disorders Mediated by CD40 Signaling" ("Методы диагностики пролиферативных нарушений, опосредуемых передачей сигнала CD40"), поданной 9 декабря 2005 г., и в переуступленной заявке на патент США 60/749285 досье у патентного поверенногоРР 028035.0002(035784/304312, и в соответствующей в международной заявке на патент PCT/US2006/019414 (досье у патентного поверенногоРР 028035.0003 (035784/311611, которая подана 18 мая 2006 г. и опубликована как WO 2006/125143; и в предварительной заявке на патент, озаглавленной как "Methods for Diagnosis and Treatment of Diseases Having an Autoimmune and/or Inflammatory Component" ("Методы диагностики и лечения заболеваний, имеющих аутоиммунный и/или воспалительный компонент"), которая подана 9 декабря 2005 г., и в переуступленной заявке на патент США 60/749336 (досье у патентного поверенногоРР 028062.0002 (035784/304311, и в соответствующей в международной заявке на патентPCT/US2006/019325 (досье у патентного поверенногоРР 028062.0003 (035784/311608, которая подана 18 мая, 2006 г. и опубликована как WO 2006/125117; содержание каждого из перечисленных докумен- 16018301 тов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Стабильные жидкие фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, содержат антагонистические антитела к CD40, в частности, антагонистические антитела к CD40 и/или их антигенсвязывающие фрагменты. При описании указанных антител применяют следующие понятия и определения."Антитело" и "иммуноглобулины" (Ig) означают гликопротеины, обладающие одинаковыми структурными характеристиками. Понятия являются синонимами. В некоторых случаях специфичность в отношении антигена иммуноглобулина может быть известна. Понятие "антитело" применяют в его наиболее широком смысле, и оно относится к полностью собранным антителам, фрагментам антител, которые могут связывать антиген (например, Fab, F(ab')2, Fv,одноцепочечные антитела, двойные антитела, химеры антител, гибридные антитела, биспецифические антитела, гуманизированные антитела и т.п.) и рекомбинантым пептидам, содержащим вышеуказанные субстанции. Понятия "моноклональное антитело" и "МАт" в контексте настоящего описания относятся к антителу, полученному из практически гомогенной популяции антител, т.е. индивидуальные антитела, входящие в популяцию, идентичны за исключением возможных встречающихся в естественных условиях мутаций, которые могут присутствовать в минорных количествах."Нативные антитела" и "нативные иммуноглобулины", как правило, представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины массой примерно 150000 Да, состоящие из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (Н) цепей. Каждая легкая цепь сцеплена с тяжелой цепью с помощью одной ковалентной дисульфидной связи, при этом количество дисульфидных мостиков варьируется в тяжелых цепях различных изотипов иммуноглобулинов. Каждая тяжелая и легкая цепь имеет также имеющие регулярное пространственное расположение дисульфидные мостики внутри цепи. Каждая тяжелая цепь имеет на одном конце вариабельную область (VH), за которой следует несколько константных областей. Каждая легкая цепь имеет на одном конце вариабельную область (VL) и константную область на ее другом конце; константная область легкой цепи соответствует первой константной области тяжелой цепи, а вариабельная область легкой цепи соответствует вариабельной области тяжелой цепи. Вероятно, конкретные аминокислотные остатки формируют поверхность раздела между вариабельными областями легкой и тяжелой цепи. Понятие "вариабельная" относится к тому факту, что среди антител последовательности определенных участков вариабельных областей значительно различаются между собой. Вариабельные области обусловливают специфичность в отношении связывания с антигеном. Однако вариабельность не равномерно распределена в вариабельных областях антител. Она сконцентрирована в трех сегментах, которые называют определяющими комплементарность участками (CDR) или гипервариабельными участками, в вариабельных областях, как легкой цепи, так и тяжелой цепи. Наиболее консервативные участки вариабельных областей расположены в каркасных (FR) участках. Каждая из вариабельных областей нативных тяжелых и легких цепей содержит четыре FR-участка, главным образом, адоптированных к -складчатой конфигурации, которые связаны тремя CDR, которые образуют петли, связывающие, а в некоторых случаях образующие часть -складчатой структуры. CDR в каждой цепи поддерживаются в тесной близости FR-участками и вместе с CDR другой цепи участвуют в образовании антигенсвязывающего центра антитела (см. Kabat и др., NIH Publ. No. 91-3242, том I, 1991, сс. 647-669). Константные области не участвуют непосредственно в связывании антитела с антигеном, но обладают различными эффекторными функциями, такими как связывание Fc-рецептора (FcR), участие антитела в антитело-обусловленной клеточной токсичности, инициации комплементзависимой цитотоксичности и дегрануляции тучных клеток. Понятие "гипервариабельный участок" в контексте настоящего описания относится к аминокислотным остаткам антитела, которые ответственны за связывание с антигеном. Гипервариабельный участок содержит аминокислотные остатки из "определяющего комплементарность участка" или "CDR" (т.е. остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в вариабельной области легкой цепи и 31-35 (H1), 50-65 (Н 2) и 95-102 (Н 3) в вариабельной области тяжелой цепи; Kabat и др., Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest, 5-е изд., изд-во Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD, 1991) и/или остатки из "гипервариабельной петли" (т.е. остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в вариабельной области легкой цепи (H1), 53-55 (Н 2) и 96-101 (Н 3) в вариабельной области тяжелой цепи; Chothia и Lesk, J. Mol.Biol, 196, 1987, ее. 901-917). В контексте настоящего описания подразумевается, что остатки "каркасного участка" или "FR" представляют собой остатки вариабельной области, отличные от остатков гипервариабельного участка."Фрагменты антитела" содержат часть интактного антитела, предпочтительно антигенсвязывающую или вариабельную область интактного антитела. Примерами фрагментов антитела являются Fab-,Fab-, F(ab')2- и Fv-фрагменты; двойные антитела; линейные антитела (Zapata и др., Protein Eng. 10, 1995,сс. 1057-1062); молекулы одноцепочечных антител; и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. Расщепление антител папаином приводит к образованию двух идентичных антигенсвязывающих фрагментов, которые называют "Fab"-фрагментами, каждый из которых несет один анти- 17018301 генсвязывающий центр, а название оставшегося "Fc"-фрагмента отражает его способность легко кристаллизоваться. В результате обработки пепсином получают F(ab)2-фрагмент, который имеет два антигенсвязывающихся центра и обладает способностью к перекрестному связыванию с антигеном."Fv"-фрагмент представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный распознающий антиген и связывающийся с антигеном сайт. Эта область состоит из димера одной вариабельной области тяжелой и одой вариабельной области легкой цепи, находящихся в тесной нековалентной ассоциации. Именно в этой конфигурации три CDR каждой вариабельной области взаимодействуют с образованием антигенсвязывающего центра на поверхности VH-VL-димера. В целом, шесть CDR придают антителу специфичность связывания с антигеном. Однако даже одна вариабельная область (или половина Fv, содержащая только три CDR, специфических для антигена) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя с более низкой аффинностью по сравнению с полным сайтом связывания.Fab-фрагмент также содержит константную область легкой цепи и первую константную область(СH1) тяжелой цепи. Fab-фрагмент отличается от Fab'-фрагментов тем, что содержит несколько дополнительных остатков на С-конце СH1-области тяжелой цепи, включая один или несколько остатков цистеина из шарнирной области антитела. В контексте настоящего описания "Fab'-SH" обозначает Fab'-фрагмент, в котором остаток(и) цистеина константных областей несет(ут) свободную тиольную группу. Fab'фрагменты получают восстановлением дисульфидного мостика тяжелой цепи F(ab')2-фрагмента. Известны другие варианты химических сочетаний фрагментов антител."Легкие цепи" антител (иммуноглобулинов) различных видов позвоночных можно отнести к одному из двух четко различимых типов, которые обозначают как каппаи лямбда , на основе аминокислотных последовательностей их константных областей. В зависимости от аминокислотной последовательности константных областей их тяжелых цепей иммуноглобулины можно отнести к различным классам. Известно пять основных классов человеческих иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, некоторые из них можно дополнительно подразделять на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные области тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, обозначают как альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны. Различные изотипы имеют различные эффекторные функции. Например, человеческие изотипы IgG1 и IgG3 обладают ADCC-активностью (антитело-обусловленной клеточнозависимой цитотоксичностью). Понятие "метка" в контексте настоящего описания относится к выявляемому соединению или композиции, которые конъюгируют прямо или косвенно с антителом с получением "меченого" антитела. Метка может представлять собой выявляемую саму по себе метку (например, радиоизотопные метки или флуоресцентные метки) или в случае ферментативной метки, может катализировать химическое изменение соединения- или композиции-субстрата, которые становятся выявляемыми."Клетка-хозяин" в контексте настоящего описания относится к микроорганизму или эукариотической клетке или линии клеток, культивируемой в виде состоящей из однородных клеток материи, которую можно применять или которую применяли в качестве реципиента для рекомбинантного вектора или других переносимых полинуклеотидов, и она включает потомство исходной клетки, которое было трансфектировано. Следует понимать, что потомство индивидуальной клетки не обязательно может быть полностью идентичным по морфологии или по комплементу геномной или общей ДНК исходной родительской клетке из-за встречающейся в естественных условиях, случайной или преднамеренной мутации."Человеческие эффекторные клетки" представляют собой лейкоциты, которые экспрессируют один или несколько FcR и осуществляют эффекторные функции. Предпочтительно клетки экспрессируют по меньшей мере Fc RIII и обладают такой эффекторной функцией, как антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (ADCC). Примерами человеческих лейкоцитов, которые опосредуют ADCC,являются мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС), естественные клетки-киллеры (NK),моноциты, макрофаги, эозинофилы и нейтрофилы, при этом предпочтительными являются РВМС и NKклетки. Антитела, которые обладают ADCC-активностью, как правило, относятся к изотипу IgG1 илиIgG3. Следует отметить, что помимо выделения антител изотипа IgG1 и IgG3, такие опосредующиеADCC антитела можно получать путем создания конструкции, содержащей вариабельную область из не обладающего ADCC антитела или фрагмента вариабельной области и константную область изотипа IgG1 или IgG3. Понятия "Fc-рецептор" или "FcR" применяют для описания рецептора, который связывается с Fcобластью антитела. Предпочтительным FcR является FcR с нативной человеческой последовательностью. Кроме того, предпочтительным является FcR, который связывается с антителом типа IgG (гаммарецептор), и включает рецепторы подклассов Fc RI, Fc RII и Fc RIII, в том числе аллельные варианты и полученные в результате альтернативного сплайсинга формы этих рецепторов. Fc RII-рецепторы включают Fc RIIA ("активирующий рецептор") и Fc RIIB ("ингибирующий рецептор"), которые имеют сходные аминокислотные последовательности, которые отличаются прежде всего своими цитоплазмати- 18018301 ческими доменами. Активирующий рецептор Fc RIIA содержит иммунорецепторный несущий тирозин активирующий мотив (ITAM) в цитоплазматическом домене. Ингибирующий рецептор Fc RIIB содержит иммунорецепторный несущий тирозин ингибирующий мотив (ITIM) в цитоплазматическом доменеClin. Med. 126, 1995, cc. 330-341. Другие FcR, включая те, которые могут быть идентифицированы в будущем, подпадают под понятие "FcR", приведенное в настоящем описании. Под понятие подпадает также неонатальный рецептор, FcRn, который ответствен за перенос материнских IgG плоду (Guyer и др., J.Immunol. 117, 1976, с. 587, и Kim и др., J. Immunol. 24, 1994, с. 249). Известны различные пути создания человеческих антител. Например, секретирующие клетки можно иммортализировать путем заражения вирусом Эпштейна-Барра (EBV). Однако зараженные EBV клетки трудно клонировать, и при их применении обычно получают относительно невысокий выход иммуноглобулина (James и Bell, J. Immunol. Methods 100, 1987, cc. 5-40). В будущем для иммортализации человеческих В-клеток можно будет использовать интродукцию определенной комбинации трансформирующих генов. Такая возможность убедительно продемонстрирована современными данными о том, что экспрессия каталитической субъединицы теломеразы в сочетании с большим онкопротеином SV40 и онкогенным аллелем H-ras приводила к онкогенной конверсии здоровых человеческих эпителиальных клеток и фибробластов (Hahn и др., Nature 400, 1999, cc. 464-468). В настоящее время можно получать трансгенных животных (например, мышей), которые после иммунизации могут продуцировать спектр человеческих антител в отсутствии эндогенного производства иммуноглобулинов (Jakobovits и др., Nature 362, 1993, cc. 255-258; Lonberg и Huszar, Int. Rev. Immunol. 13, 1995, cc. 65-93; Fishwild и др., Nat.Biotechnol. 14, 1996, cc. 845-851; Mendez и др., Nat. Genet. 15, 1997, cc. 146-156; Green, J. Immunol. Methods 231, 1999, cc. 11-23; Tomizuka и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 2000, cc. 722-727; обзор, приведенный у Little и др., Immunol. Today 21, 2000, cc. 364-370). Например, было установлено, что гомозиготная делеция гена в области стыка тяжелой цепи (JH) в химерных мышах и несущих мутант в зародышевой линии мышах приводит к полному ингибированию производства эндогенных антител (Jakobovits и др.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1993, cc. 2551-2555). Перенос набора генов иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии в такую мутантную зародышевую линию мышей приводит к производству человеческих антител после контрольного заражения антигеном (Jakobovits и др., Nature 362, 1993, cc. 255258). Mendez с соавторами (Nature Genetics 15, 1997, cc. 146-156) создали линию трансгенных мышей, у которой после контрольного заражения антигеном образовывались обладающие высокой аффинностью полностью человеческие антитела. Для этой цели можно использовать введение (интеграцию) локусов размером порядка миллиона оснований человеческой зародышевой линии тяжелой цепи и легкой цепи в мышей с делецией в эндогенном JH-сегменте, которые описаны выше. Такие мыши (полученные согласно технологии XenoMouseII (фирма Abgenix; Фремонт, шт. Калифорния несут локус размером 1,020 т.п.н. человеческой тяжелой цепи, содержащий примерно 66 VH-генов, полные DH- и JH-области и три различные константные области, а также несут локус размером 800 т.п.н. человеческой к-цепи, содержащий 32 V-гена, J-сегменты и С-гены. Антитела, которые образуются в таких мышах, очень сходны с человеческими во всех аспектах, включая перегруппировку, сборку и спектр генов. Уровень экспрессии человеческих антител превышает уровень экспрессии эндогенных антител из-за делеции в эндогенном сегменте, которая препятствует перегруппировке генов в мышином локусе. Таких мышей можно иммунизировать представляющим наибольший интерес антигеном. Сыворотку из таких иммунизированных животных можно подвергать скринингу в отношении реактивности антитела на исходный антиген. Лимфоциты можно выделять из лимфатических узлов или спленоцитов и можно дополнительно разделять В-клетки на СD138-негативные и СD19-позитивные клетки. Согласно одному из объектов такие В-клеточные культуры (ВСС) можно сливать с клетками миеломы с получением подробно описанных выше гибридом. Согласно другому объекту указанные В-клеточные культуры можно дополнительно подвергать скринингу предпочтительно в отношении реактивности на начальный антиген. Для скрининга используют иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA) с белком мишенью/антигеном, конкурентный анализ с известными антителами, которые связываются с представляющим интерес антигеном, и анализ связывания in vitro с кратковременно трансфектированными СНО или другими клетками, экспрессирующими антиген-мишень. Моноклональные антитела к CD40 известны в данной области (см., например, разделы, относящиеся к В-клеточному антигену в: Leukocyte Typing III and IV, под ред. McMichael, изд-во Oxford UniversityPress, New York, 1987; 1989, US 5674492; 5874082; 5677165; 6056959; WO 00/63395; опубликованные международные заявки на патент WO 02/28905 и WO 02/28904; Gordon и др., J. Immunol. 140, 1988, с. 1425; Valle и др., Eur. J. Immunol. 19, 1989, с. 1463; Clark и др., PNAS 83, 1986, с. 4494; Paulie и др., J. Immunol. 142, 1989, с. 590; Gordon и др., Eur. J. Immunol. 17, 1987, с. 1535; Jabara и др., J. Exp. Med. 172,1990, с. 1861; Zhang и др., J. Immunol. 146, 1991, с. 1836; Gascan и др., J. Immunol. 147, 1991, с. 8; публикации включены в настоящее описание в качестве ссылки). Другие моноклональные антитела кCD40 представляют собой (но, не ограничиваясь только ими) гуманизированные антитела к CD40, такие как SGN-40 (Tai и др., Cancer Res. 64, 2004, с.с. 2846-52; US 6838261), которое представляет собой гуманизированную форму мышиного антитела к CD40 SGN-14 (Francisco и др., Cancer Res. 60, 2000, cc. 32253231), и агонистические и антагонистические антитела, описанные в опубликованной заявке на патент США 2004/0120948; которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. Представляющими наибольший интерес в контексте настоящего изобретения являются антагонистические антитела к CD40 или их антигенсвязывающие фрагменты, которые служат для блокады опосредуемой CD40L передачи сигнала CD40 и которые могут также модулировать ADCC, что, например,характерно для антитела CHIR-12.12, описанного ниже. Антагонистические антитела к CD40, предназначенные для применения в стабильных жидких фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении, представляют собой моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обладают способностью специфически связываться с человеческим антигеном CD40, который экспрессируется на поверхности человеческой клетки. В некоторых вариантах осуществления изобретения антагонистические антитела к CD40, входящие в стабильные жидкие фармацевтические композиции, обладают сильной аффинностью к связыванию с одним сайтом находящегося на поверхности клеток антигена CD40. Для таких моноклональных антител характерно значение константы равновесия диссоциации (KD) для CD40, составляющее по меньшей мере 10-5 М, по меньшей мере 310-5 М, предпочтительно по меньшей мере от 10-6 М до 10-7 М, более предпочтительно по меньшей мере от 10-8 М до примерно 10-12 М, которое оценивают с помощью стандартного анализа, такого как Biacore. Biacore-анализ известен в данной области и его подробное описание приведено в "BIAapplications handbook". Методы, описанные в WO 01/27160, можно применять для модуляции аффинности к связыванию. Наибольший интерес представляют собой антагонистические антитела к CD40, которые не обладают существенной агонистической активностью, как описано выше, но обладают антагонистической активностью при связывании с антигеном CD40 на человеческих клетках, прежде всего при связывании с антигеном CD40 на неопластических человеческих В-клетках. В одном из вариантов осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40 не обладает существенной агонистической активностью в отношении одного из В-клеточных ответов. В другом варианте осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40 не обладает существенной агонистической активностью в отношении более одного из В-клеточных ответов (таких, например, как пролиферация и дифференцировка или пролиферация, дифференцировка и производство антител). Приемлемые моноклональные антитела к CD40 имеют человеческие константные области; предпочтительно они могут также иметь частично или полностью гуманизированные каркасные участки; и наиболее предпочтительно представляют собой полностью человеческие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты. Примерами указанных моноклональных антител являются антитела, обозначенные в контексте настоящего описания как CHIR-5.9 и CHIR-12.12. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения антагонистическое антитело,присутствующее в стабильных жидких композициях, предлагаемых в изобретении, представляет собой моноклональное антитело CHIR-5.9 или CHIR-12.12. Антитела CHIR-5.9 и CHIR-12.12 представляют собой полностью человеческие моноклональные антитела к CD40 изотипа IgG1, которые продуцируются линиями клеток гибридом 131.2F8.5.9 (обозначена в контексте настоящего описания как линия клеток 5.9) и 153.8E2.D10.D6.12.12 (обозначена в контексте настоящего описания как линия клеток 12.12). Эти линии клеток создавали с помощью спленоцитов из иммунизированных ксенотипических мышей, несущих локус тяжелой цепи человеческого IgG1 и локус человеческой -цепи (получены на основеXenoMouse-технологии; фирма Abgenix; Фремонт, шт. Калифорния). Спленоциты сливали с клетками мышиной миеломы SP2/0 (фирма Sierra BioSource). Полученные гибридомы субклонировали несколько раз для создания стабильных моноклональных клеточных линий 5.9 и 12.12. Другие антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать аналогично, используя мышей, трансгенных по локусам человеческого иммуноглобулина, или с помощью других методов, известных в данной области и/или представленных в настоящем описании. Нуклеотидные и аминокислотные последовательности вариабельных областей антитела CHIR-12.12 и аминокислотные последовательности вариабельных областей антитела CHIR-5.9 представлены в настоящем описании. Более конкретно, аминокислотные последовательности лидерной, вариабельной и константной областей легкой цепи и тяжелой цепи МАт CHIR-12.12 приведены в SEQ ID NO:2 (полная последовательность легкой цепи МАт CHIR-12.12), SEQ ID NO:4 (полная последовательность тяжелой цепи МАт CHIR-12.12) и SEQ ID NO:5 (полная последовательность варианта тяжелой цепи МАт CHIR12.12, представленной в SEQ ID NO:4, где вариант содержит замену серина на остаток аланина в положении 153 SEQ ID NO:4). Нуклеотидные последовательности, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь МАт CHIR-12.12, представлены в SEQ ID NO:1 (кодирующая последовательность легкой цепи МАтCHIR-12.12) и SEQ ID NO:3 (кодирующая последовательность тяжелой цепи МАт CHIR-12.12). Аминокислотные последовательности лидерной, вариабельной и константной областей легкой цепи и тяжелой цепи МАт CHIR-5.9 представлены в SEQ ID NO:6 (полная последовательность легкой цепи МАт CHIR5.9), SEQ ID NO:7 (полная последовательность тяжелой цепи МАт CHIR-5.9) и SEQ ID NO:8 (полная последовательность варианта тяжелой цепи МАт CHIR-5.9, представленной в SEQ ID NO:7, где вариант содержит замену серина на остаток аланина в положении 158 SEQ ID NO:7). Кроме того, гибридомы,экспрессирующие антитела CHIR-5.9 (линия мышиной гибридомы 131.2F8.5.9 (СМСС 12047) и CHIR12.12 (линия мышиной гибридомы 153.8E2.D10.D6.12.12 (СМСС 12056), депонированы в АТСС (Американская коллекция типовых культур; 10801 University Blvd., Manassas, Virginia 20110-2209 (США 17 сентября 2003 г., депозиты для целей патентования обозначены как РТА-5542 и РТА-5543 соответственно. Помимо антагонистической активности антитела к CD40, входящие в стабильные жидкие фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать другим механизмом действия в отношении опухолевых клеток. Например, нативные антитела CHIR-5.9 и CHIR-12.12 обладают ADCC-активностью. В другом варианте вариабельные области антител CHIR-5.9 и CHIR-12.12 можно экспрессировать в антителе другого изотипа, который обладает ADCC-активностью. Можно также конъюгировать нативные формы, рекомбинантные формы или антигенсвязывающие фрагментыCHIR-5.9 или CHIR-12.12 с цитотоксином, терапевтическим агентом или радиоактивным металлом или радиоизотопом, которые будут указаны ниже. Моноклональные антитела CHIR-5.9 и CHIR-12.12 связывают растворимый CD40 в анализах типаELISA, предупреждают связывание лиганда CD40 с расположенным на клеточной поверхности CD40 и замещают ранее связанный лиганд CD40, что установлено с помощью анализов, основанных на использовании метода проточной цитометрии. Антитела CHIR-5.9 и CHIR-12.12 конкурируют друг с другом за связывание с CD40, но не конкурируют с 15 В 8, моноклональным антителом к CD40, которое описано в предварительной заявке на патент США, сер. . 60/237556, озаглавленной "Human Anti-CD40 Antibodies" ("Человеческие антитела к CD40"), поданной 2 октября 2000 г. и международной заявкой РСТPCT/US01/30857, также озаглавленной "Human Anti-CD40 Antibodies" ("Человеческие антитела к CD40"),поданной 2 октября 2001 (досье у патентного поверенного . РР 16092.003), обе полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. При оценке in vitro воздействия на пролиферацию В-клеток здоровых людей CHIR-5.9 и CHIR-12.12 действуют в качестве антагонистических антител к CD40. Кроме того, CHIR-5.9 и CHIR-12.12 не индуцируют сильную пролиферацию человеческих лимфоцитов здоровых индивидуумов. Эти антитела обладают способностью уничтожать экспрессирующие CD40 клеткимишени посредством антитело-обусловленной клеточнозависимой цитотоксичности (ADCC). По даннымBiacore-анализа аффинность к связыванию CHIR-5.9 с человеческим CD40 характеризуется значением 1,210-8 М, аффинность к связыванию CHIR-12.12 характеризуется значением 510-10 М. Другие антагонистические антитела к CD40, которые имеют характеристики связывания, аналогичные характеристикам описанных выше моноклональных антител CHIR-5.9 и CHIR-12.12, включают (но,не ограничиваясь только ими) следующие антитела: (1) моноклональные антитела, которые продуцируются линиями клеток гибридом, обозначенных как 131.2F8.5.9 (в контексте настоящего описания обозначена как линия клеток 5.9) и 153.8E2.D10.D6.12.12 (в контексте настоящего описания обозначена как линия клеток 12.12), которые депонированы в АТСС для целей патентования под номерамиРТА-5542 иРТА-5543 соответственно; (2) моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность, выбранную и группы, включающей последовательность, которая представлена в SEQ IDNO:2, последовательность, которая представлена в SEQ ID NO:4, последовательность, которая представлена в SEQ ID NO:5, последовательности, которые представлены и в SEQ ID NO:2 и в SEQ ID NO:4, и последовательности, которые представлены и в SEQ ID NO:2 и в SEQ ID NO:5; (3) моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей последовательность, которая представлена в SEQ ID NO:6, последовательность, которая представлена вID NO:6 и в SEQ ID NO:8; (4) моноклональное антитело, аминокислотная последовательность которого кодируется нуклеотидной последовательностью, которая выбрана из группы, включающей нуклеотидную последовательность, которая представлена в SEQ ID NO:1, нуклеотидную последовательность, которая представлена в SEQ ID NO:3, и обеими последовательностями, которые представлены и в SEQ IDNO:1 и SEQ ID NO:3; (5) моноклональное антитело, которое связывается с эпитопом, который обладает способностью связываться с моноклональным антителом, которое продуцируется линией клеток гибридомы 5.9 или линией клеток гидридомы 12.12; (6) моноклональное антитело, которое связывается с эпитопом, содержащим остатки 82-87 аминокислотной последовательности, представленной в SEQ IDNO:10 или SEQ ID NO:12; (7) моноклональное антитело, которое конкурирует с моноклональным антителом CHIR-5.9 или CHIR-12.12 при анализе конкурентного связывания; и (8) моноклональное антитело,которое представляет собой антигенсвязывающий фрагмент моноклонального антитела CHIR-12.12 илиCHIR-5.9 или указанных выше в подпунктах (1)-(7) моноклональных антител, где фрагмент сохраняет способность специфически связываться с человеческим антигеном CD40. Специалистам в данной области должно быть очевидно, что антитела и антигенсвязывающие фраг- 21018301 менты указанных антител, приведенные в настоящем описании, включают антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые получают рекоминантно с помощью методов, хорошо известных в данной области и представленных ниже в настоящем описании, и включают, например, моноклональные антитела CHIR-5.9 и CHIR-12.12, полученные рекомбинантно. Дополнительные антагонистические антитела к CD40 включают моноклональные антитела, обозначенные как 5D12, 3 А 8 и 3 С 6, которые секретируются гибридомами, депонированными в АТСС под регистрационными номерами НВ 11339, НВ 12024 и НВ 11340 соответственно (см., например, US 6315998,который полностью включен в настоящее описание в качестве ссылки). Другие антагонистические антитела к CD40 известны в данной области. К ним относятся человеческое антитело к CD40, которое продуцируется гибридомой, обозначенной как F4-465, что описано в опубликованных заявках на патент США 20020142358 и 20030059427; которые полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. F4-465 получали из организма мыши линии НАС (Kuroiwa и др.,Nature Biotech. 10, 2000, с. 1086), и она экспрессирует человеческую легкую лямбда-цепь. Производство антител для фармацевтических композиций, предлагаемых в изобретении Антитела, предназначенные для применения в фармацевтических композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, например, представленные в описании антагонистические антитела к CD40, можно получать с помощью метода производства антител, известного специалистам в данной области. Так,поликлональную сыворотку можно получать с помощью общепринятых методов. В целом, раствор, содержащий представляющий интерес антиген, т.е. антиген CD40, сначала используют для иммунизации приемлемого животного, предпочтительно мыши, крысы, кролика или козы. Кролики или козы являются предпочтительными для получения поликлональной сыворотки из-за объема получаемой сыворотки и доступности меченых антикроличьих и антикозьих антител. Поликлональную сыворотку можно получать в трансгенном животном, предпочтительно мыши, которая несет локусы человеческого иммуноглобулина. В предпочтительном варианте осуществления изобретения Sf9-клетки, экспрессирующие представляющий интерес белок, например CD40, применяют в качестве иммуногена. Иммунизацию можно осуществлять также путем смешения или эмульгирования содержащего антиген раствора в физиологическом растворе, предпочтительно в адъюванте, таком как полный адъювант Фрейнда, и инъецировать смесь или эмульсию парентрально (как правило, подкожно или внутримышечно). Обычно достаточно использовать дозу 50-200 мкг/инъекцию. Как правило, через 2-6 недель осуществляют вторичную иммунизацию с использованием одной или нескольких инъекций белка в физиологическом растворе, предпочтительно в неполном адъюванте Фрейнда. Альтернативно этому можно получать антитела путем иммунизации in vitro с использованием методов, известных в данной области, которую для целей настоящего изобретения можно считать эквивалентной иммунизации invivo. Поликлональную антисыворотку получают путем взятия крови иммунизированного животного в стеклянный или пластиковый контейнер, инкубирования крови при 25 С в течение 1 ч с последующим инкубированием при 4 С в течение 2-18 ч. Сыворотку выделяют центрифугированием (например, при 1000g в течение 10 мин). Из кроликов можно получать образец крови объемом примерно 20-50 мл. Получение клеток Sf 9 (Spodoptera frugiperdd) описано в US 6004552, который включен в настоящее описание в качестве ссылки. В случае CD40, метод в целом состоит в следующем: последовательности,кодирующие человеческий CD40 получали рекомбинантно в бакуловирусе с помощью вектора для переноса. Плазмидами совместно с ДНК дикого типа бакуловируса трансфектировали клетки Sf 9. Инфицированные рекомбинантным бакуловирусом клетки Sf 9 идентифицировали и клонально очищали. Предпочтительно антитело является моноклональным по своей природе. Под "моноклональным антителом" подразумевают антитело, полученное из популяции практически гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, входящие в популяцию, идентичны за исключением возможных встречающихся в естественных условиях мутаций, которые могут присутствовать в минорных количествах. Понятие не ограничено видами или источниками антитела. Под понятие подпадают полные иммуноглобулины, а также их фрагменты, такие как Fab, F(ab')2, Fv и другие, сохраняющие антигенсвязывающую функцию антитела. Моноклональные антитела являются высоко специфическими, направлены против одного антигенного сайта; например, в случае антител к CD40, к находящемуся на клеточной поверхности антигену CD40. Кроме того, в отличие от общепринятых (поликлональных) препаратов антител, которые, как правило, включают различные антитела к различным детерминантам (эпитопам), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. Прилагательное "моноклональное" свидетельствует о том, что антитело получено из практически гомогенной популяции антител, а не сконструировано, как это принято при получении антитела, с помощью любого конкретного метода. Например, моноклональные антитела, предназначенные для применения согласно настоящему изобретению,можно получать с помощью метода гибридом, который описан у Kohler и др., Nature 256, 1975, с. 495,или можно получать методами рекомбинантной ДНК (см., например, US 4816567). "Моноклональные антитела" можно выделять также из фаговых библиотек антител с помощью методов, описанных, например, у Clackson и др., Nature 352, 1991, сс. 624-628; Marks и др., J. Mol. Biol. 222, 1991, cc. 581-597; и US 5514548. Под "эпитопом" подразумевают часть антигенной молекулы, к которой вырабатывается антитело и с которой антитело связывается. Эпитопы могут содержать линейные аминокислотные остатки (т.е. остатки в эпитопе расположены последовательно друг за другом линейным образом), нелинейные аминокислотные остатки (обозначены в контексте настоящего описания как "нелинейные эпитопы"; в этих эпитопах остатки не расположены последовательно), или и линейные, и нелинейные аминокислотные остатки. Моноклональные антитела можно получать с помощью метода, описанного у Kohler и др. Nature 256, 1975, cc. 495-49, или с помощью его модификации. Как правило, мышь иммунизируют раствором,содержащим антиген. Иммунизацию можно осуществлять также путем смешения или эмульгирования содержащего антиген раствора в физиологическом растворе, предпочтительно в адъюванте, таком как полный адъювант Фрейнда, и инъецировать смесь или эмульсию парентрально. Любой метод иммунизации, известный в данной области, можно применять для получения моноклональных антител, предлагаемых в изобретении. После иммунизации животного у него удаляют селезенку (и необязательно несколько крупных лимфатических узлов) и расщепляют с получением индивидуальных клеток. Спленоциты можно подвергать скринингу, нанося клеточную суспензию на планшет или лунку, сенсибилизированную представляющим интерес антигеном. В-клетки, экспрессирующие связанный с мембраной специфический для антигена иммуноглобулин, связываются с планшетом и не отмываются. Полученные в результате В-клетки или все расщепленные спленоциты затем индуцируют к слиянию с клетками миеломы с получением гибридом и культивируют в селективной среде. Образовавшиеся клетки высевают путем серийного разведения и анализируют в отношении производства антител, которые специфически связываются с представляющим интерес антигеном (и которые не связываются с неродственными антигенами). Отобранные секретирующие моноклональное антитело (МАт) гибридомы затем культивируют либоin vitro (например, во флаконах для культуры ткани, либо в реакторах с полым волокном), либо in vivo (в виде асцитов в мышах). Если антагонистические антитела к CD40 получают с помощью метода рекомбинантной ДНК, то ДНК, кодирующую моноклональные антитела, можно легко выделять и секвенировать с помощью общепринятых процедур (например, с помощью олигонуклеотидных зондов, которые могут специфически связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи мышиных антител). Представленные в настоящем описании клетки гибридом служат в качестве предпочтительного источника указанной ДНК. После выделения ДНК можно переносить в экспрессионные векторы, которыми затем трансфектируют клетки-хозяева, такие как клетки Е. coli, обезьяньи COS-клетки, клетки яичника китайского хомячка(СНО) или клетки миеломы, которые без указанной трансфекции не продуцируют белок иммуноглобулина, в результате происходит синтез моноклональных антител в рекомбинантных клетках-хозяевах. Обзорные статьи, касающиеся рекомбинантной экспрессии в бактериях ДНК, кодирующей антитела, включают публикации Skerra и др., Curr. Opinion in Immunol. 5, 1993, с. 256, и Phickthun, Immunol. Revs. 130,1992, с. 151. В альтернативном варианте антитело можно получать в линии клеток, такой как линия СНО-клеток, согласно методу, описанному в US 5545403; 5545405; и 5998144; которые включены в настоящее описание в качестве ссылки. В целом, метод состоит в следующем: линию клеток трансфектируют векторами, которые могут экспрессировать легкую цепь и тяжелую цепь соответственно. Путем трансфекции двумя белками, находящимися в разных векторах, можно получать химерные антитела. Другим преимуществом является правильное гликозилирование антитела. В некоторых вариантах осуществления изобретения антагонистическое антитело к CD40, например антитело CHIR-12.12 или CHIR-5.9, или его антигенсвязывающий фрагмент получают в СНО-клетках с помощью системы экспрессии гена GS (фирма Lonza Biologies, Портсмут, шт. Нью-Гемпшир), в которой используют глутаминсинтетазу в качестве маркера (см. также US 5122464; 5591639; 5658759; 5770359; 5827739; 5879936; 5891693 и 5981216; содержание которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки). Кроме того, антитела, предназначенные для применения в фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении, могут представлять собой химерные антитела, которые обладают требуемыми характеристиками связывания. Так, например, химерные антитела к CD40, предназначенные для применения в способах, предлагаемых в изобретении, могут обладать характеристиками связывания моноклональных антител CHIR-5.9 и CHIR-12.12, представленных в настоящем описании. Под "химерными" антителами подразумевают антитела, которые наиболее предпочтительно получены с помощью технологии рекомбинантной дезоксирибонуклеиновой кислоты и которые содержат как человеческие (включая полученные из иммунологически "родственных" видов, например шимпанзе), так и полученные из организма, кроме человека, компоненты. Так, константная область химерного антитела наиболее предпочтительно практически идентична константной области встречающегося в естественных условиях человеческого антитела; вариабельная область химерного антитела наиболее предпочтительно выведена из источника, кроме человека, и обладает требуемой антигенной специфичностью в отношении представляющего интерес антигена, т.е. антигена CD40. Источник, кроме человека, может представлять собой взятое в качестве источника любое позвоночное животное, которое можно использовать для получения антител к человеческому антигену или материалу, содержащему человеческий антиген CD40. Такие источники,кроме человека, включают (но, не ограничиваясь только ими) грызунов (таких, например, как кролик,- 23018301 крыса, мышь и т.д.; см., например, US 4816567, который включен в настоящее описание в качестве ссылки) и приматов кроме человека (таких, например, как узконосые обезьяны, высшие приматы; см., например, US 5750105 и 5756096; которые включены в настоящее описание в качестве ссылки). В контексте настоящего описания понятие "иммунологически активный" касательно, например, химерных антител кCD40, означает, что химерное антитело связывается с человеческим CD40. Под понятием "гуманизированные" подразумевают формы антител, которые содержат минимальную последовательность, выведенную из последовательностей иммуноглобулинов из организма кроме человека. В основном гуманизированные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины(антитело-реципиент), в которых остатки из гипервариабельных участков (которые называют также определяющими комплементарность участками или CDR) реципиента заменены остатками из гипервариабельного участка видов, кроме человека, (антитело-донор), таких как мышь, крыса, кролик или примат кроме человека, которые обладают требуемой специфичностью, аффинностью и потенциалом. Понятие"гипервариабельный участок" относится к аминокислотным последовательностям, которые в совокупности определяют аффинность и специфичность связывания встречающегося в естественных условиях Fvфрагмента сайта связывания нативного иммуноглобулина (см., например, Chothia и др., J. Mol. Biol. 196,1987, cc. 901-917; Kabat и др., NIH Publication No. 91-3242, изд-во U. S. Dept. of Health and Human Services, 1991). Понятие "константная область" относится к области молекулы антитела, которая обусловливает эффекторные функции. В проведенном ранее исследовании, касающемся получения неиммуногенных антител, предназначенных для лечения заболевания человека, мышиные константные области заменяли человеческими константными областями. Константные области подлежащих гуманизации антител получали из человеческих иммуноглобулинов. Однако указанные гуманизированные антитела все еще вызывали нежелательный и потенциально опасный иммунный ответ у людей и характеризовались снижением аффинности. Гуманизированные антитела, например гуманизированные антитела к CD40, предназначенные для применения в фармацевтических композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, имеют характеристики, аналогичные характеристикам представляющего интерес родительского антитела, например, описанных выше моноклональных антител CHIR-5.9 и CHIR-12.12. Гуманизацию можно осуществлять практически в соответствии с методом, описанным Winter с соавторами (Jones и др., Nature 321, 1986, с.с. 522-525; Riechmann и др., Nature 332, 1988, cc. 323-327; Verhoeyen и др., Science 239, 1988, cc. 1534-1536), путем замены CDR или последовательностей CDR грызунов или мутантных CDR или последовательностей CDR грызунов на соответствующие последовательности человеческого антитела (см. также US 5225539; 5585089; 5693761; 5693762; 5859205; которые включены в настоящее описание в качестве ссылки). В некоторых случаях остатки в каркасных участках одной или нескольких вариабельных областей человеческого иммуноглобулина заменяют на соответствующие нечеловеческие остатки (см., например, US 5585089; 5693761; 5693762 и 6180370). Кроме того,гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаружены в антителе-реципиенте или в антителе-доноре. Эти модификации осуществляют для дополнительного усовершенствования характеристики антитела (например, для получения требуемой аффинности). В целом, гуманизированное антитело должно содержать практически полностью по меньшей мере одну и, как правило, две вариабельные области, в которых все или практически все гипервариабельные участки соответствуют участкам нечеловеческого иммуноглобулина, а все или практически все каркасные участки имеют последовательность человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело необязательно должно содержать также по меньшей мере часть константной области (Fc) иммуноглобулина, как правило, человеческого иммуноглобулина. Дополнительные детали см. у Jones и др., Nature 331, 1986, cc. 522-525; Riechmann и др., Nature 332, 1988, cc. 323-329; и у Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2, 1992, cc. 593-596; которые включены в настоящее описание в качестве ссылки. Таким образом, указанные "гуманизированные" антитела могут представлять собой антитела, в которых существенно меньшая область, чем интактная человеческая вариабельная область, заменена на соответствующую последовательность из видов, кроме человека. На практике гуманизированные антитела, как правило, представляют собой человеческие антитела, в которых некоторые остатки CDR и возможно некоторые остатки каркасного участка заменены на остатки из аналогичных сайтов антител грызунов (см., например, US 5225539; 5585089; 5693761; 5693762; 5859205. Кроме того, в US 6180370 и опубликованной международной заявке WO 01/27160 описаны гуманизированные антитела и методики, предназначенные для получения гуманизированных антител с улучшенной аффинностью в отношении предварительно отобранного антигена. Настоящее изобретение можно также воплощать на практике, используя ксеногенные или модифицированные антитела, которые продуцируются в хозяине-млекопитающем кроме человека, более конкретно в трансгенной мыши, которые отличаются инактивированными эндогенными локусами иммуноглобулина (Ig). В таких трансгенных животных компетентные эндогенные гены, экспрессирующие субъединицы легкой и тяжелой цепи иммуноглобулинов хозяина, делают нефункциональными и заменяют на аналогичные локусы человеческого иммуноглобулина. Такие трансгенные животные продуцируют человеческие антитела, которые в значительной степени лишены субъединицы легкой и тяжелой цепи иммуноглобулина хозяина (см., например, US 5877397 и 5939598, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки). В некоторых вариантах осуществления изобретения полностью человеческие антитела к CD40, например, получают путем иммунизации трансгенных мышей. В частности, указанных мышей получают с помощью XenoMouse-технологии (фирма Abgenix; Фремонт, шт. Калифорния), и она описана в US 6075181, 6091001 и 6114598, которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Для получения представленных в описании антител мышей, трансгенных по локусу тяжелой цепи человеческогоIgG1 и локусу человеческой легкой к-цепи, иммунизировали клетками Sf 9, экспрессирующими человеческий CD40. Мыши могут быть также трансгенными по другим изотипам. Полностью человеческие антитела к CD40, которые можно применять в стабильных жидких фармацевтических композициях,предлагаемых в настоящем изобретении, отличаются способностью к связыванию, аналогичной способностью к связыванию, присущей представленным в настоящем описании моноклональным антителам кCHIR-5.9 и CHIR-12.12. Фрагменты конкретного представляющего интерес антитела, например, антитела к CD40, включая антагонистическое антитело к CD40, можно применять в стабильных жидких фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении, если они сохраняют требуемую аффинность полноразмерного антитела. Так, например, фрагмент антитела к CD40 должен сохранять способность связываться с поверхностным антигеном CD40 В-клеток. Для таких фрагментов характерны свойства, аналогичные свойствам соответствующего полноразмерного антитела. Так, например, фрагмент полноразмерного антагонистического антитела к CD40 должен специфически связываться с человеческим антигеном CD40, который экспрессируется на поверхности человеческой клетки, и не обладать существенной агонистической активностью, но проявлять антагонистическую активность при связывании с антигеном CD40 на человеческой клетке, экспрессирующей CD40. Указанные фрагменты обозначают как "антигенсвязывающие" фрагменты. Приемлемые антигенсвязывающие фрагменты антитела содержат часть полноразмерного антитела,как правило, его антигенсвязывающую или вариабельную область. Примерами фрагментов антител являются (но, не ограничиваясь только ими) Fab-, F(ab')2- и Fv-фрагменты и одноцепочечные молекулы антител. Под "Fab-фрагментом" подразумевают одновалентный антигенсвязывающий фрагмент иммуноглобулина, который состоит из легкой цепи и части тяжелой цепи. Под F(ab')2-фрагментом подразумевают двухвалентный антигенсвязывающий фрагмент иммуноглобулина, который содержит как обе легкие цепи, так и часть обеих тяжелых цепей. Под "одноцепочечными Fv-фрагментами" или "sFv" антитела подразумевают фрагменты, которые содержат VH- и VL-области антитела, причем эти области присутствуют в одноцепочечном полипептиде (см., например, US 4946778, 5260203, 5455030 и 5856456, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки). Как правило, полипептид Fv содержит также полипептидный линкер между VH- И VL-областями, который позволяет sFv образовывать структуру, требуемую для связывания антигена. Обзор работ, посвященных sFv, см. у Pluckthun, в: The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies, т. 113, под ред. Rosenburg и Moore, изд-во Springer-Verlag, New York, 1994, cc. 269-315. Антигенсвязывающие фрагменты антагонистических антител к CD40, представленных в настоящем описании, можно конъюгировать также с цитотоксином для уничтожения раковых клетокмишеней, что будет описано ниже. Антитела или фрагменты антител можно выделять также из фаговых библиотек антител, созданных с помощью методик, которые описаны, например, у McCafferty и др., Nature 348, 1990, cc. 552-554 и в US 5514548. Clackson и др., Nature 352, 1991, cc. 624-628 и Marks и др., J. Mol. Biol. 222, 1991, cc. 581-597 описали выделение мышиных и человеческих антител соответственно с помощью фаговых библиотек. В последующих публикациях описано производство высокоаффинных (нМ-диапазон) человеческих антител путем перестановки цепей (Marks и др., Bio/Technology 10, 1992, cc. 779-783), а также посредством комбинаторного заражения и рекомбинации in vivo в качестве стратегии для конструирования очень больших фаговых библиотек (Waterhouse и др., Nucleic. Acids Res. 21, 1993, cc. 2265-2266). Таким образом, указанные методики представляют собой важные альтернативы получения моноклональных антител традиционным методам получения моноклональных антител с помощью гибридом. Для получения фрагментов антител разработаны различные методики. Традиционно эти фрагменты получают посредством протеолитического расщепления интактных антител (см., например, Morimoto и др., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24, 1992, cc. 107-117 и Brennan и др., Science 229,1985, с. 81). Однако эти фрагменты в настоящее время можно получать непосредственно с помощью рекомбинантных клеток-хозяев. Например, фрагменты антитела можно выделять из фаговых библиотек антител, описанных выше. В альтернативном варианте Fab'-SH-фрагменты можно непосредственно выделять из Е. coli и химически сшивать с получением F(ab')2-фрагментов (Carter и др., Bio/Technology 10,1992, cc. 163-167). Согласно другому подходу F(ab')2-фрагменты можно выделять непосредственно из культуры рекомбинантных клеток-хозяев. Другие методики получения фрагментов антител должны быть очевидны специалисту в данной области. Антагонистистические антитела к CD40, предназначенные для применения в стабильных жидких фармацевтических композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, представляют собой описанные выше моноклональные антитела CHIR-5.9 и CHIR-12.12, а также антитела, отличающиеся от указанных антител, но сохранившие их CDR; и антитела с одним или несколькими аминокислотным(и) добав- 25018301 лением(ями), делецией(ями) или заменой(ами), где антагонистическую активность оценивают по ингиброванию В-клеточной пролиферации и/или дифференцировке. Изобретение относится также к деиммунизированным антителам, прежде всего деиммунизированным антагонистическим антителам к CD40,которые можно получать согласно методу, описанному, например, в международных заявках на патентWO 98/52976 и WO 0034317; которые включены в настоящее описание в качестве ссылки. При использовании этого метода остатки в антагонистических антителах к CD40, предлагаемых в изобретении, модифицируют так, чтобы сделать антитела неиммуногенными или менее иммуногенными для людей, при этом они сохраняют свою антагонистическую активность в отношении человеческих клеток, экспрессирующих CD40, при этом указанную активность оценивают с помощью анализов, приведенных в настоящем описании. Также под объем настоящего изобретения подпадают слитые белки, содержащие представляющее интерес антитело, например, антагонистическое антитело к CD40 или его фрагмент, указанные слитые белки можно синтезировать или экспрессировать из соответствующих полинуклеотидных векторов, известных в данной области. Указанные слитые белки описаны в разделе настоящего описания, касающемся конъюгации антител. Любое известное антитело, которое имеет представляющую интерес специфичность связывания,может иметь вариации последовательности, полученные с помощью методов, описанных, например, в опубликованных патентах ЕР 0983303 Al, WO 00/34317 и WO 98/52976, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки. Например, было установлено, что последовательности в CDR могут обусловливать связывание антитела с молекулами ГКГ класса II и запускать нежелательный ответ Т-клетокхелперов. Консервативная замена может способствовать сохранению антителом биологической активности, но утрате его способности запускать нежелательный Т-клеточный ответ. Любые указанные консервативные или неконсервативные замены можно осуществлять с помощью методов, известных в данной области, таких как указаны в настоящем описании, и получать антитела, которые можно использовать в стабильных жидких фармацевтических композициях, предлагаемых в настоящем изобретении. Варианты антител, как правило, можно тестировать в отношении конкретного вида активности, например, антагонистической активности, аффинности и специфичности, с использованием представленных в настоящем описании методов. Антагонистическое антитело к CD40, полученное с помощью любых описанных выше методов или любого другого метода, представленного в настоящем описании, или любого другого метода, не представленного в настоящем описании, можно использовать аналогично антителу CHIR-12.12 или CHIR-5.9,если оно обладает по меньшей мере одним из указанных видов биологической активности: ингибирует секрецию иммуноглобулинов здоровыми человеческими В-клетками периферической крови, стимулированными Т-клетками; ингибирует выживание и/или пролиферацию здоровых человеческих В-клеток периферической крови, стимулированных Т-клетками линии Jurkat; ингибирует выживание и/или пролиферацию здоровых человеческих В-клеток периферической крови, стимулированных клетками, экспрессирующими CD40L или растворимый лиганд CD40 (sCD40L); ингибирует "выживание" антиапоптозных внутриклеточных сигналов в любых клетках, стимулированных sCD40L или твердофазным CD40L; ингибирует трансдукцию сигнала CD40 в любой клетке после лигирования с sCD40L или твердофазнымCD40L; ингибирует пролиферацию человеческих злокачественных В-клеток; снижает чувствительность,делает нечувствительным (анергия) и/или обусловливает толерантность к индукции несущих CD40 клеток-мишеней или клеток, несущих родственные лиганды CD40, включая (но, не ограничиваясь только ими) Т-клетки и В-клетки; индуцирует экспансию или активацию регуляторных CD4+CD25+-T-клеток(см., например, данные об отторжении донорской аллоантигенспецфической ткани в результате взаимодействия CD40-CD40L у Maurik и др., J. Immunol. 169, 2002. сс. 5401-5404); обусловливает цитотоксичность посредством любого механизма, включая (но, не ограничиваясь только ими) антителообусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (ADCC), комплементзависимую цитотоксичность(CDC), понижающую регуляцию пролиферации и/или апоптоз клеток-мишеней); модулирует секрецию цитокинов и/или экспрессию находящихся на клеточной поверхности молекул клетками-мишениями; и их комбинациями. Анализы, предназначенные для оценки требуемой биологической активности антагонистических антител к CD40, представленных в настоящем описании, и их антигенсвязывающих фрагментов можно осуществлять с помощью методов, описанных в предварительных заявках на патент, озаглавленных "Antagonist Anti-CD40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела к CD40 и способы их применения"), которые поданы 4 ноября 2003 г. 26 ноября 2003 г. и 27 апреля 2004 г., и переуступленных заявок на патент США 60/517337 (досье у патентного поверенногоРР 20107.001 (035784/258442, 60/525579 (досье у патентного поверенногоРР 20107.002 (035784/271525 и 60/565710 (досье у патентного поверенногоРР 20107.003(035784/277214 соответственно; и международной заявке на патент PCT/US2004/037152 (досье у патентного поверенногоРР 20107.004 (035784/282916, которая озаглавлена также "Antagonist AntiCD40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use" ("Антагонистические моноклональные антитела кCD40 и способы их применения"), поданной 4 ноября 2004 г. и опубликованной как WO 2005/044854; содержание каждого из документов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки (см. также анализы, описанные в предварительной заявке, озаглавленной "Methods for Diagnosis and Treatmentof Proliferative Disorders Mediated by CD40 Signaling", "Способы диагностики и лечения пролиферативных заболеваний, опосредуемых передачей сигнала CD40", поданной 9 декабря 2005 г., и переуступленной заявке на патент США 60/749285 (досье у патентного поверенного . РР 028035.0002(035784/304312 и соответствующей международной заявке на патент PCT/US2006/019414 (досье у патентного поверенногоРР 028035.0003 (035784/311611, поданной 18 мая 2006 г. и опубликованной какWO 2006/125143; и в предварительной заявке, озаглавленной "Methods for Diagnosis and Treatment of Diseases Having an Autoimmune and/or Inflammatory Component", ("Способы диагностики и лечения заболеваний, имеющих аутоиммунный и/или воспалительный компонент"), поданной 9 декабря 2005 г., и в переуступленной заявке на патент США 60/749336 (досье у патентного поверенного . РР 028062.0002(035784/304311, и соответствующей международной заявке на патент PCT/US2006/019325 (досье у патентного поверенного . РР 028062.0003 (035784/311608, поданной 18 мая 2006 г., и опубликованной как WO 2006/125117; содержание каждого из документов полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Анализы описаны также у Schultze и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 1998, cc. 82008204; Denton и др., Pediatr. Transplant. 2, 1998, cc. 6-15; Evans и др., J. Immunol. 164, 2000, cc. 688-697;Coligan и др., Current Protocols in Immunology 13, 1991, с 12; Kwekkeboom и др., Immunology 79, 1993, c.c. 439-444; и US 5674492 и 5847082; содержание которых включено в качестве ссылки. Репрезентативный анализ, позволяющий выявлять антагонистические антитела к CD40, специфические для эпитопов антигена CD40, который применяют в настоящем описании, представляет собой "анализ конкурентного связывания". Анализы конкурентного связывания представляют собой серологические анализы, в которых неизвестные субстанции выявляют и количественно оценивают по их способность ингибировать связывание меченого известно лиганда со специфическим для него антителом. Это относится также к конкурентным анализам ингибирования. В репрезентативном конкурентном анализе связывания меченый полипептид CD40 осаждают антителами-кандидатами в образце, например, в сочетании с моноклональными антителами к одному или нескольким эпитопам моноклональных антител,предлагаемых в изобретении. Антитела к CD40, которые специфически взаимодействуют с представляющим интерес эпитопом, можно идентифицировать путем скрининга серий антител, образовавшихся к белку CD40 или фрагменту белка, содержащему конкретный представляющий интерес эпитоп белкаCD40. Например, представляющие интерес эпитопы человеческого CD40 представляют собой эпитопы,содержащие линейные и/или нелинейные аминокислотные остатки короткой изоформы человеческогоCD40 (см., GenBank, регистрационный . NP690593), последовательность которой представлена в SEQID NO:10, кодируемая последовательностью, представленной в SEQ ID NO:9; см. также GenBank, регистрационный . NM152854), или длинной изоформы человеческого CD40 (см., GenBank, регистрационныеСАА 43045 и NP001241, последовательность которой представлена в SEQ ID NO:12, кодируемая последовательностью, представленной в SEQ ID NO:11; см.е GenBank, регистрационные . Х 60592 и NM001250). В альтернативном варианте конкурентные анализы связывания с использованием ранее идентифицированных приемлемых антагонистических антител к CD40 можно применять для отбора моноклональных антител, сопоставимых по активности с ранее идентифицированными антителами. Антитела, применяемые в указанных иммуноанализах, могут быть мечеными или немечеными. Немеченые антитела можно применять при агглютинации; меченые антитела можно применять в широком разнообразии анализов, используя широкое разнообразие меток. Выявление образования комплекса антитело-антиген между антителом к CD40 и представляющим интерес эпитопом можно облегчать, присоединяя выявляемую субстанцию к антителу. Приемлемые пути выявления включают применение меток, таких как радионуклиды, ферменты, коферменты, флуоресцентные метки, хемилюминесцентные метки, хромогены, субстраты ферментов или кофакторов, ингибиторы ферментов, комплексы простетических групп, свободные радикалы, частицы, красители и т.п Примерами приемлемых ферментов являются пероксидаза из хрена, щелочная фосфатаза, -галактозидаза или ацетилхолинэстераза; примерами приемлемых комплексов простетических групп являются комплексы стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примерами приемлемых флуоресцентных материалов являются умбеллиферон, флуоресцеин, изотиоцианат флуоресцеина, родамин, дихлортриазиниламин флуоресцеина, дансилхлорид или фикоэритин; примером люминесцентного материала является луминол; примерами биолюминисцентных материалов являются люцифераза, люциферин и экворин; и примерами приемлемых радиоактивных материалов являются 125I, 1311,35S или 3 Н. Указанные меченые реагенты можно применять в широком разнообразии анализов, таких как радиоиммуноанализы, ферментные анализы, например, ELISA, флуоресцентные иммуноанализы и т.п. (см., например, US 3766162; 3791932; 3817837 и 4233402). Любые ранее описанные антагонистические антитела к CD40 или их антигенсвязывающие фрагменты можно конъюгировать перед применением в фармацевтических композициях, предлагаемых в настоящем изобретении. Методы получения конъюгированных антител известны в данной области. Так,антитело можно метить путем непрямого мечения или подхода, основанного на непрямом мечении. Под"непрямым мечением" или "подходом, основанном на непрямом мечении" подразумевают, что хелатирующий агент ковалентно присоединяют к антителу и по меньшей мере один представляющий интерес радионуклид встраивают в хелатирующий агент (см., например, хелатирующие агенты и радионуклиды,- 27018301 описанные у Srivagtava и Mease, Nucl. Med. Bio. 18, 1991, cc. 589-603, публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки). Приемлемые метки представляют собой флуорофоры, хромофоры, радиоактивные атомы (прежде всего 32 Р и 125I), агенты, реагирующие на электронную плотность, ферменты и лиганды, которые имеют "партнеров для специфического связывания". Ферменты, как правило, выявляют по их активности. Например, пероксидазу из хрена обычно выявляют по ее способности превращать 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМВ) с образованием голубого пигмента, который можно оценивать количественно спектрофотометрическим методом. Понятие "партнер для специфического связывания" относится к белку, обладающему способностью связываться с молекулой-лигандом с высокой специфичностью, как, например, в случае антигена и специфического для него моноклонального антитела. Другие партнеры для специфического связывания представляют собой биотин и авидин или стрептавидин, IgG и протеин А и многочисленные пары рецептор-лиганд, известные в данной области. Следует понимать, что в изложенном выше описании не ставится задача разделить различные метки на конкретные классы, поскольку некоторые метки могут выполнять свою функцию посредством нескольких различных механизмов. Например, I может служить в качестве радиоактивной метки или в качестве агента, реагирующего на электронную плотность. HRP может служить в качестве фермента или в качестве антигена для МАт. Кроме того, можно комбинировать различные метки для достижения требуемого эффекта. Например,МАт и авидин также требуется метить при воплощении на практике настоящего изобретения: так можно метить МАт биотином и выявлять его присутствие с помощью авидина, меченного I, или МАт к биотину,меченному с помощью HRP. Другие перестановки и возможности должны быть очевидны обычным специалистам в данной области, и они рассматриваются в качестве эквивалентов в контексте настоящего изобретения. В альтернативном варианте представляющее интерес антагонистическое антитело к CD40 можно метить путем прямого мечения или подхода, основанного на прямом мечении, при этом радионуклид ковалентно присоединяют к антителу (как правило, через аминокислотный остаток). Предпочтительные радионуклиды представлены у Srivagtava и Mease, 1991, выше. Подход, основанный на непрямом мечении, является наиболее предпочтительным (см. также, например, опубликованные международные заявки на патент WO 00/52031 и WO 00/52473, в которых для присоединения радиоактивной метки к антителам используют линкер; и меченые формы антител к CD40, описанные в US 6015542; которые включены в настоящее описание в качестве ссылки). Варианты антител Для приготовления фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, можно использовать варианты антагонистического антитела к CD40, известные в данной области. Такие варианты должны сохранять требуемую способность к связыванию родительского антитела. Так, например, когда подлежащее к включению в препаративную форму антагонистическое антитело к CD40 представляет собой вариант родительского антитела CHIR-12.12 или CHIR-5.9, то антитело-вариант должно сохранять способность к связыванию, характерную для родительского антитела CHIR-12.12 или CHIR5.9. Методы создания вариантов антител в целом, являются доступными в данной области. Например,аминокислотную последовательность вариантов антагонистического антитела к CD40, например, моноклонального антитела CHIR-5.9 или CHIR-12.12, представленного в настоящем описании, можно получать с помощью мутаций в клонируемой последовательности ДНК, которая кодирует представляющее интерес антитело. Методы мутагенеза и изменения нуклеотидных последовательностей хорошо известны в данной области (см., например, Techniques in Molecular Biology под ред. Walker и Gaastra, изд-во MacMillan Publishing Company, New York, 1983; Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 1985, cc. 488-492;Manual, Cold Spring Harbor, New York, 1989; US 4873192; и процитированные в указанных публикациях ссылки; указанные публикации включены в настоящее описание в качестве ссылки). Руководство по осуществлению соответствующих аминокислотных замен, которые не должны влиять на биологическую активность представляющего интерес полипептида, можно почерпнуть из модели, представленной уDayhoff и др., Atlas of Protein Sequence and Structure, изд-во Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.,1978, публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительными могут быть консервативные замены, при которых заменяют одну аминокислоту другой с аналогичными свойствами. Примерами консервативных замен являются (но, не ограничиваясь только ими) Gly Ala, Val IleLeu, Asp Glu, Lys Arg, Asn Gln и Phe TrpTyr. При конструировании вариантов полипептида представляющего интерес антагонистического антитела к CD40, например, антитела CHIR-12.12 или CHIR-5.9, осуществляют такие модификации, что полученные в результате варианты продолжают обладать требуемой активностью, т.е. аналогичной аффинностью к связыванию, и в случае антагонистических антител к CD40, обладают способностью к специфическому связыванию с человеческим антигеном CD40, экспрессируемым на поверхности человеческой клетки, и не обладают существенной агонистической активностью, но проявляют антагонистическую активность при связывании с антигеном CD40 на человеческой экспрессирующей CD40 клетке. Очевидно, что любые мутации в ДНК, которая кодирует вариант полипептида, не должны затрагивать последовательность вне рамки считывания и предпочтительно не должны приводить к созданию комплементарных областей, которые могут приводить к образованию вторичной структуры мРНК (см. опубликованную заявку на европейский патент ЕР 75444). Кроме того, константную область антагонистического антитела к CD40 можно разнообразными путями подвергать мутации для изменения эффекторной функции. Например, см. US 6737056B1 и опубликованную заявку на патент США 2004/0132101 А 1, в которых описаны мутации Fc, которые оптимизируют связывание антитела с Fc-рецепторами. Предпочтительно варианты антагонистического референс-антитела к CD40 имеют аминокислотные последовательности, которые идентичны по меньшей мере на 70 или 75%, предпочтительно идентичны по меньшей мере на 80% или 85% более предпочтительно идентичны по меньшей мере на 90, 91, 92, 93,94 или 95% аминокислотной последовательности референс-антитела, например, представленного в настоящем описании моноклонального антитела CHIR-5.9 или CHIR-12.12, или укороченного фрагмента молекулы референс-антитела. Более предпочтительно последовательность молекул идентична по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99%. Для целей настоящего изобретения процент идентичности последовательности определяют с помощью алгоритма поиска гомологии Смита-Ватермана, используя для поиска аффинной бреши штраф за открытие бреши 12 и штраф за удлинение бреши 2, матрицу BLOSUM 62. Алгоритм поиска гомологии Смита-Ватермана изложен у Smith и Waterman, Adv. Appl. Math. 2, 1981, сс. 482-489. Вариант может, например, отличаться от антагонистического референс-антитела к CD40 примерно 1-15 аминокислотными остатками, примерно 1-10 аминокислотными остатками, например, 6-10,примерно 5, примерно 4, 3, 2 или даже 1 аминокислотным остатком. Для оптимального сравнительного анализа двух аминокислотных последовательностей непрерывный сегмент варианта аминокислотной последовательности может иметь дополнительные аминокислотные остатки или удаленные в результате делеции аминокислотные остатки относительно аминокислотной референс-последовательности. Непрерывный сегмент, применяемый для сравнения с аминокислотной референс-последовательностью, может включать по меньшей мере 20 смежных аминокислотных остатков, и может состоять из 30, 40, 50 или большего количества аминокислотных остатков. Можно осуществлять коррекции идентичности последовательностей, ассоциированные с консервативными заменами остатков или брешами (см. алгоритм поиска гомологии Смита-Ватермана). Методы лечения с помощью фармацевтических композиций, предлагаемых в изобретении Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, находят применение при лечении индивидуума, страдающего раком или предраковым состоянием, ассоциированным с экспрессирующими CD40 клетками, или при лечении воспалительного заболевания и/или аутоиммунного заболевания, ассоциированного с экспрессирующими CD40 клетками. Понятие "лечение" в контексте настоящего описания относится к нанесению или введению фармацевтической композиции, которая содержит антагонистическое антитело к CD40, индивидууму, или к нанесению или введению фармацевтической композиции, которая содержит антагонистическое антитело к CD40, в выделенную ткань или линию клеток из организма индивидуума, где индивидуум имеет заболевание, симптом заболевания или предрасположенность к заболеванию, при этом целью является излечивание, заживление, облегчение, ослабление, изменение, лечение, уменьшение интенсивности, улучшение состояния или воздействие на заболевание, симптомы заболевания или предрасположенность к заболеванию. Под "индивидуумом" подразумевают любое животное. Предпочтительно индивидуум представляет собой млекопитающее, наиболее предпочтительно индивидуум представляет собой человека. Другие важные помимо человека млекопитающие представляют собой (но, не ограничиваясь только ими) собак,кошек, коров, лошадей, овец и свиней. Когда введение осуществляют с целью лечения, то оно может быть проведено с целью профилактики или терапии. В случае профилактического применения фармацевтическая композиция приводит к улучшению любого симптома. Профилактическое применение фармацевтической композиции служит для предупреждения или ослабления любого возникающего в последствии симптома. В случае терапевтического применения фармацевтическую композицию используют сразу (или вскоре после) проявления симптома. Терапевтическое применение фармацевтической композиции служит для ослабления любого уже имеющегося симптома. Типичные пути введения включают (но, не ограничиваясь только ими) оральное введение и парентеральное введение, в том числе внутривенную, внутримышечную, подоболочечную, интраназальную,подъязычную, внутриартериальную и внутрибрюшинную инъекцию или инфузию, и подкожную инъекцию. Методы осуществления такого введения известны обычному специалисту в данной области. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, вводят внутривенно. Внутривенное введение осуществляют предпочтительно путем инфузии в течение периода времени, составляющего от примерно 1 до примерно 10 ч, более предпочтительно от примерно 1 до примерно 8 ч, еще более предпочтительно от примерно 2 до примерно 7 ч,еще более предпочтительно от примерно 4 до примерно 6 ч, в зависимости от подлежащего введению антагонистического антитела к CD40. Первоначальную инфузию фармацевтической композицией можно осуществлять в течение периода времени, составляющего от примерно 4 до примерно 6 ч, с последую- 29
МПК / Метки
МПК: A61P 35/00, A61K 39/395, C07K 16/28, A61P 43/00
Метки: антагонистическое, антитело, композиции, фармацевтические, моноклональное, применение, содержащие, cd40
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-18301-farmacevticheskie-kompozicii-soderzhashhie-antagonisticheskoe-monoklonalnoe-antitelo-k-cd40-i-ih-primenenie.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Фармацевтические композиции, содержащие антагонистическое моноклональное антитело к cd40, и их применение</a>
Штамм гибридных клеток мыши, продуцирующий моноклональное антитело 14f7 против ганглиозидов ngcgm3, моноклональное антитело 14f7, фармацевтическая композиция и реактив, содержащие указанное антитело
Номер патента: 3318
Опубликовано: 24.04.2003
Авторы: Васкес Лопес Ана Мария, Масорра Херрера Сайма, Перес Родригес Роландо, Мулет Сьерра Айлетте, Фернандес Молина Луис Энрике, Карр Перес Адриана
МПК: A61K 51/10, A61K 47/48, A61K 39/395...
Метки: ганглиозидов, ngcgm3, указанное, клеток, против, продуцирующий, содержащие, фармацевтическая, реактив, мыши, моноклональное, антитело, штамм, 14f7, композиция, гибридных
Формула / Реферат:
1. Штамм гибридных клеток мыши 14F7 ECACC 98101901, продуцирующий моноклональное антитело 14F7 против ганглиозидов NGcGM3. 2. Моноклональное антитело 14F7, продуцируемое штаммом гибридных клеток по п.1, специфично распознающее олигосахаридную последовательность N-гликолилированная галактоза-глюкоза-сиаловая кислота в ганглиозиде NGcGM3 и обладающее цитолитической активностью по отношению к опухолевым клеткам, содержащим указанную...
Моноклональное антитело человека к cd40 и способы его применения
Номер патента: 11449
Опубликовано: 27.02.2009
Авторы: Глэйдью Роналд П., Фенг Ксиао, Корвалан Хосе, Бедиан Вахе, Джиа Ксиао-Чи
МПК: A61P 35/00, A61P 37/04, A61K 39/395...
Метки: антитело, человека, моноклональное, способы, применения
Формула / Реферат:
1. Человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, которые специфически связываются с CD40, причем указанное антитело или его антигенсвязывающая часть являются агонистом CD40, и антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 указанной тяжелой цепи и аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 указанной легкой цепи выбраны из группы, состоящей из: (a)...
Моноклональное антитело или его фрагмент, связывающиеся с полипептидом il-22ra, гуманизированное антитело, полученное из указанного антитела, гибридомы, продуцирующие антитело, и применение указанного антитела
Номер патента: 15706
Опубликовано: 31.10.2011
Авторы: Сюй Вэньфэн, Мур Маргарет Д., Киндсвогель Уэйн Р., Сивакумар Паллавур В., Ленер Джойс М., Чандрасекер Ясмин А., Диллон Стейси Р., Сиадак Энтони У.
МПК: C07K 16/28, C07K 14/715, A61K 39/395...
Метки: продуцирующие, полипептидом, моноклональное, il-22ra, фрагмент, указанного, применение, гуманизированное, антитело, гибридомы, связывающиеся, антитела, полученное
Формула / Реферат:
1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые экспрессируются гибридомой, выбранной из группы, состоящей из:a) гибридомного клона 280.46.3.4 АТСС РТА - 6284;b) гибридомного клона 281.73.49.1.1 АТСС РТА - 6285;c) гибридомного клона 283.4.1.2 АТСС РТА - 6287;d) гибридомного клона 283.52.5.4 АТСС РТА - 6311 иe) гибридомного клона 283.108.2.3 АТСС РТА - 6286,где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент связываются с IL-22RA...
Моноклональное антитело s19 к поверхностному антигену сперматозоидов, антиген, выявляемый таким антителом, и содержащие его вакцина и спермицид
Номер патента: 3531
Опубликовано: 26.06.2003
Авторы: Вестбрук-Кейс Энн, Дикман Алан Б., Херр Джон С., Нортон Элизабет
МПК: C07K 14/00, A61K 39/00, A61P 15/16...
Метки: выявляемый, антителом, моноклональное, спермицид, содержащие, антитело, антигену, антиген, сперматозоидов, вакцина, таким, поверхностному
Формула / Реферат:
1. Моноклональное антитело S19, продуцируемое гибридомой АТСС НВ-12144, специфичное к поверхностному гликопротеину сперматозоидов SAGA-1. 2. Очищенный поверхностный гликопротеин сперматозоидов SAGA-1, связываемый моноклональным антителом по п.1. 3. Противозачаточная вакцина, содержащая поверхностный гликопротеин сперматозоидов по п.2 в количестве, эффективном для индуцирования образования антител к нему при введении в женскую особь...
Моноклональное антитело против миостатина и его применение
Номер патента: 15903
Опубликовано: 30.12.2011
Авторы: Коритко Эндрю Игорь, Дэвис Джулиан, Джонс Брайан Эдвард, Митчелл Памела Джин, Смит Росамунд Кэрол, Ван Жун
МПК: A61P 21/00, A61P 3/00, A61K 39/395...
Метки: применение, миостатина, антитело, моноклональное, против
Формула / Реферат:
1. Антимиостатиновое моноклональное антитело, содержащее полипептид вариабельной области легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO:98 и полипептид вариабельной области тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO:138.2. Антимиостатиновое моноклональное антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит:a) CDRH1 с последовательностью SEQ ID NO:42,b)...
Предыдущий патент: Гетероструктура на основе твердого раствора gainassb, способ ее изготовления и светодиод на основе этой гетероструктуры
Следующий патент: Соединения в качестве модуляторов пути hedgehog
Случайный патент: Способ удаления загрязняющих примесей из потока олефинов с применением экстрактивной дистилляции