Антитела к il-25

(71)(73) Заявитель и патентовладелец: МЕДИКЛ РИСЧ КАУНСИЛ (GB)(57) Изобретение включает антитело 2C3 и мишень-связывающие частицы на основе 2C3, которые связывают интерлейкин-25. Они применимы в терапии, например, для лечения астмы. Область, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к антителам, включая их связывающие фрагменты, направленным на интерлейкин 25 (IL-25). В предпочтительных вариантах настоящего изобретения в качестве антитела используют VH и/или VL домены антитела 2C3. Другой аспект изобретения включает одну или более областей CDR VH и VL доменов, раскрываемых в данном описании, прививаемых к человеческимVH и VL каркасным областям соответственно. Предпосылки создания изобретения Астма является общим хроническим воспалительным расстройством дыхательных путей. За последние десятилетия число страдающих ею резко увеличилось, и по оценкам Всемирной организации здравоохранения во всм мире от астмы страдает около 300 миллионов человек. Аллергическая астма характеризуется неконтролируемой гиперреактивностью (AHR) дыхательных путей, вызываемой различными раздражителями, и ассоциируется с воспалительными инфильтратами в лгких типа 2. Цитокины типа 2 играют важную роль в опосредовании защитного иммунитета к заражению паразитическими червями (гельминтами), регулирующими эффекторные функции, такие как рост В-клеток и секреция IgE, индуцирующими гиперплазию бокаловидных клеток и связанные с ней образование слизи,эозинофилию, мастоцитоз и фиброз (1). Именно главная роль, которую играют эти цитокины в регуляции этих эффекторных функций, сделала их основными терапевтическими мишенями при астме. Действительно, мышиные модели, в которых сверхэкспрессируются эти цитокины, проявляют заметные признаки астмы. В таком случае удивительно, что попытки улучшить состояние, вызванное экспериментальной астмой, блокируя специфические цитокины типа 2, за исключением ингибирования IL-13, оказались безуспешными. Ингибирование IL-13 подавляет как AHR, так и воспаление дыхательных путей, хотя механизм остатся неясным (2, 3). Однако, если принимать во внимание сложную патофизиологию и недостаточно понятную этиологию астмы, неясно, окажется ли в конце концов нацеливание на отдельные пути удачным с терапевтической точки зрения. Недавно было показано, что сверхэкспрессия IL-25/IL-17E, члена семейства цитокинов IL-17 с родственной структурой (8), индуцирует типа 2 реакции in vivo (4-6) и повышает реактивность дыхательных путей к агонистам (7). Из мышей IL25-/- не удатся выгнать паразитических гельминтов; главный показатель неэффективного ответа типа 2 (9, 10). Основная структура антитела общеизвестна в уровне техники. Природное антитело обычно имеет четыре полипептидные цепи: две идентичные тяжлые цепи и две идентичные лгкие цепи, связанные дисульфидными связями. Каждая из тяжлой и лгкой цепей имеет константную и вариабельную области (или домен). За связывание антигена отвечают главным образом вариабельные области. В каждой вариабельной области три подобласти, известные как гипервариабельные участки (области) (CDRs), контактируют (осуществляют контакт) с антигеном. CDRs каждого вариабельного домена нумеруют от N- к С-концу как CDR1, CDR2 и CDR3. Между N- и С-концом к CDRs находятся четыре так называемые каркасные области, которые осуществляют слабый контакт, если вообще осуществляют какой-либо контакт,с антигеном. Более подробно структура антител описана во множестве документов, цитируемых ниже,которые вводятся в данное описание в качестве ссылки. Сущность изобретения Авторы настоящего изобретения получили антитела против IL-25 и идентифицировали молекулу антитела, которое связывается с высокой аффинностью и специфичностью с IL-25. Так как последовательности человеческого и мышиного IL-25 идентичны на 80%, то полагали маловероятной возможность получения антител против IL-25 обычной иммунизацией мышей или крыс, так как толика (степень) подобия уменьшает число иммуногенных эпитопов. Кроме того, граница раздела (интерфейс) рецепторлиганд, по-видимому, проявляет наивысшую степень консервации, тем самым исключая образование антител, способных блокировать взаимодействие IL-25 с его рецептором. Чтобы преодолеть эти сложности, авторы настоящего изобретения иммунизировали мышей, созданных таким образом, чтобы в них отсутствовала экспрессия IL-25 (IL-25-/-), надеясь, что такой подход повысит вероятность развития антител, направленных против границы раздела (интерфейса) IL-25/IL-25R. Этот подход с большим успехом был применн для получения антител против IL-25, вероятно,вследствие того, что IL-25, сам по себе, повышает гуморальный иммунный ответ. Однако даже с помощью такого подхода удалось идентифицировать только 2 блокирующих антитела из 70, подвергшихся скринингу, и только одно из них удалось выделить. Пытаясь преодолеть трудности, вызванные подобием мышиного и человеческого IL-25, которое,как считалось, препятствует получению эффективных блокирующих антител обычными способами, были убеждены, что это подобие последовательностей может способствовать образованию антитела, которое с равной эффективностью блокирует взаимодействие мышиного и человеческого IL-25 со своими рецепторами. Настоящее изобретение показывает теперь, что это происходит на самом деле. Хотя существуют другие антитела к IL-25, авторы изобретения считают, что настоящее изобретение является первой демонстрацией таких антител, способных блокировать IL-25 биоактивность. В частности, настоящее раскрытие включает тест, проведнный на мышиных моделях астмы, который показыва-1 018073 ет, что антитело по изобретению имеет полезные и неожиданные свойства, в особенности его способность предупреждать или снижать гиперреактивность дыхательных путей in vivo, основной симптом астмы. Хотя сообщалось, что введение слитого белка IL-25R-FC уменьшает воспаление типа 2 дыхательных путей, эффект был менее значительным (резким), чем эффект, сообщаемый в данном описании, а критическая оценка AHR не проводилась (11). В данной работе авторы изобретения продемонстрировали, что IL-25 играет важную роль в воспалении и AHR, сначала усиливая воспаление, опосредуемое цитокинами типа 2, но также играет важную роль в индукции AHR независимо от классических цитокинов типа 2. Идентификация IL-25-зависимой AHR дат возможность идентифицировать терапевтические мишени, которые лежат "ниже" (после), "даунстрим" IL-25. В настоящее время авторам изобретения неизвестно, действует ли IL-25 непосредственно на гладкие мышцы дыхательных путей или его действие опосредуется индукцией известных бронхоконстрикторов, таких как лейкотриены. Однако бифазная активность IL-25 делает его превосходной терапевтической мишенью для подавления воспаления дыхательных путей и ингибирования гиперреактивности дыхательных путей in vivo. Соответственно, настоящее изобретение относится к новому антителу, а в более общем плане, к участкам (частицам) связывания с (молекулой-) мишенью (мишень-связывающим участкам (частицам,содержащим последовательности CDR антител, а также к применению участников целевого связывания для лечения патологических состояний, таких как астма. В одном варианте изобретение включает участника целевого связывания, который связывает IL-25 и который содержит VH домен антитела, включающий VH CDR3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7. Эта последовательность представляет собой VH CDR3 последовательность антитела 2C3 по настоящему изобретению. В более специфических вариантах изобретения участник целевого связывания по изобретению представляет собой VH домен, который содержит VH CDR3 SEQ ID NO: 7 вместе с CDR1 SEQ ID NO: 5 и CDR2 SEQ ID NO: 6.VH домен может иметь человеческие каркасные области или каркасные области, показанные вVH домен может быть спарен с VL доменом по изобретению, например VL доменом с CDR1SEQ ID NO: 8, CDR2 SEQ ID NO: 9 и CDR3 SEQ ID NO: 10. Эти CDR могут находиться в VL домене,имеющем человеческие каркасные области или представляющем собой VL домен SEQ ID NO: 4. Так, в одном аспекте настоящее изобретение включает участки связывания с мишенью, который связывает IL-25 и который содержит 2C3 VH домен (SEQ ID NO: 2) и/или 2C3 VL домен (SEQ ID NO: 4). Изобретение также включает выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую участки связывания с мишенью по изобретению, векторы, содержащие нуклеиновую кислоту, и способы экспрессии нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине с целью получения участков связывания с мишенью по изобретению. Далее, изобретение включает применение участков связывания с мишенью по изобретению, например, в виде фармацевтической композиции для лечения заболеваний, включая астму. Эти и другие аспекты изобретения более подробно описаны ниже и со ссылкой на прилагаемые примеры. Описание фигур На фиг. 1 показана нейтрализация IL-25 перед сенсибилизацией, а также в процессе теста на астму(провокации астмы): А - чувствительность к метахолину OVA-сенсибилизированных мышей определяли через один день после последней ингаляторной антигенной стимуляции. Показаны данные 2 экспериментов, которые представляют собой среднееSEM для 14-18 мышей/группа (р 0,05 по сравнению с изотипическим контролем, р 0,01 по сравнению с изотипическим контролем); В - срезы лгких окрашивали красителем Гимзы и оценивали периваскулярную инфильтрацию,n=8/группа; С - содержание слизи определяли окрашиванием срезов лгких периодной кислотой - реактивом Шиффа (PAS), n=8/группа;D - антигенспецифический сывороточный IgE определяли методом ELISA, результат OD переводили в произвольные единицы, сравнивая со стандартной сывороткой, n=8/группа; Е - долю эозинофилов в BAL (БАЛ, бронхиальный лаваж) определяли дифференциальным подсчтом клеток клеточного материала (полученного по методике цитоспина), окрашенных красителем Гимзы,n=6/группа;F - индуцированное антигеном продуцирование цитокинов при использовании рестимулированных клеток медиастинальных лимфоузлов. Уровни белков определяли методом ELISA, n=6/группа. Символами показаны результаты для отдельных животных, а среднее значение показано в виде столбца. Представлены данные по меньшей мере из 2 независимых экспериментов; sens = антитело, введнное перед сенсибилизацией, aero = антитело, вводимое за 4 ч перед каждой ингаляторной стимуляцией. На фиг. 2 показана нейтрализация IL-25 только в процессе теста на астму (провокации астмы): А - чувствительность к метахолину OVA-сенсибилизированных мышей определяли через один день после последней ингаляторной антигенной стимуляции. Показаны данные 2 экспериментов, которые представляют собой среднееSEM для 14-18 мышей/группа (р 0,05 по сравнению с изотипическим контролем, р 0,01 по сравнению с изотипическим контролем); В - срезы лгких окрашивали красителем Гимзы и оценивали периваскулярную инфильтрацию,n=8/группа; С - содержание слизи определяли окрашиванием срезов лгких периодной кислотой - реактивом Шиффа (PAS), n=8/группа;D - долю эозинофилов в BAL (БАЛ, бронхиальный лаваж) определяли дифференциальным подсчтом клеток клеточного материала (полученного по методике цитоспина), окрашенных красителем Гимзы,n=6/группа; Е - антигенспецифический сывороточный IgE определяли методом ELISA, результат OD переводили в произвольные единицы, сравнивая со стандартной сывороткой, n=8/группа;F - индуцированное антигеном продуцирование цитокинов при использовании рестимулированных клеток медиастинальных лимфоузлов. Уровни белков определяли методом ELISA, n=6/группа. Символами показаны результаты для отдельных животных, а среднее значение показано в виде столбца. Представлены данные по меньшей мере из 2 независимых экспериментов; sens = антитело, введнное перед сенсибилизацией, aero = антитело, вводимое за 4 ч перед каждой ингаляторной стимуляцией. На фиг. 3 показано введение rmIL-25 наивным мышам. Мышам дикого типа (А), il13-/- (В) или il4-/-/il5 il9-/-ill3-/- (С) вводили 1,8 мкг rIL-25 или PBS интраназально. Чувствительность к метахолину определяли через 16 ч после стимуляции. р 0,05 по сравнению с изотипическим контролем, р 0,01 по сравнению с изотипическим контролем, n=4-8/группа. Представлены данные по меньшей мере из 2 независимых экспериментов. Последовательности. Участки связывания с мишенью по настоящему изобретению представлены в данном описании далее со ссылкой на нижеприведнные идентификационные номера последовательностей:SEQ ID NO: 10 - аминокислотная последовательность 2C3 VL CDR3. Другие последовательности представлены в прилагаемом списке последовательностей. Подробное описание изобретения Мишень-связывающая частица (мишень-связывающий участок, элемент; участок, связывающийся с мишенью). Это выражение описывает молекулу (частицу, участок, элемент) из пары молекул, обладающих специфичностью связывания друг с другом. Молекулы (партнры) из специфически связывающейся пары молекул могут быть природными или могут быть получены, полностью или частично, синтетическими методами. У одного партнра из пары молекул имеется на поверхности область или углубление (карман), которая(ое(ый специфически связывается с и, следовательно, комплементарна(о) конкретной пространственной и полярной структуре (организации) другого партнра из пары молекул. Таким образом,члены пары обладают свойством специфически связываться друг с другом. Примерами специфически связывающихся пар являются пары антиген-антитело, биотин-авидин, гормон-рецептор гормона, рецептор-лиганд, фермент-субстрат. Данное изобретение имеет отношение к реакциям типа антиген-антитело. Соответственно, участок(партнр), связывающийся с мишенью, по изобретению содержит, по меньшей мере, участок молекулы антитела, более конкретно, по меньшей мере, участок антигенсвязывающего домена такой молекулы. Обычно вариабельная область тяжлой цепи антитела (VH домен) играет значительную роль в связывании антитела с антигеном. Обнаружено, что область CDR3 VH домена является более разнообразной, чем области CDR1 и CDR2, и поэтому большинству антител сообщает специфичность к мишени антитела. Поэтому участки, связывающиеся с мишенью, по изобретению базируются вокруг VH CDR3 области антитела 2C3. Более предпочтительно, участки, связывающиеся с мишенью, по изобретению содержат все три области CDR VH домена антитела 2C3. Структура участка, связывающегосяся с мишенью, который содержит CDR по изобретению, обычно состоит из последовательности тяжлой или лгкой цепи молекулы антитела или е значительной час-3 018073VH и VL вариабельных доменов антитела, кодированных реаранжированными генами иммуноглобулинов. Структуры и местоположения вариабельных доменов иммуноглобулинов можно определить поHuman Services. 1987, и по более поздним переизданиям. Различные академические и коммерческие онлайн ресурсы (источники информации) позволяют получить доступ к этой базе данных. Например, см.and Genetics, 25 (1996), 130-133 и соответствующий он-лайн ресурс, в настоящее время по веб-адресуhttp://www.bioinf.org.uk/abs/simkab.html. Как правило, участок, связывающийся с мишенью, содержит VH домен, спаренный с VL доменом,что сообщает антителу антигенсвязывающий домен, хотя, как подробнее обсуждается ниже, для связывания антигена может использоваться один VH домен. В одном предпочтительном варианте изобретения 2C3 VH домен (SEQ ID NO: 2) спаривается с 2C3 VL доменом (SEQ ID NO: 4), так что образуется антигенсвязывающий сайт антитела, содержащий как 2C3 VH, так и VL домены. В других вариантах изобретения 2C3 VH спаривается с VL доменом, отличным от 2C3 VL. Разнородность лгких цепей тврдо установлена в уровне техники, как подробнее обсуждается в данном описании. Участок, связывающийся с мишенью, по настоящему изобретению может связывать IL-25 с аффинностью, практически аналогичной аффинности антитела 2C3, например 10%. Участок, связывающийся с мишенью, как правило, специфичен к IL-25. Так, участок, связывающийся с мишенью, обычно не проявляет какого-либо заметного связывания с молекулами, отличными от его конкретного партнра по связыванию (конкретных партнров по связыванию). Например, было найдено, что антитело 2C3 не вступает в перекрстную реакцию с IL-4, IL-5 и EL-13, и, следовательно, предотвращение такой перекрстной реактивности с другими цитокинами, непосредственно связанными с астмой и аналогичными процессами, является желательным признаком участков, связывающихся с мишенью, по изобретению. Как правило, специфичность можно определить с помощью анализов связывания, таких как ELISA,с применением панели антигенов. Участок, связывающийся с мишенью, по настоящему изобретению может узнавать IL-25, но не другие члены семейства IL-17, в частности любой из IL-17A, IL-17B иIL-17C; более предпочтительно все три из IL-17A, IL-17B и IL-17C. Связывание связывающегося с мишенью участка по изобретению с EL-25 можно нарушить конкуренцией с рекомбинантным IL-25. Аффинность связывания и эффективность нейтрализации различных связывающихся с мишенью участков можно сравнивать в соответствующих условиях. Молекула антитела. Это выражение описывает иммуноглобулин либо природный, либо частично или полностью полученный синтетическим путм. Было показано, что фрагменты целого антитела могут осуществлять функцию связывания антигенов. Поэтому ссылка на антитело также охватывает любой полипептид или белок, содержащий связывающий фрагмент антитела. Примерами связывающих фрагментов являются:(i) фрагмент Fab, состоящий из доменов VL, VH, CL и СН 1;(ii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и СН 1;(iii) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH единичного антитела;(iv) фрагмент dAb (Ward, E.S. et al., Nature. 341, 544-546 (1989, который состоит из VH домена;(vi) фрагменты F(ab')2, бивалентные фрагменты, содержащие два связанных Fab фрагмента;(vii) одноцепочечные Fv молекулы (scFv), в которых VH домен и VL домен связаны пептидным линкером, который способствует ассоциации двух доменов с образованием антигенсвязывающего сайта(viii) димеры биспецифические одноцепочечных Fv (PCT/OS92/09965) и(ix) "диатела" - "diabodies" ("диабоди"), мультивалентные или мультиспецифические фрагменты,полученные слиянием генов (WO94/13804; P. Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90, 6444-6448,1993). Молекулы Fv, scFv или диател (diabodies) можно стабилизировать введением дисульфидных мостиков, связывающих VH и VL домены (Y. Reiter et al., Nature Biotech, 14, 1239-1245, 1996). Можно также получать мини-антитела, содержащие scFv фрагмент, соединнный с доменом CH3 (S. Hu et al., CancerRes., 56, 3055-3061, 1996). Если нужно применять биспецифические антитела, эти антитела могут представлять собой обычные биспецифические антитела, которые можно получать различными способами (Holliger, P. andWinter G. Current Opinion Biotechnol. 4, 446-449 (1993, например полученные химическими методами или при использовании гибридных гибридом, или могут представлять собой любые биспецифические фрагменты антител, указанные выше. Диатела (diabodies) и scFv можно получать без области Fc, используя только вариабельные домены, потенциально ослабляющие действие антиидиопатических взаимодействий (реакций). Биспецифические диатела (diabodies), в отличие от биспецифических полных антител, могут также быть особенно полезны, так как их легко создать и экспрессировать в Е.coli. Диатела (diabodies) (и многие другие полипептиды, такие как фрагменты антител) с подходящими специфичностями связывания можно легко выбрать, используя фаговый дисплей (WO 94/13804) из библиотек. Если одно плечо диатела следует оставлять константным, например, со специфичностью, направленной против IL-25, затем можно создать библиотеку, с помощью которой изменяют другое плечо, и выбирают антитело с подходящей специфичностью. Биспецифические полные антитела можно получать с помощью техникиknobs-into-holes (J.B.B. Ridgeway et al., Protein eng., 9, 616-621, 1996). Можно брать моноклональные и другие антитела и использовать методы рекомбинантной ДНК для получения других антител или химерных молекул, которые сохраняют специфичность исходного антитела. Такие методы могут включать введение ДНК, кодирующей вариабельную область иммуноглобулина, или гипервариабельные области(CDR), антитела, в константные области, или константные области плюс каркасные области, другого иммуноглобулина. См., например, Европейскую патентную заявку EP-A-184187, патент ВеликобританииGB 2188638A или EP-A-239400. Предпочтительно CDR области прививают в человеческую каркасную область. Человеческую каркасную область можно выбирать различными методами, например, сравнением последовательностей мышиной каркасной области или мышиной V области с известными последовательностями человеческой каркасной области, имеющими наивысшую степень, или одну из наивысших степеней, подобия или идентичности. Можно сделать модификации в каркасных областях нативных последовательностей, чтобы далее оптимизировать полученные в результате CDR-привитые антитела. Хотя в предпочтительном аспекте изобретения предпочтительны молекулы антител, содержащие пару VH и VL доменов, другие аспекты изобретения составляют единичные связывающие домены. Известно, что единичные домены иммуноглобулина, в особенности VH домены, способны связывать антигены-мишени специфическим образом. В случае любого из одноцепочечных связывающих доменов эти домены можно использовать для скрининга комплементарных доменов, способных образовывать двухдоменный участок, связывающийся с мишенью, способный связывать IL-25, как подробнее описано ниже. Молекулы антител по настоящему изобретению могут далее содержать константные области антитела или их участки. Например, VL домен может быть связан по своему С-концу с константными доменами лгкой цепи антитела, включающими человеческие C или C цепи, предпочтительно C. Аналогично, связывающийся с мишенью участок на основе VH домена может связываться по своему С-концу с целой или с частью тяжлой цепи иммуноглобулина, образованной из антитела любого изотипа, например IgG, IgA, IgE и IgM, и любого подкласса изотипов, в особенности IgG1 и IgG4. Предпочтительным является IgG4. Можно использовать Fc-области, такие как nab и nac, раскрываемые в международной патентной заявке WO 99/58572. Соответственно, включаются химерные молекулы, содержащие домен, связывающийся с мишенью,или его эквивалент, слитый с другим полипептидом. Клонирование и экспрессия химерных антител описаны в Европейских патентных заявках EP-A-0120694 и EP-A-0125023. Каркасные области молекул антител по изобретению могут также включать последовательности гликозилирования, которые содержать один или более сайтов гликозилирования. В зависимости от клетки-хозяина, в которой экспрессируется участок, связывающийся с мишенью, паттерн гликозилирования может меняться. Эти нуклеотидные конструкции, которые кодируют сайты гликозилирования, можно модифицировать, удаляя сайт, или же такие сайты можно вводить в белок. Например, сайтыN-гликозилирования в эукариотических белках характеризуются аминокислотным триплетом Asp-X-Y,где X обозначает любую аминокислоту за исключением Pro, a Y обозначает Ser или Thr. Подходящие замены, добавления или делеции в нуклеотидной последовательности этих триплетов приводят к предотвращению связывания углеводных остатков по боковой цепи Asn. Изменение единичного нуклеотида,выбранное таким образом, чтобы, например, Asn был заменн на другую аминокислоту, достаточно для того, чтобы инактивировать сайт N-гликозилирования. Известные методы инактивирования сайтовN-гликозилирования в белках включают методы, описанные в патентах США 5071972 и EP 276846. Термин "антигенсвязывающий домен" описывает участок молекулы антитела, который содержит область, специфически связывающуюся с частью антигена или полным антигеном, и комплементарную части антигена или полному антигену. Если антиген велик, антитело может связываться лишь с конкретным участком антигена, и этот участок называется эпитопом. Антигенсвязывающий домен может предоставляться (создаваться) одним или более вариабельных доменов антитела (например, так называемыйFd фрагмент антитела, состоящий из VH домена). Предпочтительно антигенсвязывающий домен содержит по меньшей мере значительную часть вариабельной области лгкой цепи антитела (VL) и по меньшей мере значительную часть вариабельной области тяжлой цепи антитела (VL). Значительная часть вариабельного домена иммуноглобулина содержит по меньшей мере триCDR-области совместно с промежуточными каркасными областями. Предпочтительно эта часть (этот участок) включает по меньшей мере 50% любой из первой и четвртой каркасной области или обеих этих каркасных областей, причм эти 50% представляют собой С-концевые 50% первой каркасной области иN-концевые 50% четвртой каркасной области. Дополнительные остатки на N- или С-конце этой значительной части вариабельного домена могут представлять собой остатки, обычно не ассоциированные с природными областями вариабельных доменов. Например, создание связывающихся с мишенью участков по настоящему изобретению, получаемых методами рекомбинантной ДНК, может привести к введению N- или С-концевых остатков, кодированных линкерами, введнными с целью содействовать клонированию или другим манипуляциям. Другие манипуляции включают введение линкеров для присоединения вариабельных доменов по изобретению к другим белковым последовательностям, включая тяжлые цепи иммуноглобулинов, другие вариабельные домены (например, при получении диател (искусственных мини-антител, diabodies или белковые метки, более подробно обсуждаемые ниже. Термин "содержат" обычно применяют в смысле "включают", т.е. допускают присутствие одного или более признаков или компонентов. Термин "выделенный" относится к состоянию, в котором связывающийся с мишенью участок по изобретению, или нуклеотид, кодирующий такие связывающие участки, обычно находятся в соответствии с настоящим изобретением. Участки и нуклеотид (нуклеиновая кислота) не содержат или практически не содержат материал, с которым они ассоциированы в природе (в естественных условиях), такой как другие полипептиды или нуклеиновые кислоты, с которыми они находятся в естественной окружающей среде или в среде, в которой их получают (например, культура клеток), когда такое получение осуществляют на практике методами рекомбинантной ДНК in vitro или in vivo. Связывающиеся с мишенью участки и нуклеиновая кислота могут быть приготовлены с разбавителями или адъювантами и вс же с практической точки зрения будут являться выделенными, например связывающиеся участки (партнры, участники, элементы связывания) обычно смешаны с желатином или другими носителями, если они применяются для покрытия микротитрационных планшетов с целью применения в иммуноанализах, или смешаны с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями, если они применяются в диагностике или терапии. Связывающиеся с мишенью участки могут быть гликозилированными либо естественным путм (в природе), либо с применением гетерологичных систем эукариотических клеток (например, CHO или NS0 (ECACC 85110503), или они могут быть (например,если они продуцируются экспрессией в прокариотической клетке) негликозилированными. Дополнительные признаки участков, связывающихся с мишенью. Помимо последовательностей антитела, связывающийся с мишенью участок по настоящему изобретению может содержать другие аминокислоты, например, образующие пептид или полипептид, такой как складчатый домен, или для придания молекуле других функциональных характеристик помимо способности связывать антиген. Связывающиеся с мишенью участки по изобретению могут нести детектируемую метку или могут быть конъюгированы с токсином или ферментом (например, за счт пептидильной связи или линкера). Детектируемые метки включают радиометки (радиоактивные метки), такие как 131I или 99 Тс, которые могут связываться с антителами по изобретению обычными химическими методами, известными в уровне техники для визуализации антител. Метки также включают ферментные метки, такие как пероксидаза хрена. Кроме того, метки включают химические молекулы, такие как биотин, которые можно обнаружить, связывая их со специфической распознаваемой детектируемой молекулой, например с меченым авидином. Если дополнительным признаком является полипептидный домен или метка, связывающийся с мишенью участок можно получать методами рекомбинантной ДНК, т.е. экспрессией нуклеиновой кислоты,кодирующей слияние члена (партнра, участника) целевого связывания и дополнительного домена. Другие связывающиеся с мишенью участки по изобретению. Варианты последовательностей. Варианты VH и VL доменов и CDR, из которых собираются последовательности в данном описании и которые можно применять в связывающихся с мишенью участках для IL-25, можно получать с помощью методов изменения, мутаций и скрининга последовательностей. Такие методы также включает настоящее изобретение. Связывающийся с мишенью участок по настоящему изобретению может также представлять собой участок (партнр), который конкурирует за связывание с антигеном с любым связывающимся с мишенью участком, который как связывает антиген, так и содержит связывающийся с мишенью участок, VH и/илиVL домен, раскрываемый в данном описании, или VH CDR3 антитела 2C3, или вариант любого из них,последовательность которого практически такая, как собранная по данному описанию. Так, другой аспект настоящего изобретения включает связывающийся с мишенью участок, содержащий антигенсвязывающий сайт человеческого антитела, который конкурирует с 2C3 за связывание с IL-25. Анализ конкуренции между связывающими (мишень) участками можно легко осуществить in vitro, например используя метод ELISA или добавляя к одному связывающему участку специфическую репортрную молекулу,которую можно обнаруживать в присутствии другого (других) немеченого (немеченых) связывающего участка (учатков), чтобы способствовать идентификации членов целевого связывания, которые связывают тот же самый эпитоп или перекрывающий эпитоп. В уровне техники существуют различные методы получения связывающихся с мишенью участков против EL-25 и тех, которые конкурируют с 2C3 за связывание с IL-25. Как обсуждалось, варианты аминокислотной последовательности вариабельных доменов любого изVH и VL доменов, последовательности которых конкретно раскрываются в данном описании, можно использовать по настоящему изобретению. Конкретные варианты могут включать одно или более изменений аминокислотной последовательности (добавление, делецию, замену и/или инсерцию аминокислотного остатка), могут представлять собой менее примерно 20 изменений, менее примерно 15 изменений, менее примерно 10 изменений или менее примерно 5 изменений, 4, 3, 2 или 1. Изменения можно делать в одной или более каркасных областях и/или в одной или более CDR. В одном аспекте аминокислотная последовательность CDR, практически (в основном, по сути) по данному описанию (как представлено в данном описании), переносится в виде CDR в человеческий вариабельный домен или значительную его часть. VH CDR3 последовательности практически по данному описанию представляют собой предпочтительные варианты настоящего изобретения, и предпочтительно, чтобы каждая из них переносилась в виде VH CDR3 в вариабельный домен человеческой тяжлой цепи или значительную его часть. Под выражением "практически как представлено" ("практически по (данному описанию)") понимают, что релевантный CDR или VH или VL домен по изобретению будет либо идентичен, либо будет иметь высокую степень подобия указанным областям, последовательность которых представлена в данном описании. Под "высокой степенью подобия" подразумевают, что от 1 до 5, предпочтительно от 1 до 4, например от 1 до 3 или 1, или 2, или 3, или 4 аминокислотных замен можно сделать в CDR и/или в VH или VL домене. Варианты последовательностей участков, связывающихся с мишенью, можно получать случайным мутагенезом одного или обоих 2C3 VH и/или VL генов, генерируя мутации в целом вариабельном домене. Такой метод описан Gram et al. (1992, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 89: 3576-3580), который использует склонную к ошибкам (ненаджную) ПЦР. Другой метод, который можно использовать, представляет собой направленный мутагенез в CDRобласти VH или VL генов. Такие методы раскрываются Barbas et al. (1994, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91: 3809-3813) и Schier et al. (1996, J. Mol. Biol. 263: 551-567). Все описанные выше методы сами по себе известны в уровне техники и в этом качестве не являются частью настоящего изобретения. Специалист способен применить такие методы для получения связывающихся с мишенью участков по изобретению, используя обычные методики из уровня техники. Соответственно в другом аспекте изобретение охватывает способ получения антитела против IL-25,который включает: предоставление исходной нуклеиновой кислоты, кодирующей участок, связывающийся с мишенью,который содержит одну или более CDR последовательностей SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4; модификацию указанной нуклеиновой кислоты с целью изменить последовательность или последовательности CDR; экспрессию указанного модифицированного участка, связывающегося с мишенью; и тестирование указанного модифицированного участка, связывающегося с мишенью, на связывание с IL-25. Предпочтительно модификацию осуществляют на совокупности исходных нуклеотидных молекул,чтобы получить набор модифицированных последовательностей с разнообразными аффиностями связывания. В одном аспекте изобретения исходная нуклеиновая кислота содержит все три CDR тяжлой цепиSEQ ID NO: 2 либо в виде самой SEQ ID NO: 2, либо перенеснные в другую каркасную последовательность. В одном варианте изобретения модификации могут быть направлены на единичную CDR, например на CDR3, или модификации могут быть направлены на две или три области CDR одновременно. Получение связывающихся с мишенью участков на основе CDR3. Вариабельные домены, применяемые в изобретении, можно получать из человеческого вариабельного домена зародышевой линии или реаранжированного человеческого вариабельного домена, или они могут представлять собой синтетические вариабельные домены на основе консенсусных последовательностей известных человеческих вариабельных доменов. CDR последовательность по изобретению (например, CDR3) можно вводить в набор вариабельных доменов, не содержащих CDR (в частности,CDR3), используя методы рекомбинантной ДНК. Например, Marks et al. (Bio/Technology, 1992, 10: 779-783) описывают методы получения набора(спектра) вариабельных доменов антитела, в которых консенсусные праймеры, направленные на 5' конец или прилегающие к 5' концу области вариабельного домена, используют в сочетании с консенсусными праймерами к третьей каркасной области человеческого VH гена, чтобы получить спектр (набор) VH вариабельных доменов, не содержащих CDR3. Далее Marks et al. описывают, как этот набор можно объединять (комбинировать) с CDR3 конкретного антитела. Используя аналогичные методы, можно провести шаффлинг (перетасовку) CDR3 последовательностей по настоящему изобретению со спектром (набором)VH или VL доменов, не содержащих CDR3, и "перетасованные" (после шаффлинга) полные VH или VL домены объединяют с родственным VL или VH доменом, получая связывающиеся с мишенью участки по изобретению. Набор (спектр) можно затем визуализировать в подходящей системе-хозяине, такой как фаг-дисплейная система по WO 92/01047, так чтобы можно было выбрать подходящие участки, связывающиеся с мишенью. Набор (спектр) может состоять более чем из 104 отдельных участков (членов),например из 106-108 или 1010 участков (членов). Аналогичные методы шаффлинга или комбинаторные методы раскрываются Stemmer (Nature, 1994,370: 389-391), который описывает этот метод по отношению к гену -лактамазы, но отмечает, что такой подход можно применять для получения антител. Поэтому другой аспект изобретения охватывает способ получения связывающегося с мишенью участка, специфического к IL-25, причм этот способ включает:(а) предоставление исходного набора (спектра) нуклеиновых кислот, кодирующих VH участок, которые либо содержат область, кодирующую подлежащую замене CDR3, либо не содержат область, кодирующую CDR3;(б) объединение (смешивание) указанного набора (спектра) с донорной нуклеиновой кислотой, кодирующей аминокислотную последовательность главным образом (практически) по данному описанию для VH CDR3, так что указанная донорная нуклеиновая кислота встраивается в наборе в область CDR3, с тем, чтобы получить продукт реакции - набор нуклеиновых кислот, кодирующих VH домен;(в) экспрессию нуклеиновых кислот указанного результирующего (полученного) набора;(д) выделение указанного участка, связывающегося с мишенью, или кодирующей его нуклеиновой кислоты. Полученный продукт реакции, результирующий набор, можно коэкспрессировать, при использовании одного и того же вектора или различных векторов, с VL доменом. VL домен может представлять собой VL домен по настоящему изобретению или один или более различных VL доменов, как описано ниже относительно шаффлинга (перетасовки) цепей. Можно применять аналогичный метод, в котором VL CDR3 по изобретению объединяют с набором нуклеиновых кислот, кодирующих VL домен, которые либо содержат область, кодирующую подлежащую замене CDR3, либо не содержат область, кодирующую CDR3. Как и в вышеприведнном методе,полученный набор для VL можно коэкспрессировать, при использовании одного и того же вектора или различных векторов, с VH доменом. VH домен может представлять собой VH домен по настоящему изобретению или один или более различных VH доменов, как описано ниже относительно шаффлинга (перетасовки) цепей. Аналогичным образом одну или более или все три CDR можно привить к набору VH или VL доменов, которые затем подвергают скринингу на участок, связывающийся с мишенью, или участки, связывающиеся с мишенями, специфические к IL-25. Участки, связывающиеся с мишенью, полученные таким образом, образуют другой аспект изобретения. Шаффлинг (перетасовка) цепей. Другой аспект изобретения включает способ получения антигенсвязывающего домена антитела дляIL-25, причм этот способ включает осуществление соединения VH домена связывающегося с мишенью участка по изобретению (включая варианты, обсуждавшиеся выше) с одним или более VL доменов и тестирование комбинации или комбинаций VH/VL на антитело-антиген связывающий домен к IL-25. Указанный VL домен может иметь аминокислотную последовательность, которая является практически (главным образом) последовательностью по данному описанию. Можно применять аналогичный способ, в котором один или более вариантов последовательностиVL домена по данному описанию соединяют (объединяют) с одним или более VH доменов. Это можно осуществить методами фаг-дисплейного скрининга, используя так называемый иерархический двойственный комбинаторный способ, раскрываемый в Международной заявке WO 92/01047, в соответствии с которым индивидуальную колонию, содержащую клон либо Н, либо L цепи, используют для "заражения" полной библиотеки клонов, кодирующих другую цепь (L или Н), и полученный в результате участок, связывающийся с мишенью, выбирают в соответствии с методами фагового дисплея,как описано в данном ссылочном материале. Таким образом, настоящее изобретение включает способ отбора (селекции) молекулы антитела кIL-25, причм этот способ включает:(б) объединение указанного VH домена с совокупностью VL доменов антитела с целью получения молекул антитела;(в) скрининг указанных молекул антитела на связывание с IL-25;VH и VL домены могут предоставляться в виде белков, экспрессированных при использовании рекомбинантной ДНК, в частности фаговой или фаг(е)мидной ДНК. Совокупность VL доменов может представлять собой совокупность более 104 индивидуальных доменов, например от 106 до 108 или 1010 доменов. Молекулы антител и нуклеиновые кислоты, кодирующие такие молекулы, могут образовывать другую часть настоящего изобретения.IL-25, также известный в уровне техники как IL-17E, получают от производителя (например, RDSystems, MN, USA) или его можно клонировать или синтезировать исходя из последовательностей(ссылка 7, см. ниже). Человеческий IL-25 (NCBI Protein Q9H293) описан Fort et al. (ссылка 4, см. ниже). Для получения антител или применения в иммуноанализах можно использовать фрагменты рекомбинантного IL-25, в частности фрагменты, усечнные (процессированные) по N-концу. Например, продажный рекомбинантный человеческий IL-25 (IL-17E) содержит последовательность зрелого белка Tyr 33Gly 177 (регистрационный No. Q9H293), а продажный мышиный IL-25 содержит остатки Val 17-Ala 169 мышиного IL-17E (регистрационный No. NP542767). Нуклеиновые кислоты и векторы. В других аспектах изобретение охватывает выделенную нуклеиновую кислоту, которая содержит последовательность, кодирующую мишень-связывающий участок, VH домен или VL домен по настоящему изобретению и способы получения мишень-связывающего участка, VH домена или VL домена,которые включают экспрессию указанных нуклеиновых кислот в условиях, позволяющих осуществить получение указанного мишень-связывающего участка, VH домена или VL домена, и их выделение. Другой аспект настоящего изобретения включает нуклеиновую кислоту, обычно выделенную, кодирующую VH CDR или VL CDR последовательность, раскрываемую в данном описании, в особенности последовательность VH CDR, выбранную из SEQ ID NO: 65 и 7, последовательность VL CDR, выбранную из SEQ ID NO: 8, 9 и 10, наиболее предпочтительно 2C3 (SEQ ID NO: 7). Нуклеиновые кислоты по изобретению могут содержать последовательности, или их релевантные участки (например, CDR-кодирующие области) SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. Однако использование кодона может варьироваться, например, для оптимизации экспрессии последовательности в заданной клетке-хозяине. Настоящее изобретение далее включает выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую мишеньсвязывающий участок по настоящему изобретению. Нуклеиновая кислота включает ДНК и РНК. В предпочтительном аспекте настоящее изобретение включает нуклеиновую кислоту, которая кодирует CDR,или VH, или VL домен по изобретению по определению выше. Нуклеиновая кислота по изобретению может содержать ДНК или РНК и может быть полностью или частично синтетической. Ссылка на нуклеотидную последовательность по данному описанию охватывают молекулу ДНК со специфической последовательностью и молекулу РНК со специфической последовательностью, в которой остаток U заменн на Т, если по смыслу не требуется иное. Настоящее изобретение также включает векторы, например, в форме плазмид, вирусов, например,фаг или фагемиду, космиды, кассеты транскрипции или экспрессии, которые содержат по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, как указано выше. Можно выбрать или сконструировать подходящие векторы, содержащие соответствующие регуляторные последовательности, включая промоторные последовательности, терминирующие последовательности, последовательности полиаденилирования, энхансерные последовательности, маркерные гены и другие подходящие последовательности. Подробнее см., например, Molecular Cloning: a LaboratoryManual: 2nd edition, Sambrook et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Векторы по изобретению также включают вирусные векторы, способные инфицировать человеческие клетки in vivo, например аденовирусные, ретровирусные или аденоассоциированные вирусные векторы. Такие векторы могут применяться для экспрессии мишень-связывающего участка по изобретению в клетке субъекта - человека или животного, чтобы обеспечить продуцирование и доставку мишеньсвязывающего участка указанному субъекту. Нуклеотидная последовательность, кодирующая мишень-связывающий участок по изобретению, в одном аспекте функционально связывается с промотором, чтобы осуществить экспрессию мишеньсвязывающего участка в клетке-хозяине. Последовательность может включать на своем 5' конце лидерную последовательность, способствующую экспрессии и/или секреции мишень-связывающего участка в клетке-хозяине и/или при использовании клетки-хозяина. В уровне техники известны сами по себе многочисленные подходящие лидерные последовательности, и их может выбрать специалист в данной области техники с учтом клеткихозяина. Многие известные методы и протоколы манипуляции с нуклеиновыми кислотами, например получения нуклеотидных конструкций, мутагенеза, секвенирования, введения ДНК в клетки и экспрессии генов, и анализа белков подробно описаны в Current Protocols in Molecular Biology, Second Edition,-9 018073Ausubel et al. eds., John WileySons, 1992. Раскрытие Sambrook et al. и Ausubel et al. вводится в данное описание ссылкой. Клетки-хозяева и получение мишень-связывающих участков. Другой аспект включает клетку-хозяина, трансформированную нуклеиновой кислотой (например,нуклеотидной последовательностью в виде вектора) по изобретению. В одном варианте изобретения нуклеиновая кислота по изобретению интегрируется в геном (например, хромосому) клетки-хозяина. Интеграцию можно промотировать включением последовательностей, которые инициируют рекомбинацию с геномом, в соответствии со стандартными методами. Ещ один аспект охватывает способ получения мишень-связывающего участка по изобретению,причм этот способ включает содействие экспрессии при использовании кодирующей нуклеиновой кислоты. Такой способ может включать культивирование клеток-хозяев в условиях получения указанного мишень-связывающего участка. После получения методом экспрессии VH или VL домен или мишень-связывающий участок можно выделить и/или очистить любым подходящим методом, затем использовать при необходимости. Способ получения может включать стадию выделения и/или очистки продукта. После очистки продукта мишень-связывающий участок можно модифицировать физическими или химическими методами, например, чтобы ввести защитные группы, которые изменяют, например повышают, устойчивость или биологический период полужизни белка. Например, само по себе пегилирование белков для достижения такого эффекта известно в уровне техники, и мишень-связывающие участки по изобретению могут быть в пегилированной форме. Способ получения может охватывать приготовление из продукта композиции, включающей по меньшей мере один дополнительный компонент, такой как фармацевтически приемлемый эксципиент. Настоящее изобретение также включает рекомбинантную клетку-хозяина, которая содержит одну или более нуклеиновых кислот или векторов по описанию выше. Получение самой нуклеиновой кислоты, кодирующей любой CDR, VH или VL домен или мишень-связывающий участок, образует аспект настоящего изобретения, так же как и способ получения кодированного продукта, причм этот способ включает экспрессию при использовании нуклеиновой кислоты, кодирующей продукт. Хорошо известны системы клонирования и экспрессии полипептида во множестве различных клеток-хозяев. Подходящие клетки-хозяева включают системы бактериальных клеток, клеток млекопитающих, дрожжевые и бакуловирусные системы. Линии клеток млекопитающих, имеющиеся в уровне техники для экспрессии гетерологичного полипептида, включают клетки яичников китайского хомячка,клетки HeLa, почечные клетки детныша китайского хомячка, клетки NS0 мышиной меланомы, клеткиYB2/0 крысиной меланомы и многие другие. Обычно предпочтительной бактериальной клеткойхозяином является Е.coli. Экспрессия антител и фрагментов антител в прокариотических клетках, таких как Е.coli, хорошо известна в уровне техники. См., например, обзор Plckthun, A. Bio/Technology 9: 545-551 (1991). Экспрессия в эукариотических клетках в культуре также известна специалистам в данной области техники как вариант получения мишень-связывающего участка (элемента), см. недавние обзоры, например Ref,М.Е. (1993), Curr. Opinion Biotech. 4: 573-576; Trill J.J. et al. (1995), Curr. Opinion Biotech. 6: 553-560. Композиции. Итак, фармацевтические композиции по настоящему изобретению, и для применения по настоящему изобретению, помимо активного ингредиента могут содержать фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель, буфер, стабилизатор или другие материалы, хорошо известные специалистам в данной области техники. Такие материалы должны быть нетоксическими и не должны отрицательно влиять на эффективность активного ингредиента. Конкретный тип носителя или другого материала зависит от способа введения, который может быть пероральным или с помощью инъекции, например внутривенной. Терапевтические препараты мишень-связывающего участка (мишень-связывающей частицы) можно приготовить для хранения, смешивая мишень-связывающий участок (частицу) нужной степени чистоты с оптимальными физиологически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами(см., например, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, WilliamsWilkins), в виде лиофилизированного порошка или водных растворов. Приемлемые носители,эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксическими для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный, и буферы других органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту; низкомолекулярные (менее чем примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА (EDTA); спирты класса углеводов, такие как манит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как ион натрия; и/или неионные поверхностноактивные вещества, такие как Твин, Плуроникс или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Мишень-связывающий участок (элемент, частица), применяемый для введения in vivo, должен быть стерильным. Это легко осуществить фильтрацией через стерильные фильтрующие мембраны, до или после лиофилизации и реконституции. Мишень-связывающий участок (частица) хранится в лиофилизированном виде или в растворе. Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в виде таблеток, капсул, порошков или в жидком виде. Таблетка может содержать тврдый носитель, такой как желатин, или адъювант. Жидкие фармацевтические композиции обычно содержат жидкий носитель, такой как вода, углеводороды, минеральное, животное или растительное масло, минеральное масло или синтетическое масло. В состав могут входить физиологический солевой раствор, раствор декстрозы или других сахаридов или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Для внутривенной инъекции или инъекции в место поражения активный ингредиент должен быть в виде парентерально приемлемого водного раствора, который является апирогенным и имеет соответствующие pH, изотоничность и стабильность. Специалисты в данной области техники легко смогут приготовить соответствующие растворы, используя, например, изотонические носители, такие как раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, раствор Рингера с лактатом для инъекций. При необходимости могут включаться консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки. Терапевтическое применение изобретения. Настоящее изобретение включает первую демонстрацию того, что антитела против IL-25 эффективно предупреждают или уменьшают гиперреактивность дыхательных путей in vivo, главный, основной симптом астмы. Так, в одном аспекте изобретение предусматривает способ предупреждения или уменьшения гиперреактивности у субъекта (например, человека), нуждающегося в лечении, который включает введение субъекту мишень-связывающей частицы (мишень-связывающего участка), в частности молекулы антитела, которая связывает IL-25. В другом аспекте изобретение предусматривает способ предупреждения, уменьшения или лечения астмы у субъекта, нуждающегося в лечении, который включает введение субъекту мишень-связывающей частицы (мишень-связывающего участка), в частности молекулы антитела, которая связывает IL-25. Вышеприведнные способы можно на практике применять с мишень-связывающими частицами(участками) (включая их композиции) по настоящему изобретению, которые применимы для связывания и, предпочтительно, для противодействия эффекту антигена IL-25, с терапевтическим потенциалом, позволяющим лечить различные заболевания и расстройства, в которых принимает участие IL-25. Способы могут применяться на практике с другими мишень-связывающими частицами (участками) (включая их композиции), которые связывают IL-25, которые можно получать по описанию, приведнному ниже, в прилагаемых примерах. Мишень-связывающие частицы (участки) (включая их композиции) по настоящему изобретению можно использовать в способе лечения (включая профилактическое лечение) или диагностики человека или животного. Такой способ лечение или диагностики (который может включать профилактическое лечение) может включать введение указанному субъекту эффективного количества мишеньсвязывающей частицы (участка) по изобретению. Примеры заболеваний и расстройств обсуждаются ниже. Также предусматривается применение мишень-связывающей частицы (участка) (включая е (его) композиции) по изобретению для получения лекарственного препарата для введения человеку или животному. Клинические показания, по которым может применяться мишень-связывающая частица (антитело) против IL-25, чтобы обеспечить терапевтическую пользу, включает любое состояние, при котором IL-25 вызывает патологические последствия (результаты). Так, обычно мишень-связывающую частицу по изобретению можно использовать для лечения любого состояния, ассоциированного с нежелательной Th-2 реакцией. Например, мишень-связывающую частицу по изобретению можно использовать для лечения аллергии и астмы, в особенности астмы. Лечение антитело против IL-25 можно проводить с помощью инъекции (например, внутривенно) или методами локальной доставки. Антитело против IL-25 можно доставлять методами, опосредованными генами. Стратегии с альтернативной рецептурой могут включать препараты, пригодные для перорального введения или для применения в виде суппозиториев. Путь введения может определяться физико-химическими характеристиками лекарства, особыми медицинскими соображениями, с целью оптимизировать эффективность и свести к минимуму побочные эффекты. В соответствии с настоящим изобретением полученные композиции можно вводить индивидуумам. Предпочтительно введение осуществляют в "терапевтически эффективном количестве", которого достаточно, чтобы оказать благотворное воздействие на пациента. Такое благотворное воздействие (польза) может представлять собой, по меньшей мере, ослабление по меньшей мере одного симптома. Действительное вводимое количество и скорость, а также продолжительность курса введения зависят от характера и тяжести пролечиваемого заболевания (расстройства). За медицинские назначения, например решение о выборе дозы и т.д., отвечают врачи-терапевты и другие врачи. Подходящие дозы антитела хорошо известны в уровне техники; см. Ledermann J.A. et al. (1991), Int. J. Cancer. 47: 6590, 664; Bagshawe K.D. et Точная доза зависит от ряда факторов, в том числе предназначено антитело для диагностики или для лечения, от размера и местоположения пролечиваемой области, конкретных характеристик антитела(например, полное антитело, фрагмент или "диатело" ("diabody", природы любой детектируемой метки или другой молекулы, связанной с антителом. Типичная доза антитела находится в диапазоне 0,5 мг-1,0 г, и эту дозу можно вводить внутривенно в виде болюса. Другие способы введения включают внутривенную инфузию в течение нескольких часов, чтобы достичь аналогичной общей кумулятивной дозы. Эта доза представляет собой дозу для однократного лечения взрослого пациента, которую можно пропорционально уменьшить (корректировать) для детей и младенцев, а также корректировать для форматов других антител пропорционально молекулярной массе. Процедуры можно повторять через день,дважды в неделю, еженедельно или через месяц, по предписанию врача. В другом способе применения используется предварительное покрытие или иной путь введения в постоянные устройства, оптимальное количество антитела в этом случае определяют соответствующими опытами. Молекула антитела в некоторых предпочтительных вариантах изобретения представляет собой мономерный фрагмент, такой как F(ab) или scFv. Такие фрагменты антител могут иметь преимущество: относительно короткий период полужизни и меньший риск активации эритроцитов, которая может вызываться кластеризацией рецепторов. Кластеризация, которая вызывает активацию эритроцитов, может представлять, например, кластеризацию либо молекул IL-25, либо IL-25 с молекулами FcRII. Если применяется полное антитело, предпочтительно оно применяется в форме, не способной активировать и/или разрушить эритроциты. Изотип IgG4 или же изотипы альтернативного дизайна, образованные из каркаса IgG1 (новые конструкции Fc гена международная заявка WO 99/58572. Clark, Armour,Williamson), являются предпочтительным выбором. Можно использовать фрагменты антител меньшего размера, такие как F(ab')2. Кроме того, можно использовать целые антитела или фрагменты (например,F(ab')2 или "диатела") с двойной специфичностью эпитопов (например, для эпитопов, узнаваемых scFv 2C3). Хотя такой вариант изобретения может промотировать кластеризацию рецепторов, высокая скорость ассоциации с отдельными рецепторами может исключить эту проблему. Мишень-связывающую частицу по настоящему изобретению обычно вводят в форме фармацевтической композиции, которая может содержать по меньшей мере один компонент, помимо мишеньсвязывающей частицы. Мишень-связывающую частицу по изобретению можно вводить индивидуально или в комбинации с другим терапевтическим лечением либо одновременно, либо последовательно, в зависимости от пролечиваемого состояния. Другое терапевтическое лечение может включать введение подходящих доз обезболивающих лекарств, таких как нестероидные противовоспалительные препараты (например, аспирин,парацетамол, ибупрофен или кетопрофен) или опиаты, такие как морфин; введение противорвотных препаратов или введение по меньшей мере одного другого антиастматического соединения, обычно бронходилатирующего агента, который вызывает релаксацию (расслабление) органов дыхания или повышает клиренс слизи, например, бета-агониста (например, сальбутамола, сальметерола), динатрия кромогликата, стероидов или ингибитора PDEIv. Методы анализа. Настоящее изобретение предусматривает способ, включающий побуждение или содействие к связыванию мишень-связывающей частицы по данному описанию с IL-25. Как отмечалось, такое связывание может происходить in vivo, например, после введения мишень-связывающей частицы или нуклеиновой кислоты, кодирующей мишень-связывающую частицу, или связывание может осуществляться in vitro, например, в методах анализа, включая ELISA, вестерн-блоттинг, иммуногистохимический анализ,иммунопреципитацию или аффинную хроматографию. Величину связывания мишень-связывающей частицы (молекулы) с IL-25 можно определить. Рассчитанное количество можно отнести к количеству антигена в тестируемом образце, что может представлять интерес для диагностики. Реактивность антител по отношению к образцу можно определять любым подходящим способом. Радиоиммуноанализ (RIA) представляет собой одну такую возможность. Меченный радиоактивной меткой антиген смешивают с немеченым антигеном (тестируемый образец) и оставляют связываться с антителом. Связанный антиген физически отделяют от несвязанного антигена и определяют количество радиоактивного антигена, связанного с антителом. Чем больше антигена находится в тестируемом образце,тем меньше радиоактивного антигена связывается с антителом. Анализ конкурентного связывания можно также применять с радиоактивным антигеном, используя антиген или аналог, связанный с репортрной молекулой. Репортрная молекула может представлять собой флуорохром, люминесцентный или лазерный краситель со спектральными характеристиками поглощения и возбуждения (эмиссии). Подходящие флуорохромы включают флуоресцеин, родамин, фикоэритрин и техасский красный. Подходящие хромогенные красители включают диаминобензидин. Другие репортры (маркеры) включают макромолекулярные коллоидные частицы или макрочастицы, такие как латексные гранулы, окрашенные, магнитные или парамагнитные, и биологически или химически активные агенты, которые могут прямо или опосредованно вызывать детектируемые сигналы,- 12018073 наблюдаемые визуально, обнаруживаемые в электронном виде или регистрируемые иным способом. Эти молекулы могут представлять собой ферменты, которые катализируют реакции с появлением или изменением цвета или с изменением, например, электрических свойств. Эти молекулы могут возбуждаться, так что электронные переходы между энергетическими состояниями вызывают в результате поглощение или эмиссию, определяемые спектрально. Они (молекулы) включают химические агенты, применяемые в сочетании с биосенсорами. Можно использовать системы детекции биотин/авидин и биотин/стрептавидин и щелочную фосфатазу. Сигналы, генерируемые отдельными конъюгатами антитело-репортр (маркер), можно использовать для получения измеримых количественно абсолютных или относительных данных связывания релевантного антитела в образцах (нормальном и тестируемом). Настоящее изобретение также включает применение мишень-связывающей частицы по определению выше для измерения уровней антигенов в конкурентном анализе, т.е. способ определения уровня антигена в образце с применением мишень-связывающей частицы по настоящему изобретению в конкурентном анализе. В этом способе не требуется физическое отделение связанного отделения от несвязанного. Одной такой возможностью является связывание репортрной молекулы с мишень-связывающей частицей таким образом, что при связывании происходят изменения физических или оптических свойств. Репортрная молекула может прямо или опосредованно генерировать детектируемые и предпочтительно измеримые сигналы. Репортрные молекулы могут связываться непосредственно или опосредованно, ковалентной связью, например пептидной связью, или нековалентной связью. Связывание пептидной связью может появиться в результате рекомбинантной экспрессии слияния генов, кодирующих антитело и репортрную молекулу. Настоящее изобретение включает также непосредственное измерение уровней антигенов с применением мишень-связывающей частицы по изобретению, например, в биосенсорной системе. Способ определения связывания не является признаком настоящего изобретения, и специалисты в данной области техники способны выбрать подходящий способ в соответствии со своими предпочтениями и с известным уровнем техники. Далее настоящее изобретение охватывает мишень-связывающую частицу, которая конкурирует за связывание с IL-25 с любой мишень-связывающей частицей, которая как связывается с антигеном, так и содержит V домен, включающий область CDR с аминокислотной последовательностью, практически такой как представленная в данном описании, или V домен с аминокислотной последовательностью,практически такой, как представленная в данном описании. Конкуренцию между (мишень)связывающими частицами можно просто анализировать in vitro, например, присоединяя в виде тэга (метки) к одной (мишень)-связывающей частице репортрную молекулу, которую можно детектировать в присутствии немеченой связанной частицы (немеченых связанных частиц), чтобы содействовать идентификации мишень-связывающих частиц, которые связываются с тем же самым эпитопом или перекрывающимся эпитопом. Конкуренцию можно определять, например, методами ELISA или проточной цитометрии. Конкурентную реакцию можно использовать для селекции одной или более мишеньсвязывающих частиц, таких как производные 2C3, которые обладают одним или более дополнительными или улучшенными свойствами. Этот метод аналогичен методу селекции (отбора) на 2C3 по изобретению за исключением того, что IL-25, извлекают элюируют не из его комплекса с мини-лигандом, а из комплекса с молекулой антитела. Это может быть важно, так как такая процедура дат более высокую долю дочерних антител, которые непосредственно конкурируют с исходным (родительским) антителом. На самом деле такие дочерние антитела, как отобранные, могут обладать более высокой аффинностью(сродством) к антигену, чем исходное (способствуя усилению авидности в результате того, что визуализируется более одной молекулы антитела на фаг). Современные методы отбора (селекции) "дочерних" фаговых антител с повышенной аффинностью включают: применение концентраций (меченого) целевого антигена (антигена-мишени) ниже константы диссоциации исходного родительского антитела; применение избытка немеченого целевого антигена (антигена-мишени) в качестве конкурента, как показано в Hawkins at al. (1992). Однако они не обязательно указывают, что "улучшенное" антитело должно вытеснять/занимать тот же эпитоп, что и родительское. Введение стадии элюции должно дать более высокое число (высокую долю) дочерних антител, которые вытесняют родительское. Дочерние антитела, отобранные таким образом, могут связывать эпитоп, очень похожий на эпитоп, который связывает родительское антитело, но с более высокой аффинностью. При тестировании конкуренции можно использовать пептидный фрагмент антигена, в особенности пептид, включающий эпитоп, представляющий интерес. Можно использовать пептид, содержащий эпитопную последовательность плюс одну или более аминокислот по обоим концам. Можно сказать, что такой пептид "состоит практически (главным образом, в основном)" из указанной последовательности. Мишень-связывающие частицы по настоящему изобретению могут представлять собой такие частицы,что их связывание с антигеном ингибируется пептидом с данной последовательностью или пептидом,включающим данную последовательность. При тестировании на этот признак можно применять пептид с любой последовательностью плюс одна или более аминокислот. Мишень-связывающие частицы, которые связывают специфический пептид, могут быть выделены,например, с помощью фаг-дисплейной библиотеки пэннингом с пептидом (пептидами). Примеры Аспекты и варианты настоящего изобретения далее иллюстрируются на примерах со ссылкой на нижеприведнные опыты. Пример 1. Получение антител против IL-25. Большую панель антител, полученных в мышах il25-/-, иммунизированных против мышиногоIL-25 (RD Systems), подвергают скринингу. Найдено, что одно из этих антител против IL-25 (2C3) ингибирует как взаимодействие между rmIL-25 растворимым mIL-25R-Fc слитым белком в зависимости от дозы, так и IL-25-зависимое продуцирование IL-13 первичными мышиными не-В-, не-Т-клетками в invitro биоанализе. Антитело также ингибирует взаимодействие между hIL-25 растворимым слитымhIL-25R-Fc. Сочетание этих свойств далее исследуют на in vivo системах, чтобы продемонстрировать полезность при лечении астмы. Пример 2. Экспериментальная модель аллергической астмы. Мышей Balb/c сначала сенсибилизируют антигеном овальбумином (OVA), a затем стимулируют(провоцируют) OVA в виде аэрозоля (ингаляторная провокация). У сенсибилизированных и стимулированных Balb/c мышей развивается характерный фенотип астмы. Он характеризуется повышенной AHR(гиперреактивностью дыхательных путей) после экспозиции с провоцирующим агентом метахолином,эозинофильной инфильтрацией дыхательных путей и секрецией сывороточного IgE по сравнению с контрольными мышами Balb/c, стимулированными с помощью PBS (фиг. 1). Напротив, введение антитела mAb против IL-25 перед каждой сенсибилизацией и введением аэрозоля (аэрозолизацией) OVA приводит к заметной нейтрализации AHR после ингаляторной провокации метахолином, причм величины резистентности сравнимы с PBS контрольными мышами (фиг. 1 А). Введение изотипически родственного контрольного mAb не подавляет AHR (фиг. 1 А). Антитело mAb против IL-25 также значительно снижает уровни клеточной инфильтрации близ сосудистой системы (фиг. 1 В и 3A), гиперплазию бокаловидных эпителиальных клеток в дыхательных путях (фиг. 1 С и 3B) и уровни антиген-специфического сывороточного IgE (фиг. 1D). Анализ бронхоальвеолярного лаважа (BAL) показывает, что эозинофильная инфильтрация также в значительной степени подавляется после введения mAb против IL-25 по сравнению с мышами, получавшими изотопический контроль (фиг. 1E). Так как известно, что цитокины типа 2 регулируют эти эффекторные функции, определили уровни цитокинов, секретированных при использовании клеток, выделенных из дренирующих медиастинальных (средостенных) лимфоузлов после рестимуляции антигеном. В противоположность повышенным уровням цитокинов типа 2, IL-4, IL-5 и IL-13, индуцированных OVAсенсибилизацией и стимуляцией в Balb/c мышах, введение mAb против EL-25 приводит к значительному снижению уровней этих цитокинов (фиг. 1F). Эти результаты подтверждают гипотезу, что блокируя передачу сигнала IL-25, ограничивается продуцирование цитокинов типа 2, приводя к аннулированию эффекторных функций типа 2, включая воспаление и AHR. Таким образом, антагонисты IL-25 эффективно подавляют воспаление типа 2, если вводятся с момента стимуляции ответа. Материалы и методы. Мышей Balb/c получают от Harlan UK и сохраняют в лабораторном оборудовании SABU/CBS или Национального института заболеваний сердца и лгких (National Heart and Lung Institute) в специфической беспатогенной среде. Все эксперименты на животных, приведнные в данном сообщении, проводятся с разрешения Министерства внутренних дел Великобритании (UK Home Office). Сенсибилизация и экспозиция с аллергеном. Мышей Balb/c (в возрасте 6-12 недель) сенсибилизируют, вводя внутрибрюшинно (интраперитонеально) овальбумин (20 мкг/инъекция) в комплексе с квасцами или только квасцы (контроль) в дни 0 и 12. Введение аэрозоля 1% овальбумина осуществляют на 19-, 20-, 21-й дни в течение 20 мин/день. На 22-й день животных проверяют, используя плетизмографию для оценки AHR. Введение моноклональных антител против rmIL-25. Гиперреактивность дыхательных путей (AHR) вызывают, как описано выше и интраперитонеально вводят mAb против IL-25 (500 мкг/доза) за день до каждой интраперитонеальной сенсибилизации с помощью OVA, за день до OVA стимуляции в лгкие и за 4 ч перед каждой OVA аэрозолизацией. В других экспериментах mAb против IL-25 (500 мкг/доза) вводят только в день аэрозолизации, но перед каждой аэрозолизацией. Контрольные мыши получают либо физиологической раствор, либо изотипический контроль (500 мкг/доза) вместо mAb против IL25. Изотипическим контролем является антитело против с-myc (мышиный IgG1, клон 9 Е 10.2). Определение чувствительности (отвечаемости) дыхательных путей. Животных анестезируют, проводят трахеостомию и подсоединяют к аппарату искусственной вентиляции лгких (серия SAR-830, CWE Inc) с частотой дыхания 150 вдохов/мин, дыхательный объм 0,2 мл. Мышей контролируют с помощью плетисмографа, позволяющего определять изменение объма всего тела (EMKA Technologies, Paris), а транспульмонарное давление определяют с помощью подклю- 14018073 чнного датчика. После регистрации фонового лгочного сосудистого сопротивления с помощью ультразвукового небулайзера вводят увеличивающиеся концентрации ацетилметилхолина хлорида (метахолина) (Sigma, Dorset, UK) в виде аэрозоля в течение 15 с при каждой концентрации, и лгочную сосудистую сопротивляемость регистрируют в течение 5 мин. Для анализа лгочного сосудистого сопротивления, изменения объма лгких и стандартных параметров лгких используют программное обеспечениеIOX. Бронхоальвеолярный лаваж (BAL). Мышей умерщвляют цервикальной дислокацией и аликвоты PBS 4500 мкл инъецируют через трахеостому и извлекают. Определение лейкоцитарной формулы на 150 клетках осуществляют на препаратах, полученных на цитоцентрифуге (цитоспин), окрашенных красителем Гимзы. Пример 3. Введение перед стимуляцией (провокацией). Определим, эффективно ли mAb против IL-25 при введении только перед OVA ингаляторной стимуляцией. Обработка с помощью mAb против EL-25 резко снижает сопротивляемость дыхательных путей, индуцированную провокацией метахолином, даже когда е проводят на более поздней стадии реакции (фиг. 2 А). Напротив, введение контрольного родственного изотипически mAb не отменяет AHR. Важно отметить, что анализ гистологических срезов лгких не показывает значительных изменений уровней клеточной инфильтрации вокруг кровеносных сосудов (фиг. 2 В) или гиперплазии бокаловидных клеток дыхательных путей (фиг. 2 С) при сравнении мышей, получавших mAb против EL-25, или контрольных мышей Balb/c, стимулированных OVA, или контрольных мышей, получавших родственное по изотипу mAb. Далее, не наблюдается уменьшения содержания эозинофилов в BAL жидкости (фиг. 2D) или уровней антиген-специфического сывороточного IgE (фиг. 2 Е) после введения mAb против IL-25. Поразительно, но цитокинов типа 2 EL-5 и EL-13 остаются сравнимыми с их уровнями у стимулированныхOVA контрольных мышей Balb/c или контрольных мышей, получавших родственное по изотипу mAb после рестимуляции (фиг. 2F), а уровни IL-13 в BAL также остаются неизменными. Таким образом, введение антитела против IL-25 в фазе стимуляции (провокации, сенсибилизации) реакции может специфически отменить AHR даже когда цитокины типа 2 и их "даунстрим" эффекторы не подавляются. Эти результаты наводят на мысль, что IL-25 может инициировать AHR по метаболическому пути, независимому от классического типа 2 реакции. Материалы и методы. Применяют материалы и методы, описанные в примере 2 с добавлением. Сбор и гистологическое исследование лгочной ткани. Для гистологического анализа лгкие фиксируют в формалине (10% раствор в формальдегида в 0.9% физиологическом солевом растворе). Срезы лгких окрашивают красителем Гимзы для обнаружения воспалительного инфильтрата и периодной кислотой-реактивом Шиффа (PAS) для изучения бокаловидных клеток. Окрашенные PAS бокаловидные клетки эпителия дыхательных путей определяют вслепую (слепым методом), используя количественную шкалу (0: 5% бокаловидных клеток; 1: 5-25%; 2: 25-50%; 3: 50-75%; 4: 75%). Суммарную оценку для каждого лгкого делят на число изученных дыхательных путей, по 20-40 дыхательных путей/мышь, и выражают в виде PAS баллов в условных единицах. Воспаление оценивают, пользуясь количественной шкалой для определения числа клеток инфильтрата вокруг кровеносных сосудов (0: слой клеток воспалительного инфильтрата вокруг сосудов 2 клеток толщиной, 1: 2-4 клетки толщиной, 2: 5-8 клеток толщиной, 3: 8 клеток толщиной). Сумму баллов для каждого лгкого делят на число изученных сосудов, 20-40 дыхательных путей/мышь, и выражают в относительных единицах. Пример 4. IL-25 действует по независимому пути типа 2. Проверим, может ли экзогенно вводимый rmIL-25 вызвать усиленную AHR даже в отсутствие антигенной сенсибилизации или провокации. Уже через 16 ч после интраназального введения rmIL-25 мышам Balb/c обнаруживаем значительно повышенное сопротивление дыхательных путей (бронхиальное сопротивление, гиперреактивность дыхательных путей) (фиг. 3A). В предыдущих сообщениях имеются указания на центральную роль, которую играет IL-13 в фенотипе астмы и, в частности, в AHR. Для того чтобы определить, опосредует ли IL-25 эту роль в AHR через IL-13, вводили rmIL-25 мышам il13-/-. И снова наблюдается повышенная AHR после введения rmIL-25 (фиг. 3B). Так как было показано, что другие цитокины типа 2 участвуют в фенотипе астмы, также определяем реакцию il4-/-il5-/-il9-/-il13-/- на вводимый интраназально rmIL-25. Даже в отсутствие всех цитокинов классического типа 2 введение IL-25 усиливает AHR провокации метахолином (фиг. 3c). Эти результаты подтверждают роль IL-25 в усиленииAHR по независимому от типа 2 метаболическому пути.(G.J. McKenzie et al., 1998. Curr Biol. 8, 339) на основе мышей Balb/c по описанию. il25-/- мыши на основеC57BL/6129 F2 по описанию (P.G. Fallon et al., 2006. J. Exp. Med. 203, 1105). Интраназальное введение IL-25. Мышам вводят 1,8 мкг rIL-25 (RD Systems) или 1,8 мкг rIL-13 (Peprotech) в 40 мкл PBS каждой интраназально в день 0. Контрольные мыши получают только PBS. Пример 5. Клонирование вариабельных доменов 2C3. Выделяют РНК из трх субклонов 2 с 3 и получают кДНК реакцией обратной транскрипции. кДНК тяжлой цепи иммуноглобулина (IgH) амплифицируют с помощью ПЦР, используя консервативный праймер 5' VH-области, MHV7 (SEQ ID NO: 11) в комбинации с праймером константной области IgG1 MHCG1 (SEQ ID NO: 12). Аналогично лгкую цепь иммуноглобулина (IgK) используют с помощью праймеров консервативной 5' IgK области MKV9 (SEQ ID NO: 13) в комбинации с праймером каппа константной области(SEQ ID NO: 14). При проведении ПЦР реакций используют термостабильную полимеразу Phusion (NEB F-531L). Продукты 2 с 3 амплификации реакцией ПЦР с праймерами VH7 + MHCG1 - при использовании трх независимых кДНК непосредственно лигируют в вектор pCRIIBlunt- ТОРО, используя набор для клонирования ТОРО-blunt cloning (Cat 45-0245), как и продукты реакции амплификации лгкой цепи. Бактерии Е.coli TOP10, трансформированные при использовании лигированных pCRII-blunt векторных конструкций, клонируют на планшетах LB-амлициллин-XGal-агар, собирая белые колонии на сетку из агар-агара и в смесь для ПЦР скрининга. Клонированные инсерты в плазмиду ПЦР амплифицируют. Продукты амплификации подвергают электрофорезу в геле и получают ожидаемые продукты. Ночные культуры (5 мл) каждого клона, продуцирующие продукт ПЦР-амплификации корректного размера,процессируют, используя протокол набора QIAprep Spin Miniprep Kit (cat 27106) для получения минипрепаратов ДНК-плазмид. Плазмиды секвенируют, используя готовый набор для секвенирования BigDye Terminator v3.0Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (ABI cat. 4390242). Каждую выбранную плазмиду секвенируют в обоих направлениях, используя циклы с М 13 прямым и обратным праймерами на ПЦР-амплификатореGeneAmp9600. Электрофоретический анализ последовательностей проводят на капиллярном ДНКсеквенаторе ABI. Полный цикл RT-PCR (РВ-ПЦР), клонирования и анализа ДНК-последовательностей повторяют для получения трх совершенно независимых наборов данных о последовательностях для каждой цепи иммуноглобулина. Полные предсказанные нуклеотидные последовательности генов VH и V показаны какSEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16 соответственно. Эти последовательности включают лидерную последовательность в начале каждого вариабельного генного сегмента, который кодирует сигнальную последовательность, используемую для транспорта вновь синтезированных цепей антитела в эндоплазматический ретикулум; они отсутствуют в конечной тяжлой и лгкой цепях. Ссылки 1. P.G. Fallon et al., Immunity. 17, 7 (Jul., 2002). 2. G. Granig et al., Science. 282, 2261 (1998). 3. M. Wills-Karp et al., Science. 282, 2258 (1998). 4. M.M. Fort et al., Immunity. 15, 985 (Dec., 2001). 5. M.R. Kim et al., Blood. 100, 2330 (Oct. 1, 2002). 6. G. Pan et al., J. Immunol. 167, 6559 (Dec. 1, 2001). 7. S.D. Hurst et al., J. Immunol. 169, 443 (Jul. 1, 2002). 8. T.A. Moseley, D.R. Haudenschild, L. Rose, A.H. Reddi, Cytokine Growth Factor Rev. 14, 155 (Apr.,2003). 9. P.G. Fallon et al., J. Exp. Med. 203, 1105 (Apr. 17, 2006). 10. A.M. Owyang et al., J. Exp. Med. 203, 843 (Apr. 17, 2006). 11. T. Tamachi et al., J. Allergy Clin. Immunol. 118, 606 (Sep., 2006).NO: 7. 2. Мишень-связывающая частица по п.1, отличающаяся тем, что VH домен дополнительно содержит область CDR1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и область CDR2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6. 3. Мишень-связывающая частица по п.1, отличающаяся тем, что VH домен содержит человеческую каркасную область. 4. Мишень-связывающая частица по п.1, отличающаяся тем, что VH домен содержит SEQ ID NO: 2. 5. Мишень-связывающая частица по п.1, которая дополнительно содержит VL домен с областьюCDR3, имеющей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10. 6. Мишень-связывающая частица по п.5, отличающаяся тем, что VL домен содержит человеческую каркасную область. 7. Мишень-связывающая частица по п.5, отличающаяся тем, что VL домен содержит SEQ ID NO: 4. 8. Мишень-связывающая частица по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой Fab,F(ab')2, scFv фрагмент антитела. 9. Мишень-связывающая частица по п.1, отличающаяся тем, что она содержит константную область антитела. 10. Мишень-связывающая частица по п.9, отличающаяся тем, что константная область представляет собой константную область IgG1 или IgG4. 11. Мишень-связывающая частица по п.9, отличающаяся тем, что она содержит полное антитело. 12. Выделенная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую мишень-связывающую частицу по п.1. 13. Экспрессирующий вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.12, функционально связанную с промотором. 14. Клетка-хозяин, несущая экспрессирующий вектор по п.13. 15. Способ получения мишень-связывающей частицы, заключающийся в культивировании клетокхозяев по п.14 в условиях, пригодных для продуцирования указанной мишень-связывающей частицы. 16. Способ по п.15, отличающийся тем, что он дополнительно включает выделение указанной мишень-связывающей частицы. 17. Способ получения композиции, включающий приготовление из мишень-связывающей частицы композиции, включающей по меньшей мере один дополнительный компонент. 18. Фармацевтическая композиция для лечения или предупреждения астмы, содержащая мишеньсвязывающую частицу по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель. 19. Композиция по п.18 в виде лиофилизированного порошка. 20. Применение мишень-связывающей частицы по п.1 для получения лекарственного препарата для лечения или предупреждения астмы. 21. Применение мишень-связывающей частицы по п.1 для лечения или предупреждения астмы. 22. Способ получения антител против IL-25, включающий следующие стадии:IL-25 и содержащую VH домен области CDR3 антитела, имеющей аминокислотную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 7, с совокупностью VL доменов антитела с целью получения молекул антител;(б) скрининг молекул антител, полученных на стадии а) на связывание с IL-25;(в) отбор молекул антитела, способных связываться с IL-25. 23. Способ по п.22, отличающийся тем, что VH домен дополнительно содержит область CDR1,имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и область CDR2,имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6. 24. Способ получения мишень-связывающей частицы против IL-25, включающий следующие стадии:(а) объединение исходного набора нуклеиновых кислот, кодирующих VH домен, либо содержащих область, кодирующую подлежащую замене CDR3, либо не содержащих область, кодирующую CDR3; и донорной нуклеиновой кислоты, кодирующей область VH CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, таким образом, что указанная донорная нуклеиновая кислота встраивается в набор, с получением набора нуклеиновых кислот, кодирующих VH домен, содержащий область VH CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7;(б) экспрессию нуклеиновых кислот набора, полученного на стадии а) для получения мишень- 17018073(г) выделение полученной на стадии в) мишень-связывающей частицы или кодирующей е нуклеиновой кислоты. 25. Способ по п.24, отличающийся тем, что нуклеиновые кислоты указанного набора коэкспрессируются с нуклеиновыми кислотами, кодирующими VL домен. 26. Мишень-связывающая частица по п.6, отличающаяся тем, что VH домен содержит человеческую каркасную область. 27. Мишень-связывающая частица, которая конкурирует за связывание с IL-25 со второй мишеньсвязывающей частицей, причем вторая мишень-связывающая частица связывает IL-25 и содержит VH домен антитела, включающий область VH CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7. 28. Мишень-связывающая частица, содержащая антигенсвязывающий сайт человеческого антитела,отличающаяся тем, что эта мишень-связывающая частица конкурирует за связывание с IL-25 со второй мишень-связывающей частицей, причм вторая мишень-связывающая частица связывает IL-25 и содержит VH домен антитела, включающий SEQ ID NO: 2, и VL домен антитела, включающий SEQ ID NO: 4. 29. Мишень-связывающая частица, которая связывает IL-25, отличающаяся тем, что эта мишеньсвязывающая частица содержит VH домен антитела, включающий область VH CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, которая содержит от 1 до примерно 10 аминокислотных замен вSEQ ID NO: 7. 30. Мишень-связывающая частица, которая связывает IL-25, отличающаяся тем, что эта мишеньсвязывающая частица содержит VH домен антитела, включающий аминокислотную последовательность,которая содержит от 1 до примерно 20 аминокислотных замен в SEQ ID NO: 2.