Твёрдые композиции для селективной адсорбции из сложных смесей

006059 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к твердым композициям и способам, используемым в разделении химических компонентов в сложной смеси, в которой по меньшей мере один из химических компонентов способен селективно адсорбироваться. Изобретение также относится к способам снижения нецелевого связывания других компонентов в смеси. Предпосылки создания изобретения Разделение компонентов в смеси является важным во многих научных дисциплинах, таких как химия, биохимия и молекулярная биология. Разделение компонентов в смеси позволяет выделить интересующий компонент, т.е. аналит. После такого выделения аналита могут быть изучены или использованы его свойства. Без разделения может быть трудно определить свойства аналита, потому что независимо от используемого метода определения свойства интересующего компонента могут быть замаскированы другими компонентами в смеси или будут зависеть от них. Таким образом, методы разделения могут считаться основой в научных исследованиях. Разделение компонентов является трудновыполнимым, если смесь, содержащая аналит, является сложной смесью. Хорошие примеры сложных смесей включают среды биологической ферментации, клеточные культуры, получаемое трансгенными методами молоко или суспензии трансгенной растительной материи, в которых определенный аналит является желательным и обязательно должен быть выделен и очищен. Разделение компонентов в сложной смеси обычно осуществляют методами разделения по аффинности. Метод разделения по аффинности обычно включает контактирование смеси с твердой фазой,имеющей функциональность, специально предназначенную для связывания аналита, но, по существу,нереакционноспособную по отношению к другим компонентам в смеси, поэтому другие компоненты не подлежат удалению. После того, как несвязанные компоненты удаляются, например, промывкой твердой фазы водой или буфером, аналит остается вне связи с твердой фазой, так что аналит выделяют из несвязанных компонентов. Аналит затем выделяют отделением аналита от твердой фазы, обычно буферным обменом, с извлечением аналита в виде свободных молекул. Разработаны классы способов полезной аффинности для очистки. Указанные способы имеют много наименований: аффинная хроматография, осаждение по аффинности, имунноаффинное разделение и т.д.,но все они основаны на одних и тех же принципах, таких как специфическая функциональность или связующий компонент химически присоединяется к твердому носителю, который связывается очень селективно с целевым аналитом. Наиболее известными связующими компонентами для протеиновой очистки являются другие протеины, такие как протеин А или протеин G, или моноклональные антитела, хелатированные ионы металлов, полипептиды или небольшие органические молекулы. Моноклональные антитела могут быть особенно перспективными для протеиновой очистки, потому что они могут быть высокоселективными для заданного протеина. Как указано выше, смесь, которая содержит аналит, обеспечивает контактирование аффинного твердого носителя с присоединенным связующим компонентом. Аналит связывается со связующим компонентом на носителе, а остаток смеси удаляется. Аналит затем удаляют из связующего компонента элюированием, обычно осуществляемым заменой растворителя. Могут быть реализованы показатели очень высокой очистки. Имеется обширная литература по аффинной технологии 1-8. Недавние разработки по отбору и получению моноклональных антител дали аффинный способ на основе моноклонального антитела в качестве связующего компонента, очень мощный способ очистки протеинов и биофармацевтических веществ. Моноклональными антителами являются сами протеины,которые часто очищают от клеточной культуры или ферментации с использованием очистки по аффинности, которая использует протеин А или протеин G в качестве лиганда. Новые небольшие органические миметики протеина А также описаны в качестве используемых лигандов для очистки моноклональных антител. Хотя очистка по аффинности проявила себя как мощный способ, ее полный потенциал полностью не реализован. Существует общая практика, когда носитель формуется в небольших шариках, порядка 0,05-0,5 мм или около этого, и шарики, часто называемые средой, загружают в хроматографическую колонку. Очищаемую смесь затем пропускают через колонку, и аналит связывается с связующим компонентом, присоединенным к среде. Колонку затем интенсивно промывают для удаления окклюдированной смеси. Растворитель для элюирования затем пропускают через колонку, высвобождая аналит в раствор. В большом масштабе указанный способ требует, чтобы среда имела хорошую физическую прочность, чтобы выдерживать массу и турбулентность, встречающуюся в колонках. Некоторые носители, используемые в настоящее время для разделения по аффинности либо в колоночной хроматографии, либо в другой системе, являются материалами с малой площадью поверхности,такими как углеводсодержащие материалы или полимеры. Указанные носители с малой площадью поверхности могут иметь малый объем. Благодаря малому объему относительно большие загрузки среды требуются для извлечения нужных частиц. Но с большими загрузками среды скорости потока через колонку ограничиваются низкими значениями в результате падения давления. Колоночная хроматография также может осуществляться при высоком давлении, когда небольшие шарики используют для увеличения объема среды. Поскольку указанные шарики должны иметь высокую прочность, чтобы выдерживать-1 006059 давление, углеводные гели сшивают, в результате снижая объем получаемых шариков. Поэтому требуется обеспечение аффинных носителей с большим объемом, и которые являются, кроме того, физически устойчивыми при использовании жидкостной хроматографии высокого давления. Разработка носителей с большой площадью поверхности является одним подходом к получению среды разделения по аффинности с большим объемом. С материалом с большим объемом меньшие количества аффинного носителя требуются для извлечения нужных частиц, падения давления в колонке являются более низкими, скорости потока являются более высокими, и имеется меньше окклюдированного загрязнения в питании. Большие площади поверхности могут находиться в интервале 10-500 м 2/г. Материалами, которые могут обеспечить большую площадь поверхности, являются силикагели, диоксиды кремния, оксиды алюминия, диоксиды циркония, углеводы и полимерные материалы, такие как макропористые акриловые шарики. В случае силикагелей площадь поверхности может варьироваться от очень малой, 1 м 2/г, до очень большой, свыше 800 м 2/г, с вариантами размера пор от очень малых, менее 25 , до превышающих 1500 . Кроме того, материалы на основе неорганических оксидов являются обычно намного более физически устойчивыми, чем более мягкие углеводсодержащие носители. При использовании в качестве среды в технологии разделения по аффинности с присоединенным связующим компонентом указанные оксидсодержащие материалы, несмотря на наличие требуемой большой площади поверхности, могут страдать от высокой степени неселективного связывания нежелательных материалов. Не вся площадь поверхности используется для разделения по аффинности; часть ее фактически обеспечивает участки поверхности для неселективной адсорбции. Хорошо известно, что протеины связываются очень прочно с диоксидом кремния, например, иногда необратимо и неселективно. Поэтому, хотя связующий компонент может быть очень селективным, неиспользованные участки поверхности будут неселективными. Результатом является снижение селективности материалов с большой площадью поверхности, в результате чего снижаются показатели очистки всего способа. Указанная неселективная адсорбция многими оксидными носителями и, особенно, диоксидами кремния, такими как силикагели, является причиной того, что указанные материалы сегодня не используются широко в качестве носителей в разделении по аффинности. Одной целью данного изобретения является поверхностная композиция для нанесения на материалы с большой площадью поверхности, которая улучшает неселективную адсорбцию при сохранении высокой способности к селективному связыванию по аффинности. Такие композиции имеют большое значение в "разделении по аффинности" сложных биологических смесей, где определенные биологические виды, такие как протеины, синтезируются организмами генной инженерии. Например, сложная смесь может быть ферментационной питательной средой для клеточного или бактериального получения требуемого протеина. Ферментационные питательные среды являются сложными смесями протеинов, углеводов и т.д., которые поддерживают рост организмов, а также продуктами, полученными ферментацией. Требуемые виды также могут быть получены от ферментации и продуцируются организмом в питательной среде. В некоторых случаях требуемые виды продуцируются в клетке. Восстановление поэтому усложняется тем, что клетки должны быть гомогенизированы, а требуемые виды растворены. Указанные смеси являются особенно коварными для выделения и очистки целевых видов. Схемы разделения и очистки для выделения и очистки целевых видов из ферментационной питательной среды являются очень усложненными и дорогостоящими. Стоимость выделения и очистки является особенно значительной при крупномасштабном производстве. По причине многообещающего характера данной проблемы, область очистки и выделения является весьма обширной. Краткое описание изобретения Твердая композиция изобретения содержит неорганическое вещество и группу R10, расположенную по меньшей мере на одной поверхности указанного неорганического вещества, где указанным неорганическим веществом является неорганический оксид, и указанная R10-группа является представителем, выбранным из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3,-СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН). Когда R10 является представителем, выбранным из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2,-СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН), твердый носитель обладает отличительной характеристикой, имеет сниженное неселективное связывание любых неаналитных компонентов в сложной смеси. Представители R10 обладают общим свойством иметь нулевой электрический заряд и быть гидрофильными. Без связи с какой-либо определенной теорией предполагается, что когда твердый носитель имеет любой из представителей R10, т.е. -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3,-СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН), расположенный на его поверхности, связывание неаналитного компонента в смеси с поверхностью имеет изменение энтропии ниже, чем остальной неаналитный компонент в водной фазе смеси. Связывание любого компонента, например неаналитного или аналитного компонента, из раствора с поверхностью включает снижение энтропии благодаря локализации неаналита на поверхности. Для того чтобы связывание было благоприятным, должно иметься взаимодействие между неаналитом и поверхностью, такое как взаимодействие купонного заряда или гидрофобное взаимодействие, с преодолением снижения энтропии благодаря поверхностной локализа-2 006059 ции. Покрытие любым из или смесью представителей R10, однако, дает гидрофильную поверхность, а также поверхность, имеющую нулевой суммарный заряд, который снижает взаимодействие, необходимое для снижения энтропии, и, соответственно, снижает несвязывание неаналита. Также в объем изобретения входят твердые вещества, содержащие неорганическое вещество, группу R10, расположенную по меньшей мере на одной поверхности указанного неорганического вещества, и по меньшей мере один связующий компонент, способный связывать аналит. Группа R10 предпочтительно расположена на части поверхности неорганического оксида, а на остальной поверхности расположен связующий компонент. Связующий компонент выбран для обеспечения связывания определенного аналита и обеспечивает высокоселективное связывание для разделений по аффинности, тогда как поверхность, покрытая R10-группами, снижает связывание других частиц. В предпочтительных вариантах воплощения значительная, если не большая часть, поверхности неорганического оксида покрыта R10 группами, например, при концентрациях примерно 1-10 групп на 1 нм 2 субстрата, а остальная часть покрыта связующим компонентом. Также в объем изобретения входит твердое вещество, содержащее неорганическое вещество, в котором связующий компонент необязательно расположен на поверхности неорганического оксида с помощью мостика. Мостик может быть расположен на поверхности неорганического оксида при взаимодействии мостикового соединения с неорганическим оксидом и затем последующем взаимодействии мостика со связующим компонентом. Соответственно, изобретение относится к неорганическим веществам, содержащим мостиковые группы и R10-группы, расположенные на поверхности. Указанное твердое вещество, в свою очередь, может быть передано конечному пользователю, который может присоединить специально предназначенный связующий компонент к мостику для использования в разделении. Краткое описание чертежей На фиг. 1 схематически показана композиция данного изобретения, содержащая неорганическое вещество, поверхностные R10-группы, необязательный мостик, связующий компонент и аналит; на фиг. 2 представлены результаты примеров 1 и 2 с полосами 2 и 7, представляющими эталонPharmacia 3,6-9,3 Broad pI, полосами 3 и 4, представляющими пример 1, и полосами 5 и 6, представляющими пример 2. Данная фигура иллюстрирует неселективное связывание необработанных традиционных неорганических оксидов; на фиг. 3 представлены результаты примеров 3-5; на фиг. 4 представлены результаты примеров 6-8, которые являются иллюстрацией изобретения; на фиг. 5-8 представлены результаты анализов, проведенных для определения характеристик конкретного варианта изобретения (пример 8), с фиг. 5, показывающей ИК спектр диффузионного отражения из примера 8, фиг. 6, показывающей такой же спектр для композиции, полученной в примере 7 для сравнения, фиг. 7, показывающей MAS Si29-ЯMP-спектр из примера 8, и фиг. 8, показывающей фотоэлектронный рентгеновский спектр XPS)(ФЭРС из примера 8; на фиг. 9 показан ФЭРС-спектр из примера 7; на фиг. 10 представлена хроматограмма загрузки, промывки и элюирования из колонки, полученная в примере 9 с использованием изобретения после присоединения связующего компонента; на фиг. 11 показана спектральная поглощательная способность при 280 нм вытекающего потока от вытеснительной по размеру хроматографии очищенного поликлонального IgG кролика, полученного из элюента хроматографии по аффинности, проведенной в примере 9; на фиг. 12 показана спектральная поглощательная способность при 280 нм вытекающего потока от вытеснительной по размеру хроматографии исходного поликлонального IgG кролика, который был закреплен в клеточной среде в примере 9; на фиг. 13 показано получение агента покрытия, который дает -СН 2 ОН в качестве R10 по реакции,показанной на фиг. 14; на фиг. 14 показано получение диоксида кремния, имеющего R10, присоединенный через атом кремния, который не является частью диоксида кремния, где R10 представляет собой -СН 2 ОН, так что -SiСН 2 ОН непосредственно присоединяется к диоксиду кремния (HO-Si- представляет силанольную группу на поверхности диоксида кремния); на фиг. 15 показано получение агента покрытия, который дает -СН(ОН)2 в качестве R10, по реакции,показанной на фиг. 16; на фиг. 16 показано получение диоксида кремния, имеющего R10, присоединенный через атом кремния, который не является частью диоксида кремния, так что -Si-R10-группы присоединяются к поверхности диоксида кремния, где R10 представляет собой -СН(ОН)2 (HO-Si- представляет силанольную группу на поверхности диоксида кремния); на фиг. 17 показано получение агента покрытия, который дает гидроксиэтил в качестве R10, по реакции, показанной на фиг. 18; на фиг. 18 показан способ получения твердого вещества, содержащего диоксид кремния и -Si-R10 группы, присоединенные к поверхности диоксида кремния, т.е. R10 непосредственно присоединяется через атом кремния, который не является частью диоксида кремния, к поверхности диоксида кремния, где-3 006059 на фиг. 19 показан другой способ получения твердого вещества, содержащего диоксид кремния и-Si-R10-группы, присоединенные к поверхности диоксида кремния, т.е. R10 непосредственно присоединяется через атом кремния, который не является частью диоксида кремния, к поверхности диоксида кремния, где R10 представляет собой 1,2-дигидроксиэтил; на фиг. 20 показан вариант воплощения настоящего изобретения, в котором -Si-R10-группы сшиваются, когда присоединяются к поверхности диоксида кремния, где R10 представляет собой гидроксиметил (HO-Si- представляет силанольную группу на поверхности диоксида кремния); на фиг. 21 показано получение агента покрытия, который дает -Si-R10-группу, присоединенную к поверхности диоксида кремния в единственной точке, где R10 представляет собой гидроксиметил, полученный по реакции, показанной на фиг. 22; на фиг. 22 показан вариант воплощения настоящего изобретения, в котором -Si-R10-группа присоединяется к поверхности диоксида кремния в единственной точке, где R10 представляет собой гидроксиметил (HO-Si- представляет силанольную группу на поверхности диоксида кремния). Подробное описание изобретения Неорганическое вещество. Неорганическое вещество, подходящее для осуществления изобретения, включает продукты, коммерчески доступные в качестве хроматографической среды. Указанные вещества могут быть получены с использованием способов, известных в технике. Неорганическое вещество также может рассматриваться в качестве носителя связующего компонента, описанного ниже, и иногда неорганическое вещество называется здесь как "носитель". Вообще, неорганическим веществом настоящего изобретения является неорганический оксид, более подходяще, неорганический оксид металла, силикат или алюмосиликат. Неорганический оксид металла является предпочтительным. Неорганические оксиды, подходящие для данного изобретения, имеют свободные гидроксильные группы, способные связываться или взаимодействовать с другими химическими функциональностями. Это такие гидроксильные группы, с которыми поверхностные R10-группы и связующие компоненты и/или мостики взаимодействуют или связываются. В общем случае подходящие неорганические оксиды включают неорганические оксиды, имеющие примерно 1-10 гидроксильных групп на квадратный нанометр твердого неорганического оксида. Примеры предпочтительного неорганического оксида металла включают диоксид кремния, такой как диоксид кремния хроматографического сорта или силикагель, оксид алюминия, диоксид кремния оксид алюминия, диоксид циркония, цирконат, стекло с регулируемой пористостью или диоксид титана. Неорганическим оксидом металла предпочтительно является диоксид кремния, более предпочтительно диоксид кремния хроматографического сорта или силикагель. Также подходящими являются магнитночувствительные неорганические оксиды металлов, такие как кремнийсодержащие магнитные частицы с оксидным покрытием, раскрытые в WO 98/31461 (содержание которого включается в описание в качестве ссылки). Также могут быть использованы смешанные неорганические оксиды металлов, например,согели диоксида кремния и оксида алюминия или соосадки. Твердые вещества, полученные из силиката натрия, являются примерами подходящего силиката, а цеолит является примером подходящего алюмосиликата. Твердое вещество настоящего изобретения может быть в физической форме частиц, волокон и пластин. Поверхностные группы (R10). Как указано выше, R10-группы выбраны из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3,-СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН). R10 предпочтительно является группой, выбранной из -СН 2OН, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН и -СН(ОН)СН 2(ОН). Более предпочтительно R10 представляет собой -СН 2 ОН, -СН(ОН)СН 3 и СН 2 СН 2 ОН. Наиболее предпочтительно R10 представляет собой-СН 2 ОН. Группа R10 расположена по меньшей мере на одной поверхности неорганического вещества. Под"расположен" понимается, что R10 может быть присоединена непосредственно к функциональности на поверхности исходного неорганического вещества. R10 может быть расположена на участке поверхности,присутствующем на периферии неорганического вещества, или расположен на участке поверхности,присутствующем в порах, которые проникают внутрь неорганического вещества и имеют отверстия (поры) на периферии вещества.R10 также может быть "расположен" на поверхности неорганического вещества путем присоединения к поверхности неорганического вещества через бивалентную группу или атом (-Х-) с образованием группы, имеющей формулу -X-R10. Бивалентная группа или атом, связывающий R10 в данном варианте,не присутствует в композиции исходного неорганического вещества перед взаимодействием вещества с реагентом. Группа или атом могут быть из реагента, используемого для создания R10, например, остаточный атом металла (например, атом кремния) , происходящий от силанового реагента. Остаточная группа или атом присоединяется непосредственно к указанному неорганическому веществу и предпочтительно через гидроксильные группы на поверхности неорганических веществ. -Х-группа в таких реагентах варьируется от реагента к реагенту, но может быть атомами металлов или другими химическими группами. Например, X может быть производным от атомов металлов, таких как кремний, алюминий, цирконий и т.п. Выбранное неорганическое вещество может также определять выбор -Х- и его соответствую-4 006059 щего реагента. Обычно любой реагент, содержащий -Х-, будет таким, который может взаимодействовать с реакционной функциональностью на неорганическом веществе. В случае неорганических оксидов подходящими реагентами являются реагенты, способные взаимодействовать с гидроксильными группами. Химия реакционноспособных соединений, например, способных к взаимодействию R10 с неорганическими веществами, известна в технике, см., например, Smith, Organic Synthesis, John WileySons,1994; March, Advanced Organic Chemistry, John WileySons, Four Edition, 1992; Larock, ComprehensiveWeetall, "covalent Coupling Methods for Inorganic Support Materials", in Methods in Enzymology, vol. XLIV,edited by K.Mosbach, pp. 134-148, 1976; Abbot, US 4298500 и Arkles, US 5371262; содержание указанных документов включено в описание в качестве ссылки. Например, твердое вещество, содержащее R10 группы, расположенные на поверхности неорганического вещества, может быть получено из реагента или агента покрытия, такого как алкоксисилан, диалкоксисилан или триалкоксисилан, несущего группу предшественника R10. Например, ацетоксиметил может быть группой предшественника гидроксиметила. Агент покрытия затем обеспечивает взаимодействие с поверхностью неорганического вещества с последующим гидролизом предшественника с получением неорганического вещества, имеющего присоединенные R10-группы. Способ получения диоксида кремния, имеющего -СН 2 ОН в качестве R10, расположенного на поверхности диоксида кремния, показан на фиг. 13 и 14. На фиг. 13 показано получение агента покрытия ацетоксиметилтриэтоксисилана (см. соединение (2 для введения Si-R10-групп в силанольные группы на поверхности диоксида кремния, т.е. HO-Si-, где R10 представляет собой гидроксиметил (см. реакции,представленные на фиг. 14, в которых соединение (5) представляет собой диоксид кремния, имеющий SiR10, непосредственно присоединенный к поверхности, где R10 представляет собой гидроксиметил). Другими словами, на фиг. 14 показан способ введения R10-групп на поверхности диоксида кремния через Siатом, который является примером остаточной группы, или атом X, описанный выше в качестве остаточного от реагента, и который не является частью исходного неорганического вещества. Способ получения диоксида кремния, содержащего R10, где R10 представляет собой -СН(ОН)2, показан на фиг. 15 и 16. На фиг. 15 показано получение агента покрытия диацетоксиметилтриэтоксисилана(см. соединение (7 для введения -СН(ОН)2-групп в качестве R10-группы на поверхности диоксида кремния, (см. реакции и соединение (9), представленные на фиг. 16). На фиг. 17 показан способ получения агента покрытия - ацетоксиэтилтриэтоксисилана (см. соединение (11 для введения 2-гидроксиэтила на поверхность диоксида кремния. Два способа получения твердого вещества, содержащего диоксид кремния и 1,2-дигидроксиэтил в качестве R10-групп, присоединенных к поверхности диоксида кремния, показаны на фиг. 18 и 19. Также в объем настоящего изобретения входят, твердые вещества, содержащие неорганическое вещество, имеющее R10-группы, присоединенные к поверхности твердого вещества через остаточный металл (например, Si) из силанового реагента, где каждая получаемая Si-R10-группа присоединяется к неорганическому веществу через три ковалентные связи (например, см. конечные продукты реакционных схем на фиг. 14, 16, 18 и 19, являющиеся результатом реакции агента покрытия, имеющего три силанольные группы). Как видно на фиг. 21 и 22, также предполагается, что агенты покрытия могут быть выбраны так, что остаточные атомы могут быть также присоединены к неорганическому веществу через одну или две ковалентные связи, или что некоторые варианты воплощения содержат сшивание Si атомов. Таким сшиванием может быть Si-O-Si связь или другая связь, такая как Si-O-C(O)-O-Si, Si-О-алкилен-О-Si или Si-OC(O)-алкилен-O-Si). Конечный продукт, т.е. соединение (20), реакционной схемы на фиг. 22 показывает вариант воплощения твердого вещества настоящего изобретения, в котором Si-R10-группа имеет единственную точку присоединения к поверхности диоксида кремния. Указанный вариант воплощения получен из реакции твердого неорганического вещества и моноэтоксисилана (см. фиг. 21 для получения агента покрытия, которым является моноэтоксисилан). Связующий компонент. Твердое вещество настоящего изобретения может дополнительно содержать по меньшей мере один связующий компонент, который присоединен, необязательно через мостик, к поверхности или иным способом расположен на поверхности указанного неорганического вещества. Связующим компонентом является любая молекула или фрагмент молекулы, способные связываться с другим компонентом или компонентсодержащим аналитом, например, связываться через гидрофобное взаимодействие, ковалентное связывание или кулонное взаимодействие. Такие компоненты хорошо известны специалистам в отрасли разделения. Компоненты, обычно используемые в промышленности биоразделения, включают (например, биотин, авидин и стрептавидин) природный и неприродный протеин, пептид, антиген и нуклеиновую кислоту. В качестве связующего компонента твердого вещества настоящего изобретения протеин является предпочтительно рецептором или антителом.-5 006059 Также предпочтительно, что в твердом веществе настоящего изобретения связующим компонентом является лиганд, рецептор, антитело, антиген, ДНК и РНК, включая пробы гибридизации нуклеиновых кислот. Когда лигандом является авидин или стрептавидин, аналит может быть биотином или биотинилированным и наоборот. Связующий компонент присоединяется к неорганическому веществу с использованием методов,известных в технике (например, Hermanson et al., Immobilized Affinity Ligand Techniques, Academic Press,1992 и другие ссылки, приведенные ранее в отношении присоединения R10-групп). В твердых веществах,содержащих неорганические оксиды, связующий компонент может быть присоединен через реакцию с поверхностными функциональными группами, например, гидроксилом, на исходном неорганическом оксиде. Альтернативно, связующий компонент может быть присоединен к неорганическому веществу через мостик. Мостиком может быть бивалентная химическая группа, которая, необязательно, замещена. Необязательно замещенная бивалентная химическая группа может содержать n -R-групп, где n обозначает количество -R-групп, и n представляет собой целое число, по меньшей мере 1, предпочтительно не более чем 30 и более предпочтительно не более чем 15. Обычно бивалентная химическая группа составляет от примерно 1 до примерно 30 атомов, предпочтительно от примерно 1 до примерно 20 атомов, более предпочтительно от примерно 5 до примерно 15 атомов в длину, измеренную от связующего компонента до неорганического вещества. Химическая группа -R- может быть выбрана из группы, состоящей из-C(Ri)H-, -C(R2)=C(R3)- и -CС-, где R1, R2 и R3 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил, замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил, указанная -R-группа, необязательно, замещена -О-, -S-,карбонилом, тиокарбонилом, -ОС(О)-, -С(О)О, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(S)-, -C(S)O-, -C(S)S-, -SC(S)-,-N(R4)-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-, -C(R5)=NO-, -ON=C(R5)-, -P-, -P(OH)O-, ариленом, замещенным ариленом, циклоалкиленом, замещенным циклоалкиленом, циклоалкениленом, замещенным циклоалкениленом, бивалентным гетероциклилом или замещенным бивалентным гетероциклилом, где R4 и R5 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил, замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил. Характерной химической группой является "гидрокарбил", содержащий n -R-групп,и где n описано выше, по меньшей мере одна -R-группа представляет собой -СН 2-, и (n-1) -R-групп, необязательно, замещено R-группами, указанными выше, например, -О-, -S- и т.д. Термин "замещенная" используется здесь для обозначения групп, содержащих боковые заместители, которые не изменяют преобладающий химический характер замещенной R-группы, например углеводородный характер гидрокарбилов. Термин "алкил" относится к насыщенному разветвленному или неразветвленному гидрокарбильному радикалу предпочтительно с 1-30, более предпочтительно с 1-20 и даже более предпочтительно с 1-6 углеродными атомами. Примеры "алкила" включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, вторбутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, изопентил, неопентил, 1,1 диметилпропил, н-гексил, 1-метилпентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 1,1-диметилбутил, 2,2 диметилбутил, изогексил и неогексил. Термин "циклоалкил" относится к насыщенному циклическому гидрокарбильному радикалу предпочтительно с 3-10 и более предпочтительно с 3-6 углеродными атомами. Примеры "циклоалкила" включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, бициклогептил и декалин. "Алкенил" является разветвленным или неразветвленным гидрокарбильным радикалом, имеющим не менее одной C=С связи, где гидрокарбильный радикал имеет предпочтительно 2-30,более предпочтительно 2-20 и даже более предпочтительно 2-6 углеродных атомов. Примеры "алкенила" включают винил, аллил, 1-пропенил, изопропенил, 2-бутенил, 1,3-бутадиенил, 3-пентил и 2-гексенил."Циклоалкенил" относится к циклическому гидрокарбильному радикалу предпочтительно с 3-10, предпочтительно с 3-6 углеродными атомами, имеющему не менее одной С=С связи. "Алкинил" представляет собой разветвленный или неразветвленный гидрокарбильный радикал предпочтительно с 2-30, более предпочтительно с 2-20 и даже более предпочтительно с 2-6 углеродными атомами, имеющий не менее одной -CC- связи. Примеры "алкинила" включают этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 2-бутинил, 3 бутинил и 2-пентен-4-инил. "Циклоалкинил" представляет собой циклический гидрокарбильный радикал предпочтительно с 3-10, более предпочтительно 3-6 углеродными атомами, имеющий не менее одной-СС- связи. Примеры "циклоалкинила" включают пентинил и гексинил. "Арил" представляет собой ароматический циклический гидрокарбильный радикал предпочтительно с 6-14 углеродными атомами. Примеры "арила" включают фенил, нафтил, антрацил и фенантрил, причем фенил является предпочтительным арилом. "Аралкил" представляет собой алкильный радикал, замещенный одним или несколькими арильными радикалами. Примеры "аралкила" включают бензил, фенетил, дифенилметил и тритил, причем бензил является предпочтительным аралкилом. "Бивалентным гетероциклилом" являются бивалентные циклические ра-6 006059 дикалы, обычно имеющие 3-10, предпочтительно 3-7, более предпочтительно 4-6 кольцевых атомов,причем 1-4 кольцевых атома представляют собой атомы О, S или N или смеси атомов О, S и/или N. Примеры бивалентного гетероциклила включают бивалентные радикалы тиирена, оксирана, азиридина, 1 Назирина, 2 Н-азирина, 2 Н-тиета, тиетана, 2 Н-оксета, оксетана, азета, азетидина, 1,2-оксазетидина, тиофена, фурана, пиррола, имидазола, оксазола, изоксазола, тиазола, изотиазола, пиразола, 1,3-диоксолана,1,2,3-тиадиазола, 1,3,4-тиадиазола, 1,2,4-тиадиазола, 1,2,3-оксадиазола, 1,2,4-оксадиазола, 1,3,4-оксадиазола, 1,2,5-оксадиазола, 1,2,3-триазола, 1,2,4-триазола, тетразола, оксадиазола, пиридина, хинолина, изохинолина, хинолизина, хиназолина, птеридина, карбазола, бензоксазола, 1,3-оксазина, 2 Н-1,3-оксазина,феназина, фенотиазина, пиридазина, пиримидина, пиразина, бензо[b]фурана, бензо[b]тиофена, индола,изоиндола, индазола, пурина, изобензофурана, тетрагидрофурана, 1,4-диоксана, пирролидина, тетрагидропирана, 1,2-дигидропиридина, 1,4-дигидропиридина, пиперидина, пиперазина, морфолина, тиоморфолина, хромана, изохромана, хромена, 1 Н-азепина, 3 Н-азепина, 1,2-диазепина, 1,3-диазепина, 1,4-диазепина, триазепинов и азоцина. "Гетероарил" относится к ароматическим гетероциклическим радикалам."Алкилен", "алкенилен", "алкинилен", "циклоалкилен", "циклоалкенилен" и "арилен" являются бивалентными эквивалентами радикалов алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкенил и арил соответственно."Замещенный гетероциклил" представляет собой гетероциклильный радикал, замещенный 1-5,предпочтительно 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила,аралкила, гидрокси, сульфидрила, алкокси, алкилтио, амино, алкиламино, диалкиламино, ариламино,N,N-арилалкиламино, диариламино, азидо, амидино, уреидо, фторо, хлоро, бромо, иодо, нитро, циано,ацила (предпочтительно ацетила и бензоила), тиоацила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, алкилсульфонамидо, алкилсульфамоила, карбоксила, алкилкарбонилокси (предпочтительно ацетокси), арилкарбонилокси (предпочтительно бензоилокси), алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбамоила,арила (предпочтительно фенила), стирила, циклоалкила, циклоалкенила и гетероциклила (предпочтительно гетероарила)."Замещенный арилен", "замещенный циклоалкилен", "замещенный циклоалкенилен", "замещенный бивалентный гетероциклил" и "замещенный аралкил" являются бивалентными эквивалентами "замещенного арила", "замещенного циклоалкила", "замещенного циклоалкенила" и "замещенного гетероциклила". Мостиковое соединение химической группы -R- мостика и неорганического вещества зависит от химии, используемой для взаимодействия мостика и неорганического вещества. Мостиком может быть простой эфир, простой тиоэфир, сложный эфир, сложный тиоэфир, карбонат, карбамат, фосфат, фосфонат, сложный фосфоэфир, фосфорамидат, амин, амид, имид, мочевина, тиомочевина, сульфонамид,сульфоксид, сульфон, дисульфид, оксим, О-ацилоксим, О-карбамоилоксим, О-ацилоксиалкилоксим, Oацилоксиалкилоксиоксим, О-оксиминофосфат, О-оксиминофосфонат, О-оксиминофосфорамидат или-С=С-мостик. Мостиковым соединением химической группы -R- и связующего компонента также может быть один из вышеуказанных мостиков. Химия взаимодействия мостиков с веществами (например, неорганическими веществами) хорошо описана в литературе (см. Hermanson et al., Immobilized Affinity Ligand Techniques, 1992 и Weetal, Methods in Enzymology, vol. XLIV, pp. 134-148, 1976). Конкретная химия взаимодействия мостика с неорганическими веществами зависит от неорганического вещества и используемого мостика. Аналогично, химия взаимодействия мостика и связующего компонента зависит от мостика и используемого связующего компонента. Отдельные примеры химии взаимодействия подходящих мостиков/связующих компонентов показаны в таблице. В соответствии с таблицей связующий компонент может быть соединен с мостиком через амино-, сульфидрил-, карбонил- или гидроксигруппу или активный водородный атом на связующем компонентом.-8 006059 Таблица Примеры традиционной химии соединения мостик/связующий компонент При получении твердых носителей, содержащих мостиковые группы, порядок создания мостиковых групп в сочетании с введением R10-групп в неорганическое вещество может различаться.R10-группа может быть создана на неорганической поверхности после присоединения мостика или может быть создана перед взаимодействием мостика. Альтернативно, предшественники либо R10 группы, либо мостика, либо того и другого могут быть созданы и/или присоединены, причем предшественники затем взаимодействуют с созданием конечной R10-группы и/или мостика. Концентрация мостиковых групп на неорганической поверхности может различаться. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения связующий компонент содержит большие протеиновые молекулы, которые могут "затенять" большие участки площади поверхности носителя. В результате не требуется, чтобы концентрация мостиковых участков на поверхности носителя была относительно высокой. Концентрация может быть оптимизирована относительно размера предполагаемого комплекса связующий компонент/аналит. Факторы, которые определяют концентрации R10-группы и связующего компонента, включают идентичность R10-группы и связующего компонента, концентрацию реакционных участков на неорганическом веществе, концентрацию мостиковых групп и идентичность аналита.-9 006059 В общем случае концентрация R10 может быть в интервале от примерно 1 до примерно 10 групп на квадратный нанометр (нм 2) площади поверхности носителя относительно площади поверхности, измеренной по методу БЭТ. В некоторых вариантах воплощения концентрация связующего компонента зависит, главным образом, от искомого аналита, извлекаемого с использованием композиции. Как указано выше, концентрация связующего компонента также может зависеть от любого используемого необязательного мостика. В общем случае, однако, связующий компонент может быть в концентрации в интервале от 0,04 до примерно 4 групп на квадратный нанометр. Кроме того, связующий компонент не всегда присоединяется к мостику при стехиометрии один к одному. В некоторых вариантах воплощения, например, когда связующий компонент получен из большой протеиновой молекулы, связующий компонент может быть присоединен несколькими мостиковыми группами. В других вариантах воплощения,использующих меньшие связующие компоненты, используются количества связующих компонентов меньше стехиометрических, и любые непрореагировавшие мостиковые группы "блокируются", чтобы избежать помех, когда изобретение используют для разделения. Количество R10 и связующего компонента может быть также установлено в зависимости от того,как много функциональных групп на исходном неорганическом веществе прореагировало с или "охвачено" R10, связующим компонентом и/или необязательным мостиком. Например, от примерно 50 до примерно 99% поверхностных гидроксильных групп указанного неорганического вещества может быть охвачено R10 поверхностными группами, и примерно 1-50% поверхностных гидроксильных групп может быть охвачено связующим компонентом, необязательно присоединенным к неорганическому веществу через мостик. В некоторых вариантах воплощения твердого вещества настоящего изобретения примерно 75-99% поверхностных гидроксильных групп указанного неорганического вещества охвачено поверхностнымиR10-группами, и примерно 1-25% поверхностных гидроксильных групп охвачено связующим компонентом, непосредственно или непрямо присоединенным к неорганическому веществу через мостик. Как указано выше, твердое вещество данного изобретения, содержащее по меньшей мере один связующий компонент и R10, может быть использовано для выделения аналитов, известных для связывания с связующим компонентом. Соответственно, настоящее изобретение охватывает способ выделения аналита, смешанного по меньшей мере с одним другим компонентом в смеси, причем указанный способ включает следующие стадии:(1) контактирование твердого вещества настоящего изобретения с указанной смесью, где по меньшей мере один связующий компонент имеет селективную аффинность к указанному аналиту;(2) обеспечение соединения указанного аналита с указанным по меньшей мере одним связующим компонентом;(3) удаление указанного по меньшей мере одного другого компонента из твердого вещества, имеющего указанный связанный с ним аналит;(4) извлечение указанного твердого вещества; и(5) выделение аналита из твердого вещества. В варианте воплощения способа настоящего изобретения связующий компонент присутствует в количестве, достаточном для обеспечения избирательного связывания с желаемым аналитом. По меньшей мере один другой компонент удаляют на стадии (3) промывкой твердого вещества жидкостью и сливом промывки; и где указанный аналит удаляют на стадии (5) помещением элюанта на твердое вещество и собиранием элюанта. В способе выделения аналита предпочтительно от примерно 50 до примерно 99% гидроксильных групп поверхности указанного неорганического вещества охвачено поверхностными компонентами и от примерно 1 до примерно 50% гидроксильных групп поверхности охвачено связующим компонентом,непосредственно или непрямо присоединенным к неорганическому веществу через мостик. В способе выделения аналита, кроме того, предпочтительно от примерно 75 до примерно 99% гидроксильных групп поверхности указанного неорганического вещества охвачено поверхностными группами и от примерно 1 до примерно 25% гидроксильных групп поверхности охвачено связующим компонентом, непосредственно или непрямо присоединенным к неорганическому веществу через мостик. В предпочтительном варианте воплощения способа выделения аналита указанным неорганическим веществом является силикагель или диоксид кремния хроматографического сорта. Более предпочтительно неорганическим веществом является силикагель. Настоящее изобретение также включает способ снижения неселективного связывания примеси(примеси являются неаналитными компонентами, т.е. частицами, иными, чем аналит, в смеси, содержащей аналит) с твердым веществом, содержащим неорганическое вещество, в котором неорганическое вещество содержит по меньшей мере одну функциональную группу, с которой имеет место неселективное связывание или которая иным образом обуславливает неселективное связывание. Неорганическое вещество содержит вышеуказанный неорганический оксид, и указанный способ включает следующие стадии:(1) обеспечение указанного твердого вещества;(2) взаимодействие указанной по меньшей мере одной функциональной группы с реагентом с созданием группы R10 по меньшей мере на одной поверхности неорганического вещества, где R10 выбрана из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и-СН(ОН)СН 2(ОН). В способе снижения неселективного связывания R10 предпочтительно является представителем,выбранным из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН и -СН(ОН)СН 2(ОН). Более предпочтительно R10 является представителем, выбранным из группы, состоящей из -СН 2 ОН,-СН(ОН)СН 3 и -СН 2 СН 2 ОН. Наиболее предпочтительно R10 представляет собой -СН 2 ОН. R10 присутствует на поверхности неорганического вещества в достаточных количествах, так что, когда неорганическое вещество контактирует со смесью, содержащей примесь, неселективное связывание примеси с твердым веществом снижается. Способ является особенно пригодным в снижении неселективного связывания неорганических оксидов металлов, силикатов или алюмосиликатов, имеющих гидроксильную функциональность, расположенную на их поверхности. Он особенно применим для неорганических оксидов металлов, таких как диоксид кремния (силикагель или диоксид кремния хроматографического сорта), оксид алюминия, диоксид кремния-оксид алюминия, диоксид циркония, цирконат, стекло с регулируемой пористостью, диоксид титана, их соосадки и смеси. Способ также применим к магнитночувствительным неорганическим оксидам (таким как кремнистые с оксидным покрытием магнитные частицы). Имеются три типа связывания протеинов или других видов с поверхностью носителя, которые должны быть рассмотрены для минимизации неселективного связывания с твердым носителем. Поверхностный заряд носителя должен идеально быть нулевым при рабочем рН адсорбции. Это обусловлено тем, что протеины несут суммарный заряд, благодаря избытку групп -СООН и -NH2 в протеине. Для сложной смеси протеинов при примерно рН 7, если протеин в смеси имеет изоэлектрическую точку 7, он будет иметь суммарный отрицательный заряд, и, наоборот, если протеин в смеси имеет изоэлектрическую точку 7, он будет иметь суммарный положительный заряд. Непрореагировавшая поверхность диоксида кремния имеет изоэлектрическую точку около 2, так что, если он контактирует со сложной смесью при рН=7 или около этого, он будет иметь сильно отрицательный заряд, поэтому протеины, которые положительно заряжены, будут адсорбироваться неселективно на поверхности диоксида кремния. Это объясняет сильное неселективное связывание протеинов с поверхностями диоксида кремния. Поэтому, как указано выше, поверхностный заряд носителя должен быть идеально нулевым при рабочем рН адсорбции. Вторым типом связывающего взаимодействия, которое должно быть минимизировано, является гидрофобное связывание. Хотя более слабые, чем электростатическое или дипольное взаимодействия на единичных участках, гидрофобные взаимодействия становятся заметными, когда они становятся совместными между многими смежными участками. Гидрофобное взаимодействие становится доминирующим, когда концентрация соли растворителя является относительно высокой. Ионы соли могут взаимодействовать с заряженной поверхностью, тем самым "экранируя заряд" от протеинов. Хотя присутствие высокого содержания соли снижает электростатическое взаимодействие с поверхностью, гидрофобные взаимодействия становятся доминирующими, если поверхность имеет гидрофобный характер. Поэтому гидрофобную поверхностную композицию необходимо избегать на носителе для минимизации указанного взаимодействия. Третьим типом связывающего взаимодействия протеинов с поверхностями является водородное связывание или биполярное взаимодействие. Интересно что, если растворителем является вода, указанное взаимодействие будет содействовать растворителю по поверхности благодаря энтропийным обстоятельствам. Т.е., если протеин имеет "выбор" связывания с поверхностью через водородную связь или остается в растворе в водной системе, что также является взаимодействием водородного связывания,случай раствора является благоприятным из-за его более высокого энтропийного состояния. Поэтому для очистки протеина от водного раствора поверхность, которая имеет биполярную композицию, является благоприятной для минимизации неселективного связывания. Такая поверхность является обычно гидрофильной при низкой плотности электростатического заряда. Предполагается, что изобретение относится к каждому из указанных трех взаимодействий, и что одним из элементов новизны данного изобретения является поверхностная композиция, которая создает гидрофильную поверхность с очень низкой плотностью поверхностного заряда для протеиновой очистки из водных систем. Указанную поверхностную композицию получают химической модификацией носителя на основе неорганического оксида, такого как диоксид кремния, предпочтительно силикагелей с вышеуказанными R10-группами, такими как -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3,-СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН), предпочтительно -СН 2 ОН, покрывающими поверхность. УказанныеR10-группы являются гидрофильными, еще являются очень слабыми кислотами, что означает, что указанные R10-группы, по существу, не диссоциируются при рН менее чем примерно 12 или около этого и поэтому являются незаряженными. Когда сложная смесь протеинов присутствует вместе с указанной поверхностной композицией, зарядные взаимодействия минимизируются, еще взаимодействия водородного связывания будут способствовать водородному связыванию из водного растворителя благодаря бо- 11006059 лее высокому энтропийному состоянию растворенного протеина по сравнению с протеином, связанным водородной связью с поверхностью. Указанная поверхностная композиция будет тогда минимизировать неселективное связывание нежелательных протеинов с носителем, имеющим высокую аффинность, что дает высокие показатели очистки при большем объеме. Также в объем изобретения входят твердые вещества, содержащие R10-группы и по меньшей мере один мостик, расположенные на поверхности неорганического вещества. Такие твердые вещества могут считаться промежуточным продуктом, который может поставляться "как есть" потребителю твердого вещества. Перед выделением требуемого аналита потребитель может тогда осуществить взаимодействие связующего компонента с мостиковой группой. Мостиковые группы могут быть также, необязательно,блокированы на конце или иным образом в форме предшественника, который будет требовать дополнительной химической обработки перед его взаимодействием со связующим компонентом. Следующие рабочие примеры приведены для иллюстрации некоторых аспектов настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничение объема настоящего изобретения. Настоящее изобретение может быть осуществлено в вариантах воплощения, не показанных в примерах, без отхода от сути или существенных признаков изобретения, рассмотренного здесь. Например, настоящее изобретение может быть осуществлено на практике специалистом в данной области техники, как описано в формуле изобретения, и любые варианты, имеющие элементы, эквивалентные элементам, приведенным в формуле изобретения, входят в объем патентуемого изобретения. Примеры 1 и 2. Неселективное связывание на традиционных средах на основе диоксида кремния. Данные примеры показывают, что чистая непокрытая заряженная поверхность диоксида кремния прототипа сильно адсорбирует протеины на основе, главным образом, изоэлектрической точки и площади поверхности диоксида кремния. Испытывают два типа диоксида кремния: примеры 1 и 2. Примером 1 является силикагель, имеющий малую площадь поверхности, с площадью поверхности = 161 м 2/г после 4 ч термообработки при 150 С (микропоры = 73 м 2/г; мезопоры = 88 м 2/г, объем пор = 0,373 см 3/г, средний диаметр пор = 93 ). Примером 2 является силикагель, имеющий большую площадь поверхности/объем пор, площадь поверхности = 253 м 2/г после 4 ч термообработки при 150 С (микропоры = 35 м 2/г; мезопоры = 218 м 2/г, объем пор = 2,445 см 3/г, средний диаметр пор = 387 ). Примеры ниже описывают методику, где образцы чистого диоксида кремния контактируют со сложной смесью протеинов в водном растворе. Полученную надосадочную жидкость затем анализируют гелевым электрофорезом с изоэлетрической фокусировкой на протеиновую адсорбцию. Ампулу (325 мкг протеина/ампулa) Pharmacia 3,6-9,3 Broad pI Calibration Kit (каталог 17-0471-01) растворяют в 200 мкл деионизованной воды в пробирке Эппендорфа. Добавляют 0,005 г вещества примера 1. В другой пробирке Эппендорфа ампулу (325 мкг протеина/ампула) Pharmacia 3,6-9,3 Broad pICalibration Kit (каталог 17-0471-01) растворяют в 200 мкл деионизованной воды и добавляют 0,005 г вещества примера 2. Оба образца перемешивают непрерывно в течение 1 ч. Указанные образцы быстро подвергают гелевому электрофорезу с 3-9 изоэлектрической фокусировкой на установке PharmaciaPhastGel. Результаты показаны на фиг. 2. На фиг. 2 показано, что полосы (протеины) отсутствуют у образцов, которые контактировали с веществами примеров 1 и 2, что означает, что указанные протеины адсорбированы поверхностями диоксида кремния. Диоксид кремния с большой площадью поверхности (пример 2) адсорбирует все протеины с изоэлектрическими точками более чем 5,9, тогда как диоксид кремния с малой площадью поверхности(пример 1) адсорбирует только протеины более высокого pI. Данные ясно показывают, что непокрытый диоксид кремния связывает протеины, главным образом, через сильное электростатическое взаимодействие, и что поверхность является отрицательно заряженной при данном рН (предположительно около 5,5 или около этого). Примеры 3, 4 и 5. Неселективное связывание на гидрофобных обработанных носителях. Данные примеры показывают, что, когда диоксид кремния покрывается гидрофобными группами,метильными или октильными группами, имеет место сильная адсорбция, особенно, при умеренной ионной силе растворителя -0,1 М соли. Веществом примера 3 является чистый непокрытый крупнопористый коммерческий диоксид кремния от фирмы W.R.GraceCo., XWP-гель Р 005, площадь поверхности = 72 м 2/г, со средней линией пор 50 нм, который был активирован в течение 2 ч при 150 С. Веществом примера 4 является диоксид кремния из примера 3, который был покрыт метильными группами, описанный ниже. Веществом примера 5 является диоксид кремния из примера 3, который был покрыт октильными группами, описанный ниже. Вещество примера 4 получают следующим образом. В 250 мл круглодонную колбу загружают 50 мл толуола и 6,16 г метилтриэтоксисилана. Затем в раствор толуол/метилтриэтоксисилан добавляют 10,1 г вещества примера 3. В течение 5 мин продувают азотом для удаления воздуха и продолжают до полного прохождения реакции. Образец кипятят с обратным хо- 12006059 лодильником и перемешивают при 110 С в течение 4 ч. Образец затем фильтруют и промывают 3 раза 50 мл толуола. Образец повторно суспендируют в 50 мл толуола, затем фильтруют и промывают 3 раза 50 мл толуола. Образец затем повторно суспендируют в 50 мл толуола, затем фильтруют и промывают 3 раза 50 мл толуола. Образец сушат при 110 С и затем прокаливают в течение 4 ч при 150 С. Вещество примера 5 получают следующим образом. 10,1 г вещества примера 3 пропитывают до начальной влажности 0,53 г октилтриэтоксисилана, растворенного в 13,25 г толуола в качестве растворителя. Образец затем подвергают воздушной сушке в вытяжном шкафу в течение 2 ч, сушат при 110 С в течение 1 ч и затем прокаливают в течение 4 ч при 150 С. Адсорбцию протеинов в 0,1 М NaCl определяют следующим образом. Поскольку вещества примеров 4 и 5 являются гидрофобными, процедура увлажнения является необходимой для обеспечения хорошего контакта с протеиновым раствором. В пробирку Эппендорфа загружают 0,014 г вещества примера 3 в качестве контрольного образца. Затем добавляют 1 мл этанола, перемешивают и центрифугируют с удалением надосадочной жидкости. Добавляют 0,5 мл этанола и 0,5 мл деионизованной воды, перемешивают и центрифугируют с удалением надосадочной жидкости. Добавляют 0,25 мл этанола и 0,75 мл деионизованной воды, перемешивают и центрифугируют с удалением надосадочной жидкости. Добавляют 1 мл деионизованной воды, перемешивают и центрифугируют с удалением надосадочной жидкости. Промывку деионизованной водой повторяют более четырех раз. Добавляют (1 мл 0,1 М NaCl + 0,02M PBS с рН=7,4), перемешивают и центрифугируют с удалением надосадочной жидкости. Промывку с использованием (0,1 М NaCl + 0,02 М PBS с рН=7,4) повторяют более четырех раз. Две ампулы маркера изоэлектрической фокусировки Sigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018) растворяют в 500 мкл (0,1 МNaCl + 0,02 М PBS с рН=7,4). Растворенный IEF Mix загружают в пробирку Эппендорфа. В другую пробирку Эппендорфа загружают 0,014 г вещества примера 4. С веществом примера 4 осуществляют такую же процедуру смачивания и введения протеина, как в примере 3. В третью пробирку Эппендорфа загружают 0,014 г вещества примера 5. С веществом примера 5 осуществляют такую же процедуру смачивания и введения протеина, как в примере 3. Одну ампулу маркера изоэлектрической фокусировки Sigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018) растворяют в 250 мкл (0,1 М NaCl + 0,02 М PBS с рН=7,4). Это является стандартной необработанной протеиновой смесью. Все образцы перемешивают непрерывно в течение 1 ч. Образцы подвергают гелевому электрофорезу с 3-9 изоэлектрической фокусировкой на установке Pharmacia PhastGel. Результаты показаны на фиг. 3. Как видно на фиг. 3, хотя поверхностный заряд диоксида кремния "экранирован" растворенной солью (0,1 М NaCl), и связывания протеинов не происходит, гидрофобное взаимодействие метильных и,особенно, октильных групп является очень сильным, и много полос отсутствует. Указанные данные ясно показывают, что при вышеуказанных условиях гидрофобная поверхностная композиция может привести к неселективному связыванию. Примеры 6, 7 и 8. Пример изобретения. Данные примеры показывают преимущество использования R10-группы согласно данному изобретению для снижения неселективного связывания протеинов с поверхностью диоксида кремния. Вещество примера 6 является таким же, как вещество примера 3, за исключением того, что оно было активировано в течение 2 ч при 200 С. Вещество примера 7 является промежуточной поверхностной композицией с поверхностью диоксида кремния, имеющей присоединенные Si-R-группы, где R представляет собой ацетоксиметил. Вещество примера 8 является примером промежуточной поверхностной композиции настоящего изобретения с поверхностью диоксида кремния, имеющей присоединенные Si-R10-группы, где R10 представляет собой метилгидрокси. Также показано преимущество вещества примера 8 с растворителями с высокой и низкой ионной силой. Вещество примера 7 получают следующим образом. В 250 мл круглодонную колбу загружают 50 мл толуола и 20,42 г ацетоксиметилтриэтоксисилана. К раствору толуол/ацетоксиметилтриэтоксисилана добавляют 15,05 г вещества примера 6. В течение 5 мин продувают азотом для удаления воздуха и продолжают до полного прохождения реакции. Образец кипятят с обратным холодильником и перемешивают при 110 С в течение 16 ч. Образец затем фильтруют и промывают 3 раза 50 мл толуола. Образец повторно суспендируют в 50 мл толуола, фильтруют и промывают 5 раз 50 мл толуола. Образец затем повторно суспендируют в 50 мл толуола, затем фильтруют и промывают 5 раз 50 мл толуола. Его сушат при 110 С и затем прокаливают в течение 4 ч при 150 С.- 13006059 Вещество примера 8 получают следующим образом. В 250 мл круглодонную колбу загружают 10 г вещества примера 7 и 100 мл 0,01 М H2SO4. В течение 5 мин продувают азотом для удаления воздуха и продолжают до полного прохождения реакции. Образец кипятят с обратным холодильником и перемешивают при 100 С в течение 18 ч. Образец затем фильтруют и промывают 2 раза 100 мл деионизованной воды с температурой 80 С. Образец повторно суспендируют в 100 мл деионизованной воды с температурой 80 С, фильтруют и промывают 2 раза 100 мл деионизованной воды с температурой 80 С, сушат при 110 С и затем прокаливают в течение 4 ч при 150 С. В пробирку Эппендорфа загружают 0,007 г вещества примера 7. Одну ампулу маркера изоэлектрической фокусировки Sigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018) растворяют в 250 мкл (0,14 М NaCl+0,02M PBS с рН=7,4) и затем загружают в пробирку Эппендорфа. Образец маркируют как высокая соль примера 7. Во вторую пробирку Эппендорфа загружают 0,007 г вещества примера 8. Одну ампулу маркера изоэлектрической фокусировки Sigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018) растворяют в 250 мкл (0,14 МNaCl + 0,02 M PBS с рН=7,4) и затем загружают в пробирку Эппендорфа. Данный образец маркируют как высокая соль примера 8. В третью пробирку Эппендорфа загружают 0,007 г вещества примера 7. Одну ампулу маркера изоэлектрической фокусировки Sigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018) растворяют в 250 мкл 0,02 М PBS с рН=7,4 и затем загружают в пробирку Эппендорфа. Данный образец маркируют как низкая соль примера 7. В четвертую пробирку Эппендорфа загружают 0,007 г вещества примера 8. Одну ампулу маркера изоэлектрической фокусировки Sigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018) растворяют в 250 мкл 0,02 МPBS с рН=7,4 и затем загружают в пробирку Эппендорфа. Образец маркируют как низкая соль примера 8. В пятую пробирку Эппендорфа загружают одну ампулу маркера изоэлектрической фокусировкиSigma IEF Mix 3,6-9,3 (каталог 1-3018), которую растворяют в 250 мкл деионизованной воды и затем загружают в пробирку Эппендорфа. Образец маркируют как эталон протеиновой смеси. Все образцы перемешивают непрерывно в течение 1 ч. Все образцы затем подвергают гелевому электрофорезу с 3-9 изоэлектрической фокусировкой на установке Pharmacia PhastGel. Результаты показаны на фиг. 4. Результаты данного эксперимента ясно показывают преимущество вещества примера 8, одного из вариантов воплощения данного изобретения, в подавлении неселективной адсорбции к поверхности диоксида кремния тем, что все протеиновые полосы присутствуют (см. полосы 3 и 7) в условиях как "высокой соли", так и "низкой соли". Определение характеристик вещества примера 8. Характеристики поверхностной композиции данного изобретения определяют с помощью анализов,описанных ниже. На фиг. 5 представлен диффузный отражательный инфракрасный спектр вещества примера 8,имеющего поверхностную композицию, содержащую -СН 2 ОН-группы, в интервале 1400-4000 см-1. Инфракрасные данные получают на установке Nicolet Magna 550 с использованием диффузной отражательной приставки Spectra-Tech. Образцы разбавляют 1:20 в KBr с 512 развертками, собранными при разрешении 4 см-1. Пики при 2937 и 2897 см-1 четко показывают присутствие -СН 2-групп. Полосы для -ОНрезонансов погружены под широкий пик при 3483 см-1. Для сравнения на фиг. 6 представлен спектр вещества примера 7 с поверхностной композицией, содержащей -СН 2 ОСОСН 3-группы. Новые резонансы имеют место при 1726, 1421 и 1374 см-1 и являются характерными резонансами, связанными с ацетоксигруппами. На фиг. 7 представлен MAS Si29-ЯМР-спектр вещества примера 8. Одноимпульсный 29Si-ЯМРэксперимент проводят на установке Chemagnetics CMX 200, работающей на резонансной частоте 39,76 МГц. Образец помещают в 14 мм карандашеобразный ротор. Длительность импульса 4 мкс, соответствующую импульсу 22 степени, используют вместе с релаксационным запаздыванием 60 с. Четкий резонанс при -62 ч./млн идентифицируют как O3Si-CHx-, см. Vicic D. and Maciel J., Am.Chem. Soc. 105 (1983), pp. 3767-3776. На фиг. 8 представлен фотоэлектронный рентгеновский спектр вещества примера 8. Образец крепят на стойке для образцов двухсторонней лентой и проводят 2 ч углеродное, кислородное и кремниевое сканирование. Спектр имеет два пика, которые идентифицируют как примесь С (284,7 э-В) и С-атомP.E. and Bomben K.D., Perkin-Elmer Corp., Eden Prairie, MN, 1992. Для сравнения рентгеновский спектр вещества примера 7 представлен на фиг. 9. В данном случае также наблюдается пик при 289 э-В, связанный с карбоксильным углеродом. Указанные исследования показывают, что поверхностная композиция примера 8, один из вариантов воплощения данного изобретения, содержит метилгидроксигруппы-СН 2 ОН, например, R10, как определено здесь. Концентрация R10-групп (-СН 2 ОН) на продукте примера 8 составляет 2,01 группа/нм 2 и рассчитана по площади поверхности носителя на основе диоксида кремния (72 м 2/г) и содержании углерода (1,907%) конечного продукта. Площадь поверхности определяют с использованием метода БЭТ, и содержание углерода (мас.%) определяют с использованием установки LECO Carbon Analyzer, модель С-144. Пример 9. Присоединение связующего компонента и показ сниженного неселективного связывания при использовании изобретения. В 2000 мл круглодонную колбу загружают 842 г толуола и 3,11 г 3-аминопропилтриэтоксисилана. Затем в круглодонную колбу загружают 200 г диоксида кремния Grace Davison XWP 500 , прокаленный в течение 2 ч при 200 С, с последующим добавлением 15 "кипелок". Круглодонную колбу устанавливают в нагревательный кожух и присоединяют холодильник. Нагревательный кожух присоединяют к верху планетарного миксера, работающего при скорости 115 об./мин. Азот пропускают через круглодонную колбу и холодильник для удаления воздуха в процессе всей реакции. Образец нагревают до кипения(110 С) в течение 4 ч. Образец фильтруют и промывают толуолом 2200 мл, сушат при 115 С и затем прокаливают 2 ч при 150 С. Данный образец маркируют как "промежуточный продукт А". Концентрацию полученных -C3H6NH2 групп рассчитывают равной 0,54 на основе площади поверхности (по методу БЭТ) носителя (88 м 2/г), содержания углерода (LECO) промежуточного продукта (0,321%) и содержания азота (0,11%). Содержание азота (в мас.%) определяют на установке Carlo Erba NA 1500 Analyzer с использованием методик на основе модифицированного метода Думаса, использующего кислородсодержащую атмосферу и теплопроводящее определение. См. ASTM D5373 (для угля) и ASTM 5291. 800 мл 1 М NaCl смешивают с промежуточным продуктом А в химическом стакане и перемешивают магнитной мешалкой. Начальный рН составляет 4,79, добавляют 1 М НСl по каплям до тех пор, пока рН не станет 2. Выдерживают рН 2 в течение 15 мин. Образец фильтруют и промывают деионизованной водой 5200 мл, сушат при 115 С и затем прокаливают 2 ч при 200 С. Данный образец маркируруют как"промежуточный продукт В". В круглодонной колбе смешивают 680 г толуола и 177,25 г ацетоксиметилтриэтоксисилана с промежуточным продуктом В. Затем в круглодонную колбу помещают 15 "кипелок", колбу помещают в нагревательный кожух и присоединяют холодильник. Нагревательный кожух присоединяют к верху планетарного миксера, работающего при скорости 115 об./мин. Азот пропускают через круглодонную колбу и холодильник для удаления воздуха в процессе всей реакции. Образец нагревают до кипения (110 С) в течение 24 ч, фильтруют, промывают толуолом 3200 мл, сушат при 115 С и затем прокаливают 2 ч при 150 С. Данный образец маркируют как "промежуточный продукт С". В круглодонной колбе смешивают 900 мл диоксана и 100 мл 0,1 М H2SO4 с промежуточным продуктом С. Затем в круглодонную колбу помещают 15 "кипелок", колбу помещают в нагревательный кожух и присоединяют холодильник. Нагревательный кожух присоединяют к верху планетарного миксера,работающего при скорости 115 об./мин. Азот пропускают через круглодонную колбу и холодильник для удаления воздуха в процессе всей реакции. Образец нагревают до кипения (100 С) в течение 4 ч,фильтруют, промывают толуолом 2200 мл, сушат при 115 С и затем прокаливают 2 ч при 150 С. Данный образец маркируют как "промежуточный продукт D". Концентрация R10-групп (-СН 2 ОН) данного продукта составляет 5,65 и была определена посредством расчета содержания углерода промежуточного продукта D и последующего вычитания количества углерода, относящегося к C3H6NH2-группам, и последующего учета расчета, сделанного в примере 8. После выполнения указанного расчетная концентрация C3H6NH2-групп составляет 0,39, что меньше концентрации, рассчитанной по данным для промежуточного продукта А перед проведением химической обработки с присоединением R10-группы. Не придерживаясь определенной теории, предполагается, что незначительное изменение содержания водорода(0,11 против 0,08) обусловлено стандартным отклонением или возможно благодаря незначительному выщелачиванию C3H6NH2-групп при создании R10-групп. 20,75 г промежуточного продукта D и 400 мл соединительного буфера (0,1 М Na2PO4+0,15 M NaCl;pH=7,0) смешивают в 1000 мл химическом стакане и перемешивают в течение 5 мин. Образец фильтруют с образованием влажного осадка на фильтре, который помещают в 1000 мл химический стакан и затем в химический стакан добавляют 587,66 г 50 мас.% глутарового альдегида и 5,91 г NaCNBH3. Образец перемешивают в течение 4 ч, фильтруют, промывают 400 мл соединительного буфера и повторно суспендируют в 400 мл соединительного буфера с получением нового образца, который фильтруют, промывают 400 мл соединительного буфера и повторно суспендируют в 400 мл соединительного буфера более 2 раз. Повторно промытый и повторно суспендированный образец фильтруют и затем промывают 400 мл соединительного буфера. Данный образец маркируют как "промежуточный продукт Е".- 15006059 75,44 г соединительного буфера и 24,56 г протеина А от Repligen при концентрации 50 г протеина А на 1 л загружают в 250 мл круглодонную колбу. 2,52 г NaCNBH3 и промежуточный продукт Е загружают в колбу и перемешивают миксером в течение 4 ч. Образец фильтруют и промывают соединительным буфером 4100 мл. Затем 75,44 соединительного буфера, 2,52 г NaCNBH3 и 0,44 г этаноламина загружают в 250 мл круглодонную колбу и затем перемешивают миксером в течение 4 ч. Образец фильтруют и промывают соединительным буфером 4100 мл. Образец помещают в 20% этанол и хранят при 4 С. Данный образец маркируют как "продукт примера 9". Анализом LECO Carbon определяют, что продукт примера 9 представляет собой 34,67 мг протеина А на 1 г диоксида кремния. Аффинную колонку с внутренним диаметром 0,662 см, наполненную диоксидом кремния, имеющим непосредственно присоединенный -Si-СН 2 ОН, сначала уравновешивают 20 мМ фосфатным буфером с рН 7,4. 5 мл образца питания 0,5 мг/мл поликлонального IgG кролика в надосадочной жидкости из питательной среды Teredinobacter turnirae загружают в колонку. Афинную колонку затем промывают фосфатным буфером до тех пор, пока УФ-абсорбция при 280 нм не восстановится до исходной. IgG вымывают из аффинной колонки 0,1 М уксусной кислотой с рН 3,0 при скорости потока 1 мл/мин (см. узкий пик на фиг. 9). На фиг. 10 представлена хроматограмма загрузки, промывки и элюирования из аффинной колонки при контроле абсорбции при 280 нм. 100 мкл очищенного IgG из элюента аффинной очистки, показанной на фиг. 10, вводят в колонку вытеснительной хроматографии по размеру, которую элюируют элюирующим буфером 0,1 М Na2SO4 и 0,05 М NaH2PO4 с рН 5 при скорости потока 1 мл/мин. А 280 профиль элюента из колонки вытеснительной хроматографии по размеру показан на фиг. 11, где показан единственный пик IgG с очень небольшой примесью клеточной культуры. При сравнении на фиг. 12 представлена хроматограмма вытеснительной хроматографии по размеру при использовании одинаковых условий исходного поликлонального IgG кролика, закрепленного в клеточной культуре. При сравнении фиг. 11 и 12 ясно, что IgG, очищенный от клеточной культуры с использованием продукта примера 9 (фиг. 11), является более чистым, чем исходный IgG (фиг. 12). Таким образом, фиг. 11 и 12 показывают, что неселективное связывание среды диоксида кремния минимизируется твердым веществом данного изобретения. Библиография[0128] Weetall, "Covalent Coupling Methods for Inorganic Support Materials", in Methods in Enzymology, vol. XLIV, edited by K. Mosbach, pp. 134-148, 1976. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Твердое вещество, содержащее неорганическое вещество и группу R10, расположенную по меньшей мере на одной поверхности указанного неорганического вещества, в котором указанным неорганическим веществом является неорганический оксид, и указанная R10-группа выбрана из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН). 2. Твердое вещество по п.1, в котором R10 присоединена по меньшей мере к одной поверхности указанного неорганического вещества через бивалентную группу или атом. 3. Твердое вещество по п.1, в котором R10 является группой, выбранной из группы, состоящей из-СН 2 ОН, -СН(ОН)СН 3 и -СН 2 СН 2 ОН. 4. Твердое вещество по п.1, в котором R10 представляет собой -СН 2 ОН. 5. Твердое вещество по п.1, в котором указанным неорганическим веществом является неорганический оксид металла, силикат или алюмосиликат. 6. Твердое вещество по п.1, в котором неорганическое вещество является магнитночувствительным. 7. Твердое вещество по п.5, в котором неорганическим оксидом металла является диоксид кремния,оксид алюминия, диоксид кремния-оксид алюминия, диоксид циркония, цирконат, диоксид титана, стекло с регулируемой пористостью или их смеси.- 16006059 8. Твердое вещество по п.5, в котором неорганическим оксидом металла является диоксид кремния хроматографического сорта. 9. Твердое вещество по п.5, в котором неорганическим оксидом металла является силикагель. 10. Твердое вещество, содержащее (i) неорганическое вещество, (ii) группу R10, расположенную по меньшей мере на одной поверхности указанного неорганического вещества, и (iii) по меньшей мере один связующий компонент, способный связывать аналит, в котором указанная R10 выбрана из -СН 2 ОН,-СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН). 11. Твердое вещество по п.10, в котором по меньшей мере один связующий компонент выбран из группы, состоящей из лиганда, протеина, пептида, антигена и нуклеиновой кислоты. 12. Твердое вещество по п.10, в котором указанный по меньшей мере один связующий компонент присоединен к органическому веществу по меньшей мере через один мостик. 13. Твердое вещество по п.10, в котором указанный по меньшей мере один связующий компонент присоединен к указанному неорганическому веществу по меньшей мере через один мостик, в котором указанным по меньшей мере одним связующим компонентом является рецептор, антитело, антиген, ДНК или РНК. 14. Твердое вещество по п.10, в котором указанным по меньшей мере одним мостиком является необязательно замещенная бивалентная химическая группа. 15. Твердое вещество по п.10, содержащее примерно 1-10 R10-групп на 1 нм 2 твердого вещества. 16. Твердое вещество по п.15, содержащее от 0,04 до примерно 4 связующих компонентов на 1 нм 2 твердого вещества. 17. Твердое вещество по п.16, в котором указанным неорганическим веществом является диоксид кремния и R10 представляет собой -СН 2 ОН. 18. Твердое вещество по п.17, в котором указанным неорганическим веществом является силикагель. 19. Твердое вещество по п.17, в котором указанным неорганическим веществом является диоксид кремния хроматографического сорта. 20. Твердое вещество по п.14, в котором необязательно замещенной химической группой является гидрокарбил, содержащий n -R-групп, где n обозначает количество R-групп, и n представляет собой целое число не менее 2, причем (n-1) -R-групп, необязательно, замещено -О-, -S-, карбонилом, тиокарбонилом, -ОС(О)-, -С(О)О, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(S)-, -C(S)O-, -C(S)S-, -SC(S)-, -N(R4)-, -N(R4)C(O)-,-C(O)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-, -C(R5)=NO-, -ON=C(R5)-, -P-, -P(OH)O-, ариленом, замещенным ариленом, циклоалкиленом, замещенным циклоалкиленом, циклоалкениленом, замещенным циклоалкениленом, бивалентным гетероциклилом или замещенным гетероциклилом, где R4 и R5 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил,замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил. 21. Твердое вещество по п.12, в котором указанным по меньшей мере одним мостиком является бивалентная, необязательно замещенная, химическая группа длиной от примерно 1 до примерно 30 атомов,измеренной от связующего компонента до неорганического вещества, в котором химическая группа содержит по меньшей мере одну -R-группу, причем -R-группа является представителем, выбранным из группы, состоящей из -СН 2-, -C(R1)H-, -С(R2)=C(R3)- и -СС-, где R1, R2 и R3 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил, замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил, указанная -R-группа необязательно замещена -О-, -S-, карбонилом, тиокарбонилом, -ОС(О)-, -С(О)О, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(S)-,-C(S)O-, -C(S)S-, -SC(S)-, -N(R4)-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-, -C(R5)=NO-,-ON=C(R5)-, -P-, -P(OH)O-, ариленом, замещенным ариленом, циклоалкиленом, замещенным циклоалкиленом, циклоалкениленом, замещенным циклоалкениленом, бивалентным гетероциклилом или замещенным гетероциклилом, где R4 и R5 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил,алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил, замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил,аралкил или замещенный аралкил. 22. Твердое вещество по п.12, в котором указанный по меньшей мере один мостик присоединен к указанному по меньшей мере одному связующему компоненту и неорганическому веществу независимо через простой эфир, простой тиоэфир, сложный эфир, сложный тиоэфир, карбонат, карбамат, фосфат,фосфонат, сложный фосфоэфир, фосфорамидат, амин, амид, имид, мочевину, тиомочевину, сульфонамид, сульфоксид, сульфон, дисульфид, оксим, О-ацилоксим, О-карбамоилоксим, О-ацилоксиалкилоксим,O-ацилоксиалкилоксиоксим, О-оксиминофосфат, О-оксиминофосфонат, О-оксиминофосфорамидат или С=С-связь. 23. Твердое вещество по п.12, в котором указанный по меньшей мере один мостик образован из цианогенбромида, сложного N-гидроксисукцинимидэфира, карбонилдиимидазола, гидроаминированием,2-фтор-1-метилпиридинийтолуол-4-сульфонат-активированием, опосредованным 1-этил-3-(3-диметил- 17006059 пропил)карбодиимидом образованием амидной связи, тозилхлорида, трезилхлорида, дивинилсульфона,азлактона, цианурхлорида, иодоацетил- или бромацетил-активированием, малеимида, пиридилдисульфида, эпоксисоединения, 2-иминотиолан-5,5-дитио-бис-(2-нитробензойной кислоты), гидразида, диазония или конденсацией Манниха. 24. Способ выделения аналита, смешанного по меньшей мере с одним другим компонентом в смеси, который включает(1) контактирование твердого вещества по п.10 с указанной смесью, в которой указанный по меньшей мере один связующий компонент имеет селективную аффинность к указанному аналиту;(2) обеспечение связывания указанного аналита с указанным по меньшей мере одним связующим компонентом;(3) удаление указанного по меньшей мере одного другого компонента из твердого вещества, имеющего указанный связанный с ним аналит;(4) извлечение указанного твердого вещества; и(5) отделение аналита от твердого вещества. 25. Способ по п.24, в котором указанный по меньшей мере один другой компонент удаляют на стадии (3) промывкой твердого вещества жидкостью с получением промывки и удалением промывки, в котором указанный аналит удаляют на стадии (5) помещением элюанта на твердое вещество и собиранием элюанта. 26. Способ по п.24, в котором указанное твердое вещество содержит от примерно 1 до примерно 10 групп R10 на 1 нм 2. 27. Способ по п.26, в котором указанное твердое вещество содержит от примерно 0,04 до примерно 4 связующих компонентов на 1 нм 2 твердого вещества. 28. Способ по п.24, в котором указанным неорганическим веществом является неорганический оксид металла, силикат металла или алюмосиликат. 29. Способ по п.28, в котором неорганическое вещество является магнитночувствительным. 30. Способ по п.28, в котором неорганическим оксидом металла является диоксид кремния, оксид алюминия, диоксид кремния-оксид алюминия, диоксид циркония, цирконат, диоксид титана, стекло с регулируемой пористостью или их смеси. 31. Способ по п.28, в котором неорганическим оксидом металла является диоксид кремния хроматографического сорта. 32. Способ по п.28, в котором неорганическим оксидом металла является силикагель. 33. Способ по п.24, в котором указанным неорганическим веществом является диоксид кремния, иR10 представляет собой -СН 2 ОН. 34. Способ по п.33, в котором указанным диоксидом кремния является силикагель. 35. Способ по п.33, в котором указанным диоксидом кремния является диоксид кремния хроматографического сорта. 36. Способ по п.24, в котором указанным связующим компонентом является биотин, а указанным аналитом является авидин, стрептавидин, вещество, присоединенное к авидину, или вещество, присоединенное к стрептавидину. 37. Способ по п.24, в котором указанным связующим компонентом является авидин или стрептавидин, а указанный аналит является биотином или биотинилированным аналитом. 38. Способ снижения неселективного связывания примеси с твердым веществом, содержащим неорганическое вещество, в котором неорганическое вещество содержит по меньшей мере одну функциональную группу, с которой имеет место неселективное связывание, или которая обуславливает неселективное связывание, в котором указанным неорганическим веществом является неорганический оксид, и указанный способ включает(1) обеспечение указанного твердого вещества;(2) обеспечение взаимодействия по меньшей мере одной функциональной группы неорганического вещества с реагентом с созданием группы R10 по меньшей мере на одной поверхности неорганического вещества, где R10 выбрана из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН,-С(ОН)2 СН 3, -СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН), и R10 присутствует на поверхности указанного неорганического вещества в достаточных количествах, так что, когда неорганическое вещество контактирует со смесью, содержащей примесь, неселективное связывание указанной примеси с указанным твердым веществом снижается. 39. Способ по п.38, в котором R10 присоединяется к указанному неорганическому веществу через группу или атом, которые не присутствуют в композиции исходного неорганического вещества. 40. Способ по п.38, в котором R10 является группой, выбранной из группы, состоящей из -СН 2 ОН,-СН(ОН)СН 3 и -СН 2 СН 2 ОН. 41. Способ по п.40, в котором R10 представляет -СН 2 ОН. 42. Способ по п.38, в котором указанным неорганическим веществом является неорганический оксид металла. 43. Способ по п.42, в котором неорганический оксид металла является магнитночувствительным.- 18006059 44. Способ по п.42, в котором неорганическим оксидом металла является диоксид кремния, оксид алюминия, диоксид кремния-оксид алюминия, диоксид циркония, цирконат, диоксид титана, стекло с регулируемой пористостью, и функциональные группы на нем содержат гидроксил. 45. Способ по п.42, в котором указанным неорганическим оксидом металла является диоксид кремния хроматографического сорта. 46. Способ по п.42, в котором указанным неорганическим оксидом металла является силикагель. 47. Твердое вещество, содержащее (i) неорганическое вещество, (ii) группу R10, расположенную по меньшей мере на одной поверхности указанного неорганического вещества, и (iii) по меньшей мере один мостик, в котором указанным неорганическим веществом является неорганический оксид, и указаннаяR10 выбрана из группы, состоящей из -СН 2 ОН, -СН(ОН)2, -СН(ОН)СН 3, -СН 2 СН 2 ОН, -С(ОН)2 СН 3,-СН 2 СН(ОН)2 и -СН(ОН)СН 2(ОН). 48. Твердое вещество по п.47, в котором по меньшей мере одним мостиком является необязательно замещенная бивалентная химическая группа. 49. Твердое вещество по п.48, в котором необязательно замещенной химической группой является гидрокарбил, содержащий n -R-групп, где n обозначает количество R-групп, и n представляет собой целое число не менее 2, причем (n-1) -R-групп, необязательно, замещено -O-, -S-, карбонилом, тиокарбонилом, -ОС(О)-, -С(О)О, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(S)-, -C(S)O-, -C(S)S-, -SC(S)-, -N(R4)-, -N(R4)C(O)-,-C(O)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-, - C(R5)=NO-, -ОN=C(R5)-, -P-, -P(OH)O-, ариленом, замещенным ариленом, циклоалкиленом, замещенным циклоалкиленом, циклоалкениленом, замещенным циклоалкениленом, бивалентным гетероциклилом или замещенным гетероциклилом, где R4 и R5 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил,замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил. 50. Твердое вещество по п.47, в котором указанным по меньшей мере одним мостиком является бивалентная, необязательно замещенная, химическая группа длиной от примерно 1 до примерно 30 атомов,измеренной от конца указанной группы до неорганического вещества, в котором химическая группа содержит по меньшей мере одну -R-группу, причем указанная -R-группа является представителем, выбранным из группы, состоящей из -СН 2-, -C(R1)H-, -C(R2)=C(R3)- и -СС-, где R1, R2 и R3 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил, замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил, указанная-R-группа необязательно замещена -O-, -S-, карбонилом, тиокарбонилом, -ОС(О)-, -С(О)О, -SC(O)-,-C(O)S-, -OC(S)-, -C(S)O-, -C(S)S-, -SC(S)-, -N(R4)-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-,-C(R5)=NO-, -ON=C(R5)-, -P-, -P(OH)O-, ариленом, замещенным ариленом, циклоалкиленом, замещенным циклоалкиленом, циклоалкениленом, замещенным циклоалкениленом, бивалентным гетероциклилом или замещенным гетероциклилом, где R4 и R5 независимо представляют собой Н, алкил, замещенный алкил,циклоалкил, замещенный циклоалкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкинил, замещенный циклоалкинил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил. 51. Твердое вещество по п.47, в котором указанный по меньшей мере один мостик присоединен к неорганическому веществу через простой эфир, простой тиоэфир, сложный эфир, сложный тиоэфир,карбонат, карбамат, фосфат, фосфонат, сложный фосфоэфир, фосфорамидат, амин, амид, имид, мочевину, тиомочевину, сульфонамид, сульфоксид, сульфон, дисульфид, оксим, О-ацилоксим, О-карбамоилоксим, О-ацилоксиалкилоксим, O-ацилоксиалкилоксиоксим, О-оксиминофосфат, О-оксиминофосфонат,О-оксиминофосфорамидат или С=С-связь. 52. Твердое вещество по п.47, в котором указанный по меньшей мере один мостик образован из цианогенбромида, сложного N-гидроксисукцинимидэфира, карбонилдиимидазола, гидроаминированием,2-фтор-1-метилпиридинийтолуол-4-сульфонат-активированием, опосредованным 1-этил-3-(3-диметилпропил)карбодиимидом образованием амидной связи, тозилхлорида, трезилхлорида, дивинилсульфона,азлактона, цианурхлорида, иодоацетил- или бромацетил-активированием, малеимида, пиридилдисульфида, эпоксисоединения, 2-иминотиолан-5,5-дитио-бис-(2-нитробензойной кислоты), гидразида, диазония или конденсацией Манниха. 53. Твердое вещество по п.47, содержащее от примерно 1 до примерно 10 групп R10 на 1 нм 2 твердого вещества. 54. Твердое вещество по п.53, в котором указанным неорганическим веществом является диоксид кремния, и R10 представляет собой -СН 2 ОН.