Гликопротеин клеточной поверхности
Номер патента: 11261
Опубликовано: 27.02.2009
Авторы: Фитцджералд Стефен, Бьенковска Ядвига, Йорке-Смит Мелани, Фаган Ричард, Пауэр Кристин
Формула / Реферат
1. Полипептид, который
(i) содержит аминокислотную последовательность,
представленную в SEQ ID NO:2; SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6,
SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14,
SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22,
SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28 и/или SEQ ID NO:30; или
(ii) представляет собой функциональный эквивалент (i).
2. Полипептид по п.1, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:24 и/или SEQ ID NO:30.
3. Полипептид по п.1, который содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:26 и/или SEQ ID NO:28, или состоит из указанной последовательности.
4. Полипептид по п.1 или 2, который состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2; SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28 и/или SEQ ID NO:30.
5. Полипептид, который является функциональным эквивалентом в соответствии с подпунктом (ii) по любому из предшествующих пунктов и отличается тем, что гомологичен аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:18, и является членом семейства гликопротеинов клеточной поверхности.
6. Полипептид, который является функциональным эквивалентом по любому из пп.1-3 и который более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85, 90, 95, 98 или 99%, идентичен аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:18, или ее активному фрагменту.
7. Полипептид, который является функциональным эквивалентом по любому из пп.1-6 и который обладает значительной структурной гомологией с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:18.
8. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из предшествующих пунктов.
9. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты по п.8, которая содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27 и/или SEQ ID NO:29, или представляет собой ее избыточный эквивалент или фрагмент.
10. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты по п.9, которая состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13 или SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27 и/или SEQ ID NO:29, или представляет собой ее избыточный эквивалент или фрагмент.
11. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-10 в условиях высокой жесткости.
12. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11.
13. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п.12.
14. Лиганд, который специфически связывается с гликопротеином клеточной поверхности по любому из пп.1-7.
15. Лиганд по п.14, который представляет собой антитело.
16. Соединение, которое связывается с полипептидом по любому из пп.1-7, не индуцируя при этом каких-либо биологических эффектов указанного полипептида.
17. Соединение по п.16, которое представляет собой природный или модифицированный субстрат, лиганд, фермент, рецептор либо структурный или функциональный миметик.
18. Гибридный полипептид, содержащий полипептид по любому из пп.1-7, слитый с гетерологичной аминокислотной последовательностью.
19. Гибридный полипептид по п.18, где указанной гетерологичной аминокислотной последовательностью является константный домен IgG или его фрагмент или домен hCG или его фрагмент.
20. Применение полипептида по любому из пп.1-7, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11, вектора по п.12, лиганда по п.14 или 15, соединения по любому из п.16 или 17 или гибридного полипептида по п.18 или 19 в терапии или диагностике заболевания.
21. Способ диагностики заболевания у пациента, включающий оценку уровня экспрессии природного гена, кодирующего полипептид по любому из пп.1-7, или оценку активности полипептида по любому из пп.1-7 в ткани указанного пациента, и сравнение указанного уровня экспрессии или активности с контрольным уровнем, где уровень, отличающийся от указанного контрольного уровня, является признаком наличия заболевания.
22. Способ по п.21, осуществляемый in vitro.
23. Способ по п.21 или 22, который включает стадии (а) контактирования лиганда по п.14 или 15 с биологическим образцом в условиях, подходящих для образования комплекса лиганд-полипептид; и (b) детектирования указанного комплекса.
24. Способ по п.21 или 22, включающий стадии
a) контактирования образца ткани, взятой у пациента, с нуклеиновокислотным зондом в жестких условиях, способствующих образованию гибридного комплекса между молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11 и указанным зондом;
b) контактирования контрольного образца с указанным зондом в условиях, аналогичных условиям стадии (а); и
c) детектирования присутствия гибридных комплексов в указанных образах, где детектирование уровней указанного гибридного комплекса в образце, взятом у данного пациента, которые отличаются от уровней гибридного комплекса в контрольном образце, указывает на наличие заболевания.
25. Способ по п.21 или 22, включающий в себя
a) контактирование образца нуклеиновой кислоты ткани, взятой у пациента, с нуклеиновокислотным праймером в жестких условиях, способствующих образованию гибридного комплекса между молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11 и указанным праймером;
b) контактирование контрольного образца с указанным праймером в условиях, аналогичных условиям стадии (а);
c) амплификацию указанного образца нуклеиновой кислоты и
d) детектирование уровня амплифицированной нуклеиновой кислоты в образцах, взятых у пациента, и в контрольных образцах, где детектирование уровней амплифицированной нуклеиновой кислоты во взятом у пациента образце, которые значительно отличаются от уровней амплифицированной нуклеиновой кислоты в контрольном образце, указывает на наличие заболевания.
26. Способ по п.21 или 22, включающий
a) получение образца тканей от пациента, обследуемого на наличие заболевания;
b) выделение молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11 из указанного образца ткани и
c) установление диагноза заболевания данного пациента путем детектирования присутствия мутации в молекуле нуклеиновой кислоты, где указанная мутация ассоциирована с указанным заболеванием и где присутствие такой мутации указывает на наличие заболевания.
27. Способ по п.26, который дополнительно включает в себя амплификацию указанной молекулы нуклеиновой кислоты с образованием амплифицированного продукта и детектирование присутствия или отсутствия мутации в указанном амплифицированном продукте.
28. Способ по пп.26 или 27, где присутствие или отсутствие мутации у пациента определяют путем осуществления контакта указанной молекулы нуклеиновой кислоты с нуклеиновокислотным зондом, который гибридизуется с указанной молекулой нуклеиновой кислоты в жестких условиях, с образованием гибридной двухцепочечной молекулы, где указанная гибридная двухцепочечная молекула имеет негибридизованную часть цепи нуклеиновокислотного зонда в любой области, соответствующей мутации, ассоциированной с заболеванием; и детектирования присутствия или отсутствия негибридизованной части цепи указанного зонда как показателя присутствия или отсутсттшя ассоциированной с заболеванием мутации.
29. Способ по любому из пп.21-28, где указанными заболеваниями являются, но не ограничиваются ими, воспаление, рак, рак толстой кишки, воспалительное заболевание кишечника, расстройство поджелудочной железы и/или IL-2-ассоциированное заболевание.
30. Способ по любому из пп.21-28, где указанным заболеванием является заболевание, в патогенезе которого участвует лимфоцитарные антигены.
31. Применение полипептида по любому из пп.1-7 в качестве гликопротеина клеточной поверхности.
32. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому из пп.1-7.
33. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11.
34. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор по п.12.
35. Фармацевтическая композиция, содержащая клетку-хозяина по п.13.
36. Фармацевтическая композиция, содержащая лиганд по п.14 или 15.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из п.16 или 17.
38. Фармацевтическая композиция, содержащая гибридный полипептид по п.18 или 19.
39. Вакцинная композиция, содержащая полипептид по любому из пп.1-7 или молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11.
40. Применение полипептида по любому из пп.1-7, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11, вектора по п.12, клетки-хозяина по п.13, лиганда по п.14 или 15, соединения по любому из п.16 или 17, гибридного полипептида по п.18 или 19 или фармацевтической композиции по любому из пп.32-38 для получения лекарственного средства для лечения воспаления, рака, воспалительного заболевания кишечника, расстройства поджелудочной железы и/или IL-2-ассоциированного заболевания.
41. Применение полипептида по любому из пп.1-7, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11, вектора по п.12, клетки-хозяина по п.13, лиганда по п.14 или 15, соединения по любому из п.16 или 17, гибридного полипептида по п.18 или 19 или фармацевтической композиции по любому из пп.32-38 для получения лекарственного средства для лечения заболевания, в патогенезе которого участвуют лимфоцитарные антигены.
42. Способ лечения заболевания у пациента, включающий в себя введение указанному пациенту полипептида по любому из пп.1-7, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11, вектора по п.12, клетки-хозяина по п.13, лиганда по п.14 или 15, соединения по любому из п.16 или 17, гибридного полипептида по п.18 или 19 или фармацевтической композиции любому из пп.32-38.
43. Способ по п.42, где для лечения заболеваний, при которых уровень экспрессии природного гена или активности указанного полипептида у пациента, страдающего заболеванием, ниже, чем уровень экспрессии или активности у здорового пациента, данному пациенту вводят полипептид, молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, лиганд, соединение или композицию, которые являются агонистами.
44. Способ по п.42, где для лечения заболеваний, при которых уровень экспрессии природного гена или активности указанного полипептида у пациента, страдающего заболеванием, выше, чем уровень экспрессии или активности у здорового пациента, данному пациенту вводят полипептид, молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, лиганд, соединение или композицию, которые являются антагонистами.
45. Способ мониторинга терапевтического лечения заболевания у пациента, включающий в себя мониторинг уровня экспрессии или активности полипептида по любому из пп.1-7 или уровня экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11 в ткани указанного пациента, проводимый в течение определенного периода времени, где изменение указанного уровня экспрессии или активности за определенный промежуток времени по сравнению с контрольным уровнем является показателем рецидива указанного заболевания.
46. Способ идентификации соединения, которое является эффективным для лечения и/или диагностики заболевания, включающий в себя контактирование полипептида по любому из пп.1-7 с одним или несколькими соединениями, предположительно обладающими аффинностью связывания с указанным полипептидом или молекулой нуклеиновой кислоты; и отбор соединения, которое специфически связывается с указанной молекулой нуклеиновой кислоты или полипептидом.
47. Способ идентификации соединения, которое является эффективным для лечения и/или диагностики заболевания, включающий в себя контактирование молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11 с одним или несколькими соединениями, предположительно обладающими аффинностью связывания с указанным полипептидом или молекулой нуклеиновой кислоты; и отбор соединения, которое специфически связывается с указанной молекулой нуклеиновой кислоты или полипептидом.
48. Набор, используемый для диагностики заболевания и включающий в себя первый контейнер, содержащий нуклеиновокислотный зонд, который гибридизуется в жестких условиях с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11; второй контейнер, содержащий праймеры, подходящие для амплификации указанной молекулы нуклеиновой кислоты; и инструкции по использованию зонда и праймеров для облегчения диагностики заболевания.
49. Набор по п.45, дополнительно включающий в себя третий контейнер, содержащий агент для гидролиза негибридизованной РНК.
50. Набор, содержащий массив молекул нуклеиновой кислоты, по меньшей мере одной из которых является молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11.
51. Набор, содержащий одно или несколько антител, связывающихся с полипептидом по любому из пп.1-7, и реагент, используемый для детектирования реакции связывания между указанным антителом и указанным полипептидом.
52. Трансгенное или дефицитное по данному полипептиду животное, не являющееся человеком, которое было трансформировано так, что оно экспрессирует более высокие или более низкие уровни полипептида по любому из пп.1-7 или вообще не экспрессирует указанного полипептида.
53. Способ скрининга на соединение, эффективное для лечения заболевания, включающий в себя контактирование трансгенного животного, не являющегося человеком, по п.52 с соединением-кандидатом и оценку эффективности указанного соединения для лечения такого заболевания у указанного животного.
54. Применение полипептида по любому из пп.1-7, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11, вектора по п.12, клетки-хозяина по п.13, лиганда по п.14 или 15, соединения по любому из п.16 или 17, гибридного полипептида по п.18 или 19 или фармацевтической композиции по любому из пп.32-38 для оплодотворения в пробирке (IVF) или в качестве контрацептива.
55. Применение полипептида по любому из пп.1-7, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.8-11, вектора по п.12, клетки-хозяина по п.13, лиганда по п.14 или 15, соединения по любому из п.16 или 17, гибридного полипептида по п.18 или 19 или фармацевтической композиции по любому из пп.32-38 для изготовления контрацептива.
56. Применение полипептида INSP201 в качестве мишени для поиска лекарственных средств-кандидатов, которые могут быть использованы для лечения или предупреждения расстройства, ассоциированного с гликопротеином клеточной поверхности.
57. Способ отбора биологически активных соединений, включающий в себя
(i) контактирование соединения-кандидата с рекомбинантными клетками-хозяевами, экспрессирующими полипептид INSP201;
(ii) отбор соединений, которые связываются с указанным полипептидом INSP201 на поверхности указанных клеток и/или модулируют активность указанного полипептида INSP201.
Текст
011261 Настоящее изобретение относится к новому белку, обозначаемому INSP201 и идентифицированному в настоящей заявке как гликопротеин клеточной поверхности, и к применению этого белка и последовательностей нуклеиновой кислоты, содержащей гены, кодирующие указанный белок, в целях диагностики, предупреждения и лечения заболеваний. Все цитированные здесь публикации, патенты и патентные заявки во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Предшествующий уровень техники В настоящее время в области разработки лекарственных средств произошел крутой перелом, который положил начало новой эре функциональной геномики, пришедшей на смену старым методам. Термин "функциональная геномика" применяется к способам использования средств биоинформатики для приписывания функций последовательностям белков, представляющих интерес для специалистов. Такие средства становятся все более необходимыми, и это связано с тем, что оснащение научноисследовательских лабораторий, занимающихся определением функций последовательностей этих белков, пока не дает возможности быстро обрабатывать все нарастающий поток данных о последовательностях этих белков. Поскольку эффективность и точность методов биоинформатики возрастает, то эти методы быстро вытесняют стандартные методы биохимической характеризации. Действительно, современные средства биоинформатики, используемые для идентификации белков согласно изобретению, позволяют получать окончательные результаты с достаточной высокой степенью достоверности. Различные институты и коммерческие организации занимаются обработкой непрерывно поступающих данных о последовательностях, и на основе полученных результатов они приходят к важным открытиям. Однако необходимость в идентификации и характеризации других генов и полипептидов,кодируемых этими генами, в целях их дальнейшего исследования и поиска новых лекарственных средств, все еще остается актуальной. Введение Секретируемые белки Способность клеток продуцировать и секретировать внеклеточные белки является главным фактором во многих биологических процессах. Ферменты, факторы роста, белки внеклеточного матрикса и молекулы, передающие сигналы, секретируются клетками. Это происходит в результате слияния секреторной везикулы с плазматической мембраной. В большинстве случаев, но не всегда, белки транспортируются в эндоплазматический ретикулум и в секреторные везикулы посредством сигнального пептида. Сигнальные пептиды представляют собой цис-активные последовательности, которые влияют на транспорт полипептидных цепей из цитоплазмы в мембрано-связанный компартмент, такой как секреторная везикула. Полипептиды, которые доставляются в секреторные везикулы, либо секретируются во внеклеточный матрикс, либо удерживаются в плазматической мембране. Полипептиды, которые удерживаются в плазматической мембране, имеют один или несколько трансмембранных доменов. Примерами сигнального пептида, который играет главную роль в функционировании клеток, являются цитокины, гормоны, белки внеклеточного матрикса (адгезивные молекулы), протеазы и факторы роста и дифференцировки. Описание изобретения Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что полипептид INSP201 представляет собой гликопротеин клеточной поверхности. В одном из вариантов своего первого аспекта настоящее изобретение относится к полипептиду, который(ii) представляет собой ее фрагмент, который является членом семейства гликопротеинов клеточной поверхности или имеет общую антигенную детерминанту с полипептидами (i), или(iii) представляет собой функциональный эквивалент (i) или (ii). Предпочтительно полипептид согласно первому аспекту изобретения содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:12. Такой предпочтительный белок содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:8. В соответствии со вторым вариантом своего первого аспекта настоящее изобретение относится к полипептиду, состоящему из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO:2;SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16 и/или SEQ ID NO:18. Предпочтительно фрагментом, исключенным из объема настоящего изобретения, является фрагмент, состоящий из первых 79 аминокислот SEQ ID NO:8. Этот фрагмент описан в GenPept NCBI per.AX884746 и в нижеследующих патентных документах под названием Genset: US20050106595,US6822072, JP2001269182, JP2002511259, ЕР 1033401, WO9953051 и US6783961. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, будет далее называться "полипептидом экзона 1INSP201". Полипептид, имеющий последовательность, представленную SEQ ID NO:4, будет далее называться "полипептидом экзона 2 INSP201". Полипептид, имеющий последовательность, представленнуюSEQ ID NO:6, будет далее называться "полипептидом экзона 3 INSP201". Полипептид, имеющий последовательность, представленную SEQ ID NO:8, будет далее называться "полноразмерным полипептидомINSP201". Не претендуя на какую-либо теорию, заявители лишь предполагают, что первые 21 аминокислоты полипептида INSP201 образуют сигнальный пептид. Полипептид экзона 1 INSP201, не содержащий этой предполагаемой сигнальной последовательности, представлен в SEQ ID NO:10. Полноразмерная последовательность полипептида INSP201, не содержащая этой предполагаемой сигнальной последовательности, представлена в SEQ ID NO:12. Полипептид, имеющий последовательность, представленную SEQ ID NO:10, будет далее называться "зрелым полипептидом экзона 1 INSP201". Полипептид, имеющий последовательность, представленную SEQ ID NO:12, будет далее называться "зрелым полипептидом INSP201". В настоящей заявке высказывается предположение, что полипептид INSP201 содержит определенное число возможных сайтов N-гликозилирования. В соответствии с этим, гликопротеины, содержащие(или состоящие из) полипептид(a) INSP201, модифицированный(ого) посредством N-гликозилирования в одном, двух, трех, четырех, пяти, шести или семи положениях, соответствующих Asnl24, Asnl56, Asnl88,Asn204, Asn220, Asn250 и Asn268 SEQ ID NO:8, являются аспектами настоящего изобретения. В настоящей заявке высказывается предположение, что полипептид INSP201 содержит трансмембранную область, локализованную между остатками 406-427, включительно, последовательности SEQ IDNO:8. В соответствии с этим, внеклеточные варианты полипептида INSP201 являются аспектами настоящего изобретения. Предпочтительно, чтобы такие варианты включали внеклеточные формы, содержащие, или состоящие из них, аминокислотные остатки 1-405 SEQ ID NO:8, или остатки 22-405, включительно, последовательности SEQ ID NO:8, в их апо- и N-гликозилированных формах, описанных выше. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO:14, будет далее называтьсяSEQ ID NO:18, будет далее называться "зрелым внеклеточным полипептидом INSP201", и этот полипептид не включает аминокислоты, предположительно, образующие сигнальную последовательность полипептида INSP201. Полипептидные варианты такого типа могут быть, в частности, использованы в скрининг-анализах на лиганды, такие как секретируемые лиганды, связывающиеся с полипептидом INSP201 и с другими белками указанного типа. Такие варианты могут быть также использованы для количественной оценки указанных лигандов, например для диагностики заболевания, в патогенезе которых эти лиганды и указанный полипептид играют определенную роль. Аспектом настоящего изобретения также является внутриклеточный вариант полипептида INSP201. Таким вариантом является полипептид, состоящий из аминокислотных остатков 428-518, включительно,последовательности SEQ ID NO:8. Полипептид, имеющий последовательность, представленную в SEQID NO:16, будет далее называться "внутриклеточным полипептидом INSP201". Используемый здесь термин "полипептиды INSP201" включает полипептиды, содержащие полипептид экзона 1 INSP201, полипептид экзона 2 INSP201, полипептид экзона 3 INSP201, полноразмерный полипептид INSP201, зрелый полипептид экзона 1 INSP201, зрелый полипептид INSP201, внеклеточный полипептид INSP201, зрелый внеклеточный полипептид INSP201 и внутриклеточный полипептидINSP201. Все эти полипептиды являются аспектами настоящего изобретения. В соответствии с вышеупомянутыми вариантами первого аспекта настоящего изобретения предпочтительно, чтобы такой полипептид функционировал как секретируемый белок, в частности как член семейства гликопротеинов клеточной поверхности. Гликопротеины клеточной поверхности представляют значительный интерес для специалиста в области биологии человека, а значит, и физиологии человека, а также в области здравоохранения. Очевидно, что внешняя поверхность клеточной мембраны играет важную роль в образовании тканей и в сохранении их целостности. Внешние поверхности развивающихся и дифференцированных клеток содержат рецепторные молекулы, распознающие системные сигналы, лиганды или гормоны. Связывание или диссоциация лигандов регулирует некоторые из различных функций клеток и приводит их в соответствие с требованиями всей системы организма. Внешняя поверхность клеток также покрыта гликопротеинами и протеогликанами. Такие крупные комплексы белка и полисахаридов образуют тканеспецифический матрикс, в котором клетки, имеющие аналогичную функцию, могут действовать совместно как единая ткань. При эмбриогенезе сортировка и объединение клеток, имеющих общую функцию, облегчается и,вероятно, регулируется благодаря молекулярной специфичности гликопротеиновых и протеогликановых поверхностей данных клеток. Углеводные цепи представляют собой гликопротеины, связанные N- и О-гликозидными связями и образующие сложные структуры. Фактически, N- и О-гликановые цепи формируются в эндоплазматическом ретикулуме и в аппарате Гольджи в результате регулируемого каскада гликотрансферазных и гликозидазных реакций процессинга под влиянием событий специфической регуляции (например, на уровне-2 011261 экспрессии гена или локализации фермента). Такая комплексная регуляция приводит к образованию сотен структур, некоторые из которых варьируются, в зависимости от типа клеток/тканей или стадии их развития/дифференцировки. В настоящее время наблюдается всевозрастающий интерес к заболеваниям, вызываемым нарушением гликозилирования, и к терапевтическим гликопротеинам, продуцируемым методами рекомбинантных ДНК. В частности, патологические клетки могут содержать относительные количества указанных структур, которые в большинстве случаев отличаются от нормальных клеток по своим свойствам и могут быть использованы в целях определения стадии заболевания и в целях диагностики. Информация о структурах гликопротеинов, ассоциированных с данным заболеванием и об их функциях, может быть использована в терапии, например, в иммунотерапии, для блокирования клеточной адгезии или предотвращения других процессов связывания или других биологических процессов (Brockhausen I. et al., ActaAnat. 1998; 161(1-4):36-78; Bhatia P.K.Mukhopadhyay A., Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 1999; 64:155201). Так, например, была исследована взаимосвязь между характером гликозилирования/экспрессии гликопротеинов и прогрессированием рака/развитием злокачественных заболеваний (Dennis J.W. et al.,Biocheim. Biophys. Acta. 1999 Dec. 6; 1473 (1) :21-34) или наследственных заболеваний (Dennis J.W. et al.,Bioassays. 1999 May; 21 (5) :412-21). С учетом того, что гликопротеины обычно экспрессируются в виде смесей гликоформ, были разработаны различные методы получения гомогенных гликопептидных и гликопротеиновых материалов для их использования в экспериментах, проводимых в целях биологического исследования гликопротеинов(Grogan M.J. et al., Annu.Rev.Biochem. 2002; 71:593-634). Многие гликопротеины клеточной поверхности подвергаются ограниченному протеолизу под действием клеточных протеаз. Такой механизм "слущивания" способствует секреции внеклеточных доменов, которые могут влиять на активность связывания других циркулирующих белков, распознаваемых этими внеклеточными доменами. Фактически, такое "слущивание" внеклеточных доменов в результате изменения клеточных ответов на экзогенные раздражители приводит к развитию ряда патофизиологических процессов, таких как воспаление, дегенерация и апоптоз клеток, а также онкогенез, как было показано в результате интенсивного исследования систем "цитокин/рецептор цитокина" (Mullberg J. et al.,Eur. Cytokine Netw. 2000 Mar; 11 (1) :27-38; Arribas J.Merlos-Suarez A. Curr. Top. Dev. Biol. 2003; 54:125-44; Dello Sbarba P.Rovida E; Biol. Chem. 2002 Jan; 383 (1):69-83). Полипептиды согласно первому аспекту настоящего изобретения могут дополнительно содержать гистидиновую метку. Такая гистидиновая метка предпочтительно присутствует у С-конца данного полипептида. Предпочтительно такая гистидиновая метка содержит 1-10 гистидиновых остатков (например,1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков). Более предпочтительно указанная гистидиновая метка содержит 6 гистидиновых остатков."Антигенная детерминанта" согласно изобретению может представлять собой часть полипептида согласно изобретению, которая связывается с антигенсвязывающим сайтом антитела или с Т-клеточным рецептором (TCR). Альтернативно, "антигенная детерминанта" может представлять собой сайт на поверхности полипептида согласно изобретению, с которым связывается одна молекула антитела. Вообще говоря, антиген имеет несколько или множество различных антигенных детерминант и реагирует с антителами, обладающими множеством различных специфичностей. Такое антитело предпочтительно является иммуноспецифичным к полипептиду согласно изобретению. Предпочтительно указанное антитело является иммуноспецифичным к полипептиду согласно изобретению, который не составляет часть гибридного белка. Предпочтительно указанное антитело является иммуноспецифичным к INSP201 или к его фрагменту. Антигенные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как боковые цепи аминокислот или сахаров, и могут иметь специфические трехмерные структуры, а также определенный заряд. Предпочтительно термин "антигенная детерминанта" означает конкретную химическую группу на полипептиде согласно изобретению, которая является антигенной, то есть вырабатывает специфический иммунный ответ. Во втором своем аспекте настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид согласно первому аспекту изобретения. Термин "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" предпочтительно означает молекулу нуклеиновой кислоты согласно изобретению, которая (1) отделена, по меньшей мере примерно от 50% белков,липидов, углеводов или других соединений, с которыми ассоциируется природная полноразмерная нуклеиновая кислота при ее выделении из клеток-источников; (2) не связана со всеми полинуклеотидами или с их частью, с которыми указанная "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" ассоциируется в природе, (3) функционально присоединена к полинуклеотиду, с которым она не ассоциируется в природе; или (4) не встречается в природе как часть более крупной полинуклеотидной последовательности. Предпочтительно выделенная молекула нуклеиновой кислоты согласно изобретению, по существу, не содержит любой(ых) другой(их) примесной(ых) молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты или других примесей, которые присутствуют в ее природном окружении и могут препятствовать использованию этой нуклеиновой кислоты для продуцирования полипептидов или ее терапевтическому, диагностиче-3 011261 скому или профилактическому применению или применению в целях исследования. Предпочтительный вариант изобретения, в частности, относится к молекулам геномных ДНК, которые не входят в объем настоящего изобретения. Предпочтительно геномная ДНК, в частности, имеющая размер более чем 10 т.п.н. (тысяч пар нуклеотидов), 50 т.п.н., 100 т.п.н., 150 т.п.н., 200 т.п.н., 250 т.п.н. или 300 т.п.н., не входит в объем изобретения. При этом предпочтительно, если такая "очищенная молекула нуклеиновой кислоты" состоит только из кДНК. Предпочтительно очищенная молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO:1 (кодирующей полипептид экзона 1 INSP201), SEQ IDINSP201), SEQ ID NO:7 (кодирующей полипептид INSP201), SEQ ID NO:9 (кодирующей зрелый полипептид экзона 1 INSP201), SEQ ID NO:11 (кодирующей зрелый полипептид INSP201), SEQ ID NO:13(кодирующей внеклеточный полипептид INSP201), SEQ ID NO:15 (кодирующей внутриклеточный полипептид INSP201) или SEQ ID NO:17 (кодирующей зрелый внеклеточный полипептид INSP201), или представляет собой избыточный эквивалент или фрагмент любой из указанных последовательностей. Настоящее изобретение также относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, состоящей из последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO:1 (кодирующей полипептид экзона 1 INSP201), SEQ ID NO:3 (кодирующей полипептид экзона 2 INSP201), SEQ ID NO:5 (кодирующей полипептид экзона 3 INSP201), SEQ ID NO:7 (кодирующей полипептид INSP201), SEQ ID NO:9 (кодирующей зрелый полипептид экзона 1 INSP201), SEQ ID NO:11 (кодирующей зрелый полипептидINSP201), SEQ ID NO:13 (кодирующей внеклеточный полипептид INSP201), SEQ ID NO:15 (кодирующей внутриклеточный полипептид INSP201) или SEQ ID NO:17 (кодирующей зрелый внеклеточный полипептид INSP201), или представляющей собой избыточный эквивалент или фрагмент любой из указанных последовательностей. В своем третьем аспекте настоящее изобретение относится к очищенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой жесткости с молекулой нуклеиновой кислоты второго аспекта настоящего изобретения. Условия гибридизации высокой жесткости определяют как условия инкубирования в течение ночи при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5XSSC (150 мМ NaCl,15 мМ тринатрийцитрат), 50 мМ фосфат натрия (рН 7,6), 5 х раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, с последующей промывкой фильтров в 0,1 Х SSC приблизительно при 65 С. Используемый здесь термин "функциональный эквивалент" означает молекулу белка или нуклеиновой кислоты, обладающую функциональными или структурными свойствами, в основном аналогичными свойствам молекулы полипептида или нуклеиновой кислоты согласно изобретению. Функциональный эквивалент белка может содержать модификации, если такие модификации необходимы для осуществления конкретной функции. Термин "функциональный эквивалент" включает фрагменты, мутанты, гибриды, варианты, аналоги или химические производные молекулы. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая любой одной или несколькими функциональными активностями полипептидов согласно изобретению. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты, обладающая активностью, которая, по существу, аналогична активности INSP201 или его фрагмента, измеренной в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты,обладающая активностью, которая идентична активности или превышает активность INSP201 или его фрагмента, измеренную в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть молекула белка или нуклеиновой кислоты,обладающая активностью, которая составляет 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 100% или более от активностиINSP201 или его фрагментов, измеренной в соответствующем анализе на биологическую активность или функцию. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть белок или полипептид, обладающий in vivo или in vitro активностью, которая по существу аналогична активности полипептидов согласно изобретению. Предпочтительно "функциональным эквивалентом" может быть белок или полипептид,способный взаимодействовать с другими клеточными или внеклеточными молекулами по механизму,который, по существу, аналогичен механизму взаимодействия соответствующей части полипептидов согласно изобретению. Так, например, в иммуноанализе, "функциональный эквивалент" может способствовать снижению способности к связыванию антитела с соответствующим пептидом (то есть, пептидом, имеющим модифицированную аминокислотную последовательность, а поэтому являющимся"функциональным эквивалентом") полипептида согласно изобретению или с самим полипептидом согласно изобретению, где указанное антитело вырабатывается против соответствующего пептида полипептида согласно изобретению. Эквимолярная концентрация указанного функционального эквивалента будет снижать уровень вышеупомянутого связывания соответствующего пептида по меньшей мере примерно на 5%, предпочтительно примерно на 5-10%, более предпочтительно примерно на 10-25%, еще-4 011261 более предпочтительно примерно на 25-30% и наиболее предпочтительно примерно на 40-50%. Так, например, функциональные эквиваленты могут быть полностью функциональными, либо у них может отсутствовать одна или несколько активностей. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением, модификации могут влиять на функцию, например на активности полипептида, которые подтверждают их идентификацию как гликопротеина клеточной поверхности. В своем четвертом аспекте настоящее изобретение относится к вектору, такому как экспрессирующий вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты второго или третьего аспекта настоящего изобретения. В своем пятом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, трансформированному вектором четвертого аспекта настоящего изобретения. В своем шестом аспекте настоящее изобретение относится к лиганду, который специфически связывается с членами семейства гликопротеинов клеточной поверхности в соответствии с первым аспектом изобретения. Предпочтительно такой лиганд ингибирует функцию полипептида согласно первому аспекту изобретения, который является членом семейства гликопротеинов клеточной поверхности. Лиганды для полипептидов согласно изобретению могут иметь различные формы, включая природные или модифицированные субстраты, ферменты, рецепторы, небольшие органические молекулы, такие как небольшие природные или синтетические органические молекулы размером для 2000 Да, а предпочтительно 800 Да или менее, пептидомиметики, неорганические молекулы, пептиды, полипептиды, антитела, и их структурные или функциональные миметики. В своем седьмом аспекте настоящее изобретение относится к соединению, которое является эффективным с точки зрения изменения экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или с точки зрения регуляции активности полипептида согласно первому аспекту изобретения. Такие соединения могут быть идентифицированы с применением описанных здесь методов анализа и скрининга. Соединение согласно седьмому аспекту изобретения может либо повышать (служить агонистом),либо снижать (служить антагонистом) уровень экспрессии гена или активности полипептида. Важно отметить, что идентификация функции полипептида INSP201 дает возможность, разработать способы скрининга, позволяющие идентифицировать соединения, эффективные для лечения и/или диагностики заболеваний. Внеклеточные и внутриклеточные формы полипептида INSP201, предположительно, являются особенно подходящими для их применения в способах скрининга их источников. Лиганды и соединения согласно шестому и седьмому аспектам изобретения могут быть идентифицированы с использованием таких способов. Эти способы также являются аспектами настоящего изобретения. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к применению гена или полипептидаINSP201 в качестве мишени для скрининга кандидатов на лекарственные средства-модуляторы, а в частности лекарственных средств-кандидатов, обладающих активностью, направленной против расстройств,ассоциированных с гликопротеином клеточной поверхности. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам скрининга соединений на возможность их применения для лечения расстройств, ассоциированных с гликопротеином клеточной поверхности, где указанные способы включают в себя выявление способности указанного соединения связываться с геном или полипептидом INSP201 или с их фрагментами. В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам скрининга соединений на возможность их применения для лечения расстройств, ассоциированных с гликопротеином клеточной поверхности, где указанные способы включают в себя анализ на модуляцию активности гена или полипептида INSP201 или их фрагментов. В своем восьмом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду согласно первому аспекту настоящего изобретения или к молекуле нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту настоящего изобретения, или к вектору согласно четвертому аспекту настоящего изобретения, или к клетке-хозяину согласно пятому аспекту настоящего изобретения, или к лиганду согласно шестому аспекту настоящего изобретения, или к соединению согласно седьмому аспекту настоящего изобретения,которые могут быть использованы для лечения или диагностики заболеваний, в патогенезе которых участвуют члены семейства гликопротеинов клеточной поверхности. Такими заболеваниями могут быть клеточно-пролиферативные расстройства, включая новообразование, меланому, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи и другие солидные опухоли; миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, неходжкинская лимфома, лейкопения, тромбоцитопения, нарушение ангиогенеза, саркома Капоши; аутоиммунные/воспалительные заболевания, включая аллергию, воспалительные заболевания кишечника, артрит, псориаз, воспаление дыхательных путей,астму и отторжение трансплантированных органов; сердечно-сосудистые заболевания, включая гипертензию, отеки, стенокардию, атеросклероз, тромбоз, сепсис, инсульт, реперфузионное поражение и ишемию; неврологические расстройства, включая расстройства центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, повреждения головного мозга, амиотрофический боковой склероз и боли; заболевания дыхательных путей, включая хроническую обструктивную болезнь легких и кистозный фиброз; нарушение развития; метаболические расстройства, включая сахарный диабет, остеопороз и ожирение; СПИД и по-5 011261 чечные заболевания; инфекции, включая вирусные инфекции, бактериальные инфекции, грибковые инфекции и паразитарные инфекции, и другие патологические состояния. Такими заболеваниями предпочтительно являются заболевания, в патогенезе которых участвуют гликопротеины клеточной поверхности. Эти молекулы могут быть также использованы в целях приготовления лекарственного средства для лечения указанных заболеваний. Такие молекулы могут быть также использованы для контрацепции или для лечения репродуктивных расстройств, включая бесплодие. Молекулы согласно изобретению (то есть полипептиды согласно первому аспекту изобретения, молекула нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспектам изобретения, вектор согласно четвертому аспекту изобретения, клетка-хозяин согласно пятому аспекту изобретения, лиганд согласно шестому аспекту изобретения или соединение согласно седьмому аспекту изобретения) могут быть, в частности, использованы для лечения или диагностики расстройств/заболеваний (в данном описании изобретения, эти два термина являются взаимозаменяемыми), включая воспаление, дегенерацию и апоптоз клеток и онкогенез. В своем девятом аспекте настоящее изобретение относится к способу диагностики заболеваний у пациента, включающему в себя оценку уровня экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или оценку активности полипептида согласно первому аспекту изобретения в ткани указанного пациента и сравнение указанного уровня экспрессии или активности с контрольным уровнем, где уровень, который отличается от указанного контрольного уровня, является показателем заболевания. Такой способ предпочтительно осуществляют in vitro. Аналогичные способы могут быть использованы для мониторинга терапевтического лечения заболевания у пациента, где изменение уровня экспрессии или активности молекулы полипептида или нуклеиновой кислоты в течение определенного периода времени по сравнению с контрольным уровнем служит показателем рецидива заболевания. Предпочтительный способ детектирования полипептидов согласно первому аспекту изобретения включает в себя стадии (а) контактирования лиганда согласно шестому аспекту изобретения, такого как антитело, с биологическим образцом в условиях, подходящих для образования комплекса лигандполипептид; и (b) детектирования указанного комплекса. Что касается девятого аспекта изобретения, то в этой связи следует отметить, что для детектирования аномальных уровней белка существуют различные методы, известные специалисту, такие как методы гибридизации нуклеиновой кислоты с короткими зондами, методы анализа на точковую мутацию,метод амплификации с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и методы с использованием антител. Подобные методы могут быть использованы в короткий или продолжительный период времени, что позволяет проводить мониторинг терапевтического лечения заболевания у пациента. Настоящее изобретение относится также к наборам, которые могут быть использованы в указанных методах диагностики заболевания. В своем десятом аспекте настоящее изобретение относится к использованию полипептида согласно первому аспекту изобретения в качестве гликопротеина клеточной поверхности. Подходящим применением полипептидов согласно изобретению в качестве гликопротеинов клеточной поверхности является их использование в качестве регулятора клеточного роста, метаболизма или дифференцировки клеток; в качестве части пары рецептор/лиганд и в качестве диагностического маркера для детектирования физиологического или патологического состояния. В своем одиннадцатом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции,содержащей полипептид согласно первому аспекту изобретения или молекулу нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту изобретения, или вектор согласно четвертому аспекту изобретения,или клетку-хозяина согласно пятому аспекту изобретения, или лиганд согласно шестому аспекту изобретения, или соединение согласно седьмому аспекту настоящего изобретения, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. В своем двенадцатом аспекте настоящее изобретение относится к полипептиду согласно первому аспекту изобретения или к молекуле нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту изобретения, или к вектору согласно четвертому аспекту изобретения, или к клетке-хозяину согласно пятому аспекту изобретения, или к лиганду согласно шестому аспекту изобретения, или к соединению согласно седьмому аспекту изобретения, которые могут быть использованы в целях приготовления лекарственного средства для диагностики или лечения заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, миелопролиферативные расстройства, такие как лейкоз, лимфома, миелодиспластические синдромы и карцинома, новообразование, меланома, опухоли легких, ободочной кишки, молочной железы, поджелудочной железы, головы и шеи, и другие солидные опухоли, гематологические расстройства, такие как макроглобулинемия, аутоиммунные заболевания и воспалительные расстройства, включая аллергию, воспалительное заболевание кишечника, артрит, псориаз, рассеянный склероз, воспаление дыхательных путей,астму и отторжение трансплантированных органов, В-клеточные расстройства, сердечно-сосудистые расстройства, неврологические расстройства, нарушения развития, бесплодие, нарушения метаболизма,СПИД, почечное заболевание, инфекции и другие патологические состояния. В своем тринадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания у-6 011261 пациента, предусматривающему введение указанному пациенту полипептида согласно первому аспекту изобретения, или молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту изобретения,или вектора согласно четвертому аспекту изобретения, или клетки-хозяина согласно пятому аспекту изобретения, или лиганда согласно шестому аспекту изобретения, или соединения согласно седьмому аспекту изобретения. В том случае, если заболевания, при которых у данного пациента уровень экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или уровень активности полипептида согласно первому аспекту изобретения, ниже, чем соответствующий уровень экспрессии или активности у здорового пациента, то полипептид, молекула нуклеиновой кислоты, лиганд или соединение, вводимые указанному пациенту, должны обладать агонистическими свойствами. И наоборот, в случае, если заболевания, при которых у данного пациента уровень экспрессии природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или уровень активности полипептида согласно первому аспекту изобретения, выше, чем соответствующий уровень экспрессии или активности у здорового пациента, то полипептид, молекула нуклеиновой кислоты, лиганд или соединения, вводимые указанному пациенту, должны обладать антагонистическими свойствами. Примерами таких антагонистов являются молекулы антисмысловой нуклеиновой кислоты, рибозимы и лиганды, такие как антитела. Полипептиды INSP201 представляют собой гликопротеины клеточной поверхности, а поэтому, они играют определенную роль в развитии многих патологических состояний. Антагонисты полипептидовINSP201 представляют особый интерес, поскольку они позволяют благоприятно воздействовать на динамику патологических состояний. В своем четырнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к трансгенным животным или к животным, которые являются дефицитными по полипептиду первого аспекта настоящего изобретения и не являются человеком и которые были трансформированы так, что они экспрессируют более высокие или более низкие уровни указанного полипептида или вообще не экспрессируют такого полипептида. Указанные трансгенные животные являются наиболее подходящими моделями для исследования заболеваний и могут быть также использованы в способах скрининга в целях идентификации соединений, которые являются эффективными для лечения или диагностики данного заболевания. Различные стандартные методы и процедуры, которые могут применяться для осуществления изобретения, систематизированы ниже. При этом следует отметить, что настоящее изобретение не ограничивается описанными конкретными методами, протоколами, клеточными линиями, векторами и реагентами. Следует также отметить, что используемая здесь терминология применяется только для описания конкретных вариантов изобретения, и эта терминология не должна рассматриваться как ограничение объема настоящего изобретения. Объем изобретения ограничен только прилагаемой формулой изобретения. В настоящем описании используются стандартные сокращения, принятые для обозначения нуклеотидов и аминокислот. Если это не оговорено особо, то для осуществления настоящего изобретения используются стандартные методы молекулярной биологии и микробиологии, методы рекомбинантных ДНК и методы иммунологии, которые хорошо известны специалистам в данной области. Более полное описание указанных методов можно найти в литературе. Так, например, наиболее подходящие описания, которые могут быть использованы в качестве консультации, приводятся в следующих работах: Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989); DNA Cloning,Volumes I and II (D.N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B.D. HamesS.J. Higgins eds. 1984); Transcription and Translation (B.D. HamesS.J. Higginsand C.C. Blackwell eds. 1986). Используемый здесь термин "полипептид" включает любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислот, связанных друг с другом пептидными связями или модифицированных пептидными связями, то есть пептидными изостерами. Этот термин относится как к коротким цепям (пептидам или полипептидам), так и к более длинным цепям (белкам). Полипептид настоящего изобретения может присутствовать в форме зрелого белка, либо он может присутствовать в виде пре-, про- или препро-белка, который может быть активирован путем отщепления пре-, про- или препро-части этого белка с продуцированием активного зрелого полипептида. В таких полипептидах, пре-, про- или препро-последовательность может представлять собой лидерную или секреторную последовательность, либо она может представлять собой последовательность, используемую для очистки зрелой полипептидной последовательности. Полипептид согласно первому аспекту изобретения может образовывать часть гибридного белка.-7 011261 Так, например, часто оказывается предпочтительным, чтобы данный полипептид включал одну или несколько дополнительных аминокислотных последовательностей, которые могут содержать секреторную или лидерную последовательности, про-последовательности, последовательности, облегчающие очистку,или последовательности, сообщающие белку более высокую стабильность, например, во время рекомбинантного продуцирования. Альтернативно или дополнительно, зрелый полипептид может быть присоединен к другому соединению, такому как соединение, увеличивающее время полужизни указанного полипептида (например, к полиэтиленгликолю). Гибридный белок полипептида согласно первому аспекту изобретения может, например, содержать иммуноглобулиновый гибрид, то есть гибридный белок, содержащий весь внеклеточный INSP201 (например, INSP201-EC) или его фрагмент, слитый с полноразмерным иммуноглобулином или его частью. Методы получения гибридных белков иммуноглобулина хорошо известны специалистам и описаны, например, в WO 01/03737. Специалистам в данной области известно, что полученный гибридный белок согласно изобретению, по существу, сохраняет биологическую активность полипептида согласно первому аспекту изобретения, такую, например, как ингибирование IL-2, которое может быть определено в invitro анализах, описанных в примере 6, или в анализе на рак, описанном в примере 7, или с использованием животных-моделей воспалительного кишечного заболевания, описанных в примере 8. Указанный гибрид может быть получен путем прямого присоединения компонентов или путем их присоединения посредством короткого линкерного пептида, длина которого может составлять по меньшей мере 1-3 аминокислотных остатка или более, например 5, 7, 9, 11 или 13 аминокислотных остатков. Указанным линкером может быть, например, трипептид с последовательностью E-F-M (Glu-Phe-Met) или линкерная последовательность, состоящая из 13 аминокислот и содержащая последовательность Glu-Phe-Gly-AlaGly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met, встроенную между полипептидом согласно первому аспекту изобретения и последовательностью иммуноглобулина. Полученный гибридный белок обладает улучшенными свойствами, такими как более длительное время его присутствия в физиологических жидкостях(время полужизни), повышенная удельная активность, повышенный уровень экспрессии, или способность указанного гибридного белка легко подвергаться очистке. В предпочтительном варианте изобретения полипептид согласно первому аспекту изобретения присоединяют к константной области молекулы Ig, например к Fc-части иммуноглобулина. Предпочтительно такой полипептид присоединяют к областям тяжелой цепи, таким как домены СН 2 и СН 3, например,но необязательно, вместе с шарнирной областью человеческого IgG1. Fc-часть может быть, например,мутирована для предупреждения нежелательных активностей, таких как связывание с комплементом,связывание с Fc-рецепторами или т.п. Получение специфических гибридных белков, содержащих полипептид согласно первому аспекту изобретения и часть иммуноглобулина, описано, например, в примере 11 заявки WO99/09063. Для получения гибридных белков согласно изобретению могут быть также использованы и другие изоформы Ig,такие как изоформы IgG2 или IgG4, и изоформы других классов Ig, таких, например, как IgM или IgA. Гибридные белки могут быть мономерными или мультимерными, а также гетеро- или гомомультимерными. Другие гибридные белки полипептида согласно первому аспекту изобретения могут быть получены путем присоединения доменов, выделенных из других белков, с образованием димеров, тримеров и т.п. Примерами последовательностей белков, которые могут образовывать мультимеры полипептидов согласно изобретению, являются домены, выделенные из таких белков, как hCG (WO97/30161), коллаген X(WO 04/33486), С 4 ВР (WO 04/20639), белки Erb (WO 98/02540) или суперспирализованные пептиды (WO 01/00814). Полипептиды могут содержать аминокислоты, которые отличаются от 20 аминокислот, кодируемых генами, и которые являются модифицированными либо в результате природных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, либо в результате применения химических методов модификации, хорошо известных специалистам. Примерами известных модификаций, которые могут быть осуществлены в полипептидах настоящего изобретения, являются гликозилирование, присоединение липида,сульфирование, гамма-карбоксилирование, например, остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование и ADP-рибозилирование. Другими возможными модификациями являются ацетилирование, ацилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение молекулы гема, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липидного производного, ковалентное присоединение фосфатидилинозита, перекрестное связывание, циклизация, образование дисульфидной связи, деметилирование, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, образование GPIякоря, иодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитический процессинг,фосфорилирование, пренилирование, рацемизация, селеноилирование, присоединение аминокислот к белкам, опосредуемое переносом РНК, такое как аргинилирование, и убихитинизация. Модификации могут присутствовать в любой области полипептида, включая пептидный остов,аминокислотные боковые цепи и амино- или карбокси-концы. Действительно, блокирование амино- или карбокси-конца в полипептиде, либо того и другого, посредством ковалентной модификации является обычным процессом, происходящим в природных и синтетических полипептидах, и такие модификации-8 011261 могут присутствовать в полипептидах настоящего изобретения. Модификации, которые присутствуют в полипептиде, в большинстве случаев, будут зависеть от способа получения данного полипептида. Для полипептидов, полученных рекомбинантным методом,природа и степень модификации, по большей части, будут определяться способностью к посттрансляционной модификации конкретной клетки-хозяина и присутствием сигналов модификации в аминокислотной последовательности рассматриваемого полипептида. Так, например, характер гликозилирования может варьироваться у клеток-хозяев различного типа. Полипептиды настоящего изобретения могут быть получены любым подходящим способом. Такими полипептидами являются выделенные природные полипептиды (например, выделенные из клеточной культуры), полипептиды, продуцированные рекомбинантным методом (включая гибридные белки), синтетические полипептиды или полипептиды, продуцированные с использованием комбинации этих методов (см., например, Bray 2003, Nat. Rev. Drug. Discov. 2(7):587-93; CasiHilvert 2003, Curr. Opin. Struct.Biol., 13(5):589-94). Функционально эквивалентные полипептиды первого аспекта настоящего изобретения могут представлять собой полипептиды, гомологичные полипептиду INSP201. Два полипептида могут быть определены используемым здесь термином "гомологичные", если последовательность одного из этих полипептидов имеет достаточно высокую степень идентичности или сходства с последовательностью другого полипептида. Термин "идентичность" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей,эти две последовательности имеют идентичные аминокислотные остатки. Термин"сходство" означает, что в любом конкретном положении сопоставляемых последовательностей эти две последовательности имеют аминокислотные остатки аналогичного типа. Степень идентичности и сходства может быть легко вычислена (Computational Molecular Biology, Lesk A.M., ed., Oxford UniversitySequence Analysis Primer, Gribskov M.Devereux J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991). Поэтому, гомологичными полипептидами являются природные биологические варианты (например,аллельные варианты или варианты полипептидов, образовавшиеся в результате географических изменений видов, от которых эти полипептиды происходят) и мутанты (такие как мутанты, содержащие аминокислотные замены, инсерции или делеции) полипептида INSP201. Такими мутантами могут быть полипептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков заменены консервативным или неконсервативным аминокислотным остатком (предпочтительно консервативным аминокислотным остатком), и такой замененный аминокислотный остаток может быть, а может и не быть, остатком, кодируемым генетическим кодом. Обычно такие замены происходят между Ala, Val, Leu и Ile; между Ser и Thr; между кислотными остатками Asp и Glu; между Asn и Gln; между основными остатками Lys и Arg; или между ароматическими остатками Phe и Tyr. Особенно предпочтительными являются варианты, в которых несколько, то есть от 5 до 10, от 1 до 5, от 1 до 3, от 1 до 2 аминокислот или только одна аминокислота, являются замененными, делетированными или добавленными в любой комбинации. Особенно предпочтительными являются "молчащие" замены, добавления и делеции, которые не влияют на свойства и активность указанного белка. Также предпочтительными являются консервативные замены. Такими мутантами также являются полипептиды, в которых один или несколько аминокислотных остатков имеют группу-заместитель. В соответствии с настоящим изобретением любая замена должна быть предпочтительно "консервативной" или "допустимой" заменой, которую обычно определяют как замену, вводящую аминокислоты,имеющие аналогичные химические свойства (например, основная положительно заряженная аминокислота должна быть заменена другой основной, положительно заряженной аминокислотой), которые являются достаточными для сохранения структуры и биологической функции данной молекулы. В литературе описано множество моделей, с помощью которых может быть осуществлен отбор консервативных аминокислотных замен, исходя из статистических и физико-химических исследований последовательности и/или структуры белков (Rogov S.I. и Nekrasov A.N., 2001). Эксперименты по конструированию белков показали, что использование специфических подпоследовательностей аминокислот позволяет продуцировать белки с соответствующей укладкой и активные белки и классифицировать аминокислотные "синонимичные" замены, которые могут легко адаптироваться к белковой структуре и которые могут быть использованы для детектирования функциональных и структурных гомологов и паралогов (Murphy L.R. et al., 2000). Группы синонимичных аминокислот и группы более предпочтительных синонимичных аминокислот представлены в табл. 1. В полипептиды согласно изобретению также могут быть также введены в различных целях специфические неконсервативные мутации. Мутации, снижающие аффинность гликопротеина клеточной поверхности, допускают возможность повторного использования этих полипептидов, а также их применения в других целях, что потенциально повышает их терапевтическую эффективность (Robinson C.R.,2002). Иммуногенные эпитопы, фактически присутствующие в полипептидах согласно изобретению,могут быть использованы для разработки вакцин (Stevanovic S., 2002), либо они могут быть удалены пу-9 011261 тем модификации их последовательности известными методами отбора мутаций, повышающих стабильность белка, и их коррекции (van den Burg В.Eijsink V., 2002; WO 02/05146, WO 00/34317 и WO 98/52976). Предпочтительной альтернативой синонимичным группам для аминокислотных производных,включенных в пептидомиметики, являются группы, определенные в табл. 2. Неисчерпывающий список аминокислотных производных также включает аминоизомасляную кислоту (Aib), гидроксипролин (Hyp),1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-COOH, индолин-2-карбоновую кислоту, 4-дифторпролин, L-тиазолидин 4-карбоновую кислоту, L-гомопролин, 3,4-дегидропролин, 3,4-дигидроксифенилаланин, циклогексилглицин и фенилглицин. Термин "аминокислотное производное" означает аминокислоту, не входящую в 20 кодируемых генетическим кодом природных аминокислот, или химическую молекулу, подобную такой аминокислоте. В частности, такое аминокислотное производное может содержать замещенные или незамещенные молекулы, молекулы с прямой цепью, молекулы с разветвленной цепью или циклоалкильные молекулы, а также может включать один или несколько гетероатомов. Указанные аминокислотные производные могут быть получены de novo, либо они могут быть взяты из коммерчески доступных источников (Calbiochem-Novabiochem A.G., Switzerland; Bachem, USA). Различные методы включения неприродных аминокислотных производных в белки с использованием in vitro и in vivo систем трансляции для зондирования и/или улучшения структуры и функции белков описаны в литературе (Dougherty D.A., 2000). Методы синтеза и получения пептидомиметиков, а также непептидомиметиков также хорошо известны специалистам (Golebiowski A. et al., 2001; Hruby V.J.Balse P.M., 2000; Sawyer Т.К., "Structure Based Drug Design", edited by Veerapandian P., Marcel Dekker Inc.,pg.557-663, 1997). Обычно считается, что два полипептида, имеющие более чем 30%-ную идентичность, являются функционально эквивалентными. Предпочтительно, чтобы последовательности функционально эквивалентных полипептидов согласно первому аспекту изобретения были более чем на 80% идентичны последовательности полипептида INSP201 или его активных фрагментов. Более предпочтительными являются полипептиды, имеющие степень идентичности более чем 85, 90, 95, 98 или 99% соответственно. Функционально эквивалентными полипептидами согласно первому аспекту изобретения могут быть также полипептиды, которые были идентифицированы с применением одного или нескольких методов структурного сопоставления первичных последовательностей путем их выравнивания. Так, например, технология информационной обработки потока геномных данных (Inpharmatica Genome Threader),которая составляет один из аспектов способа поиска, используемых для генерирования базы данных поиска Biopendium, может быть применена (см. заявку РСТ WO 01/69507) для идентификации полипептидов с неизвестными функциями, в отношении которых, несмотря на их низкую степень идентичности по сравнению с полипептидом INSP201, высказывается предположение, что они представляют собой члены семейства гликопротеинов клеточной поверхности, где указанное предположение основано на их значительной структурной гомологии с последовательностью полипептида INSP201. Термин "значительная структурная гомология" означает, что технология Inpharmatica Genome Threader позволяет предсказать структурную гомологию двух белков с достоверностью по крайней мере 10% и выше. Полипептид согласно первому аспекту изобретения также включает фрагменты полипептидаINSP201 и фрагменты функциональных эквивалентов полипептида INSP201, при условии, что эти фрагменты являются членами семейства гликопротеинов клеточной поверхности или имеют общую антигенную детерминанту с полипептидом INSP201. Используемый здесь термин "фрагмент" означает полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая является идентичной части, но не всей аминокислотной последовательности полипептида INSP201, либо одному из его функциональных эквивалентов. Эти фрагменты должны содержать по крайней мере n смежных аминокислот данной последовательности, и в зависимости от конкретной последовательности, указанное число n предпочтительно равно 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16,18, 20 или более). Небольшие фрагменты могут образовывать антигенную детерминанту. Предпочтительно минимальная длина фрагмента согласно изобретению составляет 6, 10, 25, 50,100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 аминокислот. Предпочтительно максимальная длина фрагмента согласно изобретению составляет 517, 515, 510,500, 475, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100 или 50 аминокислот. Предпочтительно минимальная длина молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент согласно изобретению, составляет 18, 30, 75, 150, 300, 450, 600, 750, 900, 1050, 1200, 1350 или 1500 нуклеотидов. Предпочтительно максимальная длина молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент согласно изобретению, составляет 1551, 1545, 1530, 1500, 1425, 1350, 1200, 1050, 900, 750, 600, 450, 300 или 150 нуклеотидов. Предпочтительно максимальная длина полипептида согласно изобретению составляет 518, 520, 550,600, 650, 700, 800, 900, 1000, 1250, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500 или 5000 аминокислот.- 10011261 Предпочтительно максимальная длина молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид согласно изобретению, составляет 1554, 1560, 1750, 1800, 1950, 2100, 2400, 2700, 3000, 5000, 7500, 10000,20000, 30000, 50000, 75000 или 100000 нуклеотидов. Фрагменты полноразмерного полипептида INSP201 могут состоять из комбинаций 2 или всех трех 3 последовательностей смежных экзонов в последовательностях полипептидов INSP201, соответственно. Указанные фрагменты могут присутствовать в "свободной форме", то есть они могут не быть частью другого полипептида или не быть присоединенными к другим аминокислотам или полипептидам,либо они могут входить в состав более крупного полипептида, часть или область которого они образуют. Если фрагмент настоящего изобретения входит в состав более крупного полипептида, то наиболее предпочтительно, чтобы такой фрагмент образовывал одну непрерывную область. Так, например, некоторые предпочтительные варианты настоящего изобретения относятся к фрагменту, имеющему пре- и/или прополипептидную область, присоединенную к аминоконцу указанного фрагмента, и/или дополнительную область, присоединенную к карбоксильному концу этого фрагмента. Однако в состав одного более крупного полипептида могут входить несколько фрагментов. Полипептиды настоящего изобретения или их иммуногенные фрагменты (содержащие по крайней мере одну антигенную детерминанту) могут быть использованы для генерирования лигандов, таких как поликлональные или моноклональные антитела, которые обладают иммуноспецифичностью к таким полипептидам. Указанные антитела могут быть использованы для выделения или для идентификации клонов, экспрессирующих полипептиды настоящего изобретения, или для очистки данных полипептидов аффинной хроматографией. Как совершенно очевидно для любого читателя-специалиста, такие антитела помимо других применений могут быть также использованы в качестве диагностических или терапевтических средств. Термин "иммуноспецифический" означает, что данные антитела имеют, в основном, более высокую аффинность к полипептидам настоящего изобретения, чем к другим родственным полипептидам, описанным ранее. Используемый здесь термин "антитело" означает интактные молекулы, а также их фрагменты, такие как Fab, F(ab')2 и Fv, которые способны связываться с рассматриваемой антигенной детерминантой. Такие антитела связываются с полипептидами первого аспекта настоящего изобретения. Под понятием "значительно более высокая аффинность" авторы подразумевают заметно более высокую аффинность к полипептиду согласно изобретению по сравнению с аффинностью известных секретируемых белков. При этом предпочтительно, чтобы аффинность по отношению к полипептиду согласно изобретению по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10, 100, 103, 104, 105, 106 раз или более превышала аффинность по отношению к известным секретируемым белкам, таким как члены семейства гликопротеинов клеточной поверхности. При этом предпочтительно, чтобы аффинность по отношению к полипептиду согласно изобретению значительно превышала аффинность по отношению к известным гликопротеинам клеточной поверхности. Если предпочтительными являются поликлональные антитела, то выбранное млекопитающее, такое как мышь, кролик, коза или лошадь, может быть иммунизовано полипептидом согласно первому аспекту изобретения. Полипептид, используемый для иммунизации животного, может быть получен методами рекомбинантных ДНК, либо он может быть синтезирован методом химического синтеза. Если необходимо, то данный полипептид может быть конъюгирован с белком-носителем. Обычно используемыми носителями, к которым могут быть химически присоединены данные полипептиды, являются альбумин бычьей сыворотки, тироглобулин и гемоцианин лимфы улитки. Такой связанный полипептид может быть затем использован для иммунизации животного. Сыворотку, взятую у иммунизованного животного,собирают и обрабатывают известными методами, например иммуноаффинной хроматографией. Моноклональные антитела против полипептидов согласно первому аспекту изобретения могут быть легко получены специалистом в данной области. Общая методика получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии хорошо известна специалистам (см., например, Kohler G.Milstein С, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4:72(1983); Cole et al., 77-96,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985. Панели моноклональных антител, продуцированных против полипептидов согласно первому аспекту изобретения, могут быть скринированы на различные свойства, то есть на изотип, эпитоп, аффинность и т.п. Моноклональные антитела являются особенно подходящими для очистки отдельных полипептидов, против которых они направлены. Альтернативно, гены, кодирующие нужные моноклональные антитела, могут быть выделены из гибридом, например, методами ПЦР, известными специалистам, а также они могут быть клонированы и экспрессированы в соответствующих векторах. Могут быть также использованы и химерные антитела, в которых нечеловеческие вариабельные области соединены или лигированы с человеческими константными областями (см., например, Liu et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 3439 (1987. Эти антитела могут быть модифицированы так, чтобы они были менее иммуногенными для индивидуума, например путем их "гуманизации" (см., Jones et al., Nature, 321, 522 (1986); Verhoeyen et al., Sci- 11011261ence, 239, 1534 (1988); Kabat et al., J. Immunol., 147, 1709 (1991); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA,86, 10029 (1989); Gorman et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 88, 34181 (1991) и Hodgson et al.,Bio/Technology, 9, 421 (1991. Используемый здесь термин "гуманизованное антитело" означает молекулы антитела, в которых аминокислоты CDR и другие выбранные аминокислоты в вариабельных доменах тяжелой и/или легкой цепей нечеловеческого донорного антитела были заменены эквивалентными аминокислотами человеческого антитела. Таким образом, гуманизованное антитело имеет близкое сходство с человеческим антителом, но при этом оно обладает способностью связываться с донорным антителом. В другом альтернативном варианте изобретения таким антителом может быть "биспецифическое" антитело, то есть антитело, имеющее два различных антигенсвязывающих домена, каждый из которых обладает специфичностью к различным эпитопам. Для отбора генов, кодирующих антитела, обладающие способностью связываться с полипептидами согласно изобретению, либо из набора ПЦР-амплифицированных V-генов лимфоцитов человека, скринированных на способность вырабатывать соответствующие антитела, либо из библиотеки "необученных" лимфоцитов, может быть использована техника фагового представления (McCafferty J. et al. (1990),Nature 348, 552-554; Marks J. et al., (1992) Biotechnology 10, 779-783). Аффинность этих антител может быть также повышена путем перестановки цепей (Clackson Т. et al., (1991) Nature 352, 624-628). Антитела, генерированные вышеописанными методами, независимо от того, являются ли они поликлональными или моноклональными, обладают и другими ценными свойствами, то есть они могут быть использованы в качестве реагентов в иммуноанализах, радиоиммуноанализах (РИА) или твердофазных иммуноферментных анализах (ELISA). Для использования в этих целях антитела могут быть помечены аналитически детектируемым реагентом, таким как радиоизотоп, флуоресцентная молекула или фермент. Поликлональные антитела, направленные против полипептида согласно изобретению, обычно вырабатываются у животных (например, у кроликов или мышей) посредством нескольких подкожных или внутрибрюшинных инъекций полипептида INSP201 и адъюванта. Может оказаться желательным использовать конъюгат полипептида согласно изобретению с белком-носителем, который является иммуногенным у иммунизуемого животного, таким как гемоцианин лимфы улитки, сывороточный альбумин, бычий тироглобулин или ингибитор соевого трипсина. Кроме того, для усиления иммунного ответа используют агрегирующие агенты, такие как квасцы. После иммунизации у животных берут кровь и сыворотку анализируют на титр антитела против INSP201. Моноклональные антитела, направленные против полипептида согласно изобретению, продуцируют любым методом, который позволяет вырабатывать молекулы антитела путем культивирования непрерывной клеточной культуры. Примерами подходящих методов получения моноклональных антител являются гибридомные методы и метод получения человеческой В-клеточной гибридомы. Настоящее изобретение также относится к гибридомным клеточным линиям, продуцирующим моноклональные антитела, реагирующие с полипептидом INSP201. Моноклональные антитела согласно изобретению могут быть модифицированы для их применения в качестве терапевтических средств. Одним из вариантов является "химерное антитело", в котором часть тяжелой (Н) и/или легкой (L) цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности антител, происходящих от конкретного вида или принадлежащих к конкретному классу или подклассу, а остальная(ые) цепь(и) идентична(ы) или гомологична(ы) соответствующей последовательности антител,происходящих от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу. Настоящее изобретение также относится к фрагментам таких антител, при условии, что они обладают нужной биологической активностью. В другом своем варианте моноклональное антитело согласно изобретению является "гуманизованным" антителом. Вообще говоря, гуманизованное антитело имеет один или несколько аминокислотных остатков, введенных в это антитело из источника, не относящегося к человеку. Гуманизация может быть осуществлена, например, методами, известными специалистам, путем замены по меньшей мере одной части гипервариабельной области грызунов соответствующими областями человеческого антитела. Термин "антитело" или "иммуноглобулин" охватывает как поликлональное, так и моноклональное антитело. Предпочтительным антителом является моноклональное антитело, реагирующее с антигеном. Термин "антитело" также включает смеси более чем одного антитела, реагирующего с антигеном (например, смесь моноклональных антител различных типов, реагирующих с антигеном). Термин "антитело" также включает полноразмерные антитела, их биологически функциональные фрагменты, одноцепочечные антитела и генетически модифицированные антитела, такие как химерные антитела, содержащие части антител более чем одного вида, бифункциональные антитела, конъюгаты антител, гуманизованные и человеческие антитела. Биологически функциональными фрагментами антител, которые также могут быть использованы, являются пептидные фрагменты антитела, достаточные для связывания с антигеном. Используемый здесь термин "антитело" включает полноразмерное антитело, а также любые его фрагменты (например, F(ab')2, Fab', Fab, Fv), способные связываться с представляющими интерес эпитопами,антигенами или антигенными фрагментами. Термин "очищенное антитело" означает антитело, которое, в основном, не содержит других белков,углеводов и липидов, с которыми оно обычно ассоциируется в природе. Такое антитело "преимущест- 12011261 венно связывается" с полипептидами INSP201 согласно изобретению (или с его антигенным фрагментом), то есть, в основном, не распознает и не связывается с другими антигенно неродственными молекулами. Очищенное антитело согласно изобретению является предпочтительно иммунореактивным сINSP201 конкретного вида и обладает иммунной специфичностью к INSP201 конкретного вида, а более предпочтительно является иммуноспецифичным к нативному человеческому INSP201. Термин "специфически связывается" означает, что данное антитело связывается со специфическим полипептидом, то есть INSP201, с высокой авидностью и/или высокой аффинностью. Связывание антитела со своим эпитопом на этом специфическом полипептиде предпочтительно является более сильным,чем связывание того же самого антитела с любым другим эпитопом. Антитела, которые специфически связываются с INSP201, могут связываться и с другими полипептидами на более низком, но еще детектируемом уровне (например, на уровне, составляющем 10% или менее от уровня связывания, наблюдаемого для представляющего интерес полипептида). Такое слабое связывание или фоновое связывание можно легко дифференцировать от специфического связывания антитела с представляющим интерес соединением или полипептидом, например, с использованием соответствующего контроля. Предпочтительно аффинность антитела по отношению к полипептиду согласно изобретению по меньшей мере в 1,5, 2,5, 10, 100, 103, 104, 105, 106 или более раз превышает аффинность по отношению к другим известным членам семейства INSP201. Термин "генетически модифицированные антитела" означает антитела, аминокислотная последовательность которых отличается от последовательности нативного антитела. Благодаря релевантности методов рекомбинантных ДНК согласно изобретению, нет необходимости ограничиваться последовательностями аминокислот, обнаруживаемых в природных антителах, то есть антитела могут быть реконструированы для сообщения им желательных свойств. Возможными изменениями является множество замен, которые варьируются в пределах от замены только одной или нескольких аминокислот до полной реконструкции, например, вариабельной или константной области. Вообще говоря, для улучшения или изменения других свойств, таких как фиксация комплемента, взаимодействие с мембранами или другие эффекторные функции, могут быть сделаны модификации в константной области. Для улучшения антигенсвязывающих свойств могут быть сделаны модификации в вариабельной области. Термин "гуманизованное антитело" или "гуманизованный иммуноглобулин" означает иммуноглобулин, содержащий человеческую каркасную область, и по меньшей мере одну, а предпочтительно все гипервариабельные области (CDR), происходящие от нечеловеческого антитела, где любая присутствующая в иммуноглобулине константная область, по существу, по меньшей мере примерно на 85-90%, а предпочтительно по меньшей мере на 95%, идентична константной области человеческого иммуноглобулина. Следовательно, все части гуманизованного иммуноглобулина, возможно, за исключением CDR,по существу идентичны соответствующим частям одной или нескольких нативных последовательностей человеческого иммуноглобулина. См., например, Queen et al., патенты США 55301101; 5585089; 5693762 и 6180370 (каждый из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки)."Полностью гуманизованные антитела" представляют собой молекулы, содержащие вариабельную и константную область человеческого иммуноглобулина. Полностью гуманизованные антитела могут быть использованы в терапии, где их повторное введение необходимо для лечения хронических и рецидивирующих заболеваний, таких как аутоиммунные заболевания. Один из методов получения полностью человеческих антител заключается в "гуманизации" мышиной гуморальной иммунной системы, то есть в продуцировании мышиных штаммов, способных вырабатывать человеческий Ig (Xenomice), путем введения локусов человеческого иммуноглобулина (Ig) мыши, у которой были инактивированы эндогенные гены Ig. Области Ig являются исключительно сложными по своей физической структуре, и для конечного продуцирования иммунного ответа широкого ряда необходимо осуществление процессов реаранжировки и экспрессии генов. Разнообразие антител, главным образом, генерируется путем комбинаторной реаранжировки различных генов V, D и J, присутствующих в локусах Ig. Такие локусы также содержат чередующиеся регуляторные элементы, осуществляющие регуляцию экспрессии антител, аллельное исключение, переключение классов и созревание аффинности. Введение неаранжированных трансгенов человеческих Ig-трансгенов мышам продемонстрировало, что мышиный механизм рекомбинации совместим с механизмом рекомбинации человеческих генов. Кроме того, гибридомы, секретирующие антигенспецифические человеческие mAb различных изотипов, могут быть получены путем иммунизации мышей Xenomice антигеном. Полностью гуманизованные антитела и методы их получения известны специалистам (Mendez et al.,Nature Genetics 15:14 6-156 (1997); Buggemann et al., Eur. J. Immunol. 21:1323-1326 (1991); Tomizuka et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97:722-727 (2000), заявка на патент WO 98/24893). Термин "химерное антитело" означает антитело, в котором константная область происходит от антитела одного вида (обычно человеческого антитела), а вариабельная область происходит от антитела другого вида (обычно антитела грызуна). Следовательно, химерные антитела представляют собой молекулы, различные части которого происходят от животных различных видов, таких как молекулы, имеющие вариабельную область, происходящую от мышиного Mab и константную область человеческого им- 13011261 муноглобулина. Так, например, при использовании мышиных Mab, достигаются более высокие выходы из гибридов, но при этом наблюдается более высокая иммуногенность у человека, а поэтому для снижения иммуногенности и для увеличения выхода продукта, главным образом, используются химерные антитела, такие как человеческие/мышиные химерные Mab. Химерные антитела и методы их получения известны специалистам (Cabilly et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:3273-3277 (1984); Morrison et al., Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984); Boulianne et al., Nature 312:643-646 (1984); Cabilly et al., Европейская патентная заявка 125023 (опубликованная 14 ноября, 1984); Neuberger et al., Nature 314:268-270(1985); Taniguchi et al., Европейская патентная заявка 171496 (опубликованная 19 февраля, 1985); Morrison et al., Европейская патентная заявка 173494 (опубликованная 5 марта, 1986); Neuberger et al., заявка РСТ WO 8601533 (опубликованная 13 марта, 1986); Kudo et al., Европейская патентная заявка 184187(опубликованная 11 июня, 1986); Sahagan et al., J. immunol. 137:1066-1074 (1986); Robinson et al., Международная патентная заявкаWO 8702671 (опубликованная 7 мая, 1987); Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,USA, 84:3439-3443 (1987); Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84:214-218 (1987); Better et al., Science 240:1041-1043 (1988); Riechmann et al., Nature 332:323-327; и HarlowLane, ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, см. выше. Эти публикации во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Используемый здесь термин "фрагмент антитела" означает молекулу, содержащую часть антитела,способного специфически связываться с антигеном, антигенной детерминантой или эпитопом. Следует отметить, что Fab и F(ab)2 и другие фрагменты антител, используемых в настоящем изобретении, могут быть использованы для детектирования и количественной оценки их антигенов методами, описанными здесь для молекул интактных антител. Такие фрагменты обычно получают путем протеолитического расщепления с использованием ферментов, таких как папаин (для получения Fab-фрагментов) или пепсин (для получения F(ab')2-фрагментов). Что касается упомянутых здесь антител, то термин "моноклональное антитело" включает моноклональные антитела, химерные антитела, полностью гуманизованные антитела, антитела против антиидиотипических антител (анти-анти-Id антитела), которые могут быть помечены в растворимой или связанной форме, а также их фрагменты, полученные любыми известными методами, такими как, но не ограничивающимися ими, ферментативное расщепление, пептидный синтез или методы рекомбинантных ДНК. Моноклональные антитела представляют собой, по существу, гомогенную популяцию антител, специфичных к антигенам, где указанные популяции содержат, в основном, аналогичные эпитопсвязывающие сайты. Mab могут быть получены методами, известными специалистам. См., например, работы Kohler G.Milstein С, Nature 256:495-497 (1975); патент США 4376110; Ausubel et al., eds., HarlowLane, ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988); и Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publisching Assoc. and Wiley Interscience, N.Y. (1992-1996), содержание которых во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Такие антитела могут принадлежать к иммуноглобулинам любого класса, включая IgG, IgM, IgE, IgA, GILD и любого подкласса. Гибридома, продуцирующая mAb согласно изобретению, может быть культивирована in vitro,in situ или in vivo. Благодаря продуцированию высоких титров Mab in vivo или in situ, этот метод получения является предпочтительным. Термин "моноклональное антитело" также означает интактные молекулы, а также их фрагменты, такие, например, как Fab и F(ab')2, способные связываться с антигеном. Fab иF (ab')2-фрагменты не содержат Fc-фрагмента интактного антитела, более быстро выводятся из кровотока и могут обладать способностью к менее неспецифическому связыванию с тканями, чем интактное антитело (Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983. Считается, что моноклональное антитело "способно связываться" с молекулой, если оно способно специфически реагировать с указанной молекулой, и если такая реакция приводит к связыванию данной молекулы с антителом."Антиген" представляет собой молекулу или часть молекулы, способную связываться с антителом,где указанный антиген, кроме того, обладает способностью индуцировать у животного вырабатывание антитела, способного связываться с эпитопом такого антигена. Антиген может иметь один или несколько эпитопов. Упомянутый выше термин "специфическая реакция" означает, что указанное антитело реагирует с высокой степенью селективности с эпитопом на соответствующем антигене, но не с множеством других антигенов, индуцирующих вырабатывание других антител. Эти антитела, включая фрагменты антител, используемые в настоящем изобретении, могут быть применены для количественной или качественной оценки их антигенов в образце, или для детектирования присутствия клеток, экспрессирующих свои антигены. Такая оценка может быть осуществлена иммунофлуоресцентными методами с использованием флуоресцентно меченого антитела (см. ниже) в комбинации с флуоресцентной микроскопией, проточной цитометрией или флуориметрического детектирования. Антитела (или их фрагменты), используемые в настоящем изобретении, могут быть применены для гистологического анализа, а также в иммунофлуоресцентной или иммуноэлектронной микроскопии, дляin situ детектирования их антигенов. Детектирование in situ может быть осуществлено путем забора гистологического образца у пациента и обработки такого образца меченым антителом согласно изобрете- 14011261 нию. Это антитело (или фрагмент) предпочтительно добавляют к биологическому образцу, либо на этот биологический образец наносят меченое антитело (или его фрагмент). Путем осуществления такой процедуры может быть определено не только присутствие данных антигенов, но также и их распределение в рассматриваемой ткани. Для среднего специалиста совершенно очевидно, что для осуществления in situ детектирования с помощью настоящего изобретения могут быть применены любые модифицированные методы гистологических анализов (таких как процедуры окрашивания) широкого ряда. Такие анализы на присутствие антигенов обычно включают инкубирование биологического образца, такого как биологические жидкости, тканевые экстракты, свежесобранные клетки, такие как лимфоциты или лейкоциты, или клетки, которые были инкубированы в тканевой культуре в присутствии меченого антитела, способного идентифицировать антигены, и детектирование антитела любыми методами,хорошо известными специалистам. Биологический образец может быть иммобилизован на твердофазной подложке или на носителе,таком как нитроцеллюлоза, или на другой твердофазной подложке или на другом носителе, способном иммобилизовывать клетки, клеточные частицы или растворимые белки. Затем такая подложка или носитель могут быть промыты подходящими буферами, а затем обработаны меченым антителом согласно изобретению, как было упомянуто выше. Затем твердофазная подложка или носитель могут быть промыты буфером второй раз для удаления несвязанного антитела. Количество несвязанной метки на указанной твердой подложке или на носителе может быть затем оценено стандартными методами. Молекула антитела согласно изобретению может быть адаптирована для использования в иммунометрическом анализе, также известном как "двухсайтовый" или "сэндвич"-анализ. В типичном иммунометрическом анализе, определенное количество немеченого антитела (или фрагмента антитела) иммобилизуют на твердой подложке или на твердом носителе и добавляют определенное количество детектируемо меченого растворимого антитела, что позволяет детектировать и/или количественно оценивать трехкомпонентный комплекс, образованный антителом, иммобилизованном на твердофазном носителе,антигеном и меченым антителом. Антитела согласно изобретению могут быть использованы в комбинации с методами иммуноаффинной хроматографии. Более конкретно, такие антитела могут быть помещены на поверхность материала в хроматографической колонке. Затем, очищаемая композиция может быть пропущена через указанную колонку. Если очищаемый образец включает любые полипептиды INSP201, которые связываются с антителами, то такие полипептиды INSP201 могут быть удалены из образца, а затем очищены. Следовательно, в целом, методы диагностики могут быть осуществлены in vitro с использованием клеточного образца (например, пробы крови, биоптата лимфоузлов или ткани), выделенного у млекопитающего, либо они могут быть осуществлены путем in vivo визуализации. Композиции, содержащие антитела согласно изобретению, могут быть использованы для детектирования присутствия INSP201, например, с помощью радиоиммуноанализа, ELISA, FACS и т.п. Одна или несколько молекул-меток могут быть присоединены к гуманизованному иммуноглобулину. Примерами молекул-меток являются красители, непроницаемые для рентгеновских лучей, рентгеноконтрастное вещество, флуоресцентные молекулы, спин-меченые молекулы, ферменты и другие молекулы-метки,используемые в диагностике, а в частности, в радиологических методах или в методах визуализации с помощью магнитного резонанса. Препараты антител IgG согласно изобретению могут быть преимущественно выделены из антисыворотки согласно изобретению путем аффинной очистки, предпочтительно посредством G-белокиммунопреципитации. Антисыворотка, полученная от иммунизованного животного, может быть использована для детектирования с оптимальной чувствительностью посредством вестерн-иммуноблот-анализа,иммунопреципитации и ELISA-анализа полипептидов INSP201. В общих чертах, очищенное антитело или фрагмент антитела согласно изобретению, способное(ый) специфически связываться с антигеном-мишенью, обычно являются оптимальными с точки зрения репродуцируемости, стандартизации или точности детектирования по сравнению с неочищенным препаратом согласно изобретению. Для среднего специалиста в данной области очевидно, что указанное антитело или фрагмент,имеющее(ий) аффинность, определяемую константой диссоциации, составляющей до 10-12 для когнатного антигена, может быть получено стандартными методами. Как было описано выше, указанный препарат может преимущественно содержать антитело или фрагмент антитела, присоединенные к детектируемой молекуле любого типа. Фрагмент антитела имеет то преимущество, что его размер меньше, чем размер родительского антитела, от которого он происходит, но при этом он сохраняет, по существу, такую же специфичность связывания с антигеном-мишенью, либо такую же специфичность и аффинность связывания, как родительское антитело. Таким образом, благодаря тому, что фрагмент антитела имеет меньший размер, чем родительское антитело, он будет, в основном, иметь гораздо лучшее биологическое распределение в ткани и лучшие диффузные свойства (например, в системе in vivo или в выделенных тканях), чем родительское антитело. Фрагмент антитела, в котором, по существу, отсутствует Fc-область, такой как одноцепочечный Fv-, Fab'-, Fab- и F(ab')2-фрагмент или CDR, является предпочтительным для использования в- 15011261 целях обработки данного препарата молекулой, способной специфически связываться с такой Fcобластью, и в тех случаях когда такое связывание является нежелательным. Обычно такими случаями являются нежелательное связывание Fc-области с когнатным Fc-рецептором, или связывание Fc-области с компонентом комплемента (например, с компонентом Clq комплемента, присутствующего в сыворотке). Fc-рецепторы присутствуют на поверхности иммунных клеток многих типов, включая специализированные АПК, такие как дендритные клетки; В-лимфоциты и гранулоциты, такие как нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, моноциты, макрофаги и тучные клетки. Таким образом, отсутствие Fc-области во фрагменте антитела может быть особенно предпочтительным для предотвращения нежелательной активации иммунных клеток, опосредуемой Fc-рецептором, или нежелательного каскада реакций активации комплемента, опосредуемых компонентом комплемента, а в частности, при введении указанного препарата индивидууму in vivo.F(ab')2 представляет собой фрагмент молекулы антитела, содержащий двухвалентную антигенсвязывающую часть молекулы антитела.F(ab')2-препарат согласно изобретению может быть соответствующим образом получен стандартными методами путем обработки указанного препарата антитела, такого как антисыворотка согласно изобретению, ферментом пепсином. Полученный F(ab')2-продукт представляет собой частицу 5S.Fab- или Fab' представляет собой фрагмент молекулы антитела, содержащий одновалентную антигенсвязывающую часть молекулы антитела.CDR может быть генерирована, как описано в ЕР 0585939 или как описано у Strandberg et al. (ProteinEng. 2001 Jan; 14 (1):67-74). CDR согласно изобретению может представлять собой модифицированнуюCDR, которая оказывает значительное влияние на модуляцию полипептида INSP201. Методы модификации активных пептидов описаны, например Sawa et al. 1999 (J. Med. Chem. 42, 3289-3299).Fab'-препарат согласно изобретению может быть легко получен стандартными методами путем обработки антителосодержащего препарата согласно изобретению ферментом пепсином с последующим проведением реакции восстановления с получением F(ab')2. Такое восстановление может быть осуществлено с использованием тиолового восстановителя и с использованием, но необязательно, группы, блокирующей сульфгидрильные группы, полученные в результате расщепления дисульфидных связей. В результате такой обработки получают два моновалентных 3,5S Fab-фрагмента и Fc-фрагмента.Fab-препарат может быть легко получен стандартными методами путем обработки антителосодержащего препарата согласно изобретению, такого как антисыворотка согласно изобретению, ферментом папаином с получением интактной легкой цепи и части тяжелой цепи, состоящей из вариабельного домена и CH1-домена. Полное описание генерирования фрагмента антитела путем ферментативной обработки антитела имеется в специальной литературе (см., например, Goldenberg, патенты США 4036945 и 4331647;Porter R.R., 1959. Biochem J. 73:119-126). Одноцепочечный Fv-фрагмент (также обозначаемый в литературе scFv) представляет собой одноцепочечную молекулу, включающую вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, соединенные подходящим полипептидным линкером.F(ab')2-, Fab'-, Fab-, scFv- или CDR-препарат согласно изобретению может быть получен методами рекомбинантных ДНК. Рекомбинантный фрагмент антитела получают путем выделения мРНК из В-лимфоцитов животных, иммунизованных антигеном-мишенью; продуцирования кДНК из мРНК посредством ОТ-ПЦР; и использования указанной кДНК для конструирования библиотеки фагового представления фрагментов антитела. В-лимфоциты могут быть соответствующим образом выделены из селезенки или, альтернативно, из крови, костного мозга или лимфатических узлов иммунизованного животного. При этом следует отметить, что вышеописанная методика может быть применена для получения препарата, содержащего фрагмент моноклонального антитела согласно изобретению, обладающий, по существу, любой желательной аффинностью и/или специфичностью связывания с антигеном-мишенью. Такой препарат может быть использован в различных целях, при которых предпочтительно использовать реагент, способный связываться с антигеном-мишенью с определенными параметрами связывания. Поскольку Fab' имеет структуру, по существу аналогичную структуре Fab, то препарат настоящего изобретения, содержащий Fab', может быть использован, в основном, в таких же целях, как препарат,содержащий Fab, где указанные Fab'- и Fab-фрагменты содержат по существу аналогичные вариабельные области тяжелой и легкой цепи. В данном случае, в зависимости от конкретного применения, препарат согласно изобретению, содержащий фрагмент антитела, способный связываться с антигеном-мишенью с максимальной аффинностью, то есть F (ab)2-препарат, согласно изобретению может обладать значительно большим преимуществом по сравнению с Fab-, Fab'- или scFv-препаратами согласно изобретению,поскольку, в отличие от одновалентного связывания указанного одновалентного фрагмента антитела, F(ab)2-препарат обладает двухвалентным связыванием с антигеном-мишенью. Как было упомянуто выше, в зависимости от применения и цели этого применения, препарат, содержащий антитело или его фрагмент, может быть получен от млекопитающего любого вида. Препарат, содержащий антитело или его фрагмент согласно изобретению, происходящих от млеко- 16011261 питающего нужного вида, может быть выделен из сыворотки животного такого вида, иммунизованного антигеном-мишенью. Препарат согласно изобретению, содержащий человеческое или гуманизованное антитело или его фрагмент, может быть предпочтительным для его применения, предусматривающего введение препарата индивидууму. Так, например, человеческое или гуманизованное антитело или его фрагмент обычно имеют оптимальную иммунологическую переносимость, а поэтому они имеют оптимальное время полужизни in vivo у человека и тем самым обладают оптимальной эффективностью. Дополнительное описание получения и применения человеческих или гуманизованных антител приводится ниже. Данный препарат может быть использован per se, либо он может быть получен в виде активного ингредиента, входящего в состав фармацевтической композиции. Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и, в качестве активного ингредиента, антитело или фрагмент антитела согласно изобретению. Способы получения фармацевтической композиции, содержащей антитело или его фрагмент согласно изобретению в качестве активного ингредиента, и способы применения такой фармацевтической композиции описаны ниже. Доставку антитела или его фрагмента предпочтительно осуществляют путем введения фармацевтической композиции согласно изобретению, содержащей антитело или его фрагмент согласно изобретению в качестве активного ингредиента. Указанное антитело или его фрагмент предпочтительно вводят в целях достижения уровня фрагмента антитела, связанного с антигеном-мишенью, достаточного для достижения желательной регуляции биохимической активности. Средний специалист в данной области, такой как лечащий врач, а более предпочтительно врачспециалист по данному заболеванию, может самостоятельно провести требуемое обследование в целях определения подходящей схемы терапии, включая подходящий способ введения и подходящую дозу антитела или его фрагмента, эффективную для лечения заболевания в соответствии с настоящим изобретением. Как было описано выше, антиген-мишень (то есть INSP201), который представляет собой полипептид, может быть получен различными способами. Предпочтительно такой антиген-мишень получают стандартным методом химического синтеза. Указанный антиген-мишень может быть химически синтезирован, например, стандартными методами твердофазного синтеза. Такими методами являются исключительный твердофазный синтез, частичный твердофазный синтез, фракционированная конденсация и классический синтез в растворе. Процедуры твердофазного полипептидного синтеза хорошо известны специалистам [см., например, Stewartet al., "Solid Phase Peptide Synthesis", 2nd ed., Pierce Chemical Company, (1984)]. Синтезированный полипептид может быть очищен с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии, описанной Creighton T. [Protein, structures and molecular principles, W.H.Freeman and Co. N.Y. (1983)], а его аминокислотная последовательность может быть подтверждена стандартными методами секвенирования аминокислот. Как было описано выше, указанный препарат предпочтительно получают путем иммунизации млекопитающего указанным антигеном-мишенью. Получение препарата in vivo может быть преимущественно осуществлено путем повторной инъекции млекопитающему антигена-мишени в присутствии адъюванта в соответствии со схемой введения,предусматривающей бустер-стимуляцию продуцирования антител в сыворотке. В случае, если данный антиген-мишень слишком мал для вырабатывания адекватного иммуногенного ответа (называемый в литературе "гаптеном"), то такой гаптен может быть присоединен к антигенно нейтральному носителю,такому как гемоцианин лимфы улитки (KLH) или сывороточный альбумин [например, альбумин бычьей сыворотки (BSA)] (см., например, патенты США 5189178 и 5239078). Присоединение гаптена к носителю может быть осуществлено различными методами, хорошо известными специалистам, так, например, может быть осуществлено прямое присоединение к аминогруппам, с последующим, но необязательным, восстановлением образующейся имино-связи. Альтернативно, данный носитель может быть присоединен с использованием конденсирующих агентов, таких как дициклогексилкарбодиимид или другие карбодиимидные дегидратирующие агенты. Для такого присоединения могут быть также использованы линкерные соединения, а именно могут быть использованы гомобифункциональные и гетеробифункциональные линкеры, поставляемые фирмой Pierce Chemical Company, Rockford, III. Полученный иммуногенный комплекс может быть затем инъецирован подходящим млекопитающим, таким как коровы, овцы, мыши, кролики и т.п. После вырабатывания антитела in vivo его титр в сыворотке млекопитающего-хозяина может быть легко определен в соответствии с процедурами иммуноанализов, хорошо известными специалистам в данной области. Как было описано выше, указанный препарат может преимущественно содержит гуманизованное антитело или его фрагмент. Гуманизованные антитела или их фрагменты представляют собой генетически сконструированные- 17011261 химерные антитела или их фрагменты, имеющие предпочтительно минимальные части, происходящие от нечеловеческих антител. Гуманизованными антителами являются антитела, в которых гипервариабельные области человеческого антитела (антитела-реципиента) заменены остатками гипервариабельной области нечеловеческого антитела (донорного антитела), такого как мышиного, крысиного или кроличьего антитела, обладающего нужными функциональными свойствами. В некоторых случаях каркасные остатки Fv человеческого антитела заменены соответствующими нечеловеческими остатками. Гуманизованные антитела могут также содержать остатки, не присутствующие в последовательностях антителареципиента, в "импортной" гипервариабельной области или в каркасной области. В общих чертах, гуманизованное антитело может содержать, по существу, все или по меньшей мере один, а обычно два вариабельных домена, в которых все или, в основном, все гипервариабельные области соответствуют областям нечеловеческого антитела, а все или почти все каркасные области соответствуют областям релевантной человеческой консенсусной последовательности. В оптимальном случае гуманизованные антитела также включают по меньшей мере часть константной области антитела, такой как Fc-область, обычно происходящую от человеческого антитела (см., например, Jones et al., Nature, 321, 522 (1986); Riechmann et al.,Nature 332:323-329 и Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596). Методы гуманизации не-человеческих антител или их фрагментов хорошо известны специалистам. В общих чертах, гуманизованное антитело имеет один или несколько аминокислотных остатков, введенных в него из источника, не являющегося человеком. Такие нечеловеческие аминокислотные остатки часто называют "импортными" остатками,которые обычно происходят от "импортного" вариабельного домена. Гуманизация может быть осуществлена, по существу, как описано в литературе (см., например, Jones et al., Nature 321, 522 (1986); Riechmann et al., 1988. Nature, 332:323-327, Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536; патент CIIIA4816567) путем замены человеческих гипервариабельных областей соответствующими гипервариабельными областями грызунов. В соответствии с этим, такими гуманизованными антителами являются химерные антитела, где вариабельный домен, который, по существу, меньше вариабельного домена интанктного человеческого антитела, заменен соответствующей последовательностью, происходящей от нечеловеческого антитела. Практически, гуманизованными антителами, в основном, могут быть человеческие антитела,в которых некоторые остатки гипервариабельной области, а возможно и некоторые остатки каркасной области заменены остатками, происходящими от аналогичных сайтов антител грызунов. Человеческие антитела или их фрагменты могут быть также получены различными методами, известными специалистам, включая конструирование библиотек фагового представления [см., например, HoogenboomWinter, 1991. J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991. J. Mol. Biol. 222:581; Cole et al., "Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy", Alan R. Liss, pp. 77 (1985); Boerner et al. 1991. J. Immunol., 147:86-95). Гуманизованные антитела могут быть также получены путем введения последовательностей, кодирующих области человеческого иммуноглобулина, трансгенным животным, например мышам, у которых эндогенные гены иммуноглобулина были частично или полностью инактивированы. После антигенной стимуляции продуцирование человеческого антитела наблюдалось у таких животных, которые во всех отношениях имели сходство с человеком, включая реаранжировку генов, сборку цепей и репертуар антител. Полное руководство по осуществлению такой технологии приводится в литературе (см., например, патенты США 5545807, 5545806, 5569825, 5625126, 5633425 и 5661016; Marks et al., 1992. Bio/Technology 10:779-783; Lonberg et al., 1994. Nature 368:856-859; Morrison, 1994. Nature 368:812-13; Fishwild et al.,1996. Nature Biotechnology, 14:845-51; Neuberger 1996. Nature Biotechnology, 14:826; LonbergHuszar,1995. Intern. Rev. Immunol. 13:65-93). Антитела-антагонисты против мембрано-связанного INSP201 могут быть использованы для лечения воспалительных и/или аутоиммунных расстройств. Антитела-агонисты против мембрано-связанного INSP201 могут быть использованы для лечения рака, ВИЧ- и/или EBV-инфекций и гепатита В. Активность антител против INSP201 может быть продемонстрирована в анализах и/или на животных-моделях, как описано в примерах 6-8. Предпочтительными молекулами нуклеиновой кислоты согласно второму и третьему аспекту изобретения являются молекулы, которые кодируют полипептидные последовательности, представленные вSEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14 и/или SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:18, и функционально эквивалентные полипептиды. Эти молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы в способах и в целях, описанных в настоящей заявке. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению предпочтительно содержат по крайней мере n смежных нуклеотидов в описанных здесь последовательностях, где n в зависимости от конкретной последовательности предпочтительно равно 10 или более (например, 12, 14, 15, 18, 20, 25, 30, 35, 40 или более). Молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению также являются последовательности,комплементарные последовательностям молекул нуклеиновой кислоты, описанных выше (например, для использования в качестве антисмысловых последовательностей или в качестве зондов). Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут присутствовать в форме РНК, такой как мРНК, или в форме ДНК, включая, например, кДНК, синтетическую ДНК или геномную ДНК. Такие- 18011261 молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены методами клонирования, химического синтеза или их комбинацией. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены, например, методом химического синтеза, таким как твердофазный фосфорамидитный химический синтез, выделение из геномных или кДНК-библиотек или выделение из соответствующего организма. РНК-молекулы могут быть, в основном, генерированы путем in vitro- или in vivo-транскрипции ДНК-последовательностей. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть двухцепочечными или одноцепочечными. Одноцепочечной ДНК может быть кодирующая цепь, также известная как смысловая цепь, либо некодирующая цепь, также называемая антисмысловой цепью. Термин "молекула нуклеиновой кислоты" также охватывает аналоги ДНК и РНК, такие как аналоги,содержащие модифицированные остовы и связанные с пептидом нуклеиновые кислоты (PNA). Используемый здесь термин "PNA" означает антисмысловую молекулу или антиген, который содержит олигонуклеотид, состоящий по крайней мере из пяти нуклеотидов и присоединенный к пептидному остову из аминокислотных остатков, которые предпочтительно заканчиваются лизином. Этот концевой лизин сообщает данной композиции растворимость. PNA могут быть ПЭГилированы для продления их времени жизни в клетке, где они предпочтительно связываются с комплементарной одноцелочечной ДНК и РНК и прекращают элонгацию транскрипта (Nielsen P.E. et al. (1993) Anticancer Drug Des. 8:53-63). Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно изобретению, может быть идентична кодирующей последовательности одной или нескольких описанных здесь молекул нуклеиновой кислоты. Эти молекулы могут также иметь различные последовательности, которые, вследствие вырожденности генетического кода, кодируют полипептид, представленный в любой из последовательностей SEQSEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:18. Такими молекулами нуклеиновой кислоты могут быть, но не ограничиваются ими, последовательность, кодирующая только зрелый полипептид; последовательность, кодирующая зрелый полипептид, и дополнительные кодирующие последовательности, такие как последовательности, кодирующие лидерную или секреторную последовательность, такую как про-, пре- или препро-полипептидную последовательность; последовательность, кодирующая зрелый полипептид с вышеупомянутыми дополнительными кодирующими последовательностями или без них, либо вместе с другими дополнительными некодирующими последовательностями, включая некодирующие 5'- и 3'последовательности, такие как транскрибированные нетранслированные последовательности, которые играют определенную роль в транскрипции (включая сигналы терминации), в связывании с рибосомой и в обеспечении стабильности мРНК. Молекулами нуклеиновой кислоты могут быть также вспомогательные последовательности, кодирующие дополнительные аминокислоты, такие как аминокислоты, обладающие дополнительными функциональными свойствами. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно второму и третьему аспектам изобретения могут также кодировать фрагменты или функциональные эквиваленты полипептидов и фрагментов согласно первому аспекту изобретения. Указанная молекула нуклеиновой кислоты может представлять собой природный вариант, такой как природный аллельный вариант, либо такая молекула может представлять собой вариант, не встречающийся в природе. Указанные неприродные варианты молекулы нуклеиновой кислоты могут быть получены методами мутагенеза, включая методы, применяемые к молекулам нуклеиновой кислоты, к клеткам или к целым организмам. Среди рассматриваемых вариантов имеются варианты, которые отличаются от вышеупомянутых молекул нуклеиновой кислоты тем, что они имеют нуклеотидные замены, делеции или инсерции. Такие замены, делеции или инсерции могут быть сделаны в одном или нескольких нуклеотидах. Указанные варианты могут быть модифицированы в кодирующей или в некодирующей области или в той и другой области. Альтерации в кодирующих областях могут приводить к консервативным или неконсервативным аминокислотным заменам, делециям или инсерциям. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также сконструированы методами, в основном, известными специалистам, включая, в зависимости от целей применения, модификацию клонирования, процессинг и/или экспрессию генного продукта (полипептида). Перестановка ДНК путем рандомизированной фрагментации и повторной сборки генных фрагментов и синтетических олигонуклеотидов с помощью ПЦР представляет собой технологию, которая может быть использована для конструирования нуклеотидных последовательностей. Сайт-направленный мутагенез может быть использован для введения новых рестрикционных сайтов, изменения характера гликозилирования, изменения предпочтительности кодонов, продуцирования вариантов сплайсинга, введения мутаций и т.п. Молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид согласно первому аспекту изобретения, могут быть лигированы с гетерологичной последовательностью так, чтобы полученная комбинированная молекула нуклеиновой кислоты кодировала гибридный белок. Такие комбинированные молекулы нуклеиновой кислоты входят во второй или третий аспект настоящего изобретения. Так, например,для скрининга пептидных библиотек на ингибиторы активности указанного полипептида с использованием такой комбинированной молекулы нуклеиновой кислоты может оказаться полезным осуществление экспрессии гибридного белка, который может распознаваться коммерчески доступным антителом.- 19011261 Гибридный белок может быть также сконструирован так, чтобы он содержал сайт расщепления, локализованный между последовательностью полипептида согласно изобретению и последовательностью гетерологичного белка, и чтобы такой полипептид мог быть отщеплен и выделен из указанного гетерологичного белка. Молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также антисмысловые молекулы, которые являются частично комплементарными молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептиды согласно изобретению, а поэтому они гибридизуются с кодирующими молекулами нуклеиновой кислоты (гибридизация). В соответствии с методами, известными среднему специалисту в данной области, такие антисмысловые молекулы, например олигонуклеотиды, могут быть сконструированы так,чтобы они распознавали нужную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид согласно изобретению, специфически связывались с этой нуклеиновой кислотой и, тем самым, предотвращали ее транскрипцию (см., например, Cohen J.S., Trends in Pharm. Sci., 10, 435 (1989), Okano, J. Neurochem. 56, 560(1991); O'Connor, J. Neurochem 56, 560 (1991); Lee et al., Nucleic Acids Res 6, 3073 (1979); Cooney et al.,Science 241, 456 (1988); Dervan et al., Science 251, 1360 (1991. Используемый здесь термин "гибридизация" означает присоединение двух молекул нуклеиновой кислоты друг к другу посредством водородных связей. Обычно одна молекула может быть фиксирована на твердом носителе, а другая молекула может находиться в растворе в свободном состоянии. Затем эти две молекулы могут быть подвергнуты контакту друг с другом в условиях, благоприятствующих образованию водородной связи. Факторами, влияющими на образование таких связей, являются тип и объем растворителя; температура реакции; время гибридизации; перемешивание; присутствие агентов, блокирующих неспецифическое связывание молекулы в жидкой фазе с твердым носителем (реагент Денхардта или BLOTTO); концентрация молекул; использование соединений, повышающих скорость ассоциации молекул (сульфата декстрана или полиэтиленгликоля); и жесткость условий промывки после гибридизации (Sambrook et al., [см. выше]). Ингибирование гибридизации полностью комплементарной молекулы с молекулой-мишенью может быть оценено с использованием гибридизационного анализа, известного специалистам (Sambrook etal. [см. выше]). В высокой степени гомологичная молекула будет затем конкурировать с полностью гомологичной молекулой за связывание с молекулой-мишенью и ингибировать это связывание в различных условиях жесткости, как описано у Wahl G.M. и S.L. Berger (1987; Methods Enzymol. 152:399-407) иKimmel A.R. (1987; Methods Enzymol. 152:507-511). Термин "жесткость" означает условия реакции гибридизации, которые благоприятствуют ассоциации молекул с большим сходством, но не способствуют ассоциации отличающихся молекул. Условия гибридизации высокой жесткости определяют как условия инкубирования в течение ночи при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5XSSC (150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрийцитрат), 50 мМ фосфат натрия (рН 7,6), 5 х раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной фрагментированной ДНК спермы лосося, с последующей промывкой фильтров в 0,1X SSC приблизительно при 65 С. Условия низкой жесткости предусматривают реакцию гибридизации, осуществляемую при 35 С(Sambrook et al. [см. выше]). Предпочтительными условиями гибридизации являются условия гибридизации высокой жесткости. В предпочтительных вариантах этого аспекта, настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые по всей своей длине по крайней мере на 70% идентичны молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид INSP201, и к молекулам нуклеиновой кислоты, которые, в основном, комплементарны указанным молекулам нуклеиновой кислоты. В соответствии с этим аспектом настоящего изобретения предпочтительно, чтобы молекула нуклеиновой кислоты содержала область, которая по всей своей длине по меньшей мере на 80% идентична такой кодирующей последовательности,либо чтобы молекула нуклеиновой кислоты была комплементарна указанной молекуле. При этом особенно предпочтительно, чтобы молекулы нуклеиновой кислоты по всей своей длине были по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, а особенно предпочтительно по меньшей мере на 98%, 99% или более идентичны указанным последовательностям. Предпочтительными вариантами этого аспекта являются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды, которые обладают, в основном, такой же биологической функцией или активностью, как и полипептид INSP201. Настоящее изобретение относится к способу детектирования молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению, включающему стадии: (а) контактирования нуклеинового зонда согласно изобретению с биологическим образцом в условиях гибридизации, способствующих образованию дуплексов; и(b) детектирования любого из таких образованных дуплексов. Как будет дополнительно обсуждаться ниже в связи с анализами, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, молекула нуклеиновой кислоты, описанная выше, может быть использована в качестве гибридизационного зонда для РНК, кДНК или геномной ДНК в целях выделения полноразмерных кДНК и геномных клонов, кодирующих полипептид INSP201, и в целях выделения кДНК и геномных клонов гомологичных и ортологичных генов, имеющих высокую степень сходства с генами, кодирующими этот полипептид. В этой связи наряду с другими известными методами могут быть использованы методы, описанные- 20011261 и обсуждаемые ниже в качестве иллюстрации. Методы секвенирования и анализа ДНК хорошо известны и, в основном, доступны специалистам и могут быть реально использованы для осуществления многих вариантов согласно изобретению, обсуждаемых в настоящей заявке. В указанных методах могут использоваться ферменты, такие как фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I, секвеназа (US Biochemical Corp.,Cleveland, ОН), полимераза Taq (Perkin Elmer), термостабильная полимераза Т 7 (Amersham, Chicago, IL),или комбинация таких полимераз и корректирующие экзонуклеазы, такие как экзонуклеазы, присутствующие в ELONGASE Amplification System и поставляемые Gibco/BRL (Gaithersburg, MD). Способ секвенирования может быть предпочтительно автоматизирован с использованием устройств, таких как аппарат Hamilton Micro Lab 2200 (Hamilton, Reno, NV), термоячейка Peltier Thermal Cycler (PTC200; MJElmer). Одним из методов выделения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с функцией, эквивалентной функции полипептида INSP201, является зондирование библиотеки геномных ДНК или кДНК природным или искусственно сконструированным зондом в соответствии со стандартными процедурами, известными специалистам (см., например, "Current Protocols in Molecular Biology", Ausubelet al. (eds). Greene Publisching Associates and Wiley Interscience, New York, 1989, 1992). Особенно подходящими являются зонды, содержащие по меньшей мере 15, предпочтительно по меньше мере 30, а более предпочтительно по меньшей мере 50 непрерывно следующих друг за другом оснований, которые соответствуют или комплементарны последовательностям нуклеиновой кислоты, происходящей от соответствующего кодирующего гена (SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 и SEQ ID NO:17). Для облегчения идентификации такие зонды могут быть помечены аналитически детектируемым реагентом. Подходящими реагентами являются, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, флуоресцентные красители и ферменты, способные катализировать образование детектируемого продукта. С использованием этих зондов средний специалист в данной области может самостоятельно выделить комплементарные копии полинуклеотидов геномной ДНК, кДНК или РНК, кодирующих представляющие интерес белки, происходящие от различных источников, например человека, млекопитающего или других животных, и скринировать эти источники на присутствие родственных последовательностей, например отдельных членов семейства, типа и/или подтипа. Во многих случаях выделенные кДНК-последовательности будут неполными, то есть в этих последовательностях область, кодирующая полипептид, будет сильно обрезана, обычно у 5'-конца. Для получения полноразмерных кДНК или для удлинения коротких кДНК существует несколько методов. Такие последовательности можно удлинить с использованием неполной нуклеотидной последовательности и с применением различных известных методов детектирования выше расположенных последовательностей,таких как промоторы и регуляторные элементы. Так, например, одним из методов, который может быть использован в данном случае, является метод быстрой амплификации кДНК-концов (RACE; см., например, Frohman et al., PNAS USA 85, 8998-9002, 1998). Недавно разработанные модификации этой технологии, проиллюстрированные Marathon T.M. (Clontech Laboratories Inc.), значительно упростили поиск более длинных кДНК. Для поиска неизвестной последовательности нуклеиновой кислоты, которая является смежной с известным локусом, может быть использован слегка модифицированный метод, который называется "сайт-рестрикционной" ПЦР и предусматривает использование универсальных праймеров(Sarkar G. (1993) PCR Methods Applic. 2:318-322). Для амплификации или для удлинения последовательностей с использованием различных праймеров, полученных на основе известной области, может быть также использована обратная ПЦР (Triglia Т. et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16:8186). Другим методом,который может быть использован в данном случае, является ПЦР "с захватом", которая представляет собой ПЦР-амплификацию ДНК-фрагментов, смежных с известной последовательностью в искусственной хромосомной ДНК человека и дрожжей (Lagerstrom M. et al., (1991) PCR Methods Applic. 1, 111-119). Другим методом, который может быть использован для поиска неизвестных последовательностей, является метод Parker J.D. et al. (1991) Nucleic Acids Res. 19:3055-3060). Кроме того, можно использовать ПЦР, "гнездовые" праймеры и библиотеки PromoterFinderTM для "прогулки" по геномной ДНК(Clontech, Palo Alto, CA). Этот способ позволяет избежать необходимости скрининга библиотек и может быть использован для обнаружения участков стыка интрон/экзон. При скрининге на полноразмерные ДНК предпочтительно использовать библиотеки, которые были отобраны по размерам и содержат более крупные кДНК. Предпочтительными также являются библиотеки рандомизированных праймеров, которые могут включать дополнительные последовательности, содержащие 5'-области генов. Использование библиотеки рандомизированных праймеров может оказаться особенно предпочтительным в том случае, если библиотека oligo-d(T) не дает полноразмерной кДНК. Геномные библиотеки могут быть использованы для удлинения последовательности с получением 5'нетранскрибируемых регуляторных областей. В одном из вариантов осуществления изобретения молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть использованы для определения локализации в хромосоме. В этом методе молекула нуклеиновой кислоты может быть нацелена на конкретный участок, либо она может быть гибридизована- 21011261 с конкретным участком на отдельной хромосоме человека. В соответствии с настоящим изобретением,картирование релевантных последовательностей в хромосомах является важной стадией в подтверждении корреляции этих последовательностей с геноассоциированным заболеванием. После картирования последовательности с определением ее точной локализации физическое положение последовательности на хромосоме может быть сопоставлено с данными генетической карты. Эти данные можно найти, например, в работе V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (имеющейся в настоящее время в библиотеке Уэлльского медицинского университета Джона Хопкинса) (John Hopkins University Welch MedicalLibrary). Взаимосвязь между генами, которые могут быть картированы на одной и той же области хромосомы, и заболеваниями, ассоциированными с ними, затем идентифицируют с помощью анализа на сцепление генов (совместное наследование физически смежных генов). Это позволяет исследователям получить ценную информацию, которая может быть использована для поиска генов, ассоциированных с данным заболеванием, с применением метода позиционного клонирования или других методов обнаружения генов. После предварительного определения локализации генов, ассоциированных с данным заболеванием или синдромом, путем анализа на сцепление генов с конкретной областью генома, любое картирование последовательностей на данном участке может дать информацию об ассоциированных или регуляторных генах, которая может быть использована для последующих исследований. Молекула нуклеиновой кислоты может быть также использована для детектирования различий в хромосомной локализации,обусловленных транслокацией, инверсией и т.п., у нормальных индивидуумов, индивидуумов-носителей и у индивидуумов, страдающих заболеванием. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению также являются ценным материалом для определения локализации в тканях. Такие методы позволяют определять характер экспрессии полипептида в тканях путем детектирования мРНК, которая их кодирует. Такими методами являются методы гибридизации in situ и методы амплификации нуклеотидов, такие как ПЦР. Результаты этих исследований позволяют получить определенные сведения относительно нормальных функций данного полипептида в организме. Кроме того, в этих исследованиях сравнение нормального характера экспрессии мРНК с экспрессией мРНК, кодируемой мутантным геном, позволяет получить важную информацию о роли мутантных полипептидов в данном заболевании. Такая аномальная экспрессия может иметь кратковременную, пространственную или количественную природу. Для ингибирования эндогенной экспрессии гена, кодирующего полипептид согласно изобретению,могут быть также использованы методы "отключения" гена. Одним из методов, который может быть использован для "отключения" последовательность-специфического посттрансляционного гена, является интерференция РНК (RNAi) (Elbashir S.M. et al., Nature 2001, 411, 494-498). Короткие дцРНКолигонуклеотиды синтезируют in vitro и вводят в клетку. Последовательность-специфическое связывание этих дцРНК-олигонуклеотидов запускает процесс деградации мРНК-мишени, что приводит к снижению уровня или к отмене экспрессии белка-мишени. Эффективность методов "отключения" гена, описанных выше, может быть оценена путем определения уровня экспрессии полипептидов (например, с помощью Вестерн-блоттинга), а на РНК-уровне она может быть оценена с помощью методики, основанной на TaqMan. Векторы согласно изобретению содержат молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению и могут представлять собой клонирующие или экспрессирующие векторы. Клетки-хозяева согласно изобретению, которые могут быть трансформированы, трансфецированы или трансдуцированы векторами согласно изобретению, могут представлять собой прокариотические или эукариотические клеткихозяева. Полипептиды согласно изобретению могут быть получены в рекомбинантной форме посредством экспрессии кодирующих эти полипептиды молекул нуклеиновой кислоты в векторах, содержащихся в клетке-хозяине. Такие методы экспрессии хорошо известны специалистам и многие их них подробно описаны у Sambrook et al. (см. выше) и FernandezHoeffler (1998, eds. "Gene expression systems. Usingnature for the art of expression". Academic Press, San Diego, London, Boston, New York, Sydney, Tokyo, Toronto). Для продуцирования полипептида в нужном хозяине могут быть использованы, в основном, любые системы или любые векторы, подходящие для поддержания, амплификации или экспрессии молекул нуклеиновой кислоты. Подходящая нуклеотидная последовательность может быть встроена в экспрессионную систему любым из хорошо известных и рутинных методов, таких как методы, описанные у Sambrook et al. (см. выше). В общих чертах, кодирующий ген может быть помещен под контроль регуляторного элемента, такого как промотор, сайт связывания с рибосомой (для экспрессии в бактериях), и необязательно, оператор, так, чтобы ДНК-последовательность, кодирующая нужный полипептид, транскрибировалась в РНК в трансформированной клетке-хозяине. Примерами подходящих систем экспрессии являются, например, хромосомная, эписомная и вирусная системы, включая, например, векторы, происходящие от бактериальных плазмид, бактериофага,транспозонов, дрожжевых эписом, инсерционных элементов, дрожжевых хромосомных элементов, вирусов, таких как бакуловирус, паповавирсусы, такие как SV40, вирусы коровьей оспы, аденовирусы, вирусы оспы домашней птицы, вирусы псевдобешенства и ретровирусы, или их комбинации, а также векто- 22011261 ры, происходящие от плазмидных и бактериофаговых генетических элементов, включая космиды и фагмиды. Для доставки более крупных фрагментов ДНК, чем те, которые могут содержаться и экспрессироваться в плазмиде, могут быть также использованы искусственные человеческие хромосомы (НАС). Предпочтительными примерами векторов, которые могут быть использованы в соответствии с аспектами настоящего изобретения, относящимися к INSP201, являются векторы pCR4-TOPO, pCR4-TOPOINSP201, pENTR, pENTRINSP201EC-6HIS, pEAK12d-PAC, pDEST12.2, pEAK12d-PACINSP201EC6HIS и pDEST12.2INSP201EC-6HIS. Особенно подходящими экспрессионными системами являются микроорганизмы, такие как бактерии, трансформированные рекомбинантным бактериофагом, плазмидными или космидными ДНКэкспрессирующими векторами; дрожжи, трансформированные векторами для экспрессии в дрожжах; клеточные системы насекомых, инфицированные вирусными экспрессирующими векторами (например,бакуловирусом); клеточные системы растений, трансформированные вирусными экспрессирующими векторами (например, вирусом мозаики цветной капусты, CaMV; вирусом мозаики табака, TMV) или векторами для экспрессии в бактериях (например, плазмидами Ti или pBR322); или клеточные системы животных. Для продуцирования полипептидов согласно изобретению могут быть также использованы бесклеточные системы трансляции. Введение молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих полипептид согласно изобретению, в клетки-хозяева, может быть осуществлено методами, описанными во многих известных лабораторных руководствах, таких как руководство Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology (1986) и Sambrook et al.[см. выше]. Особенно подходящими методами являются трансфекция с использованием фосфата кальция; трансфекция, опосредованная DEAE-декстраном; трасвекция; микроинжекция; трансфекция, опосредованная катионным липидом; электропорация; трансдукция; загрузка путем соскоба; введение методом биобаллистики или инфицирование (см. Sambrook et al., 1989, [см. выше], Ausubel et al., 1991 [см. выше], Spector, GoldmanLeinwald, 1998). В эукариотических клетках экспрессионные системы, в зависимости от целей их использования, могут быть либо временными (например, эписомными), либо перманентными (хромосомная интеграция). Кодирующая молекула нуклеиновой кислоты может включать, а может и не включать, последовательность, кодирующую регуляторную последовательность, такую как сигнальный пептид или лидерная последовательность, если это необходимо, например, для секреции транслируемого полипептида в просвет эндоплазматического ретикулума, в периплазматическое пространство или во внеклеточное пространство. Эти сигналы могут быть эндогенными по отношению к полипептиду либо они могут быть гетерологичными. Лидерные последовательности могут быть удалены бактериальным хозяином при посттрансляционном процессинге. Помимо регуляторных последовательностей может оказаться желательным введение регуляторных последовательностей, которые обеспечивают регуляцию экспрессии полипептида в зависимости от роста клетки-хозяина. Примерами регуляторных последовательностей являются последовательности, которые обеспечивают увеличение или снижение уровня экспрессии гена в ответ на химическую или физическую стимуляцию, включая присутствие регуляторного соединения, или в ответ на различные температурные или метаболические условия. Регуляторными последовательностями являются нетранслируемые области вектора, такие как энхансеры, промоторы и 5'- и 3'-нетранслируемые области. Эти последовательности взаимодействуют с клеточными белками хозяина, в результате чего осуществляется транскрипция и трансляция. Такие регуляторные последовательности могут варьироваться по своей длине и специфичности. В зависимости от выбранной векторной системы и выбранного хозяина могут быть использованы любые подходящие транскрипционные и трансляционные элементы, включая конститутивные и индуцибельные промоторы. Так, например, для клонирования в бактериальных системах могут быть использованы индуцибельные промоторы, такие как гибридный промотор lacZ фагмиды BlueScript (Stratagene,LaJolla, CA) или плазмиды pSportl (Gibco BRL) и т.п. В клетках насекомых может использоваться бакуловирусный промотор полиэдрина. Промоторы или энхансеры, происходящие от геномов растительных клеток (например, гена белка теплового шока, RUBISCO и гена запасных белков) или от вирусов растений (например, вирусных промоторов или лидерных последовательностей), могут быть клонированы в указанный вектор. В клеточных системах млекопитающих предпочтительными являются промоторы, происходящие от генов млекопитающих или от вирусов млекопитающих. Если необходимо генерировать клеточную линию, содержащую множество копий данной последовательности, то могут быть использованы векторы на основе SV40 или EBV с соответствующим селективным маркером. Экспрессирующий вектор конструируют так, чтобы конкретная кодирующая последовательность нуклеиновой кислоты присутствовала в векторе вместе с соответствующими регуляторными последовательностями и чтобы положение и ориентация кодирующей последовательности по отношению к регуляторным последовательностям позволяли такой кодирующей последовательности транскрибироваться под "контролем" регуляторных последовательностей, то есть так, чтобы РНК-полимераза, которая связывается с ДНК-молекулой у регуляторных последовательностей, осуществляла транскрипцию кодирующей последовательности. В некоторых случаях может оказаться необходимым модифицировать указанную последовательность так, чтобы она могла присоединяться к регуляторным последовательностям в- 23011261 соответствующей ориентации, то есть с сохранением рамки считывания. Указанные регуляторные последовательности и другие регуляторные последовательности могут быть лигированы с кодирующей последовательностью нуклеиновой кислоты перед встраиванием в вектор. Альтернативно, такая кодирующая последовательность может быть клонирована непосредственно в экспрессирующий вектор, который уже содержит регуляторные последовательности и соответствующий рестрикционный сайт. Для длительного высокоэффективного продуцирования рекомбинантного полипептида предпочтительной является стабильная экспрессия. Так, например, клеточные линии, которые стабильно экспрессируют нужный полипептид, могут быть трансформированы с использованием экспрессирующих векторов, которые могут содержать вирусные сайты инициации репликации и/или эндогенные экспрессионные элементы и выбранный маркерный ген, присутствующий на том же самом или на отдельном векторе. После введения этого вектора клетки можно оставить на 1-2 дня для роста в обогащенной среде, которую затем заменяют селективной средой. Селективный маркер необходим для сообщения резистентности, используемой в целях отбора, и его присутствие позволяет культивировать и выделять клетки,успешно экспрессирующие введенные последовательности. Резистентные клоны стабильно трансформированных клеток могут быть подвергнуты пролиферации методами культивирования ткани, подходящими для клеток такого типа. Клеточные линии млекопитающих, подходящие в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны специалистам и такими клеточными линиями являются многие иммортализованные клеточные линии,имеющиеся в Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая, но не ограничиваясь ими,клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки HeLa, клетки почек детенышей хомячка (ВНК), клетки почек обезьяны (COS), клетки С 127, клетки 3 Т 3, клетки ВНК, клетки НЕК 293, клетки меланомы Боуэса, клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) и ряд других клеточных линий. В бакуловирусной системе материалы для получения экспрессионных систем бакуловирус/клетка насекомого являются коммерчески доступными и поставляются в наборах, inter alia, от Invitrogen, SanDiego CA (набор "МахВас"). В общих чертах, эти методы известны специалистам и подробно описаны уSummersSmith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin1555 (1987). Клетками-хозяевами, особенно подходящими для использования в данной системе, являются клетки насекомых, такие как клеткиDrosophila S2 и клетки Spodoptera Sf9. Специалистам известно множество систем экспрессии генов в клеточных культурах растений и в целых растениях. Примерами подходящих систем экспрессии генов в клетках растений являются системы, описанные в патентах США 5693506, 5659122 и 5608143. Другие примеры экспрессии генов в клеточных культурах растений описаны Zenk, Phytochemistry 30, 3861-3863 (1991). В частности, можно использовать любые растения, из которых могут быть выделены и культивированы протопласты с последующим продуцированием из них целых регенерированных растений, которые содержат перенесенный ген. В частности, из культивируемых клеток или тканей могут быть регенерированы все растения, включая, но не ограничиваясь ими, все основные виды сахарного тростника, сахарной свеклы, хлопчатника, плодовых и других деревьев, бобовых, а также овощных растений. Примерами особенно предпочтительных бактериальных клеток-хозяев являются клетки стрептококков, стафилококков, E.coli, Streptomyces и Bacillus subtilis. Примерами особенно подходящих клеток-хозяев для экспрессии в грибах являются дрожжевые клетки (например, S. cerevisiae) и клетки Aspergillus. Любые системы отбора, которые могут быть использованы для выделения трансформированных клеточных линий, известны специалистам. Примерами являются гены тимидинкиназы (Wigler M. et al.(1977) Cell 11:223-32) и аденин-фосфорибозилтрансферазы вируса простого герпеса (Lowy I. et al. (1980)Cell 22:817-23), которые могут быть использованы в tk- или aprt -клетках, соответственно. Кроме того, в качестве основы для отбора могут быть использованы гены резистентности к антиметаболиту, антибиотику или к гербициду, например ген дигидрофолат-редуктазы (DHFR), который сообщает резистентность к метотрексату (Wigler M. et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. 77:3567-70); ген npt, который сообщает резистентность к аминогликозидам, неомицину и к G-418 (Colbere-Garapin F. et al (1981)J. Mol. Biol. 150:1-14), и гены als или pat, которые сообщают резистентность к хлорсульфурон- и фосфинотрицинацетилтрансферазе соответственно. Были описаны и другие селективные гены, примеры которых хорошо известны специалистам. Хотя присутствие или отсутствие экспрессии маркерного гена позволяет предположить, что присутствует также и нужный ген, однако его присутствие и экспрессия еще нуждаются в подтверждении. Так, например, если соответствующая последовательность была встроена в последовательность маркерного гена, то трансформированные клетки, содержащие соответствующие последовательности, могут быть идентифицированы по отсутствию функции маркерного гена. Альтернативно, маркерный ген может находиться в тандеме с последовательностью, кодирующей полипептид согласно изобретению, находящийся под контролем одного промотора. Экспрессия маркерного гена в ответ на индуцирование или отбор обычно указывает также на экспрессию тандемного гена. Альтернативно, клетки-хозяева, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, ко- 24011261 дирующую полипептид согласно изобретению, и которые экспрессируют указанный полипептид, могут быть идентифицированы различными методами, известными специалистам. Такими методами являются,но не ограничиваются ими, ДНК-ДНК или ДНК-РНК-гибридизация и биоанализы на присутствие белка,например сортировка клеток по интенсивности флуоресценции (FACS) или иммуноанализы (такие как твердофазный иммуноферментный анализ [ELISA] и радиоиммуноанализ [РИА]), которые предусматривают использование мембран, растворов или чипов для детектирования и/или количественной оценки нуклеиновой кислоты или белка (см. Hampton R. et al. (1990) Serological Methods, a Laboratory Manual,APS Press, St Paul, MN) и Maddox D.E. et al., (1983) J. Exp. Med., 158, 1211-1216). Существует широкий ряд методов мечения и конъюгирования, известных специалистам, и эти методы могут быть использованы в различных анализах на присутствие нуклеиновых кислот и аминокислот. Методами, используемыми в целях продуцирования меченых зондов для гибридизации или ПЦРзондов для детектирования последовательностей, родственных молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептиды согласно изобретению, являются мечение олигонуклеотидами, ник-трансляция,мечение по концам или ПЦР-амплификация с использованием меченого полинуклеотида. Альтернативно, последовательности, кодирующие полипептид согласно изобретению, могут быть клонированы в вектор для продуцирования мРНК-зонда. Такие векторы известны специалистам, являются коммерчески доступными и могут быть использованы для синтеза РНК-зондов in vitro путем добавления соответствующей РНК-полимеразы, такой как Т 7, Т 3 или SP6, и меченых нуклеотидов. Эти процедуры могут быть проведены с использованием различных коммерчески доступных наборов (PharmaciaUpjohn (Kalamazoo, MI); Promega (Madison WI) и U.S. Biochemical Corp., Cleveland, OH. Подходящими репортерными молекулами или метками, которые могут быть использованы для облегчения детектирования, являются радионуклиды, ферменты и флуоресцентные, хемилюминисцентные или хромогенные агенты, а также субстраты, кофакторы, ингибиторы, магнитные частицы и т.п. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть также использованы для генерирования трансгенных животных, а в частности грызунов. Такие трансгенные животные входят в дополнительный аспект согласно изобретению. Это генерирование может быть осуществлено путем локальной модификации соматических клеток или манипуляций с зародышевыми линиями для введения наследуемых модификаций. Такие трансгенные животные могут быть, в частности, использованы для генерирования животных-моделей в целях поиска молекул лекарственных средств, которые являются эффективными в качестве модуляторов полипептидов согласно изобретению. Полипептид может быть выделен и очищен из рекомбинантных клеточных культур хорошо известными методами, включая преципитацию сульфатом аммония или этанолом, экстракцию кислотой, анионообменную или катионообменную хроматографию, хроматографию на фосфоцеллюлозе, гидрофобную хроматографию, аффинную хроматографию, хроматографию на гидроксиаппатитах и хроматографию на лектине. Для очистки наиболее подходящей является высокоэффективная жидкостная хроматография. В случае, если данный полипептид был денатурирован в процессе выделения и/или очистки, то для восстановления активной конформации может быть использована хорошо известная техника рефолдинга белков. Если необходимо, то для облегчения очистки белков могут быть также использованы специальные векторные конструкции, полученные путем присоединения последовательностей, кодирующих полипептиды согласно изобретению, к нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидный домен,который облегчает очистку растворимых белков. Примерами таких доменов, облегчающих очистку белков, являются пептиды, образующие хелатные комплексы с металлами, такие как гистидинтриптофановые модули, которые позволяют проводить очистку на иммобилизованных металлах; домены белка А, которые позволяют проводить очистку на иммобилизованном иммуноглобулине; и домен, используемый в системе удлинения/очистки FLAGS (Immunex Corp., Seattle, WA). Для облегчения очистки между доменом для очистки и полипептидом согласно изобретению могут быть включены расщепляемые линкерные последовательности, такие как последовательности, специфичные к фактору ХА или энтерокиназе (Invitrogen, San Diego, CA). Один из таких экспрессирующих векторов обеспечивает экспрессию гибридного белка, содержащего полипептид согласно изобретению, присоединенный к нескольким гистидиновым остаткам, за которыми следуют тиоредоксин или рестрикционный сайт энтерокиназы. Гистидиновые остатки облегчают проведение очистки с помощью IMAC (аффинной хроматографии на иммобилозованном ионе металла, описанной Porath J. et al. (1992), Prot. Exp. Purif. 3:263-281), тогда как тиоредоксин или рестрикционный сайт энтерокиназы позволяют выделять полипептид из гибридного белка. Обсуждение векторов, содержащих гибридные белки, можно найти у Kroll D.J. et al. (1993; DNACell Biol. 12:441-453). Если экспрессируемый полипептид используется в аналитическом скрининге, то обычно предпочтительно, чтобы он был продуцирован на поверхности клетки-хозяина, в которой он экспрессируется. В этом случае, клетки-хозяева могут быть собраны до их использования в скрининг-анализе, например,таким методом, как сортировка клеток с возбуждением флуоресценции (FACS), или иммуноаффинным методом. Если полипептид секретируется в среду, то такая среда может быть восстановлена для выделения и очистки экспрессированного полипептида. Если полипептид продуцируется внутри клетки, то, пе- 25011261 ред выделением полипептида, эти клетки должны быть сначала подвергнуты лизису. Как указывалось выше, настоящее изобретение также относится к новым мишеням и к способам скрининга на лекарственные средства-кандидаты или другие нужные вещества. Такие методы скрининга включают анализы на связывание и/или функциональные анализы и могут быть осуществлены in vitro, в клеточных системах и in vivo в организме животного. В этой связи конкретной целью настоящего изобретения является применение полипептидаINSP201 в качестве мишени для скрининга на лекарственные средства-кандидаты, которые могут быть использованы для лечения или предупреждения расстройств, ассоциированный с гликопротеином клеточной поверхности. Другой целью настоящего изобретения является разработка способов отбора биологически активных соединений, где указанные способы включают контактирование соединения-кандидата с геном или полипептидом INSP201 и отбор соединений, которые связываются с указанным геном или полипептидом. Другой целью настоящего изобретения является разработка способов отбора биологически активных соединений, где указанные способы включают контактирование соединения-кандидата с рекомбинантной клеткой-хозяином, экспрессирующей полипептид INSP201, и отбор соединений, которые связываются с указанным полипептидом INSP201 на поверхности указанных клеток, и/или которые модулируют активность полипептида INSP201. Термин "биологически активное соединение" означает любое соединение, обладающее биологической активностью у индивидуума, предпочтительно терапевтической активностью; более предпочтительно соединение, обладающее активностью гликопротеина клеточной поверхности, а еще более предпочтительно соединение, которое может быть использовано для лечения INSP201-ассоциированных расстройств или в качестве средства для разработки лекарственных препаратов, предназначенных для лечения расстройств, ассоциированных с гликопротеином клеточной поверхности. "Биологически активным соединением" предпочтительно является соединение, модулирующее активность INSP201. Вышеописанные способы могут быть осуществлены in vitro с применением различных устройств и различных условий, включая использование иммобилизованных реагентов, и эти способы могут также включать дополнительную стадию анализа активности выбранных соединений в модели, такой как животное-модель с расстройством, ассоциированным с гликопротеином клеточной поверхности. Предпочтительными выбранными соединениями являются агонисты INSP201, то есть соединения,которые могут связываться с INSP201 и имитировать активность его эндогенного лиганда. Другой целью настоящего изобретения является разработка способа отбора биологически активных соединений, где указанный способ включает контактирование in vitro тестируемого соединения с полипептидом INSP201 согласно изобретению и определение способности указанного тестируемого соединения модулировать активность указанного полипептида INSP201. Другой целью настоящего изобретения является разработка способа отбора биологически активных соединений, где указанный способ включает контактирование in vitro тестируемого соединения с геномINSP201 согласно изобретению и определение способности указанного тестируемого соединения модулировать экспрессию указанного гена INSP201, а предпочтительно стимулировать его экспрессию. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу скрининга, отбора или идентификации активных соединений, а в частности соединений, обладающих активностью, направленной на подавление воспаления, дегенерацию клеток, апоптоз и онкогенез, где указанный способ включает контактирование тестируемого соединения с рекомбинантной клеткой-хозяином, содержащей репортерную конструкцию, где указанная конструкция содержит репортерный ген, находящийся под контролем промотора гена INSP201, и отбор тестируемых соединений, модулирующих (например, стимулирующих или снижающих, а предпочтительно стимулирующих) экспрессию указанного репортерного гена. Полипептид согласно изобретению может быть использован для скрининга библиотек соединений в любом из известных методов, применяемых для поиска лекарственных средств. Такие соединения могут стимулировать (служить агонистами) или ингибировать (служить антагонистами) экспрессию гена или активность полипептида согласно изобретению, а поэтому они составляют дополнительный аспект настоящего изобретения. Предпочтительными соединениями являются соединения, способные влиять на экспрессию природного гена, кодирующего полипептид согласно первому аспекту изобретения, или регулировать активность полипептида согласно первому аспекту изобретения. Соединения-агонисты или соединения-антагонисты могут быть выделены, например, из клеток,бесклеточных препаратов, химических библиотек или смесей природных продуктов. Такими агонистами или антагонистами могут быть природные или модифицированные субстраты, лиганды, ферменты, рецепторы, либо структурные или функциональные миметики. Подходящее описание таких методов скрининга можно найти в работе Coligan et al., Current Protocols in Immunology 1(2):Chapter 5 (1991). Связывание с геном или с полипептидом-мишенью служит показателем способности указанного соединения модулировать активность указанной мишени и, тем самым, оказывать влияние на путь, приводящий к развитию у индивидуума расстройства, ассоциированного с гликопротеином клеточной поверхности. Детектирование связывания может быть осуществлено различными методами, такими как- 26011261 мечение соединения-кандидата, анализ на конкурентное связывание с известным меченым лигандом и т.п. Для проведения анализов на связывание in vitro указанные полипептиды могут быть использованы, в основном, в чистой форме, в виде суспензии, в форме, иммобилизованной на носителе, или в форме, экспрессируемой в мембране (в форме интактной клетки, мембранного препарата, липосомы и т.п.). Модуляция активности включает, но не ограничивается ими, стимуляцию поверхностной экспрессии рецептора INSP201, модуляцию мультимеризации указанного рецептора (например, образование мультимерных комплексов с другими субъединицами) и т.п. Клетками, используемыми в таких анализах,могут быть любые рекомбинантные клетки (то есть, любые клетки, содержащие рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид INSP201) или любые клетки, экспрессирующие эндогенный полипептид INSP201. Примерами таких клеток являются, но не ограничиваются ими, прокариотические клетки (такие как бактерии) и эукариотические клетки (такие как клетки дрожжей, клетки млекопитающих, клетки насекомых, клетки растений и т.п.). Конкретными примерами являются клетки E.coli,Pichia pastoris, Hansenula polymorpha, Shizosaccharomyces pombe, дрожжевые клетки Kluyveromyces илиSaccharomyces, клеточные линии млекопитающих (например, клетки Vero, клетки СНО, клетки 3 Т 3,клетки COS и т.п.), а также первичные и стабилизированные клеточные культуры млекопитающих (например, культуры фибробластов, эмбриональных клеток, эпителиальных клеток, нервных клеток, адипоцитов и т.п.). Соединения, которые могут рассматриваться как наиболее вероятные кандидаты на хорошие антагонисты, представляют собой молекулы, которые связываются с полипептидом согласно изобретению,но не индуцируют каких-либо биологических эффектов полипептида после связывания с ним. Потенциальными антагонистами являются небольшие органические молекулы, пептиды, полипептиды и антитела, которые связываются с полипептидом согласно изобретению и, тем самым, ингибируют или подавляют его активность. Таким образом, связывание полипептида с нормальными связывающимися клеточными молекулами может быть подвергнуто ингибированию, что будет приводить к подавлению нормальной биологической активности такого полипептида. Согласно изобретению полипептид, который используется в таком методе скрининга, может находиться в растворе в свободном состоянии, может быть иммобилизован на твердом носителе или может присутствовать на клеточной поверхности, либо он может быть локализован внутри клетки. Вообще говоря, в таких процедурах скрининга могут быть использованы соответствующие клетки или клеточные мембраны, экспрессирующие полипептид, который контактирует с тестируемым соединением, что приводит к связыванию, либо к стимуляции или ингибированию функционального ответа. Затем функциональный ответ клеток, контактируемых с тестируемым соединением, сравнивают с ответом контрольных клеток, которые не контактировали с тестируемым соединением. Такой анализ, проводимый с помощью подходящей системы детектирования, позволяет определить, может ли тестируемое соединение давать сигнал, генерируемый активацией указанного полипептида. Ингибиторы активации обычно анализируют в присутствии известного агониста и оценивают влияние этого агониста на активацию в присутствии тестируемого соединения. Предпочтительный способ идентификации соединения, являющегося агонистом или антагонистом полипептида согласно изобретению, включает в себя:(a) контактирование клетки, экспрессирующей (необязательно, на своей поверхности) полипептид согласно первому аспекту изобретения, где указанный полипептид ассоциирован со вторым компонентом, способным давать детектируемый сигнал в ответ на связывание соединения с указанным полипептидом, где указанное соединение скринируют в условиях, стимулирующих связывание с указанным полипептидом; и(b) определение события связывания указанного соединения с указанным полипептидом, либо его активации или ингибирования путем измерения уровня сигнала, генерируемого в результате взаимодействия указанного соединения с указанным полипептидом. Методы генерирования детектируемых сигналов в анализах описанного здесь типа хорошо известны специалистам. Конкретным примером является совместное введение конструкции, экспрессирующей полипептид согласно изобретению или его фрагмент, такой как LBD, присутствующий в виде гибрида с ДНК-связывающим доменом GAL4, в клетку вместе с репортерной плазмидой, такой, например, какpFR-Luc (Stratagene Europe, Amsterdam, The Netherlands). Эта конкретная плазмида содержит синтетический промотор с пятью тандемными повторами GAL4-связывающих сайтов, регулирующих экспрессию гена люциферазы. При введении потенциального лиганда в клетки, он будет связываться с гибридом"GAL4-полипептид" и индуцировать транскрипцию гена люциферазы. Мониторинг уровня экспрессии гена люциферазы может быть проведен путем детектирования его активности на устройстве для считывания интенсивности люминесценции (см., например, Lehman et al., JBC 270, 12953, 1995; Pawar et al.,JBC, 277, 39243, 2002). Еще более предпочтительный способ идентификации агониста или антагониста полипептида согласно изобретению включает в себя:(a) контактирование меченого или немеченого соединения с полипептидом, иммобилизованным на любом твердом носителе (например, на сферах, пластинах, матричном носителе, чипе), и детектирование- 27011261 указанного соединения путем определения присутствия метки или самого соединения;(b) контактирование клетки, экспрессирующей на своей поверхности полипептид, путем его искусственного заякоривания на клеточной мембране или путем конструирования химерного рецептора, ассоциированного со вторым компонентом, способным давать детектируемый сигнал в ответ на связывание соединения с указанным полипептидом, где указанное соединение скринируют в условиях, стимулирующих связывание с указанным полипептидом; и(c) определение события связывания указанного соединения с указанным полипептидом, либо его активации или ингибирования путем сравнения уровня сигнала, генерируемого в результате взаимодействия указанного соединения с указанным полипептидом, с уровнем сигнала, вырабатываемого в отсутствие данного соединения. Так, например, может быть применен такой способ, как FRET-детектирования лиганда, связанного с полипептидом в присутствии пептидных ко-активаторов (Norris et al., Science 285, 744, 1999). Другой предпочтительный способ идентификации агониста или антагониста полипептида согласно изобретению включает в себя:(a) контактирование клетки, экспрессирующей (необязательно, на своей поверхности) полипептид,ассоциированный со вторым компонентом, способным давать детектируемый сигнал в ответ на связывание соединения с указанным полипептидом, где указанное соединение скринируют в условиях, стимулирующих связывание с указанным полипептидом; и(b) определение события связывания указанного соединения с указанным полипептидом, либо его активации или ингибирования путем сравнения уровня сигнала, генерируемого в результате взаимодействия указанного соединения с указанным полипептидом, с уровнем сигнала, вырабатываемого в отсутствии данного соединения. В других предпочтительных вариантах изобретения общие методы, описанные выше, могут, кроме того, включать осуществление идентификации агониста или антагониста в присутствии меченого или немеченого лиганда для полипептида. В другом варианте изобретения способ идентификации агониста или антагониста полипептида согласно изобретению включает в себя: определение факта ингибирования связывания лиганда с клетками, которые экспрессируют полипептид согласно изобретению (и которые, но необязательно, содержат на своей поверхности полипептид согласно изобретению), или с клеточными мембранами, содержащими такой полипептид, в присутствии соединения-кандидата в условиях, стимулирующих связывание с указанным полипептидом, и определение количества лиганда, связанного с указанным полипептидом. Считается, что соединение, способствующее снижению уровня связывания с лигандом, является агонистом или антагонистом. При этом,предпочтительно, чтобы указанный лиганд был меченым. Более конкретно, способ скрининга на соединение, являющееся агонистом или антагонистом полипептида, включает в себя стадии:(а) инкубирования меченого лиганда с целой клеткой, экспрессирующей на своей поверхности полипептид согласно изобретению, или с клеточной мембраной, содержащей полипептид согласно изобретению;(b) измерения количества меченого лиганда, связанного с целой клеткой или с клеточной мембраной;(c) добавления соединения-кандидата к смеси меченого лиганда и целой клетки или клеточной мембраны стадии (а) и доведение этой смеси до состояния равновесия;(d) измерения количества меченого лиганда, связанного с целой клеткой или с клеточной мембраной, после проведения стадии (с); и(e) сравнения различия в количествах связанного меченого лиганда стадий (b) и (d), где соединение,вызывающее снижение уровня связывания в стадии (d), считается агонистом или антагонистом. Аналогичным образом, настоящее изобретение относится к способу скрининга на соединение, являющееся агонистом или антагонистом полипептида, включающему в себя стадии:(a) инкубирования меченого лиганда с полипептидом согласно изобретению, иммобилизованным на любом твердом носителе или на клеточной поверхности, или с клеточной мембраной, содержащей полипептид согласно изобретению;(b) измерения количества меченого лиганда, связанного с полипептидом согласно изобретению,иммобилизованным на любом твердом носителе, или с целой клеткой или с клеточной мембраной;(c) добавления соединения-кандидата к смеси меченого лиганда и полипептида, иммобилизованного на твердом носителе, целой клетки или клеточной мембраны стадии (а), и доведение этой смеси до состояния равновесия;(d) измерения количества меченого лиганда, связанного с иммобилизованным полипептидом, с целой клеткой или с клеточной мембраной, после проведения стадии (с); и(e) сравнения различия в количествах связанного меченого лиганда стадий (b) и (d), где соединение,вызывающее снижение уровня связывания в стадии (d), считается агонистом или антагонистом. Полипептид INSP201 согласно изобретению может модулировать рост и дифференцировку клеток.- 28011261 Таким образом, биологическая активность полипептида INSP201 может быть оценена в системах, которые позволяют проводить исследование роста и дифференцировки клеток, таких как системы для анализа в культуре органа или системы для анализа колоний клеток в агарозной культуре. Стимуляция или ингибирование пролиферации клеток могут быть измерены с помощью различных анализов. Так, например, для оценки ингибирования роста клеток может быть использована твердая или жидкая среда. В твердой среде, клетки, рост которых подвергается ингибированию, могут быть отобраны из группы клеток индивидуума путем сравнения размеров образуемых ими колоний. В жидкой среде, ингибирование роста может быть скринировано путем измерения мутности культуральной среды или включения меченого тимидина в ДНК. Обычно включение нуклеозидного аналога в только что синтезированную ДНК может служить основой для измерения пролиферации клеток (то есть активного роста клеток) в данной популяции. Так, например, в качестве реагента для мечения ДНК может быть использован бромдезоксиуридин (BrdU), а в качестве детектирующего реагента могут быть использованы мышиные моноклональные антитела против BrdU. Это антитело связывается только с клетками, содержащими ДНК, в которую был включен бромдезоксиуридин. В комбинации с этим анализом могут быть использованы различные методы детектирования, включая иммунофлуоресцентные, иммуногистохимические,ELISA- и колориметрические методы. Наборы, включающие бромдезоксиуридин (BrdU) и мышиное моноклональное антитело против BrdU, являются коммерчески доступными и поставляются фирмой Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN). Влияние полипептида INSP201 на дифференцировку клеток может быть оценено посредством контактирования стволовых клеток или эмбриональных клеток с различными количествами полипептидаINSP201 и оценки такого влияния на дифференцировку стволовых клеток или эмбриональных клеток. Для идентификации полученных клеток могут быть использованы тканеспецифические антитела и методы микроскопии. Было обнаружено, что полипептид INSP201 может также модулировать дозозависимую пролиферацию и дифференцировку клеток иммунной и/или нервной системы в вышеописанных анализах. Таким образом, термин "функциональные эквиваленты" полипептида INSP201 включает полипептиды, которые обладают любой из указанных активностей дозозависимой регуляции роста и дифференцировки клеток в вышеописанных анализах. Хотя степень дозозависимой активности необязательно должна быть идентична активности полипептида INSP201, однако предпочтительно, чтобы указанные "функциональные эквиваленты" обладали, по существу, аналогичной дозозависимой активностью, измеренной в данном анализе, по сравнению с активностью полипептида INSP201. В некоторых описанных выше вариантах настоящего изобретения могут быть использованы простые анализы на связывание, в которых адгезию тестируемого соединения к поверхности, несущей данный полипептид, детектируют с помощью метки, непосредственно или опосредованно ассоциированной с тестируемым соединением, или анализы на конкуренцию с меченым соединением-конкурентом. В другом варианте осуществления изобретения могут быть использованы конкурентные анализы на скрининг лекарственных средств, в которых нейтрализующие антитела, способные связываться с данным полипептидом, специфически конкурируют за связывание с тестируемым соединением. Таким образом, указанные антитела могут быть использованы для детектирования на присутствие любого тестируемого соединения, обладающего специфической аффинностью связывания с указанным полипептидом. Могут быть также разработаны анализы для детектирования влияния добавленных тестируемых соединений на продуцирование мРНК, кодирующей указанный полипептид, в клетках. Так, например, может быть разработан такой анализ ELISA, который позволяет измерять секретированные или клеточноассоциированные уровни полипептида с использованием моноклональных или поликлональных антител стандартными методами, известными специалистам, и такой анализ может быть использован для поиска соединений, которые могут ингибировать или усиливать продуцирование полипептида из соответствующим образом модифицированных клеток или тканей. Затем может быть определен уровень образования связывающих комплексов между полипептидом и тестируемым соединением. Другой метод, который может быть использован для скрининга лекарственных средств, позволяет осуществлять высокоэффективный скрининг соединений, обладающих подходящей аффинностью связывания с представляющим интерес полипептидом (см. международную патентную заявку WO 84/03564). В этом методе большое число различных небольших тестируемых соединений синтезируют на твердом субстрате, который затем может быть подвергнут реакции с полипептидом согласно изобретению и промывке. Одним из способов иммобилизации полипептида является использование не нейтрализующих антител. Связанный полипептид может быть затем детектирован методами, хорошо известными специалистам. Очищенный полипептид также может быть непосредственно нанесен на планшеты для последующего использования в вышеупомянутых способах скрининга на лекарственные средства. Специалистам известны и другие методы такого типа. См., например, Adessi С.Soto С. Curr. Med.Chem. 2002, 9(9):963-78; Strand F.L. Prog. Drug. Res., 2003 61:1-37; Hruby V.J. Nat. Rev. Drug. Discov. 2002, 1(11):847-58. Полипептид согласно изобретению может быть использован для идентификации мембраносвязанных или растворимых рецепторов с помощью стандартной техники связывания с рецептором, известной- 29011261 специалистам, такой как анализы на связывание и перекрестное связывание с лигандом, в которых данный полипептид метят радиоактивным изотопом, химически модифицируют или присоединяют к пептидной последовательности, которая облегчает его детектирование или очистку, и инкубируют с источником предполагаемого рецептора (например, с композицией клеток, клеточными мембранами, клеточными супернатантами, тканевыми экстрактами или с физиологическими жидкостями). Эффективность связывания может быть определена биофизическими методами, такими как поверхностный плазмонный резонанс и спектроскопия. Анализы на связывание могут быть использованы для очистки и клонирования рецептора, но они могут быть также использованы для идентификации агонистов и антагонистов указанного полипептида, которые конкурируют с указанным полипептидом за связывание с рецептором. Стандартные методы проведения скрининг-анализов хорошо известны специалистам. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к применению полипептида INSP201 или его фрагмента, где указанным фрагментом, предпочтительно, является фрагмент, специфичный к гену INSP201, в целях выделения или генерирования агониста или стимулятора полипептида INSP201 для лечения иммуноассоциированного расстройства, где указанный агонист или стимулятор выбран из группы, состоящей из: 1. специфического антитела или его фрагмента, включая: а) химерное, b) гуманизованное или с) полностью человеческое антитело, а также 2. биспецифического или мультиспецифического антитела,3. одноцепочечного антитела (например, scFv), или 4. однодоменного антитела, или 5. пептидо- или непептидомиметика, происходящего от указанных антител, или 6. антитело-миметика, такого как (а) антикалин или (b) связывающая молекула на основе фибронектина (например, тринектин или аднектин). Получение пептидо- или непептидомиметиков из антител известно специалистам (Saragovi et al.,1991 и Saragovi et al., 1992). Антикалины также известны специалистам (Vogt et al., 2004). Связывающие молекулы на основе фибронектина описаны в патенте США 6818418 и в WO 2004029224. Кроме того, тестируемыми соединениями могут быть соединения различного происхождения, природы и состава, такие как любые небольшие молекулы, нуклеиновые кислоты, липиды, пептиды, полипептиды, включая антитела, такие как химерное, гуманизованное или полностью человеческое антитело или его фрагмент, происходящие от них пептидо- или непептидомиметики, а также биспецифические или мультиспецифические антитела, одноцепочечные антитела (например, scFv), однодоменные антитела, антитела-миметики, такие как антикалин или связывающая молекула на основе фибронектина (например, тринектин или аднектин) и т.п., в изолированной форме или в виде их смеси или комбинаций. Настоящее изобретение также относится к набору для скрининга, используемому в методах идентификации агонистов, антагонистов, лигандов, рецепторов, субстратов и ферментов, описанных выше. Настоящее изобретение также относится к агонистам, антагонистам, лигандам, рецепторам, субстратам, ферментам и к другим соединениям, модулирующим активность или антигенность полипептида согласно изобретению в соответствии с описанными выше механизмами. Как указывалось выше, предполагается, что различные молекулы согласно изобретению (то есть полипептиды согласно первому аспекту настоящего изобретения, молекула нуклеиновой кислоты согласно второму или третьему аспекту настоящего изобретения, вектор согласно четвертому аспекту настоящего изобретения, клетка-хозяин согласно пятому аспекту настоящего изобретения, лиганд согласно шестому аспекту настоящего изобретения и соединение согласно седьмому аспекту настоящего изобретения) могут быть использованы для лечения или диагностики заболеваний. В целях оценки эффективности указанных молекул согласно изобретению для лечения или диагностики заболевания могут быть проведены один или несколько из описанных ниже анализов. Следует отметить, что хотя некоторые из нижеследующих анализов описаны для тестируемых соединений, являющихся белком/полипептидом,однако специалист в данной области может легко модифицировать эти анализы для их применения к другим молекулам согласно изобретению, которые также могут быть использованы в качестве "тестируемых соединений". Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим полипептид, нуклеиновую кислоту, лиганд или соединение согласно изобретению в комбинации с подходящим фармацевтическим носителем. Эти композициимогут быть использованы в качестве терапевтических или диагностических реагентов, в качестве вакцин или в качестве других иммуногенных композиций,подробно описанных ниже. В соответствии с используемой здесь терминологией, композиция, содержащая полипептид, нуклеиновую кислоту, лиганд или соединение [X], считается "в основном, не содержащей" примесей [здесь,Y], если по крайней мере 85 мас.% от всего количества X+Y в данной композиции составляет X. Предпочтительно X составляет по крайней мере примерно 90%, а более предпочтительно по крайней мере примерно 95%, 98% или даже 99 мас.% по общей массе X+Y в данной композиции. Предпочтительно фармацевтические композиции должны содержать терапевтически эффективное
МПК / Метки
МПК: C07K 14/435
Метки: клеточной, поверхности, гликопротеин
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-11261-glikoprotein-kletochnojj-poverhnosti.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Гликопротеин клеточной поверхности</a>
Молекулы распознавания на клеточной поверхности, содержащие иммуноглобулиновый домен
Номер патента: 7985
Опубликовано: 27.02.2007
Авторы: Пауэр Кристин, Фэйган Ричард Джозеф, Дэвидс Эндрю Роберт, Фелпс Кристофер Бенджамин
МПК: C07K 14/705, A01K 67/027, C12N 15/12...
Метки: поверхности, содержащие, молекулы, распознавания, домен, клеточной, иммуноглобулиновый
Формула / Реферат:
1. Полипептид, который: (i) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, или внеклеточный домен INSP052, представленный на фиг. 7, либо состоит из указанных аминокислотных последовательностей или указанного внеклеточного домена; (ii) представляет собой фрагмент, обладающий активностью полипептида (i) или имеющий общую...
Растворимый гликопротеин гиалуронидазы (shasegp), способ его получения, применение и фармацевтическая композиция его содержащая
Номер патента: 9383
Опубликовано: 28.12.2007
Авторы: Фрост Грегори И., Кунду Анирбан, Букбиндер Луис Х.
МПК: C12N 15/00, C07H 21/04, C12N 1/20...
Метки: растворимый, гиалуронидазы, получения, применение, гликопротеин, способ, shasegp, содержащая, композиция, фармацевтическая
Формула / Реферат:
1. По существу, очищенный гликопротеин, содержащий растворимый гиалуронидазный полипептид РН-20, активный в нейтральных условиях, причем полипептид РН-20 усечён у C-концевого остатка в пределах 10 аминокислот от сайта отщепления эндогенного GPI (гликозилфосфатидил-инозитола) и содержит по меньшей мере один N-связанный фрагмент молекулы сахара, характеризующийся тем, что N-связанный фрагмент молекулы сахара ковалентно присоединен к остатку...
Способ контроля количества сиаловой кислоты, присутствующей в олигосахаридной боковой цепи гликопротеина, способ получения химерного гликопротеина, препарат, содержащий химерный гликопротеин, и терапевтическая композиция.
Номер патента: 1215
Опубликовано: 25.12.2000
Авторы: Этчэверри Тина, Штрайтмюллер Томас, Лесслауер Вернер, Рилл Томас, Рихтер Вольфганг
МПК: C12N 5/00, A61P 29/00, C07K 19/00...
Метки: способ, сиаловой, присутствующей, химерный, получения, количества, цепи, химерного, контроля, композиция, гликопротеин, содержащий, терапевтическая, гликопротеина, препарат, боковой, кислоты, олигосахаридной
Формула / Реферат:
1. Способ контроля количества сиаловой кислоты, присутствующей в олигосахаридной боковой цепи гликопротеина, продуцируемого культурой клеток млекопитающего, путем изменения удельной продуктивности указанной культуры, который осуществляют следующим образом: во время переходной фазы добавляют к культуре клеток алкановую кислоту с 3-6 атомами углерода или ее соль в интервале концентраций, составляющем примерно от 0,1 мМ до 20 мМ, устанавливают...
Способ получения клеточной популяции
Номер патента: 63
Опубликовано: 30.04.1998
Автор: Бурдули Маради Александровна
Метки: клеточной, способ, получения, популяции
Формула / Реферат:
1. Способ получения клеточной популяции, включающий выделение живых клеток и введение их в ооциты, отличающийся тем, что в качестве живых клеток используют сперматиды, после выделения их помещают в эмбриональную жидкость, затем сливают полученную суспензию под давлением, величина которого обеспечивает целостность клеточных мембран, в зиготоподобные клетки и инъецируют полученные андроиды в оплодотворенные ооциты. 2. Способ по п. 1, отличающийся...
Ингибиторы клеточной адгезии
Номер патента: 5578
Опубликовано: 28.04.2005
Авторы: Корнебайз Марк, Скотт Дэниел, Ли Вен-Чернг, Петтер Расселл
МПК: A61K 31/40, C07D 401/06
Метки: ингибиторы, адгезии, клеточной
Формула / Реферат:
1. Соединение формулы (1) где R1 представляет собой пирролидинил, необязательно замещенный -SO2-фенильной группой, где фенил необязательно замещен одним-тремя заместителями, которые выбирают независимо из группы, состоящей из водорода, галогена, гидроксила, амино, нитро, трифторметила, трифторметокси, C1-10алкила, C2-10алкенила, C2-10алкинила, циано, карбокси, карбоC1-10алкокси, Ar'-замещенного C1-10алкила, Ar'-замещенного C2-10алкенила или...
Предыдущий патент: Способ получения 3-(4-пиперидинил)-2,3,4,5-тетрагидро-1,3- бензодиазепин-2(1н)-она
Следующий патент: Акустические головки и узлы и их применение
Случайный патент: Производные бензоила, обладающие гербицидным действием