Антитело к рецептору интерлейкина-1 типа 1 (il-1r1) и его применение

Формула / Реферат | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Код ссылки

Номер патента: 18072

Опубликовано: 30.05.2013

Авторы: Кван Хьюминг, Хуан Хайчунь, Эллиот Гари, Везина Крис, Витт Алисон, Варнум Брайан, Мартин Фрэнк

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 16, или содержащий их антигенсвязывающий фрагмент.

2. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 18, или содержащий их антигенсвязывающий фрагмент.

3. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 36, или содержит их антигенсвязывающий фрагмент.

4. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40, или содержит их антигенсвязывающий фрагмент.

5. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее:

а) тяжелую цепь, имеющую вариабельный участок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 10 или ее антигенсвязывающим фрагментом, и легкую цепь, имеющую вариабельный участок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 12 или ее антигенсвязывающим фрагментом; либо

б) тяжелую цепь, имеющую вариабельный участок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 14 или ее антигенсвязывающим фрагментом, и легкую цепь, имеющую вариабельный участок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 12 или ее антигенсвязывающим фрагментом; либо

в) тяжелую цепь, имеющую вариабельный участок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 16 или ее антигенсвязывающим фрагментом, и легкую цепь, имеющую вариабельный участок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 18 или ее антигенсвязывающим фрагментом.

6. Антитело по п.5, в котором тяжелая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 10, или содержащий ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12, или содержащий ее антигенсвязывающий фрагмент.

7. Антитело по п.6, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 10, а вариабельный участок легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12.

8. Антитело по п.5, в котором тяжелая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 14, или содержащий ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12, или содержащий ее антигенсвязывающий фрагмент.

9. Антитело по п.8, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 14, а вариабельный участок легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12.

10. Антитело по п.5, в котором тяжелая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 16, или содержащий ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь содержит вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 18, или содержащий ее антигенсвязывающий фрагмент.

11. Антитело по п.10, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 16, а вариабельный участок легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 18.

12. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее:

а) легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 38, или содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична антигенсвязывающему фрагменту SEQ ID NO: 38; и

б) тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 30, или содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична антигенсвязывающему фрагменту указанных последовательностей.

13. Антитело по п.12, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 20, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

14. Антитело по п.13, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 20, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38.

15. Антитело по п.12, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 22, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

16. Антитело по п.15, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 22, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38.

17. Антитело по п.12, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 24, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

18. Антитело по п.17, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 24, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38.

19. Антитело по п.12, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 26, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

20. Антитело по п.19, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 26, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38.

21. Антитело по п.12, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 28, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

22. Антитело по п.21, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 28, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38.

23. Антитело по п.12, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 30, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

24. Антитело по п.23, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 30, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38.

25. Изолированное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее:

а) легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 40, или содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична антигенсвязывающему фрагменту SEQ ID NO: 40; и

б) тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 36, или содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична антигенсвязывающему фрагменту указанных последовательностей.

26. Антитело по п.25, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 32, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 40, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

27. Антитело по п.26, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 32, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 40.

28. Антитело по п.25, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 34, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 40, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

29. Антитело по п.28, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 34, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 40.

30. Антитело по п.25, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 36, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 40, или содержит ее антигенсвязывающий фрагмент.

31. Антитело по п.30, в котором тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 36, а легкая цепь имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 40.

32. Антитело по пп.1-5, 12 или 25, в котором тяжелая цепь и легкая цепь соединены гибким линкером с образованием одноцепочечного антитела.

33. Антитело по п.32, которое представляет собой одноцепочечное Fv-антитело.

34. Антитело по пп.1-5, 12 или 25, которое представляет собой Fab-фрагмент антитела.

35. Антитело по пп.1-5, 12 или 25, которое представляет собой Fab'-фрагмент антитела.

36. Антитело по пп.1-5, 12 или 25, которое представляет собой (Fab')₂-фрагмент антитела.

37. Антитело по пп.1-5, 12 или 25, которое ингибирует связывание IL-1 с его рецептором.

38. Способ лечения опосредованного IL-1 заболевания у пациента, при котором пациенту вводят фармацевтически эффективное количество антитела по п.37.

39. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество антитела по п.37.

40. Способ лечения опосредованного IL-1 заболевания у пациента, при котором пациенту вводят фармацевтическую композицию по п.39.

41. Тяжелая цепь человеческого антитела, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащая вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 16 или антигенсвязывающим фрагментом указанных последовательностей.

42. Тяжелая цепь человеческого антитела, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащая аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 36 или антигенсвязывающим фрагментом указанных последовательностей.

43. Легкая цепь человеческого антитела, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащая вариабельный участок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 18 или содержащую антигенсвязывающий фрагмент указанных последовательностей.

44. Легкая цепь человеческого антитела, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащая аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40 или антигенсвязывающим фрагментом указанных последовательностей.

45. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее:

а) каркасные участки человеческой тяжелой цепи, участок, определяющий комплементарность-1 (CDR1) человеческой тяжелой цепи, участок, определяющий комплементарность-2 (CDR2) человеческой тяжелой цепи, и участок, определяющий комплементарность-3 (CDR3) человеческой тяжелой цепи, где участок CDR3 человеческой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 или SEQ ID NO: 69; и

б) каркасные участки человеческой легкой цепи, участок CDR1 человеческой легкой цепи, участок CDR2 человеческой легкой цепи и участок CDR3 человеческой легкой цепи, где участок CDR3 человеческой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 75.

46. Изолированное человеческое антитело по п.45, в котором участок CDR2 человеческой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66, а участок CDR2 человеческой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 73.

47. Изолированное человеческое антитело по п.45, в котором участок CDR1 человеческой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 63, а участок CDR1 человеческой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71.

48. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR1 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 63.

49. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR2 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66.

50. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR3 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 или SEQ ID NO: 69.

51. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR1 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71.

52. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR2 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 73.

53. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR3 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 75.

54. Антитело по пп.5, 12 или 25, которое представляет собой антитело IgG2.

55. Антитело по пп.5, 12 или 25, которое специфично связывается с полипептидом SEQ ID NO: 76.

56. Антитело по пп.5, 12 или 25, которое специфично связывается с эпитопом 4 IL-1R1.

57. Изолированное человеческое антитело, которое специфически связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее:

а) каркасные участки человеческой тяжелой цепи, участок CDR1 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 63; участок CDR2 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66; и участок CRD3 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 или SEQ ID NO: 69;

б) каркасные участки человеческой легкой цепи, участок CDR1 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71; участок CDR2 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 73; и участок CRD3 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 75.

58. Способ картирования антигенных эпитопов IL-1R1, при котором:

а) создают серию слитых белков, где каждый слитый белок содержит (1) авидин и (2) фрагмент IL-1R1;

б) проводят скрининг этой серии слитых белков на связывание с одним или более чем одним антителом к IL-1R1 по любому из пп.1-37, 45-57;

в) выделяют слитые белки на среде, содержащей биотин, где авидин связывается с биотином;

г) анализируют слитые белки, связанные антителом(ами) к IL-1R1, для определения на IL-1R1 сайтов связывания к антителу(ам) к IL-1R1.

Текст

Смотреть все

(IL-1R1). Описан способ картирования эпитопов IL-1R1 с использованием антител к IL-1R1. Данная заявка относится и заявляет приоритет по предварительной заявке США 60/408719, поданной 6 сентября 2002, описание которой включено сюда путем ссылки. Область изобретения Изобретение относится к антителам, которые связываются с белком-рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1). Предложены также композиции, в частности фармацевтические композиции, и способы лечения опосредованных IL-1 заболеваний, таких как ревматоидный артрит, остеоартрит и другие воспалительные состояния. Предшествующий уровень техники Разработка антител. Воспаление представляет собой ответ организма на повреждения, являющиеся результатом механического повреждения, инфекции или антигенной стимуляции. Воспалительные реакции часто патологически выражены. Такие состояния возникают, когда воспаление преувеличенно выражено, неправильно стимулировано или продолжает существовать после удаления повреждающего агента. Воспалительный ответ опосредован, среди прочего, цитокинами. Одним из уже открытых наиболее сильнодействующих воспалительных цитокинов является интерлейкин-1 (IL-1). Возрастание сигнала IL1 вызывает персистентное воспаление, связанное с несколькими заболеваниями, и IL-1 считают ключевым медиатором при многих заболеваниях и медицинских состояниях. Этот цитокин производится, прежде всего (но не исключительно), клетками макрофагально-моноцитарной линии и может продуцироваться в двух формах: IL-1 альфа (IL-1) и IL-1 бета (IL-1).IL-1 стимулирует клеточные ответы путем взаимодействия с гетеродимерным рецепторным комплексом, состоящим из двух трансмембранных белков, белка-рецептора IL-1 типа 1 (IL-1R1) и вспомогательного белка-рецептора IL-1 (IL-1RAcP). IL-1 сначала связывается с IL-1R1; затем IL-1RAcP рекрутируется в этот комплекс (Greenfeder et al., 1995, J. Biol. Chem. 270: 13757-13765; Yoon and Dinarello, 1998,J. Immunology 160: 3170-3179; Cullinan et al., 1998, J. Immunology 161, 5614-5620) с последующим преобразованием сигнала, приводящим в результате к индукции клеточного ответа. Исследования связывания на основе клеток позволяют предположить, что IL-1RAcP стабилизирует комплекс передачи сигнала IL-1R путем замедления скорости выключения лиганда (Wesche et al., 1998,FEBS Letters 429: 303-306). Хотя взаимодействие IL-1 с IL-1R тщательно описано, взаимодействие IL1RAcP с рецептором, связанным с лигандом, остается плохо изученным. Поскольку IL-1RAcP не обладает значительным сродством ни к одному IL-1, ни к одному IL-1R1, но обладает высоким сродством к комплексу, из этого следует, что новые сайты связывания для IL-1RAcP образуются в результате события связывания IL-1/IL-1R, в которых могут даже принимать участие остатки IL-1 (Ettorre et al., 1997,Eur. Cytokine Netw. 8, 161-171). Другая молекула, антагонист рецептора IL-1 (IL-1ra), конкурирует с IL1 и IL-1 за связывание с рецептором, но не способна рекрутировать IL-1RAcP, образуя в результате занятый, но не передающий сигнал рецептор. Активность IL-1 может быть дополнительно уравновешенаIL-1R типа II, рецептором-приманкой, который связывает лиганд, но не участвует в передаче сигнала в связи с укороченным внутриклеточным доменом. Действие IL-1ra и IL-1R типа II уменьшает тяжесть и продолжительность опосредованных IL-1 воспалительных событий (Wesche et al., 1998, FEBS Letters 429: 303-306; Dripps et al., 1991, J. Biol. Chem. 266: 10331-10336; Dripps et al., 1991, J. Biol. Chem. 266: 2033120335). Ингибиторы интерлейкина-1 могут быть получены из любого белка, способного к специфичному предотвращению действия клеточных рецепторов к IL-1, которое может быть результатом ряда механизмов. Такие механизмы включают негативную регуляцию продуцирования IL-1, связывание свободногоIL-1, вмешательство в связывание IL-1 с IL-1R, вмешательство в образование комплекса IL-1R-IL-1RAcP или вмешательство в модулирование передачи сигнала IL-1 после связывания с его рецептором. Классы ингибиторов IL-1 включают: антагонисты рецептора интерлейкина-1, такие как IL-1ra, как описано ниже; моноклональные анти-IL-1R антитела (например, как раскрыто в опубликованной Европейской патентной заявке ЕР 623674, описание которой включено сюда путем ссылки); белки, связывающие IL-1, такие как растворимые рецепторы IL-1 (например, как раскрыто в патентах США 5492888; 5488032; 5464937; 5319071 и 5180812; описания которых включены сюда путем ссылки); моноклональные анти-IL-1 антитела (например, как раскрыто в публикациях Международных патентных заявокWO 9501997, WO 9402627, WO 9006371, в патенте США 4935343, в ЕР 364778,ЕР 267611 и ЕР 220063, описания которых включены сюда путем ссылки); вспомогательные белки-рецепторы IL-1 и антитела к ним (например, как раскрыто в публикациях Международных патентных заявокWO 96/23067 и WO 99/37773, описания которых включены сюда путем ссылки); ингибиторы интерлейкин-1-превращающего фермента (ИПФ) или каспазы 1 (например, как раскрыто в публикациях Международных патентных заявокWO 99/46248, WO 99/47545 и WO 99/47154, описания которых включены сюда путем ссылки), которые могут применяться для ингибиро-1 018072 вания продуцирования и секреции IL-1; ингибиторы интерлейкин-1-протеазы и другие соединения и белки, которые блокируют синтез in vivo или высвобождение IL-1 из клеток. Примерные ингибиторы IL-1 раскрыты в следующих ссылках: патенты США 5747444; 5359032; 5608035; 5843905; 5359032; 5866576; 5869660; 5869315; 5872095; 5955480 и 5965564; публикации Международных патентных заявок WO 98/21957, WO 96/09323, WO 91/17184, WO 96/40907, WO 98/32733, WO 98/42325, WO 98/44940, WO 98/47892, WO 98/56377, WO 99/03837, WO 99/06426, WO 99/06942, WO 91/17249, WO 98/32733, WO 98/17661, WO 97/08174, WO 95/34326, WO 99/36426 и WO 99/364125; публикации Европейских патентных заявок ЕР 534978 и ЕР 89479 и Французской патентной заявки FR 2762514. Описания всех этих вышеупомянутых ссылок включены сюда путем ссылки. Антагонист рецептора интерлейкина-1 (IL-1ra) представляет собой человеческий белок, который действует в качестве природного ингибитора интерлейкина-1 и является членом семейства IL-1, которое включает IL-1 и IL-1. Предпочтительные антагонисты рецептора (включая IL-1ra и его варианты и производные), а также способы его получения и применения описаны в патенте US 5075222; в публикациях Международных патентных заявокWO 91/08285; WO 91/17184; WO 92/16221; WO 93/21946;FR2706772; описания которых включены сюда путем ссылки. Эти белки включают как гликозилированные, так и негликозилированные формы антагонистов рецептора IL-1. Конкретно раскрыты три полезные формы IL-1ra и его вариантов, и они описаны в патенте США 5075222 ("патент 222"). IL-1ra охарактеризован с помощью ДСН-ПААГ электрофореза как 22-23 кДа молекула, имеющая приблизительную изоэлектрическую точку 4,8, элюирующая из колонки Mono QFLPC примерно при 52 мМ NaCl в трис-буфере, рН 7,6. IL-1ra охарактеризован как 22-23 кДа белок,элюирующий из колонки Mono Q при 48 мМ NaCl. Как IL-1ra, так и IL-1ra гликозилированы. IL-1rax охарактеризован как 20 кДа белок, элюирующий из колонки Mono Q при 48 мМ NaCl и не являющийся гликозилированным. В "патенте 222" также раскрыты способы выделения генов, ответственных за кодирование указанных ингибиторов, клонирования этого гена в подходящих векторах и типах клеток и экспрессии этого гена для продуцирования указанных ингибиторов. IL-1ra, хотя и является эффективным,имеет относительно короткий период полужизни. При современном применении IL-1ra вводят один раз в сутки. Таким образом, данная область выиграет от получения антагониста рецептора IL-1 с приемлемо более длительным периодом полужизни. Предотвращение передачи сигнала путем ингибирования связывания IL-1 с рецептором IL-1 является привлекательным терапевтическим подходом к лечению опосредованных IL-1 заболеваний. В данной области существует необходимость в клинически эффективных ингибиторах пути передачи сигналаIL-1, которые могут ослаблять воздействия опосредованных IL-1 заболеваний и пригодны для введения пациентам-людям. Человеческое антитело, которое блокирует передачу сигнала IL-1, обладает особенным преимуществом при выполнении этой задачи и обеспечит более длительный период полужизни, чем доступная в настоящее время терапия. Краткое изложение сущности изобретения В изобретении предложены моноклональные антитела, которые связываются с рецептором интерлейкина-1 типа I (IL-1R1). Предпочтительно эти антитела ингибируют передачу сигнала IL-1, конкурируя со связыванием IL-1 и IL-1 с IL-1R1. В данном изобретении также предложены клеточные линии гибридомы, которые продуцируют и наиболее предпочтительно секретируют в клеточную культуральную среду моноклональные антитела по изобретению. Антитела по изобретению успешно блокируют передачу сигнала IL-1 в человеческих клетках и в результате этого полезны для лечения пациентов с опосредованными IL-1 заболеваниями. Далее, в изобретении предложены слитые белки, содержащие последовательность Fc-участка антитела и одну или более чем одну последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ IDNO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38 и SEQ ID NO: 40. Такие молекулы могут быть получены с использованием способов, которые описаны, например, в WO 00/24782, которая включена сюда путем ссылки. Такие молекулы могут экспрессироваться, например, в клетках млекопитающих (например, в клетках яичника китайского хомячка) или в бактериальных клетках (например, в клетках Е.coli). В некоторых аспектах изобретения предложены антитела, предпочтительно моноклональные антитела, наиболее предпочтительно человеческие антитела, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 2,SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В изобретении также предложены антитела, предпочтительно моноклональные антитела, наиболее предпочтительно человеческие антитела, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь со-2 018072 держит аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 4, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В определенных аспектах антитела по изобретению содержат тяжелую цепь и легкую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 16, либо ее антигенсвязывающий фрагмент или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В других аспектах вариабельный участок легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как представлено любой из SEQ IDNO: 12 или SEQ ID NO: 18, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В дополнительных аспектах тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 36, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В других дополнительных аспектах легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Такие цепи антител полезны при получении антител, которые связываются специфично с IL-1R1, а также при получении антител двойной специфичности, у которых полученная в результате молекула связывается с IL-1R1 и/или с другой молекулой-мишенью (например,с TNF или с рецептором TNF). В изобретении также предложены антитела, которые связываются специфично с IL-1R1, где тяжелая цепь содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 10, либо ее антигенсвязывающий фрагмент или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь содержит вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах в изобретении также предложены антитела, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит первый вариабельный участок и где этот первый вариабельный участок содержит последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленную SEQ ID NO: 10, и где легкая цепь содержит второй вариабельный участок, где этот второй вариабельный участок содержит последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленную SEQ ID NO: 12, где это антитело взаимодействует с IL-1R1. В изобретении, далее, предложены антитела, которые специфично связываются с IL-1R1, где тяжелая цепь содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 14, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь содержит вариабельный участок легкой цепи,содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 12, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах в изобретении также предложены антитела, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит первый вариабельный участок и где этот первый вариабельный участок содержит последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленную SEQ ID NO: 14, и где легкая цепь содержит второй вариабельный участок, где этот второй вариабельный участок содержит последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленную SEQ ID NO: 12, причем это антитело взаимодействует с IL-1R1. В изобретении также предложены антитела, которые специфично связываются с IL-1R1, где тяжелая цепь содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 16, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь содержит вариабельный участок легкой цепи,содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 18, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В некоторых аспектах в изобретении также предложены антитела, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит первый вариабельный участок и где этот первый вариабельный участок содержит последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленную SEQ ID NO: 16, и где легкая цепь содержит второй вариабельный участок, где этот второй вариабельный участок содержит последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно примерно 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленную SEQ ID NO: 18, причем это ан-3 018072 титело взаимодействует с IL-1R1. В изобретении также предложены антитела, которые специфично связываются с IL-1R1, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 30, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 38, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Далее, в изобретении предложены антитела, которые специфично связываются с IL-1R1, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент, а легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную SEQID NO: 40, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. В изобретении также предложены воплощения всего вышеуказанного, которые представляют собой одноцепочечные антитела, одноцепочечные Fv антитела, Fab-антитела, Fab'-антитела и (Fab')2-антитела. В конкретных аспектах в изобретении предложена легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Кроме того, в изобретении предложена тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ IDNO: 28 или SEQ ID NO: 30, либо ее антигенсвязывающий или иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент. Изобретение также относится к выделенным человеческим антителам, которые специфично связываются с IL-1R1, где это антитело содержит: (а) каркасные участки человеческой тяжелой цепи, участокCDR1 человеческой тяжелой цепи, участок CDR2 человеческой тяжелой цепи и участок CDR3 человеческой тяжелой цепи и (б) каркасные участки человеческой легкой цепи, участок CDR1 человеческой легкой цепи, участок CDR2 человеческой легкой цепи и участок CDR3 человеческой легкой цепи. В некоторых аспектах участок CDR1 человеческой тяжелой цепи может представлять собой участок CDR1 тяжелой цепи 26F5, 27F2 или 15 С 4, как показано на фиг. 10, а участок CDR1 человеческой легкой цепи может представлять собой участок CDR1 легкой цепи 26F5, 27F2 или 15 С 4, как показано на фиг. 11. В других аспектах участок CDR2 человеческой тяжелой цепи может представлять собой участок CDR2 тяжелой цепи 26F5, 27F2 или 15 С 4, как показано на фиг. 10, а участок CDR2 человеческой легкой цепи может представлять собой участок CDR2 легкой цепи 26F5, 27F2 или 15 С 4, как показано на фиг. 11. В следующих аспектах участок CDR3 человеческой тяжелой цепи может представлять собой участок CDR3 тяжелой цепи 26F5, 27F2 или 15 С 4, как показано на фиг. 10, а участок CDR3 человеческой легкой цепи может представлять собой участок CDR3 легкой цепи 26F5, 27F2 или 15 С 4, как показано на фиг. 11. Кроме того, в изобретении предложено отдельное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR1 человеческой тяжелой цепи, где этот участок CDR1 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 63; участок CDR2 человеческой тяжелой цепи, где этот участокCDR2 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 или SEQID NO: 66; и/или участок CDR3 человеческой тяжелой цепи, где этот участок CDR3 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 или SEQ ID NO: 69. Кроме того, в изобретении предложено отдельное человеческое антитело, которое специфично связывается с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (IL-1R1), содержащее участок CDR1 человеческой легкой цепи, где этот участок CDR1 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71; участок CDR2 человеческой тяжелой цепи, где этот участок CDR2 легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 73; и/или участок CDR3 человеческой тяжелой цепи, где этот участок CDR3 тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 75. В некоторых воплощениях антитела по изобретению связываются с третьим доменом IL-1R1, который показан на фиг. 17. Предпочтительно эпитоп для антитела по изобретению состоит из аминокислотной последовательности YSV, которая обозначена здесь как эпитоп 4 и показана на фиг. 24. Далее, изобретение относится к слитым белкам и к другим молекулам, способным к связыванию с эпитопом 4(вместе с вышеупомянутыми антителами, которые все вместе называют "партнерами специфичного связывания"), как, например, к таким, которые могут быть получены с использованием способов, таких как описанные, например, в WO 00/24782, которая включена сюда путем ссылки. Такие молекулы могут экспрессироваться, например, в клетках млекопитающих (например, в клетках яичника китайского хомячка) или в бактериальных клетках (например, в клетках Е. coli). Кроме того, в изобретении предложен способ картирования эпитопов выбранного антигена. В одном аспекте этот способ включает стадии: (а) создания серии слитых белков, содержащих (1) авидин и(2) фрагмент антигена; (б) скрининга этой серии слитых белков на связывание с одним или более чем одним партнером специфичного связывания для этого антигена; (в) выделения этих слитых белков на среде, содержащей биотин, где авидин связывается с биотином и (г) анализа слитых белков, связанных партнером или партнерами специфичного связывания, для определения сайтов связывания на антигене для этого конкретного партнера или партнеров специфичного связывания. В особом аспекте эти конкретные партнеры специфичного связывания представляют собой антитела. В дополнительных воплощениях в изобретении предложены способы лечения опосредованного IL1 заболевания, состояния или расстройства, включающие стадию введения фармацевтически эффективного количества одного или множества моноклональных антител по изобретению либо их антигенсвязывающего или иммунологически функционального иммуноглобулинового фрагмента индивидууму, нуждающемуся в таком лечении. В изобретении также предложены способы определения уровня IL-1R1 в биологическом образце,включающие стадию приведения в контакт этого образца с моноклональным антителом по изобретению или его связывающим антиген фрагментом. Анти-IL-1R1 антитела по изобретению можно использовать в любом известном способе анализа, таком как анализы конкурентного связывания, прямые и косвенные"сэндвич-анализы", анализы иммунопреципитации и твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA)(см. Sola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, p. 147-158, CRC Press, Inc.) для обнаружения и количественного определения IL-1R. Антитела могут связывать IL-1R со сродством, которое соответствует используемому типу анализа. Конкретные предпочтительные воплощения изобретения будут очевидны на основании последующего более подробного описания некоторых предпочтительных воплощений и формулы изобретения. Краткое описание чертежей На фиг. 1 А, 1 В изображена последовательность кДНК (фиг. 1 А), кодирующая константный участок тяжелой цепи IgG1 человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 1) и аминокислотная последовательность (фиг. 1 В) константного участка тяжелой цепи IgG1 человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQID NO: 2); на фиг. 2 А, 2 В изображена последовательность кДНК (фиг. 2 А), кодирующая константный участок каппа-цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 3) и аминокислотная последовательность(фиг. 2 В) константного участка каппа-цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 4); на фиг. 3 А, 3 В изображена последовательность кДНК (фиг. 3 А), кодирующая константный участок тяжелой цепи IgG2 человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 5) и аминокислотная последовательность (фиг. 3 В) константного участка тяжелой цепи IgG2 человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQID NO: 6); на фиг. 4 А, 4 В изображена последовательность кДНК (фиг. 4 А), кодирующая константный участок тяжелой цепи IgG4 человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 7) и аминокислотная последовательность (фиг. 4 В) константного участка тяжелой цепи IgG4 человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQID NO: 8); на фиг. 5 А, 5 В изображена последовательность кДНК (фиг. 5 А), кодирующая вариабельный участок 26F5 тяжелой цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 9) и аминокислотная последовательность (фиг. 5 В) вариабельного участка 26F5 тяжелой цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела(SEQ ID NO: 10); на фиг. 6 А, 6 В изображена последовательность кДНК (фиг. 6 А), кодирующая вариабельный участок 26F5 каппа-цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 11) и аминокислотная последовательность (фиг. 6 В) вариабельного участка 26F5 каппа-цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQID NO: 12); на фиг. 7 А, 7 В изображена последовательность кДНК (фиг. 7 А), кодирующая вариабельный участок 27F2 тяжелой цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 13) и аминокислотная последовательность (фиг. 7 В) вариабельного участка 27F2 тяжелой цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела(SEQ ID NO: 14); на фиг. 8 А, 8 В изображена последовательность кДНК (фиг. 8 А), кодирующая вариабельный участок 15 С 4 тяжелой цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 15) и аминокислотная последовательность (фиг. 8 В) вариабельного участка 15 С 4 тяжелой цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела(SEQ ID NO: 16); на фиг. 9 А, 9 В изображена последовательность кДНК (фиг. 9 А), кодирующая вариабельный участок 15 С 4 каппа-цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQ ID NO: 17) и аминокислотная последовательность (фиг. 9 В) вариабельного участка 15 С 4 каппа-цепи человеческого анти-IL-1R1 антитела (SEQID NO: 18); на фиг. 10 показано выравнивание аминокислотных последовательностей тяжелых цепей от антител анти-IL-1R1, обозначенных 15 С 4, 27F2 и 26F5. Участки, определяющие комплементарность (CDR, complementarity determining regions), подчеркнуты. CDR1 для 26F5 обозначен как SEQ ID NO: 61; для 27F2 обозначен как SEQ ID NO: 62; для 15 С 4 обозначен как SEQ ID NO: 63. CDR2 для 26F5 обозначен какSEQ ID NO: 69; на фиг. 11 показано выравнивание аминокислотных последовательностей легких цепей от антител анти-IL-R1-, обозначенных как 15 С 4, 27F2 и 26F5. CDR1 для 26F5/27F2 обозначен как SEQ ID NO: 70; для 15 С 4 обозначен как SEQ ID NO: 71. CDR2 для 26F5/27F2 обозначен как SEQ ID NO: 72; для 15 С 4 обозначен как SEQ ID NO: 73. CDR1 для 26F5/27F2 обозначен как SEQ ID NO: 74; для 15 С 4 обозначен как SEQ ID NO: 75; фиг. 12 представляет собой график, иллюстрирующий ингибиторное воздействие анти-IL-1R1 антител на образование комплекса IL-1R/IL-1/IL-1RAcP; фиг. 13 представляет собой график, иллюстрирующий ингибиторное воздействие моноклонального анти-IL-1R1 антитела, описанного здесь и обозначенного как 15 С 4, на образование комплекса IL-1R/IL1/IL-1RAcP; фиг. 14 представляет собой график, на котором представлена способность анти-IL-1R1 антител к блокированию связывания IL-1 при незначительном вмешательстве в связывание IL-1ra по сравнению с контролем IgG; фиг. 15 А представляет собой график, показывающий ингибирование продуцирования IL-6 в первичных человеческих хондроцитах анти-IL-1R1 антителами, идентифицированными здесь и обозначенными как 15 С 4, 26F5 и 27F2, по сравнению с IL-1ra; фиг. 15 В представляет собой график, показывающий ингибирование продуцирования IL-6 в первичных человеческих хондроцитах IL-1ra и моноклональными антителами 15 С 4 и 27F2 по сравнению с классом моноклональных антител, представленным 10 Н 7 и 24 Е 12; фиг. 16 представляет собой график, показывающий ингибирование продуцирования IL-6 в цельной крови человека моноклональными антителами анти-IL-1R1, обозначенными 15 С 4, 26F5 и 27F2, по сравнению с IL-1ra; на фиг. 17 изображена человеческая аминокислотная (SEQ ID NO: 78) и нуклеотидная (SEQ ID NO: 77) последовательность, а также крысиная нуклеотидная (SEQ ID NO: 78) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 79) 3-го домена IL-1R1. Пронумерованные полосы над человеческой последовательностью показывают 15 различных сайтов, мутированных для конструирования 15 различных мутированных белков. Крысиные остатки, введенные в результате мутации, перечислены под крысиной нуклеотидной последовательностью; на фиг. 18 показан вестерн-блот анализ, демонстрирующий распознавание моноклонального антиIL-1R1 антитела мутантами IL-1R1; фиг. 19 представляет собой чертеж, на котором представлены (I) активация пути передачи сигналаIL-1, который начинается со связывания IL-1 с IL-1R1 и рекрутмента IL-1RAcP, и три класса анти-IL1R1 антител: (II) блокаторы эпитопа 3-го домена IL-1, (III) блокаторы эпитопа 3-го домена RAcP и (IV) блокаторы эпитопа 1-го/2-го домена IL-1; на фиг. 20 изображена кристаллическая структура 15 С 4 и 27F2 с мутацией 10, как описано здесь. Остатки, изображенные серым цветом, показывают эпитопы 15 С 4 и 27F2; на фиг. 21 изображены эпитопы 15 С 4 в третьем домене внеклеточного IL-1R1; на фиг. 22 изображены эпитопы 24 Е 12 в третьем домене внеклеточного IL-1R1; на фиг. 23 изображена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 59) химерного белка авидин - человеческий IL-1R1 - FLAG по изобретению; на фиг. 24 изображена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 60) химерного белка авидин-IL-1R1-FLAG Cynomolgus по изобретению. Рекомбинантный авидин цыпленка (выделен курсивом) соединен со зрелым внеклеточным доменом IL-1R1 Cynomolgus (подчеркнут с С-концевой меткойFLAG, выделенной жирным шрифтом) с помощью 6-аминокислотного линкера. Четыре аминокислоты из человеческого IL-1R1, которые были введены одни или в комбинации с последовательностью Cynomolgus, выделены жирным шрифтом под последовательностью Cynomolgus. Эпитоп 4 выделен жирным шрифтом, курсивом и подчеркнут; на фиг. 25 А показан вестерн-блот анализ связывания анти-человеческий IL1-R1 антитела (антиhuIL1-R1) с IL-1R1. Символ указывает на то, что антитела использовали в концентрации 5 мкг/мл,тогда как остальные антитела использовали в концентрации 1 мкг/мл; на фиг. 25 В показано суммирование данных денситометрического анализа двойной серии экспериментов вестерн-блоттинга; на фиг. 26 показаны графики, представляющие связывание антител анти-huIL1-R1 с белками авидин-IL-1R1-FLAG во множественном анализе связывания на гранулах. Подробное описание некоторых предпочтительных воплощений Заголовки разделов, использованные здесь, нужны только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие сущность изобретения. Все источники, цитируемые в данной заявке, точно включены сюда путем ссылки в любых целях. Определения. Заболевание или медицинское состояние считают "опосредованным интерлейкином-1 (IL-1) забо-6 018072 леванием", если встречающееся естественным образом или вызванное экспериментально заболевание или медицинское состояние связано с повышенными уровнями IL-1 в жидкостях организма или в тканях,либо, если клетки или ткани, взятые из организма, продуцируют повышенные уровни IL-1 в культуре. Повышенные уровни IL-1 могут включать, например, уровни, которые превышают таковые, обнаруживаемые в норме в конкретной клетке или ткани, либо могут представлять собой любой обнаружимый уровень IL-1 в клетке или в ткани, в которых в норме IL-1 не экспрессируется. Во многих случаях опосредованные IL-1 заболевания распознают также на основании двух приведенных ниже дополнительных условий: (1) патологические показатели, связанные с заболеванием или медицинским состоянием, можно имитировать экспериментальным путем у животных посредством введения IL-1 или положительной регуляции экспрессии IL-1 и (2) патология, вызванная в экспериментальных животных моделях заболевания или медицинского состояния, может быть ингибирована или устранена посредством обработки агентами, которые ингибируют действие IL-1. При большинстве опосредованных IL-1 заболеваний встречаются по меньшей мере два из указанных условий, и при многих опосредованных IL-1 заболеваниях встречаются все три указанные условия. Не исключительный перечень острых и хронических опосредованных IL-1 заболеваний включает,но не ограничен ими, приведенные ниже: острый панкреатит; боковой амиелотрофический склероз (ALS,amyelolaterosclerosis); болезнь Альцгеймера; кахексию/анорексию, включая кахексию, вызванную СПИД; астму и другие легочные заболевания; атеросклероз; аутоиммунный васкулит; синдром хронической усталости; заболевания, связанные с Clostridium, включая диарею, связанную с Clostridium; коронарные состояния и показания, включая застойную сердечную недостаточность, коронарный рестеноз, инфаркт миокарда, дисфункцию миокарда (например, связанную с сепсисом) и коронарный артериальный шунтированный трансплантат; рак, такой как множественная миелома и миелогенная (например, AML (острая миелоидная лейкемия) или CML (хроническая миелоидная лейкемия и другие лейкемии, а также метастаз опухоли; диабет (например, инсулинзависимый диабет); эндометриоз; лихорадку; фибромиалгию; гломерулонефрит; болезнь трансплантат против хозяина/отторжение трансплантата; геморрагический шок; гипералгезию; воспалительное кишечное заболевание; воспалительные состояния сустава, включая остеоартрит, псориатический артрит и ревматоидный артрит; воспалительное глазное заболевание, которое может быть связано, например, с трансплантатом роговицы; ишемию, включая церебральную ишемию (например, повреждение головного мозга в результате травмы, эпилепсии, геморрагии или удара,каждое из которых может привести к нейродегенерации); болезнь Кавасаки; нарушение познавательной способности; легочные заболевания (например, РДСВ (острый респираторный дистресс-синдром; рассеянный склероз; миопатии (например, мышечный метаболизм белков, особенно при сепсисе); нейротоксичность (например, которая вызвана ВИЧ); остеопороз; боль, включая боль при раке; болезнь Паркинсона; заболевание периодонта; преждевременные роды; псориаз; реперфузионное повреждение; септический шок; побочные эффекты лучевой терапии; заболевание височно-верхнечелюстного сустава; расстройство сна; увеит или воспалительное состояние в результате деформации, растяжения, повреждения хряща, травмы, ортопедической операции, инфекции или других болезненных процессов. Способы по изобретению для лечения этих острых и хронических опосредованных IL-1 заболеваний, а также других опосредованных IL-1 заболеваний описаны ниже. Для получения рекомбинантной ДНК, осуществления синтеза олигонуклеотидов и практики культивирования ткани и трансформации (например, электропорации, трансфекции или липофекции) могут быть использованы общепринятые методики. Ферментативные реакции и методики очистки можно осуществить в соответствии с указаниями фирмы-производителя, либо как их обычно выполняют в данной области, либо как описано здесь. Вышеуказанные методики и процедуры можно, как правило, осуществить общепринятыми методами, хорошо известными в уровне техники, и как описано в различных общих и более конкретных источниках, которые цитируются и обсуждаются на протяжении всего настоящего описания; см., например, книгу Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rded., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., которая включена сюда путем ссылки для любой цели. Если не представлены конкретные определения, лабораторные процедуры и методики аналитической химии, химии органического синтеза, а также лекарственной и фармацевтической химии,описанные здесь, и номенклатура, связанная с ними, хорошо известны и обычно используются в данной области. Для химических синтезов, химических анализов, получения, изготовления и доставки фармацевтических препаратов и лечения пациентов могут быть использованы стандартные методики. Как используют в соответствии с настоящим описанием, приведенные ниже термины, если не указано иное, следует понимать следующим образом: Термин "изолированный полинуклеотид" означает, что рассматриваемый полинуклеотид: 1) не связан (ковалентно или нековалентно) со всеми другими полинуклеотидами или частью их, с которыми указанный полинуклеотид связан в природе, или 2) связан с молекулой, с которой он не связан в природе,или 3) не встречается в природе связанным с какими-либо другими полинуклеотидами. Такой отдельный полинуклеотид может представлять собой геномную ДНК, кДНК, мРНК или другие РНК, синтетического происхождения либо любую их комбинацию. Термин "изолированный белок", упоминаемый здесь, означает, что указанный белок: 1) свободен,-7 018072 по меньшей мере, от некоторых других белков, с которыми он должен обычно обнаруживаться, 2) по существу, свободен от других белков из того же источника, например из того же вида, 3) экспрессируется клеткой другого вида, 4) отделен по меньшей мере от 50% полинуклеотидов, липидов, углеводов или других веществ, с которыми он связан в природе, 5) не связан (посредством ковалентного или нековалентного взаимодействия) с участками белка, с которым "изолированный белок" связан в природе, 6) оперативно связан (посредством ковалентного или нековалентного взаимодействия) с полипептидом, с которым он не связан в природе, или 7) не встречается в природе. Геномная ДНК, кДНК, мРНК или другие РНК синтетического происхождения либо любая их комбинация могут кодировать такой изолированный белок. Предпочтительно изолированный белок, по существу, свободен от белков или полипептидов либо других примесей, которые обнаруживаются в его природном окружении, которые будут препятствовать его терапевтическому, диагностическому, профилактическому, исследовательскому или другому применению. Термин "полипептид" или "белок" означает одну или более чем одну цепь аминокислот, где каждая цепь содержит аминокислоты, ковалентно связанные пептидными связями, и где указанный полипептид или белок может содержать множество цепей, нековалентно и/или ковалентно связанных вместе пептидными связями, имеющих последовательность нативных белков, то есть белков, продуцируемых встречающимися в природе и, конкретно, нерекомбинантными клетками, либо полученными генноинженерным путем или рекомбинантными клетками, и содержит молекулы, имеющие аминокислотную последовательность нативного белка, или молекулы, имеющие делеции, вставки и/или замены одной или более чем одной аминокислоты нативной последовательности. Термин "полипептид" или "белок", конкретно, включает анти-IL1-R1 антитела или последовательности, которые имеют делеции, вставки и/или замены одной или более чем одной аминокислоты анти-IL1-R1 антитела. Таким образом, "полипептид" или "белок" может включать одну цепь (называется "мономер") или множество цепей (называется "мультимер") аминокислот. Термин "фрагмент полипептида" относится к полипептиду, который может быть мономерным или мультимерным, который имеет аминоконцевую делецию, карбоксиконцевую делецию и/или внутреннюю делецию или замену встречающегося в природе или продуцированного рекомбинантным путем полипептида. В некоторых воплощениях фрагмент полипептида может содержать аминокислотную цепь длиной по меньшей мере от 5 до примерно 500 аминокислот. Должно быть понятно, что в некоторых воплощениях фрагменты имеют длину по меньшей мере 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350,400 или 450 аминокислот. Особенно полезные фрагменты полипептида включают включают в себя функциональные домены, включая связывающие домены. В случае антитела IL1-R1 полезные фрагменты включают, но не ограничены ими, участок CDR, особенно участок CDR3 тяжелой или легкой цепи; вариабельный домен тяжелой или легкой цепи; участок аминокислотной цепи или, по меньшей мере, ее вариабельный участок, включающий два CDR, и тому подобное. Термин "иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент", как его используют здесь, относится к фрагменту полипептида, который содержит, по меньшей мере, вариабельные домены тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина. Иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент по изобретению способен к связыванию с лигандом, предотвращая связывание этого лиганда с его рецептором, прерывая биологический ответ в результате связывания лиганда с рецептором или любой их комбинацией. Предпочтительно иммунологически функциональный иммуноглобулиновый фрагмент по изобретению специфично связывается с IL-1R1. Термины "встречающийся в природе" и "нативный" означают, что биологические материалы (молекулы, последовательности, белковые комплексы, клетки и тому подобное), к которым применяют эти термины, могут быть обнаружены в природе, а не сконструированы человеком. Например, полипептид или полипептидная последовательность, которые присутствуют в организме (включая вирусы), которые могут быть выделены из природного источника и не модифицированы человеком намеренно, являются встречающимися в природе. Подобным образом термины "не встречающийся в природе" или "ненативный" относятся к материалу, который не обнаруживается в природе или который был структурно модифицирован или синтезирован человеком. Термин "функциональным образом связанный" означает, что компоненты, к которым применяют этот термин, находятся во взаимоотношениях, которые дают им возможность осуществлять свойственные им функции в подходящих условиях. Например, регуляторная последовательность "функциональным образом связана" с последовательностью, кодирующей белок, сшита с ней таким образом, что экспрессия этой последовательности, кодирующей белок, достигается в условиях, совместимых с транскрипционной активностью этих регуляторных последовательностей. Термин "регуляторная последовательность" означает, что указанная полинуклеотидная последовательность может осуществлять экспрессию и процессинг кодирующих последовательностей, с которыми она сшита. Природа таких регуляторных последовательностей может зависеть от организма-хозяина. В конкретных воплощениях регуляторные последовательности для прокариот могут включать промотор,сайт связывания рибосомы и последовательность терминации транскрипции. В других конкретных воплощениях регуляторные последовательности для эукариот могут включать промоторы, содержащие один сайт или множество сайтов распознавания для факторов транскрипции, последовательностиэнхансеры транскрипции и последовательность терминации транскрипции. В некоторых воплощениях"регуляторные последовательности" могут включать лидерные последовательности и/или последовательности партнера слияния. Термин "полинуклеотид" означает полимеры однонитевой или двунитевой нуклеиновой кислоты длиной по меньшей мере 10 оснований. В некоторых воплощениях нуклеотиды, составляющие полинуклеотид, могут представлять собой рибонуклеотиды или дезоксирибонуклеотиды либо модифицированную форму любого типа нуклеотида. Такие модификации включают модификации оснований, такие как производные бромуридина и инозина, модификации рибозы, такие как 2',3'-дидезоксирибоза, и модификации межнуклеотидной связи, такие как фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанилотиоат, фосфораниладат и фосфороамидат. Этот термин включает однонитевую и двунитевую формы ДНК. Термин "олигонуклеотид" означает полинуклеотид, имеющий длину 200 оснований или меньше. В предпочтительных воплощениях длина олигонуклеотидов составляет 10-60 оснований. В более предпочтительных воплощениях длина олигонуклеотидов составляет 12-19 или 20-40 оснований. Олигонуклеотиды могут быть однонитевыми или двунитевыми, например, для использования при конструировании мутантного гена. Олигонуклеотиды по изобретению могут представлять собой смысловые или антисмысловые олигонуклеотиды. Термин "встречающиеся в природе нуклеотиды" включает дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Термин "модифицированные нуклеотиды" включает нуклеотиды с модифицированными или замещенными сахарными группами, либо с модифицированными или замещенными основаниями. Термин(1988), Nucl. Acids Res. 16: 3209; Zon et al. (1991), Anti-Cancer Drug Design 6: 539; Zon et al. (1991), Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, p. 87-108 (F. Eckstein, ed.), Oxford University Press, Oxford, England; Stec et al., U.S. Pat. No. 5151510; Uhlmann and Peyman (1990), Chemical Reviews 90: 543,описания которых включены сюда путем ссылки для любой цели. Олигонуклеотид по изобретению может включать метку, в том числе радиоактивную метку, флуоресцентную метку, гаптен или антигенную метку для анализов на обнаружение. Термин "вектор" означает любую молекулу (например, нуклеиновую кислоту, плазмиду или вирус),используемую для переноса кодирующей информации в клетку-хозяина. Термин "экспрессионный вектор" или "экспрессионная конструкция" относится к вектору, который является пригодным для трансформации клетки-хозяина и содержит последовательности нуклеиновой кислоты, которые направляют и/или регулируют (в связи с клеткой-хозяином) экспрессию одного или более чем одного гетерологичного кодирующего участка, функциональным образом связанного с ней. Экспрессионная конструкция может включать, но не ограничиваться ими, последовательности, которые воздействуют на транскрипцию, трансляцию и сплайсинг РНК, если присутствуют интроны кодирующего участка, функциональным образом связанного с ними, или контролируют их. Термин "клетка-хозяин" означает клетку, которая трансформирована или способна быть трансформированной последовательностью нуклеиновой кислоты и посредством этого экспрессирует выбранный интересующий ген. Этот термин включает потомство родительской клетки, пока присутствует выбранный ген, независимо от того, идентично ли это потомство по морфологии или по генетическому составу исходной родительской клетке. Термин "трансдукция" означает перенос генов от одной бактерии к другой, обычно посредством фага. "Трансдукция" также относится к приобретению и переносу эукариотических клеточных последовательностей ретровирусами. Термин "трансфекция" означает захват чужеродной или экзогенной ДНК клеткой, и клетка "трансфицирована", когда экзогенная ДНК введена внутрь под клеточную мембрану. Ряд методик трансфекции хорошо известен в данной области и обсуждается здесь; см., например, Graham et al., 1973, Virology 52: 456; Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Id., Davis et al., 1986, Basic Methods inMolecular Biology, Elsevier и Chu et al., 1981, Gene 13: 197. Такие методики можно использовать для введения одной или более чем одной молекулы экзогенной ДНК в подходящие клетки-хозяева. Термин "трансформация" относится к изменению генетических характеристик клетки, и клетка трансформирована, когда она модифицирована таким образом, что содержит новую ДНК. Например,клетка трансформирована, когда она модифицирована по сравнению с ее нативным состоянием посредством трансфекции, трансдукции или других методик. После трансфекции или трансдукции трансформирующая ДНК может рекомбинировать с ДНК клетки путем физической интеграции в хромосому клетки, либо может поддерживаться транзитно в виде эписомного элемента без репликации, либо может реплицироваться независимо в виде плазмиды. Клетку считают "стабильно трансформированной", когда трансформирующая ДНК реплицируется при делении клетки. Термин "антиген" относится к молекуле или участку молекулы, которые способны связываться с избирательным связывающим агентом, таким как антитело, и, кроме того, могут быть использованы у животного для продуцирования антител, способных связываться с эпитопом этого антигена. Антиген может иметь один или более чем один эпитоп. Термин "эпитоп" включает любой детерминант, предпочтительно полипептидный детерминант,способный к специфичному связыванию с иммуноглобулином или рецептором Т-клетки. В некоторых воплощениях детерминанты эпитопов включают химически активные поверхностные группировки молекул, такие как аминокислоты, сахарные боковые цепи, фосфорил или сульфонил, и в некоторых воплощениях могут иметь специфичные характеристики трехмерной структуры и/или специфичные характеристики заряда. Эпитоп представляет собой участок антигена, который связывается антителом. В некоторых воплощениях указано, что антитело специфично связывает антиген, когда оно преимущественно распознает его антиген-мишень в сложной смеси белков и макромолекул. В предпочтительных воплощениях указано, что антитело специфично связывает антиген, когда константа диссоциации меньше или равна примерно 10 нМ, более предпочтительно, когда константа диссоциации меньше или равна примерно 100 пМ, и наиболее предпочтительно, когда константа диссоциации меньше или равна примерно 10 пМ. Термин "идентичность" относится к родству между последовательностями двух или более полипептидных молекул либо двух или более молекул нуклеиновых кислот, как определено на основании сравнения их последовательностей. В данной области "идентичность" также означает степень родства между молекулами нуклеиновых кислот или полипептидов, что в данном случае определяют как совпадение между последовательностями двух или более нуклеотидов либо двух или более аминокислот. "Идентичность" определяет процент идентичных совпадений между меньшими из двух или более последовательностей с выравниванием разрывов (если они есть) со ссылкой на конкретную математическую модель или компьютерную программу (то есть "алгоритмы"). Термин "подобие" используют в данной области в отношении родственной концепции; в отличие от"идентичности", тем не менее, "подобие" относится к мере родства, которое включает как идентичные совпадения, так и совпадения консервативных замен. Если две полипептидные последовательности имеют, например, 10/20 идентичных аминокислот, а остальные представляют собой неконсервативные замены, тогда и процент идентичности, и процент подобия будет составлять 50%. Если в том же примере существует пять дополнительных положений, где имеются консервативные замены, тогда процент идентичности остается 50%, но процент подобия будет составлять 75% (15/20). Следовательно, в случаях, где имеются консервативные замены, процент подобия между двумя полипептидами будет выше, чем процент идентичности между этими двумя полипептидами. Идентичность и подобие родственных нуклеиновых кислот и полипептидов можно легко вычислить известными способами. Такие способы включают, но не ограничены ими, способы, описанные в Computational Molecular Biology (Lesk, A.M., ed.), 1988, Oxford University Press, New York; Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith, D.W., ed.), 1993, Academic Press, New York; Computer analysis of Sequence Data, Part 1 (Griffin, A.M. and Griffin, H.G., eds.), 1994, Humana Press, New Jersey; von Heinje, G.Durbin et al., 1998, Biological Sequence Analysis, Cambridge University Press. Предпочтительные способы определения идентичности разработаны так, чтобы давать наибольшее совпадение между тестируемыми последовательностями. Способы определения идентичности описаны в общедоступных компьютерных программах. Предпочтительные компьютерные программные способы определения идентичности между двумя последовательностями включают, но не ограничены ими, пакет программ GCG, включая GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12: 387; Genetic Computer Group,University of Wisconsin, Madison, WI), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410). Программа BLASTX общедоступна от National Center for Biotechnology Information (NCBI) и из других источников (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894; Altschul et al.,1990, см. выше). Хорошо известный алгоритм Смита-Вотермана (Smith Waterman) может быть также использован для определения идентичности. Некоторые схемы выравнивания для выравнивания двух аминокислотных последовательностей могут приводить в результате к совпадению только короткого участка этих двух последовательностей, и этот небольшой выровненный участок может иметь очень высокую идентичность последовательности,даже если нет значительного родства между двумя полноразмерными последовательностями. Соответственно в некоторых воплощениях избранный способ выравнивания (программа GAP) будет приводить в результате к выравниванию, которое охватывает по меньшей мере 50 смежных аминокислот целевого полипептида. Например, используя компьютерный алгоритм GAP (Genetic Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI), два полипептида, для которых нужно определить процент идентичности последовательности, выравнивают до оптимального совпадения их соответствующих аминокислот ("совпадающий промежуток", как определено с помощью этого алгоритма). В некоторых воплощениях в соответствии с этим алгоритмом используют метод штрафных функций открытия разрыва (которые вычисляют как трехкратную среднюю диагональ, где "средняя диагональ" представляет собой среднее диагонали матрицы сравнения; "диагональ" представляет собой очки или число, оцениваемое для каждого точного совпадения аминокислот конкретной матрицей сравнения) и метод штрафных функций протяженности разрыва (которые обычно составляют одну десятую штрафных функций открытия разрыва), а также матрицу сравнения РАМ 250 или BLOSUM 62. В некоторых воплощениях этим алгоритмом также используется стандартная матрица сравнения (см. Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5: 345-352 для матрицы сравнения РАМ 250; Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919 для матрицы сравнения BLOSUM 62). В некоторых воплощениях параметры для сравнения полипептидных последовательностей включают приведенные ниже: алгоритм: Needleman et al. (1970), J. Mol. Biol. 48: 443-453; матрица сравнения: BLOSUM 62 от Henikoff et al. (1992), см. выше; штрафная функция разрыва: 12; штрафная функция длины разрыва: 4; порог подобия: 0. Программа GAP может быть применима с приведенными выше параметрами. В некоторых воплощениях вышеупомянутые параметры являются недостаточными параметрами для полипептидных сравнений (параллельно с отсутствием штрафных функций для концевых разрывов) при использовании алгоритма GAP. Термин "встречающийся в природе", как его используют в отношении аминокислот, относится к двадцати традиционным аминокислотам; см. Immunology-A Synthesis, 2nd Edition (E.S. Golub and D.R.Gren, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, MA (1991), включенную сюда путем ссылки для любой цели. Пептидные аналоги широко применяют в фармацевтической промышленности в качестве непептидных лекарств со свойствами, аналогичными свойствам пептида-матрицы. Эти типы непептидных соединений называют "пептидные миметики" или "пептидомиметики"; см. Fauchere (1986) Adv. Drug Res. 15: 29; VeberFriedinger, 1985, TINS p. 392 и Evans et al. (1987) J. Med. Chem. 30: 1229, которые включены сюда путем ссылки для любой цели. Такие соединения часто разрабатывают с целью компьютерного молекулярного моделирования. Пептидные миметики, которые структурно подобны терапевтически полезным пептидам, можно использовать для получения подобного терапевтического или профилактического эффекта. Как правило, пептидомиметики структурно подобны пептиду или полипептиду-образцу(то есть пептиду или полипептиду, который обладает биологическим свойством или фармакологической активностью), такому как человеческое антитело, но имеют одну или более чем одну пептидную связь,возможно, замененную связью, выбранной из -CH2-NH-, -CH2-S-, -CH2-CH2-, -СН=СН- (цис и транс),-СОСН 2-, -СН(ОН)СН 2- и -CH2SO-, способами, хорошо известными в данной области. Систематическая замена одной или более чем одной аминокислоты согласованной последовательности D-аминокислотой того же типа (например, D-лизин вместо L-лизина) может быть использована в некоторых воплощениях для создания более стабильных пептидов. Кроме того, сжатые пептиды, содержащие согласованную последовательность или, по существу, идентичный вариант согласованной последовательности, можно сконструировать способами, известными в данной области (RizoGierasch, 1992, Ann. Rev. Biochem. 61: 387, включено сюда путем ссылки для любой цели); например, путем добавления внутренних цистеиновых остатков, способных к образованию внутримолекулярных дисульфидных мостиков, которые приводят к циклизации пептида."Антитело" или "пептид(ы) антитела" относятся к интактному антителу или к его связывающему фрагменту, который конкурирует с интактным антителом за специфичное связывание и включает химерные, гуманизированные, полностью человеческие антитела и антитела двойной направленности. В некоторых воплощениях связывающие фрагменты получают с помощью методик рекомбинантной ДНК. В дополнительных воплощениях связывающие фрагменты получают путем ферментативного или химического расщепления интактных антител. Связывающие фрагменты включают, но не ограничены ими, Fab,Fab', F(ab')2, Fv и одноцепочечные антитела. Термин "тяжелая цепь" включает полноразмерную тяжелую цепь и ее фрагменты, имеющие достаточную последовательность вариабельного участка для придания специфичности к IL-1R1. Полноразмерная тяжелая цепь включает домен вариабельного участка, VH, и три домена константного участка,CH1, CH2 и CH3. Домен VH находится на аминоконце полипептида, а домен CH3 находится на карбоксильном конце. Термин "легкая цепь" включает полноразмерную легкую цепь и ее фрагменты, имеющие достаточную последовательность вариабельного участка для придания специфичности к IL-1R1. Полноразмерная легкая цепь включает домен вариабельного участка, VL, и домен константного участка, CL. Подобно тяжелой цепи домен вариабельного участка легкой цепи находится на аминоконце полипептида."Fab-фрагмент" состоит из одной легкой цепи и CH1 и вариабельных участков тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи."Fab'-фрагмент" содержит одну легкую цепь и одну тяжелую цепь, которая содержит большую часть константного участка между доменами CH1 и CH2, так что межцепочечная дисульфидная связь мо- 11018072 жет образоваться между двумя тяжелыми цепями с образованием молекулы F(ab')2. Фрагмент F(ab')2 содержит две легких цепи и две тяжелых цепи, содержащих часть константного участка между доменами CH1 и CH2, так что между двумя тяжелыми цепями образована межцепочечная дисульфидная связь."Fv участок" содержит вариабельные участки из обеих цепей, тяжелой и легкой, но не содержит константного участки."Одноцепочечные антитела" представляют собой молекулы Fv, в которых вариабельные участки тяжелой и легкой цепи соединены гибким линкером с образованием единой полипептидной цепи, которая формирует антигенсвязывающий участок. Одноцепочечные антитела подробно обсуждаются в публикации Международной патентной заявкиWO 88/01649 и в патентах США 4946778 и 5260203,описания которых включены путем ссылки для любой цели."Бивалентное антитело", иное чем "мультиспецифичное" или "многофункциональное" антитело в некоторых воплощениях, понимают как содержащее сайты связывания, имеющие идентичную антигенную специфичность."Биспецифичное" или "бифункциональное" антитело представляет собой гибридное антитело,имеющее две пары тяжелой/легкой цепей и два различных сайта связывания. Биспецифичные антитела могут быть получены с помощью ряда способов, включая, но не ограничиваясь ими, слияние гибридом или сшивку Fab'-фрагментов; см., например, SongsivilaiLachmann (1990), Clin. Exp. Immunol. 79: 315321; Kostelny et al., J. Immunol. 148: 1547-1553. При оценке связывания антитела и специфичности по изобретению антитело "по существу, ингибирует" адгезию лиганда к рецептору тогда, когда избыток антитела уменьшает количество рецептора, связанного с контррецептором по меньшей мере на 20, 40, 60, 80, 85% или более (как измерено в конкурентном анализе связывания in vitro). Термин "агент" означает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, полученные из биологических материалов. Термин "метка" или "меченый" относится к включению обнаруживаемого маркера, например, путем включения аминокислоты с радиоактивной меткой или присоединения к полипептиду биотиновых группировок, которые можно обнаружить с помощью меченого авидина (например, стрептавидина,предпочтительно содержащего обнаружимый маркер, такой как флуоресцентный маркер, хемилюминесцентный маркер или ферментативную активность, которую можно обнаружить оптическими или колориметрическими способами). В некоторых воплощениях эта метка может быть, также, терапевтической. Различные способы мечения полипептидов и гликопротеинов известны в данной области техники и могут успешно использоваться в способах, раскрытых здесь. Примеры меток для полипептидов включают,но не ограничены ими, приведенные ниже: радиоактивные изотопы и радионуклиды (например, 3 Н, 14C,15N, 35S, 90Y, 99mTc, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные метки (например, флуоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ),родамин или фосфоры лантаноидов), ферментативные метки (например, пероксидазу хрена, галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные метки, гаптеновые метки, такие как биотинильные группы, и предопределенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, последовательности пар лейциновых молний, сайты связывания для вторичных антител, домены связывания металла, эпитопные метки). В некоторых воплощениях метки присоединены с помощью спейсерных плеч (таких как (СН 2)n где n20) различной длины для уменьшения потенциальных стерических препятствий. Термин "биологический образец" включает, но не ограничен этим, любое количество вещества из живого организма или прежде жившего организма. Такие живые организмы включают, но не ограничены ими, людей, мышей, обезьян, крыс, кроликов и других животных. Такие вещества включают, но не ограничены ими, кровь, сыворотку, мочу, клетки, органы, ткани, кости, костный мозг, лимфу, лимфатические узлы, синовиальную жидкость, хондроциты, синовиальные макрофаги, эндотелиальные клетки, сосудистую ткань (в частности, воспаленную сосудистую ткань) и кожу. Термины "фармацевтический агент" и"лекарство" относятся к химическому соединению или композиции, которые способны вызвать желаемый терапевтический эффект при правильном введении пациенту. Термин "пациент" включает субъектов-людей и животных. Если в контексте не требуется иное, термины в единственном числе включают множественные числа, а термины во множественном числе включают единственное. Аминокислоты. Двадцать встречающихся в природе аминокислот и их сокращения соответствуют общепринятому использованию; см. Immunology-A Synthesis, 2nd Edition (E.S. Golub and D.R. Gren, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, MA (1991), включенную сюда путем ссылки для любой цели. Стереоизомеры (например,D-аминокислоты) этих двадцати обычных аминокислот, неприродные аминокислоты, такие как -,двузамещенные аминокислоты, N-алкиламинокислоты и другие необычные аминокислоты могут также быть пригодными компонентами полипептидов по изобретению. Примеры необычных аминокислот включают: 4-гидроксипролин, -карбоксиглутамат, -N,N,N-триметиллизин, -N-ацетиллизин, о- 12018072 фосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин, -N-метиларгинин и другие подобные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В обозначении полипептидов, используемом здесь, левое направление является аминоконцевым направлением, а правое направление является карбоксиконцевым направлением, в соответствии со стандартным употреблением и соглашением. Подобным образом, если не указано иное, левый конец однонитевой полинуклеотидной последовательности является 5'-концом; левое направление двунитевых полинуклеотидных последовательностей является 5'-направлением. Направление наращивания транскриптов вновь образующейся РНК от 5'- к 3'концу называют направлением транскрипции; участки последовательности на нити ДНК, имеющей такую же последовательность, как РНК транскрипт, которые являются 5' по отношению к 5'-концу РНК транскрипта, называют "последовательностями в обратном направлении"; участки последовательности на нити ДНК, имеющей такую же последовательность, как РНК транскрипт, которые являются 3' по отношению к 3'-концу РНК транскрипта, называют "последовательностями в прямом направлении". Встречающиеся в природе аминокислотные остатки можно разделить на классы на основании общих свойств боковой цепи: 1) гидрофобные: норлейцин (Nor или Nle), Met, Ala, Val, Leu, Ile; 2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) кислотные: Asp, Glu; 4) основные: His, Lys, Arg; 5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro; и 6) ароматические: Trp, Tyr, Phe. Консервативные аминокислотные замены могут подразумевать замену члена одного из этих классов другим членом того же класса. Консервативные аминокислотные замены могут охватывать не встречающиеся в природе аминокислотные остатки, которые обычно включаются посредством химического синтеза пептидов, а не при синтезе в биологических системах. Они включают пептидомиметики и другие обращенные или инвертированные формы аминокислотных группировок. Неконсервативные замены могут включать замену члена одного из этих классов членом другого класса. Такие замененные остатки могут быть введены, например, в участки человеческого антитела,которые гомологичны антителам, не являющимся человеческими, либо в негомологичные участки этой молекулы. При создании таких замен согласно некоторым воплощениям можно учитывать гидропатический индекс аминокислот. Каждой аминокислоте присваивают гидропатический индекс на основании ее гидрофобности и характеристик заряда. Они представляют собой изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин(-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамин (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин (-3,9) и аргинин (-4,5). В данной области понятна важность гидропатического индекса аминокислоты при придании интерактивной биологической функции белку (см., например, Kyte et al., 1982, J. Mol. Biol. 157: 105-131). Известно, что некоторые аминокислоты могут быть заменены другими аминокислотами, имеющими подобный гидропатический индекс или показатель, и все же сохраняют подобную биологическую активность. При создании замен, основанных на гидропатическом индексе, в некоторые воплощения включена замена аминокислот, гидропатические индексы которых находятся в пределах 2. В некоторые воплощения включены те, которые находятся в пределах 1, а в некоторые воплощения те, которые находятся в пределах 0,5. В данной области также понятно, что замена подобных аминокислот может быть эффективно осуществлена на основании гидрофильности, в частности, когда биологически функциональный белок или пептид, созданный посредством этого, предназначен для применения в иммунологических воплощениях,как раскрыто здесь. В некоторых воплощениях локальная наибольшая средняя гидрофильность белка,управляемая гидрофильностью его соседних аминокислот, коррелирует с его иммуногенностью и антигенностью, то есть с биологическим свойством этого белка. Этим аминокислотным остаткам присвоены приведенные ниже значения гидрофильности: аргинин(+3,0); лизин (+3,0); аспартат (+3,01); глутамат (+3,01); серин (+0,3); аспарагин (+0,2); глутамин (+0,2); глицин (0); треонин (-0,4); пролин (-0,5 1); аланин (-0,5); гистидин (-0,5); цистеин (-1,0); метионин (-1,3); валин (-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5) и триптофан (-3,4). При создании замен на основании подобных значений гидрофильности в некоторые воплощения включена замена аминокислот, значения гидрофильности которых находятся в пределах 2, в некоторые воплощения включены те, которые находятся в пределах 1, а в некоторые воплощения те, которые находятся в пределах 0,5. Можно также идентифицировать эпитопы из первичной аминокислотной последовательности на основании гидрофильности. Эти участки также называют "кор-участками эпитопов". Примеры замен аминокислот представлены в табл. 1. Таблица 1 Аминокислотные замены Специалист в данной области сможет определить подходящие варианты полипептидов, как изложено ниже, используя хорошо известные методики. В некоторых воплощениях специалист в данной области может идентифицировать подходящие области молекулы, которые могут быть заменены без разрушения активности, путем выбора участков, которые не считаются важными для активности. В других воплощениях специалист в данной области может идентифицировать остатки и участки молекул, которые являются консервативными для подобных полипептидов. В следующих воплощениях, даже области,которые могут быть важны для биологической активности или для структуры, могут быть подвергнуты консервативным аминокислотным заменам без разрушения биологической активности или без вредного воздействия на структуру полипептида. Кроме того, специалист в данной области может сделать обзор структурно-функциональных исследований, идентифицирующих остатки в подобных полипептидах, которые важны для активности или структуры. С точки зрения такого сравнения специалист в данной области может предсказать важность аминокислотных остатков в белке, которые соответствуют аминокислотным остаткам, важным для активности или структуры в подобных белках. Специалист в данной области может подобрать химически подобные аминокислотные замены для таких предсказанных важных аминокислотных остатков. Специалист в данной области может также анализировать трехмерную структуру и аминокислотную последовательность в отношении этой структуры в подобных полипептидах. С точки зрения такой информации специалист в данной области техники может предсказать выравнивание аминокислотных остатков антитела по отношению к его трехмерной структуре. В некоторых воплощениях специалист в данной области может сделать выбор не осуществлять радикальных замен аминокислотных остатков,предположительно находящихся на поверхности белка, поскольку такие остатки могут быть вовлечены в важные взаимодействия с другими молекулами. Кроме того, специалист в данной области может создать контрольные варианты, содержащие единственную аминокислотную замену по каждому желаемому аминокислотному остатку. Затем эти варианты можно подвергнуть скринингу с использованием анализов активности, известных специалистам в данной области. Такие варианты могут быть использованы для сбора информации о подходящих вариантах. Например, если обнаружено, что изменение конкретного аминокислотного остатка привело в результате к разрушенной, нежелательно сниженной или непригодной активности, вариантов с таким изменением следует избегать. Иными словами, на основании информации, собранной из таких рутинных экспериментов, специалист в данной области может легко об- 14018072 наружить аминокислоты, где дополнительных изменений следует избегать и как таковых, и в комбинации с другими мутациями. Ряд конкретных публикаций посвящен предсказанию вторичной структуры; см. Moult, 1996, Curr.Biochem. 47: 251-276 и Chou et al., 1979, Biophys. J. 26: 367-384. Кроме того, в настоящее время доступны компьютерные программы для помощи в предсказании вторичной структуры. Один из способов предсказания вторичной структуры основан на моделировании гомологии. Например, два полипептида или белка, которые имеют идентичность последовательности более чем 30% или подобие более чем 40%, часто обладают подобными структурными топологиями. В последнее время рост структурной белковой базы данных (PDB, protein database) обеспечил повышенную предсказуемость вторичной структуры, включая потенциальное число складок в структуре полипептида или белка; см. Holm et al., 1999, Nucl. Acid Res. 27: 244-247. Высказано предположение (Brenner et al., 1997, Curr. Op. Struct. Biol 7: 369-376), что в заданном полипептиде или белке существует ограниченное число складок и что, как только критическое число структур установлено, предсказание структуры станет значительно более точным. Дополнительные способы предсказания вторичной структуры включают "нанизывание" (Jones et al.,1997, Curr. Op. Struct. Biol. 7: 377-87; Sippl. et al., 1996, Structure 4: 15-19), "профильный анализ" (Bowie etNatl. Acad. Set 84: 4355-4358) и "эволюционную связь" (см. Holm, 1999, выше, и Brenner, 1997, выше). В некоторых воплощениях варианты антител включают варианты гликозилирования, где число и/или тип сайтов гликозилирования изменены по сравнению с аминокислотными последовательностями исходного полипептида. В некоторых воплощениях варианты белка содержат больше или меньше сайтовN-гликозилирования, чем нативный белок. N-связанный сайт гликозилирования характеризуется последовательностью: Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где аминокислотный остаток, обозначенный X, может представлять собой любой аминокислотный остаток, кроме пролина. Замена аминокислотных остатков для создания этой последовательности обеспечивает потенциально новый сайт для добавления N-связанной углеводной цепи. Альтернативно, замены, которые элиминируют эту последовательность, будут удалять существующую N-связанную углеводную цепь. Предложена также перестройка N-связанных углеводных цепей, где один или более чем один N-связанный сайт гликозилирования (обычно те, которые встречаются в природе) элиминируется, а один или более чем один новый N-связанный сайт образуется. Предпочтительные дополнительные варианты антитела включают цистеиновые варианты, где один или более чем один цистеиновый остаток удален или заменен другой аминокислотой (например, серином) по сравнению с исходной аминокислотной последовательностью. Цистеиновые варианты могут быть полезны,когда антитела должны быть заново уложены в биологически активную конформацию, как, например,после отделения нерастворимых телец включения. Цистеиновые варианты, как правило, имеют меньше цистеиновых остатков, чем нативный белок, и обычно имеют равное число остатков, чтобы минимизировать взаимодействия в результате неспаренных цистеинов. Согласно некоторым воплощениям аминокислотными заменами являются те, которые: (1) снижают чувствительность к протеолизу, (2) снижают чувствительность к окислению, (3) изменяют связывающую аффинность к образованию белковых комплексов, (4) изменяют аффинность связывания и/или (5) придают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства таких полипептидов. Согласно некоторым воплощениям единственные или множественные аминокислотные замены (в некоторых воплощениях консервативные аминокислотные замены) могут быть сделаны в последовательности, встречающейся в природе (в некоторых воплощениях - в участке полипептида вне домена(ов), образующего(их) межмолекулярные контакты). В предпочтительных воплощениях консервативная аминокислотная замена обычно не изменяет, по существу, структурные характеристики исходной последовательности (например, замененная аминокислота не склонна разрушать спираль, которая встречается в исходной последовательности, или разрушать другие типы вторичной структуры, характеризующей исходную последовательность). Примеры вторичных и третичных структур полипептидов, известных в данной области, описаны в Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, ed.), 1984, W.H. Freeman and Company, New York; Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds.), 1991, GarlandPublishing, New York, N.Y. и Thornton et al. (1991), Nature 354: 105, причем каждая из публикаций включена сюда путем ссылки. Получение антител. Структурные единицы, представляющие собой встречающиеся в природе антитела, обычно являются тетрамерами. Каждый такой тетрамер обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей,причем каждая пара имеет одну полноразмерную "легкую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу примерно 25 кДа) и одну полноразмерную "тяжелую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу примерно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи обычно содержит вариабельный участок из примерно от 100 до 110 или более аминокислот, который обычно ответственен за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи обычно определяет константный участок, ответственный за эффекторную функцию. Человеческие легкие цепи обычно классифицируются как каппа- и лямбда- 15018072 легкие цепи. Тяжелые цепи обычно классифицируются как мю-, дельта-, гамма-, альфа- или эпсилон- и определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. IgG имеет несколько подклассов, включая, но не ограничиваясь ими, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. IgM имеет подклассы, включая, но не ограничиваясь ими, IgM1 и IgM2. IgA, подобным же образом, подразделен на подклассы, включающие,но неограниченные ими, IgA1 и IgA2. В пределах полноразмерных легких и тяжелых цепей участок "J" примерно из 12 или более аминокислот обычно соединяет вариабельный участок и константные участки,причем тяжелая цепь также включает "D" участок из примерно 10 или более аминокислот; см., например,Fundamental Immunology, Ch. 7, 2nd ed. (Paul, W., ed.), 1989, Raven Press, N.Y. (включена путем ссылки в полном объеме для всех целей). Комбинация вариабельных участков каждой пары легкая цепь/тяжелая цепь обычно образует антигенсвязывающий сайт. Вариабельные районы каждой из тяжелых цепей и легких цепей обычно имеют общую структуру,состоящую из относительно консервативных каркасных участков (FR, framework regions), соединенных тремя гипервариабельными участками, также называемыми "участками, определяющими комплементарность", или CDR (complementarity determining regions). CDR из двух цепей каждой пары обычно выравнены по каркасным участкам, причем это выравнивание может обеспечить связывание со специфичным эпитопом. От N-конца к С-концу вариабельные участки как легкой, так и тяжелой цепи обычно содержат домены FR1, CDR1, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Распределение аминокислот в каждом домене обычно соответствует тому, как определено в Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 и 1991,National Institutes of Health, Bethesda, Md.), ChothiaLesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917, или Chothia etal., 1989, Nature 342: 878-883). Антитела стали применимыми и начали представлять интерес в качестве фармацевтических агентов со времени разработки моноклональных антител. Моноклональные антитела получают, используя любой способ, с помощью которого производят молекулы антител непрерывными клеточными линиями в культуре. Примеры подходящих способов получения моноклональных антител включают метод гибридомKohler et al. (1975, Nature 256: 495-497) и метод гибридом человеческих В-клеток (Kozbor, 1984, J. Immunol. 133: 3001 и Brodeur et al., 1987, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications (MarcelDekker, Inc., New York), p. 51-63). Моноклональные антитела могут быть модифицированы для применения в качестве терапевтических агентов. Одним из примеров является "химерное" антитело, в котором часть тяжелой цепи и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности в антителах, имеющих происхождение от конкретного вида или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, а остальная часть цепи(ей) идентична(ы) или гомологична(ы) соответствующей последовательности антител, имеющих происхождение от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител. Другими примерами являются фрагменты таких антител, в той степени, в какой они проявляют желаемую биологическую активность; см. патент США 4816567 и Morrison et al. (1985), Proc. Natl.Acad. Sci. USA 81: 6851-6855. Подобной разработкой является "CDR-трансплантированное" антитело,которое содержит один или более чем один участок, определяющий комплементарность (CDR) из конкретного вида или принадлежащий к конкретному классу или подклассу антител, тогда как остальная цепь(и) антитела идентична(ы) или гомологична(ы) соответствующей последовательности в антителах,имеющих происхождение из другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител. Другой разработкой является "гуманизированное" антитело. Способы "гуманизации" антител, не являющихся человеческими, хорошо известны в данной области (см. патенты США 5585089 и 5693762). Как правило, гуманизированное антитело продуцируется животным, не представляющим собой человека, и некоторые аминокислотные остатки, обычно не из антигенраспознающих участков, этого антитела модифицируют таким образом, чтобы они были гомологичны указанным остаткам в человеческом антителе соответствующего изотипа. Гуманизацию можно осуществить, например, способами, описанными в уровне техники (Jones et al., 1986, Nature 321: 522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323327; Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534-1536), путем замещения по меньшей мере части вариабельного участка грызунов соответствующими участками человеческого антитела. Более поздней и многообещающей является разработка человеческих антител без подвергания людей воздействию антигена ("полностью человеческие антитела"). Используя трансгенных животных (например, мышей), которые способны продуцировать репертуар человеческих антител в отсутствие продуцирования эндогенного мышиного иммуноглобулина, получают такие антитела путем иммунизации антигеном (обычно имеющим по меньшей мере 6 непрерывно рядом расположенных аминокислот), возможно, конъюгированным с носителем; см., например, Jakobovits et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-2555; Jakobovits et al., 1993, Nature 362: 255-258 и Braggermann et al., 1993, Year in Immunol. 7: 33. В одном примере этих способов трансгенных животных получают путем выведения из строя локусов эндогенного мышиного иммуноглобулина, кодирующих у них тяжелую и легкую цепи мышиного иммуноглобулина, и вставки в их геном локусов, кодирующих человеческие белки тяжелой и легкой цепи. Затем частично модифицированных животных, имеющих неполный комплемент модификаций, скрещивают для получения животного, имеющего все желаемые модификации иммунной системы. При введении иммуногена эти трансгенные животные продуцируют антитела, которые являются иммуноспеци- 16018072 фичными к этим антигенам, имеющие человеческие (а не мышиные) аминокислотные последовательности, включая вариабельные участки; см. публикации WO 96/33735 и WO 94/02602, включенные путем ссылки. Другие способы описаны в патенте США 5545807, WO 91/10741, WO 90/04036, ЕР 546073 В 1 и ЕР 546073 А 1, включенных сюда путем ссыпки. Человеческие антитела можно также получить путем экспрессии рекомбинантной ДНК в клетках-хозяевах или путем экспрессии в клетках гибридомы, как описано здесь. Полностью человеческие антитела могут быть также получены с помощью фагово-дисплейных библиотек (как описано в Hoogenboom et al., 1991, J. Mol. Biol. 227: 381; и Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581). Эти способы имитируют иммунный отбор посредством проявления репертуара антител на поверхности нитевидного бактериофага и последующего отбора фагов по их связыванию с выбранным антигеном. Одна из таких методик описана в WO 99/10494, включенной сюда путем ссылки, в которой описано выделение высокоаффинных и функциональных антител, агонистических для MPL- и mskрецепторов, с использованием такого подхода. Как только определены нуклеотидные последовательности, кодирующие такие антитела, химерные,CDR-трансплантированные, гуманизированные и полностью человеческие антитела также могут быть получены рекомбинантными способами. Нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела, вводят в клеткихозяева и осуществляют их экспрессию, используя материалы и методики, хорошо известные в данной области. В изобретении предложено одно или множество полностью человеческих моноклональных антител против человеческого IL-1R1. Предпочтительно эти антитела связывают третий домен IL-1R1. В предпочтительных воплощениях в изобретении предложены нуклеотидные последовательности, кодирующие и аминокислотные последовательности, содержащие молекулы тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина, в частности последовательности, соответствующие их вариабельным участкам. В предпочтительных воплощениях предложены последовательности, соответствующие участкам, определяющим комплементарность (CDR), предпочтительно от CDR1 до CDR3 включительно. В других предпочтительных воплощениях в изобретении предложены клеточные линии гибридомы, экспрессирующие такие молекулы иммуноглобулина, и моноклональные антитела, продуцируемые ими, наиболее предпочтительно очищенные человеческие моноклональные антитела против человеческого IL-1R1. Возможность клонировать и осуществлять реконструкцию человеческих локусов размером несколько мегабаз в дрожжевых искусственных хромосомах (YAC) и вводить их в зародыши мышей обеспечивает прогрессивный подход к выявлению функциональных компонентов очень больших или неточно картированных локусов, а также к созданию полезных моделей заболевания человека. Кроме того,использование такой технологии для замещения мышиных локусов их человеческими эквивалентами позволяет уникальным образом изучить экспрессию и регуляцию продуктов человеческих генов в процессе развития, их взаимосвязь с другими системами и их вовлечение в индукцию и прогрессирование заболевания. Важным практическим применением такой стратегии является "гуманизация" мышиной системы гуморального иммунитета. Введение локусов человеческого иммуноглобулина (Ig) в мышей, у которых эндогенные гены Ig инактивированы, дает возможность исследовать механизмы, лежащие в основе запрограммированной экспрессии и сборки антител, а также их роли в развитии В-клеток. Кроме того, такая стратегия обеспечивает источник получения полностью человеческих моноклональных антител(MAb), в частности, для применения в качестве терапевтических агентов. Полностью человеческие антитела экспрессируются таким образом, чтобы минимизировать иммуногенные и аллергические ответы,свойственные мыши или Mab мышиного происхождения, и посредством этого повысить эффективность и безопасность вводимых антител при терапевтических применениях. Полностью человеческие антитела можно применять при лечении хронических и рекуррентных заболеваний человека, таких как остеоартрит, ревматоидный артрит и другие воспалительные состояния, лечение которых требует повторного введения антител. Специалист в данной области техники может сконструировать линии мышей, дефектных по продуцированию мышиных антител, с большими фрагментами человеческих локусов Ig, так что такие мыши продуцируют человеческие антитела в отсутствие мышиных антител. Большие фрагменты человеческогоIg могут сохранять большое разнообразие вариабельных генов, а также правильную регуляцию продуцирования и экспрессии антител. Использование мышиного механизма многообразия и отбора антител и отсутствие иммунологической толерантности к человеческим белкам дают воспроизведенный репертуар человеческих антител в этих линиях мышей, содержащий высокоаффинные антитела против любого представляющего интерес антигена, включая человеческие антигены. Используя гибридомную технологию, можно получить и отобрать специфичные к антигену человеческие MAb с желаемой специфичностью. В некоторых воплощениях специалист в данной области может использовать в таких мышах константные участки из видов, иных, чем человек, вместе с вариабельными человеческими участками с образованием химерных антител. Антитела по изобретению можно продуцировать путем иммунизации таких животных полноразмерным IL-1R1, растворимыми формами IL-1R1 или их фрагментом; см., на- 17018072CDR-районы вариабельных участков легкой и тяжелой цепи анти-IL-1R1 антитела по изобретению можно трансплантировать в каркасные участки (FR) из того же или из другого вида. В некоторых воплощениях CDR-районы вариабельных участков легкой и тяжелой цепи анти-IL-1R1 антитела можно трансплантировать в консенсусные человеческие FR-участки. Для создания консенсусных человеческихFR-участков FR-участки аминокислотных последовательностей нескольких человеческих тяжелых цепей или легких цепей выравнивают, чтобы идентифицировать консенсусную аминокислотную последовательность. FR из тяжелой цепи или легкой цепи анти-IL-1R1 антитела могут быть заменены FR из другой тяжелой цепи или легкой цепи. Редкие аминокислоты в FR тяжелых и легких цепей анти-IL-1R1 антитела обычно не заменяют, тогда как остальные аминокислоты FR могут быть заменены. Редкими аминокислотами являются определенные аминокислоты, которые находятся в положениях, в которых они обычно не обнаруживаются в FR. Трансплантированные вариабельные участки из анти-IL-1R1 антител по изобретению можно использовать с константным участком, который отличается от константного участка анти-IL-1R1 антитела. Или же, трансплантированные вариабельные участки являются частью одноцепочечного антитела Fv. CDR-трансплантация описана, например, в патентах США 6180370,5693762, 5693761, 5585089 и 5530101, которые включены сюда путем ссылки для любой цели. В некоторых воплощениях в изобретении предложены анти-IL1-R1 антитела, которые содержат участок CDR1 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 63; участок CDR2 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66; и/или участок CDR3 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 или SEQ ID NO: 69. В других воплощениях в изобретении предложены антитела анти-IL1-R1, которые содержат участок CDR1 человеческой легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71; участок CDR2 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72 или SEQ ID NO: 73; и/или участок CDR3 человеческой тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 75. Антитела по изобретению предпочтительно получают, используя трансгенных мышей, которые имеют существенный участок человеческого локуса, продуцирующего антитела, встроенный в клетки мышей, продуцирующие антитела, и у которых далее генно-инженерным путем создают дефект по продуцированию эндогенных мышиных антител. Такие мыши способны продуцировать молекулы человеческого иммуноглобулина и антитела и не способны либо способны продуцировать значительно сниженные количества молекул мышиного иммуноглобулина и антител. Технологии, используемые для достижения этого результата, раскрыты в патентах, заявках и ссылках, раскрытых здесь в описании. В предпочтительных воплощениях квалифицированный специалист может использовать способы, как раскрыто в публикации Международной патентной заявкиWO 98/24893, которая включена сюда путем ссылки для любой цели; см. также статью Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15: 146-156, которая включена сюда путем ссылки для любой цели. Моноклональные антитела (MAb) по изобретению можно получить с помощью разнообразных методик, включая общепринятую методологию моноклональных антител, например стандартную гибридизацию соматических клеток Kohler and Milstein, 1975, Nature 256: 495. Хотя методики гибридизации соматических клеток являются предпочтительными, в принципе для получения моноклональных антител можно использовать другие методики, например вирусную или онкогенную трансформацию Влимфоцитов. В предпочтительном воплощении человеческие моноклональные антитела, направленные противIL-1R1, можно создать, используя мышей, называемых "HuMab" мышами, содержащих минилокус человеческого гена иммуноглобулина, который кодирует не перестроенные человеческие последовательности тяжелой ( и ) и легкой -цепи иммуноглобулина, вместе с направленными мутациями, которые инактивируют локусы - и -цепи (Lonberg et al., 1994, Nature 368: 856-859). Соответственно эти мыши проявляют пониженную экспрессию мышиного IgM илив ответ на иммунизацию, встроенные трансгены человеческих тяжелой и легкой цепей претерпевают переключение класса и соматическую мутацию с образованием человеческих моноклональных антителIgG высокой аффинности (Lonberg et al., см. выше; Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N. Y. Acad.Sci. 764: 536-546). Получение HuMab мышей подробно описано в Taylor et al., 1992, Nucleic Acids Res. 20: 6287-6295; Chen et al., 1993, International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al., 1994, J. Immunol. 152: 2912-2920; Lonberg et al., 1994, Nature 368: 856-859; Lonberg, 1994, Handbook of Exp. Pharmacology 113: 49-101; Taylor et al., 1994, International Immunology 6: 579-591; LonbergHuszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; HardingLonberg, 1995, Ann. N. Y. Acad. Sci. 764: 536-546; Fishwild et al., 1996, NatureBiotechnology 14: 845-851, причем содержания всех этих публикаций включены сюда путем ссылки в полном объеме; см. дополнительно патенты США 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5814318; 5874299 и 5770429; авторы всех патентов Lonberg and Kay, a также патент США 5545807, авторы Surani et al., публикации Международной патентной заявкиWO 93/1227, опубликована 24 июня 1993; WO 92/22646, опубликована 23 декабря 1992, и WO 92/03918,опубликована 19 марта 1992, причем описания всех этих публикаций включены сюда путем ссылки в полном объеме. Альтернативно, для создания человеческих анти-IL-1R1 антител можно использовать трансгенные линии мышей НСо 7 и НСо 12, описанные в приведенных ниже примерах. Предпочтительно полностью человеческие моноклональные антитела, специфичные к IL-1R1, получают, как описано ниже. Трансгенных мышей, содержащих человеческие гены иммуноглобулинов,иммунизируют представляющим интерес антигеном, родственным IL-1R1. Лимфатические клетки (такие как В-клетки) получают из мышей, которые экспрессируют антитела. Такие выделенные клетки сливают с клеточной линией миелоидного типа с получением бессмертных клеточных линий гибридомы, и эти клеточные линии гибридомы подвергают скринингу и отбору по идентификации клеточных линий гибридомы, которые продуцируют антитела, специфичные к представляющему интерес антигену. В некоторых воплощениях предложено получение клеточной линии гибридомы, которая продуцирует антитела кIL-1R1. В предпочтительных воплощениях антитела по изобретению продуцируют с помощью линий гибридомы. В этих воплощениях антитела по изобретению связываются с IL-1R1 с константой диссоциации(Kd) между примерно 4 и 100 пМ. В некоторых воплощениях изобретения антитела связываются с IL-1R1 с Kd менее чем примерно 20 пМ. В других воплощениях антитела по изобретению связываются с третьим доменом IL-1R1. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности третьего домена человеческого и крысиного IL1-R1 показаны на фиг. 17. В предпочтительных воплощениях антитела по изобретению представляют собой антитела изотипаIgG1, IgG2 или IgG4, причем предпочтителен изотип IgG2. В предпочтительных воплощениях изобретения антитела содержат человеческую легкую каппа-цепь и человеческую тяжелую цепь IgG1, IgG2 илиIgG4. В конкретных воплощениях вариабельные участки антител лигированы с константным участком,иным, чем константный участок для изотипа IgG1, IgG2 или IgG4. В некоторых воплощениях антитела по изобретению клонированы для экспрессии в клетках млекопитающих. В некоторых воплощениях консервативные аминокислотные замены в тяжелой и легкой цепях анти-IL-1R1 антитела (и соответствующие модификации кодирующих нуклеотидов) будут давать анти-IL1R1 антитела, имеющие функциональные и химические характеристики, подобные таковым антитела IL1R1. Напротив, могут быть получены существенные изменения функциональных или химических характеристик анти-IL-1R1 антитела, если выбираются замены в аминокислотной последовательности тяжелых и легких цепей, которые существенно отличаются по влиянию на сохранение: (а) структуры молекулярного каркаса в области замены, например, в виде листовой или спиральной конформации, (б) заряда или гидрофобности молекулы в сайте-мишени или (в) общего объема боковых цепей. Например, "консервативная аминокислотная замена" может включать замену нативного аминокислотного остатка ненативным остатком, так что воздействие на полярность или заряд аминокислотного остатка в данном положении мало или отсутствует. Кроме того, любой нативный остаток в полипептиде может быть заменен аланином, как описано ранее для "аланинового сканирующего мутагенеза" (Wells,1991, Methods Enzymol. 202: 390 (ed. J.J. Langone), Academic Press, London). Желаемые аминокислотные замены (либо консервативные, либо неконсервативные) могут быть определены специалистами в данной области в тот момент, когда такие замены желательны. В некоторых воплощениях аминокислотные замены могут быть использованы для идентификации важных остатков анти-IL-1R1 антитела либо для повышения или снижения аффинности анти-IL-1R1 антител, описанных здесь. В альтернативных воплощениях антитела по изобретению можно экспрессировать в клеточных линиях, иных, чем клеточные линии гибридомы. В этих воплощениях последовательности, кодирующие конкретные антитела, можно использовать для трансформации подходящей клетки-хозяина млекопитающих. Согласно этим воплощениям трансформация может быть достигнута с использованием любого известного способа введения полинуклеотидов в клетку-хозяина, включая, например, упаковку этого полинуклеотида в вирусе (или в вирусном векторе) и трансдукцию клетки-хозяина этим вирусом (вектором), либо методики трансфекции, известные в данной области. Примеры таких методик приведены в патентах США 4399216, 4912040, 4740461 и 4959455 (все они включены сюда путем ссылки для любой цели). Как правило, используемая методика трансформации может зависеть от клетки-хозяина,подлежащей трансформации. Способы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области и включают, но не ограничены ими, опосредованную декстраном трансфекцию, кальцийфосфатную преципитацию, опосредованную полибреном трансфекцию,слияние протопластов, электропорацию, инкапсуляцию полинуклеотида(ов) в липосомы и прямую микроинъекцию ДНК в ядра. Согласно некоторым воплощениям способов по изобретению молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность константного участка тяжелой цепи, вариабельного участка тяжелой цепи, константного участка легкой цепи или вариабельного участка легкой цепи IL-1R1 антитела по изобретению, встраивают в соответствующий экспрессионный вектор, используя стандарт- 19018072 ные методики лигирования. В предпочтительно воплощении константный участок тяжелой или легкой цепи IL-1R1 присоединен к С-концу соответствующего вариабельного участка и лигирован в экспрессионном векторе. Этот вектор обычно отбирают таким образом, чтобы он был функциональным в конкретной используемой клетке-хозяине (то есть вектор, совместимый с аппаратом клетки-хозяина, так чтобы могли происходить амплификация гена и/или экспрессия гена). Обзор экспрессионных векторов см. вGoeddel (ed.), 1990, Meth Enzymol., vol. 185, Academic Press, N.Y. Обычно экспрессионные векторы, используемые в любой из клеток-хозяев, будут содержать последовательности для поддержания плазмиды, а также для клонирования и экспрессии нуклеотидных экзогенных последовательностей. Такие последовательности, называемые все вместе "фланкирующие последовательности", в некоторых воплощениях будут обычно включать одну или более чем одну из приведенных ниже нуклеотидных последовательностей: промотор, одну или более чем одну энхансерную последовательность, точку начала репликации, последовательность терминации транскрипции, полную интронную последовательность, содержащую донорный и акцепторный сайт сплайсинга, последовательность, кодирующую лидерную последовательность для секреции полипептида, сайт связывания рибосомы, последовательность полиаденилирования, полилинкерный участок для встраивания нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, подлежащий экспрессии, и селективный маркерный элемент. Каждая из этих последовательностей обсуждается ниже. Вектор необязательно может содержать последовательность, кодирующую метку (tag), то есть олигонуклеотидную молекулу, локализованную на 5'- или 3'-конце последовательности, кодирующей полипептид IL-1R1; причем указанная олигонуклеотидная последовательность кодирует поли-His (такой как гекса-His), или другую метку, такую как FLAG, НА (гемагглютинин вируса гриппа) или myc, для которых имеются в продаже антитела. Эта метка обычно сливается с полипептидом при экспрессии этого полипептида и может служить в качестве средства для аффинной очистки или обнаружения антитела IL1R1 из клетки-хозяина. Аффинную очистку можно осуществить, например, путем колоночной хроматографии, используя антитела против метки в качестве матрицы аффинности. Оптимально эту метку можно после этого удалить из очищенного полипептида IL-1R1 различными способами, такими как использование некоторых пептидаз для расщепления. Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (то есть из того же вида и/или линии, что и клетка-хозяин), гетерологичными (то есть из вида, иного, чем вид или линия клетки-хозяина),гибридными (то есть комбинация фланкирующих последовательностей более чем из одного источника),синтетическими или нативными. Как таковым источником фланкирующей последовательности может быть любой прокариотический или эукариотический организм, любой позвоночный или беспозвоночный организм или любое растение при условии, что эта фланкирующая последовательность является функциональной в аппарате клетки-хозяина и может быть активирована этим аппаратом. Фланкирующие последовательности, пригодные в векторах по данному изобретению, могут быть получены любыми из нескольких способов, хорошо известных в данной области. Обычно пригодные здесь фланкирующие последовательности будут предварительно идентифицированы путем картирования и/или ферментативного гидролиза эндонуклеазами рестрикции и могут быть, таким образом, выделены из соответствующего тканевого источника с использованием подходящих эндонуклеаз рестрикции. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность фланкирующей последовательности. Здесь фланкирующую последовательность можно синтезировать, используя описанные здесь способы, для синтеза или клонирования нуклеиновых кислот. Когда известна вся фланкирующая последовательность или только ее часть, их можно получить,используя полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и/или путем скрининга геномной библиотеки подходящим зондом, таким как олигонуклеотид и/или фрагмент фланкирующей последовательности из того же или из другого вида. Когда фланкирующая последовательность неизвестна, фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, можно выделить из большого участка ДНК, который может содержать, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или другие гены. Выделение можно осуществить с помощью ферментативного гидролиза эндонуклеазами рестрикции с получением правильного фрагмента ДНК с последующим выделением с использованием очистки из агарозного геля, колоночной хроматографии Quagen (Chatsworth, CA) или другими способами, известными специалисту в данной области. Выбор подходящих ферментов для осуществления данной цели будет очевиден обычному специалисту в данной области. Точка начала репликации обычно представляет собой часть прокариотических экспрессионных векторов, имеющихся в продаже, и эта точка начала репликации способствует амплификации вектора в клетке-хозяине. Если выбранный вектор не содержит точку начала сайта репликации, ее можно синтезировать химическим путем на основе известной последовательности и лигировать в вектор. Например,точка начала репликации из плазмиды pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA) пригодна для большинства грамотрицательных бактерий, а различные точки начала репликации вирусного происхождения(например, от SV40, полиомы, аденовируса, вируса везикулярного стоматита (VSV) или папилломавирусов, таких как HPV или BPV) полезны для клонирования векторов в клетках млекопитающих. Как правило, компонент, представляющий собой точку начала репликации, не является необходимым для экс- 20018072 прессионных векторов млекопитающих (например, точку начала репликации SV40 часто используют только в связи с тем, что она также содержит ранний вирусный промотор). Последовательность терминации транскрипции обычно локализована 3' от конца участка, кодирующего полипептид, и служит для терминации транскрипции. Обычно последовательность терминации транскрипции в прокариотических клетках представляет собой G-C богатый фрагмент, за которым следует поли-Т последовательность. Хотя эту последовательность обычно клонируют из библиотеки или даже покупают в виде части вектора, ее также можно легко синтезировать, используя способы синтеза нуклеиновых кислот, такие как описано здесь. Селективный маркерный ген кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки-хозяина,выращиваемой на селективной культуральной среде. Типичные селективные маркерные гены кодируют белки, которые: (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например к ампициллину, тетрациклину или канамицину, прокариотическим клеткам-хозяевам; (б) восполняют ауксотрофные дефициты клетки или (в) обеспечивают критические питательные вещества, недоступные из комплексной или определенной среды. Предпочтительными селективными маркерами являются ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Ген устойчивости к неомицину можно также использовать для отбора как прокариотических, так и эукариотических клеток-хозяев. Можно использовать другие селективные гены для амплификации гена, который нужно экспрессировать. Амплификация представляет собой процесс, где гены, которые более нужны для продуцирования белка, критичного для роста или выживания клетки, воспроизводятся снова и снова, обычно в тандеме, в хромосомах последующих поколений рекомбинантных клеток. Примеры подходящих селективных маркеров для клеток млекопитающих включают дигидрофолатредуктазу (DHFR) и беспромоторную тимидинкиназу. Трансформанты клеток млекопитающих помещают в условия селективного давления, при котором только трансформанты адаптируются к выживанию за счет селективного гена, присутствующего в векторе. Селективное давление прилагают путем культивирования трансформированных клеток в условиях, в которых концентрацию селективного агента в среде последовательно увеличивают, приводя посредством этого к амплификации как селективного гена, так и ДНК, которая кодирует другой ген, такой как полипептид IL-1R1, включенный в вектор. В результате с амплифицированной ДНК синтезируются повышенные количества полипептида, такого как полипептид IL-1R1. Сайт связывания рибосом обычно необходим для инициации трансляции мРНК и характеризуется последовательностью Шайна-Далгарно (прокариоты) или последовательностью Козака (эукариоты). Этот элемент обычно локализован 3' к промотору и 5' к кодирующей последовательности полипептида,подлежащего экспрессии. В некоторых случаях, например, когда желательно гликозилирование в системе эукариотической клетки-хозяина, можно манипулировать различными пре- и про-последовательностями для улучшения гликозилирования или выхода. Например, можно изменить сайт отщепления пептидазой конкретного сигнального пептида или добавить про-последовательности, которые также могут влиять на гликозилирование. Конечный белковый продукт будет иметь в положении -1 (относительно первой аминокислоты зрелого белка) одну или более чем одну дополнительную аминокислоту, свойственную экспрессии, которая может не быть полностью удалена. Например, конечный белковый продукт может иметь один или два аминокислотных остатка, обнаруживаемых в сайте отщепления пептидазой, присоединенном к аминоконцу. Альтернативно, использование некоторых сайтов ферментативного отщепления может привести в результате к несколько укороченной форме желаемого полипептида, если фермент расщепляет в такой области в зрелом полипептиде. Векторы экспрессии и клонирования по изобретению будут обычно содержать промотор, который распознается организмом-хозяином и функциональным образом связан с молекулой, кодирующей антиIL-1R1 антитело. Промоторы представляют собой нетранскрибируемые последовательности, локализованные вверх по течению (то есть 5') от стартового кодона структурного гена (как правило, в пределах примерно от 100 до 1000 п.о.), которые регулируют транскрипцию структурного гена. Промоторы традиционно группируют в один из двух классов: индуцибельные промоторы и конститутивные промоторы. Индуцибельные промоторы повышают уровни транскрипции с ДНК под их контролем в ответ на некоторое изменение условий культивирования, таких как присутствие или отсутствие питательного вещества или изменение температуры. Конститутивные же промоторы инициируют постоянное продуцирование генного продукта; то есть существует небольшой или не существует никакого контроля над экспрессией гена. Хорошо известен широкий ряд промоторов, распознаваемых разнообразными потенциальными клетками-хозяевами. Подходящий промотор функциональным образом связывают с ДНК, кодирующей тяжелую цепь или легкую цепь, составляющие антитело анти-IL-1R1 по изобретению, путем извлечения промотора из источника ДНК путем ферментативного гидролиза ферментами рестрикции и вставки желаемой промоторной последовательности в вектор. Подходящие промоторы для использования с дрожжевыми хозяевами также хорошо известны в данной области. Дрожжевые энхансеры успешно используют с дрожжевыми промоторами. Подходящие промоторы для использования с клетками-хозяевами млекопитающих хорошо известны и включают, но не ограничены ими, промоторы, полученные из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус fowlpox, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус бычьей папилломы, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита В и наиболее предпочтительно вирус обезьян 40 (SV40). Другие подходящие промоторы млекопитающих включают гетерологичные промоторы млекопитающих, например термошоковые промоторы и промотор актина. Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают, но не ограничены ими: участок раннего промотора SV40 (Bernoist and Chambon, 1981, Nature 290: 304-10); промотор CMV; промотор, содержащийся в 3' длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса (Yamamoto et al., 1980,Cell 22: 787-97); промотор тимидинкиназы герпеса (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1444-45); регуляторные последовательности гена металлотионеина (Brinster et al., 1982, Nature 296: 3942); прокариотические экспрессионные векторы, такие как промотор бета-лактамазы (Villa-Kamaroff etSci. USA 80: 21-25). Также представляют интерес следующие участки регуляции транскрипции животных, которые проявляют тканевую специфичность и были использованы в трансгенных животных: регуляторный участок гена эластазы I, который активен в ацинарных клетках поджелудочной железы (SwiftMacDonald, 1987, Hepatology 7: 425-515); регуляторный участок гена инсулина, который активен в бетаклетках поджелудочной железы (Hanaman, 1985, Nature 315: 115-22); регуляторный участок гена иммуноглобулина, который активен в лимфоидных клетках (Grosschedl et al., 1984, Cell 38: 647-58; Adames etal., 1985, Nature 318: 533-38; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-44); регуляторный участок вируса опухоли молочной железы мыши, который активен в семенниках, молочной железе, лимфоидных и тучных клетках (Leder et al., 1986, Cell 45: 485-95); регуляторный участок гена альбумина, который активен в печени (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel. 1: 268-76); регуляторный участок гена альфа-фетопротеина, который активен в печени (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol 5:1639-48; Hammer et al., 1987,Science 235: 53-58); регуляторный участок гена альфа-1-антитрипсина, который активен в печени (Kesleyet al., 1987, Genes and Devel. 1: 161-71); регуляторный участок гена бета-глобина, который активен в миелоидных клетках (Mogram et al., 1985, Nature 315: 338-40; Kollias et al., 1986, Cell 46: 89-94); регуляторный участок гена основного белка миелина, который активен в клетках-олигодендроцитах в головном мозге (Readhead et al., 1987, Cell 48: 703-12); регуляторный участок легкой цепи-2 миозина, который активен в скелетных мышцах (Sani, 1985, Nature 314: 283-86) и регуляторный участок гена гормона, высвобождающего гонадотропин, который активен в гипоталамусе (Mason et al., 1986, Science 234: 1372-78). Энхансерная последовательность может быть вставлена в вектор для усиления транскрипции ДНК,кодирующей легкую или тяжелую цепь, входящую в состав анти-IL-1R1 антитела по изобретению, высшими эукариотами. Энхансеры представляют собой цис-активные элементы ДНК, обычно примерно 10300 п.о. в длину, которые действуют на промотор, усиливая транскрипцию. Энхансеры являются относительно независимыми от ориентации и положения. Они обнаружены в направлении 5' и 3' от транскрипционной единице. Известны некоторые энхансерные последовательности, доступные из генов млекопитающих (например, гены глобина, эластазы, альбумина, альфа-фето-протеина и инсулина). Обычно, однако, используют энхансер из вируса. Энхансер SV40, энхансер раннего промотора цитомегаловируса,энхансер полиомы и аденовирусные энхансеры, известные в данной области техники, являются примерными энхансерными элементами для активации эукариотических промоторов. Хотя энхансер можно встроить в вектор в положении 5' или 3' к молекуле нуклеиновой кислоты, обычно его локализуют в сайте 5' от промотора. Экспрессионные векторы по изобретению можно конструировать из исходного вектора, например имеющегося в продаже вектора. Такие векторы могут содержать, а могут не содержать все желаемые фланкирующие последовательности. Когда одна или более из фланкирующих последовательностей, описанных здесь, еще не присутствует в векторе, их можно получить отдельно и лигировать в этот вектор. Способы, используемые для получения каждой из фланкирующих последовательностей, хорошо известны специалистам в данной области. После того как вектор сконструирован и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь или тяжелую цепь либо и легкую цепь, и тяжелую цепь, входящие в состав анти-IL-1R1 антитела, встроена в правильный сайт этого вектора, такой полный вектор можно вводить в подходящую клетку-хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Трансформацию экспрессионного вектора для антиIL-1R1 антитела в выбранную клетку-хозяина можно осуществить хорошо известными способами, включая трансфекцию, инфекцию, кальцийфосфатную совместную преципитацию, электропорацию, микроинъекцию, липофекцию, трансфекцию, опосредованную ДЭАЭ-декстраном, или другие известные методики. Выбранный способ будет отчасти зависеть от типа клетки-хозяина, которую будут использовать. Эти и другие подходящие способы хорошо известны специалистам в данной области и изложены, например, в Sambrook et al., см. выше. Клетка-хозяин при культивировании в соответствующих условиях синтезирует анти-IL-1R1 антитело, которое можно затем собрать из культуральной среды (если клетка-хозяин секретирует его в среду) или непосредственно из клетки-хозяина, продуцирующей его (если она не секретирует). Выбор подхо- 22018072 дящей клетки-хозяина будет зависеть от различных факторов, таких как желаемые уровни экспрессии,модификации полипептида, которые желательны или необходимы для активности (такие как гликозилирование или фосфорилирование), и легкость его укладки в биологически активную молекулу. Линии клеток млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают, но не ограничены ими, множество бессмертных клеточных линий, имеющихся в Американской Коллекции Типовых Культур (АТСС, American Type Culture Collection) и включающих, но не ограниченных ими, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки HeLa, клетки почек детеныша хомячка (BHK), клетки почек обезьяны (COS), клетки печеночно-клеточной карциномы человека (например, HepG2) и ряд других клеточных линий. В некоторых воплощениях можно выбрать клеточные линии путем определения того, какие клеточные линии обладают высокими уровнями экспрессии и продуцируют антитела с конститутивными свойствами связывания IL-1R1. В другом воплощении, можно выбрать клеточную линию из линий В-клеток, которая не производит свои собственные антитела, но обладает способностью производить и секретировать гетерологичное антитело (например,линии клеток миеломы мыши NS0 и SP2/0). Антитела по изобретению полезны для обнаружения IL-1R1 в биологических образцах и идентификации клеток или тканей, которые продуцируют белок IL-1R1. Указанные антитела, которые связываются с IL-1R1 и блокируют взаимодействие с другими связывающими соединениями, имеют терапевтическое применение при модулировании опосредованных IL-1 заболеваний. В предпочтительных воплощениях антитела к IL-1R1 могут блокировать связывание IL-1R1 с IL-1 или с IL-1, что может приводить в результате к прерыванию каскада преобразования сигнала IL-1. Антитела по изобретению, которые специфично связываются с IL-1R1, могут быть полезны при лечении опосредованных IL-1 заболеваний, как обсуждается ниже. Указанные антитела можно применять в анализах связывания для обнаружения связывания IL-1R1 и их способности ингибировать IL-1R1 в результате образования комплекса с IL-1 и со вспомогательным белком IL-1R (IL-1RAcP) либо с IL-1 и сIL-1RAcP. В некоторых воплощениях в изобретении предложены способы лечения медицинских расстройств,связанных с опосредованными IL-1 воспалительными реакциями или с опосредованными IL-1 иммунорегуляторными реакциями. Способы по изобретению включают введение антитела анти-IL1R1 по изобретению индивидууму, который поражен воспалительным или иммунорегуляторным заболеванием,которое опосредовано IL-1. Как используют здесь, термины "болезнь", "заболевание", "медицинское состояние" или "аномальное состояние" используют взаимозаменяемо с термином "медицинское расстройство". В конкретном воплощении способы по изобретению включают введение пациенту анти-IL-1R1 антитела по изобретению, посредством чего предотвращается связывание IL-1 с его рецептором на клеточной поверхности (IL-1R1). Для лечения медицинского расстройства, характеризующегося аномальной или избыточной экспрессией IL-1 либо аномальной или избыточной передачей сигнала IL-1, молекулу, содержащую антитело к IL-1R типа 1, по данному изобретению вводят пациенту в количестве и в течение периода времени,которые достаточны для индукции длительного улучшения по меньшей мере одного признака, отражающего тяжесть этого расстройства. Улучшение считают "длительным", если пациент проявляет это улучшение по меньшей мере два раза с интервалом от одной до четырех недель. Степень улучшения определяют на основании признаков или симптомов, и можно также применять вопросники, которые предлагают пациенту, такие как вопросники качества жизни. Для определения того, достаточны ли количество и время лечения, можно оценивать различные признаки, которые отражают степень заболевания пациента. Базовое значение для выбранного признака или признаков устанавливают путем обследования пациента перед введением первой дозы антитела. Предпочтительно обследование базового уровня проводят в пределах примерно 60 суток от введения первой дозы. Если антитело IL-1R вводят для лечения острых симптомов, как, например, для лечения травматических повреждений (травматического повреждения колена, удара, повреждения головы и т.д.),первую дозу вводят настолько быстро, насколько это возможно после того, как произошло повреждение или событие. Улучшение индуцируется посредством повторного введения дозы антитела до тех пор, пока пациент не проявляет улучшения по сравнению с базовым уровнем для выбранного(ых) признака или признаков. При лечении хронических состояний этой степени улучшения достигают повторяющимся введением данного лекарства в течение периода, по меньшей мере, месяц или более, например в течение одного,двух или трех месяцев либо более, либо в течение неопределенного времени. Период от одной до шести недель или даже однократная доза часто являются достаточными для лечения острых состояний. Хотя степень заболевания пациента после лечения может казаться улучшенной по одному или более чем одному признаку, лечение может быть продолжено в течение неопределенного времени на том же уровне или с повышенной дозой или частотой. Если лечение снижено или прервано, оно может быть позднее возобновлено, когда симптомы появятся снова. Любой эффективный путь введения можно использовать для терапевтического введения антитела. Антитело можно инъецировать посредством внутрисуставного, внутривенного, внутримышечного введения, введения внутрь очага поражения, внутрибрюшинного, внутричерепного, ингаляционного или подкожного путей введения, с помощью болюсной инъекции или путем непрерывной инфузии. Например, легочные заболевания могут включать интраназальный и ингаляционный способы введения. Другие подходящие средства введения включают пролонгированное высвобождение из имплантатов, аэрозольную ингаляцию, глазные капли, пероральные препараты, включая пилюли, сиропы, лепешки или жевательную резинку, и местные препараты, такие как лосьоны, гели, спреи, мази или другие подходящие методики. Введение путем ингаляции особенно полезно при лечении заболеваний, связанных с легочными расстройствами. В одном воплощении изобретения анти-IL-1R1 антитело по изобретению можно вводить один раз в месяц. В другом воплощении это антитело вводят один раз каждые две недели или один раз в неделю для лечения различных медицинских расстройств, раскрытых здесь. Еще в одном другом воплощении антитело вводят по меньшей мере два раза в неделю, а в другом воплощении его вводят по меньшей мере один раз в сутки. Взрослым пациентом является человек в возрасте 18 лет или старше. При инфекции эффективное количество для взрослого пациента находится в интервале от 1-200 мг/м 2, либо от 1-40 мг/м 2, либо примерно 5-25 мг/м 2. Альтернативно, можно вводить равномерную дозу, количество которой может находиться в интервале от 2-400 мг/доза, 2-100 мг/доза, либо примерно от 10 до 80 мг/доза. Если дозу нужно вводить более чем один раз в неделю, примерный интервал дозы является таким же, как выше- или нижеописанные интервалы дозы. В одном воплощении изобретения различные показания, приведенные ниже, лечат путем введения препарата, приемлемого для инъекции, содержащей антитело к рецептору IL-1, при 80-100 мг/доза, или, альтернативно, содержащего 80 мг на дозу. Эту дозу вводят повторно. Если используют иной путь введения, чем инъекция, дозу соответствующим образом корректируют в соответствии со стандартной медицинской практикой. Например, если путем введения является ингаляция, дозировка может включать введение от одного до семи раз в неделю при дозах от 10 до 50 мг/доза. В предпочтительных воплощениях в изобретении также предложены фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество одного антитела или множества антител по изобретению вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, солюбилизатором,эмульгатором, консервантом и/или адъювантом. Предпочтительно приемлемые вещества препаратов являются нетоксичными для реципиентов при применяемых дозировках и концентрациях. В предпочтительных воплощениях предложены фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество анти-IL-1R1 антител. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция может содержать вещества препаратов,предназначенные для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмотического давления, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, всасывания или проникновения композиции. В таких воплощениях подходящие вещества для препаратов включают, но не ограничены ими, аминокислоты (такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин); противомикробные агенты; антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферы (такие как боратный, бикарбонатный,трис-HCl, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты); сыпучие агенты (такие как маннит или глицин); хелатирующие агенты (такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА; комплексообразующие агенты (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропилбета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды и другие углеводы (такие как глюкоза,манноза или декстрины); белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или гемоглобины); красящие, корригирующие и разбавляющие агенты; эмульгирующие агенты; гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон); полипептиды низкой молекулярной массы; противоионы (такие как натрий); консерванты (такие как бензалкония хлорид, азотная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, циклогексидин, сорбиновая кислота или перекись водорода); растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); сахарные спирты (такие как маннит или сорбит); суспендирующие агенты; сурфактанты или увлажняющие агенты (такие как плюроники, ПЭГ, сорбитановые эфиры, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 80, тритон,триметамин, лецитин, манитерол, тилоксапал); агенты, повышающие стабильность (такие как сахароза или сорбит); тонические агенты (такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, маннит, сорбит); носители для доставки; разбавители; эксципиенты и/или фармацевтические агенты; см. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (A.R. Gennaro, ed.), Mack PublishingCompany. В некоторых воплощениях оптимальная фармацевтическая композиция будет определяться специалистом в данной области в зависимости, например, от назначенного пути введения, формы доставки и желаемой дозировки; см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, выше. В некоторых воплощениях такие композиции могут влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения in В некоторых воплощениях первичный растворитель или носитель в фармацевтической композиции может быть либо водным, либо неводным по природе. Например, подходящий растворитель или носитель может представлять собой воду для инъекций, физиологический солевой раствор или искусственную спинно-мозговую жидкость, в которые, возможно, добавлены другие вещества, общие в композициях для парентерального введения. Нейтральный буферный физиологический раствор или физиологический раствор, смешанный с сывороточным альбумином, представляют собой примеры дополнительных растворителей. В предпочтительных воплощениях фармацевтические композиции содержат трис-буфер с примерным рН 7,0-8,5 или ацетатный буфер с примерным рН 4,0-5,5 и могут дополнительно включать сорбит или его подходящий заменитель. В некоторых воплощениях изобретения для хранения композиции анти-IL-1R1 антитела можно изготовить путем смешивания выбранной композиции, имеющей желаемую степень очистки, с возможными агентами препаратов (Remington's Pharmaceutical Sciences, выше) в форме лепешки лиофилизированного порошка или в форме водного раствора. Кроме того, в некоторых воплощениях препарат продукта анти-IL-1R1 антитела можно готовить в виде лиофилизата, используя соответствующие эксципиенты, такие как сахароза. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть выбраны для парентеральной доставки. Эти композиции могут быть выбраны для ингаляции или для доставки через пищеварительный тракт,например, перорально. Изготовление таких фармацевтически приемлемых композиций находится в пределах компетенции специалиста в данной области. Компоненты препарата присутствуют предпочтительно в концентрациях, которые являются приемлемыми для сайта введения. В некоторых воплощениях буферы используют для поддержания физиологического рН или несколько более низкого рН композиции, обычно рН в интервале от примерно 5 до примерно 8. Когда рассматривают парентеральное введение, терапевтические композиции для применения по данному изобретению могут быть предложены в форме апирогенного, парентерально приемлемого водного раствора, содержащего желаемое анти-IL-1R1 антитело в фармацевтически приемлемом растворителе. Конкретным подходящим растворителем для парентеральной инъекции является стерильная дистиллированная вода, в которой готовят препарат анти-IL-1R1 антитела в виде стерильного, изотонического раствора, правильно законсервированного. В некоторых воплощениях этот препарат включает изготовление препарата желаемой молекулы с агентом, таким как инъекционные микросферы, биологически разрушаемые частицы, полимерные соединения (такие как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), гранулы или липосомы, которые могут обеспечить регулируемое или пролонгированное высвобождение продукта, который можно доставлять посредством депонируемой инъекции. В некоторых воплощениях можно также использовать гиалуроновую кислоту, обладающую эффектом, способствующим пролонгированному нахождению в кровообращении. В некоторых воплощениях для введения желаемой молекулы антитела можно использовать имплантируемые устройства доставки лекарства. Можно готовить препараты фармацевтических композиций по изобретению для ингаляции. В этих воплощениях препараты анти-IL-1R1 антител готовят в виде сухого порошка для ингаляции. В предпочтительных воплощениях можно также готовить препараты анти-IL-1R1 антител в виде ингаляционных растворов с пропеллентом для доставки аэрозоля. В некоторых воплощениях растворы можно распылять с помощью небулайзера. Введение в легкие и способы изготовления препаратов для этого дополнительно описаны в публикации Международной патентной заявкиWO 94/20069, включенной путем ссылки, в которой описана доставка в легкие химически модифицированных белков. Рассматривается также, что препараты можно вводить перорально. Препараты анти-IL-1R1 антител,которые вводят таким образом, можно готовить с носителями, обычно используемыми для приготовления препаратов твердых лекарственных форм, таких как таблетки или капсулы, или без них. В некоторых воплощениях капсула может быть предназначена для высвобождения активной части препарата в желудочно-кишечном тракте, где биологическая доступность максимальна, а досистемный распад минимален. Можно включать дополнительные агенты, чтобы способствовать всасыванию анти-IL-1R1 антитела. Можно также использовать разбавители, корригенты, воска с низкой точкой плавления, растительные масла, смазывающие агенты, суспендирующие агенты, разрыхлители для таблеток и связующие агенты. Фармацевтическая композиция по изобретению предпочтительно должна содержать эффективное количество одного или множества анти-IL-1R1 антител в смеси с нетоксичными эксципиентами, которые пригодны для производства таблеток. Путем растворения таблеток в стерильной воде или другом подходящем растворителе можно получить растворы в форме со стандартной дозой. Подходящие эксципиенты включают, но не ограничены ими, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат или бикарбонат натрия, лактоза или фосфат кальция; или связующие агенты, такие как крахмал, желатин или аравийская камедь; или смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Дополнительные фармацевтические композиции будут очевидны специалистам в данной области,включая препараты, содержащие анти-IL-1R1 антитела для пролонгированной или регулируемой доставки. Методики изготовления ряда препаратов других средств с пролонгированной или регулируемой доставкой, таких как липосомные носители, биологически разрушаемые гранулы или пористые гранулы и депонируемые инъекции, также известны специалистам в данной области; см., например, публикацию Международной патентной заявкиWO 93/15722, включенную сюда путем ссылки, в которой описано регулируемое высвобождение пористых полимерных микрочастиц для доставки фармацевтических композиций. Препараты пролонгированного высвобождения могут включать полупроницаемые полимерные матрицы в виде формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Матрицы для пролонгированного высвобождения могут включать полиэфиры, гидрогели, полилактиды (как раскрыто в патенте США 3773919 и в публикации Европейской патентной заявкиЕР 058481), сополимеры Lглутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата (Sidman et al., 1983, Biopolymers 22: 547-556), поли-(2 гидроксиэтилметакрилат) (Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15: 167-277 и Langer, 1982, Chem.Tech. 12: 98-105), этиленвинилацетат (Langer et al., см. выше) или поли-D(-)-3-гидроксимасляную кислоту (публикация Европейской патентной заявкиЕР 133988). Композиции пролонгированного высвобождения могут также включать липосомы, которые могут быть получены любым из нескольких способов,известных в данной области, см., например, Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 3688-3692; публикации Европейских патентных заявокЕР 036676; ЕР 088046 и ЕР 143949. Фармацевтические композиции, используемые для введения in vivo, обычно предлагают в виде стерильных препаратов. Стерилизацию можно осуществить путем фильтрования через стерильные фильтрующие мембраны. Когда композиция лиофилизирована, стерилизацию с использованием такого способа можно проводить либо до, либо после лиофилизации и восстановления. Композиции для парентерального введения можно хранить в лиофилизированной форме или в растворе. Парентеральные композиции,как правило, помещают в контейнер, имеющий стерильный канал доступа, например пакет или флакон для внутривенного раствора, имеющий пробку, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций. Как только препарат фармацевтической композиции изготовлен, его можно хранить в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества или в виде дегидратированного или лиофилизированного порошка. Такие препараты можно хранить либо в готовой к употреблению форме, либо в форме (например, лиофилизата), которую разводят перед введением. В изобретении также предложены наборы для производства единицы для введения однократной дозы. Каждый набор по изобретению может содержать как первый контейнер, в котором имеется высушенный белок, так и второй контейнер, в котором имеется водный препарат. В некоторых воплощениях данного изобретения предложены наборы, содержащие однокамерные и многокамерные предварительно наполненные шприцы (например, шприцы с жидким содержимым или с лиофилизатом). Эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей анти-IL-1R1 антитело, для терапевтического применения, будет зависеть, например, от терапевтической ситуации и цели. Специалисту в данной области техники будет понятно, что подходящие уровни дозировки для лечения будут варьировать в зависимости отчасти от доставляемой молекулы, от показания, для которого применяют анти-IL-1R1 антитело, от пути введения и от размера (массы тела, поверхности тела или размера органа) и/или состояния (возраста и общего состояния здоровья) пациента. В некоторых воплощениях врач может титровать дозировку и модифицировать путь введения для получения оптимального терапевтического эффекта. Типичная дозировка может находиться в интервале от примерно 0,1 мкг/кг вплоть до примерно 100 мг/кг или более в зависимости от упомянутых выше факторов. В предпочтительных воплощениях дозировка может находиться в интервале от 0,1 мкг/кг вплоть до 100 мг/кг; более предпочтительно от 1 мкг/кг вплоть до примерно 100 мг/кг или даже более предпочтительно от 5 мкг/кг вплоть до примерно 100 мг/кг. Частота дозировки будет зависеть от фармакокинетических параметров конкретного анти-IL-1R1 антитела в применяемом препарате. Обычно врач вводит композицию до тех пор, пока не достигнет дозировки, при которой достигается желаемый эффект. Следовательно, композицию можно вводить в виде однократной дозы или в виде двух или более доз (которые могут содержать или не содержать такое же количество желаемой молекулы) за определенный период времени, либо в виде непрерывной инфузии посредством имплантационного устройства или катетера. Дальнейшее улучшение подходящей дозировки производится рутинным способом обычными специалистами в данной области, что входит в их рутинно выполняемые обязанности. Подходящие дозировки могут быть установлены с использованием соответствующих данных испытаний доза-ответ. Путь введения фармацевтической композиции находится в соответствии с известными способами,например пероральным введением, внутривенной инъекцией, внутрибрюшинным, интрацеребральным(интрапаренхимальным), интрацеребровентрикулярным, внутримышечным, внутриглазным, внутриартериальным введением, введением внутрь воротной вены или внутрь повреждения; введением с помощью систем пролонгированного высвобождения или с помощью имплантационных устройств. В некоторых воплощениях композиции можно вводить путем болюсной инъекции или непрерывно путем инфузии либо с помощью имплантационного устройства. Композицию можно также вводить местно посредством имплантации мембраны, губки или другого подходящего материала, на котором адсорбирована или в котором инкапсулирована желаемая молекула. В некоторых воплощениях, где применяют имплантационное устройство, это устройство может быть имплантировано в любую подходящую ткань или орган, и доставка желаемой молекулы может происхо- 26018072 дить посредством диффузии, болюса, высвобождаемого со временем, или непрерывного введения. Фармацевтические композиции анти-IL-1R1 антитела согласно изобретению также может быть желательно применять ex vivo. В таких случаях клетки, ткани или органы, которые извлечены из пациента,подвергают воздействию фармацевтических композиций анти-IL-1R1 антитела, после чего эти клетки,ткани и/или органы имплантируют обратно пациенту. В частности, анти-IL-1R1 антитела можно доставлять путем имплантации некоторых клеток, которые были подвергнуты генной инженерии, используя такие способы, как описано здесь для экспрессии и секреции полипептида. В некоторых воплощениях такие клетки могут представлять собой животные или человеческие клетки и могут быть аутологичными, гетерологичными или ксеногенными. В некоторых воплощениях эти клетки могут быть бессмертными. В других воплощениях, чтобы уменьшить возможность иммунологического ответа, эти клетки можно инкапсулировать во избежание инфильтрации в окружающие ткани. В других воплощениях материалы инкапсуляции обычно представляют собой биологически совместимые полупроницаемые полимерные оболочки или мембраны, которые дают возможность высвобождения белкового(ых) продукта(ов), но предотвращают разрушение клеток иммунной системой пациента или другими вредными факторами из окружающих тканей. В некоторых воплощениях изобретение дополнительно охватывает введение анти-IL-1R1 антитела или фармацевтической композиции по изобретению одновременно с одним или более чем одним лекарством, которое вводят тому же пациенту, причем каждое лекарство вводят в режиме, подходящем для данного лекарства. Эти воплощения охватывают предварительное лечение, одновременное лечение, последовательное лечение и переменные режимы. Примеры таких лекарств включают, но не ограничены ими, противовирусные агенты, антибиотики, анальгетики, кортикостероиды, антагонисты воспалительных цитокинов, модифицирующие заболевание противоревматические лекарства (МЗПЛ), а также нестероидные противовоспалительные лекарства. В других воплощениях анти-IL-1R1 антитело или фармацевтическую композицию по изобретению можно вводить в комбинации с другими ингибиторами цитокинов, включая те, которые антагонизируют,например RANKL, TGF, IFN, IL-6 или IL-8 и TNF, предпочтительно TNF. В комбинации с IL-6 антитело по данному изобретению можно применять для лечения и предупреждения рецидива эпилептических припадков, включая припадки, вызванные антагонизмом рецептора GABAA, припадки, связанные с иктальными эпизодами ЭЭГ, и моторно-лимбические припадки, возникающие во время эпилептического статуса. В комбинации с ингибитором IFN антитело по данному изобретению полезно при лечении идиопатического фиброза легких и муковисцидоза. Комбинация антитела к рецептору IL-1 и ингибиторами RANKL, например, с антителом RANKL, полезна для предупреждения деструкции костей при различных состояниях, включая, но не ограничиваясь ими, различные ревматические расстройства, остеопороз, множественную миелому или другие злокачественные опухоли, которые вызывают разрушение костей, либо противоопухолевую терапию с целью предупреждения метастаза в кость, либо разрушение костей, связанное с отходами износа протеза или с периодонтитом. Кроме того, антитела по изобретению можно вводить в комбинации с ингибиторами IL-17, такими как растворимые формы рецептора IL-17(такого как IL-17R:Fc), либо с антителом к IL-17, либо с антителом к IL-17R, белком, связывающим IL18, растворимыми формами рецепторов к IL-18, с антителами против рецепторов к IL-18 или с антителами против CD30-лиганда или против CD4. Изобретение далее охватывает способы применения анти-IL-1R1 антитела или фармацевтической композиции по изобретению при лечении раскрытых здесь медицинских расстройств в комбинации с ингибитором TNF, предпочтительно TNF:Fc (ENBREL), и любую комбинацию вышеописанных цитокинов или ингибиторов цитокинов, которые являются активными агентами в комбинационной терапии. Например, в соответствии с настоящим изобретением способы комбинационной терапии можно применять для лечения ревматоидного артрита, удара, астмы, псориаза и т.д. Состояния, которые эффективно лечат с помощью анти-IL-1R1 антитела или фармацевтической композиции, описанных здесь, включают легочные заболевания, такие как астма, хроническая обструктивная болезнь легких, легочно-альвеолярный протеиноз, индуцированная блеомицином пневмопатия и фиброз, индуцированный облучением фиброз легких, муковисцидоз, аккумуляция коллагена в легких и РДСВ (респираторный дистресс-синдром взрослых), все из которых можно лечить комбинациями антитела к IL-1R и ингибитора IL-4 и/или ингибитора IL-13, например антитела IL-4R, которое ингибирует активность IL-13 и IL-4. Описанные антитела и фармацевтические композиции по изобретению также полезны для лечения бронхолегочной дисплазии (БЛД); хронических обструктивных болезней легких(например, эмфиземы и хронического бронхита) и хронической фибротической болезни легких недоношенных детей. Кроме того, соединения, композиции и комбинированную терапию по изобретению применяют для лечения профессиональных легочных заболеваний, включая асбестоз, пневмокониоз хлопкоробов, силикоз или подобные состояния, связанные с длительным воздействием мелких частиц. В других аспектах изобретения раскрытые соединения, композиции и комбинированную терапию применяют для лечения пневмонии, образующей бронхиолиты, фиброза легких, включая идиопатический фиброз легких и индуцированный облучением фиброз легких; саркоидоза легких и аллергий, включая аллергический ринит, контактный дерматит, атопический дерматит и астму. Такие комбинации полезны также для лечения пациентов, страдающих различными кожными расстройствами, включая, но не ограничиваясь ими, герпетиформный дерматит (болезнь Дюринга), атопический дерматит, контактный дерматит, крапивницу (включая хроническую идиопатическую крапивницу) и аутоиммунные заболевания, вызывающие образование пузырей, включая обыкновенную пузырчатку и буллезный пемфигоид. Другие заболевания, поддающиеся лечению комбинацией антитела IL-1R и ингибитора IL-4 и/или IL-13, включают тяжелую миастению, саркоидоз, включая саркоидоз легких,склеродерму, реактивный артрит, синдром повышенного IgE, рассеянный склероз и идиопатический гиперэозинофильный синдром. Эту комбинацию также применяют для лечения аллергических реакций на лекарства, а также в качестве адъюванта для иммунотерапии аллергии. Антитела к рецептору IL-1 или фармацевтические композиции, описанные здесь, полезны для лечения протозойных заболеваний, включая малярию и шистосомиаз, и для лечения лепрозной узловой эритемы; бактериального или вирусного менингита; туберкулеза, включая туберкулез легких и пневмонии,вторичной по отношению к бактериальной или вирусной инфекции, включая гриппозную инфекцию и инфекционный мононуклеоз. Сердечно-сосудистые расстройства и повреждения можно лечить и/или предупреждать описанными фармацевтическими композициями или анти-IL1-R1 антителами, одними или в комбинации с ингибиторами других цитокинов. Сердечно-сосудистые заболевания, поддающиеся лечению, включают абдоминальную аневризму аорты, острый коронарный синдром, артериит; закупорку сосудов, включая закупорку церебральной артерии; осложнения операции коронарного шунтирования; ишемическое/реперфузионное повреждение; заболевание сердца, включая атеросклеротическую болезнь сердца,миокардит, включая хронический аутоиммунный миокардит и вирусный миокардит; сердечную недостаточность, включая хроническую сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность,кахексию сердечной недостаточности; инфаркт миокарда; рестеноз и/или атеросклероз после операции на сердце или после баллонных пластических операций на сонной артерии; бессимптомную ишемию миокарда; дисфункцию клапана левого желудочка, осложнения после имплантации вспомогательных устройств левого желудочка; синдром Рейно; тромбофлебит; васкулит, включая васкулит Кавасаки; болезнь окклюзии вен, гигантоклеточный артериит, гранулематоз Вегенера; спутанность сознания после операции сердечно-легочного шунтирования и пурпуру Шенлейн-Геноха. В некоторых воплощениях анти-IL-1R1 антитела и фармацевтические композиции по изобретению можно также применять для лечения хронических болевых состояний, таких как хроническая боль в области таза, включая хронический простатит/тазовый болевой синдром, и постгерпетическая боль. Расстройства эндокринной системы, включая юношеский диабет (включает аутоиммунный сахарный диабет и инсулинзависимые типы диабета) и диабет взрослых (включая инсулиннезависимый и опосредованный ожирением диабет) также можно лечить анти-IL-1R1 антителами или фармацевтическими композициями по изобретению. Такое лечение включает вторичные состояния, связанные с диабетом,такие как диабетическая ретинопатия, отторжение трансплантата почки у больных диабетом, устойчивость к инсулину, опосредованная ожирением, и почечная недостаточность, которая сама по себе может быть связана с протеинурией и гипертензией. Другие эндокринные расстройства также можно лечить этими соединениями и включают болезнь поликистоза яичников, X-сцепленную адренолейкодистрофию,гипотиреоз и тиреоидит, включая тиреоидит Хасимото (то есть аутоиммунный тиреоидит), дисфункцию клеток щитовидной железы, включая синдром заболевания при эутиреозе. Состояния желудочно-кишечной системы можно лечить или предупреждать анти-IL-1R1 антителами или фармацевтическими композициями по изобретению, одними или в комбинации с другими терапевтическими агентами. Эти состояния включают глютеновую болезнь, болезнь Крона; неспецифический язвенный колит; идиопатический гастропарез; панкреатит, включая хронический панкреатит; острый панкреатит, воспалительное кишечное заболевание и язвы, включая язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. Расстройства мочеполовой системы также можно лечить или предупреждать описанными здесь анти-IL-1R1 антителами или фармацевтическими композициями. Такие расстройства включают гломерулонефрит, включая аутоиммунный гломерулонефрит, гломерулонефрит вследствие воздействия токсинов или гломерулонефрит, вторичный по отношению к инфекциям гемолитическими стрептококками или другими инфекционными агентами. Также можно лечить соединениями, композициями и комбинированными терапиями по изобретению уремический синдром и его клинические осложнения (например,почечная недостаточность, анемия и гипертрофическая кардиомиопатия), включая уремический синдром, связанный с воздействием токсинов окружающей среды, лекарств или других причин. Осложнения, которые возникают в результате воспаления стенки желчного пузыря, которые приводят к изменению всасывающей функции, можно лечить или предупреждать антителами по изобретению. В такие осложнения включены холелитиаз (желчные конкременты) и холидохолитиаз (камни желчного протока) и рецидивы холелитиаза и холидохолитиаза. Дополнительными состояниями, которые можно лечить этими соединениями, композициями и комбинированными терапиями по изобретению, являются осложнения гемодиализа; состояния простаты, включая доброкачественную гипертрофию простаты, не бактери- 28018072 альный простатит и хронический простатит, а также осложнения гемодиализа. Также по изобретению предложены способы применения антител анти-IL-1R1 по изобретению,композиций и комбинированных терапий для лечения различных гематологических и онкологических расстройств. Например, анти-IL-1R1 антитела, одни или в комбинации с ингибиторами других цитокинов или с другими активными агентами, как описано выше, можно применять для лечения различных форм рака, включая острую миелогенную лейкемию, хроническую миелогенную лейкемию, носоглоточную вирусположительную карциному Эпштейна-Барра, глиому, рак ободочной кишки, желудка, простаты, почечных клеток, шейки матки и яичника, рак легких (SCLC и NSCLC), включая кахексию, связанную с раком, утомляемость, астению, паранеопластический синдром кахексии и гиперкальцемии. Солидные опухоли, включая саркому, остеосаркому и карциному, такую как аденокарцинома (например,рак молочной железы) и сквамозно-клеточная карицнома, также можно лечить. Дополнительные раки,которые можно лечить, включают рак пищевода, рак желудка, карциному желчного пузыря, лейкемию,включая острую миелогенную лейкемию, хроническую миелогенную лейкемию, миелоидную лейкемию,хроническую или острую лимфобластную лейкемию и волосистоклеточную лейкемию. Другие злокачественные опухоли с инвазивным метастатическим потенциалом, включая множественную миелому,можно лечить целевыми соединениями, композициями и комбинированными терапиями. Кроме того, описанные анти-IL-1R1 антитела можно применять для лечения анемий и гематологических расстройств, включая хроническую идиопатическую нейтропению, анемию хронического заболевания, гипопластическую анемию, включая врожденную гипопластическую анемию Фанкони; идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ИТП); тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, синдромы миелодисплазии (включая рефракторную анемию, рефракторную анемию с кольцевыми сидеробластами, рефракторную анемию с избытком бластных клеток, рефракторную анемию с избытком бластных клеток в трансформации); миелофиброз/миелоидную метаплазию и серповидно-клеточный вазоокклюзивный криз. Анти-IL-1R1 антителами по изобретению также можно лечить различные лимфопролиферативные заболевания, включая аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (АЛПС), хроническую лимфобластную лейкемию, волосисто-клеточную лейкемию, хронический лимфолейкоз, периферическую Тклеточную лимфому, лимфому малых лимфоцитов, лимфому клеток коры головного мозга, лимфому Беркитта, вирус-положительную Т-клеточную лимфому Эпштейна-Барра, гистиоцитарную лимфому,болезнь Ходжкина, диффузную агрессивную лимфому, острые лимфатические лейкемии, Т-гамма лимфопролиферативное заболевание, лимфому кожных В клеток (то есть грибовидный микоз) и синдром Сезари. Антителами по данному изобретению можно лечить наследственные состояния, такие как болезнь Гоше, болезнь Гентингтона, болезнь, связанная с линейным IgA, и мышечная дистрофия. Другие состояния, которые можно лечить или предупреждать описанными антителами к рецепторуIL-1 или фармацевтическими композициями, включают состояния, которые являются результатом повреждений головы или спинного мозга, включая субдуральную гематому вследствие травмы головы. Касательно данной терапии, описанные композиции и комбинации пригодны для предупреждения неврологической черепно-мозговой травмы, а также для предупреждения и лечения цервикогенной головной боли. Описанные композиции и комбинации, кроме того, пригодны для лечения неврологических побочных эффектов, связанных с облучением головного мозга. Анти-IL-1R1 антитела и фармацевтическая композиция по изобретению также полезны для лечения состояний печени, таких как гепатит, включая острый алкогольный гепатит, острый индуцированный лекарствами или вирусный гепатит, гепатит А, В и С, склерозирующий холангит, печеночный синусоидный эпителий и воспаление печени вследствие неизвестных причин. Расстройства, в которые вовлечена потеря слуха и которые связаны с аномальной экспрессией IL-1,можно лечить антителами анти-IL-1R1 или фармацевтическими композициями по изобретению. Такие расстройства включают потерю слуха, связанную с преддверно-улитковым нервом, которую считают результатом аутоиммунного процесса, то есть аутоиммунную потерю слуха. Антителами анти-IL-1R1 или фармацевтическими композициями по изобретению также можно лечить синдром Меньера и холестеатому, расстройство среднего уха, часто связанное с потерей слуха. Неартритные расстройства костей и суставов также можно лечить описанными здесь антителами. Эти расстройства включают расстройства остеокластов, которые приводят к разрежению кости, такие как, но не ограниченные ими, остеопороз, включая постменопаузный остеопороз, остеоартрит, периодонтит, приводящий в результате к расшатыванию и потере зубов, и расшатывание протеза после замещения сустава (как правило, связанное с воспалительным ответом на инородные остатки от износа). Это последнее состояние часто называют "ортопедический имплантантный остеолиз". Другим состоянием,которое можно лечить соединениями, композициями и комбинированными терапиями по изобретению,является дисфункция височно-нижнечелюстного сустава (ВНС). Антитела анти-IL-1R1 или фармацевтические композиции по изобретению также можно применять для лечения ревматических расстройств, включая взрослый и ювенильный ревматоидный артрит; склеродерму; системную красную волчанку; подагру; остеоартрит; ревматическую полимиалгию; серонега- 29

МПК / Метки

МПК: A61K 39/395, C07K 16/00, G01N 33/53

Метки: применение, интерлейкина-1, антитело, типа, рецептору, il-1r1

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/30-18072-antitelo-k-receptoru-interlejjkina-1-tipa-1-il-1r1-i-ego-primenenie.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антитело к рецептору интерлейкина-1 типа 1 (il-1r1) и его применение</a>