Химически модифицированный налоксон

Изобретение относится к низкомолекулярному лекарственному веществу налоксон, химически модифицированному путем ковалентного связывания с водорастворимым олигомером,представляющим собой полиэтиленгликоль. Конъюгат согласно изобретению при введении любым из ряда способов демонстрирует пониженную скорость проникновения через биологические мембраны по сравнению со скоростью проникновения через биологические мембраны низкомолекулярных лекарственных веществ, не связанных с водорастворимым олигомером. Область техники Данное изобретение предлагает химически модифицированные молекулы налоксона и соответствующие способы, обладающие определенными преимуществами перед малыми молекулами, не подвергнутыми химической модификации. Химически модифицированные молекулы налоксона в соответствии с настоящим изобретением относятся и/или находят применение в сферах исследования лекарственных препаратов, фармакотерапии, физиологии, органической химии, химии полимеров и других. Уровень техники В последние годы использование белков в качестве активных агентов значительно расширилось благодаря нескольким факторам: усовершенствование технологий идентификации, выделения, очистки и/или рекомбинантного продуцирования; углубление понимания роли белков in vivo благодаря появлению протеономики; улучшение композиций, средств доставки и подходов к химической модификации белков, усиливающей их фармакокинетические или фармакодинамические свойства. Говоря о новых подходах к химической модификации белков, следует отметить применение ковалентного связывания полимеров, таких как поли(этиленгликоль) или ПЭГ, с белком с целью улучшения его показателя полужизни в циркуляции, уменьшения иммуногенности и/или сокращения протеолитической деградации. Такой способ ковалентного связывания ПЭГ с белком или другим активным агентом широко известен как ПЭГилирование. Белки для инъекции, которые были модифицированы ковалентным связыванием с ПЭГ, обычно подвергаются связыванию с относительно высокомолекулярными ПЭГполимерами, обладающими молекулярной массой в диапазоне от около 5000 до около 40000 Да. В то время как модификация относительно больших белков с целью усовершенствования их фармацевтических свойств является, возможно, одним из наиболее распространенных примеров применения ПЭГилирования, эта технология также использовалась, хотя и в ограниченной степени, для повышения биодоступности и облегчения формулирования низкомолекулярных лекарственных веществ, имеющих низкий уровень водорастворимости. К примеру, водорастворимые полимеры, такие как ПЭГ, ковалентно связывались с артилиновой кислотой, чтобы улучшить ее растворимость в воде (Патент США 6461603). Подобным образом, ПЭГ ковалентно связывали с соединениями на основе триазина, такими как тримеламол, для улучшения их растворимости в воде и повышения их химической стабильности(WO 02/043772). Ковалентное связывание ПЭГ с бисиндолилмалеимидами использовалось для повышения низкой биодоступности подобных соединений, вызванной их малой растворимостью в воде (WO 03/037384). Цепочки ПЭГ, связанные с низкомолекулярными лекарственными средствами с целью повышения их водорастворимости, обычно имеют размер от примерно 500 до примерно 5000 Да в зависимости от молекулярной массы низкомолекулярных лекарственных веществ. Активный агент может вводиться любым из множества способов, включая инъекционное введение,пероральное, ингаляционное, назальное и трансдермальное. Одним из наиболее предпочтительных способов введения благодаря его простоте является пероральный. Пероральный прием, наиболее часто применимый для низкомолекулярных препаратов (т.е. препаратов не на основе белка), удобен и часто приводит к более тщательному соблюдению режима и схемы лечения со стороны пациентов по сравнению с другими способами введения. К сожалению, многие низкомолекулярные препараты обладают такими качествами (например, низким уровнем биодоступности при пероральном введении), которые делают пероральный прием непрактичным. Часто качества низкомолекулярных лекарственных веществ, необходимые для растворения и селективной диффузии через различные биологические мембраны, непосредственно вступают в конфликт с качествами, необходимыми для оптимального целевого сродства и введения. Первичные биологические мембраны, которые ограничивают проникновение низкомолекулярных лекарственных веществ в определенные органы или ткани, связаны с определенными физиологическими барьерами, например гематоэнцефалическим барьером, гематоплацентарным барьером и гематотестикулярным барьером. Гематоэнцефалический барьер защищает мозг от большинства токсичных веществ. Специализированные клетки - астроциты - имеют множество ответвлений, формирующих барьер между капиллярным эндотелием и нейронами мозга. Липиды клеточных оболочек астроцитов и очень плотные соединения между соседними эндотелиальными клетками ограничивают прохождение водорастворимых молекул. Хотя гематоэнцефалический барьер обеспечивает прохождение необходимых питательных веществ, он эффективен для предупреждения проникновения некоторых инородных субстанций и может ограничить уровень попадания других веществ в ткани мозга. Плацентарный барьер защищает развивающийся и уязвимый плод от многих токсичных веществ,которые могут присутствовать в материнском кровотоке. Этот барьер состоит из нескольких клеточных слоев между материнскими и фетальными кровеносными сосудами в плаценте. Липиды в клеточных мембранах ограничивают диффузию водорастворимых токсинов. Другие вещества, такие как питательные вещества, газы и продукты обмена веществ развивающегося плода, могут, тем не менее, преодолевать плацентарный барьер. Как и в случае с гематоэнцефалическим барьером, плацентарный барьер не полностью непроницаем, но эффективно замедляет диффузию большинства токсинов от матери к плоду в процессе развития. Для большинства препаратов, принимаемых перорально, проникновение через определенные био-1 018427 логические мембраны, такие как гематоэнцефалический барьер и гематоплацентарный барьер, является крайне нежелательным и может привести к серьезным побочным эффектам, таким как нейротоксичность, бессонница, головная боль, спутанность сознания, ночные кошмары и тератогенность. Этих побочных эффектов, в тяжелых случаях, достаточно, чтобы прекратить разработку лекарственных препаратов, демонстрирующих подобное нежелательное накопление в мозге или плаценте. Таким образом, существует потребность в новых способах эффективной доставки препаратов, в частности низкомолекулярных, в организм пациента, одновременно снижая опасные, а нередко и токсичные побочные эффекты низкомолекулярных лекарственных веществ. Особенно, существует потребность в усовершенствовании способов доставки лекарственных веществ, обладающих оптимальным балансом между хорошей биодоступностью при пероральном введении, биологической активностью и фармакокинетическим профилем. Данное изобретение отвечает этому и другим требованиям. Сущность изобретения Настоящее изобретение основывается на разработке и исследовании препаратов с химически модифицированными молекулами опиоидного антагониста налоксона, обладающих уникальными характеристиками (такие как более низкий уровень проникновения через биологические мембраны), а также на способах приготовления и введения таких соединений. В одном из аспектов объектом изобретения является соединение, представляющее собой конъюгат,состоящий из части, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества, ковалентно связанной при помощи стабильной связи с водорастворимым олигомером. Олигомер представляет собой полиэтиленгликоль. Преимущество состоит в том, что полиэтиленгликоль, связанный с низкомолекулярным лекарственным веществом, эффективно снижает способность полученного конъюгата преодолевать определенные биологические мембраны, такие как связанные с гематоэнцефалитическим или гематоплацентарным барьером. В одном или нескольких вариантах осуществления изобретения предлагается конъюгат, который демонстрирует пониженную скорость преодоления биологических мембран по сравнению со скоростью преодоления биологических мембран низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с полиэтиленгликолем. В одном варианте осуществления изобретение соединения выбрано из группы, включающей 6-CH3-(OCH2CH2)5-O-налоксол; 6-CH3-(OCH2CH2)6-O-налоксол; 6-CH3-(OCH2CH2)7-O-налоксол; 6-CH3-(OCH2CH2)8-O-налоксол и 6-CH3-(OCH2CH2)9-O-налоксол или его фармацевтически приемлемую соль, причем соединение является -6-изомером, -6-изомером или смесью -6- и -6-изомеров. В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение выбрано из,-6-CH3-(OCH2CH2)9-O-налоксола и его фармацевтически приемлемой соли. В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение представляет собой ,-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-налоксол или его фармацевтически приемлемую соль. В одном из вариантов осуществления изобретения соединение выбрано из-6-СН 3-(OCH2CH2)9-O-налоксола и его фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение представляет собой -6CH3-(OCH2CH2)7-O-налоксол или его фармацевтически приемлемую соль. В другом варианте осуществления изобретения соединение выбрано из-6-СН 3-(OCH2CH2)9-O-налоксола и его фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение представляет собой -6-CH3(OCH2CH2)7-O-налоксол или его фармацевтически приемлемую соль. В еще одном аспекте изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый наполнитель. Краткое описание чертежей На фиг. 1 представлен график зависимости концентрации в плазме от времени для 6-налоксола и типичных низкомолекулярных ПЭГ-конъюгатов (3-мер, 5-мер, 7-мер), введенных крысам линии SpragueDawley, как подробно описано в примере 4. На фиг. 2 представлен график влияния ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на желудочно-кишечный перенос (как показатель биодоступности при пероральном введении) налоксона и ПЭГn-Nal. На фиг. 3 представлен график, изображающий влияние ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на пересечение гематоэнцефалитического барьера налоксоном и ПЭГn-Nal. На фиг. 4 изображен график, отображающий фармакокинетику налоксона и ПЭГn-Nal у крыс после введения через желудочный зонд. На фиг. 5 и 6 представлены графики, которые демонстрируют влияние ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на уровень метаболитов налоксона и метаболитов ПЭГn-Nal. На фиг. 7 представлен масс-спектр метокси-ПЭГ-350, полученного из коммерческого источника(компания Sigma-Aldrich). Как можно видеть из анализа, хотя реагент продается как метокси-ПЭГ с молекулярной массой 350, реагент, в действительности, представляет собой смесь 9 отдельных ПЭГолигомеров, обладающих количеством мономерных подгрупп в диапазоне от приблизительно 7 до приблизительно 15. Подробное описание изобретения Следует отметить, что используемое в настоящем описании указание на единственное число предполагает указание на множественное число, если контекст четко не указывает на обратное. В описании и формуле изобретения будет использована следующая терминология в соответствии с определениями, приведенными ниже."Водорастворимый", как в "водорастворимом олигомере", указывает на олигомер, который по меньшей мере на 35 мас.% растворим, а предпочтительно более чем на 95% растворим в воде при комнатной температуре. Обычно нефильтрованный водный препарат "водорастворимого" олигомера пропускает по меньшей мере 75%, предпочтительнее по меньшей мере 95% света, пропускаемого через этот же раствор после фильтрации. С точки зрения массы "водорастворимый" олигомер предпочтительно по меньшей мере на 35 мас.% растворим в воде, предпочтительнее по меньшей мере на 50 мас.% растворим в воде, еще предпочтительнее по меньшей мере на 70 мас.% растворим в воде и еще предпочтительнее по меньшей мере на 85 мас.% растворим в воде. Самым предпочтительным, тем не менее, является, чтобы водорастворимый олигомер по меньшей мере на 95 мас.% был растворим в воде или полностью растворим в воде. Термины "мономер", "мономерная подгруппа" и "мономерная группа" используются здесь взаимозаменяемо и относятся к одной из базисных структурных единиц полимера или олигомера. В случае гомо-олигомера, термин определяется как структурная повторяющаяся единица олигомера. В случае коолигомера, мономерную единицу следует определять как остаток мономера, который был подвергнут олигомеризации для получения олигомера, так как повторяющаяся структурная единица может включать более одного типа мономерных единиц. Предпочтение в данном изобретении отдается гомо-олигомерам."Олигомер" - это молекула, включающая от приблизительно 1 до приблизительно 30 мономеров. Архитектура олигомера может варьироваться. Конкретные олигомеры для использования в данном изобретении включают олигомеры различных геометрических форм, такие как линейные, разветвленные или вилкообразные, более подробное описание которых последует ниже."ПЭГ" или "полиэтиленгликоль" в данном контексте подразумевает любой водорастворимый поли(этиленоксид). Если нет указаний на обратное, "ПЭГ-олигомер" или олигоэтиленгликоль представляет собой такой олигомер, в котором все мономерные подгруппы являются подгруппами этиленоксида. Как правило, практически все, или все мономерные подгруппы являются подгруппами этиленоксида, хотя олигомер может содержать отдельные замыкающие части молекулы или функциональные группы, например, для конъюгации. Как правило, ПЭГ-олигомеры, используемые в данном изобретении, будут представлять одну из двух следующих структур: "-(СН 2 СН 2 О)n-" или "-(CH2CH2O)n1CH2CH2-", в зависимости от того, был ли замещен концевой кислород, или нет, например, в процессе синтетической трансформации. Как указано выше, для ПЭГ-олигомеров данного изобретения могут различаться величины (n) в диапазоне от 1 до 30, концевые группы и архитектура всего ПЭГ. Если ПЭГ также включает функциональную группу А для связывания к ней, например, низкомолекулярного лекарственного вещества, эта функциональная группа в случае ковалентного связывания с ПЭГ-олигомером не приводит к образованию (i) кислород-кислородной связи (-О-O-, пероксидное соединение) или (ii) азотно-кислородной связи"Замыкающая группа", в целом, представляет собой нереакционноспособную группу, содержащую углерод, связанную с концевым кислородом ПЭГ-олигомера. Для целей настоящего изобретения предпочтение отдается замыкающим группам, имеющим относительно низкие молекулярные массы, как метил или этил. Замыкающая группа может включать меченый атом. Такие атомы включают, без ограничений, люминофоры, хемилюминесцеры, части, используемые для мечения ферментов, колориметрические метки (например, красители), ионы металла, радиоактивные части."Разветвленный" по отношению к геометрической форме или общей структуре олигомера относится к олигомеру, имеющему два или несколько полимерных "ответвлений", отходящих из точки разветвления."Вилкообразный" по отношению к геометрической форме или общей структуре олигомера относится к олигомеру, имеющему две или более функциональных групп (обычно через один или несколько атомов), расходящихся из точки разветвления."Точка разветвления" означает точку бифуркации, включающую один или несколько атомов, в которой ветви или вилки олигомера от линейной структуры расходятся в одну или несколько дополнительных ветвей. Термин "реакционноспособный" или "активированный" относится к функциональной группе, которая легко вступает в реакцию или вступает в реакцию с практически значимой скоростью при заданных условиях органического синтеза. Это противоположность группам, которые либо не вступают в реакцию,либо требуют присутствия сильных катализаторов или нереальных для практики условий реакции (т.е."Плохо вступающие в реакцию" функциональные группы присутствуют в молекуле в реакционной смеси - группы, которые остаются в значительной степени неизменными при условиях, эффективных для выполнения желаемой реакции в реакционной смеси."Защитная группа" является частью молекулы, которая предотвращает или блокирует реакцию определенной химически реакционноспособной функциональной группы в молекуле при определенных условиях реакции. Защитная группа будет меняться в зависимости от типа защищаемой химически реакционноспособной группы, а также от условий реакции, которые используются, и наличия дополнительных реакционноспособных или защитных групп в молекуле. Функциональные группы, которые могут подвергаться защите, включают, например, группы карбоновых кислот, аминогруппы, гидроксильные группы, тиологруппы, карбонильные группы и им подобные. Репрезентативные защитные группы для карбоновых кислот включают сложные эфиры (такие как p-метоксибензольный эфир), амиды и гидразиды; для аминогрупп - карбаматы (такие как трет-бутоксикарбонил) и амиды; для гидроксильных групп простые и сложные эфиры; для тиологрупп -простые и сложные тиоэфиры; для карбонильных групп ацетали и кетали и так далее. Такие защитные группы хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области и описаны, например, в T.W. Greene and G.M. Wuts, Protecting Groups in OrganicSynthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999, и приведенных там ссылках. Функциональная группа в "защищенной форме" - это функциональная группа, имеющая защитную группу. Термин "функциональная группа", используемый здесь, или любой его синоним охватывает и защищенные формы."Физиологически расщепляемая" или "гидролизуемая" или "разрушающаяся" связь является сравнительно изменчивой связью, которая вступает в реакцию с водой (т.е. гидролизируется) в физиологических условиях. Тенденция связи к гидролизу в воде будет зависеть не только от общего типа связи, соединяющей два центральных атома, но и от замещающих атомов, связанных с этими центральными атомами. Соответствующие гидролитически нестабильные или слабые связи включают, но не ограничены перечисленным, сложный карбоксилатный эфир, сложный эфир фосфорной кислоты, ангидриды, ацетали, кетали, ацилоксиалкильный эфир, имины, ортоэфиры, пептиды, олигонуклеотиды, тиоэфиры, эфиры тиоловой кислоты и карбонаты."Ферментативно разлагаемая связь" - это связь, которая разлагается одним или более ферментами."Гидролитически стабильная" связь относится к химической связи, как правило ковалентной, которая, по существу, стабильна в воде, что означает, что она не подвержена гидролизу при физиологических условиях в ощутимой степени в течение продолжительного периода времени. Примеры гидролитически стабильных связей включают, но не ограничиваются следующими: углерод-углеродные связи (например,в алифатических цепочках), эфиры, амиды, уретаны, амины и им подобные. Обычно гидролитически стабильная связь является одной из тех связей, которые характеризуются уровнем гидролиза менее чем около 1-2% в день при физиологических условиях. Скорости гидролиза репрезентативных химических связей можно найти в обычных учебниках по химии."В значительной степени" или "по существу" означает приблизительно полностью или целиком,например, 95% или более, предпочтительнее 97% или более, еще предпочтительнее 98% или более, еще предпочтительнее 99% или более, еще более предпочтительно 99,9% или более и самым предпочтительным вариантом 99,99% или более от некоторого указанного количества. имеют точно определенную одинаковую молекулярную массу и определенное количество мономеров,определяемое с помощью хроматографии или масс-спектрометрии. Композиции монодисперсного олигомера, с одной стороны, чистые, что означает, что у них преобладает один или известное количество (в целом) мономеров, а не большое их разнообразие. Композиция монодисперсного олигомера согласно настоящему изобретению обладает значением Mw/Mn 1,0005 или менее и предпочтительнее значениемMw/Mn 1,0000. В широком смысле композиция, охватывающая монодисперсные конъюгаты, означает,что все олигомеры всех конъюгатов в композиции обладают одним или определенным количеством (в целом) мономеров, а не большим распределением, и имеют значение Mw/Mn 1,0005 или более предпочтительно значение Mw/Mn 1,0000, если олигомер не связан с частью молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества. Композиция, включающая в себя монодисперсные конъюгаты,однако, может включать один или несколько неконъюгатных веществ, таких как растворители, реагенты,наполнители и так далее."Бимодальная" по отношению к олигомерной композиции означает, что в ней, по существу, все олигомеры имеют одно из двух определенных и различных чисел (целые числа) мономеров, а не большое распределение, и распределение молекулярных масс, представленное на графике зависимости дроби от молекулярной массы, выглядит как две отдельные различимые вершины. Предпочтительно, чтобы для бимодальной олигомерной композиции, соответствующей данному описанию, каждый пик был симметричен относительно его середины, хотя размеры двух пиков могут отличаться. В идеале, показатель полидисперсности каждого пика в бимодальном распределении - Mw/Mn составляет 1,01 или менее, предпочтительнее 1,001 или менее, еще предпочтительнее 1,0005 или менее и наиболее предпочтительное значение Mw/Mn составляет 1,0000. В более широком смысле композиция, состоящая из бимодальных конъюгатов, означает, что практически все олигомеры всех конъюгатов композиции имеют одно из двух определенных и разных чисел (целые числа) мономеров, а не широкое распределение, и будут обладать значением Mw/Mn 1,01 или менее, предпочтительнее 1,001 или менее, еще предпочтительнее 1,0005 или менее и наиболее предпочтительное значение Mw/Mn составляет 1,0000, если олигомеры не были прикреплены к части молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества. Композиция,состоящая из бимодальных конъюгатов, может, однако, включать одно или несколько неконъюгированных веществ, таких как растворители, реагенты, наполнители и так далее. Под "биологической мембраной" подразумевается любая мембрана, обычно состоящая из специализированных клеток и тканей, которая служит барьером, по меньшей мере, для некоторых ксенобиотиков или других нежелательных веществ. В настоящем описании "биологическая мембрана" включает те мембраны, которые ассоциируются с физиологическими защитными барьерами, включающими, например, гематоэнцефалический барьер, гематоликворный барьер, гематоплацентарный барьер, гематотестикулярный барьер, гематомолочный барьер и барьеры слизистых оболочек, включающие вагинальную слизистую, слизистую уретры, анальную слизистую, буккальную слизистую, подъязычную слизистую,ректальную слизистую и так далее. В случае, если из контекста с очевидностью не следует обратное,термин "биологическая мембрана" не включает те мембраны, которые связаны со средним желудочнокишечным трактом (например, желудок и тонкий кишечник)."Скорость пересечения биологической мембраны" в данном описании является мерой способности соединения пересекать биологический барьер, например гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Для оценивания пересечения молекулой любой из упомянутых мембран могут быть использованы различные способы. Способы определения скорости пересечения биологических мембран, связанных с любым из упомянутых биологических барьеров (например, гематоликворный барьер, гематоплацентарный барьер,гематомолочный барьер, кишечный барьер и т.д.), известны, описаны в данном документе и/или в соответствующей литературе и/или могут быть определены специалистом, обладающим обычными познаниями в данной области. Соединение, которое "пересекает гематоэнцефалитический барьер" в соответствии с изобретением,является таким соединением, которое пересекает ГЭБ с большей скоростью, чем атенолол, при использовании описанных здесь способов."Пониженная скорость метаболизма" в контексте данного изобретения относится к измеряемому снижению скорости метаболизма конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества по сравнению со скоростью метаболизма низкомолекулярного лекарственного вещества, не связанного с водорастворимым олигомером (например, низкомолекулярного лекарственного вещества в чистом виде), или стандартного вещества для сравнения. В особом случае "снижения скорости пресистемного метаболизма" применяется та же "пониженная скорость метаболизма", за исключением того, что низкомолекулярное лекарственное вещество (или стандартное вещество для сравнения) и соответствующий конъюгат вводятся перорально. Перорально вводимые лекарственные препараты абсорбируются из желудочно-кишечного тракта в кровообращение в системе воротной вены и должны пройти через печень, прежде чем достигнут кровообращения большого круга. Поскольку печень является первичным пунктом метаболизма или биотрансформации лекарственных препаратов, существенное количество лекарственного препарата может быть метаболизировано даже до того, как оно достигнет кровообращения большого круга. Степень пресистемного метаболизма и, таким образом, любого его сниже-5 018427 ния может быть измерена согласно нескольким подходам. Например, образцы крови животных могут быть собраны через определенные интервалы времени, и плазма или сыворотка проанализирована при помощи жидкостной хроматографии или масс-спектрометрии для определения уровней метаболитов. Другие способы измерения "пониженной скорости метаболизма", связанной с пресистемным метаболизмом или другими метаболическими процессами, известны, описаны здесь и/или в соответствующей литературе и/или могут быть определены специалистом, обладающим обычными познаниями в данной области техники. Предпочтительно, чтобы конъюгат согласно изобретению мог обеспечивать пониженную скорость метаболизма, причем это снижение должно удовлетворять по меньшей мере одному из следующих значений: по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%; по меньшей мере приблизительно 20%; по меньшей мере приблизительно 25%; по меньшей мере приблизительно 30%; по меньшей мере приблизительно 40%; по меньшей мере приблизительно 50%; по меньшей мере приблизительно 60%; по меньшей мере приблизительно 70%; по меньшей мере приблизительно 80% и по меньшей мере приблизительно 90%."Фармацевтически приемлемый наполнитель" или "фармацевтически приемлемый носитель" соответствует наполнителю, который может быть включен в композиции настоящего изобретения и который не оказывает значимого неблагоприятного токсикологического воздействия на пациента."Фармакологически эффективное количество", "физиологически эффективное количество" и "терапевтически эффективное количество" используются здесь взаимозаменяемо для обозначения количества конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества, присутствующего в композиции, которое необходимо для обеспечения желаемого уровня активного агента и/или конъюгата в кровотоке или в ткани-мишени. Точное количество будет зависеть от множества факторов,например от конкретного активного агента, компонентов и физических характеристик композиции,предполагаемого контингента пациентов, их характеристик и так далее, и легко может быть определено специалистом, обладающим обычными знаниями в данной отрасли техники, на основе информации,предложенной в данном описании и доступной из соответствующей литературы."Дифункциональным" называется олигомер, имеющий в составе две функциональные группы,обычно на концах. Если функциональные группы идентичны, олигомер называется гомофункциональным. Если функциональные группы различны, олигомер называется гетерофункциональным. Основный или кислотный реагент в данном описании включает также нейтральные, заряженные или любые другие соответствующие формы его солей. Термин "пациент" относится к живому организму, страдающему или склонному к заболеванию, которое может быть предотвращено или излечено путем приема описанного здесь конъюгата, как правило,но не обязательно, в виде конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества, и охватывает как людей, так и животных."Необязательные" или "необязательно" обозначает, что описанное далее обстоятельство может иметь место, а может и не иметь, так что описание включает и случаи, когда обстоятельство имеет место,и случаи, когда оно места не имеет. Настоящее изобретение направлено (кроме прочего) на композиции низкомолекулярных лекарственных веществ, химически модифицированных ковалентным связыванием с водорастворимым олигомером, полученным из монодисперсной или бимодальной композиции водорастворимых олигомеров. Поскольку водорастворимый олигомер получен из монодисперсной или бимодальной композиции водорастворимых олигомеров, получаемые согласно настоящему изобретению композиции низкомолекулярного лекарственного вещества и олигомера в высшей степени беспримесны и четко определены с точки зрения структуры. Преимуществом описанных здесь конъюгатов является их способность демонстрировать пониженную скорость пересечения биологических мембран по сравнению с соответствующим активным агентом в неконъюгированной форме. Не привязываясь к теории, тем не менее, существует убеждение, что размер молекулы является важным фактором определения того, может ли, и в какой степени, любая данная молекула пройти или пересечь биологическую мембрану. Например, большинство, если не все, защитные барьеры хотя бы частично полагаются на плотно расположенные клетки, которые формируют мембрану и имеют тесные связи, которые могут быть преодолены только очень мелкими молекулами. Таким образом, для данного низкомолекулярного лекарственного вещества связывание с водорастворимым полимером низкомолекулярного лекарственного вещества дает в результате конъюгат, который оказывается обязательно большим, и потому можно ожидать, что он либо не сможет преодолеть биологическую мембрану, либо преодолеет ее с меньшей скоростью, чем низкомолекулярное лекарственное вещество в неконъюгированной форме. Как детально будет показано ниже и в экспериментальной части, снижение скорости преодоления биологической мембраны путем увеличения размера молекулы при помощи конъюгирования водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества не в каждом случае дает в результате полностью удовлетворительный конъюгат. В идеале, конъюгат будет представлен в виде композиции, состоящей из монодисперсных или бимодальных конъюгатов. И вновь, не привязываясь к теории,тем не менее, существует убеждение, что даже малейшие различия между конъюгатами в количестве мономеров могут привести к относительно большим различиям в их свойствах, таких как фармакологическая активность, метаболизм, биодоступность при пероральном введении, скорость пересечения биологической мембраны, растворимость и т.д. Далее, как подтверждено масс-спектральным анализом, результаты которого представлены на фиг. 7, коммерчески доступные олигомерные композиции, такие как ПЭГ-350, на самом деле, относительно неоднородны с точки зрения размеров олигомеров, присутствующих в композиции. Таким образом, использование подобных относительно неоднородных олигомерных композиций (без дальнейшей очистки) в синтезе конъюгатов приведет к широкому диапазону молекулярных масс конъюгатов (в результате широкого диапазона молекулярных масс в композиции, использованной для получения конъюгатов). Как следствие, полученная композиция конъюгатов будет включать множество видов конъюгатов, где каждый конъюгат, как предполагается, будет обладать различными свойствами. С регулятивной и медицинской точки зрения композиций, включающих соединения, имеющие ярко выраженные отличия в свойствах, следует, в идеале, избегать. Итак, настоящее изобретение предлагает конъюгаты, которые не только относительно велики (по сравнению с неконъюгированным низкомолекулярным лекарственным веществом), что приводит к снижению скорости пересечения биологической мембраны (вновь, по сравнению с соответствующей неконъюгированной формой низкомолекулярного лекарственного вещества), но также, по существу, беспримесны, что обеспечивает полноценную запланированную активность и другие характеристики композиции. Таким образом, предлагается композиция, включающая монодисперсные или бимодальные конъюгаты, каждый из которых включает часть молекулы, полученную из низкомолекулярного лекарственного вещества, ковалентно связанную при помощи стабильной связи с водорастворимым олигомером,причем указанный конъюгат демонстрирует пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером. Как было указано выше, использование дискретных олигомеров из четко определенной композиции олигомеров для получения конъюгатов может изменить в лучшую сторону определенные качества, связанные с соответствующим низкомолекулярным лекарственным веществом. Например, конъюгат согласно настоящему изобретению в случае приема любым из известных путей введения, таких как парентеральный, пероральный, трансдермальный, буккальный, пульмонарный или назальный, демонстрирует пониженное проникновение через биологическую мембрану (такую как биологические мембраны, связанные с гематоэнцефалическим и гематоплацентарным барьерами). Предпочтительно, чтобы конъюгаты демонстрировали замедленное, минимальное или практически отсутствующее преодоление биологической мембраны (такой как биологические мембраны, связанные с гематоэнцефалическим и гематоплацентарным барьерами), но проникали через стенки желудочно-кишечного тракта в кровообращение большого круга в случае перорального приема. Если предполагается пульмонарное введение, введенный конъюгат предпочтительно не проникнет в кровообращение большого круга или будет иметь пониженную скорость преодоления барьера между легочной тканью и кровью с тем, чтобы поддерживать уровень в легких для локального фармакологического действия на них. Более того, конъюгаты данного изобретения сохраняют степень биоактивности и биодоступности в конъюгированной форме. Относительно гематоэнцефалитического барьера (ГЭБ) следует отметить, что он ограничивает перенос лекарственных веществ из крови в мозг. Этот барьер состоит из непрерывного слоя уникальных эндотелиальных клеток, связанных плотными соединениями. Церебральные капилляры, составляющие более 95% общей поверхности ГЭБ, представляют основной путь попадания большинства растворов и лекарственных веществ в центральную нервную систему. Хотя для некоторых соединений может быть желательным достижение требуемой концентрации в тканях мозга для соответствующего фармакологического воздействия, многие другие соединения, не имеющие полезного фармакологического влияния на ткани головного мозга, могут, в конечном счете,достичь тканей центральной нервной системы. Путем снижения уровня поступления этих нецентрализованно действующих соединений в центральную нервную систему риск побочных эффектов в центральной нервной системе снижается, а терапевтический эффект может даже усилиться. Гематоликворный барьер сходен с гематоэнцефалическим. Гематоликворный барьер создает преграду или иным образом снижает количество токсических или нежелательных веществ, попадающих в спинно-мозговую жидкость. Он в основном расположен в вентрикулярной системе и субарахноидальном пространстве. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное пациенту, преодолеть гематоликворный барьер, определенное количество соединения может быть введено мышам путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения образцы спинно-мозговой жидкости мышей могут быть проанализированы на предмет присутствия и количества соединения. Гематоплацентарный барьер защищает развивающийся плод от большинства токсинов, присутствующих в кровообращении матери. Этот барьер состоит из нескольких клеточных слоев между кровеносными сосудами матери и плода в плаценте. Как в случае с гематоэнцефалическим барьером, плацентарный барьер не является абсолютно непроницаемым, но эффективно замедляет диффузию большинст-7 018427 ва токсинов. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное беременной самке млекопитающего, преодолеть гематоплацентарный барьер, определенное количество соединения может быть введено беременным мышам путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения образцы эмбриональной ткани мышей могут быть проанализированы на предмет присутствия и количества соединения. Гематомолочный барьер сходен с гематоэнцефалическим в том, что биологическая мембрана отделяет и ограничивает проникновение определенных веществ из кровообращения большого круга. В случае с гематомолочным барьером биологическая мембрана предотвращает попадание определенных веществ в молочные железы. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например,низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное кормящей самке млекопитающего, преодолеть гематомолочный барьер, определенное количество соединения может быть введено кормящим мышам путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения образцы молока из молочных желез мышей могут быть проанализированы на предмет присутствия и количества соединения. Гематотестикулярный барьер объединяет поддерживающие клетки (клетки Сертоли), которые выстилают мужские половые пути и плотно связаны между собой. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное самцу млекопитающего, преодолеть гематотестикулярный барьер, определенное количество соединения может быть введено самцам мыши путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения яички мышей могут быть удалены и проанализированы на предмет присутствия и количества соединения. Барьеры слизистых оболочек представляют еще одну биологическую мембрану, которая, как правило, блокирует или уменьшает попадание нежелательных субстанций в кровообращение большого круга. Введение препарата в определенную область исследуемой слизистой и последующий анализ образцов крови на предмет присутствия и количества соединения позволяет определить, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат) преодолеть область данной слизистой оболочки. Говоря о любой биологической мембране, конъюгат водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества демонстрирует скорость пересечения биологической мембраны, пониженную по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером. Например, снижение скорости пересечения биологической мембраны включает случаи снижения по меньшей мере приблизительно на 5%,по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% в сравнении со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером. Предпочтительное снижение скорости пересечения биологической мембраны для конъюгата составляет по меньшей мере приблизительно 20%. В некоторых случаях является предпочтительным, чтобы низкомолекулярное лекарственное вещество само по себе проникало через одну или несколько из вышеупомянутых мембран. Конъюгаты, демонстрирующие пониженную скорость пересечения биологической мембраны,обычно имеют структуруD - часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества. Часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества, с одной стороны, отличается от исходного низкомолекулярного лекарственного вещества тем, что она соединена, как правило, ковалентной связью, с атомом, который не связан с исходным низкомолекулярным лекарственным веществом. Кроме отличия в связи с другим атомом, тем не менее, часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества, по существу, аналогична низкомолекулярному лекарственному веществу и имеет такой же фармакологический механизм действия. Таким образом, говоря о низкомолекулярном лекарственном веществе, допустимо иметь в виду и часть, полученную из низкомолекулярного лекарственного вещества. Активный агент, используемый в конъюгатах, представляет собой налоксон. Путем ковалентной связи низкомолекулярного лекарственного вещества с водорастворимым олигомером можно получить значительные изменения в переносе низкомолекулярного лекарственного вещества и фармакологических свойствах. Использование водорастворимого олигомера позволяет получить четко определенные свойства лекарства, так как полученные конъюгаты составляют четко определенную композицию, а не распределение из множества видов конъюгатов низкомолекулярного лекарственного вещества и олигомеров, имеющих целый спектр мономерных подгрупп (и, следовательно, моле-8 018427 кулярных масс). Как уже было сказано, добавление или изъятие даже одного мономера может оказывать значительное влияние на характеристики итогового конъюгата. В течение разумного времени можно провести просеивание матрицы дискретных олигомеров различного размера (от 1 до 30 мономерных подгрупп) и, таким образом, получить необходимые конъюгаты с необходимыми свойствами. Олигомеры, связанные с низкомолекулярным препаратом, обеспечивают отличие в свойствах по сравнению с исходным низкомолекулярным лекарственным веществом. Использование малых олигомеров (по сравнению с 5 К-60 К полимерными цепочками, которые обычно присоединяются к белкам) также увеличивает вероятность сохранения биоактивности лекарства хотя бы в малой степени или предпочтительно в значительной мере. Эта характеристика продемонстрирована в табл. V (пример 7), предлагающей данные о биологической активности (ЕС 50) для примеров конъюгатов согласно настоящему изобретению. Иллюстрационные конъюгаты ПЭГ-олигомера-налоксона/налоксола обладают биологической активностью в диапазоне от 5% до приблизительно 35% немодифицированного исходного лекарственного вещества, демонстрируя и другие положительные характеристики соединений настоящего изобретения. Олигомеры обычно включают два или более мономеров, последовательно связанных с образованием цепочки мономеров. Олигомер сформирован из мономеров одного типа (гомо-олигомер). В результате мономеры образуют водорастворимый олигомер, как определено выше, т.е. с растворимостью в воде 95%, предпочтительно 99% растворимостью в воде при комнатной температуре и физиологическом уровне кислотности (pH 7,2-7,6). Приготовление олигомер-конъюгата налоксона описывается в примере 1. В этом показательном синтезе, вслед за защитой ароматической гидроксильной группы, кетогруппа в налоксоне восстанавливается до соответствующего гидроксила, который затем присоединяется к олигомерному этиленгликольгалиду с образованием конъюгата малой молекулы с эфирной (-O-) связью. Любопытно, что в данном примере восстановление гидроксильной группы в налоксоне привело к образованию двух стереоизомеров,отличающихся ориентацией гидроксильной группы. Соответствующие олигомерные конъюгаты были приготовлены и выделены, и было продемонстрировано, что они обладают в некоторой степени отличными характеристиками, которые будут обсуждаться более подробно ниже. Это представляет другую особенность данного изобретения, а именно приготовление/выделение отдельных изомеров конъюгатов олигомеров-малых молекул и способы их использования. Конъюгаты по настоящему изобретению демонстрируют пониженную скорость пересечения биологического барьера, как было описано ранее. Более того, конъюгаты сохраняют по меньшей мере приблизительно 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70% или более биоактивности немодифицированного исходного низкомолекулярного лекарственного вещества. Для определенного низкомолекулярного лекарственного вещества, имеющего более одного реакционноспособного места, подходящего для модификации, может возникнуть необходимость в выполнении молекулярного моделирования или in vivo или in vitro количественном определении биологической активности, чтобы оценить биологическую активность полученного конъюгата и определить место, наиболее подходящее для ковалентного связывания с олигомером, см. пример иллюстративных данных по биоактивности в табл. VI, в которой приведены различные олигомерные конъюгаты налоксона или производного налоксона, 6-NH2-налоксона и 6-ОН-налоксола. В данном исследовании переменные включали место химической модификации на исходном лекарственном веществе, вид ковалентной связи, стереохимию и размер олигомера, ковалентно связанного с функциональной группой лекарственной части. Как можно увидеть из данных, биоактивность конъюгатов варьировалась от приблизительно 5% до приблизительно 35% биоактивности исходного лекарственного вещества. Было открыто, что стабильное ковалентное связывание малых водорастворимых олигомеров с перорально биодоступными низкомолекулярными лекарственными веществами способно в значительной степени изменить свойства этих молекул, делая их, таким образом, более клинически эффективными. Конкретнее, ковалентное связывание монодисперсных олигомеров, таких как олигоэтиленоксид, является эффективным для снижения или, в некоторых случаях, устранения переноса лекарственного вещества через гематоэнцефалический барьер, что затем выражается в значительном снижении побочных эффектов, связанных с центральной нервной системой. Во-первых, олигомер конъюгируется с низкомолекулярным лекарственным веществом. Предпочтительно лекарственное вещество является биодоступным при пероральном введении и само по себе демонстрирует некоторую скорость пересечения биологической мембраны. Далее, способность конъюгата пересекать биологическую мембрану определяется с использованием подходящей модели и сравнивается с моделью немодифицированного исходного лекарственного вещества. Если результаты оказываются подходящими, а именно, если, например, скорость пересечения существенно снижается, то далее оценивается биоактивность конъюгата. Хороший конъюгат в соответствии с данным изобретением является биоактивным, так как связь является гидролитически стабильной и не приводит к высвобождению немодифицированного лекарства после его введения. Таким образом, лекарство в конъюгированной форме должно быть биоактивным и предпочтительно сохранять значительную степень биоактивности по сравнению с исходным лекарственным веществом, т.е. больше чем приблизительно 30% биоактивности ис-9 018427 ходного лекарства или даже более предпочтительно более чем приблизительно 50% биоактивности исходного лекарства. Затем вышеперечисленные этапы повторяются с использованием олигомеров того же самого мономерного типа, но обладающих различным количеством подгрупп. Так как желудочно-кишечный тракт ("ЖКТ") ограничивает перенос пищи и лекарств из пищеварительной полости в кровь и лимфу, он представляет еще один барьер, в отношении которого должен быть испытан конъюгат. Однако барьер ЖКТ является таким барьером, который не должен препятствовать конъюгату, если тот предназначен для перорального приема и системной доставки. Барьер ЖКТ состоит из непрерывных слоев клеток кишечника, плотно соединенных в кишечном эпителии. Для каждого конъюгата, чья способность пересекать биологическую мембрану снижается по сравнению с неконъгированным низкомолекулярным лекарственным веществом, впоследствии оценивается пероральная биодоступность. Основываясь на этих результатах, то есть основываясь на последовательном добавлении увеличивающегося количества дискретных мономеров к некоторой малой молекуле в определенном положении или расположении на малой молекуле, возможно определить размер олигомера, который наиболее эффективен для получения конъюгата, обладающего оптимальным балансом между снижением пересечения биологической мембраны, биодоступностью при пероральном введении и биоактивностью. Малый размер олигомеров делает такой скрининг возможным и позволяет исследователю эффективно получить нужные свойства конечного конъюгата. Производя небольшие поэтапные изменения размера олигомера и применяя подход экспериментального проектирования, исследователь может эффективно определить конъюгат, обладающий благоприятным балансом между снижением скорости пересечения биологической мембраны, биоактивностью и биодоступностью при пероральном введении. В некоторых случаях, связывание олигомера, как описано здесь, является эффективным, чтобы действительно повысить биодоступность лекарственного вещества при пероральном введении. Например, специалист, обладающий обычными знаниями в данной области техники, с использованием стандартного экспериментирования может определить наиболее подходящий размер молекулы и вид связи для улучшения биодоступности при пероральном введении, вначале приготовив серию олигомеров с различным весом и функциональными группами, а затем получая необходимые профили клиренса путем введения конъюгатов пациенту и периодического отбора образцов крови и/или мочи. Как только будет получена серия профилей клиренса для каждого исследуемого конъюгата, может быть определен подходящий конъюгат. Для изучения переноса перорального вводимого лекарственного вещества также могут использоваться экспериментальные модели на животных (грызунах или собаках). Кроме этого, методы, которые не относятся к методам in vivo, включают иссеченную ткань вывернутого пищеварительного канала грызуна и модели культур из монослоя ткани клеток Сасо-2. Эти модели полезны в прогнозировании биодоступности пероральных препаратов. Настоящее изобретение также включает фармацевтические препараты, включающие конъюгат согласно настоящему изобретению в сочетании с фармацевтическим наполнителем. Вообще, конъюгат сам по себе будет в твердой форме (например, как осадок), который может смешиваться с подходящим фармацевтическим наполнителем, который может быть либо в твердой, либо в жидкой форме. Иллюстративные наполнители включают, без ограничения, те наполнители, которые были выбраны из группы, состоящей из углеводов, неорганических солей, противомикробных веществ, антиоксидантов,ПАВ, буферов, кислот, оснований и их комбинаций. Углеводы, такие как сахар, производный сахар, такой как альдит, альдоновая кислота, эстерифицированный сахар и/или сахарный полимер, могут присутствовать в качестве наполнителей. Конкретные углеводные наполнители включают, например: моносахариды, такие как фруктоза, мальтоза, галактоза,глюкоза, D-манноза, сорбоза и т.п.; дисахариды, такие как лактоза, сахароза, трегалоза, целлобиоза и т.п.; полисахариды, такие как рафиноза, мелезитоза, мальтодекстрины, декстраны, крахмалы и т.п.; и альдиты, такие как маннит, ксилит, мальтит, лактит, ксилит, сорбит (глюцитол), пиранозил сорбит, миоинозитол и т.п. Наполнитель также может включать неорганическую соль или буфер, такие как лимонная кислота,хлорид натрия, хлорид калия, сульфат натрия, нитрат калия, фосфат натрия одноосновный, фосфат натрия двухосновный и их сочетания. Также препарат может включать противомикробные вещества для профилактики или ограничения роста микроорганизмов. Неограничивающие примеры противомикробных веществ, подходящих для настоящего изобретения включают бензалкония хлорид, бензетония хлорид, бензиловый спирт, цетилпиридиния хлорид, хлорбутанол, фенол, фенилэтиловый спирт, фенилмеркурнитрат, тимерсол и их сочетания. Также в препарате может быть представлен антиоксидант. Антиоксиданты используются для предотвращения окисления, препятствуя, таким образом, порче конъюгата или других компонентов препарата. Подходящие антиоксиданты для использования в настоящем изобретении включают, например,аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гипофосфорную кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, бисульфит натрия, натрия формальдегид сульфоксилат,- 10018427 пиросульфит натрия и их сочетания. В качестве наполнителя могут присутствовать ПАВ. Примерные ПАВ включают полисорбаты, такие как "Твин 20" и "Твин 80", и плуроники, такие как F68 и F88 (оба вида которых производит компанияBASF, Маунт Олив, штат Нью-Джерси, США); эфиры сорбитана; липиды, такие как фосфолипиды, такие как лецитин и другие фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины (однако предпочтительно не в липосомной форме), жирные кислоты; стероиды, такие как холестерин; и хелатообразующие вещества, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота, цинк и другие подходящие катионы. Кислоты или основания могут присутствовать в препарате как наполнители. Неограничивающие примеры кислот, которые можно использовать, включают выбранные из группы, состоящей из соляной кислоты, уксусной кислоты, фосфорной кислоты, лимонной кислоты, яблочной кислоты, молочной кислоты, муравьиной кислоты, трихлоруксусной кислоты, азотной кислоты, хлорной кислоты, ортофосфорной кислоты, серной кислоты, фумаровой кислоты и их сочетаний. Примеры подходящих оснований включают, без ограничения, основания, выбранные из группы, состоящей из гидроксида натрия, ацетата натрия, гидроксида аммония, гидроксида калия, ацетата аммония, ацетата калия, фосфата натрия, фосфата калия, цитрата натрия, формиата натрия, сульфата натрия, сульфата калия, фумерата калия и их сочетания. Количество конъюгата в композиции будет варьироваться в зависимости от нескольких факторов,но оптимальной будет терапевтически эффективная доза в случае, когда композиция будет храниться в упаковке с единичной дозой. Терапевтически эффективная доза может быть определена экспериментальным путем посредством повторных приемов повышающихся доз конъюгата, чтобы определить, какое количество приводит к желаемому клиническому результату. Количество каждого отдельного наполнителя в композиции будет зависеть от активности наполнителя и конкретных требований к композиции. Обычно оптимальное количество какого-либо отдельного наполнителя определяется посредством стандартного экспериментирования, т.е. с помощью приготовления смесей, содержащих разное количество наполнителя (которое варьируется от низкого до высокого),изучения стабильности и других показателей, а затем определения диапазона, в котором достигаются оптимальные характеристики без выраженных отрицательных эффектов. В целом, однако, наполнитель будет присутствовать в композиции в количестве примерно от 1 до примерно 99 вес.%, предпочтительно от приблизительно 5 до 98 вес.%, более предпочтительно от примерно 15 до 95 вес.% наполнителя, наиболее предпочтительно в концентрациях менее чем 30 вес.%. Вышеупомянутые фармацевтические наполнители наряду с другими наполнителями описаны вExcipients, 3-е издание, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., 2000. Фармацевтическая композиция может производиться в любой форме, и изобретение в этом отношении не ограничено. Типичные препараты наиболее предпочтительны в форме, удобной для перорального приема, такой как таблетка, каплета, капсула, гелевая капсула, пастилка, дисперсия, суспензия, раствор, эликсир, сироп, лепешка, трансдермальный пластырь, спрей, суппозиторий и порошок. Пероральные дозировочные формы являются предпочтительными для тех конъюгатов, которые активны при пероральном введении, и включают таблетки, каплеты, капсулы, гелевые капсулы, суспензии,растворы, эликсиры и сиропы, а также могут содержать большое количество гранул, горошин, порошков или пластинок, которые необязательно заключаются в капсулу. Такие дозировочные формы приготовляются с использованием стандартных методов, хорошо известных специалистам, работающим в сфере технологии приготовления фармацевтических композиций, и описаны в соответствующей литературе. Например, таблетки и каплеты могут производиться с соблюдением стандартных процедур технологии фармацевтического производства и на обычном оборудовании. Методы прямого прессования и грануляция предпочтительны при производстве таблеток или каплет, которые содержат описанные здесь конъюгаты. Кроме конъюгата, таблетки и каплеты обычно будут содержать инертные, фармацевтически приемлемые носители, такие как связующие вещества, смазочные вещества, вещества, вызывающие дезинтеграцию, наполнители, стабилизаторы, ПАВы, красители и т.п. Связующие вещества используются,чтобы придать таблетке связующие свойства и гарантировать, таким образом, что таблетка останется неповрежденной. Подходящие связующие вещества включают, но не ограничиваются перечисленным: крахмал (включая кукурузный крахмал и прежелатинизированный крахмал), желатин, сахар (включая сахарозу, глюкозу, декстрозу и лактозу), полиэтиленгликоль, воск и природные или синтетические камеди, например акациевый альгинат натрия, поливинилпирролидон, полимеры на основе целлюлозы(включая гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, этилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу и т.п.) и вигум. Смазочные вещества используются для того, чтобы облегчить промышленное производство таблеток, способствуя текучести порошка и предупреждая разрушение частиц (т.е. дробление частиц) при прессовании. Полезными смазывающими веществами являются стеарат магния, стеарат кальция и стеариновая кислота. Вещества,вызывающие дезинтеграцию, используются для того, чтобы ускорить разрушение таблетки, и обычно это крахмалы, глины, целлюлозы, альгины, камеди или сшитые полимеры. Наполнители включают, напри- 11018427 мер, такие вещества, как диоксид кремния, диоксид титана, окись алюминия, тальк, каолин, порошкообразная целлюлоза и микрокристаллическая целлюлоза, а также растворимые вещества, такие как маннит,мочевина, сахароза, декстроза, хлорид натрия и сорбит. Стабилизаторы, как хорошо известно специалистам, используются, чтобы подавить или замедлить реакции распада в лекарственном веществе, которые включают, например, окислительные реакции. Капсулы также являются предпочтительными пероральными дозировочными формами, и в этом случае композиция, содержащая конъюгат, может быть заключена в капсулу в виде жидкости или геля(например, в случае с желатиновыми капсулами), или твердого вещества (включая такие твердые частицы, как гранулы, горошины, порошки или пеллеты). Подходящими видами капсул являются твердые и мягкие капсулы, которые обычно делают из желатина, крахмала или целлюлозных материалов. Твердые желатиновые капсулы, состоящие из двух частей, предпочтительно запечатываются, например, с помощью желатиновых полосок или подобным образом. Сюда же включаются формы для парентерального введения, главным образом, в сухом виде (обычно, как лиофилизат или осадок, который может быть в форме порошка или брикета), а также формы,приготовленные для инъекционного введения, которые обычно являются жидкостями и требуют этапа восстановления из сухой формы исходного препарата. Примеры подходящих разбавителей для восстановления твердых форм до введения включают бактериостатическую воду для инъекций, 5%-ный раствор декстрозы в воде, физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера, раствор хлорида натрия, стерильную воду, деионизированную воду и их сочетания. В некоторых случаях композиции, предназначенные для парентерального введения, могут производиться в форме неводных растворов, суспензий или эмульсий, при этом каждая форма обычно является стерильной. Примерами неводных растворителей или разбавителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое и кукурузное масло, желатин и инъекционные органические эфиры, такие как этилолеат. Описанные здесь исходные формы также могут содержать вспомогательные средства, такие как консерванты, увлажняющие, эмульгирующие и диспергирующие вещества. Форма становится стерильной благодаря включению стерилизующего вещества, фильтрации через фильтры, удерживающие бактерии, облучению или нагреванию. Также конъюгат может вводиться через кожу с помощью обычного трансдермального пластыря или другой системы трансдермального введения лекарственного вещества, где конъюгат содержится внутри слоистой структуры, которая служит прикрепляемым к коже средством введения лекарства. В такой структуре конъюгат находится в слое или "резервуаре", который находится под верхним защитным слоем. Слоистая структура может содержать один резервуар или множество. Также изобретение предлагает способ приема конъюгата, как описано здесь, пациентом, страдающим состоянием, которое реагирует на лечение с использованием данного конъюгата. Способ содержит введение, обычно пероральное, терапевтически эффективной дозы конъюгата (предпочтительно предусмотренную как часть фармацевтического препарата). Рассматриваются также и другие способы введения, такие как пульмонарный, назальный, буккальный, ректальный, сублингвальный, трансдермальный и парентеральный. Для целей настоящего изобретения термин "парентеральный" включает подкожное,внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшное, внутрисердечное, интратекальное и внутримышечное введение. В тех случаях, когда используется парентеральное введение, может быть необходимо применение олигомеров несколько большего размера, чем описанные ранее, с молекулярным весом от 500 до 30 кДа(например, с молекулярным весом приблизительно 500, 1000, 2000, 2500, 3000, 5000, 7500, 10000, 15000,20000, 25000, 30000 или даже больше). Способ введения может использоваться для лечения любого состояния, которое может быть предотвращено или излечено благодаря приему конкретного конъюгата. Специалистам, обладающим обычными знаниями в данной области техники, будет понятно, какие состояния конкретный конъюгат может эффективно лечить. Фактическая доза, которая должна вводиться, зависит от возраста, массы тела и общего состояния пациента, а также от тяжести состояния, которое лечится, решения врача и вводимого конъюгата. Терапевтически эффективные количества известны специалистам в данной отрасли и/или описываются в соответствующей справочной литературе. В целом, терапевтически эффективная доза будет варьироваться от приблизительно 0,001 до 100 мг, предпочтительно в дозах от 0,01 до 75 мг/день,и более предпочтительно в дозах от 0,10 до 50 мг/день. Разовая дозировка определенного конъюгата (снова предпочтительно предусмотренная как часть фармацевтического препарата) может вводиться в самых разных схемах дозирования, в зависимости от решения лечащего врача, потребностей пациента и т.д. Конкретные планы дозирования будут известны специалистам, обладающим обычными познаниями в данной области техники, или могут быть определены экспериментально с использованием стандартных методов. Типичные схемы дозирования включают,без ограничения, прием пять раз в день, четыре раза в день, три раза в день, два раза в день, один раз в день, три раза в неделю, два раза в неделю, раз в неделю, два раза в месяц, один раз в месяц, и любые их сочетания. Как только будет достигнут клинический результат, введение композиции прекращается. Одним из преимуществ приема конъюгатов, описанных в данном изобретении, является то, что может быть достигнуто снижение пресистемного метаболизма по сравнению с исходным лекарственным веществом; см., например, подтверждающие этот факт результаты, приведенные в примере 8. Подобный результат является благоприятным для многих лекарств, принимаемых перорально, которые в значительной степени метаболизируются при прохождении через пищеварительный канал. Таким образом,клиренс конъюгата может модулироваться с помощью отбора молекулярного размера олигомера, связи и расположения ковалентного связывания, обеспечивая желаемые свойства клиренса. Специалист, обладающий обычными познаниями в данной области техники, сможет определить идеальный молекулярный размер олигомера, основываясь на изложенной здесь информации. Предпочитаемые снижения пресистемного метаболизма для конъюгата по сравнению с соответствующим неконъюгированным низкомолекулярным лекарственным веществом включают по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30%; по меньшей мере приблизительно 40%; по меньшей мере приблизительно 50%; по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80% и по меньшей мере приблизительно 90%. Таким образом, изобретение предлагает способ снижения метаболизма активного вещества. Способ включает следующие этапы: предоставление монодисперсных или бимодальных конъюгатов, каждый из которых состоит из части молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества, ковалентно связанной посредством стабильной связи с водорастворимым олигомером, причем данный конъюгат демонстрирует пониженную скорость метаболизма по сравнению со скоростью метаболизма низкомолекулярного лекарственного вещества, не связанного с водорастворимым олигомером; и введение конъюгата пациенту. Обычно введение осуществляется посредством одного вида введения, выбранного их группы, состоящей из перорального введения, трансдермального введения, буккального введения,введения через слизистую оболочку, внутривагинального введения, ректального введения, парентерального введения и пульмонального введения. Будучи полезны в снижении многих видов метаболизма (включая и метаболизм фазы I и фазы II),конъюгаты особенно полезны в ситуациях, когда низкомолекулярные лекарственные вещества метаболизируются ферментами печени (например, одним или несколькими изоформами цитохрома Р 450) и/или одним или несколькими ферментами кишечника. Экспериментальная часть Необходимо понять, что хотя данное изобретение было описано в связи с предпочтительными и конкретными вариантами его осуществления, вышеизложенные описания, а также примеры, которые следуют после них, предназначены для того, чтобы проиллюстрировать, но не ограничить объем притязаний изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации в рамках объема притязаний изобретения будут очевидны для специалистов, обладающих знаниями в той области техники, к которой относится данное изобретение. Все химические реагенты, которые упоминаются в прилагаемых примерах, являются коммерчески доступными, если не оговорено иное. Приготовление иллюстративных мономолекулярных ПЭГ-меров описано в примере 9. Олиго(этиленгликоль)метиловые эфиры, использованные в примерах ниже, были монодисперсными и хроматографически чистыми, как было определено с помощью обращенно-фазной хроматографии. Все данные, полученные с помощью 1 ЯМР (ядерно-магнитного резонанса), были получены на ЯМР-спектрометре с частотой 300 МГц производства компании Bruker. Список конкретных соединений,а также источников этих соединений, приведен далее: 2-бромоэтил диметиловый эфир, 92%, Aldrich; 1 бромо-2-(2-метоксиэтокси)этан, 90%, Aldrich; CH3(OCH2CH2)3Br был получен из СН 3(OCH2CH2)3 ОН; три(этиленгликоль) монометиловый эфир, 95%, Aldrich; ди(этиленгликоль), 99%, Aldrich; три(этиленгликоль), 99%, Aldrich; тетра(этиленгликоль), 99%, Aldrich; пента(этиленгликоль), 98%, Aldrich; гекса(этиленгликоль), 97%, Aldrich; гидрид натрия, 95% сухой порошок, Aldrich; метансульфонил хлорид, 99%, АСЕ; тетрабутиламмонийбромид, Sigma. Пример 1. Синтез ПЭГ 3-3-налоксола. Структурная формула налоксола, иллюстративного низкомолекулярного лекарственного вещества,показана ниже. Данная молекула была получена (с защищенной гидроксильной группой) в рамках большей схемы синтеза, описанной в примере 2. Пример 2. Синтез ,-6-СН 3-(OCH2CH2)1-налоксола (,-ПЭГ 1-Nal). Получали ,-ПЭГ 1-налоксол. Схема данного синтеза представлена ниже. 2 А. Синтез 3-МЕМ-налоксона. Диизопропилэтиламин (390 мг, 3,0 ммоль) был добавлен к раствору налоксона HCl2H2O (200 мг,0,50 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) при перемешивании. Метоксиэтилхлорид ("MEMCl", 250 мг, 2,0 ммоль) был затем добавлен по каплям к вышеупомянутому раствору. Раствор перемешивали при комнатной температуре под N2 в течение ночи. Неочищенный продукт анализировали с помощью ВЭЖХ, которая показала, что 3-МЕМ-Oналоксон (1) образовался с 97% выходом. Растворители удаляли с помощью ротационного выпаривания с получением липкого масла. 2 В. Синтез смеси - и -эпимеров 3-МЕМ-налоксола (2). 3 мл 0,2 N NaOH добавляли к раствору 3-МЕМ-налоксона (1) (полученного в 2 А выше и использованного без дальнейшей очистки) в 5 мл этанола. К этому добавляли раствор NaBH4 (76 мг, 2,0 ммоль) в воде (1 мл) по каплям. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Этанол удаляли ротационным выпариванием, за которым следовало добавление раствора 0,1 N HCl, чтобы удалить избыток NaBH4 и довести значение рН до 1. Раствор промывали CHCl3, чтобы удалить избыток метоксиэтилхлорида и его производных (350 мл), затем добавляли K2CO3, чтобы поднять значение рН раствора до 8,0. Продукт экстрагировали CHCl3 (350 мл) и сушили над Na2SO4. Растворитель удаляли с помощью выпаривания с получением бесцветного липкого твердого вещества (192 мг, 0,46 ммоль,выход 92% выделенного продукта на основе налоксона HCl2 Н 2 О). ВЭЖХ показала, что данный продукт являлся смесью - и -эпимеров 3-МЕМ-налоксола (2). 2 С. Синтез смеси - и -эпимеров 6-CH3-OCH2CH2-O-3-МЕМ-налоксола (3 а).NaH (60% в минеральном масле, 55 мг, 1,38 ммоль) добавляли в раствор 6-гидроксил-3-МЕМналоксола (2) (192 мг, 0,46 ммоль) в диметилформамиде ("ДМФ", 6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре под N2 в течение 15 мин, после чего добавляли 2-бромоэтил метиловый эфир (320 мг, 2,30 ммоль) в ДМФ (1 мл). Затем раствор перемешивали при комнатной температуре под N2 в течение 3 ч. Анализ методом ВЭЖХ выявил образование смеси - и -6-СН 3-ОСН 2 СН 2-O-3-МЕМ-налоксола (3) с примерно 88% выхода. ДМФ удаляли с помощью ротационного выпаривания до получения белого липкого твердого вещества. Данный продукт использовался для последующих превращений без дальнейшей очистки. 2D. Синтез смеси - и -эпимеров 6-CH3-OCH2CH2-налоксола (4). Неочищенный - и -6-CH3-OCH2CH2-O-3-МЕМ-налоксол (3) растворяли в 5 мл CH2Cl2 с образованием непрозрачного раствора, к которому добавляли 5 мл трифторуксусной кислоты ("ТФК"). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Окончание реакции определялось на основании анализа с помощью ВЭЖХ. CH2Cl2 удаляли ротационным выпариванием, после чего добавляли 10 мл воды. К данному раствору добавляли достаточное количество K2CO3, чтобы удалить избыток ТФК и довести значение рН до 8. Затем раствор был экстрагирован CHCl3 (350 мл), а экстракты объединены и далее экстрагировались 0,1 N HCl раствором (350 мл). Значение рН полученной водной фазы было доведено до 8 добавлением K2CO3, после чего последовало дальнейшее экстрагированиеCHCl3 (350 мл). Объединенный органический слой затем высушивали Na2SO4. Растворители удаляли с получением бесцветного липкого твердого вещества. Это твердое вещество было очищено посредством двукратного прохождения через колонку с силикагелем (230 см) с использованием CHCl3/CH3OH (30:1) в качестве элюента с образованием липкого твердого вещества. Очищенный продукт определяли посредством 1 Н-ЯМР как смесь - и -эпимеров 6- 14018427 СН 3-ОСН 2 СН 2-налоксола (4), содержащую приблизительно 30%эпимера и приблизительно 70% эпимера [100 мг, 0,26 ммоль, 56% выход выделенного на основе 6-гидроксил-3-МЕМ-налоксола (2)]. 1 Н-ЯМР (, промиль, CDCl3): 6,50-6,73 (2 Н, мультиплет, ароматический протон налоксола), 5,78NaH (60% в минеральном масле, 38 мг, 0,94 ммоль) добавляли к раствору 3-МЕМ-налоксола [98 мг,0,24 ммоль из примера 2, показанный на схеме как (2)] в диметилформамиде ("ДМФ", 8 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в атмосфере N2 в течение 15 мин, затем добавляли раствор СН 3(OCH2CH2)3Br (320 мг, 1,41 ммоль) в ДМФ (1 мл). Полученный раствор нагревали под N2 в масляной бане в течение 2 ч. Анализ методом ВЭЖХ выявил, что необходимый продукт, смесь - и -6-CH3-(OCH2CH2)3-O-3 МЕМ-налоксола, был образован приблизительно с 95% выходом. ДМФ удаляли ротационным выпариванием для получения липкого белого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали без дальнейшей очистки. 3 В. Синтез смеси - и -эпимеров 6-CH3-(OCH2CH2)3-O-налоксола (,-ПЭГ 3-Nal). Неочищенная смесь - и -6-CH3-(OCH2CH2)3-O-3-МЕМ-налоксола из п.3 А выше была растворена в 3 мл CH2Cl2 с образованием мутного раствора, к которому добавляли 4 мл трифторуксусной кислоты("ТФК"). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Анализ методом ВЭЖХ выявил, что реакция завершилась. Растворитель CH2Cl2 удаляли ротационным выпариванием. К оставшемуся раствору добавляли 5 мл воды, а затем K2CO3, чтобы устранить избыток ТФК и довести значение рН до 8. Затем раствор экстрагировали CHCl3 (350 мл). Экстракты CHCl3 объединяли и экстрагировали 0,1 N HCl раствором (350 мл). Значение рН оставшейся водяной фазы было снова доведено до 8 посредством добавления K2CO3, за чем последовало экстрагирование CHCl3 (350 мл). Объединенные органические экстракты затем были высушены над Na2SO4. После удаления растворителей было получено бесцветное липкое твердое вещество. Это твердое вещество было очищено посредством двукратного прохождения через колонку с силикагелем (230 см) с использованием CHCl3/CH3OH (30:1) в качестве элюента. Очищенный продукт,смесь - и -эпимеров 6-CH3-(OCH2CH2)3-O-налоксола, содержащую приблизительно равные количества- и -эпимеров, была охарактеризована с помощью ЯМР (46 мг, 0,097 ммоль, 41% выхода выделенного продукта на основе 6-гидроксил-3-МЕМ-O-налоксона). 1 Н-ЯМР (, промиль, CDCl3): 6,49-6,72 (2 Н,мультиплет, ароматический протон налоксола), 5,79 (1 Н, мультиплет, олефиновый протонналоксола),5,17 (2 Н, мультиплет, олефиновые протоны налоксола), 4,71 (1 Н, дублет, С 5 протонналоксола), 4,52(1 Н, дублет, C5 протонналоксола), 3,89 (1 Н, мультиплет, С 6 протонналоксола), 3,56-3,80 (12 Н, мультиплет, ПЭГ), 3,39 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ, -эпимер), 3,38 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ, -эпимер), 3,22 (1 Н, мультиплет, С 6 протонналоксола), 1,14-3,12 (14 Н, мультиплет,протоны налоксола). 3 С. Разделение -6-СН 3-(OCH2CH2)3-O-налоксола и -6-СН 3-(OCH2CH2)3-O-налоксола. Приблизительно 80 мг неочищенной смеси - и -эпимеров ПЭГ 3-Nal растворяли в минимальном количестве CHCl3 и загружали в колонну с силикагелем (230 см), приготовленную с использованиемCHCl3. Колонну осторожно элюировали смесью CHCl3/CH3OH (60:1). Чистый -ПЭГ 3-Nal был первым элюированным веществом (26 мг, 33% выделенный выход), за которым последовал чистый -ПЭГ 3-Nal(30 мг, 38% выделенный выход). Оба соединения были бесцветными липкими твердыми веществами. ПЭГ 3-Nal, 1 Н-ЯМР (, промиль, CDC13): 6,49-6,73 (2 Н, двойной дублет, ароматический протон налоксола), 5,79 (1 Н, мультиплет, олефиновый протон налоксола), 5,17 (2 Н, триплет, олефиновые протоны налоксола), 4,71 (1 Н, дублет, C5 протон налоксола), 3,81 (1 Н, мультиплет, С 6 протон налоксола), 3,57-3,80,-6-CH3-(OCH2CH2)5-O-налоксол (",-ПЭГ 5-Nal") и ,-6-СН 3-(OCH2CH2)7-O-налоксол (",ПЭГ 7-Nal") были приготовлены аналогичным способом, и их отдельные изомеры были разделены и выделены. Пример 4. Биодоступность при пероральном введении ПЭГ-меров налоксола. Самки крыс линии Sprague Dawley (весом 150-200 г) были получены из лаборатории Harlan Labs. В наружные яремные вены крыс были введены канюли, а затем животным дали возможность акклиматизироваться в течение 72 ч до того, как начнется исследование. Ночью животных не кормили (день -1), но воду они могли пить свободно. Утром того дня, в который начиналось введение препарата (день 0), каждую крысу взвесили и в канюли ввели гепарин (1000 ед/мл). После этого с помощью питательной трубки животным перорально ввели (через желудочный зонд) водные составы, которые содержали либо ПЭГ-илированное, либо чистое лекарственное вещество. Доза определялась в мг/кг в зависимости от веса крысы. Общий объем дозы не превышал 10 мл/кг. Через определенные промежутки времени (1, 2 и 4 ч) через канюлю отбирались анализы крови (приблизительно 1,0 мл), помещались в пробирки для центрифуги объемом 1,5 мл, в которых уже находилось 14 мкл гепарина, содержимое размешивалось и центрифугировалось, чтобы отделить плазму крови. Образцы плазмы замораживали ( -70C) до проведения количественного анализа. Образцы плазмы очищали с использованием осадительного метода, и анализируемое вещество экстрагировали и подвергали количественному анализу с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЖХ) с масс-селективным детектором (МСД). Стандартные образцы были приготовлены таким же образом, чтобы построить калибровочную кривую, из которой концентрация неизвестных образцов могла бы быть экстраполирована. Если это было целесообразно, в анализе использовался внутренний стандарт. Избранные свойства исследуемых соединений (такие как молекулярный вес и растворимость) подытожены в табл. I. Фермент-связывающая активность in-vitro некоторых исследуемых соединений также приводится как значения IC50 в табл. 1. Таблица I Некоторые свойства исследуемых соединений Связывающая активность мю-опиатных рецепторов для серии соединений налоксона Была рассчитана биодоступность каждого изомера в серии соединений налоксона при пероральном введении и приведена в табл. II. Доза для перорального приема налоксона составляла 5 или 10 мг/кг, а дозы для ПЭГ-илированных соединений были нормированы к дозе 1 мг/кг. Профили концентрации в плазме в зависимости от времени для данных соединений приведены на фиг. 1. Таблица II Значения биодоступности серии соединений налоксона Вышеуказанные результаты показывают, что ПЭГ-илирование малых, липофильных соединений,таких как налоксон (свободная основная форма), повышает их растворимость и биодоступность при пероральном введении. С другой стороны, связывание олигомерных ПЭГ также повышает молекулярный вес исходного соединения (более чем приблизительно 500 Да), что, в свою очередь, может ограничивать проникновение при пероральном приеме очень водорастворимых соединений, в частности, с повышением длины ПЭГ-мера. Пример 5. Перенос через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) ПЭГ-меров налоксона. Для данных экспериментов использовалась техника перфузии нетронутого головного мозга крысыin situ, чтобы (i) определить проникновение лекарственного вещества через ГЭБ в обычных физиологических условиях и (ii) изучить механизмы переноса, такие как пассивная диффузия в сравнении с опосредованным носителем переносом. Перфузия выполнялась с использованием метода одного момента времени. Вкратце, перфузионная жидкость (перфузат), содержащая исследуемое соединение (соединения) вливалась крысам через левую внешнюю сонную артерию с постоянной скоростью с помощью инфузионного насоса (20 мл/мин). Скорость перфузионного потока была установлена так, чтобы полностью доставить поток жидкости до мозга при нормальном физиологическом давлении (80-120 мм рт. ст.). Продолжительность перфузии составляла 30 с. Сразу же после перфузии проводили перфузию сосудов мозга на протяжении дополнительных 30 с перфузатом без лекарственного вещества, чтобы удалить остатки лекарства. Насос останавливали и мозг немедленно удаляли из черепа. Образцы левого полушария каждой крысы сначала взвешивались, а затем гомогенизировались на гомогенизаторе Polytron. Четыре (4) мл 20%-ного метанола добавляли к каждому мозгу крыс для гомогенизации. После гомогенизации измеряли и регистрировали общий объем гомогената. Измеряемое количество гомогената было разведено органическим растворителем и позднее центрифугировано. Была удалена надосадочная жидкость, выпарена в потоке азота, восстановлена и проанализирована с помощью ЖХ/МС/МС. Определение уровня концентраций лекарственного вещества в гомогенате мозга было выполнено по отношению к калибровочной кривой, построенной с помощью впрыскивания лекарственных веществ в чистый (т.е. без присутствия в нем лекарственных средств) гомогенат мозга. Анализ уровней концентрации в гомогенатах мозга проводили три раза, а значения использовались для расчета скорости накопления в мозге в пмоль на грамм мозга крысы за секунду перфузии. В каждом перфузионном растворе присутствовал атенолол (целевая концентрация, 50 мкМ), антипирин (целевая концентрация, 5 мкМ) и исследуемое соединение (налоксон или ПЭГn-Nal) в целевой концентрации 20 мкМ. Накопление через ГЭБ каждого исследуемого соединения было рассчитано, нормировано и зарегистрировано в табл. III. Все данные были нормированы к 5 мкМ вводимого раствора при скорости перфузии 20 мл/мин в течение 30 с. Таблица III Накопление через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) исследуемых соединений Вышеприведенные результаты показывают, что ПЭГ-илирование липофильного соединения, такого как ретиноевая кислота и налоксон, может значительно снизить интенсивность поглощения мозгом("ИПМ"). Было отмечено снижение ИПМ в 16 раз для ПЭГ 5-Nal и ПЭГ 7-Nal. Таким образом, в целом, неожиданно было открыто, что посредством связывания малых водорастворимых полимеров с налоксоном можно оптимизировать профиль доставки лекарственного средства посредством модифицирования его способности пересекать биологические мембраны, такие как мембраны, связанные с барьером желудочно-кишечного тракта, гематоэнцефалическим барьером, плацентарным барьером и т.п. Более важным открытием является то, что в случае с налоксоном, который принимается перорально, связывание одного или нескольких небольших водорастворимых полимеров является эффективным для существенного снижения скорости переноса такого препарата через биологический барьер, например гематоэнцефалический. В идеале, на перенос такого модифицированного препарата через желудочно-кишечный тракт не оказывается негативного воздействия в значительной степени, хотя перенос через биологический барьер, такой как гематоэнцефалический барьер, в значительной степени подавляется, а биодоступность модифицированного препарата при пероральном введении остается на клинически эффективном уровне. Данные, полученные в примерах 4 и 5, были изображены в виде графика, чтобы сравнить влияние размера ПЭГ на относительную биодоступность при пероральном введении и перенос через ГЭБ налок- 17018427 сона, см. фиг. 2-4. На фиг. 2 изучается влияние ковалентного связывания ПЭГ 3-мера, ПЭГ 5-мера и ПЭГ 7-мера на биодоступность налоксона при пероральном введении. На фиг. 3 показано влияние ковалентного связывания подобных ПЭГ-меров на пересечение гематоэнцефалического барьера налоксоном. На фиг. 4 показано, что соединения ПЭГn-Nal обладали более высокой биодоступностью при пероральном введении, чем налоксон. Как можно увидеть из данных графиков, с повышением размера ПЭГ олигомера, значительно снижается интенсивность поглощения через ГЭБ, тогда как биодоступность при пероральном введении возрастает по сравнению с исходной молекулой. Разница в биодоступности при пероральном введении между - и -изомерами налоксона может иметь место благодаря различиям в их физико-химических свойствах. Один изомер немного более липофильный, чем другой, что, таким образом, приводит к небольшим отличиям в биодоступности при пероральном введении. Пример 6. Метаболизм ПЭГ-налоксола in vitro. Для изучения влияния ПЭГ-илирования на фазу II метаболизма (глюкуронидацию) налоксона был разработан метод in vitro. Процедура предусматривала приготовление раствора НАДФН воспроизводящей системы (НВС). Раствор НВС готовится путем растворения бикарбоната натрия (22,5 мг) в 1 мл деионизированной воды. В данный раствор добавляли В-никотинамидадениндинуклеотидфосфата натриевую соль или НАДФ (1,6 мг), глюкозо-6-фосфат (7,85 мг), глюкозо-6-фосфат дегидрогеназу (3 мкл), уридин 5-дифосфоглукороновой кислоты тринатриевую соль или УДФГК (2,17 мг), 3-фосфоаденозин-5 фосфосульфат литиевую соль или ФАФС (0,52 мг) и 1 М раствора хлорида магния (10 мкл). После того как растворялись все твердые вещества, раствор хранили на ледяной бане. 30 мМ исходного раствора исследуемого вещества готовили путем растворения навесок налоксонаHCl, 6-m-ПЭГ 3-O-налоксона, -6-m-ПЭГ 5-O-налоксона и -m-ПЭГ 7-O-налоксона в 1 мл деионизированной воды. Микросомы самцов крыс линии Sprague Dawley (0,5 мл при концентрации 20 мг/мл; М 00001, полученные от компании In-vitro Technologies, Балтимор, штат Мэриленд) были удалены из морозильной камеры и разморожены на ледяной бане. 40 мкл микросом печени разводили до 100 мкл 60 мкл деионизированной воды в пробирке. В пробирку добавляли трис-буфер, рН 7,4 (640 мкл) и запас исследуемого образца (10 мкл), чтобы получился объем 750 мкл. Каждая пробирка и раствор НВС были отдельно помещены на водяную баню с температурой 37C на 5 мин. В каждую пробирку добавляли раствор НВС (250 мкл). При добавлении НВС в первую пробирку был запущен таймер реакции. Каждый образец (200 мкл) собирали, а затем добавляли перхлорную кислоту (20 мкл) для завершения реакции. Образцы были собраны в следующие моменты времени: 0-2,20, 40 и 60 мин. Все пробирки закрытыми хранились на ледяной бане. В каждую пробирку добавляли ацетонитрил (100 мкл), затем пробирки центрифугировались при 3000g в течение 5 мин. Надосадочную жидкость (230 мкл) отбрасывали, а затем 10 мкл исследуемого раствора подвергали количественному анализу с использованием метода ЖХ/МС. Концентрация исследуемого вещества в каждом образце была измерена и зафиксирована в каждый момент времени. В табл. IV перечислено процентное содержание активного остатка после инкубации с микросомами печени. Таблица IV Процентное содержание активного остатка после инкубации с микросомами печени Принимая во внимание результаты, приведенные в табл. IV, можно сделать вывод, что ПЭГилирование олигомером снижает скорость глукоронидации малой молекулы, такой как налоксол. Более того, с увеличением цепочки ПЭГ олигомера, скорость глукоронидации снижается. Кроме этого, сравнение -изомеров и -изомеров ПЭГ 3-налоксола показывает, что -изомер является плохим субстратом для цитохромных изоферментов Р 450 в выделенных микросомах печени крыс. Данное наблюдение подтверждает данные in-vivo, проиллюстрированные на фиг. 4. Возвращаясь к данным на фиг. 5 и 6, оказывается, что связывание малых ПЭГ может быть эффективным для снижении скорости метаболизма лекарственного вещества (на что указывает образование глукоронида в случае налоксона). Причиной более высоких уровней -изомера в крови по сравнению с-изомером, скорее всего, является значительное предупреждение эффекта "первого прохождения", т.е. значительное предотвращение объема пресистемного метаболизма (фиг. 4), что является результатом ковалентного связывания олигомерной ПЭГ молекулы. Молекула ПЭГ может создавать стерические препятствия и/или создавать гидрофильные или гидрофобные эффекты, которые при связывании ПЭГ с формой -изомера, изменяют сродство конъюгата -изомера с цитохромными изоферментами Р 450 в более значительной степени, чем в случае, когда ПЭГ присоединяется к форме -изомера. Уровни метаболита -изомера ниже по сравнению с метаболитом -изомера и не-ПЭГ-илированным налоксоном. Пример 7. Влияние разных опиоидных антагонистов на мю-опиатные рецепторы. В отдельных сериях экспериментов биоактивность налоксона, других опиоидных антагонистов и различных конъюгатов в отношении мю-опиатных рецепторов определялась in vitro. Результаты сведены в табл. V. Таблица V Активность налоксона и конъюгатов ПЭГn-6-налоксола в отношении мю-опиатных рецепторов in-vitro В вышеприведенной таблице для каждого соединения биоактивность приводится как мера относительной биоактивности каждого из различных конъюгатов ПЭГ в сравнении с исходным лекарственным веществом. ЕС 50 - это концентрация агониста, которая вызывает реакцию на полпути между базовым уровнем и максимальной реакцией на стандартной кривой зависимости "доза-эффект". Как можно заметить из вышеприведенных данных, каждый из конъюгатов ПЭГn-Nal является биоактивным и, фактически, все конъюгаты 6-налоксона или налоксола сохраняли степень биоактивности, которая составляет по меньшей мере 5% или более биоактивности исходного лекарственного вещества, при этом уровень биоактивности варьируется от приблизительно 5 до приблизительно 35% от биоактивности немодифицированного исходного соединения. В понятиях биоактивности ПЭГ 550-6-NH-налоксон обладает приблизительно 13% биоактивности исходного соединения (6-NH2-налоксон), -ПЭГ 3-Nal обладает приблизительно 30% биоактивности исходного соединения (-6-ОН-налоксол) и -ПЭГ 3-Nal обладает приблизительно 35% биоактивности исходного соединения (-6-ОН-налоксол). Пример 8. Метод получения олиго(этиленгликоль) метиловых эфиров с, по существу, мономолекулярным весом и их производных. Мономолекулярные (монодисперсные) ПЭГ настоящего изобретения были получены, как подробно изложено ниже. Данные мономолекулярные ПЭГ были особенно полезными в обеспечении модифицированных активных веществ данного изобретения и в придании желаемой модификации свойств переноса через барьеры активных веществ, о которых идет речь. Метод, показанный ниже, представляет собой еще один аспект настоящего изобретения, т.е. метод получения монодисперсных олиго(этиленоксид) метиловых эфиров из монодисперсных олиго(этиленгликолей) с низким молекулярным весом, используя галогенпроизводное (например, бромопроизводное) олиго(этиленоксида). Также здесь предусмотрен в другом аспекте изобретения метод связывания олиго(этиленоксид) метилового эфира (из соединения с мономолекулярным весом) с активным веществом с использованием галогенпроизводного олиго(этиленоксид) метилового эфира. Схематически реакция может быть представлена следующим образом: Тетра(этиленгликоль) (55 ммоль, 10,7 г) растворяли в 100 мл тетрагидрофурана ("ТГФ") и к этому раствору добавляли KOtBu (55 мл, 1,0 М в ТГФ) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего следовало капельное добавлениеCH3OCH2CH2Br (55 ммоль, 5,17 мл в 50 мл ТГФ). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего проводили экстракцию H2O (300 мл)/CH2Cl2 (3300 мл). Органические экстракты объединяли и затем сушили над безводным Na2SO4. После отфильтровывания твердого осушителя и удаления растворителя путем выпаривания восстановленный неочищенный осадок очищали колоночной хроматографией с использованием колонки с силикагелем (CH2Cl2:CH3OH=60:140:1), чтобы получить чистый пента(этиленгликоль) монометиловый эфир (выход 35%). 1 Н-ЯМР (CDCl3)3,753,42 (m, 20 Н, ОСН 2 СН 2 О), 3,39 (s, 3H, МеО). 8 В. Синтез CH3O-(СН 2 СН 2 О)7-Н с использованием MeOCH2CH2Br. К раствору гекса(этиленгликоля) (10 г, 35 ммоль) и 2-бромоэтилметилового эфира (4,9 г, 35 ммоль) в ТГФ (100 мл) медленно добавляли гидрид натрия (2,55 г, 106 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. ВЭЖХ показала, что m-ПЭГ 7-ОН был образован приблизительно с 54% выходом. Затем реакция была остановлена добавлением разбавленной соляной кислоты, чтобы разрушить избыток гидрида натрия. Все растворители были удалены с использованием ротационного выпаривания с получением липкой жидкости коричневого цвета. Чистый m-ПЭГ 7 ОН получали в виде бесцветной жидкости (4,9 г, 41% выделенного выхода) с помощью полупрепаративной ВЭЖХ (204 см, С 18 колонна, ацетонитрил и вода в качестве подвижных фаз). 1H-ЯМР (CDCl3): 2,57 промиль (триплет, 1 Н,ОН); 3,38 промиль (синглет, 3 Н, CH3O); 3,62 промиль (мультиплет, 30 Н, OCH2CH2). 8 С. Синтез CH3O-(СН 2 СН 2 О)5-Br. Триэтиламин (5,7 мл, 40 ммоль) добавляли к СН 3 О-(СН 2 СН 2 О)5-ОН (5,0 г, 20 ммоль) при перемешивании. Раствор охлаждали на ледяной бане под N2 и по каплям добавляли 2,5 мл метансульфохлорида(32 ммоль) в течение 30 мин. Затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси была добавлена вода (40 мл) и раствор экстрагировали CH2Cl2 (3150 мл), а органическую фазу промывали 0,1 N HCl (380 мл) и водой (280 мл). После высушивания Na2SO4 и удаления растворителя была получена светло-коричневая жидкость. Данный продукт и Bu4NBr (12,80 г, 39,7 ммоль) растворяли в CH3CN (50 мл), а полученный раствор перемешивали под N2 и при 50C в течение 15 ч. После охлаждения до комнатной температуры CH3CN удаляли посредством ротационного выпаривания до получения жидкости красного цвета, которую растворяли в 150 мл воды и экстрагировалиEtOAc (2200 мл). Органическую фазу объединяли, промывали водой и сушили над Na2SO4. После удаления растворителя была получена жидкость красного цвета (4,83 г, 77,4%). 1H-ЯМР (300 Гц, CDCl3):3,82 (t, 2H), 3,67 (m, 14H), 3,51 (m, 2H), 3,40 (s, 3H). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Химически модифицированный налоксол, представляющий собой соединение, выбранное из группы, состоящей из 6-CH3-(OCH2CH2)5-O-налоксола; 6-СН 3-(OCH2CH2)6-O-налоксола; 6-СН 3-(OCH2CH2)7-O-налоксола; 6-СН 3-(OCH2CH2)8-O-налоксола и 6-CH3-(OCH2CH2)9-O-налоксола, или его фармацевтически приемлемую соль, причем модифицированный налоксол является -6 изомером, -6-изомером или смесью -6- и -6-изомеров. 2. Химически модифицированный налоксол по п.1, выбранный из группы, состоящей из,-6-СН 3-(OCH2CH2)9-O-налоксола, или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Химически модифицированный налоксол по п.2, представляющий собой ,-6-CH3-(OCH2CH2)7O-налоксол или его фармацевтически приемлемую соль. 4. Химически модифицированный налоксол по п.1, выбранный из группы, состоящей из-6-CH3-(OCH2CH2)9-O-налоксола, или его фармацевтически приемлемая соль. 5. Химически модифицированный налоксол по п.4, представляющий собой -6-CH3-(OCH2CH2)7-Oналоксол или его фармацевтически приемлемую соль. 6. Химически модифицированный налоксол по п.1, выбранный из группы, состоящей из-6-СН 3-(OCH2CH2)9-O-налоксола; или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Химически модифицированный налоксол по п.1, представляющий собой -6-CH3-(OCH2CH2)7-Oналоксол или его фармацевтически приемлемую соль. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая химически модифицированный налоксол по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый наполнитель. Биодоступность налоксона и - и -изомеров ПЭГ-Nal у крыс при пероральном введении Влияние длины цепочки ПЭГ на перенос через ГЭБ ПЭГ-Nal и налоксона у крыс линии Sprague-Dawley Фиг. 2 Влияние длины цепочки ПЭГ на перенос через ГЭБ ПЭГ-Nal и налоксона у крыс линии Sprague-Dawley Фиг. 3 Фармакокинетика налоксона и ПЭГ-налоксола у крыс после перорального введения через желудочный зонд (5 мг/кг, n=3, СПС) Метаболизм налоксона и ПЭГ-6-налоксола у крыс после перорального введения Фиг. 5 Уровни глукоронида в плазме крыс после перорального введения налоксона и ПЭГ-налоксола (n=3,СПС)