Содержащая флавонол сухая композиция растительного происхождения и способы ее использования

1 Настоящее изобретение относится к содержащей флавонол сухой композиции растительного происхождения, а также относится к ее различным применениям. Высокое потребление вина во Франции считали важным диетическим фактором в низкой частоте смертности от ишемической болезни сосудов сердца (ИБС), и предполагалось, что,по меньшей мере, частично оно обеспечивает объяснение феномена, известного как "Французский парадокс" (Renaud and De Lorgeril 1992), заключающегося в том, что Франция является исключением в сравнении с большинством других стран, поскольку смертность от ИБС в этой стране низкая, несмотря на высокое потребление насыщенных жиров. Существует большая литература по заявленным полезным эффектам красного вина в отношении предупреждения ИБС. Эпидемиологические данные позволяют предположить, что защита, обеспечиваемая вином, превосходит защиту другими алкогольными напитками, такими как пиво и спиртные напитки, а это указывает на то, что этот эффект вызывается не содержанием алкоголя, а иными факторами, содержащимися в вине (St.Leger et al., 1979; Renaud and De Lorgeril, 1992). В рассчитанном на перспективу исследовании в Копенгагене, Дании, оценивали многочисленные параметры, в том числе прием алкоголя, привычку к курению и показатель веса тела у 13,285 людей, с одновременным 12-летним прослеживанием смертности. Было доказано, что низко-умеренное потребление вина (но не пива или спиртных напитков) ассоциировалось с более низкой смертностью от сердечных и мозговых сосудистых заболеваний и других причин (Gronbaek et al.,1995). Эти результаты подтвердили данные, полученные ранее в США (Klatsky and Armstrong,1993). Имеется растущее доказательство, что радикальная цепная реакция перокисления липидов, включающая в себя окисление липопротеинов низкой плотности (ЛНП) играет важную способствующую роль в развитии атеросклероза и ИБС (Steinberg, 1993).Frankel et al. (Lancet 1993, 341, 454-457) исследовали способность разбавленного красного вина с удаленным спиртом ингибировать окисление ЛНП человека in vitro и нашли, что это вино является очень активным в качестве антиоксиданта. Авторы предположили, что частое употребление красного вина может "снижать окисление липопротеинов и уменьшать тромботические явления". Однако авторы признались, что "мы нуждаемся в дополнительных знаниях о фармакокинетике флавоноидов вина и абсорбции и метаболизме фенолов вина , если мы должны дать дополнительную оценку потенциальной роли антиоксидантных соединений в красном вине в снижении ИБС". 2 Флавоноиды относятся к группе веществ,называемых полифенолами, названными так потому, что они содержат две или более фенольных групп. Полифенолы присутствуют в большом количестве в красном вине и состоят из большого числа различных химических веществ с непостоянными молекулярными массами. Основные полифенольные компоненты винограда и вина и их концентрации описаны Shahidi and Nazck (1995) in "Food phenolics: sources,chemistry, effects and applications" (TechnomicPublishing Co., Lancaster Pa, USA), p. 136-146. Среди полифенолов существуют следующие классы: флавоноиды (термин, часто используемый для обозначения полифенолов в общем, но более обычно в Европе для обозначения только флавонов), флавонолы, проантоцианидины(также называемые процианидолы, процианины,процианидины и таннины) и антоцианины (антоцианидины). Флавоны представляют собой соединения общей структуры, показанной на фиг. 2, в которой два бензольных кольца (А и В) связаны с гетероциклическим шестичленным кольцом С,содержащим карбонильную группу. Кольцо В может быть присоединено в положении 2 (как показано) с образованием флавона или в положении 3 с образованием изофлавона. Гидроксилирование может иметь место в положениях 3,5, 7 и 3', 4', 5' с образованием соединений, называемых флавонолами. Типичными примерами флавонолов являются: кверцитин (гидроксилированный в положениях 3, 5, 7, 3', 4'), кемпферол (гидроксилированный в положениях 3, 5, 7,4') и мирицетин (гидроксилированный в положениях 3, 5, 7, 3', 4', 5'). Они могут существовать природно в виде агликонов или в виде Oгликозидов (например, D-глюкозы, галактозы,арабинозы, рамнозы и т.д.). Также находили и другие формы замещения, такие как метилирование, сульфатирование и малонилирование. Флавонолы имеют общую структуру, показанную на фиг. 3. Двумя наиболее известными флавонолами являются катехин (гидроксильные группы в положениях 5, 7, 3', 4') и его стереоизомер эпикатехин. Гидроксильные группы могут быть этерифицированы галловой кислотой (показано на фиг. 4). Проантоцианидины являются полимерами катехина и/или эпикатехина и могут содержать до 8 или более единиц этих мономеров. Антоцианины являются окрашенными веществами с основной структурой, показанной на фиг. 5. Их еще называют антоцианидинами. Типичными примерами являются: цианидин (гидроксилированный в положениях 3, 5, 7, 3', 4'),дельфинидин (гидроксилированный в положениях 3, 5, 7, 3', 4', 5') и пеларгонидин (гидроксилированный в положениях 3, 5, 7, 3'). Гидроксильные группы обычно гликозилированы и/или метоксилированы (например, мальвидин при 3', 5'). 3 В общий термин "полифенолы" включены дигидрокси- или тригидроксибензойные кислоты и фитоалексины, типичным примером которых является резвератрол (показанный на фиг. 6). Наиболее широко используемым методом определения окисления ЛНП является применение переходного металла - меди (в частности,ионы Сu2+) в качестве катализатора для промотирования окисления эндогенных гидропероксидов липидов. Антиоксиданты, присутствующие в ЛНП, особенно альфа-токоферол, задерживают процесс окисления и обеспечивают так называемую лаг-фазу. Этот процесс легко проследить УФ-спектрофотометром, поскольку реакция окисления производит конъюгированные диены, которые можно непрерывно наблюдать при 234 нм (Esterbauer et al., 1989). Для защиты ЛНП от окисления во время хранения добавляют ЭДТК для комплексования меди и других микроэлементов. Этот избыток ЭДТК мешает катализируемому медью окислению. ЭДТК может быть удалена диализом препарата ЛНП перед добавлением ионов меди, или избыток ионов меди может быть добавлен для компенсации ионов меди, скомплексованных с ЭДТК. Результаты экспериментов in vitro в некоторой степени сходные с результатами, описанными Frankel et al., (Lancet 1993, цитир. выше),сообщались также Frankel et al. в 1995 г. (J. Agricult. and Food Chemistry 43, 890-894). Авторы этой публикации обращают внимание на сложность интерпретации данных in vitro. Так, "хотя фенольные соединения имеют сходные химические свойства, их восстанавливающая способность не является очень точным предсказателем их антиоксидантной активности. При исследовании окисления ЛНП и других тестах на антиоксидантную активность система обычно является гетерогенной, и физические свойства, такие, как липофильность, растворимость и распределение между водной и липидной фазами ЛНП, могут стать важными в определении антиоксидантной активности". Действительно, специалистам в данной области понятно, что экстраполяция открытийin vitro на ситуации in vivo часто бывает непригодна. В качестве примера читатель ссылается на публикацию McLoone et al., (1995 Proc. Nutr.Soc. 54, Abstract 168A), которая показывает, что,хотя лютеин обладает потенциалом ингибирования окисления ЛНП in vitro, дополнение пищевого рациона добровольцев лютеином в течение 2 недель (что давало 6-кратное увеличение уровней лютеина в кровяной плазме) не влияло на окисление ЛНП. Некоторые испытания in vivo проводились для исследования возможной пользы красного вина для здоровья. Fuhrman et al., (1995, Am. J. 4 красном вине, но не в белом вине, всасываются,связываются с ЛНП кровяной плазмы и могут быть ответственными за антиоксидантные свойства красного вина", и обеспечили, по их словам, первую демонстрацию того, "что потребление красного вина ингибирует склонность ЛНП подвергаться липидному перокислению" и что это может способствовать ослаблению атеросклероза. Однако исследование Sharpe et al.,результаты которого были опубликованы (Q. J.Med. 1995, 88,101-108) почти одновременно с результатами Fuhrman et al., нашли, что ни потребление красного вина, ни потребление белого вина не имело какого-либо действия "на общий холестерин, триглицериды, липиды высокой плотности или на измерения антиоксидантного состояния, в том числе на восприимчивость ЛНП к окислению".De Rijke et al. также исследовали этот вопрос и провели рандомизированное двойное слепое исследование. Они сообщили свои результаты в 1996 году (Am. J. Clin. Nutr. 63, 329334), утверждая, что "результаты этого исследования не показывают полезного эффекта потребления красного вина на окисление ЛНП". Таким образом, суммируя, можно сказать,что имеется несколько сообщений о том, что разбавленное красное вино может ингибировать окисление ЛНП в тестах in vitro, но что эти открытия необязательно могут быть распространены на ситуацию in vivo. Кроме того, данные in vivo в отношении ингибирования окисления ЛНП употреблением красного вина являются в лучшем случае противоречивыми, и нет ясного доказательства для предположения, что потребление красного вина оказывает какоелибо действие на окисление ЛНП. В настоящее время в открытой продаже имеется ряд композиций, приготовленных из побочных продуктов вина или винограда и которые могут содержать полифенолы (хотя в крайне низких уровнях в некоторых из этих композиций). Среди них - капсулы "Французский Парадокс" (от фирмы Arkopharma). Капсулы "Французский Парадокс" получают приготовлением экстракта из мезги (отходов в виде виноградной кожицы, остающейся после ферментации вина). Большинство полифенолов,присутствующих в виноградной кожице, являются спирторастворимыми и, следовательно,склонны экстрагироваться в ферментирующееся вино. Таким образом, капсулы "Французский Парадокс" в действительности имеют довольно низкое содержание полифенолов. Другие доступные в открытой продаже композиции включают в себя антоцианинсодержащий порошок(от фирмы Sefcal), получаемый из экстракта виноградной кожицы и используемый в качестве пищевого красителя, и проантоцианидинсодержащую композицию ("Эндотелон"), приготовленную из виноградных косточек. 5 Даже если бы капсулы "Французский Парадокс" содержали значительное количество полифенолов, не ясно, обеспечивает ли пероральное употребление такой синтетической полифенольной композиции тот же терапевтический эффект, который якобы связан с потреблением красного вина. Например, как объясняетGoldberg (1995, Clin. Chem., 41, 14-16), содержание алкоголя в вине поддерживает полифенолы растворенными и в вине, и в кишечнике человека, так чтобы они могли в нем всасываться. Синтетический безалкогольный полифенольный порошок может оказаться совершенно неэффективным, поскольку полифенолы в отсутствие алкоголя являются недостаточно растворимыми в кишечнике для их абсорбции. Кроме того, абсорбция в кровоток может быть недостаточной для какого-либо антиоксидантного действия,проявляемого в отношении ЛНП, и может потребоваться тесная связь полифенолов с фракцией ЛНП. Общепризнанно, что механизм окисления свободных радикалов провоцирует многие заболевания, например, рак, катаракту, диабет и т.д. Считают, что антиоксиданты, содержащиеся в пищевых веществах, такие как витамин Е, витамин С и другие, предотвращают окисление радикалов во многих органах и тканях. Таким образом, абсорбция полифенолов, которые являются эффективными антиоксидантами, повидимому, оказывает действие, как правило, на заболевания, связанные со свободными радикалами/окислением, и применение полифенолов может быть гораздо более широким, чем предупреждение ИБС. Тем не менее, ИБС представляет собой одну из главных причин смертности и заболеваемости в западном мире и, следовательно, представляет особый интерес. Патогенез этого состояния состоит, по существу, в двухстадийном процессе, включающем в себя сначала развитие атеросклеротических бляшек и затем образование тромба из бляшки (процесс, называемый тромбозом), который может вызвать закупорку артерии, последствием чего может быть инфаркт миокарда и внезапная смерть. Другими заболеваниями, которые обусловлены тромбозом, являются удар (кровоизлияние в мозг) и внезапный тромбоз. Начальной стадией в образовании тромба является агрегация тромбоцитов, которые затем выделяют факторы свертывания в кровь, приводя к образованию фибриновых сгустков. Как только образуются сгустки крови, они могут быть удалены посредством процесса, известного как фибринолиз, который,по существу, представляет собой растворение сгустков и деградацию фибрина для продуктов деградации. Таким образом, существуют, по меньшей мере, два процесса, при помощи которых может быть предотвращен тромбоз: ингибирование агрегации тромбоцитов и усиление фибринолиза. 6 Аномальная пролиферация клеток гладкой мышечной ткани сосудов может способствовать образованию закупоривающих повреждений при ишемической болезни сердца, атеросклерозе, рестинозе, инсульте и неоплазмах гладкой мускулатуры пищеварительного тракта и матки,фиброиде или фиброме матки. В течение многих лет было известно, чтоTGF- является одним из наиболее сильных ингибиторов клеточного роста (Massaque, 1990),и несколько авторов обнаружили, что TGFингибирует пролиферацию клеток гладкой мускулатуры сосудов (Assolian, 1986; Bjorkerud,1991; Owens, 1988; Kirschenlohr, 1993). Клетки гладкой мускулатуры сосудов человека продуцируют TGF- в латентной, неактивной форме,которая активируется протеолитически сериновым белком плазмином, который, в свою очередь, образуется из плазминогена семейством активаторов плазминогена, таких как тканевый активатор плазминогена (tPA) (Lyons, 1990). Увеличение общего TGF- в плазме считают эффективным в ингибировании роста клеток гладкой мускулатуры сосудов, поскольку латентная форма превращается плазмином в активную форму. Несколькими авторами разработаны методы оценки уровня TGF- в плазме крови и для поиска фармацевтических соединений, которые могут стимулировать образование TGF как в латентной, так и в активной форме. В патенте США 5,545,569 (Grainger et al.) раскрыт способ определения in vitro эффективности соединений,которые повышают уровень TGF- в плазме и стимулируют его образование, с применением описанным там же способов. В WO 94/26303(Grainger et al.) описан способ поддержания или увеличения диаметра просвета сосуда у патологического или поврежденного сосуда млекопитающего путем введения эффективного количества активатора TGF- или стимулятора его образования. Заявляется, что соединение Тамоксифен (транс-2-[4-(дифенил-1-бутанил)фенокси] диметилэтиламин) является эффективным, так как оно стимулирует продуцирование TGF- и увеличивает отношение активного TGF- к латентному TGF-. Другим соединением, обнаруживающим активность, является аспирин(Grainger, et al., 1995), который увеличивает как общий, так и активный сывороточный TGF- у здоровых людей, но только общий TGF- у ишемических больных. Распространенность (Elwood et al., 1991) и частоту (Thaulou et al., 1991) ИБС также в значительной степени связывали с усилением агрегации тромбоцитов. Их агрегацию удобно исследовать с применением агрегометра тромбоцитов, в котором суспензию тромбоцитов, свежевыделенных из крови, вводят в контакт с агонистом, вызывающим агрегацию. Могут использоваться многие агонисты, но наиболее ти 7 пичными являются арахидоновая кислота, АДФ,коллаген и тромбин. На основании измерения максимальной агрегации (%) можно исследовать действия ингибиторов агрегации тромбоцитов, которые могут предоставляться субъекту перорально или инъекцией. Одним из наиболее эффективных веществ в предотвращении агрегации тромбоцитов является аспирин, который ингибирует циклооксигеназную активность и образование тромбоксана, необходимого фактора в образовании тромбов (Moncada and Vane,1979). Аспирин также предотвращает ИБС, инсульт, инфаркт и внезапную смерть (Hennekenset al., 1988). Фибринолитическая система представляет собой каскад внеклеточных протеолитических реакций, строго регулируемых активаторами и ингибиторами. Фермент-активатор плазминогена тканевого типа (t-PA) превращает плазминоген в плазмин, который, в свою очередь, растворяет фибриновые сгустки. t-PA представляет собой гликопротеин, синтезируемый в эндотелиальных клетках, который адсорбируется на фибрине для активации. Ингибитор активатора плазминогена (PAI-1) представляет собой ингибитор сериновой протеазы и действует как специфический ингибитор t-PA. PAI-1 существует в трех формах: активной, латентной и в виде неактивного комплекса. Он синтезируется в эндотелиальных клетках, печени и тромбоцитах. В крови большая часть t-PA (95%) комплексирована с PAI-1. Очень малая часть t-PA иPAI-1 находятся в свободной (активной) форме. Считают, что пониженная фибринолитическая активность обусловлена увеличением уровня или активности PAI-1, что приводит к пониженной активации плазминогена до плазмина посредством t-PA. Это важно вследствие сообщений о связи между уменьшенной фибринолитической активностью и риском ИБС (Mehta et al.,1987) и MI. Ухудшенный фибринолиз, в основном обусловленный повышением PAI-1 плазмы,является обычным обнаруживаемым явлением в тромботическом заболевании. В Northwik ParkHeart Study, рассчитанном на перспективу эпидемиологическом исследовании людей среднего возраста (40-54 лет в начале исследования), Meade et al. (1987) сообщили, что пониженная фибринолитичеcкая активность является главным независимым фактором риска для будущей ИБС. Перекрестные исследования пациентов со стенокардией или перенесенным инфарктом миокарда неизменно показывали пониженную фибринолитическую активность у пациентов в сравнении с контролем (Hamsten et al., 1985 и 1987; Johnson 1984; Paramo et al., 1985; Aznar etal., 1986; Francis 1988 и Olofson et al., 1989). Было показано, что концентрации PAI-1 были выше в пациентах с инфарктом миокарда в сравнении с контролями (Hamsten et al., 1987). Вследствие роли агрегации тромбоцитов и фибринолиза в образовании тромбов способ 8 уменьшения агрегации тромбоцитов и/или увеличения фибринолиза мог бы применяться в качестве способа лечения тромботических заболеваний в общем, а также ИБС, в частности. Сущность изобретения Первым объектом изобретения является содержащая флавонол сухая композиция растительного происхождения, пригодная для потребления человеком, полученная из винограда,вина или содержащих флавонол побочных продуктов или отходов виноделия, в которой, по меньшей мере, 25 вес.% составляют полифенолы и, по меньшей мере, 1 вес.% составляет флавонол, причем композиция обеспечивает один или несколько следующих эффектов: ингибирование окисления LDL (липопротеинов низкой плотности) плазмы крови,стимулирование выработки фактора TGF,ингибирование агрегации тромбоцитов и стимулирование фибринолиза. Следует пояснить, что происходящие от растений композиции могут содержать экстракты растений или из части (такие как клубни,плоды), которые могут быть обработаны какимлибо образом (например, ферментацией). Таким образом, происходящие от растений композиции включают в себя экстракты водным или органическим растворителем растений или их частей, фруктовые соки и ферментированные напитки (например, вино), производимые из растений или фруктового сока, или композиции,полученные из перечисленных выше компонентов. Растительный материал обычно обрабатывают (физически и/или химически) во время получения композиции для экстракции полифенолов из растения и, следовательно, увеличения и обогащения содержания полифенолов в композиции. Предпочтительно, эта композиция может быть такой, чтобы полученный из растения материал содержал, по меньшей мере, 35% полифенолов, предпочтительно, по меньшей мере,45% полифенолов. Композиция может состоять полностью или частично из растительного материала, обеспечивающего содержание флавонола в композиции. Альтернативно, эта композиция может содержать другой материал, такой как вкусовые и ароматические вещества, наполнители, носители и т.п., применяемые в приготовлении композиций для употребления человеком. Термин "происходящий от растений материал" в этой композиции относится к той части композиции, которая происходит от того же самого источника, который обеспечивает содержание флавонола в этой композиции. Композиция может также содержать другие ингредиенты (например, крахмал или ароматизаторы), полученные из растений, но они не должны рассматриваться как "происходящий от растений материал", если они не получены из 9 того же источника, что и флавонольный компонент этой композиции. Предпочтительно, композиция является такой, чтобы содержание флавонола составляло,по меньшей мере, 1% и еще более предпочтительно, по меньшей мере, 2% от общего содержания полифенолов в композиции. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что композиции по изобретению являются эффективными, при пероральном употреблении людьми, для ингибирования окисления ЛНП кровяной плазмы, измеренных по ряду критериев. Так, пероральное потребление композиции эффективно для увеличения лаг-фазы в окислении выделенных ЛНП плазмы, определяемых методом Esterbauer et al. (1989, FreeRadic. Res. Commun. 6, 67-75), Вкратце, по этому методу ЛНП, выделенные из плазмы субъекта ультрацентрифугированием, подвергают диализу для удаления ЭДТК и к ЛНП (присутствующим в концентрации 50 мг/л) добавляют ионы меди (5 мкМ). Обычная лаг-фаза перед образованием диенов составляет приблизительно 50-60 мин. Введение композиции по изобретению субъекту должно пролонгировать лагфазу предпочтительно, по меньшей мере, на 2 мин (или 4% или более). Наиболее предпочтительным является диапазон 5-25 мин (или 1050%). Кроме того, эта композиция эффективна(при пероральном употреблении) в уменьшении количества пероксидов липидов в плазме крови субъектов-людей (оцениваемого методом Goroget al., 1994, как описано ниже). Желательно, чтобы эти композиции содержали полифенолы (в том числе флавонолы),полученные из винограда (целого винограда или его частей, таких как кожица или сок), вина(особенно красного вина, которое содержит гораздо более высокие концентрации полифенолов, чем белое вино) или побочных продуктов и/или отходов виноделия, таких как жом (т.е. остатки после прессования винограда для экстракции сока) или мезга (твердые отходы, остающиеся после начальной ферментации). Однако полифенолы, такие как флавонолы, присутствуют в широком диапазоне природновстречающихся материалов, многие из которых имеют более высокое содержание флавонолов,чем красное вино, и, следовательно, могут представлять собой более пригодные источники флавонола. Примеры таких материалов включают в себя: фрукты в общем смысле, такие как яблоки(особенно предпочтительная вследствие относительно высокого содержания флавонолов); лимоны; вишня; клюква; крыжовник; томаты; маслины; 10 и овощи в целом, в том числе такие как редис (например, сорта "Saxa treib"); кольраби(например, сорта "Primavera"); хрен; картофель; лук и спаржа. В предпочтительном варианте композицию получают из красного вина, и она содержит характерный профиль, по существу, всех полифенольных соединений, присутствующих в вине(обычно, хотя и необязательно, присутствующих в композиции, по существу, в соотношениях, характерных для вина, из которого эта композиция произведена). Такая композиция может быть названа "общим полифенольным пулом",т.е. содержащей всю группу полифенолов. Полифенолы легко получить из красного вина или других полифенолсодержащих жидкостей адсорбцией на хроматографической колонке с элюированием обогащенной полифенолами фракции из колонны (обычно после промывки) 40-50%-ным этанолом в качестве элюента или другим подходящим органическим растворителем (таким, как метанол, ацетон, этилацетат,диметилхлорид и хлороформ, которые могут быть в виде водного раствора). Органический растворитель предпочтительно является относительно летучим (т.е. имеющим температуру кипения между 30 и 85 С при 760 мм рт.ст.) и,следовательно, легко отгоняемым с оставлением, по существу, сухой (т.е. менее 10% H2O м/м) твердой композицией, содержащей полифенолы. Такой способ может быть успешно использован для получения общего полифенольного пула из красного вина. Альтернативно, полифенолы могут быть получены из красного вина или другой содержащей полифенолы жидкости экстракцией растворителем с применением подходящего органического растворителя, не смешивающегося с вином или другой жидкостью. Альтернативно,полифенолы могут быть получены из содержащих полифенолы твердых веществ экстракцией растворителем (обычно экстракцией органическим растворителем, таким как этанол или этилацетата) - твердые вещества могут быть затем отделены от растворителя фильтрованием или центрифугированием. Растворитель может быть затем выпарен с оставлением, по существу, сухой твердой композиции, содержащей полифенолы. В предпочтительных вариантах композиция представлена в виде пищевой добавки. Она может быть веществом для добавления в качестве дополнительного ингредиента при приготовлении пищевого продукта, или она может быть отдельным веществом, употребляемым субъектом (например, таблетка или капсула), по существу, изолированным, т.е. не смешанным с другими компонентами пищи, перед ее употреблением (хотя, конечно, таблетку или капсулу можно принимать вместе с едой). Таким образом, данное изобретение включает в свою сферу действия продукт, в частности пищевой про 11 дукт, содержащий композицию по изобретению. Альтернативно, эта композиция может быть представлена в виде твердого вещества, из которого готовят напиток смешиванием с физиологически приемлемым разбавителем (таким,как молоко, вода или иная водная жидкость). Доза композиции, даваемой субъекту, зависит от степени активности материала, но находится между 10 мг и 10 г в день. Для общего полифенольного пула, полученного из красного вина, предпочтительная доза равна 0,1-4,0 г/день и более предпочтительно 1-2 г/день, что эквивалентно 0,5-1 л красного вина в день. Предпочтительная доза флавонола будет находиться в диапазоне 0,1-1000 мг в день, "предпочтительно доза флавонола будет находиться в диапазоне 0,1-1000 мг в день, предпочтительно в диапазоне 0,5-500 мг/день, более предпочтительно в диапазоне 1-250 мг/день. Специалисты в данной области смогут приготовить препарат полифенолов, полученных из вина, винограда или побочных продуктов вина, и фракционировать далее с получением композиций с более концентрированной активностью. Это может быть выполнено колонной хроматографией, экстракцией растворителем, при помощи молекулярных сит с полупроницаемыми мембранами или другими способами, обычно применяемыми в пищевой промышленности. Преимуществом здесь является то,что масса активного вещества становится меньше, а цвет и вкус этой добавки могут быть модифицированы удобным образом. Композиции по изобретению могут быть получены с применением активных полифенольных агентов в соответствии с общепринятыми практикой приготовления пищевых добавок или с фармацевтической практикой. Разбавители, наполнители или носители и т.д., которые могут использоваться, хорошо известны в области приготовления препаратов, и форма,выбранная для любого конкретного режима приема, будет зависеть от конкретного контекста и выбора изготовителя. В общем, доза будет зависеть от концентрации полифенолов в композиции и от идентичности применяемых полифенольных соединений. Кроме того, композиции могут содержать любое число дополнительных компонентов,таких, какие обычно применяются в пищевой промышленности и/или в фармацевтической промышленности. Такие компоненты могут включать в себя питательные элементы (в частности, микроэлементы и витамины), антиоксиданты, терапевтические вещества (в частности,имеющие терапевтическое действие в отношении предотвращения и/или лечения ИБС, в частности, аспирин), вкусовые вещества и подсластители, в частности, искусственные подсластители, такие как аспартам, и т.д. Примеры вышеуказанных веществ включают в себя следующие компоненты: каротино 002760 12 ид, такой, как лютеин, ликопин или - и/или каротин; антиоксидантные питательные элементы или противовоспалительные агенты, такие как витамин А, витамин С, витамин Е (токоферол и другие активные токоферолы), фолиевая кислота, селен, медь, цинк, марганец,убихинон (кофермент Q10), салициловая кислота, 2,3-дигидроксибензойная кислота и 2,5 дигидроксибензойная кислота. Антиоксиданты, такие как каротиноиды и витамин Е, частично разрушаются в желудочнокишечном тракте окислением. Считают, что включением этих соединений в композицию по изобретению этот процесс ингибируется, и поэтому всасывается больше антиоксидантов. Применение композиции, содержащей токоферол и/или аспирин; особенно предпочтительно, так как считают, что такая смесь дает синергeтический эффект в присутствии полифенолов. Типичными пригодными суточными дозами этих дополнительных компонентов данной композиции (которые могут быть, следовательно, включены в композиции таким образом, что нормальное потребление композиции будет давать подходящую дозу) являются следующие дозы: Лютеин Бета-каротин Витамин А Витамин С Фолиевая кислота Селен Медь Цинк Кофермент Q10 Аспирин Так, в одном варианте композиция имеет форму капсул, причем каждая капсула содержит 500 мг полифенольных соединений, с предполагаемым приемом 1-4 капсулы в день. Другим вариантом выполнения может быть безалкогольный напиток, обеспечивающий эффективную дозу полифенолов при растворении в воде,обычной или газированной, с добавлением ароматических веществ или подсластителей для улучшения вкуса, или растворенный в фруктовом соке, например, виноградном, яблочном или апельсиновом. В то время, как может быть предпочтительным по ряду причин (например, социальным, религиозным или экономическим) обеспечивать безалкогольный напиток, содержащий композицию по изобретению, такие напитка могут быть обогащены спиртом (сделаны креплеными) (например, водкой, джином, виски) с получением желательного содержания 5-15% алкоголя в зависимости от вкуса потребителя. Другими вариантами могут быть пищевые добавки в молочные продукты, такие как молоко и йогурт, пресервы и диетические продукты,используемые в качестве дополнения или заме 13 ны обычных продуктов. Приведенные выше примеры являются только иллюстративными и не предназначены для какого-либо ограничения. Третий объект изобретения обеспечивает способ ингибирования окисления ЛНП кровяной плазмы человека; причем этот способ предусматривает приготовление композиции в соответствии с первым или вторым объектом изобретения и введение этой композиции субъекту. Авторы изобретения нашли, что пероральное употребление композиции по изобретению не только ингибирует окисление ЛНП плазмы,но эта композиция будет также стимулировать продуцирование трансформирующего ростового фактора (TGF-) in vivo. Кроме того, авторы изобретения нашли, что пероральное употребление композиции по изобретению будет ингибировать агрегацию и/или стимулировать фибринолиз, уменьшая тем самым тромботическую тенденцию индивидуума, что способствует предотвращению и/или лечению тромботических заболеваний, таких, как ИБС и инсульт (инфаркт). В частности, было обнаружено, что потребление этой композиции повышает уровень активности t-PA в плазме (легко измеряемый при помощи таких тестов, как "Chromolize"[фирма Biopool,Sweden], описанный ниже),вследствие чего увеличивается нетто-скорость фибринолиза субъекта. В соответствии с четвертым объектом,изобретение предлагает способ стимуляции образования TGF- у человека; причем этот способ предусматривает приготовление композиции в соответствии с первым или вторым объектами изобретения и введение этой композиции человеку. В пятом объекте изобретение предлагает способ ингибирования агрегации тромбоцитов и/или стимуляции фибринолиза у человека,причем этот способ предусматривает приготовление композиции в соответствии с первым или вторым объектами изобретения, и введение этой композиции человеку. В шестом объекте изобретение предлагает применение композиции в соответствии с первым или вторым объектами изобретения, описанными выше, для производства медикамента для перорального употребления человеком для ингибирования окисления ЛНП кровяной плазмы у человека. В седьмом объекте изобретение предлагает применение композиции в соответствии с первым или вторым объектами изобретения, описанными выше, для производства медикаментов для перорального потребления человеком для стимуляции образования TGF- у человека. В восьмом объекте изобретение предлагает применение композиции в соответствии с первым или вторым объектами изобретения, описанными выше, для производства медикамента для перорального употребления человеком для 14 ингибирования агрегации тромбоцитов и/или стимуляции фибринолиза в субъекте (в частности, путем повышения уровня активности t-PA в кровяной плазме этого человека). Композиция в соответствии с первым и вторым объектами изобретения будет, как правило, придавать все из вышеупомянутых свойств субъекту, потребляющему эту композицию. Таким образом, изобретение также обеспечивает способ приготовления лекарственного средства для перорального потребления человеком для того, чтобы вызвать у него один или несколько из следующих эффектов: ингибирование окисления ЛНП кровяной плазмы, ингибирование агрегации тромбоцитов, стимуляция фибринолиза и стимуляция образования TGF-,причем этот способ предусматривает приготовление композиции в соответствии с первым или вторым объектами изобретения, если необходимо, смешивание этой композиции с физиологически приемлемым наполнителем или носителем, и приготовление стандартных доз этой композиции. Подходящие способы приготовления таких лекарственных средств хорошо известны специалистам в соответствующей области. Лекарственные средства, обладающие таким действием, могут иметь форму пищевых добавок или ингредиентов, как объяснялось выше, и должны быть применимы в предупреждении или лечении ишемической болезни сердца. Подходящие дозы этих лекарственных средств, как объяснено ранее, будут зависеть от концентрации и идентичности полифенолов в композиции и от тяжести состояния заболевания в подлежащем лечению субъекте. Однако в качестве общего указания эта доза должна предпочтительно обеспечивать то же самое количество полифенолов, какое обеспечивается потреблением, по меньшей мере, одного стакана вина в день ("который приблизительно эквивалентен 0,25 г общего полифенольного пула из красного вина), но более предпочтительно 0,51,0 л красного вина в день (т.е. приблизительно 1,0-2,0 г общего полифенола вина). Далее изобретение описывается на иллюстративных примерах со ссылкой на сопутствующие рисунки, на которых: фиг. 1 - график окисления ЛНП в зависимости от времени (минуты); фиг. 2 - схематичное представление центральной структуры флавонов; фиг. 3 - схематичное представление центральной структуры флавонолов; фиг. 4 - схематичное представление структуры галловой кислоты; фиг. 5 - схематичное представление центральной структуры антоцианинов; и фиг. 6 - схематичное представление структуры резвератрола. Пример 1. Приготовление полифенольного порошка из красного вина.(French 1993 Cabernet Sauvignon) фильтровали для удаления осадка и перегоняли под вакуумом при 300 миллибар при 75-80 С в течение 1 мин,затем охлаждали и концентрировали под вакуумом при 55 С и затем быстро охлаждали до 25 С с принудительным охлаждением. Концентрированное вино пропускали через колонку(диаметр 55 см, высота приблизительно 2 м),содержащую 65 л смолы Diaion HP-20. Колонку промывали 250 л дистиллированной воды, и полифенолы элюировали приблизительно 250 литрами 50%-ного этанола в течение 150 мин или около этого. В конце этого периода времени элюат (элюированная фракция) не содержал полифенолов, определяемых по методу FolinCiocalteu (описанному Singleton and Rossi, 1965) Затем элюат концентрировали до 35%-ного содержания сухого вещества перегонкой под вакуумом и сушили распылением под азотом с получением приблизительно 2 кг порошка с содержанием влаги 3-4%. Полифенольный порошок является превосходным пищевым компонентом, имеющим темно-красный цвет при растворении в воде или водном спирте, причем он является вполне вкусным и дает привкус красного вина. Рекомендуемая дневная доза равна 1-2 г/день. Типичная композиция полифенольного порошка сравнивается ниже с полифенольным содержанием красного вина. В сравнении с красным вином полифенольный порошок содержит пропорционально больше проантоцианинов, чем других полифенолов, но, по существу, сохраняет относительное обилие различных полифенолов. Состав красного вина и полифенольного порошка Эквив. галловой Полифенольный кислоты красного порошок красного вина, мг/л % вина, мг/л % Гидроксицинна 165 15 18 3 мовая кислота Катехины 200 17 38 6 Флавонолы 20 2 14 2 Антоцианины 200 17 70 11 Проантоциани 550 49 480 77 дины Всего 1135 620 Пример 2. Исследования с применением полифенолов вина проводили для определения антиоксидантной активности красного и белого винa и полифенольных препаратов на здоровых добровольцах. Субъекты и способы. 26 Здоровых людей в возрасте 35-65 лет,некурящие, употреблявшие стандартную (в Великобритании) диету, приняли участие в государственном конфиденциальном исследовании. За две недели перед исследованием добровольцы прекращали потребление вина. Всех добровольцев просили поддерживать обычный пище 002760 16 вой рацион и стиль жизни во время исследования. Добровольцев разделили на группы, которые потребляли следующие винные и чайные продукты с едой в течение двух недель в количествах, указанных в табл. 1. Красным вином было Cabernet Sauvignon (1993), а белое вино было из района Narbonne, France. Вино, обеспечиваемое во время этого исследования, было единственным дозволенным вином во время экспериментального периода. Кроме того, тем же субъектам давали полифенольный порошок,приготовленный из той же самой партии красного вина, которую использовали в этом исследовании. Один образец порошка (РР 1) хранили при -20 С, а свежий образец (РР 2) получили в июне 1996 года. Исследования были начаты в начале сентября 1995 года и продолжались приблизительно в течение 1 года. Тестируемое вещество группы 1) Красное вино Cabernet Sauvignon (375 мл), содержащее 1,8 г/л пoлифенолов 2) Обычное белое вино (375 мл), содержащее 0,2 г/л полифенолов 3) Полифенольный порошок из красного вина (полученный из вина, даваемого группе 1),1 г в двух желатиновых капсулах 4) Белое вино, содержащее в растворе 1 г полифенолов красного вина (см. ниже) 5) Водка и лимонад (10% об/об) алкоголя,400 мл в день 6) 50 мг/день антоцианинов в виде экстракта виноградной кожицы (Sefcal, St. Julien de(French Paradox, Nice, France), даваемая в виде капсул (3 в день), причем каждая капсула содержит 250 мг мезги 8) Проантоцианидины виноградных косточек в виде капсул из Endotelon (SanofiWinthrop, France) (3 в день), причем каждая капсула содержит 150 мг проантоцианидина 9) Экстракт зеленого чая (Polyphenon,Mitsui Norin, Fujieda, Japan), 3 капсулы в день,причем каждая капсула содержит 100 мг следующих катехинов чая: 1,6% галлокатехина,19,3% эпигаллокатехина, 6,4% эпикатехинов,59,1% галлата эпигаллокатехина и 13,7% галлата эпикатехина. Пробы крови брали в К 3-ЭДТК (1 ммоль/л) через 12 ч после ужина, до и в конце периода потребления винного продукта. Пробы центрифугировали при 2000 х g в течение 15 мин при 4 С для получения плазмы. ЛНП отделяли ультрацентрифугированием в градиенте плотности с применением настольной модели центрифуги(Beckman, Palo Alto, CA) следующим образом: к плазме добавляли бромид натрия до плотности 1,3 г/мл и наслаивали под раствор с плотностью 1,006 г/мл. Вращали при 100000 об/мин в течение 20 мин при 4 С. Оранжево-желтую полосу 17 удаляли и вращали с растворами с плотностями 1,154 и 1,063 г/мл в течение 30 мин при 100000 об/мин и 4 С. Видимый слой ЛНП удаляли и диализировали 10 мМ забуференным фосфатом солевым раствором с 2 мкМ ЭДТК в течение 1 ч с применением диализной кассеты (Pierce Slide-ALyzer, Perstorp Biotec Company, USA) при 4 С в течение 1 ч, а затем 10 мМ забуференным фосфатом солевым раствором до утра. Общие полифенолы определяли в плазме и во фракции ЛНП по методу Singleton and Rossi(1965). Вкратце, общие полифенолы и ЛНП в плазме измеряли взятием 125 мкл плазмы или 400 мкл ЛНП и доведением до 500 мкл водой. Эту смесь добавляли к 2,5 мл реагента Фолина(75 г/л). После тщательного смешивания раствор инкубировали при комнатной температуре в течение 2,5 ч и затем центрифугировали при 2500 об/мин в течение 8 мин. Оптическую плотность измеряли при 765 нм. Галловую кислоту использовали в качестве стандарта для сравнения. Белок определяли по Бредфорду (Bradford,1976) с использованием набора, содержащего реагент Bioguant (Merck, Darmstadt, Germany). Для определения антиоксидантной активности использовали два независимых метода: 1) Окисление ЛНП медью. Липопротеин (50 мг белка ЛНП/л) инкубировали в присутствии сульфата меди (5 мМ) при 37 С в течение 5 ч. Вели непрерывный мониторинг образования конъюгированных диенов путем слежения за увеличением поглощения при 234 нм, а лаг-фазу перед образованием диенов определяли по методу Esterbauer, et al.(1989). Фиг. 1 показывает график образования конъюгированных диенов (измерение поглощения при 234 нм) в зависимости от времени (в минутах). Типичные кривые иллюстрируют пробы, взятые в начале испытания (0) и после 2 недель. Лаг-фазу измеряют экстраполяцией линейной части кривых до оси х (как показано прерывистыми линиями). Предпочтительно,потребление композиций по изобретению будет приводить к увеличению лаг-фазы на 2 мин или более. 2) Пероксиды липидов плазмы. Все липиды и липопротеины плазмы селективно удаляли сорбентом PHM-L-liposorb(Calbiochem-Novabiochem, UK). Сухой PHM-Lliposorb (20 мг) суспендировали в 0,25 мл 150 мМ хлорида натрия, содержащего 10 мМ цитрата натрия, в керамической микроцентрифужной пробирке на 2 мл, содержимое перемешивали, и давали уравновешиваться в течение 5 мин. Затем добавляли плазму (0,5 мл) или солевой раствор (слепой опыт) к суспензии липосорбента,перемешивали и пробирки помещали во вращающийся миксер на 15 мин. После центрифугирования (12000 х g в течение 1 мин) надоса 002760 18 дочную жидкость выбрасывали, и гель липосорбента промывали дважды 1,5 мл солевого раствора, с последующим перемешиванием и центрифугированием. Промытый гель липосорбента суспендировали в 1,5 мл холестериноксидазаиодидном реагенте (BDH-Merck) и помещали во вращающийся миксер и перемешивали в течение 60 мин. После центрифугирования (12000 хg в течение 3 мин) при комнатной температуре оптическую плотность прозрачной надосадочной жидкости измеряли в спектрофотометре при 405 нм, используя в качестве контроля солевой раствор (Gorog et al., 1994). Предпочтительно, употребление композиций по изобретению будет приводить к снижению концентрации пероксидов липидов в плазме на, по меньшей мере, 0,1 мкмоль/г белка. Результаты Полученные величины сравнивали до и после обработки. Табл. 1 обобщает результаты,представленные в деталях в табл. 2-6. Как показано в табл. 1, продукты, содержащие обильное количество полифенолов вина (красное вино,РР 1, РР 2, белое вино + РР 1), показали увеличение полифенолов в плазме и ЛНП и антиоксидантной активности в ЛНП, при измерении вышеописанными тестами 1 и 2. Два полифенольных порошка (РР 1, РР 2) дали результаты одного порядка, что и эквивалентное количество красного вина. Не дали эффекта белое вино, антоцианиновый порошок (Sefcal, экстракт из виноградной кожицы, используемый в качестве пищевого красителя), выжимки красного вина, капсулыFrench Paradox (Arkopharma) или Endotelon,(Sanofi-Wintrop, препарат проантоцианидина из виноградных косточек) и экстракт зеленого чая(Polyphenon), содержащий катехины и их эфиры. Активный полифенольный препарат содержал пул всех полифенолов в красном вине и был осторожно обработан таким образом, чтобы избежать его окисления. Кроме того, было показано, что содержание полифенолов в плазме и количество выделенных ЛНП повышались у субъектов, получавших красное вино или полифенольный порошок, полученный из красного вина или кожицы красного винограда. В подтверждение антиоксидантной активности этого препарата использовали второй тест, в котором плазму обрабатывали адсорбирующей смолой, которая удаляет липиды и липопротеины, и в этой смоле определяли содержание пероксидов липидов. Содержание пероксидов липидов уменьшалось у субъектов, получавших красное вино или препарат полифенолов. Опять величина эффекта полифенольного порошка была эквивалентна количеству красного вина, из которого он был получен. Эти эксперименты убедительно доказывают, что полифенолы поглощаются после приема красного вина и появляются в плазме и ЛНП и 19 что полифенолы, выделенные из вина, могут оказывать такое же действие. Кроме того, поглощенные полифенолы обладают сильной антиоксидантной активностью. Возможны несколько механизмов действия полифенолов. Прежде всего они могут захватывать ионы металлов, таких как медь и железо, которые промотируют образование пероксидов липидов invivo. Эти хелатированные ионы являются неактивными в качестве прооксидантов. Полифенолы, вследствие высокого содержания гидроксигрупп, содержат химические структуры, о которых известно, что они хелатируют ионы металлов, и таким образом разрушают их каталитические свойства. Другим механизмом может быть действие в качестве соединения, окисляемого прежде окисления ЛНП, как это имеет место в случае токоферола. Однако данное изобретение не ограничивается любым из конкретных способов действия. Для исследования важности удаления ЭДТК из препарата перед окислением содержащим медь катализатором было сделано сравнение посредством использования диализа с ЭДТК и без ЭДТК, а также метод с колонной ионообменной смолой. При добавлении ЭДТК к диализату пролонгирование лаг-фазы, производимое полифенольным порошком красного вина, не имело места или было заметно уменьшено. Диализ без ЭДТК и метод с ионообменной смолой дали сходные результаты. Неспособность прежних авторов (de Rijke et al., 1996) получить эффект красного вина у добровольцев может быть объяснена присутствием ЭДТК в их препаратах, использованных для катализируемого медью окисления. Таблица 1. Общие результаты исследований на добровольцах действия полифенолов вина Полифенольная антиоксидантная активность ПродуктПлаз- ЛНП ЛНП Пероксиды ма метод с липидов плазмы медью Красное вино 9+ но+РР 1 Алкогольный 6 напиток Антоцианины 5 Мезга красно- 6 не опр. го вина Проантоциа 6 нины виноградных косточек Экстракт зеле- 7 не опр. ного чая- = нет эффекта не опр. = не определяли 20 Таблица 2. Действие вина и винных продуктов на полифенолы кровяной плазмы (мг/г белкаСт. откл.) Величина Продукт 0 2 нед. Р пар. tкритерий Красное вино 9 16,25,6 22,62,7 0,008 Белое вино 9 18,95,0 20,31,4 0,450 Порошок РР 1 9 21,02,9 26,95,3 0,009 Порошок РР 2 6 24,51,4 26,01,8 0,070 Белое вино+РР 1 6 17,64,0 22,61,7 0,020 Алкогольный напиток 6 23,91,0 24,01,2 0,860 Антоцианины 5 19,26,4 21,43,1 0,580 Мезга от красного вина 6 22,60,7 23,4+1,2 0,158 Проантоцианины ви 6 20,46,7 21,37 0,380 ноградных косточек Экстракт зеленого чая 7 21,31,2 22,11,6 0,295 Таблица 3. Действие вина и винных продуктов на полифенолы LDL (мг/гСт. откл.) Величина Продукт 0 2 нед. Р пар. tкритерий 1 2 3 4 5 Красное вино 9 34,06,2 42,3+8,1 0,001 Белое вино 9 39,36,1 38,510,0 0,820 Порошок РР 1 9 37,04,6 47,66,2 0,002 Порошок РР 2 6 35,55,1 46,010,0 0,006 Белое вино+РР 1 6 33,56,3 54,221,0 0,040 Алкогольный напи 6 39,44,5 43,71,6 0,084 ток Антоцианины 5 40,05,6 36,26,0 0,520 Мезга от красного 6 41,73,6 38,43,4 0,063 вина Проантоцианины 6 38,24,8 40,23,7 0,240 виноградных косточек Экстракт зеленого 7 36,96,2 37,35,3 0,840 чая Таблица 4. Действие вина и винных продуктов на пероксиды липидов в плазме (мкмоль/г белкаСт. откл.) Величина Продукт 0 2 нед. Р пар. tкритерий Красное вино 9 2,130,70 1,540,48 0,056 Белое вино 9 1,730,55 2,150,66 0,158 Порошок РР 1 9 1,900,52 1,370,38 0,051 Порошок РР 2 6 1,880,24 1,51+0,21 0,018 Белое вино+РР 1 6 1,700,51 1,190,19 0,40 Алкогольный на 6 1,600,25 1,500,40 0,460 питок Антоцианины 5 3,040,73 2,93+0,56 0,260 Мезга от красного 6 не определяли вина Проантоцианины 6 1,690,13 1,470,46 0,289 виноградных косточек Экстракт зеленого 7 не определяли чая Таблица 5. Действие вина и винных продуктов на окисление ЛНП медью: средняя лаг-фаза в минутах ( Ст. откл.) Продукт Величина 21 Мезга от красного вина Проантоцианины виноградных косточек Экстракт зеленого чая Выводы Антиоксидантная активность 1 г полифенольного порошка вина эквивалентна половине бутылки красного вина. Дневная доза в 1-2 г полифенольного порошка могла бы обеспечить профилактику ишемической болезни сердца. Другие продукты, такие как экстракт кожицы винограда, используемый в пищевой промышленности в качестве красителя, препарат проантоцианидина, капсулы "Французский Парадокс" и экстракт зеленого чая, содержащий катехины и их эфиры,оказались неактивными. Пример 3. Капсулу готовили из следующих ингредиентов простым смешиванием и обычным инкапсулированием. мг Полифенольный порошок вина 500 Стеариновая кислота 25 Стеарат магния 50 Микрокристаллическая целлюлоза 25 Всего 600 мг Две-четыре капсулы принимаются в день с едой или после еды. Пример 4. Капсулу готовили из следующих ингредиентов простым смешиванием и обычным инкапсулированном. мг Полифенольный порошок вина 400 150(1:50 в разбавителе) 10 Лецитин 20 Пчелиный воск 20 Всего 600 мг По меньшей мере, три капсулы в день следует принимать во время приемов пищи. Пример 5. Один грамм порошка винного полифенола добавляют к рецептуре диетической композиции также в виде сухого порошка, обеспечивающей 405 ккал в день (42 г белка, 43 г углевода и 8 г жира, RDA витаминов и минеральных соединений), товарный знак Cambridge Diet(Cambridge Health Plan Ltd, Norwich, UK). Однодневный прием (3 раза в день) обеспечивает прием полифенолов, эквивалентный приему 0,5 л красного вина в день. Пример 6. 0,5 г общего пула полифенолов, полученного из красного вина, добавляют к 250 мл обычного йогурта, содержащего клубничный 22 ароматизатор и подсластитель. Полифенольный материал красного цвета улучшает вид йогурта и обеспечивает очень вкусный пищевой продукт с полезными для здоровья свойствами. Пример 7. Следующая порошковая композиция дает безалкогольный напиток при смешивании ее с водой. Моногидрат декстрозы 300 г Лимонная кислота 32 г Тринатрий-цитрат 5 г Ароматизатор грейпфрута 6 г Ароматизатор лимона 1,4 г Ароматизатор апельсина 1,4 г Аспартам 1 г Общий пул полифенолов вина(пример 1) 21 г 53 г порошка растворяют в 1 л воды. Прием 250 мл обеспечивает 0,75 г активных полифенолов. Пример 8. В этом примере представлен алкогольный напиток в виде разлитой в бутылки смеси, готовой для питья. Тоник без газа 450 мл Водка 50 мл Общий пул полифенолов вина(деаэрированной) смеси тоника и затем газируют диоксидом углерода под давлением с получением газированного напитка. Аликвоты по 450 мл разливают в бутылки, добавляют водку и бутылки закрывают завинчивающимися крышками. Пример 9. Около 2000 кг выжимок белого винограда,хорошо перемешивали в коммерческой мешалке с 2500 л дистиллированной воды при 30 С в течение 4 ч. Затем смесь удаляли из мешалки и помещали в чан, где ей дали осесть в течение 2 ч, а затем супернатант оттягивали и фильтровали с получением прозрачной жидкости. Затем применяли процедуру по примеру 1 для адсорбции полифенолов на смоле с использованием одинаковых количеств смолы Diaion HP-20 и элюирующего раствора. При концентрировании водного этанольного раствора до 35% сухого вещества красное твердое вещество весило приблизительно 600 г. Его растворяли в 10% водном спирте и сушили распылением под азотом с получением 1,4 кг красного материала, содержащего приблизительно 50% полифенолов. Эта композиция была подобна композиции, полученной в примере 1. Недостатком этого метода является то, что процедура получения экстракта перед адсорбцией на смоле является сложной и требует больше времени. Хотя выход был меньше, дос 23 тупность дешевой виноградной кожицы имеет свои коммерческие преимущества. Порошковый напиток разводили водой и давали 5 добровольцам в течение двух недель в соответствии с протоколом, описанным в примере 2. Результаты теста катализируемого медью окисления ЛНТ были следующие: До 78,87,2 мин После 2 недель 93,09,4 мин Изменение (величина Р 0,003) 14,24,8 мин Сделан вывод, что экстракт кожицы винограда (в этом случае белого винограда), т.е. выжимок, мог бы быть эффективным антиоксидантом при пероральном приеме в течение 2 недель. Пример 10. ЛНП кровяной плазмы (группы добровольцев, описанной в примере 2) отделяли центрифугированием и диализировали фосфатным буфером, как описано в примере 2. Содержащие полифенолы вещества анализировали на содержание полифенолов по методу Singleton andRossi (1965). ЛНП плазмы (0,05 мкг LDL в 1,0 мл) инкубировали со 100 мкл раствора сульфата меди (конечная концентрация 5 мкМ) при 37 С,а лаг-фазу определяли по методу катализируемых медью диенов, как описано в примере 2. Способность содержащих полифенолы веществ продлевать лаг-фазу in vitro определяли добавлением 4 мкг полифенольного вещества к 1 мл ЛНП перед добавлением сульфата меди. Тестировали следующие вещества: 1) Красное вино Cabernet Sauvignon; 2) Обыкновенное белое вино; 24 3) Полифенолы красного вина, полученные, как описано в примере 1; 4) Антоцианин Sefcal, описанный в примере 1; 5) Проантоцианидины Endotelon, описанные в примере 2; 6) Капсулы French Paradox (мезга от красного вина), описанные в примере 2; 7) Polyphenon (катехины зеленого чая),описанный в примере 2. Результаты, полученные in vivo при пероральном употреблении тестируемых веществ в течение 2 недель, сравниваются с результатамиin vitro в табл. 7 ниже. Результаты in vitro представляют собой среднюю величину из 4 замеров. Лаг-фаза увеличивалась всеми веществами,добавляемыми при уровне 4 мкг/мл. Последовательность величины эффекта была следующей: полифенольный порошок = антоцианиныкатехины зеленого чаяпроантоцианидины виноградных косточеккрасное винобелое виномезга от красного вина. Когда эти вещества принимали перорально и ЛНП отделяли и тестировали, как описано в примере 2, только красное вино и полифенолы красного вина давали продление лаг-фазы, все другие содержащие полифенолы вещества были неактивными. Это ясно демонстрирует, как сложно предсказать in vivo эффект вещества,исходя из результатов in vitro. Отсутствие активности большинства этих веществ in vivo может быть обусловлено отсутствием их абсорбции из кишечника или неспособностью включаться в ЛНП. Таблица 6. Сравнение содержащих полифенолы веществ in vitro и in vivo при тестировании медно-диеновым методом Соед. поли- in vitro Увеличение лаг-фазы Прием поли- in vivo Увеличение лаг-фазы Вещество фенолов мин% эффект Красное вино 1,8 г/л 26 100 Антоцианины красного вина 500 мг/г 66 255-8 Проантоцианины семян винограда 425 мг/г 50 190-38 Мезга красного вина 210 мг/г 18 70-10 Катехины зеленого чая 960 мг/г 75 290 Пример 11. Двадцать из вышеупомянутых добровольцев из примере 2 делили на группы (А и В) из 69 субъектов и им давали в течение двух недель:A) ароматизированный черной смородиной напиток (330 мл), содержащий 1 г общих полифенолов красного вина и смешанный с коммерчески доступным порошком (сахар, лимонная кислота, аспартам цитрата натрия, синтетический ароматизатор; Cambridge Manufacturing CoLtd, Corby, UK), к которому добавляли воду непосредственно перед употреблением; илиB) капсулы, содержащие полифенольный порошок красного вина, полученный, как опи сано выше, в дозе 2 г полифенолов красного вина/день. Эти продукты делили на равные части и принимали после обеда (ланча) и после ужина. Получали пробы плазмы и обрабатывали их в ультрацентрифуге для получения ЛНП, как описано в примере 2. Для обработки ЛНП перед окислением применяли следующие три способа.a) Конечный диализ без ЭДТК. ЛНП диализировали 10 мМ забуференным фосфатом солевым раствором, содержащим 2 мкМ ЭДТК, в течение 1 ч с применением диализной кассеты (Pierce Slide-A-Lyzer Perstorp 25 затем 10 мМ забуференным фосфатом солевым раствором до утра.b) Непрерывный диализ с ЭДТК. ЛНП удаляли и диализировали при 4 С,как описано выше, за исключением того, что весь диализ проводили с 1 мкМ ЭДТК в 10 мМ забуференном фосфатом солевом растворе.c) Колонная обработка. ЛНП пропускали через обессоливающую колонну EcNo-pac 10DG (Bio-Rad Labs, UK). Колонну дважды промывали обработанным 10 мМ ЗФР (chelex-100 resin (Bio-Rad, UK) , 5 г/л ЗФР смешивали и декантировали). Затем 600 мкл ЛНП нагружали на эту колонну и элюировали 3 мл ЗФР-буфера при скорости потока 0,6 мл/мин с применением перистальтического насоса Ismatec IPC (Ismatec, Weston Super Mare,UK). Затем проводили катализируемое медью перокисление и измеряли лаг-фазу, как в примере 2. Результаты представлены в табл. 7. Употребление полифенолов красного вина либо в виде напитка (1 г/день), либо в виде капсул (2 г/день) приводило к увеличению лаг-фазы(когда ЭДТК был исключен из конечного диализа) 30 и 21%, соответственно, и также при применении колоночного способа 12 и 22%,соответственно. Добавление ЭДТК к диализату уничтожало эффект дозы 1 г/день полифенолов красного вина и давало лишь небольшое увеличение лаг-фазы 7% с 2 г/день. Таблица 7. Лаг-фазы (мин) в катализируемом медью перокислении с использованием различных методов обессоливания ЛНП Диализ Диализ Без диализа Добавка Без ЭДТК с ЭДТК Колонна Полифенолы вина 6 Напиток (1 г/день) Фон 60,05,3 64,33,8 54,24,6 После 2 недель 77,78,4 64,53,9 60,64,7 Разность средних 17,73,1 0,30,1 6,40,1 Р-величина 0,02 0,9 0,005 Капсулы (2 г/день) 6 Фон 62,72,5 67,73,6 54,0+2,2 После 2 недель 75,82,8 72,23,1 65,82,2 Разность средних 13,20,3 4,50,5 11,80,1 Р-величина 0,004 0,02 0,003 Другой задачей изобретения является обеспечение активного полифенольного препарата (легко получаемого из винограда, вина или побочных продуктов виноделия) для лечения ишемической болезни сердца и других заболеваний, связанных с пролиферацией клеток гладких мышц, таких как атеросклероз, рестеноз,инсульт и неоплазии пищеварительного тракта и матки, фиброид или фиброма матки. Авторы изобретения неожиданно нашли,что можно приготовить полифенольную композицию (например, из красного вина), которая при пероральном приеме человеком будет сти 002760 26 мулировать образование общего и активногоTGF1. Было продемонстрировано, что при пероральном введении человеку красного вина или препарата полифенолов, полученных из красного вина, в виде порошка или напитка, происходит повышение содержания общего и активногоTGF1 в кровяной плазме. Белое вино, содержащее мало полифенолов, является неактивным. Доза полифенольного препарата зависит от степени активности этого материала, но она будет находиться в пределах 10 мг - 10 г на день. Для общего пула полифенолов, полученного из вина, предпочтительная доза составляет 0,1-4 г/день и более предпочтительно 1-2 г/день,что эквивалентно 0,5-1 л красного вина в день. Пример 12. Красное вино, белое вино и препарат полифенолов, полученных из красного вина (как описано ранее в примере 1) в форме порошка или напитка, предоставляемых перорально субъектам-людям, исследовали на образованиеTGF- плазмы. Здоровых добровольцев (30 человек в возрасте 35-65 лет) просили прекратить употребление вина на 2 недели. Им давали либо 375 мл красного вина или белого вина или 1 г общего пула полифенолов красного вина (полученного из того же самого вина Cabernet Sauvignon, указанного выше), либо в виде капсул, либо в виде ароматизированных напитков в 330 мл воды. Каждую из добавок употребляли дважды в день после еды в течение периода двух недель. Пробы крови брали в К 3-ЭДТК (1 ммоль/л) после обработки и центрифугировали для получения плазмы, которую хранили при -70 С до анализа. Общие полифенолы плазмы измеряли по способу Singleton and Rossi (1965). ОбщийTGF1 определяли иммуноанализом с использованием двух различных поликлональных антител (методы 1 и 2, описанные ниже). Метод 1. Общий (латентный + активный) TGF- измеряли при помощи набора для иммуноанализа человеческого TGF- Quantikine, поставляемого системными RD (Abingdon, Oxford,UK).В этом анализе используют количественный способ сэндвич-иммуноанализа. Растворенный TGFрецептор типа II связывают TGF-1, который был нанесен в виде покрытия на микротитрационный планшет. Стандарты и пробы вносят пипетками в лунки, и любой присутствующий TGF1 связывается иммобилизационным рецептором. После вымывания любых несвязанных веществ в лунки добавляют связанные с ферментом поликлональные антитела, специфические для TGF1, для образования сэндвича с TGF1, иммобилизованным во время первой инкубации. После промывки для удаления несвязанного антитело-фермент 27 ного реагента к лункам добавляют раствор субстрата, который продуцирует окраску с ферментом. Интенсивность развившейся окраски пропорциональна присутствующему TGF1. Перед проведением анализа латентныйTGF- превращают в активную форму добавлением уксусной кислоты и мочевины, инкубированием в течение 10 мин и затем нейтрализацией раствором гидроксид натрия/HEPES. Этот способ определяет (латентный + активный)TGF проводили следующим образом: к 0,1 мл плазмы добавляли 0,1 мл смеси 2,5 н. уксусная кислота/10 М мочевина, хорошо смешивали и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. К этому раствору добавляли 0,1 мл смеси 2,7 н. NaOH/1 M HEPES для нейтрализации пробы и хорошо перемешивали. Перед анализом активированную пробу плазмы разбавляли в 10 раз калиброванным разбавителем RD6M,поставляемым изготовителем набора. Процедура анализа была следующей: 200 мкл пробы или стандарта добавляли в каждую лунку микротитрационного планшета. Затем планшет покрывали клейкой полоскoй пластикового материала и инкубировали в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем каждую лунку отсасывали и промывали три раза по 400 мкл промывного буфера. Затем 200 мкл конъюгата TGF1 добавляли к каждой лунке,и планшет опять закрывали новой клейкой лентой и инкубировали при комнатной температуре в течение 110 мин. Затем лунки отсасывали и промывали три раза по 400 мкл промывного буфера. К лункам добавляли 200 мкл раствора субстрата, и планшет инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем к каждой лунке добавляли 50 мкл 2 н. раствораH2SO4 и измеряли оптическую плотность при 450 нм. Метод 2. Использовали, по существу, тот же метод, что и описанный выше, за исключением того, что TGF- не активировали перед определением и вместо поликлонального антитела для TGF1 использовали антитело BDA19 (RD systems, Abingdon, Oxford, UK). Этот метод позволяет оценивать активную формуTGF1. Предпочтительно, употребление композиции по изобретению будет приводить к увеличению уровней содержания TGF1 у субъекта,по меньшей мере, 1,5 нг/мл при оценке по методу 1 или, по меньшей мере, 0,5 нг/мл при оценке по методу 2. Результаты Как показано в табл. 8, содержание полифенолов в плазме увеличивалось в варианте с красным, но не с белым вином, а также с полифенольными капсулами и напитком. Увеличение TGF1 наблюдали обоими способами в варианте с красным вином и с полифенольными 28 капсулами и напитком, но не в варианте с белым вином. Это свидетельствует о том, что полифенолы красного вина увеличивают как общее количество (латентного + активного) TGF-1, так и количество активной формы TGF1. Сделан вывод, что полифенолы вина увеличивают общий TGF1 и обладают потенциалом ингибирования пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов. Таблица 8. Действие вина и полифенолов красного вина на полифенолы плазмы и общий TGF- согласно двум различным методам анализа ПолифеОбщий TGFДобавканолы мг/г Способ 1 Способ 2 белка(нг/мл) (нг/мл) Красное вино 8 Исходное состояние 16,21,87 6,61,3 5,00,4 Через 2 недели 22,60,91 15,53,1 6,50,5 Разность средних 6,330,96 8,91,8 1,50,1 Р-величина 0,002 0,01 0,01 8 Белое вино Исходное состояние 18,91,67 9,72,5 5,60,6 Через 2 недели 20,20,91 11,93,4 5,30,6 Разность средних 1,330,76 2,20,9 0,30,1 Р-величина 0,5 0,5 0,8 Полифенольные капсулы 8 Исходное состояние 21,00,96 9,02,3 6,00,7 Через 2 недели 26,91,76 19,83,9 8,50,9 Разность средних 5,860,80 10,81,6 2,50,2 Р-величина 0,02 0,01 0,01 Полифенольный напиток 6 Исходное состояние 21,60,35 9,21,1 5,01,5 Через 2 недели 23,60,40 15,62,4 9,91,1 Разность средних 2,050,05 6,4+1,3 4,9+0,4 Р-величина 0,03 0,03 0,03 СреднееSEM (станд. ошибка оценки) Авторы изобретения, кроме того, неожиданно обнаружили, что можно приготовить полифенольную композицию (например, из красного вина), которая при пероральном введении субъекту-человеку будет ингибировать агрегацию тромбоцитов и стимулировать фибринолиз. В частности, продемонстрировано, что при пероральном введении человеку полифенолов,полученных из красного вина, имеет место уменьшение агрегации тромбоцитов при использовании в качестве агонистов арахидоновой кислоты, ADP, коллагена или тромбина. Кроме того, употребление полифенольного препарата увеличивает активность t-PA в плазме субъекта. Доза полифенольного препарата зависит от степени активности материала, но будет находиться между 10 мг и 10 г в день. Если композиция содержит общий полифенольный пул,полученный из красного вина, предпочтительная доза равна 0,1-4,0 г/день и более предпочтительно 1-2 г, что эквивалентно 0,5-1,0 л красного вина в день. Пример 13. Полифенольную композицию красного вина получали, как описано ранее (пример 1 выше). Пищевой рацион 12 здоровых мужчин в возрасте 35-65 лет дополняли 2 г полифенолов красного вина (как описано в примере 2) или аспирином ежедневно в течение 2 недель. Цитратную кровь брали натощак для оценки исходного состояния, и через 4 ч и две недели после начала испытания следующим образом: кровь брали из передней локтевой вены у субъекта,находящегося в положении полулежа, с применением минимального пережима, в шприц, содержащий 0,11 М цитрат (1:9 об/об к крови). Обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП) получали центрифугированием крови при 250 g в течение 10 мин. Большую часть ОТП удаляли, и получали бедную тромбоцитами плазму (БТП) центрифугированием оставшейся крови при 2500 х g в течение 15 мин. Концентрацию тромбоцитов в ОТП определяли в цитометре (MinosSTX, АВХ Ltd, Montpellier, France). Пробы с числом тромбоцитов за пределами 15000-350000 на мкл не использовали. ОТП давали стоять в течение, по меньшей мере, 30 мин перед началом исследований агрегации. Время между взятием крови и агрегацией тромбоцитов никогда не было более трех часов. Агрегацию тромбоцитов определяли на свежеполученных тромбоцитах с применением агрегометра РАР-4 С (BioData, Alpha Laboratories, Southampton, UK). Пробу 200 мкл ОТП добавляли в покрытую силиконом кювету и инкубировали при 37 С в течение 3 мин. Агрегацию вызывали добавлением 20 мкл агониста (одного из следующих агонистов: арахидоновой кисло 30 ты при 455 мкг/мл; 1,8 мкмоль/л ADP; коллагена при 43 мкг/мл, полученного из BioData; тромбина при 0,11 Е/мл, полученного из Sigma,Poole, Dorset, UK; указаны конечные концентрации в смеси для агрегации). Суспензию тромбоцитов перемешивали при 1000 об/мин при 37 С в течение 5 мин. Максимальную агрегацию (в процентах от фона) определяли в пределах этого времени. Эта величина является мерой потенциала агрегации тромбоцитов, причем уменьшение указывает на антиагрегирующий ответ при сравнении проб, взятых до и после употребления тест-материала. Статистическую значимость оценивали при помощи парного t-критерия. Полифенольный порошок красного вина ингибировал агрегацию тромбоцитов либо остро, либо хронически, как показано в табл. 9. Эти эффекты подобны эффектам, но меньше эффектов, наблюдаемых с аспирином (75 мг/день), за исключением тромбина. В частности, действие полифенолов на вызванную арахидонатом агрегацию предполагает ингибирование циклооксигеназной активности тромбоцитов. Эти результаты предполагают, что полифенолы красного вина обладают аспирин-подобными действиями,хотя существует дополнительное ингибирующее действие на вызванную тромбином агрегацию. Таблица 9. Максимальная агрегация тромбоцитов у добровольцев, получавших полифенолы красного вина или аспирин (%). Средняя величина; в скобках - стандартная ошибка измерений Максимальная агрегация тромбоцитов (%) Аспиринb (7) Полифенолы красного винаa (12) Исходное состояние 4 часа 2 недели Исходное состояние 4 часа Тот же самый тест использовали для исследования уровней активности PAI-1 и t-PA у субъектов. Кровь у них брали из передней локтевой вены в положении полулежа, с применением минимального пережатия, в шприц, содержащий 0,5 М цитрат, рН 4,3 (Stabilyte, 1:9 об/об к крови). Плазму получали центрифугированием крови при 2500 х g в течение 15 мин при 4 С и замораживали сразу же при -70 С. Все три пробы (исходную, 4-часовую и 2-x недельную) крови субъекта быстро оттаивали при 37 С в день анализа. Активности t-РА определяли при помощи коммерчески доступного набора ("Chromolize", Biopool, Umea, Sweden),который представляет собой биофункциональный иммуносорбентный анализ. Пробу или стандарт (100 мкл) добавляли в каждую лунку. Микротитрационный планшет инкубировали в планшетном шейкере в течение 20 мин, после чего содержимое лунок выбрасывали и лунки промывали 4 раза. Затем в каждую лунку добавляли 50 мкл раствора субстрата и затем 50 мкл плазминогенового реагента и планшет инкубировали еще в течение 90 мин. Наконец, в каждую лунку добавляли 50 мкл 1,7 М раствора ледяной уксусной кислоты и смешивали в течение 15 с. Поглощение измеряли при 405 нм, и активность t-PA в пробе определяли по линейной калибровочной кривой. Значимость различий между величинами фона, 4 ч и 2 недель для каждого варианта, оценивали при помощи двустороннего парного t-критерия. Эти результаты показаны в табл. 10. Фермент t-PA является важным белком в фибринолитическом пути, и считается, что его активность играет основную роль в фибринолитической системе. Физиологическая роль t-PA состоит в активации плазминогена до плазмина, 31 который деградирует фибрин до растворимых продуктов деградации фибрина. При анализе tPA обычно присутствует в большом избытке специфический ингибитор PAI-1, и он должен быть блокирован, чтобы предотвратить ингибирование активности t-PA. Это обеспечивается применением пробирок для сбора крови Stabilyte, которые обеспечивают слабое подкисление пробы. Поскольку известно, что величины PAI-1 подвержены суточной изменчивости, проводили дополнительное испытание, в котором тех же субъектов исследовали с использованием воды в качестве плацебо вместо полифенолов красного вина. Эти результаты показаны в табл. 11. Таблица 10. PAI-1 и t-PA после добавления полифенолов красного вина (2 г/день). СреднееSEM (стандартная ошибка) Исходное 4 часа 2 недели(МЕ/мл) Таблица 11. Сравнение 2 г полифенолов красного вина с водой после 4 ч Антиген PAI-1 (нг/мл) (n=11) Полифенола красного вина (2 г) Время 0 ч 4 ч 0 ч 4 ч Среднее 21,9 10,6 20,3 9,5SEM 3,8 1,3 2,7 0,9 Величина Р 0,0061 0,0007 Активность t-PA (МЕ/мл) (n=9) Доза Вода Полифенола красного вина (2 г) Время 0 ч 4 ч 0 ч 4 ч Среднее 0,821 1,221 0,566 1,511 Полифенолы красного вина (2 г/день) производили значимое уменьшение в PAI-1 после 4 ч, что ассоциировалось со значимым увеличением активности t-PA (табл. 10). Не наблюдали изменений после ночного голодания после 2 недельной обработки. Однако, как показано в табл. 11, после 4 ч концентрация антигена PAI-1 уменьшается после введения воды, что указывает на то, что действия на концентрацию антигена PAI-1, наблюдаемые после потребления полифенольного порошка, были вызваны просто суточным изменением. Однако введение воды не увеличивало значимо активность t-PA, в то время как порошок полифенолов красного вина приводил к 2,7-кратному увеличению активности t-PA. Сделан вывод, что полифенолы красного вина оказывают полезное действие путем стимуляции фибринолиза посредством увеличения активности t-PA, но не влияют на концентрацию антигена PAI-1. t-PA стимулирует образование плазмина из плазминогена, а плазмин превращает латентную форму TGF- в его активную форму, которая затем ингибирует рост клеток гладкой мускулатуры сосудов, способствующий росту атеросклеротических бляшек. Предпочтительно потребление композиции по изобретению будет вызывать, по меньшей мере, 2%-ное уменьшение максимальной агрегации тромбоцитов (как определено по способу,описанному выше) и/или увеличение активности t-PA, по меньшей мере, 0,75 МЕ/мл (как определено по методу, описанному выше). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Содержащая флавонол сухая композиция растительного происхождения, пригодная для потребления человеком, полученная из винограда, вина или содержащих флавонол побочных продуктов или отходов виноделия, в которой, по меньшей мере, 25 вес.% составляют полифенолы и, по меньшей мере, 1 вес.% составляет флавонол, причем композиция обеспечивает один или несколько следующих эффектов: ингибирование окисления LDL (липопротеинов низкой плотности) плазмы крови,стимулирование выработки фактора TGF,ингибирование агрегации тромбоцитов и стимулирование фибринолиза. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем,что флавонольное содержание включает, по меньшей мере, 2% от oбщего содержания в композиции полифенолов растительного происхождения. 3. Композиция по п.1 или 2, полученная из красного винограда или красного вина и содержащая полифенолы красного вина. 4. Композиция по любому из пп.1-3, дополнительно содержащая наполнитель, разбавитель или носитель. 5. Композиция по любому из пп.1-4, дополнительно содержащая одно или более веществ, выбранных из группы, состоящей из питательных веществ, антиоксидантов, терапевтических веществ, особенно тех, которые оказывают терапевтическое действие в отношении предотвращения и/или лечения ишемической болезни сердца, ароматизаторов и подсластителей. 6. Композиция по любому из пп.1-5, дополнительно содержащая одно или более веществ, выбранных из группы, состоящей из лютеина, ликопена, - и -каротина, витамина А,витамина С, витамина Е (-токоферола и других активных токоферолов), фолиевой кислоты, селена, меди, цинка, марганца, убихинона (коэнзима Q10), салициловой кислоты, 2,3-дигидроксибензойной кислоты, 2,5-дигидроксибензойной кислоты и аспирина. 7. Формованное изделие, содержащее композицию по любому из пп.1-6. 8. Формованное изделие по п.7 в виде единичной дозированной формы. 9. Формованное изделие по п.7 или 8 в виде таблетки, капсулы или пилюли. 10. Напиток, содержащий композицию по любому из пп.1-6 и физиологически приемлемую жидкость. 11. Напиток по п.10, в котором физиологически приемлемая жидкость представляет собой воду, водный раствор, спиртовой раствор, фруктовый сок, молоко или йогурт. 12. Способ приготовления напитка, предусматривающий смешивание композиции или изделия по любому из пп.1-9 с физиологически приемлемой жидкостью. 13. Способ по п.12, в котором физиологически приемлемая жидкость представляет собой воду, водный раствор, спиртовой раствор, фруктовый сок, молоко или йогурт. 14. Способ ингибирования окисления LDL(липопротеинов низкой плотности) плазмы крови у человека, предусматривающий приготовление композиции или изделия по любому из пп.1-9, или напитка по п.10 или 11, и введение этой композиции, изделия или напитка человеку. 15. Способ стимулирования выработки фактора TGF- у человека, предусматривающий приготовление композиции или изделия по любому из пп.1-9 или напитка по любому из пп. 10 34 или 11, и введение этой композиции, изделия или напитка человеку. 16. Способ ингибирования агрегации тромбоцитов и/или стимулирования фибринолиза у человека, предусматривающий приготовление композиции или изделия по любому из пп.1-9 или напитка по любому из пп.10 или 11,и введение этой композиции, изделия или напитка человеку. 17. Применение композиции по любому из пп.1-6 для производства медикамента для ингибирования стимулирования окисления LDL (липопротеинов низкой плотности) плазмы крови человека. 18. Применение композиции по любому из пп.1-6 для производства медикамента для стимулирования выработки фактора TGF- у человека. 19. Применение композиции по любому из пп.1-6 для производства медикамента для ингибирования агрегации тромбоцитов и/или стимулирования фибринолиза у человека. 20. Способ получения медикамента для перорального введения человеку, включающий приготовление композиции по любому из пп.1-6 и приготовление единичных доз этой композиции. 21. Продукт для потребления человеком, в частности, пищевой продукт, содержащий композицию или изделие по любому из пп.1-9.