Белки, содержащие домены vwfa и/или ant_ig
Номер патента: 13251
Опубликовано: 30.04.2010
Авторы: Йорке Мелани, Дэвис Марк Дуглас, Пауэр Кристин, Михалович Дэвид
Формула / Реферат
1. Полипептид, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:148; или
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i); или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
2. Полипептид по п.1, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:128 или SEQ ID NO:132;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
3. Полипептид по п.1 или 2, который:
(i) состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:148; или
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
4. Полипептид, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
5. Полипептид по п.4, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:52 или SEQ ID NO:156;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
6. Полипептид по п.4 или 5, который:
(i) состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
7. Полипептид, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
8. Полипептид по п.7, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:137 или SEQ ID NO:141;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
9. Полипептид по п.7 или 8, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
10. Полипептид, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:148;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
11. Полипептид по п.10, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:126;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
12. Полипептид по п.10 или 11, который:
(i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:148;
(ii) представляет собой ее фрагмент, который связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидом (i), или
(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii), имеющий активность, определенную в (ii).
13. Полипептид, являющийся функциональным эквивалентом полипептида согласно части (iii) любого из предшествующих пунктов и отличающийся тем, что он является гомологом аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:148 или SEQ ID NO:150, связывается с субъединицей токсина сибирской язвы PA, хелатирует двухвалентный катион, необходимый для связывания токсина сибирской язвы, или блокирует интоксикацию сибирской язвы.
14. Полипептид, который представляет собой фрагмент или функциональный эквивалент по любому из предшествующих пунктов, имеющий последовательность, которая более чем на 50%, предпочтительно более чем на 60, 70, 80, 90, 95, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:148 или SEQ ID NO:150, или ее активному фрагменту.
15. Полипептид, который представляет собой функциональный эквивалент по любому из предшествующих пунктов и который обладает значительной структурной гомологией с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:148 или SEQ ID NO:150.
16. Полипептид, который представляет собой фрагмент по пп.1-14, имеющий антигенную детерминанту, общую с полипептидом согласно части (i) любого из пп.1, 4, 7, 10 или 13, и состоящий из 7 или более аминокислотных остатков аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:148 или SEQ ID NO:150.
17. Гибридный белок, содержащий полипептид по любому из предшествующих пунктов.
18. Гибридный белок по п.17, содержащий INSP141, INSP142, внеклеточную часть INSP143 или внеклеточную часть INSP144.
19. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из предшествующих пунктов.
20. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты по п.19, которая содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141 и/или SEQ ID NO:143, или представляет собой ее избыточный эквивалент или фрагмент.
21. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты по п.19, которая состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147 и/или SEQ ID NO:149, и/или представляет собой ее избыточный эквивалент или фрагмент.
22. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-21 в условиях высокой жесткости.
23. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22.
24. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.23.
25. Лиганд, который специфически связывается с полипептидом по любому из пп.1-18.
26. Лиганд по п.25, который представляет собой антитело.
27. Применение полипептида по любому из пп.1-18 в терапии или в диагностике заболевания.
28. Способ диагностики заболевания у пациента, включающий в себя оценку активности полипептида по любому из пп.1-18 в ткани, полученной у указанного пациента, и сравнение указанного уровня экспрессии или активности с контрольным уровнем, где уровень, отличающийся от указанного контрольного уровня, является признаком наличия заболевания.
29. Способ по п.28, осуществляемый in vitro.
30. Способ по п.28 или 29, который включает в себя стадии (а) контактирования лиганда по п.25 или 26 с биологическим образцом в условиях, подходящих для образования комплекса лиганд-полипептид; и (b) детектирования указанного комплекса.
31. Способ по п.28 или 29, включающий в себя:
а) контактирование образца ткани, взятой у пациента, с нуклеиново-кислотным зондом в жестких условиях, способствующих образованию гибридного комплекса между молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22, и указанным зондом;
b) контактирование контрольного образца с указанным зондом в условиях, аналогичных условиям стадии (а); и
c) детектирование присутствия гибридных комплексов в указанных образцах, где детектирование уровней указанного гибридного комплекса в образце, взятом у данного пациента, которые отличаются от уровней гибридного комплекса в контрольном образце, указывает на наличие заболевания.
32. Способ по п.28 или 29, включающий в себя:
a) контактирование образца нуклеиновой кислоты ткани, взятой у пациента, с нуклеиново-кислотным праймером в жестких условиях, способствующих образованию гибридного комплекса между молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22 и указанным праймером;
b) контактирование контрольного образца с указанным праймером в условиях, аналогичных условиям стадии (а);
c) амплификацию указанного образца нуклеиновой кислоты и
d) детектирование уровня амплифицированной нуклеиновой кислоты в образцах, взятых у пациента, и в контрольных образцах, где детектирование уровней амплифицированной нуклеиновой кислоты во взятом у пациента образце, которые значительно отличаются от уровней амплифицированной нуклеиновой кислоты в контрольном образце, указывает на наличие заболевания.
33. Способ по п.28 или 29, включающий в себя:
a) взятие образца ткани у пациента, обследуемого на наличие заболевания;
b) выделение молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22 из указанного образца ткани и
c) установление диагноза заболевания у указанного пациента путем детектирования присутствия мутации в молекуле нуклеиновой кислоты, где указанная мутация ассоциируется с указанным заболеванием и где наличие такой мутации указывает на наличие заболевания.
34. Способ по п.33, который дополнительно включает в себя амплификацию указанной молекулы нуклеиновой кислоты, с образованием амплифицированного продукта, и детектирование наличия или отсутствия мутации в указанном амплифицированном продукте.
35. Способ по п.33 или 34, где наличие или отсутствие мутации у пациента определяют путем осуществления контакта указанной молекулы нуклеиновой кислоты с нуклеиново-кислотным зондом, который гибридизуется с указанной молекулой нуклеиновой кислоты в жестких условиях с образованием гибридной двухцепочечной молекулы, где указанная гибридная двухцепочечная молекула имеет негибридизованную часть цепи нуклеиново-кислотного зонда в любой области, соответствующей мутации, ассоциированной с заболеванием; и детектирования наличия или отсутствия негибридизованной части цепи указанного зонда как показателя наличия или отсутствия ассоциированной с заболеванием мутации.
36. Способ по любому из пп.28-35, где указанными заболеваниями являются, без ограничения, клеточно-пролиферативные расстройства, включая новообразования, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения, нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунные/воспалительные заболевания, включая аллергию, воспалительное заболевание кишечника, артрит, псориаз, воспаление дыхательных путей, астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистые заболевания, включая гипертензию, отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологические расстройства, включая заболевание центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждение головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; нарушения развития; метаболические расстройства, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИД и почечные заболевания; инфекции, включая вирусные инфекции, грибковые инфекции, паразитарные инфекции, бактериальные инфекции, бактериальные интоксикации; сибирская язва, заболевания, ассоциированные с блокадой токсинов (например, бактериальных токсинов), рак, опухоль эндотелия, рак ободочной кишки, рак мочевого пузыря, рак пищевода, рак легких, меланома, ювенильный гиалиновый фиброматоз (ЮГФ), детский системный гиалиноз (ДСГ), болезнь фон Виллебранда, миопатия Бетлема, дистрофический буллезный эпидермолиз, тромбоз, модуляция опосредуемой тромбоцитами агрегации, аутоиммунные заболевания, воспаления и другие патологические состояния.
37. Способ по любому из пп.28-35, где указанным заболеванием является воспалительное заболевание кишечника, заболевание, ассоциированное с токсинами, рак, кожные болезни, воспаления, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, контактный дерматит, атопическая экзема, рак кровеносной и лимфатической систем, рак кожи, рак пищеварительной системы, рак мочевыделительной системы, рак молочной железы, рак яичника, рак женских половых органов, хориокарцинома, рак легких, опухоли головного мозга, опухоли кости, карциноидная опухоль, рак ободочной кишки, рак носоглотки, ретроперитонеальные саркомы, опухоли мягких тканей, рак щитовидной железы, рак яичек или рак печени, заболевание, ассоциированное с бактериальным токсином, заболевание, ассоциированное с токсином сибирской язвы или ботулиническим токсином С2 клостридий, болезнь Крона или язвенный колит, псориаз, рак кровеносной и лимфатической систем, рак кожи, рак пищеварительной системы, рак мочевыделительной системы, рак молочной железы, рак яичника, рак женских половых органов, хориокарцинома, рак легких, опухоли головного мозга, опухоли кости, карциноидная опухоль, рак носоглотки, ретроперитонеальные саркомы, опухоли мягких тканей, рак щитовидной железы, рак яичек или рак печени.
38. Способ по любому из пп.28-36, где указанным заболеванием является заболевание, в патогенезе которого участвуют белки, содержащие домен vWFA и/или ANT_IG, предпочтительно ATR-подобные белки.
39. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому из пп.1-18.
40. Вакцинная композиция, содержащая полипептид по любому из пп.1-18 или молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22.
41. Применение фармацевтической композиции по п.39 для получения лекарственного средства для лечения клеточно-пролиферативных расстройств, включая новообразования, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативных расстройств, таких как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения, нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунных/воспалительных заболеваний, включая аллергию, воспалительное заболевание кишечника, артрит, псориаз, воспаление дыхательных путей, астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистых заболеваний, включая гипертензию, отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологических расстройств, включая заболевание центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждение головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; нарушений развития; метаболических расстройств, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИДа и почечного заболевания; инфекций, включая вирусные инфекции, грибковые инфекции, паразитарные инфекции, бактериальные инфекции, бактериальные интоксикации, сибирскую язву; заболеваний, ассоциированных с блокадой токсинов (например, бактериальных токсинов), рака, опухоли эндотелия, рака ободочной кишки, рака мочевого пузыря, рака пищевода, рака легких, меланомы, ювенильного гиалинового фиброматоза (ЮГФ), детского системного гиалиноза (ДСГ), болезни фон Виллебранда, миопатии Бетлема, дистрофического буллезного эпидермолиза, тромбоза, модуляции опосредуемой тромбоцитами агрегации, аутоиммунных заболеваний, воспаления и других патологических состояний.
42. Применение фармацевтической композиции по п.39 для получения лекарственного средства для лечения заболевания, в патогенезе которого участвуют белки, содержащие домен vWFA и/или ANT_IG, предпочтительно ATR-подобные белки.
43. Способ лечения заболевания у пациента, включающий в себя введение указанному пациенту молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22, вектора по п.23, клетки-хозяина по п.24, где заболевание выбрано из группы, включающей воспалительные заболевания кишечника, заболевания, ассоциированные с токсинами, предпочтительно ассоциированные с бактериальными токсинами, заболевания, ассоциированные с сибирской язвой или с ботулиническим токсином С2 клостридий, рак, кожные болезни, воспаления, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, контактный дерматит, атопическая экзема, рак кровеносной и лимфатической систем, рак кожи, рак пищеварительной системы, рак мочевыделительной системы, рак молочной железы, рак яичника, рак женских половых органов, хориокарцинома, рак легких, опухоли головного мозга, опухоли кости, карциноидная опухоль, рак ободочной кишки, рак носоглотки, опухоль эндотелия, рак мочевого пузыря, рак пищевода, ретроперитонеальные саркомы, опухоли мягких тканей, рак щитовидной железы, рак яичек или рак печени, клеточно-пролиферативные расстройства, включая новообразования, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения, нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунные/воспалительные заболевания, включая аллергию, артрит, воспаление дыхательных путей, астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистые заболевания, включая гипертензию, отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, модуляцию агрегации, опосредуемой тромбоцитами, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологические расстройства, включая заболевание центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждения головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; нарушения развития; метаболические расстройства, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИД и почечные заболевания; инфекции, включая вирусные инфекции, бактериальные инфекции, грибковые инфекции и паразитарные инфекции, ювенильный гиалиновый фиброматоз (ЮГФ), детский системный гиалиноз (ДСГ), болезнь фон Виллебранда, миопатия Бетлема, дистрофический буллузный эпидермолиз, аутоиммунные заболевания и воспаления.
44. Способ по п.43, согласно которому для лечения заболеваний, при которых уровень экспрессии природного гена у пациента, страдающего указанным заболеванием, ниже, чем уровень указанной экспрессии у здорового пациента, данному пациенту вводят молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, которые являются агонистами.
45. Способ по п.43, согласно которому для лечения заболеваний, при которых уровень экспрессии природного гена у пациента, страдающего указанным заболеванием, выше, чем уровень указанной экспрессии у здорового пациента, данному пациенту вводят молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, которые являются антагонистами.
46. Способ лечения заболевания у пациента, включающий в себя введение указанному пациенту полипептида по любому из пп.1-18, лиганда по п.25 или 26 или фармацевтической композиции по п.39, где заболевание выбрано из группы, включающей воспалительные заболевания кишечника, заболевания, ассоциированные с токсинами, предпочтительно ассоциированные с бактериальными токсинами, заболевания, ассоциированные с сибирской язвой или с ботулиническим токсином С2 клостридий, рак, кожные болезни, воспаления, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, контактный дерматит, атопическая экзема, рак кровеносной и лимфатической систем, рак кожи, рак пищеварительной системы, рак мочевыделительной системы, рак молочной железы, рак яичника, рак женских половых органов, хориокарцинома, рак легких, опухоли головного мозга, опухоли кости, карциноидная опухоль, рак ободочной кишки, рак носоглотки, опухоль эндотелия, рак мочевого пузыря, рак пищевода, ретроперитонеальные саркомы, опухоли мягких тканей, рак щитовидной железы, рак яичек или рак печени, клеточно-пролиферативные расстройства, включая новообразования, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения, нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунные/воспалительные заболевания, включая аллергию, артрит, воспаление дыхательных путей, астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистые заболевания, включая гипертензию, отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, модуляцию агрегации, опосредуемой тромбоцитами, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологические расстройства, включая заболевание центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждения головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; нарушения развития; метаболические расстройства, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИД и почечные заболевания; инфекции, включая вирусные инфекции, бактериальные инфекции, грибковые инфекции и паразитарные инфекции, ювенильный гиалиновый фиброматоз (ЮГФ), детский системный гиалиноз (ДСГ), болезнь фон Виллебранда, миопатия Бетлема, дистрофический буллузный эпидермолиз, аутоиммунные заболевания и воспаления.
47. Способ по п.46, согласно которому для лечения заболеваний, при которых уровень активности указанного полипептида у пациента, страдающего указанным заболеванием, ниже, чем уровень указанной активности у здорового пациента, данному пациенту вводят полипептид, лиганд или композицию, которые являются агонистами.
48. Способ по п.46, согласно которому для лечения заболеваний, при которых уровень активности указанного полипептида у пациента, страдающего указанным заболеванием, выше, чем уровень указанной активности у здорового пациента, данному пациенту вводят полипептид, лиганд или композицию, которые являются антагонистами.
49. Способ мониторинга терапевтического лечения заболевания у пациента, предусматривающий мониторинг уровня экспрессии или активности полипептида по любому из пп.1-18 или уровня экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22 в ткани указанного пациента за определенный период времени, где изменение указанного уровня экспрессии или активности за определенный промежуток времени по сравнению с контрольным уровнем является показателем рецидива указанного заболевания.
50. Способ идентификации соединения, которое является эффективным для лечения и/или диагностики заболевания, предусматривающий приведение в контакт молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22 с одним или несколькими соединениями, предположительно обладающими аффинностью связывания с указанной молекулой нуклеиновой кислоты; и отбор соединения, которое специфически связывается с указанной молекулой нуклеиновой кислоты.
51. Способ идентификации соединения, которое является эффективным для лечения и/или диагностики заболевания, предусматривающий приведение в контакт полипептида по любому из пп.1-18 с одним или несколькими соединениями, предположительно обладающими аффинностью связывания с указанным полипептидом; и отбор соединения, которое специфически связывается с указанным полипептидом.
52. Набор, используемый для диагностики заболевания и включающий в себя первый контейнер, содержащий нуклеиново-кислотный зонд, который гибридизуется в жестких условиях с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22; второй контейнер, содержащий праймеры, подходящие для амплификации указанной молекулы нуклеиновой кислоты; и инструкции по использованию указанных зонда и праймеров для облегчения диагностики заболевания.
53. Набор по п.52, который дополнительно включает в себя третий контейнер, содержащий агент для гидролиза негибридизованной РНК.
54. Набор, содержащий массив молекул нуклеиновой кислоты, по меньшей мере одной из которых является молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.19-22.
55. Набор, включающий в себя одно или несколько антител, связывающихся с полипептидом по любому из пп.1-18, и реагент, используемый для детекции реакции связывания между указанным антителом и указанным полипептидом.
56. Трансгенное или дефицитное [по данному полипептиду] животное, не являющееся человеком, которое было трансформировано так, что оно экспрессирует более высокие или более низкие уровни полипептида по любому из пп.1-18 или вообще не экспрессирует указанный полипептид.
57. Способ скрининга на соединение, эффективное для лечения заболевания, предусматривающий контактирование трансгенного животного, не являющегося человеком, по п.56 с соединением-кандидатом и оценку эффективности указанного соединения в отношении указанного заболевания у указанного животного.
58. Применение фармацевтической композиции по п.39 при оплодотворении в пробирке (IVF) или в качестве контрацептива.
59. Применение фармацевтической композиции по п.39 при изготовлении контрацептива.
60. Применение полипептида INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144 в качестве мишени для скрининга лекарственных средств-кандидатов, которые могут быть использованы для лечения или предупреждения расстройства, ассоциированного с белком, содержащим домен vWFA и/или ANT_IG.
61. Способ отбора биологически активных соединений, предусматривающий:
(i) контактирование соединения-кандидата с рекомбинантными клетками-хозяевами, экспрессирующими полипептид INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144;
(ii) отбор соединений, которые связываются с указанным полипептидом INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144 на поверхности указанных клеток и/или модулируют активность указанного полипептида INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144.
Текст
013251 Настоящее изобретение относится к новым белкам (обозначенным здесь INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144), идентифицированным как рецептороподобные белки сибирской язвы, содержащие домен фактора А фон Виллебранда (vWFA) и внеклеточный домен рецептора сибирской язвы (ANTIG),и к использованию этих белков и последовательностей нуклеиновых кислот кодирующих генов в целях диагностики, предупреждения и лечения заболевания. Все цитированные здесь публикации, патенты и патентные заявки во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Предшествующий уровень техники В настоящее время в области разработки лекарственных средств произошел крутой перелом, который положил начало новой эре функциональной геномики, пришедшей на смену старым методам. Термин "функциональная геномика" применяется к способам использования средств биоинформатики для приписывания функций последовательностям белков, представляющих интерес для специалистов. Такие средства становятся все более необходимыми, и это связано с тем, что оснащение научноисследовательских лабораторий, занимающихся определением функций последовательностей этих белков, пока не дает возможности быстро обрабатывать все нарастающий поток данных о последовательностях этих белков. Поскольку эффективность и точность методов биоинформатики возрастают, эти методы быстро вытесняют стандартные методы биохимической характеризации. Действительно, современные средства биоинформатики, используемые для идентификации белков согласно изобретению, позволяют получать окончательные результаты с достаточно высокой степенью достоверности. Различные институты и коммерческие организации занимаются обработкой непрерывно поступающих данных о последовательностях, и на основе полученных результатов они приходят к важным открытиям. Однако необходимость в идентификации и характеризации других генов и полипептидов,кодируемых этими генами, в целях их дальнейшего исследования и поиска новых лекарственных средств все еще остается актуальной. Введение Рецептор токсина сибирской язвы. Сибирская язва главным образом поражает домашних и диких животных, в частности травоядных животных, таких как крупный рогатый скот, овцы, лошади, мулы и козы. Человек поражается этим заболеванием случайно посредством контакта с заболевшими животными, например через мясо, кости, шкуру, шерсть и экскременты. Один из компонентов токсина сибирской язвы обладает действием, которое может привести к летальному исходу и которое пока еще не изучено. Смерть наступает из-за недостатка кислорода, вторичного шока, возрастающей проницаемости сосудов и нарушения дыхания. Смерть человека и животных от сибирской язвы часто наступает внезапно и неожиданно. На самой последней стадии заболевания уровень летального токсина в кровотоке быстро возрастает, и его концентрация прямо пропорциональна концентрации микроорганизмов в крови. Трехкомпонентный токсин сибирской язвы продуцируется бактерией Bacillus anthracis, которая является возбудителем сибирской язвы. Этот токсин способствует проникновению бактерии в иммунную систему и вызывает гибель хозяина в результате системной инфекции. Указанный токсин состоит из трех белков: протективного антигена (PA) (одной связывающейся с рецептором молекулы) и двух ферментных молекул, называемых фактором отека (EF) и летальным фактором (LF). После высвобождения указанных белков из бактерии в качестве нетоксичных молекул они попадают на поверхность клеток млекопитающих и образуют токсические комплексы, связывающиеся с клетками (Mourez M. et al., Nat.Biotechnol. 2001, 19, 958-961). Два компонента указанного токсина ферментативно модифицируют субстраты в цитозоле клеток млекопитающих, где фактор отека (EF) представляет собой аденилатциклазу, которая нарушает защитную функцию организма посредством различных механизмов, включая супрессию функции нейтрофилов и подавление резистентности хозяина. Летальный фактор (LF) представляет собой цинкзависимую протеазу, которая расщепляет активированную митогеном киназу протеинкиназы и вызывает лизис макрофагов. Протективный антиген (PA), т.е. третий компонент токсина, связывается с клеточным рецептором и опосредует доставку ферментных компонентов в цитозоль (Leppla S.H. Anthrax toxin, In Aktories K.,Just I., editors. Handbook of experimental pharmacology. Berlin: Springer; 2000, p. 447-72). Рецептор токсина сибирской язвы (ATR) кодируется геном эндотелиального маркера опухоли 8(TEM8). Для осуществления первой стадии интоксикации токсином сибирской язвы используют белковый продукт гена TEM8. Истинные физиологические функции ATR пока неизвестны, однако очевидно,что TEM8 стимулирует развитие рака ободочной кишки (St Croix В. et al. (2000), Science, Aug. 18; 289(5482): 1197-1202). Транскрипция TEM8 также стимулируется в процессе ангиогенеза. Исследования,проводимые на мышином гене опухолевого эндотелиального маркера 8 (mTEM8), дают основание предположить, что mTEM8 может участвовать в неоваскуляризации опухоли (Carson-Walter E. et al. (2001),Cancer Res. Sep. 15; 61 (18): 6649-55).-1 013251 Белок 2 капиллярного морфогенеза человека (CMG2) имеет доменную структуру, аналогичнуюATR, и последовательности этих двух белков по всей их длине имеют 40%-ную идентичность. Было экспериментально показано, что CMG2 может связываться с субъединицами токсина сибирской язвы (PA),что дает основание предположить, что механизм действия CMG2 может быть аналогичен механизмуATR (Scobie H.M. et al. (2003), Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Apr. 29; 100 (9): 5170-4). Истинные физиологические функции CMG2 неизвестны, однако было показано, что рекомбинантная форма CMG2 способна связываться с коллагеном типа IV и ламинином (Bell S. et al. (2001), J. Cell Sci. Aug; 114 (Pt. 15): 2755-73). Внеклеточный домен рецептора сибирской язвы (ANTIG) расположен предположительно во внеклеточной N-концевой половине рецептора токсина сибирской язвы. Другой домен рецептора токсина сибирской язвы был найден во внеклеточной части и был назван ANTC. Эта часть, вероятно, принадлежит молекуле суперсемейства IgG и обнаруживает наиболее близкое сходство с доменом IPT/TIG. Семейство IPT/TIG состоит из доменов, которые имеют такую же пространственную упаковку, что и иммуноглобулин. Эти домены были обнаружены в рецепторах клеточной поверхности, таких как Met и Ron, а также в факторах транскрипции, где они участвуют в связывании ДНК. Рецептор тирозинкиназы Ron имеет общие, присущие всем членам этого подсемейства (Met и Sea), уникальные функциональные свойства: способность к регуляции диссоциации клеток; подвижность и способность к инвазии внеклеточного матрикса (разрушению). Одним из типичных признаков ATR является внеклеточный домен фактора фон Виллебранда(vWFA), известный также как домен интегрина (I). Домен vWFA был обнаружен во многих внеклеточных белках. Примерами таких белков являются фактор В белков комплемента (FB), С 2, CR3 и CR4, интегрины и коллаген типов VI, VII, XII, XIV (Perkins S.J. et al., (1994), J. Mol. Biol. Apr. 22; 238 (1): 104-19),а также рецепторы токсина сибирской язвы (Bradley K. et al. (2003), Biochem Pharmacol. Feb. 1; 65 (3): 309-14). Функциями, ассоциироваными с белками, содержащими домен vWFA, являются их действие в качестве компонентов внеклеточного матрикса, гемостаз, клеточная адгезия и действие по механизмам иммунной защиты (Colombatti A. et al. (1993), Matrix. Jul.; 13 (4): 297-306). Домен vWFA, обнаруженный в белках класса интегринов, был обозначен как домен интегрина I(Roland A. et al. (2003), J. Biol. Chem. Apr. 25; 278 (17), 15035-15039). Было показано, что субъединица PA токсина сибирской язвы связывается непосредственно с доменом vWFA ATR по механизму, который,очевидно, имитирует механизм связывания интегринов с их природными субстратами. Было показано,что растворимая форма этого домена действует в клеточной культуре как эффективный внеклеточный антитоксин сибирской язвы (Bradley K. et al. (2003), Biochem. Pharmacol. Feb. 1; 65 (3): 309-14). Общим мотивом для большинства белков, содержащих домен vWFA, является зависимый от ионов металла сайт адгезии (MIDAS). Мотив MIDAS участвует в координиции катионов (например, Mg2+,Mn2+, Zn2+ и Са 2+) и состоит из пяти остатков, Asp-x-Ser-x-Ser, Thr и Asp (Scobie H.M. et al. (2003), Proc.Natl. Acad. Sci. USA Apr. 29; 100 (9): 5170-4). Мотив MIDAS расположен во внеклеточном домене vWFA хелатных комплексов ATR/TEM8, образуемых двухвалентным катионом, который играет решающую роль в связывании PA. Было показано, что растворимый домен vWFA ATR (sATR) блокирует интоксикацию сибирской язвой клеток китайского хомячка (CHO) в клеточной культуре (Bradley et al. Nature 2001; 414: 225-9; см. также WO 04/052277 и WO 02/46228).Bradley et al. также сообщали об участии комплекса ATR/TEM8/CMG2 в патогенезе рака, а именно опухолей эндотелия, рака ободочной кишки, рака мочевого пузыря, рака легких и меланомы (Bradley etal. Biochemical Pharmacology, 2003. Vol. 65, p. 309-314). Было высказано предположение, что лечение инфекций, вызываемых возбудителем сибирской язвы, а также рака может быть осуществлено с использованием нуклеиновой кислоты, которая является антисмысловой по отношению к ATR/TEM8 (WO 04/013313 и WO 04/052277). Было также высказано предположение, что природный ATR/TEM8/CMG2 играет определенную роль в ангиогенезе (см. Nanda and St.Croix, Current Opinion in Oncology, 2004. Vol. 16, p. 44-49). Было показано, что внеклеточный домен TEM8 связывается с субъединицей 3 коллагена VI посредством СООН-концевого домена С 5 (Nanda et al. Cancer Research, 2004. Vol. 64, p. 817-820). PA может конкурировать с субъединицей коллагена за связывание с ATR. Nanda et al. было высказано предположение, что взаимодействие с TEM8/С 5 может играть важную роль в опухолевом ангиогенезе. Мутации в гене CMG2 (в частности, в домене vWFA) вызывают два связанных с аллелями расстройства: ювенильный гиалиновый фиброматоз (ЮГФ) и системный гиалиноз у детей (ISH; Lacy et al.,PNAS 2004. Vol. 101.17, p. 6367-6372). Кроме того, миссенс-мутации в доменах vWFA различных белков приводят к заболеваниям человека. Мутации предшественника фактора фон Виллебранда (vWF) ассоциируются с заболеванием фон Виллебранда (OMIM Acc.193400). Мутации предшественника коллагеновой цепи 3(VI) ассоциируются с миопатией Бетлема (OMIM Acc.120250 и 158810). Мутации предшественника коллагеновой цепи 1(VII) (длинноцепочечный коллаген) (LC-коллаген) ассоциируются с буллезным дистрофическим эпидермолизом (доминантный ген, OMIM Acc.120120; рецессивный ген, OMIM Acc.131750; претибиаль-2 013251 ный, доминантный и рецессивный OMIM Acc.226600 и OMIM Acc.131850). Некоторые белки, которые содержат одну или несколько копий домена типа А, участвуют в механизмах защиты хозяина, таких как иммунный ответ и воспаление (см., например, Celikel et al., NatureStructural Biology, 5: 189 (1998. В WO 92/17192 приведена терапевтическая композиция, эффективная для лечения или ингибирования тромбоза и содержащая мономерный полипептид, расположенный во фрагменте зрелой субъединицы фактора фон Виллебранда (vWF) дикого типа. WO 04/062551 относится к полипептидам, которые содержат, по меньшей мере, однодоменное антитело против vWF, домена vWF A1, домена A1 активированного vWF, домена vWF A3, gbIb и/или коллагена, или к гомологам и/или функциональным частям этих полипептидов, где указанные полипептиды могут быть использованы в диагностике и/или лечении состояний, требующих модуляции опосредованной тромбоцитами агрегации. Поэтому получение еще большей информации о белках, содержащих домен vWFA и доменANTIG, в частности об ATR-подобных белках, имеет исключительно важное значение в понимании процессов, лежащих в основе вышеупомянутых патологических состояний, а следовательно, и в разработке более эффективной генной и/или лекарственной терапии указанных расстройств. Описание изобретения Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что белки, обозначенные здесьINSP141, INSP142, INSP143 и INSP144, представляют собой варианты сплайсинга одной и той же последовательности, которые гомологичны рецептору токсина сибирской язвы. В частности, настоящее изобретение основано на неожиданном обнаружении того факта, что полипептиды, описанные в настоящем документе, предпочтительно INSP142, обнаруживают ограниченную экспрессию, о чем ранее не высказывалось каких-либо предположений, и эта экспрессия наблюдается в биоптатах ободочной кишки и подвздошной кишки, пораженных IBD, а также в биоптатах кожи, пораженной псориазом. РезультатыTaqMan-анализа экспрессии указывали на специфическую картину экспрессии, которая показала, чтоINSP142 стимулирует воспалительный процесс в кишечнике и способствует развитию воспалительных заболеваний кишечника, а также болезней и воспалений кожи. Эти неожиданно обнаруженные свойства являются характерными свойствами полипептидов согласно изобретению и кодирующих их полинуклеотидов и позволяют использовать указанные полипептиды для приготовления лекарственных средств или фармацевтических композиций. Все INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 предположительно содержат домен фактора А фон Виллебранда (vWFA) и внеклеточный домен рецептора токсина сибирской язвы (ANTIG). Эти два внеклеточных домена сообщают ATR-подобным белкам токсина сибирской язвы рецепторные связывающие свойства. На фиг. 8 и 9 проиллюстрированы консервативные свойства белков INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144, присущие ATR-подобным белкам на структурном и аминокислотном уровне. ДоменvWFA идентичен доменам INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144. Домен ANTIG в белке INSP141 слегка отличается от домена ANTIG в INSP142, INSP143 и INSP144. Предполагается, что INSP141 и INSP142 секретируют белки, которые не содержат трансмембранные области. Предполагается, что INSP143 и INSP144 содержат сигнальный пептид и трансмембранные области. Что касается INSP143 и INSP144, то предполагается, что их N-конец является внеклеточным, а С-конец является внутриклеточным. В одном из вариантов своего первого аспекта настоящее изобретение относится к полипептиду, который:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). Предпочтительно полипептид согласно первому аспекту изобретения:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). В соответствии с этим аспектом полипептид согласно изобретению может состоять из одной из вышеуказанных последовательностей, таких как SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132,-3 013251SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:148. Полипептид согласно первому аспекту изобретения может, кроме того, содержать гистидиновую метку. Предпочтительно, если такая гистидиновая метка находится на С-конце указанного полипептида. Предпочтительная гистидиновая метка содержит 1-10 гистидиновых остатков (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9 или 10 остатков). Более предпочтительно если гистидиновая метка содержит 6 гистидиновых остатков. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, будет далее называться "полипептидом экзона 1 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:4, будет далее называться "полипептидом экзона 2 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:6, будет далее называться "полипептидом экзона 3 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:8, будет далее называться "полипептидом экзона 4 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:10, будет далее называться "полипептидом экзона 5 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:12, будет далее называться "полипептидом экзона 6 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:14, будет далее называться "полипептидом экзона 7 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:16, будет далее называться "полипептидом экзона 8 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:18, будет далее называться "полипептидом экзона 9 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:20, будет далее называться "полипептидом экзона 10 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:22, будет далее называться "полипептидом экзона 11 INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:24, будет далее называться "полипептидом INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:128, будет далее называться "клонированным полипептидом INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:130, будет далее называться "клонированным полипептидом INSP141 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:132, будет далее называться "клонированным зрелым полипептидом INSP141". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:134, будет далее называться "клонированным зрелым полипептидом INSP141 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:146, будет далее называться "пептидной последовательностью домена vWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:148, будет далее называться "пептидной последовательностью домена ANTIG INSP141". Используемый здесь термин "полипептиды INSP141" включает в себя полипептиды, содержащие полипептид экзона 1 INSP141, полипептид экзона 2 INSP141, полипептид экзона 3 INSP141, полипептид экзона 4 INSP141, полипептид экзона 5 INSP141, полипептид экзона 6 INSP141, полипептид экзона 7INSP141, полипептид экзона 8 INSP141, полипептид экзона 9 INSP141, полипептид экзона 10 INSP141,полипептид экзона 11 INSP141, полипептид INSP141, клонированный полипептид INSP141, клонированный полипептид INSP141 с гистидиновой меткой, клонированный зрелый полипептид INSP141, клонированный зрелый полипептид INSP141 с гистидиновой меткой, пептидную последовательность доменаvWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144, пептидную последовательность домена ANTIG INSP141. Предпочтительно полипептид согласно этому аспекту изобретения действует как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок. Под термином "действует как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG", авторы настоящего изобретения подразумевают,что полипептиды, содержащие аминокислотную последовательность или структурные признаки, которые могут быть идентифицированы, например, с помощью стандартных методов биотехнологии как консервативные признаки, присущие полипептидам белков, относящихся к семействам белков, содержащих домены vWFA и/или ANTIG, функционируют так, что взаимодействие этих полипептидов с лигандом или рецептором не оказывает какого-либо значительного негативного действия по сравнению с функцией полноразмерного полипептида дикого типа. Так, например, домен ANTIG определяют по конкретной сигнатуре (данные о конструировании HMMER) в базах данных по выравниванию семейств белков и НММ (PFAM, The Pfam Protein Families Database. Alex et al. Nucleic Acids Research 2004. Database Issue 32: D138-D141). Определение функциональных свойств не должно быть ограничено конкретным биоин-4 013251 формативным средством, таким как PFAM, поскольку для детекции консервативных доменов или мотивов существуют и другие средства, имеющие свои собственные конкретные сигнатуры. Кроме того, консервативные остатки в домене ANTIG и в домене vWFA, которые, очевидно, имеют важное значение для их правильного функционирования, показаны на фиг. 9 (например, 13 идентичных остатков присутствуют в домене ANTIG во всех членах этого семейства). Более того, специалист в данной области, исходя из выравнивания, показанного на фиг. 9, может создать конкретные сигнатуры для домена vWFA и/или домена ANTIG с применением подходящих средств (например, Psi-blast). Под термином "функции, аналогичные функции ATR-подобного белка", авторы настоящего изобретения подразумевают, что полипептиды содержат домены vWFA и ANTIG, которые имеют свойства,аналогичные белку ATR. Так, например, полипептиды согласно изобретению предпочтительно обладают способностью связываться с токсином, более конкретно - с бактериальным токсином и/или обладают способностью к предупреждению и/или лечению рака. Во втором варианте своего первого аспекта настоящее изобретение относится к полипептиду, который:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). Предпочтительно полипептид согласно первому аспекту изобретения:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). В соответствии с этим аспектом изобретения полипептид согласно изобретению может состоять из одной из вышеуказанных последовательностей, таких как SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:136,SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:26, будет далее называться "полипептидом экзона 1 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:28, будет далее называться "полипептидом экзона 2 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:30, будет далее называться "полипептидом экзона 3 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:32, будет далее называться "полипептидом экзона 4 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:34, будет далее называться "полипептидом экзона 5 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:36, будет далее называться "полипептидом экзона 6 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:38, будет далее называться "полипептидом экзона 7 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:40, будет далее называться "полипептидом экзона 8 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:42, будет далее называться "полипептидом экзона 9 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:44, будет далее называться "полипептидом экзона 10 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:46, будет далее называться "полипептидом экзона 11 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:48, будет далее называться "полипептидом экзона 12 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:50, будет далее называться "полипептидом экзона 13 INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:52, будет далее называться "полипептидом INSP142".-5 013251 Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:136, будет далее называться "клонированным полипептидом INSP142". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:146, будет далее называться "пептидной последовательностью домена vWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:150, будет далее называться "пептидной последовательностью домена ANTIG INSP142-INSP143-INSP144". Используемый здесь термин "полипептиды INSP142" включает в себя полипептиды, содержащие полипептид экзона 1 INSP142, полипептид экзона 2 INSP142, полипептид экзона 3 INSP142,полипептид экзона 4 INSP142, полипептид экзона 5 INSP142, полипептид экзона 6 INSP142,полипептид экзона 7 INSP142, полипептид экзона 8 INSP142, полипептид экзона 9 INSP142,полипептид экзона 10 INSP142, полипептид экзона 11 INSP142, полипептид экзона 12 INSP142,полипептид экзона 13 INSP142, полипептид INSP142, клонированный полипептид INSP142, пептидную последовательность домена vWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144, пептидную последовательность домена ANTIG INSP142-INSP143-INSP144. Предпочтительно полипептид согласно этому аспекту изобретения действует как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок. В третьем варианте своего первого аспекта настоящее изобретение относится к полипептиду, который:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). Предпочтительно полипептид согласно первому аспекту изобретения:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). В соответствии с этим аспектом полипептид согласно изобретению может состоять из одной из вышеуказанных последовательностей, таких как SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58,SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70,SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82,SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140,SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:54, будет далее называться "полипептидом экзона 1 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:56, будет далее называться "полипептидом экзона 2 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:58, будет далее называться "полипептидом экзона 3 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:60, будет далее называться "полипептидом экзона 4 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:62, будет далее называться "полипептидом экзона 5 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:64, будет далее называться "полипептидом экзона 6 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:66, будет далее называться "полипептидом экзона 7 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:68, будет далее называться "полипептидом экзона 8 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:70, будет далее называться "полипептидом экзона 9 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:72, будет далее называться "полипептидом экзона 10 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:74, будет далее называться "полипептидом экзона 11 INSP143".-6 013251 Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:76, будет далее называться "полипептидом экзона 12 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:78, будет далее называться "полипептидом экзона 13 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:80, будет далее называться "полипептидом экзона 14 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:82, будет далее называться "полипептидом экзона 15 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:84, будет далее называться "полипептидом экзона 16 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:86, будет далее называться "полипептидом экзона 17 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:88, будет далее называться "полипептидом экзона 18 INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:90, будет далее называться "полипептидом INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:138, будет далее называться "клонированным полипептидом INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:140, будет далее называться "клонированным полипептидом INSP143 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:142, будет далее называться "клонированным зрелым полипептидом INSP143". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:144, будет далее называться "клонированным зрелым полипептидом INSP143 с гистидиновой меткой". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:146, будет далее называться "пептидной последовательностью домена vWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:150, будет далее называться "пептидной последовательностью домена ANTIG INSP142-INSP143-INSP144". Используемый здесь термин "полипептиды INSP143" включает в себя полипептиды, содержащие полипептид экзона 1 INSP143, полипептид экзона 2 INSP143, полипептид экзона 3 INSP143,полипептид экзона 4 INSP143, полипептид экзона 5 INSP143, полипептид экзона 6 INSP143,полипептид экзона 7 INSP143, полипептид экзона 8 INSP143, полипептид экзона 9 INSP143,полипептид экзона 10 INSP143, полипептид экзона 11 INSP143, полипептид экзона 12 INSP143,полипептид экзона 13 INSP143, полипептид экзона 14 INSP143, полипептид экзона 15 INSP143,полипептид экзона 16 INSP143, полипептид экзона 17 INSP143, полипептид экзона 18 INSP143,полипептид INSP143, клонированный полипептид INSP143, клонированный полипептид INSP143 с гистидиновой меткой, клонированный зрелый полипептид INSP143, клонированный зрелый полипептидINSP143 с гистидиновой меткой, пептидную последовательность домена vWFA INSP141-INSP142INSP143-INSP144, пептидную последовательность домена ANTIG INSP142-INSP143-INSP144. Предпочтительно полипептид согласно этому аспекту изобретения действует как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок. В четвертом варианте своего первого аспекта настоящее изобретение относится к полипептиду, который:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). Предпочтительно полипептид согласно первому аспекту изобретения:(ii) представляет собой фрагмент, который действует как белок, содержащий домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок, или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii).-7 013251 В соответствии с этим аспектом полипептид согласно изобретению может состоять из одной из вышеуказанных последовательностей, таких как SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96,SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108,SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120,SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:146 и/или SEQ ID NO:150. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:92, будет далее называться "полипептидом экзона 1 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:94, будет далее называться "полипептидом экзона 2 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:96, будет далее называться "полипептидом экзона 3 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:98, будет далее называться "полипептидом экзона 4 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:100, будет далее называться "полипептидом экзона 5 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:102, будет далее называться "полипептидом экзона 6 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:104, будет далее называться "полипептидом экзона 7 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:106, будет далее называться "полипептидом экзона 8 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:108, будет далее называться "полипептидом экзона 9 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:110, будет далее называться "полипептидом экзона 10 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:112, будет далее называться "полипептидом экзона 11 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:114, будет далее называться "полипептидом экзона 12 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:116, будет далее называться "полипептидом экзона 13 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:118, будет далее называться "полипептидом экзона 14 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:120, будет далее называться "полипептидом экзона 15 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:122, будет далее называться "полипептидом экзона 16 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:124, будет далее называться "полипептидом экзона 17 INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:126, будет далее называться "полипептидом INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:146, будет далее называться "пептидной последовательностью домена vWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144". Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:150, будет далее называться "пептидной последовательностью домена ANTIG INSP142-INSP143-INSP144". Используемый здесь термин "полипептиды INSP144" включает в себя полипептиды, содержащие полипептид экзона 1 INSP144, полипептид экзона 2 INSP144, полипептид экзона 3 INSP144,полипептид экзона 4 INSP144, полипептид экзона 5 INSP144, полипептид экзона 6 INSP144,полипептид экзона 7 INSP144, полипептид экзона 8 INSP144, полипептид экзона 9 INSP144,полипептид экзона 10 INSP144, полипептид экзона 11 INSP144, полипептид экзона 12 INSP144,полипептид экзона 13 INSP144, полипептид экзона 14 INSP144, полипептид экзона 15 INSP144,полипептид экзона 16 INSP144, полипептид экзона 17 INSP144, полипептид INSP144, пептидную последовательность домена vWFA INSP141-INSP142-INSP143-INSP144, пептидную последовательность домена ANTIG INSP142-INSP143-INSP144. Предпочтительно "белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG", может означать молекулу, содержащую домен vWFA и/или ANTIG, детектируемые с величиной ошибки, составляющей менее чем 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001, 0,0002, 0,00001, 0,000001 или 0,0000001. Предпочтительно полипептид согласно этому аспекту изобретения действует как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно как ATR-подобный белок.-8 013251 Предпочтительно активность полипептида настоящего изобретения может быть подтверждена по меньшей мере в одном из следующих анализов: а) в анализах на мышиных моделях воспалительного заболевания кишечника, индуцированного декстрансульфатом натрия (DSS), описанных Okayasu et al. (A novel method in the induction of reliablec) на моделях рака, описанных Kamb и Lassota (Drug Discovery Today: Disease Models; Vol. 1,1,2004, p. 31-36), или на моделях рака кожи, описанных Odashiro et al. (Drug Discovery Today: DiseaseModels, 2005; в печати),d) на моделях контактного дерматита или атопической экземы, описанных Gutermuth et al. (Druge) в анализах на модуляцию пролиферации или выживания нормальных и раковых клеток, илиg) в анализах на модуляцию ангиогенеза или неоваскуляризации, илиh) в анализах на блокаду бактериальной интоксикации, например интоксикации токсином сибирской язвы, илиi) в анализах на способность связываться с токсином, например с бактериальным токсином."Антигенная детерминанта" согласно изобретению может представлять собой часть полипептида согласно изобретению, которая связывается с антигенсвязывающим сайтом антитела или с Т-клеточным рецептором (TCR). Альтернативно, "антигенная детерминанта" может представлять собой сайт на поверхности полипептида согласно изобретению, с которым связывается одна молекула антитела. Вообще говоря, антиген имеет несколько или множество различных антигенных детерминант и реагирует с антителами, обладающими множеством различных специфичностей. Такое антитело предпочтительно является иммуноспецифичным в отношении полипептида согласно изобретению. Предпочтительно указанное антитело является иммуноспецифичным в отношении полипептида согласно изобретению, который не составляет часть гибридного белка. Предпочтительно указанное антитело является иммуноспецифичным в отношении INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 или их фрагментов. Антигенные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как боковые цепи аминокислот или сахаров, и могут иметь специфические трехмерные структуры, а также определенный заряд. Предпочтительно термин "антигенная детерминанта" означает конкретную химическую группу на полипептиде согласно изобретению, которая является антигенной, т.е. вызывает выработку специфического иммунного ответа. Полипептиды ADU02541 (SEQ ID NO:168) и IPI00480015.1/ENSP00000346942 (SEQ ID NO:169) и кодирующие их нуклеиново-кислотные последовательности не входят в объем настоящего изобретения. Во втором своем аспекте настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид согласно первому аспекту изобретения. Термин "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" предпочтительно означает молекулу нуклеиновой кислоты согласно изобретению, которая (1) отделена по меньшей мере примерно на 50% от белков, липидов, углеводов или других соединений, с которыми ассоциируется природная полноразмерная нуклеиновая кислота при ее выделении из клеток-источников; (2) не связана со всеми полинуклеотидами или с их частью, с которыми указанная "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" ассоциируется в природе; (3) функционально присоединена к полинуклеотиду, с которым она не ассоциируется в природе; или (4) не встречается в природе как часть более крупной полинуклеотидной последовательности. Предпочтительно выделенная молекула нуклеиновой кислоты согласно изобретению, по существу, не содержит любой(ых) другой(их) примесной(ых) молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты или других примесей, которые присутствуют в ее природном окружении и могут препятствовать использованию этой нуклеиновой кислоты для продуцирования полипептидов или ее терапевтическому, диагностическому или профилактическому применению или применению в целях исследования. В предпочтительном варианте изобретения геномные ДНК не входят в объем настоящего изобретения. Предпочтительно геномная ДНК, в частности ДНК, имеющая размер более чем 10 т.п.н. (тысяч пар нуклеотидов), 50 т.п.н.,100 т.п.н., 150 т.п.н., 200 т.п.н., 250 т.п.н. или 300 т.п.н., не входит в объем изобретения. При этом предпочтительно если такая "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" состоит только из кДНК.-9 013251 Предпочтительно очищенная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную вSEQ ID NO:121 (кодирующей полипептид экзона 16 INSP144),SEQ ID NO:123 (кодирующей полипептид экзона 17 INSP144),SEQ ID NO:125 (кодирующей полипептид INSP144),SEQ ID NO:127 (кодирующей клонированный полипептид INSP141),SEQ ID NO:129 (кодирующей клонированный полипептид INSP141 с гистидиновой меткой),SEQ ID NO:131 (кодирующей клонированный зрелый полипептид INSP141),SEQ ID NO:133 (кодирующей клонированный зрелый полипептид INSP141 с гистидиновой меткой),SEQ ID NO:135 (кодирующей клонированный полипептид INSP142),SEQ ID NO:137 (кодирующей клонированный полипептид INSP143),SEQ ID NO:139 (кодирующей клонированный полипептид INSP143 с гистидиновой меткой),SEQ ID NO:141 (кодирующей клонированный зрелый полипептид INSP143),SEQ ID NO:143 (кодирующей клонированный зрелый полипептид INSP143 с гистидиновой меткой),SEQ ID NO:145 (кодирующей пептидную последовательность домена vWFA INSP141-INSP142INSP143-INSP144),SEQ ID NO:147 (кодирующей пептидную последовательность домена ANTIG-INSP141),SEQ ID NO:149 (кодирующей пептидную последовательность домена ANTIG-INSP142-INSP143INSP144) или представляет собой избыточный эквивалент или фрагмент любой одной из указанных последовательностей. Настоящее изобретение относится также к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, состоящей из любой одной из вышеуказанных последовательностей нуклеиновой кислоты. В своем третьем аспекте настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты согласно второму аспекту изобретения. Условия гибридизации высокой жесткости определяют как условия инкубирования в течение ночи при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5X SSC (150 мМ NaCl,15 мМ тринатрийцитрат), 50 мМ фосфат натрия (pH 1,6), 5X раствор Денхардта, 10% декстрансульфата и 20 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, с последующей промывкой фильтров в 0,1X SSC приблизительно при 65 С. В своем четвертом аспекте настоящее изобретение относится к вектору, такому как экспрессирующий вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту настоящего изобретения. В своем пятом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, трансформированной вектором согласно четвертому аспекту настоящего изобретения. В своем шестом аспекте настоящее изобретение относится к лиганду, который специфически связывается с белками, содержащими домен vWFA и/или ANTIG согласно первому аспекту изобретения. Предпочтительно такой лиганд ингибирует функцию белков, содержащих домен vWFA и/или ANTIG согласно первому аспекту изобретения. Лиганды для полипептида согласно изобретению могут иметь различные формы, включая природные или модифицированные субстраты, ферменты, рецепторы, небольшие органические молекулы, такие как небольшие природные или синтетические органические молекулы размером до 2000 Да, предпочтительно 800 Да или менее, пептидомиметики, неорганические молекулы, пептиды, полипептиды, антитела и их структурные или функциональные миметики. Белки,содержащие домен vWFA и/или ANTIG согласно изобретению, могут связываться с бактериальными токсинами, например с токсинами сибирской язвы и с ботулиническим токсином С 2 клостридий. Настоящее изобретение относится также к полипептиду согласно первому аспекту изобретения, образующему комплекс с бактериальным токсином. В своем седьмом аспекте настоящее изобретение относится к соединению, которое является эффективным с точки зрения изменения экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или с точки зрения регуляции активности полипептида согласно первому аспекту изобретения. Такие соединения могут быть идентифицированы с применением описанных здесь методов анализа и скрининга. Соединение согласно седьмому аспекту изобретения может либо повышать (служить агонистом),либо снижать (служить антагонистом) уровень экспрессии гена или активности полипептида. Важно отметить, что идентификация функции полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 иINSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 дает возможность разработать способы скрининга, позволяющие идентифицировать соединения, эффективные для лечения и/или диагностики заболеваний. Лиганды и соединения согласно шестому и седьмому аспектам изобретения могут быть идентифицированы такими способами. Эти способы также являются аспектами настоящего изобретения. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к применению гена или полипептидаINSP141, INSP142, INSP143 или INSP144 в качестве мишени для скрининга кандидатов на лекарственные средства-модуляторы, в частности на лекарственные средства-кандидаты, обладающие активностью,- 11013251 направленной против расстройств, ассоциированных с белком, содержащим домен vWFA и/или ANTIG. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам скрининга соединений на возможность их применения для лечения расстройств, ассоциированных с белком, содержащим доменvWFA и/или ANTIG, где указанные способы включают в себя выявление способности указанного соединения связываться с геном или полипептидом INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144 или с их фрагментами. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам скрининга соединений на возможность их применения для лечения расстройств, ассоциированных с белком, содержащим доменvWFA и/или ANTIG, где указанные способы включают в себя тестирование на модуляцию активности гена или полипептида INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144 или их фрагментов. В своем восьмом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду согласно первому аспекту настоящего изобретения, или к молекуле нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту настоящего изобретения, или к вектору согласно четвертому аспекту настоящего изобретения, или к клетке-хозяину согласно пятому аспекту настоящего изобретения, или к лиганду согласно шестому аспекту настоящего изобретения, или к соединению согласно седьмому аспекту настоящего изобретения,которые могут быть использованы для лечения или диагностики заболеваний, в патогенезе которых участвуют белки, содержащие домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно ATR-подобные белки. Полипептиды согласно изобретению или их фрагменты (например, фрагменты, содержащие домен фактора Виллебранда (vWF) типа A (vWFA) и/или домен ANTIG) предпочтительно используются для диагностики и/или лечения заболеваний, которые восприимчивы к терапевтической активности других рецептороподобных белков токсина сибирской язвы (например, TEM8 или CMG2). В частности, полипептиды согласно изобретению могут быть использованы для блокирования бактериальных токсинов. Растворимый домен vWFA (весь мотив MIDAS; остатки, имеющие важное значение, показаны на фиг. 9) и/или растворимый домен ANTIG полипептидов согласно изобретению могут быть использованы для блокирования бактериальных токсинов (например, токсинов сибирской язвы,ботулинического токсина С 2 клостридий (Clostridium botulinum и тем самым для предупреждения или лечения бактериальных инфекций. Растворимый домен vWFA и/или домен ANTIG полипептидов согласно изобретению могут быть присоединены к липидному хвосту, например к гликозилфосфатидилинозиту (GPI-хвосту), который действует как рецептор для субъединицы PA блокируемого бактериального токсина. LiuHeppla. В TheJournal of Biological. Chemistry, 2003, Vol. 278,7, p. 5227-5234 описано присоединение внеклеточного домена TEM8 к GPI-заякоривающей последовательности uPAR. Полипептиды согласно изобретению, в частности растворимый домен vWFA (по всему мотивуMIDAS, остатки, играющие важную роль, показаны на фиг. 9) и/или домен ANTIG полипептидов согласно изобретению, могут быть использованы также для лечения рака. Антагонисты полипептидов согласно изобретению, в частности мембрано-связанные изоформыINSP143 и INSP144, могут быть использованы также для удаления бактериальных токсинов и для лечения рака. Предпочтительно такими антагонистами являются моноклональные антитела или антисмысловые нуклеиновые кислоты. Предпочтительно указанные антагонисты направлены против домена vWFA,более предпочтительно против мотива MIDAS и/или домена ANTIG. Другими заболеваниями, которые могут быть подвергнуты лечению, являются клеточнопролиферативные расстройства, включая новообразование, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения,нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунные/воспалительные заболевания, включая аллергию, воспалительные заболевания кишечника, артрит, псориаз, воспаление дыхательных путей, астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистые заболевания, включая гипертензию,отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологические расстройства, включая расстройства центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждения головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; нарушения развития; метаболические расстройства, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИД и почечные заболевания; инфекции, включая вирусные инфекции, бактериальные инфекции, грибковые инфекции и паразитарные инфекции, и другие патологические состояния. Такими заболеваниями предпочтительно являются заболевания, в патогенезе которых участвуют белки, содержащие домен vWFA и/или ANTIG,предпочтительно ATR-подобные белки. Примерами заболеваний, в патогенезе которых участвуют белки,содержащие домен vWFA и/или ANTIG, являются бактериальные инфекции, бактериальные интоксикации, сибирская язва, заболевания, ассоциированные с блокадой токсинов (например, бактериальных токсинов), рак, опухоль эндотелия, рак ободочной кишки, рак мочевого пузыря, рак пищевода, рак легких,меланома, ювенильный гиалиновый фиброматоз (ЮГФ), детский системный гиалиноз (ДСГ), болезнь фон Виллебранда, миопатия Бетлема, дистрофический буллузный эпидермолиз, тромбоз, модуляция агрегации, опосредуемой тромбоцитами, аутоиммунные заболевания и воспаления. Эти молекулы могут быть использованы также в целях приготовления лекарственного средства для лечения указанных забо- 12013251 леваний. Такие молекулы могут быть использованы также для контрацепции или для лечения репродуктивных расстройств, включая бесплодие. Результаты экспрессии, полученные авторами настоящего изобретения и описанные в настоящем документе, неожиданно выявили ограниченную экспрессию INSP142 в биоптатах, взятых из ободочной кишки и подвздошной кишки, пораженных ВЗК, а также биоптата кожи, пораженной псориазом. Такой специфический характер экспрессии позволяет сделать вывод о роли INSP142 в развитии воспалительных заболеваний кишечника, кожных болезней или воспалений. Эти неожиданно выявленные свойства, характеризующие полинуклеотиды или соответствующие полипептиды согласно изобретению, делают их особенно подходящими для получения лекарственного средства или фармацевтической композиции. Особенно предпочтительными заболеваниями являются воспалительные заболевания кишечника,заболевания, ассоциированные с токсинами, рак, кожные болезни, воспаления, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, контактный дерматит, атопическая экзема, рак кровеносной и лимфатической систем, рак кожи, рак пищеварительной системы, рак мочевыделительной системы, рак молочной железы, рак яичника, рак женских половых органов, хориокарцинома, рак легких, опухоли головного мозга, опухоли кости, карциноидная опухоль, рак ободочной кишки, рак носоглотки, ретроперитонеальные саркомы,опухоли мягких тканей, рак щитовидной железы, рак яичек или рак печени. Предпочтительно заболевание, ассоциированное с токсинами, выбрано из заболевания, ассоциированного с бактериальными токсинами, заболевания, ассоциированные с сибирской язвой или с ботулиническим токсином С 2 клостридий. Предпочтительно воспалительное заболевание выбрано из болезни Крона или язвенного колита. Предпочтительным кожным заболеванием является псориаз. Предпочтительно "раковое заболевание" выбрано из рака кровеносной и лимфатической систем, рака кожи, рака пищеварительной системы, рака мочевыделительной системы, рака молочной железы, рака яичника, рака женских половых органов, хориокарциномы, рака легких, опухоли головного мозга, опухоли кости, карциноидной опухоли, рак носоглотки, ретроперитонеальной саркомы, опухолей мягких тканей, рака щитовидной железы, рака яичек или рака печени. Предпочтительно воспалительное заболевание выбрано из болезни Крона или язвенного колита. Предпочтительно кожными заболеваниями являются псориаз, контактный дерматит или атопическая экзема. Указанные молекулы согласно первому, второму, третьему, четвертому, пятому, шестому или седьмому аспектам согласно изобретению могут быть, в частности, использованы в целях приготовления лекарственного средства для лечения указанных заболеваний. В своем девятом аспекте настоящее изобретение относится к способу диагностики заболеваний у пациента, включающему оценку уровня экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или оценку активности полипептида согласно первому аспекту изобретения в ткани указанного пациента и сравнение указанного уровня экспрессии или активности с контрольным уровнем, где уровень, который отличается от указанного контрольного уровня, является показателем заболевания. Такой способ предпочтительно осуществляют in vitro. Аналогичные способы могут быть использованы для мониторинга терапевтического лечения заболевания у пациента, где изменение уровня экспрессии или активности молекулы полипептида или нуклеиновой кислоты в течение определенного периода времени по сравнению с контрольным уровнем служит показателем рецидива заболевания. Предпочтительный способ детекции полипептидов согласно первому аспекту изобретения включает стадии:(а) контактирования лиганда согласно шестому аспекту изобретения, такого как антитело, с биологическим образцом в условиях, подходящих для образования комплекса лиганд-полипептид; и(b) детекции указанного комплекса. Что касается девятого аспекта изобретения, то в этой связи следует отметить, что для детекции аномальных уровней белка существуют различные методы, известные специалисту, такие как методы гибридизации нуклеиновой кислоты с короткими зондами, методы анализа на точковую мутацию, метод амплификации с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и методы с использованием антител. Подобные методы могут быть использованы в короткий или продолжительный период времени, что позволяет проводить мониторинг терапевтического лечения заболевания у пациента. Настоящее изобретение относится также к наборам, которые могут быть использованы в указанных методах диагностики заболевания. Заболеванием, диагностируемым способом согласно девятому аспекту изобретения, предпочтительно является заболевание, в патогенезе которого участвуют белки, содержащие домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно ATR-подобные белки. В своем десятом аспекте настоящее изобретение относится к использованию полипептида согласно первому аспекту изобретения, такому как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно ATR-подобный белок. Подходящим применением полипептидов согласно изобретению, таких как белок, содержащий домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно ATR-подобный белок, является их- 13013251 использование в качестве регуляторов клеточного роста, метаболизма или дифференцировки клеток; в качестве части пары рецептор/лиганд и в качестве диагностического маркера для детекции физиологического или патологического состояния, выбранного из вышеуказанного списка. Другими подходящими применениями являются методы скрининга, осуществляемые для идентификации лигандов и других молекул-агонистов или молекул-антагонистов, которые могут быть использованы в целях терапии и диагностики заболеваний и состояний, для лечения которых применим белок указанной категории. В своем одиннадцатом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции,содержащей полипептид согласно первому аспекту изобретения или молекулу нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту изобретения, или вектор согласно четвертому аспекту изобретения,или клетку-хозяина согласно пятому аспекту изобретения, или лиганд согласно шестому аспекту изобретения, или соединение согласно седьмому аспекту настоящего изобретения, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. В своем двенадцатом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду согласно первому аспекту изобретения, или к молекуле нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту изобретения, или к вектору согласно четвертому аспекту изобретения, или к клетке-хозяину согласно пятому аспекту изобретения, или к лиганду согласно шестому аспекту изобретения, или к соединению согласно седьмому аспекту изобретения, которые могут быть использованы в целях приготовления лекарственного средства для диагностики или лечения заболеваний, включая, без ограничения ими, клеточнопролиферативные расстройства, включая новообразования, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения,нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунные/воспалительные заболевания, включая аллергию, воспалительные заболевания кишечника, артрит, псориаз, воспаление дыхательных путей, астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистые заболевания, включая гипертензию,отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологические расстройства, включая заболевание центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждения головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; нарушения развития; метаболические расстройства, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИД и почечные заболевания; инфекции, включая вирусные инфекции, бактериальные инфекции, грибковые инфекции и паразитарные инфекции, и другие патологические состояния. Такими заболеваниями предпочтительно является одно из заболеваний, в патогенезе которого участвуют белки, содержащие домен vWFA и/илиANTIG, предпочтительно ATR-подобные белки. Примерами заболеваний, в патогенезе которых участвуют белки, содержащие домен vWFA и/илиANTIG, являются бактериальные инфекции, бактериальные интоксикации, сибирская язва, заболевания,ассоциированные с блокадой токсинов (например, бактериальных токсинов), рак, опухоль эндотелия, рак ободочной кишки, рак мочевого пузыря, рак пищевода, рак легких, меланома, ювенильный гиалиновый фиброматоз (ЮГФ), детский системный гиалиноз (ДСГ), болезнь фон Виллебранда, миопатия Бетлема,дистрофический буллузный эпидермолиз, тромбоз, модуляция агрегации, опосредуемой тромбоцитами,аутоиммунные заболевания и воспаления. В своем тринадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания у пациента, предусматривающему введение указанному пациенту полипептида согласно первому аспекту изобретения, или молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту изобретения,или вектора согласно четвертому аспекту изобретения, или клетки-хозяина согласно пятому аспекту изобретения, или лиганда согласно шестому аспекту изобретения, или соединения согласно седьмому аспекту изобретения. В случае если пациент страдает заболеванием, при котором у данного пациента уровень экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или уровень активности полипептида согласно первому аспекту изобретения ниже, чем соответствующий уровень экспрессии или активности у здорового пациента, то полипептид, молекула нуклеиновой кислоты, лиганд или соединение, вводимые указанному пациенту, должны обладать агонистическими свойствами. И, наоборот, в случае если пациент страдает заболеванием, при котором у данного пациента уровень экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или уровень активности полипептида согласно первому аспекту изобретения выше, чем соответствующий уровень экспрессии или активности у здорового пациента, то полипептид, молекула нуклеиновой кислоты, лиганд или соединения, вводимые указанному пациенту, должны обладать антагонистическими свойствами. Примерами таких антагонистов являются молекулы антисмысловой нуклеиновой кислоты, рибозимы и лиганды, такие как антитела. Полипептиды INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 представляют собой белки, содержащие домен vWFA и/или ANTIG, поэтому они играют определенную роль в развитии многих патологических состояний. Антагонисты полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 представляют особый интерес, поскольку они позволяют благоприятно воздействовать на механизм модуляции патологических состояний.- 14013251 В своем четырнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к трансгенным животным или к животным, которые являются дефицитными по полипептиду первого аспекта настоящего изобретения и не являются человеком и которые были трансформированы так, что они экспрессируют более высокие или более низкие уровни указанного полипептида или вообще не экспрессируют такого полипептида. Указанные трансгенные животные являются наиболее подходящими моделями для исследования заболеваний, и могут быть использованы также в способах скрининга в целях идентификации соединений, которые являются эффективными для лечения или диагностики данного заболевания. Используемый здесь термин "функциональный эквивалент" означает молекулу белка или нуклеиновой кислоты, обладающую функциональными или структурными свойствами, в основном аналогичными свойствам молекулы полипептида или нуклеиновой кислоты согласно изобретению. Функциональный эквивалент белка может содержать модификации, если такие модификации необходимы для осуществления конкретной функции. Термин "функциональный эквивалент" включает фрагменты, мутанты, гибриды, варианты, аналоги или химические производные молекулы. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая любой одной или несколькими функциональными активностями полипептидов согласно изобретению. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая, по существу, аналогична активности INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144 или их фрагментов, и измеренная в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая идентична активности или превышает активность INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 или их фрагментов, измеренную в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая составляет 50,60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 100% или более от активности INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 или их фрагментов, измеренной в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть белок или полипептид, обладающий in vivo или in vitro активностью, которая, по существу, аналогична активности полипептидов согласно изобретению. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть белок или полипептид, способный взаимодействовать с другими клеточными или внеклеточными молекулами по механизму, который, по существу, аналогичен механизму взаимодействия соответствующей части полипептидов согласно изобретению. Так, например, в иммуноанализе "функциональный эквивалент" может способствовать снижению способности к связыванию антитела с соответствующим пептидом (т.е. пептидом, имеющим модифицированную аминокислотную последовательность, а поэтому являющимся"функциональным эквивалентом") полипептида согласно изобретению или с самим полипептидом согласно изобретению, где указанное антитело вырабатывается против соответствующего пептида полипептида согласно изобретению. Эквимолярная концентрация указанного функционального эквивалента будет снижать уровень вышеупомянутого связывания соответствующего пептида по меньшей мере примерно на 5%, предпочтительно примерно на 5-10%, более предпочтительно примерно на 10-25%, еще более предпочтительно примерно на 25-30% и наиболее предпочтительно примерно на 40-50%. Так, например, функциональные эквиваленты могут быть полностью функциональными либо у них может отсутствовать одна или несколько активностей. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением модификации могут влиять на функцию, например на активности полипептида, которые подтверждают наличие у них домена vWFA и/или ANTIG. Различные стандартные методы и процедуры, которые могут применяться для осуществления изобретения, систематизированы ниже. При этом следует отметить, что настоящее изобретение не ограничивается описанными конкретными методами, протоколами, клеточными линиями, векторами и реагентами. Следует также отметить, что используемая здесь терминология применяется только для описания конкретных вариантов изобретения, и эта терминология не должна рассматриваться как ограничение объема настоящего изобретения. Объем изобретения ограничен только прилагаемой формулой изобретения. В настоящем описании используются стандартные сокращения, принятые для обозначения нуклеотидов и аминокислот. Если это не оговорено особо, то для осуществления настоящего изобретения используются стандартные методы молекулярной биологии и микробиологии, методы рекомбинантных ДНК и методы иммунологии, которые хорошо известны специалистам в данной области. Более полное описание указанных методов можно найти в литературе. Так, например, наиболее подходящие описания, которые могут быть использованы в качестве консультации, приводятся в следующих работах: Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989), DNA Cloning,Volumes I и II (D.N. Glover, ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed. 1984); Nucleic AcidEdition (Springer Verlag, N.Y.) и Handbook of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D.M. WeirС.С. Blackwell eds. 1986). Используемый здесь термин "полипептид" включает в себя любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислоты, связанные друг с другом пептидными связями или модифицированные пептидными связями, т.е. пептидными изостерами. Этот термин относится как к коротким цепям (пептидам или полипептидам), так и к более длинным цепям (белкам). Полипептид настоящего изобретения может присутствовать в форме зрелого белка либо он может присутствовать в виде пре-, про- или препробелка, который может быть активирован путем отщепления пре-, про- или препрочасти этого белка с продуцированием активного зрелого полипептида. В таких полипептидах, пре-, про- или препропоследовательность может представлять собой лидерную или секреторную последовательность либо она может представлять собой последовательность, используемую для очистки зрелой полипептидной последовательности. Полипептид согласно первому аспекту изобретения может образовывать часть гибридного белка. Так, например, часто оказывается предпочтительным, чтобы данный полипептид включал одну или несколько дополнительных аминокислотных последовательностей, которые могут содержать секреторную или лидерную последовательности, пропоследовательности, последовательности, облегчающие очистку,или последовательности, сообщающие белку более высокую стабильность, например, во время рекомбинантного продуцирования. Альтернативно или дополнительно, зрелый полипептид может быть присоединен к другому соединению, такому как соединение, увеличивающее время полужизни указанного полипептида (например, полиэтиленгликоль). В другом предпочтительном варианте изобретения полипептидом согласно изобретению, который может включать последовательность, имеющую 85%-ную гомологию с последовательностями INSP141,INSP142, INSP143 и INSP144, является гибридный белок. Указанные гибридные белки могут быть получены путем клонирование полипептида, кодирующего полипептид, содержащий последовательность, имеющую 85%-ную гомологию с последовательностямиINSP141, INSP142, INSP143 и INSP144, с сохранением рамки считывания последовательностей, кодирующих последовательности гетерологичных белков. Используемый здесь термин "гетерологичный" означает любой полипептид, отличающийся от полипептида человека INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144. Примерами гетерологичных последовательностей, которые могут присутствовать в гибридных белках у N- или С-конца, являются внеклеточные домены мембрано-связанного белка, константные области иммуноглобулина (Fc-области), домены мультимеризации, домены внеклеточных белков, сигнальные последовательности, "экспортные" последовательности и последовательности, пригодные для очистки методами аффинной хроматографии. Многие из этих гетерологичных последовательностей являются коммерчески доступными и применяются для экспрессии в плазмидах, поскольку эти последовательности обычно вводят в гибридные белки, которые сообщают им дополнительные свойства, но не нарушают специфическую биологическую активность белка, входящего в состав данного гибридного белка (Terpe K., 2003, Appl. Microbiol.Biotechnol., 60: 523-33). Примерами таких дополнительных свойств являются их более продолжительное время полужизни в физиологических жидкостях, внеклеточная локализация или более легкая очистка,осуществляемая с помощью гистидинового фрагмента, так называемой "гистидиновой метки" (Gentz etal. 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 821-4) или метки "НА" эпитопа, полученного из белка гемаглютинина [вируса] гриппа (Wilson et al. 1994, Cell, 37: 767-78). Если необходимо, то гетерологичные последовательности могут быть элиминированы путем протеолитического расщепления, например путем встраивания протеолитического сайта расщепления между белком и гетерологичной последовательностью и обработки очищенного гибридного белка соответствующей протеазой. Эти свойства являются особенно ценными для гибридных белков, поскольку они облегчают их продуцирование и использование в целях приготовления фармацевтических композиций. Так, например, полипептид INSP141, INSP142,INSP143 или INSP144 может быть очищен с помощью гексагистидинового пептида, присоединенного к С-концу INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144. Если данный гибридный белок содержит иммуноглобулиновую область, то указанный гибрид может быть получен путем прямого присоединения компонентов или путем их присоединения посредством короткого линкерного пептида, длина которого может составлять по меньшей мере 1-3 аминокислотных остатка или более, например 13 аминокислотных остатков. Указанным линкером может быть, например, трипептид с последовательностью E-F-M(Glu-Phe-Met) или линкерная последовательность, состоящая из 13 аминокислот и содержащая последовательность Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met (SEQ ID NO:151), встроенную между полипептидом согласно изобретению и последовательностью иммуноглобулина. Полученный гибридный белок обладает улучшенными свойствами, такими как более длительное время присутствия в физиологических жидкостях (т.е. повышенное время полужизни), повышенная удельная активность, повышенный- 16013251 уровень экспрессии или его способность легко подвергаться очистке. В предпочтительном варианте изобретения полипептид присоединяют к константной области молекулы Ig. Предпочтительно такой полипептид присоединяют к областям тяжелой цепи, таким как домены СН 2 и СН 3 человеческого IgG1. Для генерирования гибридных белков согласно изобретению подходящими также являются и другие изоформы Ig, такие как изоформы IgG2 или IgG4 или Ig других классов,например IgM или IgA. Гибридные белки могут быть мономерными или мультимерными, а также гетероили гомомультимерными.INSP141, INSP142 или внеклеточные части INSP141 или INSP144 могут быть использованы как таковые или как компоненты гибридных белков, таких как Fc-гибриды и/или в комбинации с другими агентами. В другом варианте изобретения функциональное производное содержит по меньшей мере одну молекулу, присоединенную к одной или нескольким функциональным группам, которые присутствуют в виде одной или нескольких боковых цепей на аминокислотных остатках. Одной из таких молекул предпочтительно является полиэтиленовая (ПЭГ) молекула. ПЭГилирование может быть осуществлено различными известными методами, такими как методы, описанные, например, в WO 99/55377. Полипептиды могут содержать аминокислоты, которые отличаются от 20 аминокислот, кодируемых генами, и которые являются модифицированными либо в результате природных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, либо в результате применения химических методов модификации,хорошо известных специалистам. Примерами известных модификаций, которые могут быть осуществлены в полипептидах настоящего изобретения, являются гликозилирование, присоединение липида, сульфирование, гамма-карбоксилирование, например остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование иADP-рибозилирование. Другими возможными модификациями являются ацетилирование, ацилирование,амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение молекулы гема, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липидного производного, ковалентное присоединение фосфатидилинозита, перекрестное связывание, циклизация, образование дисульфидной связи, деметилирование, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, образование GPI-якоря,иодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизация, селеноилирование, присоединение аминокислот к белкам,опосредуемое переносом РНК, такое как аргинилирование, и убихитинизация. Модификации могут присутствовать в любой области полипептида, включая пептидный остов,аминокислотные боковые цепи и амино- или карбоксиконцы. Действительно, блокирование амино- или карбоксиконца в полипептиде либо того и другого посредством ковалентной модификации является обычным процессом, происходящим в природных и синтетических полипептидах, и такие модификации могут присутствовать в полипептидах настоящего изобретения. Модификации, которые присутствуют в полипептиде, в большинстве случаев будут зависеть от способа получения данного полипептида. Для полипептидов, полученных рекомбинантным методом,природа и степень модификации по большей части будут определяться способностью к посттрансляционной модификации конкретной клетки-хозяина и присутствием сигналов модификации в аминокислотной последовательности рассматриваемого полипептида. Так, например, характер гликозилирования может варьироваться у клеток-хозяев различного типа. Полипептиды настоящего изобретения могут быть получены любым подходящим способом. Такими полипептидами являются выделенные природные полипептиды (например, выделенные из клеточной культуры), полипептиды, продуцированные рекомбинантным методом (включая гибридные белки), синтетические полипептиды или полипептиды, продуцированные с использованием комбинации этих методов. Функционально-эквивалентные полипептиды согласно первому аспекту настоящего изобретения могут представлять собой полипептиды, гомологичные полипептидам экзонов INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144 и полипептидам INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144. Два полипептида могут быть определены используемым здесь термином "гомологичные", если последовательность одного из этих полипептидов имеет достаточно высокую степень идентичности или сходства с последовательностью другого полипептида. Термин "идентичность" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей эти две последовательности имеют идентичные аминокислотные остатки. Термин "сходство" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей эти две последовательности имеют аминокислотные остатки аналогичного типа. Степень идентичности и сходства может быть легко вычислена (Computational Molecular Biology, Lesk A.M. ed.,Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing Informatics и Genome Projects, Smith D.W. ed.,Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin A.M.Griffin H.G.,eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G. Academic- 17013251 Поэтому гомологичными полипептидами являются природные биологические варианты (например,аллельные варианты или варианты полипептидов, образовавшиеся в результате географических изменений видов, от которых эти полипептиды происходят) и мутанты (такие как мутанты, содержащие аминокислотные замены, инсерции или делеции) полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144. Такими мутантами могут быть полипептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков заменены консервативным или неконсервативным аминокислотным остатком (предпочтительно консервативным аминокислотным остатком), и такой замененный аминокислотный остаток может быть, а может и не быть, остатком, кодируемым генетическим кодом. Обычно такие замены происходят между Ala, Val, Leu и Ile; между Ser и Thr; между кислотными остатками Asp и Glu; между Asn и Gln; между основными остатками Lys и Arg или между ароматическими остатками Phe и Tyr. Особенно предпочтительными являются варианты, в которых несколько,т.е. от 5 до 10, от 1 до 5, от 1 до 3, от 1 до 2 аминокислот или только одна аминокислота являются замененными, делетированными или добавленными в любой комбинации. Особенно предпочтительными являются "молчащие" замены, добавления и делеции, которые не влияют на свойства и активность указанного белка. Также предпочтительными являются консервативные замены. Такими мутантами также являются полипептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков имеют группузаместитель. В соответствии с настоящим изобретением любая замена должна быть предпочтительно "консервативной" или "допустимой" заменой, которую обычно определяют как замену, вводящую аминокислоты,имеющие аналогичные химические свойства (например, основная положительно заряженная аминокислота должна быть заменена другой основной, положительно заряженной аминокислотой), которые являются достаточными для сохранения структуры и биологической функции данной молекулы. В литературе описано множество моделей, с помощью которых может быть осуществлен отбор консервативных аминокислотных замен исходя из статистических и физико-химических исследований последовательности и/или структуры белков (Rogov S.I. и Nekrasov A.N., 2001). Эксперименты по конструированию белков показали, что использование специфических подпоследовательностей аминокислот позволяет продуцировать белки с соответствующей пространственной упаковкой и активные белки и классифицировать аминокислотные "синонимичные" замены, которые могут легко адаптироваться к белковой структуре и которые могут быть использованы для детекции функциональных и структурных гомологов и паралогов (Murphy L.R. et al., 2000). Группы синонимичных аминокислот и группы более предпочтительных синонимичных аминокислот представлены в табл. 1. В полипептиды согласно изобретению могут быть также введены в различных целях специфические неконсервативные мутации. Мутации, снижающие аффинность гликопротеина клеточной поверхности, допускают возможность повторного использования этих полипептидов, а также их применения в других целях, что потенциально повышает их терапевтическую эффективность. (Robinson C.R., 2002). Иммуногенные эпитопы, фактически присутствующие в полипептидах согласно изобретению, могут быть использованы для разработки вакцин (Stevanovic S., 2002) либо они могут быть удалены путем модификации их последовательности известными методами отбора мутаций, для повышения стабильности белка и коррекции этих эпитопов (van den Burg В.Eijsink V, 2002; WO 02/05146, WO 00/34317 иWO 98/52976). Предпочтительной альтернативой синонимичным группам для аминокислотных производных,включенных в пептидомиметики, являются группы, определенные в табл. 2. Неисчерпывающий список аминокислотных производных также включает аминоизомасляную кислоту (Aib), гидроксипролин (Hyp), 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-COOH, индолин-2-карбоновую кислоту, 4-дифторпролин,L-тиазолидин-4-карбоновую кислоту, L-гомопролин, 3,4-дегидропролин, 3,4-дигидроксифенилаланин,циклогексилглицин и фенилглицин. Термин "аминокислотное производное" означает аминокислоту, не входящую в 20 кодируемых генетическим кодом природных аминокислот, или химическую молекулу, подобную такой аминокислоте. В частности, такое аминокислотное производное может содержать замещенные или незамещенные молекулы, молекулы с прямой цепью, молекулы с разветвленной цепью или циклоалкильные молекулы, а также оно может включать один или несколько гетероатомов. Указанные аминокислотные производные могут быть получены de novo либо они могут быть взяты из коммерчески доступных источников(Calbiochem-Novabiochem A.G., Switzerland; Bachem, USA). Различные методы включения неприродных аминокислотных производных в белки с использованием in vitro и in vivo систем трансляции для зондирования и/или улучшения структуры и функции белков описаны в литературе (Dougherty D.A., 2000). Методы синтеза и получения пептидомиметиков, а также непептидомиметиков также хорошо известны специалистам (Golebiowski A. et al., 2001; Hruby V.J.Balse P.M., 2000; Sawyer T.K. "Structure Based Drug Design", edited by Veerapandian P., Marcel Dekker Inc.,p. 557-663, 1997). Обычно, считается, что два полипептида, имеющие более чем 30%-ную идентичность, являются функционально эквивалентными. Предпочтительно, чтобы последовательности функционально эквивалентных полипептидов согласно первому аспекту изобретения были более чем на 80% идентичны после- 18013251 довательностям полипептидам экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидам INSP141,INSP142, INSP143 и INSP144 или их активных фрагментов. Более предпочтительными являются полипептиды, имеющие степень идентичности более чем 85, 90, 95, 98 или 99% соответственно. Функционально-эквивалентными полипептидами согласно первому аспекту изобретения могут быть также полипептиды, которые были идентифицированы с применением одного или нескольких методов структурного сопоставления первичных последовательностей путем их выравнивания. Так, например, технология информационной обработки потока геномных данных (Inpharmatica Genome Threader),которая составляет один из аспектов способа поиска, используемых для генерирования базы данных поиска Biopendium, может быть применена (см. заявку РСТ WO 01/69507) в целях идентификации полипептидов с неизвестными функциями, в отношении которых, несмотря на их низкую степень идентичности по сравнению с полипептидами экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидамиINSP141, INSP142, INSP143 и INSP144, высказывается предположение, что они представляют собой белки, содержащие vWFA и/или ANTIG, где указанное предположение основано на их значительной структурной гомологии с последовательностью полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 иINSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144. Термин "значительная структурная гомология" означает структурную гомологию двух белков, которая может быть предсказана с помощью технологии Inpharmatica Genome Threader с достоверностью по меньшей мере 10% и выше. Полипептиды согласно первому аспекту изобретения также включают фрагменты полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и фрагменты функциональных эквивалентов полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 при условии, что эти фрагменты представляют собой белки, содержащие домены vWFA и/или ANTIG, или имеют общую антигенную детерминанту с белками, содержащими домен vWFA и/или ANTIG. Используемый здесь термин "фрагмент" означает полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая является идентичной части, но не всей, аминокислотной последовательности полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 иINSP144 либо одному из его функциональных эквивалентов. Эти фрагменты должны содержать по меньшей мере n смежных аминокислот данной последовательности, и в зависимости от конкретной последовательности указанное число n предпочтительно равно 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18,20 или более). Небольшие фрагменты могут образовывать антигенную детерминанту. Нуклеиновые кислоты согласно изобретению имеют длину, которая предпочтительно составляет 10-2000, более предпочтительно 10-1750 нуклеотидов, еще более предпочтительно 500-1500, наиболее предпочтительно 600-1200, еще наиболее предпочтительно 750-1000 нуклеотидов. Полипептиды согласно изобретению имеют длину, которая предпочтительно составляет 10-700 аминокислот, более предпочтительно 50-600, еще более предпочтительно 100-500, наиболее предпочтительно 200-400, еще наиболее предпочтительно 300-375 аминокислот. Фрагменты полноразмерных полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 могут состоять из комбинаций 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15, 16 или 17 последовательностей смежных экзонов в полипептидах INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144, соответственно. Указанные фрагменты могут присутствовать в "свободной форме", т.е. они не являются частью другого полипептида или не присоединены к другим аминокислотам или полипептидам либо они могут быть включены в состав более крупного полипептида, часть или область которого они образуют. Если фрагмент настоящего изобретения входит в состав более крупного полипептида, то наиболее предпочтительно, чтобы такой фрагмент образовывал одну непрерывную область. Так, например, некоторые предпочтительные варианты настоящего изобретения относятся к фрагменту, имеющему пре- и/или прополипептидную область, присоединенную к аминоконцу указанного фрагмента, и/или дополнительную область, присоединенную к карбоксильному концу этого фрагмента. Однако в состав одного более крупного полипептида могут входить несколько фрагментов. Полипептиды настоящего изобретения или их иммуногенные фрагменты (содержащие по меньшей мере одну антигенную детерминанту) могут быть использованы для генерирования лигандов, таких как поликлональные или моноклональные антитела, которые обладают иммуноспецифичностью к таким полипептидам. Указанные антитела могут быть использованы для выделения или для идентификации клонов, экспрессирующих полипептиды настоящего изобретения, или для очистки данных полипептидов аффинной хроматографией. Как совершенно очевидно для любого специалиста, такие антитела, помимо других применений, могут быть использованы также в качестве диагностических или терапевтических средств. Термин "иммуноспецифический" означает, что данные антитела имеют в основном более высокую аффинность к полипептидам настоящего изобретения, чем к другим родственным полипептидам, описанным ранее. Используемый здесь термин "антитело" означает интактные молекулы, а также их фрагменты, такие как Fab, F(ab')2 и Fv, которые способны связываться с рассматриваемой антигенной детер- 19013251 минантой. Такие антитела связываются с полипептидами первого аспекта настоящего изобретения. Под понятием "значительно более высокая аффинность" авторы подразумевают заметно более высокую аффинность полипептида согласно изобретению по сравнению с аффинностью известных белков,содержащих домен vWFA и/или ANTIG, предпочтительно ATR-подобных белков. При этом предпочтительно, чтобы аффинность по отношению к полипептиду согласно изобретению по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10, 100, 103, 104, 105, 106 раз или более превышала аффинность по отношению к известным белкам, содержащим домен vWFA и/или ANTIG. При этом предпочтительно, чтобы аффинность по отношению к полипептиду согласно изобретению значительно превышала аффинность по отношению к известным белкам, содержащим домен vWFA и/или ANTIG. Если предпочтительными являются поликлональные антитела, то выбранное млекопитающее, такое как мышь, кролик, коза или лошадь, может быть иммунизовано полипептидом согласно первому аспекту изобретения. Полипептид, используемый для иммунизации животного, может быть получен методами рекомбинантных ДНК либо он может быть синтезирован методом химического синтеза. Если необходимо, то данный полипептид может быть конъюгирован с белком-носителем. Обычно используемыми носителями, к которым могут быть химически присоединены данные полипептиды, являются альбумин бычьей сыворотки, тироглобулин и гемоцианин лимфы улитки. Такой связанный полипептид может быть затем использован для иммунизации животного. Сыворотку, взятую у иммунизованного животного,собирают и обрабатывают известными методами, например иммуноаффинной хроматографией. Моноклональные антитела против полипептидов согласно первому аспекту изобретения могут быть легко получены специалистом в данной области. Общая методика получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии хорошо известна специалистам (см. например, Kohler G.Milstein, С. Nature, 256: 495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today, 4: 72(1983); Cole et al., 77-96,Monoclonal Antibodies и Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985. Панели моноклональных антител, продуцированных против полипептидов согласно первому аспекту изобретения, могут быть скринированы на различные свойства, т.е. на изотип, эпитоп, аффинность и т.п. Моноклональные антитела являются особенно подходящими для очистки отдельных полипептидов,против которых они направлены. Альтернативно, гены, кодирующие нужные моноклональные антитела,могут быть выделены из гибридом, например, методами ПЦР, известными специалистам, а также они могут быть клонированы и экспрессированы в соответствующих векторах. Могут быть использованы также и химерные антитела, в которых нечеловеческие вариабельные области соединены или лигированы с человеческими константными областями (см. например, Liu et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 3439 (1987. Эти антитела могут быть модифицированы так, чтобы они были менее иммуногенными для индивидуума, например путем их "гуманизации" (см., Jones et al., Nature, 321, 522 (1986); Verhoeyen et al.,Science, 239, 1534 (1988); Rabat et al., J. Immunol., 147, 1709 (1991); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,USA, 86, 10029 (1989); Gorman et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 88, 34181 (1991) и Hodgson et al.,Bio/Technology, 9, 421 (1991. Используемый здесь термин "гуманизованное антитело" означает молекулы антитела, в которых аминокислоты CDR и другие выбранные аминокислоты в вариабельных доменах тяжелой и/или легкой цепей нечеловеческого донорного антитела были заменены эквивалентными аминокислотами человеческого антитела. Таким образом, гуманизованное антитело имеет близкое сходство с человеческим антителом, но при этом оно обладает способностью связываться с донорным антителом. В другом альтернативном варианте изобретения таким антителом может быть "биспецифическое" антитело, т.е. антитело, имеющее два различных антигенсвязывающих домена, каждый из которых обладает специфичностью к различным эпитопам. Для отбора генов, кодирующих антитела, обладающие способностью связываться с полипептидами согласно изобретению, либо из набора ПЦР-амплифицированных V-генов лимфоцитов человека, скринированных на способность вырабатывать соответствующие антитела, либо из библиотеки "необученных" лимфоцитов может быть использована техника фагового представления (McCafferty J. et al. (1990),Nature 348, 552-554; Marks J. et al. (1992) Biotechnology 10, 779-783). Аффинность этих антител может быть также повышена путем перестановки цепей (Clackson Т. et al. (1991), Nature, 352, 624-628). Антитела, генерированные вышеописанными методами, независимо от того, являются ли они поликлональными или моноклональными, обладают и другими ценными свойствами, т.е. они могут быть использованы в качестве реагентов в иммуноанализах, радиоиммуноанализах (РИА) или твердофазных иммуноферментных анализах (ELISA). Для использования в этих целях антитела могут быть помечены аналитически детектируемым реагентом, таким как радиоизотоп, флуоресцентная молекула или фермент.- 20013251 Предпочтительными молекулами нуклеиновых кислот второго и третьего аспектов настоящего изобретения являются молекулы, кодирующие полипептидную последовательность, представленную вSEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74,SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134,SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146,SEQ ID NO:148 или SEQ ID NO:150, и их функционально эквивалентные полипептиды. Молекулы нуклеиновых кислот согласно изобретению предпочтительно содержат по меньшей мереn смежных нуклеотидов описанных здесь последовательностей, где n в зависимости от конкретной последовательности составляет 10 или более (например, 12, 14, 15, 18, 20, 25, 30, 35, 40 или более). Молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению также являются последовательности,комплементарные последовательностям молекул нуклеиновой кислоты, описанных выше (например,используемых в качестве антисмысловых последовательностей или в качестве зондов). Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут присутствовать в форме РНК, такой как мРНК, или в форме ДНК, включая, например, кДНК, синтетическую ДНК или геномную ДНК. Такие молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены методами клонирования, химического синтеза или их комбинацией. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены, например, методом химического синтеза, таким как твердофазный фосфорамидитный химический синтез, выделение из геномных или кДНК-библиотек или выделение из соответствующего организма. РНК-молекулы могут быть в основном генерированы путем in vitro- или in vivo-транскрипции ДНК-последовательностей. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть двухцепочечными или одноцепочечными. Одноцепочечной ДНК может быть кодирующая цепь, известная также как смысловая цепь, либо некодирующая цепь, также называемая антисмысловой цепью. Термин "молекула нуклеиновой кислоты" также охватывает аналоги ДНК и РНК, такие как аналоги,содержащие модифицированные остовы и связанные с пептидом нуклеиновые кислоты (PNA). Используемый здесь термин "PNA" означает антисмысловую молекулу или антиген, который содержит олигонуклеотид, состоящий по меньшей мере из пяти нуклеотидов и присоединенный к пептидному остову из аминокислотных остатков, которые предпочтительно заканчиваются лизином. Этот концевой лизин сообщает данной композиции растворимость. PNA могут быть ПЭГилированы для продления их времени жизни в клетке, где они предпочтительно связываются с комплементарной одноцепочечной ДНК и РНК и прекращают элонгацию транскрипта (Nielsen P.E. et al. (1993), Anticancer Drug Des. 8: 53-63). Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно изобретению, может быть идентична кодирующей последовательности одной или нескольких описанных здесь молекул нуклеиновой кислоты. Эти молекулы могут также иметь различные последовательности, которые вследствие вырожденности генетического кода кодируют полипептид, представленный в любой из последовательностейSEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74,SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134,SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:146,SEQ ID NO:148 или SEQ ID NO:150. Такими молекулами нуклеиновой кислоты могут быть, без ограничения ими, последовательность,кодирующая только зрелый полипептид; кодирующая последовательность зрелого полипептида и дополнительные кодирующие последовательности, такие как последовательности, кодирующие лидерную или секреторную последовательность, такую как про-, пре- или препрополипептидную последовательность; кодирующая последовательность зрелого полипептида с вышеупомянутыми дополнительными коди- 21013251 рующими последовательностями или без них, либо вместе с другими дополнительными некодирующими последовательностями, включая некодирующие 5'- и 3'-последовательности, такие как транскрибированные нетранслируемые последовательности, которые играют определенную роль в транскрипции (включая сигналы терминации), в связывании с рибосомой и в обеспечении стабильности мРНК. Молекулами нуклеиновой кислоты могут быть также вспомогательные последовательности, кодирующие дополнительные аминокислоты, такие как аминокислоты, обладающие дополнительными функциональными свойствами. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму и третьему аспектам изобретения могут также кодировать фрагменты или функциональные эквиваленты полипептидов и фрагментов согласно первому аспекту изобретения. Указанная молекула нуклеиновой кислоты может представлять собой природный вариант, такой как природный аллельный вариант, либо такая молекула может представлять собой вариант, не встречающийся в природе. Указанные неприродные варианты молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены методами мутагенеза, включая методы, применяемые к молекулам нуклеиновой кислоты, к клеткам или к целым организмам. Среди рассматриваемых вариантов имеются варианты, которые отличаются от вышеупомянутых молекул нуклеиновой кислоты тем, что они имеют нуклеотидные замены, делеции или инсерции. Такие замены, делеции или инсерции могут быть сделаны в одном или нескольких нуклеотидах. Указанные варианты могут быть модифицированы в кодирующей или в некодирующей области либо в той и другой областях. Альтерации в кодирующих областях могут приводить к консервативным или неконсервативным аминокислотным заменам, делециям или инсерциям. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также сконструированы методами, в основном известными специалистам, включая в зависимости от целей применения модификацию клонирования, процессинг и/или экспрессию генного продукта (полипептида). Перестановка ДНК путем рандомизированной фрагментации и повторной сборки генных фрагментов и синтетических олигонуклеотидов с помощью ПЦР представляет собой технологию, которая может быть использована для конструирования нуклеотидных последовательностей. Сайт-направленный мутагенез может быть использован для введения новых рестрикционных сайтов, изменения характера гликозилирования, изменения предпочтительности кодонов, продуцирования вариантов сплайсинга, введения мутаций и т.п. Молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид согласно первому аспекту изобретения, могут быть лигированы с гетерологичной последовательностью так, чтобы полученная комбинированная молекула нуклеиновой кислоты кодировала гибридный белок. Такие комбинированные молекулы нуклеиновой кислоты входят во второй или третий аспект настоящего изобретения. Так, например,для скрининга пептидных библиотек на ингибиторы активности указанного полипептида с использованием такой комбинированной молекулы нуклеиновой кислоты может оказаться полезным осуществление экспрессии гибридного белка, который может распознаваться коммерчески доступным антителом. Гибридный белок может быть также сконструирован так, чтобы он содержал сайт расщепления, локализованный между последовательностью полипептида согласно изобретению и последовательностью гетерологичного белка и чтобы такой полипептид мог быть отщеплен и выделен из указанного гетерологичного белка. Молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также антисмысловые молекулы, которые частично комплементарны молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептиды согласно изобретению, поэтому они гибридизуются с кодирующими молекулами нуклеиновой кислоты(гибридизация). В соответствии с методами, известными среднему специалисту в данной области, такие антисмысловые молекулы, например олигонуклеотиды, могут быть сконструированы так, чтобы они распознавали нужную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид согласно изобретению, специфически связывались с этой нуклеиновой кислотой и тем самым предотвращали ее транскрипцию (см. например, Cohen J.S., Trends in Pharm. Sci., 10, 435 (1989), Okano, J. Neurochem. 56, 560 (1991); O'Connor, J.(1988); Dervan et al., Science, 251, 1360 (1991. Используемый здесь термин "гибридизация" означает присоединение двух молекул нуклеиновой кислоты друг к другу посредством водородных связей. Обычно одна молекула может быть фиксирована на твердом носителе, а другая молекула может находиться в растворе в свободном состоянии. Затем эти две молекулы могут быть подвергнуты контакту друг с другом в условиях, благоприятствующих образованию водородной связи. Факторами, влияющими на образование таких связей, являются тип и объем растворителя; температура реакции; время гибридизации; перемешивание; присутствие агентов, блокирующих неспецифическое связывание молекулы в жидкой фазе с твердым носителем (реагент Денхардта или BLOTTO); концентрация молекул; использование соединений, повышающих скорость ассоциации молекул (декстрансульфата или полиэтиленгликоля); и жесткость условий промывки после гибридизации (Sambrook et al. [см. выше]). Ингибирование гибридизации полностью комплементарной молекулы с молекулой-мишенью может быть оценено с использованием гибридизационного анализа, известного специалистам (Sambrook etal. [см. выше]). По существу, гомологичная молекула будет конкурировать с полностью гомологичной- 22013251 молекулой за связывание с молекулой-мишенью и ингибировать это связывание в различных условиях жесткости, как описано у Wahl G.M. и S.L. Berger (1987; Methods Enzymol. 152: 399-407) и Kimmel A.R.(1987; Methods Enzymol. 152: 507-511). Термин "жесткость" означает условия реакции гибридизации, которые благоприятствуют ассоциации молекул с большим сходством, но не способствуют ассоциации отличающихся молекул. Условия гибридизации высокой жесткости определяют как условия инкубирования в течение ночи при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5X SSC (150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрийцитрат), 50 мМ фосфат натрия (pH 7,6), 5 раствор Денхардта, 10% декстрансульфата и 20 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, с последующей промывкой фильтров в 0,1X SSC приблизительно при 65 С. Условия низкой жесткости предусматривают реакцию гибридизации, осуществляемую при 35 С(Sambrook et al. [см. выше]). Предпочтительными условиями гибридизации являются условия гибридизации высокой жесткости. В предпочтительных вариантах этого аспекта настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые по всей своей длине по меньшей мере на 70% идентичны молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептиды экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептиды INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144, и молекулам нуклеиновой кислоты, которые в основном комплементарны указанным молекулам нуклеиновой кислоты. В соответствии с этим аспектом настоящего изобретения предпочтительно, чтобы молекула нуклеиновой кислоты содержала область, которая по всей своей длине по меньшей мере на 80% идентична такой кодирующей последовательности, либо молекула нуклеиновой кислоты была комплементарна указанной молекуле. При этом особенно предпочтительно, чтобы молекулы нуклеиновой кислоты по всей своей длине были по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, а особенно предпочтительно по меньшей мере на 98, 99% или более идентичны указанным последовательностям. Предпочтительными вариантами этого аспекта являются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды, которые обладают в основном такой же биологической функцией или активностью, как и полипептиды экзонов INSP141, INSP142, INSP143 иINSP144 и полипептиды INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144. Настоящее изобретение относится к способу детекции молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению, включающему в себя стадии:(а) контактирования нуклеинового зонда согласно изобретению с биологическим образцом в условиях гибридизации, способствующих образованию дуплексов; и(b) детекции любого из таких образованных дуплексов. Как будет дополнительно обсуждаться ниже в связи с анализами, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, молекула нуклеиновой кислоты, описанная выше, может быть использована в качестве гибридизационного зонда для РНК, кДНК или геномной ДНК в целях выделения полноразмерных кДНК и геномных клонов, кодирующих полипептиды INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144, и в целях выделения кДНК и геномных клонов гомологичных и ортологичных генов, имеющих высокую степень сходства с генами, кодирующими этот полипептид. В этой связи, наряду с другими известными методами, могут быть использованы методы, описанные и обсуждаемые ниже в качестве иллюстрации. Методы секвенирования и анализа ДНК хорошо известны и в основном доступны специалистам и могут быть реально использованы для осуществления многих вариантов согласно изобретению, обсуждаемых в настоящем изобретении. В указанных методах могут использоваться ферменты, такие как фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I, секвеназа (US(Amersham, Chicago, IL) или комбинация таких полимераз и, корректирующие экзонуклеазы, такие как экзонуклеазы, присутствующие в ELONGASE Amplification System и поставляемые Gibco/BRL(Gaithersburg, MD). Способ секвенирования может быть предпочтительно автоматизирован с использованием устройств, таких как аппарат Hamilton Micro Lab 2200 (Hamilton, Reno, NV), термоячейка Peltier(Perkin Elmer). Одним из методов выделения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с функцией, эквивалентной функции полипептида INSP141, INSP142, INSP143 или INSP144, является зондирование библиотеки геномных ДНК или кДНК природным или искусственно сконструированным зондом в соответствии со стандартными процедурами, известными специалистам (см., например, "CurrentYork, 1989, 1992). Особенно подходящими являются зонды, содержащие по меньшей мере 15, предпочтительно по меньше мере 30, более предпочтительно по меньшей мере 50 непрерывно следующих друг за другом оснований, которые соответствуют или комплементарны последовательностям нуклеиновой кислоты, происходящей от соответствующего кодирующего гена SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41,- 23013251SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65,SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77,SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:137,SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:147 и/или SEQ ID NO:149. Для облегчения идентификации такие зонды могут быть помечены аналитически детектируемым реагентом. Подходящими реагентами являются, без ограничения ими, радиоизотопы, флуоресцентные красители и ферменты, способные катализировать образование детектируемого продукта. С использованием этих зондов средний специалист в данной области может самостоятельно выделить комплементарные копии полинуклеотидов геномной ДНК, кДНК или РНК, кодирующих представляющие интерес белки, происходящие от различных источников, например человека, млекопитающего или других животных, и скринировать эти источники на присутствие родственных последовательностей, например отдельных членов семейства, типа и/или подтипа. Во многих случаях выделенные кДНК-последовательности будут неполными, т.е. в этих последовательностях область, кодирующая полипептид, будет сильно обрезана, обычно у 5'-конца. Для получения полноразмерных кДНК или для удлинения коротких кДНК существует несколько методов. Такие последовательности можно удлинить с использованием неполной нуклеотидной последовательности и с применением различных известных методов детекции выше расположенных последовательностей, таких как промоторы и регуляторные элементы. Так, например, одним из методов, который может быть использован в данном случае, является метод быстрой амплификации кДНК-концов (RACE; см., например,Frohman et al., PNAS USA, 85, 8998-9002, 1998). Недавно разработанные модификации этой технологии,проиллюстрированные Marathon (Clontech Laboratories Inc.), значительно упростили поиск более длинных кДНК. Для поиска неизвестной последовательности нуклеиновой кислоты, которая является смежной с известным локусом, может быть использован слегка модифицированный метод, который называется "сайт-рестрикционной" ПЦР и предусматривает использование универсальных праймеров (Sarkar G.(1993), PCR Methods Applic. 2: 318-322). Для амплификации или для удлинения последовательностей с использованием различных праймеров, полученных на основе известной области, может быть использована также обратная ПЦР (Triglia Т. et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16: 8186). Другим методом, который может быть использован в данном случае, является ПЦР "с захватом", которая представляет собой ПЦРамплификацию ДНК-фрагментов, смежных с известной последовательностью в искусственной хромосомной ДНК человека и дрожжей (Lagerstrom M. et al. , (1991), PCR Methods Applic. 1, 111-119). Другим методом, который может быть использован для поиска неизвестных последовательностей, является метод Parker J.D. et al. (1991); Nucleic Acids Res. 19: 3055-3060. Кроме того, можно использовать ПЦР,"гнездовые" праймеры и библиотеки PromoterFinderTM для "прогулки" по геномной ДНК (Clontech, PaloAlto, CA). Этот способ позволяет избежать необходимости скрининга библиотек и может быть использован для обнаружения участков стыка интрон/экзон. При скрининге на полноразмерные кДНК предпочтительно использовать библиотеки, которые были отобраны по размерам и содержат более крупные кДНК. Предпочтительными также являются библиотеки рандомизированных праймеров, которые могут включать дополнительные последовательности,содержащие 5'-области генов. Использование библиотеки рандомизированных праймеров может оказаться особенно предпочтительным в том случае, если библиотека oligo-d(T) не дает полноразмерной кДНК. Геномные библиотеки могут быть использованы для удлинения последовательности с получением 5'-нетранскрибируемых регуляторных областей. В одном из вариантов осуществления изобретения молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть использованы для определения локализации в хромосоме. В этом методе молекула нуклеиновой кислоты может быть нацелена на конкретный участок, либо она может быть гибридизована с конкретным участком на отдельной хромосоме человека. В соответствии с настоящим изобретением картирование релевантных последовательностей в хромосомах является важной стадией в подтверждение корреляции этих последовательностей с геноассоциированным заболеванием. После картирования последовательности и определения ее точной хромосомной локализации физическое положение последовательности на хромосоме может быть сопоставлено с данными генетической карты. Эти данные можно найти, например, в работе V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (имеющейся в настоящее время в библиотеке Уэлльского медицинского университета Джона Хопкинса) (John Hopkins University WelchMedical Library). Взаимосвязь между генами, которые могут быть картированы на одной и той же области хромосомы, и заболеваниями, ассоциированными с ними, затем идентифицируют с помощью анализа на сцепление генов (совместное наследование физически смежных генов). Это позволяет исследователям получить ценную информацию, которая может быть использована для поиска генов, ассоциированных с данным заболеванием, с применением метода позиционного клонирования или других методов обнару- 24013251 жения генов. После предварительного определения локализации генов, ассоциированных с данным заболеванием или синдромом, путем анализа на сцепление генов с конкретной областью генома любое картирование последовательностей на данном участке может дать информацию об ассоциированных или регуляторных генах, которая может быть использована для последующих исследований. Молекула нуклеиновой кислоты может быть использована также для детекции различий в хромосомной локализации,обусловленных транслокацией, инверсией и т.п. у нормальных индивидуумов, индивидуумов-носителей и у индивидуумов, страдающих заболеванием. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению также являются ценным материалом для определения локализации в тканях. Такие методы позволяют определять характер экспрессии полипептида в тканях путем детекции мРНК, которая их кодирует. Такими методами являются методы гибридизации in situ и методы амплификации нуклеотидов, такие как ПЦР. Результаты этих исследований позволяют получить определенные сведения относительно нормальных функций данного полипептида в организме. Кроме того, в этих исследованиях сравнение нормального характера экспрессии мРНК с экспрессией мРНК, кодируемой мутантным геном, позволяет получить важную информацию о роли мутантных полипептидов в данном заболевании. Такая аномальная экспрессия может иметь кратковременную, пространственную или количественную природу. Для ингибирования эндогенной экспрессии гена, кодирующего полипептид согласно изобретению,могут быть использованы также методы "отключения" гена. Одним из методов, который может быть использован для "отключения" последовательность-специфического посттрансляционного гена, является интерференция РНК (RNAi) (Elbashir S.M. et al., Nature, 2001, 411, 494-498). Короткие дцРНКолигонуклеотиды синтезируют in vitro и вводят в клетку. Последовательность-специфическое связывание этих дцРНК-олигонуклеотидов запускает процесс деградации мРНК-мишени, что приводит к снижению уровня или к отмене экспрессии белка-мишени. Эффективность методов "отключения" гена, описанных выше, может быть оценена путем определения уровня экспрессии полипептидов (например, с помощью Вестерн-блоттинга), а на РНК-уровне она может быть оценена с помощью методики, основанной на TaqMan. Векторы согласно изобретению содержат молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению и могут представлять собой клонирующие или экспрессирующие векторы. Клетки-хозяева согласно изобретению, которые могут быть трансформированы, трансфецированы или трансдуцированы векторами согласно изобретению, могут представлять собой прокариотические или эукариотические клеткихозяева. Полипептиды согласно изобретению могут быть получены в рекомбинантной форме посредством экспрессии кодирующих эти полипептиды молекул нуклеиновой кислоты в векторах, содержащихся в клетке-хозяине. Такие методы экспрессии хорошо известны специалистам и многие их них подробно описаны у Sambrook et al. (см. выше) и FernandezHoeffler (1998, eds. "Gene expression systems. Usingnature for the art of expression". Academic Press, San Diego, London, Boston, New York, Sydney, Tokyo,Toronto). Для продуцирования полипептида в нужном хозяине могут быть использованы в основном любые системы или любые векторы, подходящие для поддержания, амплификации или экспрессии молекул нуклеиновой кислоты. Подходящая нуклеотидная последовательность может быть встроена в экспрессирующую систему любым из хорошо известных и рутинных методов, таких как методы, описанные уSambrook et al. (см. выше). В общих чертах кодирующий ген может быть помещен под контроль регуляторного элемента, такого как промотор, сайт связывания с рибосомой (для экспрессии в бактериях), и необязательно, оператор, так, чтобы ДНК-последовательность, кодирующая нужный полипептид, транскрибировалась в РНК в трансформированной клетке-хозяине. Примерами подходящих систем экспрессии являются, например, хромосомная, эписомная и вирусная системы, включая, например, векторы, происходящие от бактериальных плазмид, бактериофага,транспозонов, дрожжевых эписом, инсерционных элементов, дрожжевых хромосомных элементов, вирусов, таких как бакуловирус, паповавирусы, такие как SV40, вирусы коровьей оспы, аденовирусы, вирусы оспы домашней птицы, вирусы псевдобешенства и ретровирусы, или их комбинации, а также векторы,происходящие от плазмидных и бактериофаговых генетических элементов, включая космиды и фагмиды. Для доставки более крупных фрагментов ДНК, чем те, которые могут содержаться и экспрессироваться в плазмиде, могут быть использованы также искусственные человеческие хромосомы (НАС). Предпочтительными примерами векторов, которые могут быть использованы в соответствии с аспектами настоящего изобретения, относящимися к INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144, являются векторы pCR4-TOPO-INSP142, pCR4-TOPO-INSP141, pCR4-TOPO-INSP143-EC, pDEST12.2INSP1416HIS-V1, pEAK12dINSP141-6HIS-V1, pENTRINSP141-6HIS-V1, pEAK12dINSP143-EC-6HIS-V1,pDEST12dINSP143-EC-6HIS-V1, pDONR-ZeoINSP143-EC-6HIS-V1 и pEAK12d-INSP142-6HIS. Особенно подходящими экспрессирующими системами являются микроорганизмы, такие как бактерии, трансформированные рекомбинантным бактериофагом, плазмидными или космидными ДНКэкспрессирующими векторами; дрожжи, трансформированные векторами для экспрессии в дрожжах; клеточные системы насекомых, инфицированные вирусными экспрессирующими векторами (например,- 25013251 бакуловирусом); клеточные системы растений, трансформированные вирусными экспрессирующими векторами (например, вирусом мозаики цветной капусты, CaMV; вирусом мозаики табака, TMV) или векторами для экспрессии в бактериях (например, плазмидами Ti или pBR322) или клеточные системы животных. Для продуцирования полипептидов согласно изобретению могут быть использованы также бесклеточные системы трансляции. Введение молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих полипептид согласно изобретению, в клетки-хозяева может быть осуществлено методами, описанными во многих известных лабораторных руководствах, таких как руководство Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology (1986) и Sambrook et al.[см. выше]. Особенно подходящими методами являются трансфекция с использованием фосфата кальция; трансфекция, опосредованная DEAE-декстраном; трансфекция; микроинжекция; трансфекция, опосредованная катионным липидом; электропорация; трансдукция; загрузка путем соскоба; введение методом биобаллистики или инфицирование (см. Sambrook et al., 1989, [см. выше], Ausubel et al., 1991 [см. выше], Spector, GoldmanLeinwald, 1998). В эукариотических клетках экспрессирующие системы, в зависимости от целей их использования, могут быть либо временными (например, эписомными), либо перманентными (хромосомная интеграция). Кодирующая молекула нуклеиновой кислоты может включать, а может и не включать последовательность, кодирующую регуляторную последовательность, такую как сигнальный пептид или лидерная последовательность, если это необходимо, например, для секреции транслируемого полипептида в просвет эндоплазматического ретикулума, в периплазматическое пространство или во внеклеточное пространство. Эти сигналы могут быть эндогенными по отношению к полипептиду либо они могут быть гетерологичными. Лидерные последовательности могут быть удалены бактериальным хозяином при посттрансляционном процессинге. Помимо регуляторных последовательностей может оказаться желательным введение регуляторных последовательностей, которые обеспечивают регуляцию экспрессии полипептида в зависимости от роста клетки-хозяина. Примерами регуляторных последовательностей являются последовательности, которые обеспечивают увеличение или снижение уровня экспрессии гена в ответ на химическую или физическую стимуляцию, включая присутствие регуляторного соединения, или в ответ на различные температурные или метаболические условия. Регуляторными последовательностями являются нетранслируемые области вектора, такие как энхансеры, промоторы и 5'- и 3'-нетранслируемые области. Эти последовательности взаимодействуют с клеточными белками хозяина, в результате чего осуществляется транскрипция и трансляция. Такие регуляторные последовательности могут варьироваться по своей длине и специфичности. В зависимости от выбранной векторной системы и выбранного хозяина могут быть использованы любые подходящие транскрипционные и трансляционные элементы, включая конститутивные и индуцибельные промоторы. Так, например, для клонирования в бактериальных системах могут быть использованы индуцибельные промоторы, такие как гибридный промотор lacZ фагмиды BlueScript (Stratagene,LaJolla, CA) или плазмиды pSportl (Gibco BRL) и т.п. В клетках насекомых может использоваться бакуловирусный промотор полиэдрина. Промоторы или энхансеры, происходящие от геномов растительных клеток (например, гена белка теплового шока, RUBISCO и гена запасных белков) или от вирусов растений (например, вирусных промоторов или лидерных последовательностей), могут быть клонированы в указанный вектор. В клеточных системах млекопитающих предпочтительными являются промоторы, происходящие от генов млекопитающих или от вирусов млекопитающих. Если необходимо генерировать клеточную линию, содержащую множество копий данной последовательности, то могут быть использованы векторы на основе SV40 или EBV с соответствующим селективным маркером. Экспрессирующий вектор конструируют так, чтобы конкретная кодирующая последовательность нуклеиновой кислоты присутствовала в векторе вместе с соответствующими регуляторными последовательностями и чтобы положение и ориентация кодирующей последовательности по отношению к регуляторным последовательностям позволяли такой кодирующей последовательности транскрибироваться под "контролем" регуляторных последовательностей, т.е. так, чтобы РНК-полимераза, которая связывается с ДНК-молекулой у регуляторных последовательностей, осуществляла транскрипцию кодирующей последовательности. В некоторых случаях может оказаться необходимым модифицировать указанную последовательность так, чтобы она могла присоединяться к регуляторным последовательностям в соответствующей ориентации, т.е. с сохранением рамки считывания. Указанные регуляторные последовательности и другие регуляторные последовательности могут быть лигированы с кодирующей последовательностью нуклеиновой кислоты перед встраиванием в вектор. Альтернативно, такая кодирующая последовательность может быть клонирована непосредственно в экспрессирующий вектор, который уже содержит регуляторные последовательности и соответствующий рестрикционный сайт. Для длительного высокоэффективного продуцирования рекомбинантного полипептида предпочтительной является стабильная экспрессия. Так, например, клеточные линии, которые стабильно экспрессируют нужный полипептид, могут быть трансформированы с использованием экспрессирующих векторов, которые могут содержать вирусные сайты инициации репликации и/или эндогенные экспрессирующие элементы и выбранный маркерный ген, присутствующий на том же самом или на отдельном векто- 26013251 ре. После введения этого вектора клетки можно оставить на 1-2 дня для роста в обогащенной среде, которую затем заменяют селективной средой. Селективный маркер необходим для сообщения резистентности, используемой в целях отбора, и его присутствие позволяет культивировать и выделять клетки,успешно экспрессирующие введенные последовательности. Резистентные клоны стабильно трансформированных клеток могут быть подвергнуты пролиферации методами культивирования ткани, подходящими для клеток такого типа. Клеточные линии млекопитающих, подходящие в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны специалистам, и такими клеточными линиями являются многие иммортализованные клеточные линии,имеющиеся в Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая, без ограничения ими, клетки яичника китайского хомячка (CHO), клетки HeLa, клетки почек детенышей хомячка (BHK), клетки почек обезьяны (COS), клетки С 127, клетки 3 Т 3, клетки BHK, клетки HEK 293, клетки меланомы Боуэса, клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) и ряд других клеточных линий. В бакуловирусной системе материалы для получения экспрессирующих систем бакуловирус/клетка насекомого являются коммерчески доступными и поставляются в наборах, inter alia, от Invitrogen, SanDiego CA (набор "МахВас"). В общих чертах эти методы известны специалистам и подробно описаны уSummersSmith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin1555 (1987). Клетками-хозяевами, особенно подходящими для использования в данной системе, являются клетки насекомых, такие как клеткиDrosophila S2 и клетки Spodoptera Sf9. Специалистам известно множество систем экспрессии генов в клеточных культурах растений и в целых растениях. Примерами подходящих систем экспрессии генов в клетках растений являются системы, описанные в патентах США 5693506, 5659122 и 5608143. Другие примеры экспрессии генов в клеточных культурах растений описаны Zenk, Phytochemistry 30, 3861-3863 (1991). В частности, можно использовать любые растения, из которых могут быть выделены и культивированы протопласты с последующим продуцированием из них целых регенерированных растений, которые содержат перенесенный ген. В частности, из культивируемых клеток или тканей могут быть регенерированы все растения, включая, без ограничения ими, все основные виды сахарного тростника, сахарной свеклы, хлопчатника, плодовых и других деревьев, а также бобовых и овощных растений. Примерами особенно предпочтительных бактериальных клеток-хозяев являются клетки стрептококков, стафилококков, E.coli, Streptomyces и Bacillus subtilis. Примерами особенно подходящих клеток-хозяев для экспрессии в грибах являются дрожжевые клетки (например, S.cerevisiae) и клетки Aspergillus. Любые системы отбора, которые могут быть использованы для выделения трансформированных клеточных линий, известны специалистам. Примерами являются гены тимидинкиназы (Wigler M. et al.(1977), Cell, 11: 223-32) и аденин-фосфорибозилтрансферазы вируса простого герпеса (Lowy I. et al.(1980), Cell, 22: 817-23), которые могут быть использованы в tk- или aprt -клетках соответственно. Кроме того, в качестве основы для отбора могут быть использованы гены резистентности к антиметаболиту, антибиотику или к гербициду, например ген дигидрофолат-редуктазы (DHFR), который сообщает резистентность к метотрексату (Wigler M. et al. (1980), Proc. Natl. Acad. Sci. 77: 3567-70); ген npt,который сообщает резистентность к аминогликозидам, неомицину и к G-418 (Colbere-Garapin F. et al.(1981), J. Mol. Biol. 150: 1-14), и гены als или pat, которые сообщают резистентность к хлорсульфурон- и фосфинотрицин-ацетилтрансферазе соответственно. Были описаны и другие селективные гены, примеры которых хорошо известны специалистам. Хотя присутствие или отсутствие экспрессии маркерного гена позволяет предположить, что присутствует также и нужный ген, однако его присутствие и экспрессия еще нуждаются в подтверждении. Так, например, если соответствующая последовательность была встроена в последовательность маркерного гена, то трансформированные клетки, содержащие соответствующие последовательности, могут быть идентифицированы по отсутствию функции маркерного гена. Альтернативно, маркерный ген может находиться в тандеме с последовательностью, кодирующей полипептид согласно изобретению, находящийся под контролем одного промотора. Экспрессия маркерного гена в ответ на индуцирование или отбор обычно указывает также на экспрессию тандемного гена. Альтернативно, клетки-хозяева, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид согласно изобретению, и которые экспрессируют указанный полипептид, могут быть идентифицированы различными методами, известными специалистам. Такими методами являются,но не ограничиваются ими, ДНК-ДНК или ДНК-РНК-гибридизация и биоанализы на присутствие белка,например сортировка клеток по интенсивности флуоресценции (FACS) или иммуноанализы (такие как твердофазный иммуноферментный анализ [ELISA] и радиоиммуноанализ [РИА]), которые предусматривают использование мембран, растворов или чипов для детекции и/или количественной оценки нуклеиновой кислоты или белка (см. Hampton R. et al. (1990), Serological Methods, a Laboratory Manual, APS- 27013251 Существует широкий ряд методов мечения и конъюгирования, известных специалистам, и эти методы могут быть использованы в различных анализах на присутствие нуклеиновых кислот и аминокислот. Методами, используемыми в целях продуцирования меченных зондов для гибридизации или ПЦР-зондов для детекции последовательностей, родственных молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептиды согласно изобретению, являются мечение олигонуклеотидами, ник-трансляция,мечение по концам или ПЦР-амплификация с использованием меченного полинуклеотида. Альтернативно, последовательности, кодирующие полипептид согласно изобретению, могут быть клонированы в вектор для продуцирования мРНК-зонда. Такие векторы известны специалистам, являются коммерчески доступными и могут быть использованы для синтеза РНК-зондов in vitro путем добавления соответствующей РНК-полимеразы, такой как Т 7, Т 3 или SP6, и меченных нуклеотидов. Эти процедуры могут быть проведены с использованием различных коммерчески доступных наборов (PharmaciaUpjohn(Kalamazoo, MI); Promega (Madison WI) и U.S. Biochemical Corp., Cleveland, OH. Подходящими репортерными молекулами или метками, которые могут быть использованы для облегчения детекции, являются радионуклиды, ферменты и флуоресцентные, хемилюминисцентные или хромогенные агенты, а также субстраты, кофакторы, ингибиторы, магнитные частицы и т.п. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть использованы также для генерирования трансгенных животных, в частности грызунов. Такие трансгенные животные входят в дополнительный аспект согласно изобретению. Это генерирование может быть осуществлено путем локальной модификации соматических клеток или манипуляций с зародышевыми линиями для введения наследуемых модификаций. Такие трансгенные животные могут быть, в частности, использованы для создания животных-моделей в целях поиска молекул лекарственных средств, которые являются эффективными в качестве модуляторов полипептидов согласно изобретению. Полипептид может быть выделен и очищен из рекомбинантных клеточных культур хорошо известными методами, включая преципитацию сульфатом аммония или этанолом, экстракцию кислотой, анионообменную или катионообменную хроматографию, хроматографию на фосфоцеллюлозе, гидрофобную хроматографию, аффинную хроматографию, хроматографию на гидроксиаппатитах и хроматографию на лектине. Для очистки наиболее подходящей является высокоэффективная жидкостная хроматография. В случае если данный полипептид был денатурирован в процессе выделения и/или очистки, то для восстановления активной конформации может быть использована хорошо известная техника рефолдинга белков. Если необходимо, то для облегчения очистки белков могут быть использованы также специальные векторные конструкции, полученные путем присоединения последовательностей, кодирующих полипептиды согласно изобретению, к нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидный домен,который облегчает очистку растворимых белков. Примерами таких доменов, облегчающих очистку белков, являются пептиды, образующие хелатные комплексы с металлами, такие как гистидинтриптофановые модули, которые позволяют проводить очистку на иммобилизованных металлах; домены белка А, которые позволяют проводить очистку на иммобилизованном иммуноглобулине; и домен, используемый в системе удлинения/очистки FLAGS (Immunex Corp., Seattle, WA). Для облегчения очистки между доменом для очистки и полипептидом согласно изобретению могут быть включены расщепляемые линкерные последовательности, такие как последовательности, специфичные к фактору ХА или энтерокиназе (Invitrogen, San Diego, CA). Один из таких экспрессирующих векторов обеспечивает экспрессию гибридного белка, содержащего полипептид согласно изобретению, присоединенный к нескольким гистидиновым остаткам, за которыми следуют тиоредоксин или рестрикционный сайт энтерокиназы. Гистидиновые остатки облегчают проведение очистки с помощью IMAC (аффинной хроматографии на иммобилизованном ионе металла, описанной Porath J. et al. (1992), Prot. Exp. Purif. 3: 263-281), тогда как тиоредоксин или рестрикционный сайт энтерокиназы позволяют выделять полипептид из гибридного белка. Обсуждение векторов, содержащих гибридные белки, можно найти у Kroll D.J. et al., 1993; DNACell Biol. 12: 441-453. Если экспрессируемый полипептид используется в аналитическом скрининге, то обычно предпочтительно, чтобы он был продуцирован на поверхности клетки-хозяина, в которой он экспрессируется. В этом случае клетки-хозяева могут быть собраны до их использования в скрининг-анализе, например, таким методом, как сортировка клеток с возбуждением флуоресценции (FACS), или иммуноаффинным методом. Если полипептид секретируется в среду, то такая среда может быть собрана для выделения и очистки экспрессированного полипептида. Если полипептид продуцируется внутри клетки, то перед выделением полипептида эти клетки должны быть сначала подвергнуты лизису. Полипептид согласно изобретению может быть использован для скрининга библиотек соединений в любом из известных методов скрининга, применяемых для поиска лекарственных средств. Такие соединения могут стимулировать (служить агонистами) или ингибировать (служить антагонистами) экспрессию гена или активность полипептида согласно изобретению, а поэтому они составляют дополнительный аспект настоящего изобретения. Предпочтительными соединениями являются соединения, способные влиять на экспрессию природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или регулировать активность полипептида согласно первому аспекту изобретения.- 28013251 Соединения-агонисты или соединения-антагонисты могут быть выделены, например, из клеток,бесклеточных препаратов, химических библиотек или смесей природных продуктов. Такими агонистами или антагонистами могут быть природные или модифицированные субстраты, лиганды, ферменты, рецепторы либо структурные или функциональные миметики. Подходящее описание таких методов скрининга можно найти в работе Coligan et al., Current Protocols in Immunology, 1 (2): Chapter 5 (1991). Соединения, которые могут рассматриваться как наиболее вероятные кандидаты на хорошие антагонисты, представляют собой молекулы, которые связываются с полипептидом согласно изобретению,но не индуцируют каких-либо биологических эффектов полипептида после связывания с ним. Потенциальными антагонистами являются небольшие органические молекулы, пептиды, полипептиды и антитела, которые связываются с полипептидом согласно изобретению и тем самым ингибируют или подавляют его активность. Таким образом, связывание полипептида с нормальными связывающимися клеточными молекулами может быть подвергнуто ингибированию, что будет приводить к подавлению нормальной биологической активности такого полипептида. Полипептид согласно изобретению, который используется в таком методе скрининга, может находиться в растворе в свободном состоянии, может быть иммобилизован на твердом носителе или может присутствовать на клеточной поверхности либо он может быть локализован внутри клетки. Вообще говоря, в таких процедурах скрининга могут быть использованы соответствующие клетки или клеточные мембраны, экспрессирующие полипептид, который контактирует с тестируемым соединением, что приводит к связыванию либо к стимуляции или ингибированию функционального ответа. Затем функциональный ответ клеток, контактируемых с тестируемым соединением, сравнивают с ответом контрольных клеток, которые не контактировали с тестируемым соединением. Такой анализ, проводимый с помощью подходящей системы детекции, позволяет определить, может ли тестируемое соединение давать сигнал,генерируемый активацией указанного полипептида. Ингибиторы активации обычно анализируют в присутствии известного агониста и оценивают влияние этого агониста на активацию в присутствии тестируемого соединения. Методы генерирования детектируемых сигналов в анализах описанного здесь типа хорошо известны специалистам. Конкретным примером является совместное введение конструкции, экспрессирующей полипептид согласно изобретению или его фрагмент, такой как LBD, присутствующий в виде гибрида с ДНК-связывающим доменом GAL4, в клетку вместе с репортерной плазмидой, такой как, например,pFR-Luc (Stratagene Europe, Amsterdam, The Netherlands). Эта конкретная плазмида содержит синтетический промотор с пятью тандемными повторами GAL4-связывающих сайтов, регулирующих экспрессию гена люциферазы. При введении потенциального лиганда в клетки он будет связываться с гибридом"GAL4-полипептид" и индуцировать транскрипцию гена люциферазы. Мониторинг уровня экспрессии гена люциферазы может быть проведен путем детекции его активности на устройстве для считывания интенсивности люминесценции (см., например, Lehman et al., JBC 270, 12953, 1995; Pawar et al., JBC, 277,39243, 2002). Еще более предпочтительный способ идентификации агониста или антагониста полипептида согласно изобретению включает в себя:(а) контактирование меченного или немеченного соединения с полипептидом, иммобилизованным на любом твердом носителе (например, на сферах, пластинах, матричном носителе, чипе), и детекцию указанного соединения путем определения присутствия метки или самого соединения;(b) контактирование клетки, экспрессирующей на своей поверхности полипептид путем его искусственного заякоривания на клеточной мембране или путем конструирования химерного рецептора, ассоциированного со вторым компонентом, способным давать детектируемый сигнал в ответ на связывание соединения с указанным полипептидом, где указанное соединение скринируют в условиях, стимулирующих связывание с указанным полипептидом; и(c) определение события связывания указанного соединения с указанным полипептидом либо его активации или ингибирования путем сравнения уровня сигнала, генерируемого в результате взаимодействия указанного соединения с указанным полипептидом, с уровнем сигнала, вырабатываемого в отсутствие данного соединения. Так, например, может быть применен такой способ, как FRET-детекция лиганда, связанного с полипептидом в присутствии пептидных коактиваторов (Norris et al., Science 285, 744, 1999). В других предпочтительных вариантах изобретения общие методы, описанные выше, могут, кроме того, включать осуществление идентификации агониста или антагониста в присутствии меченного или немеченного лиганда для полипептида. В другом варианте изобретения способ идентификации агониста или антагониста полипептида согласно изобретению включает в себя определение факта ингибирования связывания лиганда с полипептидом согласно изобретению на любой твердой или клеточной поверхности в присутствии соединениякандидата в условиях, стимулирующих связывание с указанным полипептидом, и определение количества лиганда, связанного с указанным полипептидом. При этом считается, что соединение, способствующее снижению уровня связывания с лигандом, является конкурентом, который может действовать как агонист или антагонист. Причем предпочтительно, чтобы указанный лиганд был меченным.- 29013251 Более конкретно способ скрининга на соединение, являющееся агонистом или антагонистом полипептида, включает стадии:(a) инкубирования меченного лиганда с полипептидом согласно изобретению, присутствующим на твердом носителе, с клеточной поверхностью или с клеточной мембраной, содержащей полипептид согласно изобретению;(b) определения количества меченного лиганда, связанного с полипептидом на твердом носителе, с интактой клеткой или с клеточной мембраной;(c) добавления соединения-кандидата к смеси меченного лиганда и иммобилизованного полипептида на твердом носителе, интактой клетки или клеточной мембраны стадии (а) и доведения этой смеси до состояния равновесия;(d) определения количества меченного лиганда, связанного с иммобилизованным полипептидом или с целой клеткой или с клеточной мембраной, после проведения стадии (с); и(e) сравнения различия в количествах связанного меченного лиганда стадий (b) и (d), где соединение, вызывающее снижение уровня связывания в стадии (d), рассматривается как агонист или антагонист. Было обнаружено, что указанные полипептиды могут модулировать различные физиологические и патологические процессы в зависимости от вводимой дозы в вышеописанных анализах. Таким образом,термин "функциональные эквиваленты" полипептидов согласно изобретению включают полипептиды,которые обладают любой из указанных дозозависимых модулирующих активностей в вышеописанных анализах. Хотя степень дозозависимой активности необязательно должна быть идентична активности указанных полипептидов согласно изобретению, однако предпочтительно, чтобы в данном анализе на активность указанные "функциональные эквиваленты" обладали дозозависимой активностью, по существу, аналогичной активности полипептидов согласно изобретению. Полипептиды экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептиды INSP141, INSP142,INSP143 и INSP144 согласно изобретению могут модулировать рост и дифференцировку клеток. Таким образом, биологическая активность полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 может быть оценена в системах, позволяющих проводить исследование роста и дифференцировки клеток, таких как системы тканевых культур in vitro. Стимуляция или ингибирование пролиферации клеток могут быть измерены с помощью различных анализов. Так, например, для оценки ингибирования роста клеток может быть использована твердая или жидкая среда. В твердой среде клетки, рост которых подвергается ингибированию, могут быть отобраны из группы клеток индивидуума путем сравнения размеров образуемых ими колоний. В жидкой среде ингибирование роста может быть скринировано путем измерения мутности культуральной среды или включения меченного тимидина в ДНК. Обычно включение нуклеозидного аналога в только что синтезированную ДНК может служить основой для измерения пролиферации клеток (т.е. активного роста клеток) в данной популяции. Так, например, в качестве реагента для мечения ДНК может быть использован бромдезоксиуридин (BrdU), а в качестве детектирующего реагента могут быть использованы мышиные моноклональные антитела против BrdU. Это антитело связывается только с клетками, содержащими ДНК, в которую был включен бромдезоксиуридин. В комбинации с этим анализом могут быть использованы различные методы детекции, включая иммунофлуоресцентные, иммуногистохимические, ELISA- и колориметрические методы. Наборы, включающие бромдезоксиуридин (BrdU) и мышиное моноклональное антитело против BrdU, являются коммерчески доступными и поставляются фирмой Boehringer Mannheim(Indianapolis, IN). Влияние полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141,INSP142, INSP143 и INSP144 согласно изобретению на дифференцировку клеток может быть оценено посредством контактирования стволовых клеток или эмбриональных клеток с различными количествами указанных полипептидов и оценки такого влияния на дифференцировку стволовых клеток или эмбриональных клеток. Для идентификации полученных клеток могут быть использованы тканеспецифические антитела и методы микроскопии. Было обнаружено, что в вышеописанном анализе полипептиды экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептиды INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 могут также модулировать пролиферацию и дифференцировку клеток иммунной и/или нервной системы в зависимости от дозы. Таким образом, "функциональные эквиваленты" полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 включают полипептиды, которые обладают любой из таких дозозависимых активностей, направленных на регуляцию роста и дифференцировку клеток в вышеописанном анализе. Хотя степень дозозависимой активности необязательно должна быть идентичной активности полипептидов экзонов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141,INSP142, INSP143 и INSP144, однако предпочтительно, чтобы указанные "функциональные эквиваленты" обладали, по существу, таким же дозозависимым действием, как и полипептиды экзонов INSP141,INSP142, INSP143 и INSP144 и полипептидов INSP141, INSP142, INSP143 и INSP144.
МПК / Метки
МПК: C07K 14/195, A61K 38/16
Метки: белки, домены, содержащие, ant_ig
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-13251-belki-soderzhashhie-domeny-vwfa-i-ili-antig.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Белки, содержащие домены vwfa и/или ant_ig</a>
Полипептиды, содержащие домены протеина gax, участвующие в подавлении транскрипции и/или взаимодействующие с другими протеинами, соответствующие нуклеиновые кислоты и их применение
Номер патента: 3694
Опубликовано: 28.08.2003
Авторы: Мафуди Абдерраим, Марсиро Кристоф, Бранеллек Дидье, Фурнье Алан
МПК: A61K 38/17, C12N 15/12, C07K 14/47...
Метки: транскрипции, соответствующие, нуклеиновые, протеинами, взаимодействующие, кислоты, домены, протеина, применение, участвующие, другими, содержащие, полипептиды, подавлении
Формула / Реферат:
1. Полипептид, отличающийся тем, что он представляет собой фрагмент протеина GAX (Growth-Arrest-Specific Homeobox) человека, содержащий, по меньшей мере, остатки 1-32 протеина GAX и обладающий репрессорной активностью в отношении транскрипции и/или оказывающий положительное или отрицательное влияние на репликацию ДНК. 2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит остатки 140-230 протеина GAX человека. 3. Полипептид,...
Слитые белки glp-1
Номер патента: 5584
Опубликовано: 28.04.2005
Авторы: Глеснер Вольфганг, Щанг Шенг-Ханг Рэйнбоу, Миканович Радмилла
МПК: A61K 38/38, A61P 3/10, C07K 14/605...
Формула / Реферат:
1. Гетерологичный слитый белок, содержащий первый полипептид, имеющий N-конец и C-конец, слитый со вторым полипептидом, имеющим N-конец и C-конец, где первым полипептидом является GLP-1-соединение, а второй полипептид выбран из группы, состоящей из a) альбумина человека; b) аналогов альбумина человека и c) фрагментов альбумина человека, и где C-конец первого полипептида слит с N-концом второго полипептида. 2. Гетерологичный слитый белок,...
Rage – слитые белки и способы их применения
Номер патента: 12586
Опубликовано: 30.10.2009
Авторы: Вебстер Джеффри К., Янь Ши Ду, Тянь Йе Э., Мджалли Аднан М.М., Ротлейн Роберт, Стерн Дэвид М., Шмидт Анн Мари
МПК: A61K 38/17, C07K 14/705, C12N 15/62...
Метки: способы, применения, белки, слитые
Формула / Реферат:
1. Слитый белок, содержащий полипептид RAGE, связанный на его карбоксиконце с аминоконцом не-RAGE-полипептида, где полипептид RAGE является фрагментом человеческого sRAGE, где последовательность человеческого sRAGE приведена в SEQ ID NO: 5 или 6, и где последовательность указанного фрагмента содержит на своем аминоконце SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности SEQ ID NO: 9...
Остеопротегеринсвязующие белки и рецепторы
Номер патента: 3636
Опубликовано: 28.08.2003
Автор: Бойл Уильям Дж.
МПК: A61K 31/7115, C07K 14/705, A61P 19/08...
Метки: рецепторы, остеопротегеринсвязующие, белки
Формула / Реферат:
1. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая остеопротегеринсвязывающий белок, выбранная из группы, включающей: а) последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную на фиг. 1 (SEQ ID NO:1) и фиг. 4 (SEQ ID NO:3); б) нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются в условиях высокой жесткости с участками последовательности, приведенной в а), причем последовательность, приведенная в а), кодирует остеопротегеринсвязывающий белок, показанный на фиг....
Белки слияния на основе rage и способы их использования
Номер патента: 12082
Опубликовано: 28.08.2009
Авторы: Мджалли Аднан М.М., Вебстер Джеффри К., Тянь Йе Э., Ротлейн Роберт
МПК: C07K 19/00, C07K 14/705
Метки: способы, основе, белки, использования, слияния
Формула / Реферат:
1. Белок слияния, включающий полипептид RAGE, непосредственно присоединенный к полипептиду, включающему СН2 домен иммуноглобулина или часть СН2 домена иммуноглобулина, где полипептид RAGE включает сайт связывания лиганда и где белок слияния не содержит шарнирной области Fc иммуноглобулина. 2. Белок слияния по п.1, отличающийся тем, что: (a) белок слияния включает междоменный линкер, происходящий из RAGE, а не междоменный шарнирный полипептид,...
Предыдущий патент: Ингибиторы c – fms киназы
Следующий патент: Сигареты с полыми волокнами
Случайный патент: Легочное введение химически модифицированного инсулина