Штамм бактерий serpens spp., фармацевтическая композиция, способы их применения и диагностический набор

1 Область изобретения Настоящее изобретение относится к способам и композициям, пригодным для обнаружения, предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных, и к новому штамму бактерийSerpens spp. Предпосылки создания изобретения Папилломатозный пальцевидный дерматит(PDD) является хронической инфекцией и очевидным контагиозным заболеванием ступней и/или нижних участков конечностей рогатого скота. Заболевание известно под несколькими обычными и научными названиями, включая пальцевидный дерматит, межпальцевидный папилломатоз, пальцевидный папилломатоз, веррукозный дерматит, бородавчатые стопы, волосатые бородавчатые стопы, волосатые пяточные бородавки, малиноподобная пятка (raspberry(strawberry foot), земляникоподобное гниение ступни. Оно идентифицируется как одно из наиболее важных заболеваний, с которым сталкивается сегодня молочная (животноводческая) индустрия. Заболевание вызывает хромоту животных, которая приводит к экономически значительному снижению производства молока и сопровождается ухудшением здоровья животных, например, потерей веса и плодовитости. Полагают, что инфекционный агент может заноситься на молочную ферму при поступлении нового поголовья, распространяться посредством машинки для обрезки копыт, через доильные аппараты (dairy testers), грязную обувь ветеринаров и т.д. В текущей практике молочных ферм, в результате заболевания, как было установлено, потери молочной продукции, репродуктивные потери и повышенная отбраковка, в среднем, оценивается как, по крайней мере, 100 долларов в день. На сегодняшний день, только два метода контроля являются обещающими: локальное применение антибиотиков (очистка, выскабливание и перевязывание каждой стопы), или их парентеральное введение (проблематично по причинам потерь молока), а также применение бактерицидных ванн для стоп (антибиотики,формальдегид, йод и т.д.). Хотя многие повреждения могут хорошо реагировать на антибиотики или ванны для стоп, содержащие антибактерицидные соединения, известно, что имеют место рецидивы и существуют очевидные свидетельства в пользу развития устойчивости к антибиотикам. Указанные подходы являются трудоемкими, подверженными человеческой ошибке, дорогостоящими, подвергаются правительственным ограничениям и не обеспечивают экологической безопасности окружающей среды или продолжительной защиты от рецидива заболевания. Ввиду значительного экономического ущерба, вызываемого PDD, является желатель 002181 2 ной разработка эффективного пути обнаружения и лечения инфицированных животных, а также их защита от дальнейшей инфекции. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к композициям и способам обнаружения, предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных. Указанное изобретение обеспечивается использованием штамма бактерий Serpens spp.HBL-112 АТСС-202005. Кроме того, оно обеспечивается использованием фармацевтической композиции для предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных,включающей терапевтически эффективное количество живых бактерий Serpens spp. ШтаммаHBL-112 АТСС 202005, или живых бактерий S.flexibilis, или соответствующего бактерина,и/или их иммунологически активного компонента, и/или фрагмента, содержащего антигенную детерминанту, и приемлемый с ветеринарной точки зрения разбавитель или носитель. Указанная фармацевтическая композиция предназначена для лечения и/или предупреждения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных. Она может включать терапевтически эффективное количество живых бактерий Serpens spp. Штамма HBL-112 АТСС 202005 или соответствующего бактерина. Она может также включать терапевтически эффективное количество живых бактерий S. flexibilis или соответствующего бактерина. Настоящее изобретение также относится к способу предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных, заключающемуся во введении животным фармацевтической композиции, охарактеризованной выше. Способ может быть применен, когда у жвачных животных проявляются или не проявляются симптомы папилломатозного пальцевидного дерматита. Изобретение также относится к способу определения антител к возбудителю папилломатозного пальцевидного дерматита в образце сыворотки жвачных животных, заключающемуся в обеспечении контактирования указанного образца с антигеном, выбранным из группы,включающим живые бактерии Serpens spp штамма HBL-112 АТСС-202005, или живые бактерии S. Flexibilis, или соответствующий бактерин, или их иммунологически активный компонент и/или фрагмент, содержащий антигенную детерминанту, перекрестно реагирующую с антигеном S. spp., и выявление комплекса антиген-антитело, образование которого свидетельствует о наличии данных антител. Изобретение также относится к способу определения антител к возбудителю папилломатозного пальцевидного дерматита в образце сыворотки жвачных животных, заключающемуся в обеспечении контактирования указанного об 3 разца с антигеном, выбранным из группы,включающей живые бактерии Serpens spp штамма HBL-112 АТСС-202005 или его иммунологически активный компонент и/или фрагмент, содержащий антигенную детерминанту,перекрестно реагирующую с антигеном S. spp штамма HBL-112 АТСС-202005, добавление в реакционную среду антител к иммуноглобулинам жвачного животного, конъюгированных с ферментом, и субстрата, взаимодействующего с ферментом, с образованием легко определяемого продукта, который свидетельствует о наличии данных антител. Изобретение также относится к диагностическому набору, используемому для осуществления последнего указанного способа определения антител к возбудителю папилломатозного пальцевидного дерматита, содержащий антиген,конъюгат антител к иммуноглобулинам жвачного животного и соответствующий субстрат. Он может также содержать компоненты для приготовления образца сыворотки. Штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 был депонирован в Американской коллекции типовых культур 25 июля 1997 г. и обозначен как штамм HBL-112/1 и ему был присвоен регистрационный номер АТСС-202005. ШтаммыHBL-112 бактерии и HBL-112/1 являются идентичными. В тексте и примерах, которые следуют далее, будет использоваться только обозначение штамм HBL-112 для идентификации бактерий Serpens spp., заявленных в соответствии с изобретением. Краткое описание изобретения Настоящее изобретение иллюстрируется следующими рисунками. Фиг. 1 представляет график, показывающий клинически значимое снижение общей площади поражения бородавками стоп (footwart), наблюдаемое у молочного крупного рогатого скота в ответ на вакцинацию с использованием бактерина Serpens spp штамма HBL-112,полученного согласно настоящему изобретению, по сравнению с контролем. Площадь поражения бородавками дается в квадратных сантиметрах, как рассчитанная на основе измерений поражений стоп крупного рогатого скота в миллиметрах, проведенных в двух направлениях. Время выражается, как число дней после регистрации в опыте. Полное время осуществления эксперимента составляет 76 суток. Фиг. 2 представляет собой диаграмму, где в виде прямоугольников выражены площади поражений бородавками, полученные на основе первоначальных измерений и поствакцинационных измерений (на 49 ый день) у обработанных и контрольных животных методом Games-Howellpost hoc, демонстрирующим значение эффекта вакцинации. Фиг. 3 представляет собой диаграмму, где в виде прямоугольников при использовании метода Games-Howell серологические титры в 4 выборочных образцах от половины зарегистрированных животных, полученные на основе первоначальных измерений и измерений после вакцинации (на 49 ый день) у обработанных и контрольных животных. Фиг. 4 а представляет собой график типичной стандартной кривой положительного образца бычьей сыворотки, титрованной методомELISA с захватом. Фиг. 4b представляет собой график стандартной кривой конкурентного ELISA с использованием постоянного антитела и титрованного антигена. На фиг. 5 приведена микрофотография индуцибельной спиральной формы бактерий Serpens spp. штамма HLB-112. На фиг. 6 приведена микрофотография той же чистой культуры штамма HLB-112 Serpensspp., как и на фиг. 5, иллюстрирующая длинные палочки, короткие палочки и сферические тела типичных бактерий Serpens spp. На фиг. 7 приведена микрофотография той же чистой культуры штамма HLB-112 Serpensspp. штамма HLB-112. Фиг. 8 представляет собой график, который показывает использование вакцины настоящего изобретения для предупреждения поражения волосатыми бородавками стоп, и фиг. 9 иллюстрирует серологический ответ на вакцину настоящего изобретения у незараженных телок. Детальное описание изобретения Выделение и очистка штамма бактерий HLB112 Serpens spp. HLB-112 До настоящего изобретения единственно известным видом рода Serpens был род Serpensflexibilis, который был выделен из верхней сантиметровой части осадка (грязевого), найденного в эфтрофных прудах со свежей водой. Бактерии S. flexibilis представляют собой клетки палочковидной формы, 0,3-0,4 мкм в ширину и 812 мкм в длину. Они находятся либо в виде единичных клеток, либо в виде парных. Клетки в стационарной фазе роста являются более длинными и часто обладают пузырчатыми или сферическими протуберанцами. Бактерии S. flexibilis обладают уникально гибкой подвижностью. Они имеют биполярные бородки из 4-10 жгутиков, а также несколько латеральных жгутиков. Не опубликовано никакой литературы по этому организму, свидетельствующей о какой-либо его способности вызывать патогенез, а также о какой-либо связи с животными. Штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 был выделен авторами настоящего изобретения из ткани крупного рогатого скота, страдающегоPDD. Ткань бородавок была изрублена и отфильтрована в жидкую среду прямой инокуляцией в лунки, вырезанные в чашках с мягким агаром. Инкубация параллельных культур была проведена при 25-37 С в различных воздушных(CampyPak). Конечная очистка штамма была выполнена за счет альтернативного пассажа на чашках с мягким агаром (0.8%) и стандартным агаром (1.5-2%). Альтернативный способ выделения штамма бактерий Serpens spp. HBL-112 заключается в измельчении борoдавчатой ткани, помещении ее на диск фильтра (с размером пор 0,45 мкм) на чашку с мягким агаром и инкубировании ее в течение 2-6 ч в условиях пониженного содержания кислорода (сосуд со свечой). Удаление фильтровального диска после короткого периода инкубации снижает риск загрязнения зооспорами, способными плавать вдоль диска, но не через него. Использование пониженной концентрации агара в чашке с агаром позволяет быстро плавающим спирохетам (Serpens spp.) удалиться через агар в сторону от менее подвижных бактерий; таким образом, их культура становится более очищенной. Повторные последовательные пропускания через фильтр/мягкий агар приводят к получению очищенной бактериальной культуры спирохет, а именно штамму бактерийSerpens spp. HBL-112. Скорость движения через мягкий агар может быть использована для идентификации различий между спирохетами Serpens spp. В очень мягком агаре (0,5%) Serpens flexibilis движется со скоростью 4 мм/ч, достигая края (от центра) 100 мм чашки с агаром приблизительно за 12 часов, в то время как очень быстрые спирохеты движутся только со скоростью 0,50,8 мм/ч. В мягком агаре (0,8%), Serpens flexibilis движется со скоростью 2 мм/ч, в то время как бактерии штамма Serpens spp. HBL-112 движутся со скоростью приблизительно 1,5 мм/ч. Микроскопическая морфология и подвижность Световая микроскопия штамма бактерийSerpens spp. HBL-112 обнаруживает слабое окрашивание грамм-отрицательных палочек, часто искривленных (обычно с 0,5%-5% клеток)(вплоть до 100%, в зависимости от составляющих компонентов среды и условий роста) в форме жестких спиралей (фиг. 5). Как показано на фиг. 6, бактерии Serpens spp. штамма HBL112 являются высоко плеоморфными, и существуют в виде основных форм: прямых или искривленных стержней, палочек, сферических цистоподобных структур (polliwogs) и жестких спиралей. Палочки могут иметь, а могут и не иметь участков жестких спиралей, перемешанных с прямыми участками. Изменения в условиях роста будут индуцировать все возрастающее преобладание одной или другой формы над другой, по сравнению с тем, что наблюдается при стандартных условиях. Высоковлажная фазовоконтрастная микроскопия бактерий Serpens spp. штамма HBL-112,как искривленных, так и прямых палочек в срезах блока мягкого агара обнаруживает их уни 002181 6 кальную и характерную гибкость и змеевидную подвижность, известную для Serpens flexibilis. Палочки, но не polliwogs или жесткие спиральные формы, демонстрируют способность к движению (от плавающего до змеевидного), причем змеевидное движение и гибкость особенно очевидны при условиях более высокой вязкости. Изменение направления движения является быстрым, у организмов, способных к движению в любом направлении вдоль их продольной оси. Жесткие спирали часто неподвижны. Polliwogs или цистоподобные структуры способны плавать и извиваться, подобно истинным polliwogs. При использовании влажных срезов стандартных чашек с агаром морфология молодых культур представлена преимущественно палочковидными формами. В более старых культурах обнаруживаются широко различающиеся по форме палочки, а также коккоидные формы иpolliwogs. В случае мягкой агаровой среды, Serpensspp. выявляют разрезанием небольших агаровых блоков с получением тонкослойных препаратов.Serpens spp. внутри агара или в контакте с ним проявляют змеевидную подвижность. Serpensspp., которые вымываются из агара, обычно имеют форму палочек, хотя они способны изгибаться при перемещении и передвигаться по спирали. Жесткая спиральная форма бактерий Serpens spp. штамма HBL-112, как показано на фиг. 5, редко наблюдается во многих средах, но встречается более часто в среде, содержащей более высокие концентрации соединений серы,таких как цистеин и тиогликолят. Когда эти соединения добавляют даже и при более высоких концентрациях, практически в 100% случаев форма микроорганизма становится спиральной. Трансмиссионная электронная микроскопия подтверждает три преобладающих морфологических фенотипа. Аксиальные волокна(жгутик, лежащий рядом с бактериальной клеткой, внутри клеточной мембраны), характерные и необходимые для идентифицирования организма как относящегося к спирохетам, не обнаруживаются как у Serpens flexibilis, так и у бактерий Serpens spp. штамма HBL-112. Видно, что жгутик присоединяется терминально к некоторым прямым и искривленным палочковидным формам, а также вдоль боковых участков микроорганизма (латеральный жгутик); количество жгутиков на каждом конце (терминальных или субтерминальных) предположительно составляет 2-4, как показано на фиг. 7. Биохимия Биологически чистые культуры SerpensSerpens flexibilis были охарактеризованы с помощью стандартных биохимических реакций,приведенных в таблицах 1 а и 1b, ниже. Таблица 1 а представляет данные по биохимическим реакциям Serpens flexibilis. Serpens spp. штамма возможных этиологических агентов для PDD, иHBL-112 настоящего изобретения, а также трех широкого ряда бактерий рода Спирохеты,бактериальных родов, которые как полагают родственных двум CVDLS спирохет штаммам. близко родственны роду Serpens., который вCVDLS изолят представляет собой семь данное время не относится ни к какому бактериштаммов спирохет, выделенных в связи с пораальному Семейству, согласно Bergey's Manual of жениями волосатыми бородавками стоп, всеDeterminative Bacteriology. обладают одними и теми же ферментативными Таблица 1b представляет данные по ферреакциями. CVDLS 1-9185 MED представляет ментативным реакциям Serpens flexibilis, Serсобой восьмой штамм спирохет, который имеетpens spp., штамма HBL-112, двух штаммов спиотличный ферментативный профиль, чем другие рохет, предложенных CVDLS (California VeteriCVDLS изоляты.nary Diagnostic Laboratory System) в качестве Таблица 1 а. Суммарные биохимические реакции БиохимическаяONPG Аргинин дигидролаза Лизин декарбоксилаза Орнитин декарбоксилаза Цитрат в качестве единственного С-источника Образование H2S Гидролиз мочевины Триптофан деаминаза Образование индола+ Ферменты: глюкоза манноза инозит сорбит рамноза сахароза мелибиоза амигдалин арабиноза+ Восстановление нитрита до азота Состав фермента Щелочная фосфатаза Эстераза (С 4) Липаза эстеразы (С 8) Липаза (С 14) Лейцин ариламидаза Валин ариламидаза Цистин аридамидаза Трипсин Химотрипсин Кислотная фосфатаза Нафтол-AS-BIфосфогидролаза Таблица 1b. Сравнение ферментативных реакций Количество фермента Родственные бактериальные spp. 1 а 1b 1 с 1d 1e 1f 1g 1h+=положительная, но не дает уровня 1a-Штамм 112(1) HBL изолят; =изоляты или испытанные штаммы. 1b-АТСС штамм 29606 (1) 1c-CVDLS изолят (7) 1d-CVDLS 1-9185 MED (1) 1e-Borrelia spp. (6) 1f-Leptospira interrogans (12) 1g-Treponema spp. (oral) (1) 1h-Serpulina spp. (8) 1i-Human Intastinal spirochetes (2) 1k-Human and avian spirochetes (4) Как показано в таблице 1 а, штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 согласно изобретению является очень слабо каталаза положительным при пероксидном анализе, оксидаза положительным при точечном оксидазном анализе(Difco Spot-test), и дает следующие реакции после сорока восьми часов инкубации (при 3536 С) на полосах API 20E (bioMerieux); отрицательную для ONPG (о-нитрофенилD-галактопиранозид), отрицательную для аргинин дигидролазы, отрицательную для лизин декарбоксилазы, отрицательную для орнитин декарбоксилазы, не использует цитрат, не продуцирует сероводород из тиосульфата, отрицательную для уреазы, отрицательную для триптофан деаминазы, не образует индола из триптофана, не продуцирует ацетоина из пирувата, не разжижает желатин и не ферментирует любой из 20E cахаров (глюкозу, маннит, инозитол, сорбит, рамнозу, сукрозу, мелибиозу, амигдалин, L+ арабинозу); восстанавливает нитрат до нитрита, но не восстанавливает до газообразного азота. Как проиллюстрировано в таблице 1a,штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 отличается от S.flexibilis тем, что он дает отрицательную реакцию Voges-Proskauer (VP), гдеS.flexibilis дает положительную реакцию. Voges-Proskauer тест используется для определения способности бактерий к метаболизации пирувата в ацетоин, промежуточного метоболита глюкозы. Другое четкое отличие заключается в способности штамма Serpens spp. HBL-112 к миграции через чашки с мягким (0.8%) агаром.S.flexibilis мигрирует со скоростью около 2 мм/ч, тогда как скорость миграции штамма Serpens spp HBL-112 составляет 70-80% от этой величины. Большая скорость миграцииS.flexibilis через мягкий агар соответствует его более высокой скорости роста в некоторых средах, включающих и бульон Mueller Hinton, иspp. HBL-112 дает следующие реакции после четырех часов инкубации при 35-36 С для ферментов на API-ZYM (bioMerieux) испытываемой полоске после сорока восьми часов аэробного роста на чашках с триптическим соевым кровяным агаром или с OTI бульоном или бульономMueller Hinton: слабо положительную реакцию для щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы,нaфтoл-AS-BI-фocфoгидpoлaзы, и валин ариламидазы; положительную для С 4 эстеразы и С 14 липазы; сильно положительную для С 8 эстеразалипазы и дейцин ариламидазы. Реакции на остальные одиннадцать ферментов, тестированные на этой же полосе, были отрицательными. При тех же условиях роста Serpens flexibilis дает идентичные результаты. Параметры роста. Штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 способен расти на твердой фазе стандартного триптического кровяного соевого агара (TSBA),агаре Mueller Hinton, и шоколадных агарах (1,52% агар) или чашках с мягким BSK-H (0,8%) агаром при аэробных, анаэробных условиях, в условиях 10% СО 2 (в сосуде со свечой), и мик 11 роаэрофильных (BBL Campypak or CampypakPluc) условиях. С повышением содержания кислорода, организм обладает слегка повышенной способностью к миграции вдоль верхнего слоя агаровой поверхности. Рост на TSBA и BSK-H агаре в этих атмосферных условиях протекает при 25, 30 и 35-36 С; область температур является пока не полностью определенной. Штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 способен расти суспендированным в жидкой модифицированной среде Игла (MEM), бульонеMueller Hinton и жидкой тиогликолятной (FTG) среде при 35-36 С. Добавление стерильной сыворотки лошади при концентрации 2-5% (об/об) не оказывает влияния на рост в этих средах. Штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 способен расти в стандартной микробиологической жидкой среде при рН в области от 6,8 до 9,4, с оптимальным ростом при приблизительно рН 7,4. Термин штамм Serpens spp. HBL-112,как он использован здесь, обозначает штамм бактерий Serpens spp. HBL-112, обладающий биохимическими реакциями, приведенными выше в таблицах 1 а и 1b. Настоящее изобретение включает применение бактерий Serpens spp. штамма HBL-112.Serpens flexibilis и/или их иммунологически активного компонента, и/или антигенного эпитопа, по существу, перекрестно реагирующего с иммунологически активной частью (частями) рода Serpens для того, чтобы вызвать защитную иммунную реакцию против PDD у жвачных для предупреждения и/или лечения PDD. Вакцина, содержащая бактерии или бактерин может быть введена животным с симптомами PDD или животным, у которых не проявляются симптомы заболевания. Настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции для предупреждения и/или лечения PDD у жвачных животных, таких как коровы, овцы и козы. Композиции включают эффективное количество бактерий рода Serpens(живых или убитых), или их иммунологически активный компонент и иммунологически приемлемый носитель, адъювант, эмульгатор и/или разбавитель. Пригодными бактериями Serpens являются бактерии Serpens spp. штамма HBL112 и бактерии Serpens flexibilis, предпочтительно бактерии штамма HBL-112 Serpens spp. Убитые бактерии могут быть обычно приготовлены путем выращивания чистой культуры Serpens spp. в обычной микробиологической среде,умерщвлением бактерий с помощью любого пригодного известного способа и стандартизированием антигенной массы до соответствующего CFU/мл эквивалента. Там, где желательной является живая вакцина, бактерии не убивают, но процедура составления композиции остается той же самой, что и для суспензии убитых бактерий. В случае приготовления вакцины соответствующий носитель(ли), адъювант(ты), 002181 12 эмульгатор(ры) и/или разбавитель(ли) могут быть добавлены к бактериальной (живой или убитой) суспензии. Композиция, полученная в соответствии с настоящим изобретением, для предупреждения и/или лечения PDD может быть приготовлена обычным способом путем смешивания убитой или живой бактериальной суспензии Serpensspp. или иммунологически активного компонента бактерий с иммунологически приемлемым носителем, адъювантом, эмульгатором и/или разбавителем, таким как гидроокись алюминия или минеральное масло фармацевтической марки и эмульгатором. Предпочтительным является введение заявленной композиции настоящего изобретения подкожным путем, хотя может быть также использовано парентеральное или оральное введение. Оральные композиции содержат бактерииSerpens spp. или их иммунологически активный компонент или эпитоп антигена, по существу,перекрестно реагирующий с иммунологически активной частью(частями) бактерий Serpens spp. в питьевой воде или пище. Хотя дозы и режимы должны быть в каждом случае установлены с использованием профессионального подхода и веса животного,обычно дозы будут составлять от около 1108 до около 11011 CFU/мл, предпочтительно от около 1109 до около 11010 CFU/мл на основе 5 мл дозы, вводимой подкожно. В некоторых случаях,достаточные терапевтически дозы могут быть получены при более низких дозах, в то время как в других случаях будут требоваться большие дозы. Хотя фиг. 1 показывает дозы вакцины,введенные на 0 день, 8 день и 35 день, предпочтительным теперь является введение от двух до трех доз, первую в 0 день, вторую дозу тремя или четырьмя неделями позже и, если желательно, третья доза может быть введена через три-четыре недели после введения второй дозы. Соответственно, дозы будут содержать то же количество бактерий или бактерина. Парентеральное введение может быть осуществлено при использовании жидких форм в виде единичной дозы, таких как стерильные растворы и суспензии, предназначенные для подкожной или внутримышечной инъекции. Эти формы готовятся суспендированием или растворением определенного количества приготовленной бактериальной суспензии в нетоксичном стерильном наполнителе, пригодном для инъекции, таком, как стерильная водная или маслообразная среда. Или же, отмеренное количество стерильной бактериальной суспензии помещается в стерильный сосуд и герметизируется или лиофилизуется и герметизируется. Соответствующий стерильный сосуд или наполнитель могут быть заготовлены заранее для смешения перед 13 введением. Нетоксичные соли и растворы солей могут быть добавлены для придания инъекционному раствору изотонических свойств. Могут быть также добавлены адъюванты, стабилизаторы, консерванты и эмульгаторы. Настоящее изобретение обеспечивает способ диагностики PDD и обнаружения Serpens антител или Serpens антигенов с использованием обычных методов иммуноанализа. Сыворотка от клинически пораженных животных или подвергнутых воздействию инфекционного агента, но не вакцинированных животных,взаимодействует с Serpens антигеном, если она содержит антитела к бактериям. Связывание антител может быть измерено. Поэтому, Serpens антиген может быть использован в диагностическом тесте скрининга животных, не подвергнутых вакцинации до предварительного воздействия агента. Аналогично, такой диагностический тест может быть также использован для оценки иммунного статуса животного, подвергнутого вакцинации, по отношению к Serpens антигену. Напротив, антитела, которые образовались в организме животного, подвергнутого вакцинации Serpens бактериями, и отобранные у этого животного, могут быть использованы для обнаружения Serpens бактерий. Способ определения присутствия PDD антигена в образце ткани жвачного животного включает введение Serpens spp. бактерий илиSerpens spp. бактерина и/или их иммунологически активного компонента и/или фрагмента,содержащего антигенную детерминанту, перекрестно реагирующую с антигеном Serpens spp. в организме жвачного животного, сбор образующихся антител или сбор клеток, продуцирующих антитела, и впоследствии выделение антител из этих клеток, обеспечение связывания антител со связывающими партнерами и прямое или непрямое измерение продуктов реакции связывания.Serpens антигены, или анти- Serpens антитела, или их иммунологически активные фракции могут быть использованы в способе концентрирования или очистки соответствующих антител или антигенов, применяемых в качестве реагентов. Способ определения присутствия PDD антител в образце сыворотки жвачного животного может соответственно включать обеспечение контактирования образца с бактериями Serpensspp., предпочтительно штаммом бактерий Serpens spp. HBL-112, и обнаружение антител в указанном образце, которые связываются с указанным антигеном. Способ обнаружения PDD или бактерий Serpens посредством определения наличия антител к Serpens в образце сыворотки млекопитающего может соответственно включать инкубирование образца с раствором, содержащим, по крайней мере, один связывающий партнер, способный связывать антитела к Ser 002181pens, и прямое или непрямое определение наличия связывания партнеров в образце. При осуществлении настоящего изобретения используется сыворотка для взятия образцов и Serpens антиген в качестве соответствующего связывающего партнера, однако, может быть использована специфическая реакция связывания для обнаружения другого партнера,следовательно, другие образцы, такие как тканевые срезы, клеточные мазки и части клеток или образцы из природных источников бактерии Serpens per se или их фракции могут быть изучены с использованием этого метода. Связывающий партнер может включать либо один, либо большее число обнаруживаемых маркеров, таких как радиоизотоп, металл или флуоресцирующий хромофор, или он может быть обнаружен не непосредственно, а с помощью фермента, конъюгированного с обнаруживаемым субстратом. Или же, в том случае, когда первые связывающие партнеры не содержат ни маркера, ни другого средства для прямого обнаружения,могут быть получены вторые связывающие партнеры для последующего обнаружения либо с использованием группы антигенов Serpens,или комплементарных им антител и/или антиSerpens антител или посредством использования связывающих партнеров, которые не являются родственными Serpens (такими как авидинбиотин), но которые могут быть использованы непосредственно или опосредованно для обнаружения первых связывающих партнеров. Последующее обнаружение и количественная оценка вышеуказанных маркеров, связывающих партнеров или других измеряемых средств могут быть осуществлены обычным способом в соответствии с известной методологией. Или же, обнаружение Serpens в образце может быть осуществлено с помощью прямого или опосредованного измерения физических параметров, характерных для Serpens. Такие измерения могут включать обнаружение и количественное определение соединений, или смесей соединений, содержащих липиды, белки или нуклеиновые кислоты, например ДНКамплификацию, хроматографическое разделение, в частности газовую или жидкостную хроматографию. Изобретение также относится к диагностическому набору для применения при осуществлении способа, согласно изобретению, который включает антиген Serpens и один или большее количество связывающих партнеров. Диагностический набор может также включать реагенты, требуемые для приготовления образца, и необязательно реагенты для обнаружения связанного антитела. Настоящее изобретение иллюстрируется предпочтительными вариантами его осуществления в следующих примерах. Все значения 15 температур выражены в градусах и все части и соотношения являются весовыми, если не оговорено иное. Пример 1. Цельноклеточный штамм бактерий Serpensspp. HBL-112, бактерии Serpens flexibilis или другие бактерины Serpens spp. (убитые культуры) готовят выращиванием бактериальных клеток в стандартной микробиологической среде,умерщвлением клеток формальдегидом, промыванием стерильным солевым раствором для удаления клеточного дебриса, неиспользованных компонентов среды, продуктов бактериальной жизнедеятельности и т.д. и суспендированием бактерина в стерильном забуференном солевом растворе с 10% (об/об) гидроокиси алюминия (адъювант) и 0.01% тимерозала (консервант). Пример 2. Цельноклеточный штамм бактерий Serpensspp. HBL-112 или Serpens flexibilis или другие бактерины Serpens spp. (убитые культуры) готовят выращиванием бактериальных клеток в стандартной микробиологической среде, умерщвлением клеток формальдегидом, промыванием стерильным солевым раствором для удаления клеточного дебриса, неиспользованных компонентов среды, продуктов бактериальной жизнедеятельности и т.д. и эмульгированием бактерина в стерильном забуференном солевом растворе с 25% (об/об) минерального масла фармацевтической марки и эмульгаторов (адъювант) и 0.01% тимерозала (консервант). Пример 3. Невирулентный штамм бактерий Serpensspp. или другой апатогенный бактериальный штамм, несущий перекрестно-протективныеSerpens подобные антигены, выращивают в стандартизованных условиях (например, с использованием одной из нескольких обычных микробиологических сред с рН между 6,8-9,4,инкубируют при температуре приблизительно 25-37 С в одной из различных атмосфер в течение периода времени от нескольких суток до нескольких недель), устанавливают, что культура является чистой культурой с помощью соответствующего метода, такого как микроскопия и морфология колоний, скорость движения через мягкий агар, характеризация подвижности (motility) при фазовой контрастной микроскопии,и/или биохимическое тестирование, и затем собирают. Собранные клетки промывают, суспендируют в стерильном наполнителе (например,забуференном солевом растворе), содержащем любой обычный крископический защитный агент, обычно используемый при изготовлении вакцины, вносит в стерильный сосуд и консервируют либо с помощью замораживания, либо лиофилизацией. Сохраняемый материал оттаивают или восстанавливают повторно для введения подкожно, орально, либо парентерально 16 жвачным животным с соответствующим дозированием. Пример 4. Все 76 молочных коров с активными необработанными повреждениями PDD были внесены в перечень для испытаний при обработке вакциной. Пятьдесят животных были из первой молочной серии (наиболее продуктивные коровы), и двадцать шесть были из госпитальной серии. Так как госпитальные коровы были аналогично подвергнуты обработке, как при маститах, которая может изменять их иммунологический профиль, только первая серия коров была использована в качестве тестируемых и исследована серологически. Все животные были оценены на хромоту и зарегистрировано количество стоп на начало испытания; сгруппированные по принципу хромота/стопа, каждая корова была оценена статистически для получения либо вакцины,либо плацебо в процессе испытаний. В первый день и приблизительно дважды еженедельно после этого каждую стопу животного очищали водой, распыляемой при соответствующем давлении из ручного опрыскивателя, и оценивали на наличие отсутствия боли и на размер повреждений, обусловленных PDD; в каждый визит определяли молочную продуктивность для оценки возможного негативного эффекта (covariate), и собирали информацию о статусе, относящемся к беременности, возрасту, количеству лактаций и числу суток, в которые было получено молоко, для оценки возможного негативного эффекта или нарушений. Оценку проводили вслепую: учетные листы не показывали, какие животные были подвергнуты вакцинации, а какие были контрольными, и количество испытанных животных препятствовало запоминанию их статуса. 5,0 мл Дозу вакцины или плацебо вводили каждому животному. Вакцина содержала 2109CFU/мл штамма бактерий Serpens spp. HBL-112,суспендированного в стерильном фосфатном буферном растворе с 10% (об/об) гидроокиси алюминия и 0,01% тимерозала. Плацебо не содержал бактерина, бактерий или бактериальных антигенов, но в других отношениях был идентичен вакцине. Вакцину или плацебо вводили каждому испытываемому животному в 0 день,на 8 день и на 35 день: первоначально в виде двух доз с небольшим интервалом между введениями для того, чтобы определить, может или не может быть вакцина использована терапевтически. В течение курса от трех до четырех недель клинические улучшения наблюдали у многих испытываемых животных, как показано на фиг. 1. Клинически оказалось, что наблюдается выход на плато в непрерывном улучшении,так что было принято решение провести введение бустерной дозы вакцины на пятую неделю испытания. Впоследствии было обнаружено, что частичный выход на плато обусловлен наличи 17 ем персистирующей рубцовой ткани, которая ошибочно оценивалась, как бородавчатая ткань. Причиной того, что в контрольной группе начинают появляться улучшения после 40 дней(фиг. 1) было применение окситетрациклиновых ванн для стоп в случае вакцинированных и контрольных коров. Однако животные, подвергнутые вакцинации, обнаруживали статистически значительное преимущество над контрольными животными с точки зрения уменьшения бородавчатых участков, несмотря на улучшение состояния контрольных животных, приписываемое единственно окситетрациклиновым ваннам стоп. У трех животных с признаками хромоты,не было обнаружено повреждений при регистрации на начало испытаний. Когда у них не развивалось повреждений через восемь недель испытаний, они были выведены из эксперимента. Два из этих животных позволяли получить некоторую полезную информацию: у них не было выявлено никаких серологически положительных результатов при исследовании методомELISA с использованием штамма бактерий Serpens spp. HBL-112 в качестве антигена; указанное позволяет предположить, что данные животные предварительно не контактировали с эпитопами указанных бактерий. То обстоятельство, что эти испытываемые животные без повреждений не распознавали штамм бактерийSerpens spp. HBL-112, в анализе ELISA, в то время как животные, не подвергнутые вакцинации (контрольные), имеющие повреждения,распознавали данный штамм в значительной степени подтверждают, что Serpens spp. вовлечены в патогенез PDD. Фиг. 2 и 3 показывают воздействие,имеющее место до любого эффекта, обусловленного антибиотиковыми ваннами для стоп: клинические эффекты проявляются у животных,подвергнутых вакцинации (их нет у контрольных животных), и, таким образом, приписываются единственно использованию бактерина штамма HBL-112. Кроме того, ограничение данных в столбцах диаграммы результатами,видимыми только через 49 дней до клинического улучшения, наблюдается после третьей дозы вакцины, введенной на 36 день. У всех из сорока пяти животных отбирали кровь три раза во время эксперимента для определения антител к возбудителю PDD. Двадцати двум серологически наблюдаемым коровам была проведена вакцинация, включая двух животных, у которых не обнаруживали бородавок; двадцать три животных были контрольными. Как показано на фиг. 3, все животные с бородавками (и те, которым была проведена вакцинация, и контрольные животные) были серопозитивными по отношению к штамму бактерийSerpens spp. HBL-112 в начальном (перед вакцинацией) ELISA, свидетельствуя о предварительном или конкурентном контактировании с 18 тем же самым или перекрестно-реагирующем эпитопам вакцинного штамма HBL. Фиг. 3 далее иллюстрирует, что в то время как у контрольных животных уменьшается титр антител в ELISA по мере проведения испытания, животные, подвергнутые вакцинации, обнаруживают повышение титра, что указывает на то, что вакцина обеспечивает более быстрый иммунологический ответ. Так как указанное увеличение титра было обнаруживаемым лишь через восемь дней после первой (и только в это время) вакцинации, это позволяет строго предположить, что вакцина ускоряет анамнестический ответ у животных, подвергнутых вакцинации, а не просто первичный ответ (который обычно требует 1421 дней для того, чтобы стать обнаруживаемым). В целом, абсолютная величина титра была выше (хотя незначительно:.460 против .441) среди контрольных животных, по сравнению с животными, подвергнутыми вакцинации, в начале испытания и оставалась той же или снижалась в процессе эксперимента для двадцати из двадцати трех контрольных животных. Три контрольных животных с небольшим увеличением титра также входили в группу животных, у которых обнаруживалась наибольшая общая площадь поражения в процессе испытания: экспонирование агента в области поражения было рассчитано с небольшим увеличением. У двадцати одного из двадцати двух животных, подвергнутых вакцинации, обнаруживалось вполне значительное увеличение титра (.441 увеличивался до .560) в ответ на вакцинацию: у одного животного выявлялось небольшое снижение титра. Таблица 2, приведенная ниже, представляет таблицы суммы квадратов III Типа для зависимых изменений площади поражений бородавками и титра, и показывает статистически значимые различия между животными, подвергнутыми вакцинации, и контрольными в ответ на вакцинацию. В то время как стадо, в целом, обнаруживало существенное уменьшение размеров поражения (площадь поражения бородавками) между началом испытания и после 49 суток(значение р = 0,0420), наиболее значительный эффект выявлялся у животных, подвергнутых вакцинации: значение р = 0,01555 для взаимодействий до-после со статусом вакцинации(=группе). Изменения в титре, наблюдаемые в стаде, как в целом, между началом испытания и на 49 сутки, единственно приписывается увеличению, наблюдаемому у животных, подвергнутых вакцинации (значение р для взаимодействия до-после в расчете на группу является достаточно значительной против значения р = 0,0001 для единичных эффектов до-после при величине р = 0,2682). Таблица 3, приведенная ниже, представляет серии средних значений до и после вакцина 19 и контрольными. У животных, подвергнутых ции для исследованных вариабельно зависимых вакцинации, определенно не развиваются такие величин в анализе тестирования вакцины. обширные поражения, и не сохраняются пораИз измеренных факторов только общая жения такое же время, как у контрольных жиплощадь поражения бородавками показывает вотных. Смотри фиг. 1-3. статистически значимые ( р 0,05) различия между животными, подвергнутыми вакцинации,Таблица 2 Сумма квадратов типа III Среднее значение квадратного Источник Сумма квадратов типа III Среднее значение квадратного Сумма квадратов корня Таблица 3 Средние значения Таблицы Эффект: до/послеГруппа Зависимая: площадь поражения Счет до, вакцинации 20 до, контроль 23 после, вакцинации 15 после, контроль 22 Средние значения Таблицы Эффект: до/послеГруппа Зависимое: поражениеСчет до, вакцинации 20 до, контроль 23 21 после, вакцинации 15 после, контроль 22 Средние значения Таблицы Эффект: до/послеГруппа Зависимое: влияние на стопы Счет до, вакцинации 20 до, контроль 23 после, вакцинации 15 после, контроль 22 Таблица 3 (продолжение) Средние значения Таблицы Эффект: до/после Группа Зависимая: хромота Счет до, вакцинации 20 до, контроль 23 после, вакцинации 15 после, контроль 22 Средние значения Таблицы Эффект: до/послеГруппа Зависимый: титр Счет до, вакцинации 20 до, контроль 23 после, вакцинации 15 после, контроль 22 Пример 5. Тот же антиген, который присутствует в вакцине и бактерине штамма HBL-112, также используется в тесте ELISA для мониторинга серологического ответа на вакцинацию. Антиген (5%-ная суспензия концентрированных убитых, отмытых целых клеток бактерий штаммаHBL-112, содержащая приблизительно 5108 клеток/мл в покрывающем буфере, в карбонат натрий/бикарбонатном буфере при рН 9,6) помещают в ячейки 96-луночного планшета для микротитрирования на ночь при комнатной температуре. Планшет осторожно промывают с использованием промывного буфера (натрий фосфатного буфера, содержащего детергент,такой как Твин или Тритон (рН 7,5. Добавляют образец бычьей сыворотки (первое антитело) и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч. Планшеты осторожно промывают,вновь используя промывной буфер, для удаления несвязавшихся антител. Второе антитело к иммуноглобулинам коровы такое, как антитело овцы, конъюгированное с щелочной фосфатазой, инкубируют в планшете в течение одного часа при комнатной температуре. Планшет вновь осторожно промывают, используя промывной буфер. Затем его инкубируют с пнитрофенил фосфатным субстратом в 10% диэтаноламиновом буфере (рН 9,8) при комнатной температуре до тех пор, пока максимальная оптическая плотность OD в лунках не достигнет приблизительно 0,8-1,0, без использования останавливающего агента. Фермент щелочная фосфатаза, присоединенная ко второму антителу, конвертирует п-нитрофенилфосфатный субстрат и бесцветный раствор становится бледножелтым. Связывание первого антитела, второго антитела и, следовательно, величина регистрируемой OD является пропорциональной количеству антитела, присутствующего в коровьей сыворотке, которое направлено к антигену бактерий Serpens sрр. штамма HBL-112. Указанный способ является, по существу,стандартным ELISA и любой другой вариантELISA и многочисленные его модификации, как ожидается, будут давать аналогичные результаты. Описанная методика отличается от типичных способов ELISA тем, что стадии инкубирования проводятся при комнатной температуре. Целью этого является только снижение внутрилуночных изменений, обусловленных индуцированными температурой краевыми эффектами. Сыворотка от животных, не подвергнутых вакцинации, связывается с антигеном бактерийSerpens spp. штамма HBL-112, если она содержит антитела, направленные к бактериям. Пример 6. Часто желательно использование многокомпонентного (содержащего множество антигенов) препарата вакцины для уменьшения количества инъекций, которые должны быть проведены животному. Использование единичного фармацевтического препарата, который содер 23 жит множество антигенов, сводит к минимуму боль и риск инфекции (абсцессов в участке, в который осуществляется инъекция) у животного, и снижает затраты труда и риск заражения(при контакте с повреждениями и/или случайной само-инъекции) пользователей препарата. Тот же самый антиген, использованный сам по себе для получения вакцин, описанных в примерах 1 и 2, также может быть использован в комбинации с любыми антигенами для производства многокомпонентной вакцины, полезной для лечения и/или предупреждения других бактериальных инфекций жвачных животных дополнительно к PDD. Гибкость состава на основеSerpens spp. вакцин будет позволять использование фактически любого другого вакцинного антигена, применяемого в настоящее время для вакцинации жвачных животных, который преимущественно включается в состав на основеSerpens spp. вакцины для одновременного инъецирования. Или же, антиген Serpens spp. может быть включен в любой другой фармацевтический препарат для жвачных животных, вводимый любым другим способом, кроме внутривенного введения. Например, штаммы анаэробных бактерий,таких как бактерии родов Bacteroides и/или Fusobacterium, которые являются агентами, вызывающими заболевания, известное, как копытная гниль крупного рогатого скота и овец, могут быть введены вместе с антигенами Serpens spp. в фармацевтический препарат, который при инъецировании жвачным животным, будет предотвращать оба заболевания, а именно и PDD, и копытную гниль. В другом случае, предупреждение PDD у молочных коров может оптимально требовать вакцинации антигенами Serpensspp. в недойный сухой период, так как пик вспышки заболевания приходится на первые несколько месяцев после начала лактации. Поскольку много других вакцин вводится корове в течение этого периода для того, чтобы обеспечить высокие титры материнских антител для передачи теленку через молозиво, антиген Serpens spp. может быть преимущественно введен корове вместе с другими вакцинными антигенами в течение этого сухого периода. Или же, известно, что некоторые другие антигены обладают общими иммуностимулирующими свойствами, например суперантигены бактерий рода Staphylococcus или коровьи антигены некоторых колиформных бактерий,таких как бактерии штамма J-5 Escherichia coli,когда они включены в вакцины вместе с первым антигеном. В этом случае включение в состав 24 вакцины любого подходящего иммуностимулирующего антигена вместе с антигеном бактерийSerpens spp. или родственного антигена(нов) приводит к получению вакцины с усиленными иммунопрофилактическими свойствами. Пример 7. Были проведены исследования при использовании двойного слепого выборочного метода. Коровы с PDD поражениями были разделены на две равных группы на основании показателей хромоты и повреждения стоп. Одна группа, выбранная случайным образом, была подвергнута вакцинации тремя дозами по 5,0 мл вакцины, содержащей 3,3108 CFU/мл бактеринаSerpens spp. штамма HBL-112, суспендированного в стерильном фосфатном забуферном растворе с 10% (об/об) гидроокиси алюминия и 0,01% тимерозала, а другой группе вводили 5,0 мл дозы плацебо, идентичного вакцине, но не содержащего бактерина. Для каждого измерения коровьи стопы очищали водой, и площадь поражений бородавок измеряли миллиметровой линейкой; измерения осуществлял персонал, незнакомый с тем,проводилась ли животному вакцинация или нет. Повторная оценка площади бородавок была проведена через шесть с половиной месяцев после начала исследования. Литературные сообщения указывают на неожиданную ремиссию заболевания с интенсивностью, превышающей 60%, через семь - двенадцать недель после перевязки поражений. В таблице 4, приведенной ниже, представлены данные использования трех доз вакцины по сравнению с контролем. Когда общая площадь поражения бородавками усредняется по всем животным с такими поражениями, а не по всей группе, из таблицы 4, приведенной ниже,можно видеть, что все тридцать четыре животных, подвергнутых вакцинации, обнаруживают улучшение, заключающееся в уменьшении размера поражений, тогда как только у тринадцати леченных контрольных животных выявляется уменьшение средней площади бородавок в ответ на окситетрациклиновые и линкоциновые ванны для стоп. Все животные, подвергнутые вакцинации, реагировали на комбинированную терапию (вакцина с ваннами для стоп), тогда как две трети контрольных животных не показывали улучшения в результате только ванн для стоп. Пониженное распространение волосатых бородавок после вакцинации Serpens видами бактерина. Животные, подвергнутые вакцинации Контрольные животные Поражениекоровы Преобла- Средн. Waкоровы Преобла- Средн. Wa дание дание Апр. 96 0 неделя Бородавк. 34 100.0% 10.3 37 100.0% 10.2 Общее 34 37 11 32.4% 4.6 23 63.9% 11.7 Бородавк. Июнь 96 10 Бородавок недель нет 22 64.7% 13 36.1% 5 недель Не видны 1 2.9% 0 0.0% после 34 36 вакцинац. Общее 5.8 44.4% 6.5 16 26.5% 9 Бородавк. Сент. 96 24 Бородавок недели 36.1% 13 55.9% 19 нет 19 2.8% 1 14.7% 5 Не видны недель 16.7% 6 2.9% 1 Твердые после 36 34 вакцинац. Общеесухие коровы Дата В среднем у всех животных, подвергнутых вакцинации, выявлялось улучшение в течение курса испытания; только одна третья часть контрольных животных обнаруживала улучшение,заключающееся в уменьшении размеров повреждения. Из одиннадцати животных с бородавками, подвергнутых вакцинации, к концу десятой недели испытаний у пятерых имело место полное выздоровление за шесть месяцев. При проверке после шести месяцев у трех животных,подвергнутых вакцинации, обнаружились новые поражения, указывающие на степень рецидива поражений, составляющую только 10,7% (3/28). В группе контрольных животных на шестой месяц выявлялось недостаточное число выздоровевших животных для оценки степени ремиссии поражений. На шестой месяц, распространение поражений бородавками среди контрольных животных снижалось до 44,4% (16/37) при использовании линкоциновых ванн для стоп,однако, кажущееся улучшение не учитывало,что пять животных были выбракованы как неподдающиеся бородавчатым поражениям стоп. Пример 8. Животные (88 коров и телок породы Holstein) были разделены на три равных группы на основании возраста, способности к деторождению, размера (DIM), продуктивности и параметра SCC из наиболее современных данных официальной системы учета (DHIA). Каждая группа была отнесена к ее статусу вакцинации(F1=29 животных; F2=29 животных; контроль=30 животных) статистически. Животные в группах F1 и F2 были подвергнуты вакцинации с месячными интервалами 5,0 мл дозами вакцины, содержащей 7,9108 CFU/мл бактеринаSerpens spp. штамма HBL-112, суспендированного в стерильном фосфатном буферном растворе с 10% (об/об) гидроокиси алюминия и 0,01% тимерозала, в расчете на общее количество трех вакцинных доз. Контрольные животные получали 5,0 мл дозы плацебо, использованного в примере 7. Распространение поражений боро давками в каждой группе было определено визуальной проверкой животных в начале испытания, а возникновение новых случаев определяли визуальной проверкой животных с недельными интервалами. Как показано на фиг. 8, обе группы животных F1 и F2, подвергнутых вакцинации, обнаруживали защитные эффекты против развития бородавок в течение четырнадцатинедельного периода, по сравнению с контрольными животными. (В группе F1 было зарегистрировано 3 новых случая появления бородавок (3/24 при риске 12,5%) в то время, как в группе F2 выявлялось 2 новых случая (2/23 при риске 8,7%). В течение того же самого периода времени, в контрольной группе животных обнаружилось 11 новых случаев появления бородавок (11/26 при риске 42,3%), означающее, что у контрольных животных была более чем в четыре раза большая вероятность появления бородавок, чем у животных, подвергнутых вакцинации, в течение четырнадцати недель. Это испытание продолжается и, как показано на фиг. 8, нет сведений о том, что в контрольной группе появление новых случаев образования бородавок будет прекращаться, в то время как у животных, подвергнутых вакцинации, не было зарегистрировано новых случаев развития бородавок с момента получения третьей дозы вакцины. Фиг. 8, таким образом, показывает эффективность вакцины на основе бактерина Serpens spp. в предупреждении появления новых поражений бородавками при тестировании вакцины на всем стаде. Пример 9. Животные (88 коров и телок породы Holstein) были разделены на три равных группы на основании возраста, способности к деторождению, размера (DIM), продуктивности и параметра SCC из наиболее современных данных официальной системы учета (DHIA). Установление статуса вакцинации в каждой группе было проведено статистически. В целом, контрольная группа включала четыре телки, пять 27 животных входили в группу F1, подвергнутую вакцинации, и шесть животных входили в группу F2, подвергнутую вакцинации. Животные были подвергнуты вакцинации с месячными интервалами 5,0 мл дозами вакцины, как указано в примере 8, в целом тремя дозами вакцины; контрольным животным вводили 5,0 мл дозы плацебо, как указано в примере 8. Титры ELISA по отношению к антигену целых клеток были определены во всех четырех образцах сыворотки от каждого животного в одно время для того,чтобы свести к минимуму флуктуации, обусловленные использованными планшетами, работой оператора и изменяемостью реагента. Титры определяли при сравнении с установленной стандартной кривой для заданного антигена. Фиг. 9 показывает серологический ответ на вакцинацию у первых телочек, у которых не было поражений бородавками, оцененный через один месяц после введения каждой из трех доз бактерина и сравнения с базовыми величинами и контрольными животными. В большинстве случаев титр увеличивался у животных, подвергнутых вакцинации, после второй дозы бактерина; третья доза не давала дополнительного увеличения титра. Базовые значения для всех трех групп были неопределимыми. Титры антител у контрольных животных оставались на уровне базовых величин на протяжении исследования. В обеих группах животных, подвергнутых вакцинации, регистрировали среднее трехкратное увеличение титра в ответ на первую дозу бактерина с последующим трех-шестикратным увеличением титра после второй дозы. Третья доза бактерина приводила к незначительному увеличению титра. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Штамм бактерий Serpens spp. HBL-112 АТСС - 202005. 2. Фармацевтическая композиция для предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных,включающая терапевтически эффективное количество живых бактерий Serpens spp. штаммаHBL-112 АТСС 202005 или живых бактерий S.flexibilis или соответствующего бактерина и/или их иммунологически активного компонента и/или фрагмента, содержащего антигенную детерминанту, и приемлемый с ветеринарной точки зрения разбавитель или носитель. 3. Фармацевтическая композиция по п.2,для лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачного животного. 4. Фармацевтическая композиция по п.2,для предупреждения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачного животного. 5. Фармацевтическая композиция по п.2,отличающаяся тем, что она включает терапев 002181 28 тически эффективное количество живых бактерий Serpens spp. штамма HBL-112 АТСС-202005 или соответствующего бактерина. 6. Фармацевтическая композиция по п.2,отличающаяся тем, что она включает терапевтически эффективное количество живых бактерий S. flexibilis или соответствующего бактерина. 7. Способ предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных, заключающийся во введении животным фармацевтической композиции по любому из пп.2-6. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что у жвачных животных проявляются симптомы папилломатозного пальцевидного дерматита. 9. Способ по п.7, отличающийся тем, что у жвачных животных не проявляются симптомы папилломатозного пальцевидного дерматита. 10. Способ определения антител к возбудителю папилломатозного пальцевидного дерматита в образце сыворотки жвачных животных, заключающийся в обеспечении контактирования указанного образца с антигеном, выбранным из группы, включающей живые бактерии Serpens spp. штамма HBL-112 АТСС 202005, или живые бактерии S. Flexibilis или соответствующего бактерина, или их иммунологически активный компонент и/или фрагмент,содержащий антигенную детерминанту, перекрестно реагирующую с антигеном S.spp, и выявление комплекса антиген-антитело, образование которого свидетельствует о наличии данных антител. 11. Способ определения антител к возбудителю папилломатозного пальцевидного дерматита в образце сыворотки жвачных животных, заключающийся в обеспечении контактирования указанного образца с антигеном, выбранным из группы, включающей живые бактерии Serpens spp. штамма HBL-112 АТСС-202005 или его иммунологически активный компонент и/или фрагмент, содержащий антигенную детерминанту, перекрестно реагирующую с антигеном S. spp. штамма HBL-112 АТСС-202005,добавление в реакционную среду антител к иммуноглобулинам жвачного животного, конъюгированных с ферментом, и субстрата, взаимодействующего с ферментом, с образованием легко определяемого продукта, который свидетельствует о наличии данных антител. 12. Диагностический набор, используемый для осуществления способа по п.11, содержащий указанный антиген, конъюгат антител к иммуноглобулинам жвачного животного и соответствующий субстрат. 13. Набор по п.12, отличающийся тем, что он дополнительно содержит компоненты для приготовления образца сыворотки.