Восстановительное алкилирование гликопептидных антибиотиков

1 Настоящее изобретение относится к усовершенствованным способам восстановительного алкилирования гликопептидных антибиотиков. Настоящее изобретение обеспечивает повышенную региоселективность реакции между множеством участков, и, тем самым, способствует увеличению выходов предпочтительного продукта. В частности, настоящее изобретение относится к способам предпочтительного осуществления реакции восстановительного алкилирования амина на сахаридном участке гликопептидных антибиотиков, имеющих один или более дополнительных аминов. Сущность настоящего изобретения заключается в обнаружении того факта, что проведение реакции в присутствии растворимой меди способствует предпочтительной реакции с амином в положении сахарида, в результате чего повышается выход реакции восстановительного алкилирования в данном участке. Начальная стадия заключается в образовании медного комплекса гликопептидного антибиотика, который затем подвергают восстановительному алкилированию. Настоящее изобретение также относится к указанным медным комплексам исходных гликопептидных антибиотиков. Алкилированные продукты гликопептидного антибиотика получают в виде медных комплексов,которые представляют другой вариант осуществления настоящего изобретения. Настоящее изобретение относится к восстановительному алкилированию гликопептидных антибиотиков. Гликопептидные антибиотики представляют собой большой класс веществ, либо продуцируемых микроорганизмами, либо продуцируемых микроорганизмами с последующей частичной модификацией. Два из них, ванкомицин и тейкопланин,имеются в продаже как антибактериальные продукты, но многие другие были открыты позже и рассматриваются как перспективные соединения для дальнейшего исследования, особенно,со времени возникновения в последние 1980-е годы устойчивости к различным антибиотикам,включая и сами гликопептиды. Весь класс гликопептидных антибиотиков хорошо описан в"Glycopeptide Antibiotics", изданной Ramakrishnan Nagarajan (Marcel Dekker, Inc., New York,1994). Среди гликопептидов, открытых позже,известны такие соединения, как А 82846 А (называемые также эреомомицином), А 82846 В (известное также как хлорориентицин А), А 82846 С(известное также как ориентицин С) и ориентицин А. Настоящее изобретение относится предпочтительно, к использованию гликопептидных антибиотиков типа ванкомицина, включая ванкомицин, А 82846 А, А 82846 В, А 82846 С, и ориентицин А; а особенно предпочтительно, к использованию А 82846 В. Было осуществлено множество модификаций природных гликопептидов. К этим модифи 002925 2 кациям относится восстановительное алкилирование реакционноспособного амина (аминов),присутствующего в гликопептидах. См., например, патент США 4698327, в котором описано восстановительное алкилирование ванкомицина, и ЕРО 435503 А 1 и ЕРО 667353 А 1, в которых описано восстановительное алкилирование ряда гликопептидов, включая ванкомицин,А 82846 А, А 82846 В, А 82846 С, и ориентицин А. В указанных работах описано восстановительное алкилирование, которое приводит к введению в исходные гликопептиды широкого ряда алкильных групп. В патенте 4698327 описаны алкилированные соединения ванкомицина формулы где R представляет водород или метил;R1 представляет водород или метил;R2 и R3 независимо представляют водород или группу формулы R6R7CH-;R5 представляет водород, C1-С 10 алкил, C2 С 10 алкенил, C1-С 4 алкокси, C3-С 10 циклоалкил,C5-С 12 циклоалкенил, фенил, нафтил, инденил,тетралинил, декалинил, адамантил, моноциклическую гетероциклическую кольцевую систему,содержащую 3-8 атомов на кольце, или бициклическую гетероциклическую кольцевую систему, содержащую 6-11 атомов, при условии,что, по крайней мере, один атом кольцевой системы является атомом углерода, и, по крайней мере, один атом кольцевой системы является гетероатомом, выбранным из О, N и S и R5 может быть замещен одним или более гидрокси-,нитро-, C1-С 10 алкокси, C1-С 10 алкильной группой, фенильной группой, C1-С 6 алкилтиогруппой, нитрильной группой, галогеном, С 2 С 4 ациламиногруппой, аминогруппой, C1-С 4 диалкиламиногруппой; и R4 представляет водород,при условии, что, (1) по крайней мере, один изR2 и R3 не должен быть водородом; (2) если n=2,то R должен представлять водород;(3) если R представляет метил, а R3 представляет водород, то R2 не может быть метилом; и (4) если R и R1 оба представляют метил, то R2 представляет водород или метил, и n=1. В ЕРО 435503 А 1 описаны алкилированные и ацилированные гликопептиды формулы где R представляет водород или (4-эпиванкозаминил)-O-гликозильную группу формулы или гликозильную группу формулы Х представляет водород или хлор;Y представляет водород или хлор;R5 и R6 независимо представляют водород или C1-С 3 алкил;R представляет (4-эпиванкозаминил)-O-гликозильную группу, то R1, R2 и R3 не являются все водородом, и если R представляет водород или гликозильную группу, то R1 и R3 не являются оба водородом. В том случае, когда R представляет (4-эпиванкозаминил)-O-гликозил, определенными таким образом гликопептидами являются Х=Н, Y=Cl, A82846A Х=Y=Cl, A82846B Х=Y=Н, А 82846 С Х=Cl, Y=Н, ориентицин А. Таким образом, в ЕРО 435503 А 1 описаны алкильные производные A82846A, A82846B,А 82846 С и ориентицина А, где алкильной группой является группа где R4 представляет водород, галоген, C1 С 8 алкил, или C1-С 8 алкокси. В ЕРО 667353 А 1 описаны алкилированные гликопептидные антибиотики формулы где X и Y каждый независимо представляют водород или хлор;R1 представляет водород или маннозу;R5 представляет водород или маннозу;R8 выбирают из группы, состоящей из а) полициклического арила, незамещенного или замещенного одним или более заместителями, независимо выбранными из группы,состоящей из(xiv) группы формулы -С(О)N(R10)2, где каждый заместитель R10 независимо представляет водород, (C1-С 6)алкил, (C1-C6)алкокси, фенил, или фенил, замещенный (C1-С 6)алкилом,(C1-С 6)алкокси, галогеном, или нитро;(b) гетероарила, незамещенного или замещенного одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из(i) галогена,(ii) (C1-С 6)алкила,(iii) (C1-С 6)алкокси,(iv) галоген-(C1-С 6)алкила,(v) галоген-(C1-С 6)алкокси,(vi) фенила,(vii) тиофенила,(viii) фенила, замещенного галогеном, (C1 С 6)алкилом, (С 2-С 6)алкенилом, (C2-С 6)алкинилом, (C1-С 6)алкокси, или нитро,(ix) карбо-(C1-С 6)алкокси,(х) карбобензилокси,(xi) карбобензилокси, замещенного (C1 С 6)алкилом, (C1-С 6)алкокси, галогеном, или нитро,(xii) группы формулы -S(O)n'-R9, определенной выше,(xiii) группы формулы -С(О)N(R10)2, определенной выше, и (xiv) тиенила; с) группы формулы где А 1 представляет -ОС(A2)2-C(А 2)2-O, -OС(А 2)2-O-, -С(А 2)2-O, или С(А 2)2-С(A2)2-C(A2)2C(А 2)2-, и каждый заместитель А 2 независимо выбирают из водорода, (C1-С 6)алкила, (C1 С 6)алкокси, и (C4-С 10)циклоалкила;d) группы формулы где р равно от 1 до 5; и R11 независимо выбирают из группы, состоящей из"р" должен быть больше или равен 2, либо, еслиR12 независимо выбирают из группы, состоящей из(ii) двухвалентного (C1-С 6)алкила, незамещенного или замещенного гидрокси, (C1 С 6)алкилом, или (C1-С 6)алкокси;R14 независимо выбирают из водорода, (C1 С 6)алкила, или (C4-С 10)циклоалкила; и R15 выбирают из -О-, -S-, -SO-, -SO2-, -SO2-O-, -С(O)-, -OC(O)-,-С(O)O-, -NH, -N(C1-С 6)алкила)-, и -C(O)NH-,NHC(O)-, N=N;R13 независимо выбирают из группы, состоящей из(i) (C4-С 10)гетероциклила,(ii)гетероарила,(iii) (C4-С 10)циклоалкила, незамещенного или замещенного (C1-С 6)алкилом, или(iv) фенила, незамещенного или замещенного 1-5 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси, нитро, (C1-С 10)алкила,(C1-С 10)алкокси, галоген-(C1-С 3)алкокси, галоген-(C1-С 3)алкила, (C1-С 3)алкоксифенила, фенила, фенил-(C1-С 3)алкила, (C1-С 6)алкоксифенила,фенил-(C2-С 3)алкинила, и (C1-С 6)алкилфенила;f) (C4-С 10)циклоалкила, незамещенного или замещенного одним или более заместителями,независимо выбранными из группы, состоящей изg) группы формулы где А 3 и А 4 каждый независимо выбирают из(iv) -С(R17)2-, где каждый заместитель R17 независимо выбирают из водорода, (C1 С 6)алкила, гидрокси, (C1-С 6)алкила,(C1 С 6)алкокси, либо оба заместителя R17, взятые вместе, представляют О,(v) -N(R18)2-, где каждый заместитель R18 независимо выбирают из водорода; (C1 С 6)алкила; (C2-С 6)алкенила; (С 2-С 6)алкинила;(С 4-С 10)циклоалкила; фенила; фенила, замещенного нитро, галогеном, (C1-С 6)алканоилокси; либо оба заместителя R18, взятые вместе, представляют (С 4-С 10)циклоалкил;u равно 0-4. В этой работе предпочтительными гликопептидными антибиотиками являются А 82846 А,А 82846 В, А 82846 С, и ориентицин А; предпочтительными алкилами являются алкилы, где R7 представляет CH2-R8; и предпочтительными группами R8 являются группы, определенные как группы "(d)" и "(е)". Настоящее изобретение может быть использовано для получения алкилированных гликопептидов, описанных в этих работах. Предпочтительные алкилированные гликопептиды, которые могут быть получены способом настоящего изобретения, включают следующие соединения:N4-(4-(2-(4-метоксифенил)этинил)бензил)А 82846 В. В вышеуказанных работах описано восстановительное алкилирование, включающее первую стадию, на которой гликопептид взаимодействует с соответствующим альдегидом или кетоном с образованием основания Шиффа,которое на второй стадии восстанавливают до требуемого алкилированного продукта. В одном варианте этого способа, в ЕРО 667353 А 1 описан способ, в котором восстановитель добавляют одновременно с гликопептидом и альдегидом или кетоном. В этих работах указано, что может быть использован любой химический восстановитель, и в этих работах также предполагается, что предпочтительным является цианоборогидрид натрия. По существу, все гликопептиды содержат множество реакционноспособных участков. Управление этим множеством участков не всегда является предпочтительным. Иногда, для региоселективной реакции гликопептида желательно, чтобы реакция проходила только в одном из множественных участков. Это справедливо и в случае восстановительного алкилирования гликопептидов. В качестве примера может служить А 82846 В. Хотя производные, алкилированные на лейциновом амине (N1) и/или моносахариде (N6), являются активными в качестве антибактериальных агентов, видимо, является алкилирование амина N4 (дисахарида) предпочтительным. Фармацевтическая практика требует использования относительно чистой формы, и следовательно, для получения в высокой степени чистого N4-алкилированного продукта желательной является предпочтительная реакция на участке N4. Настоящее изобретение относится к способу осуществления реакции предпочтительно,на амине на сахариде в положении N4 в гликопептидном антибиотике. В случае ванкомицина,А 82846 А, А 82846 В, А 82846 С и ориентицина А,способ настоящего изобретения позволяет снизить реакционную способность на участках N1 иN6, и тем самым, повысить реакционную селективность на участке N4 (дисахарида). В соответствии с настоящим изобретением, требуется первоначальное получение растворимого медного комплекса гликопептида, который затем 9 подвергают восстановительному алкилированию. Растворимый медный комплекс получают путем взаимодействия гликопептидного антибиотика с медью, обычно путем добавления источника растворимой меди к реакционной смеси, содержащей гликопептидный антибиотик. Выбор источника меди не является критическим, при условии, что он является, по крайней мере, частично растворимым и не оказывает неблагоприятного влияния на рН. Такая соль меди может быть использована в безводной или гидратированной форме. Предпочтительным источником меди является ацетат меди (II), наиболее часто используемый в виде гидрата. Введение меди в реакционную смесь приводит к первоначальному получению медного комплекса с исходным материалом гликопептидного антибиотика, обычно в отношении 1:1. Этот медный комплекс исходного материала гликопептидного антибиотика является одним из характерных признаков настоящего изобретения. Восстановителем, используемым в настоящем изобретении, является цианоборогидрид натрия или пиридин-борановый комплекс. Выбор растворителя имеет важное значение. Неразбавленный метанол дает высокие выходы, и предполагается, что метанол, разбавленный до некоторой степени ДМФ или ДМСО,будет давать приемлемые выходы. Другие растворители не дают удовлетворительных результатов. Поэтому реакционным растворителем является, по крайней мере, предпочтительно метанол. Реакция должна быть проведена при рН 68, и предпочтительно, при рН 6,3-7,0. Количества используемых реактивов и реагентов не имеют существенного значения; количества, используемые для максимизации выхода продукта, будут, до некоторой степени,изменяться в зависимости от конкретных реагентов. В реакции гликопептидный антибиотик и альдегид или кетон расходуются в эквимолярных количествах. Предпочтительным является небольшой избыток альдегида или кетона, например от 1,3 до 1,7:1. Количество используемого гликопептидного антибиотика должно быть скорректировано на его чистоту. В этой реакции расходуется эквимолярное количество восстановителя. По крайней мере, такое количество должно быть использовано, и предпочтительным является небольшой избыток. Количество растворимой меди не имеет существенного значения, когда в качестве восстановителя используется цианоборогидрид натрия. При использовании пиридин-борана в качестве восстановителя, количество используемой растворимой меди является более важным, поскольку избыток меди будет реагировать с пиридинбораном. Независимо от выбора восстановителя, в способе настоящего изобретения сначала образуется комплекс (1:1) с гликопептидным 10 антибиотиком; следовательно, предпочтительно, медь и гликопептидный антибиотик присутствуют приблизительно в эквимолярном количестве. Количества, превышающие один молярный эквивалент (в случае пиридин-борана) или два молярных эквивалента (в случае цианоборогидрида натрия), являются нежелательными. Суммируя вышесказанное, идеальными количествами, которые могут быть использованы, являются отношения гликопептид:альдегид или кетон:восстановитель:соль меди = 1:1,3 1,5:1,3:1; за исключением того, что если в качестве восстановителя используется пиридинборановый комплекс, то предпочтительным является отношение 1:1,3 - 1,7:1,5:0,9 - 1,0. Концентрация реагентов в растворителе имеет некоторое значение для данного способа. Объем метанола по отношению к массе гликопептидного антибиотика может изменяться от 50:1 до 500:1; и видимо, может быть использовано разбавление 100:1, практическое отношение, хотя более высокие разбавления могут давать немного более высокие выходы. Температура, при которой осуществляют способ, не играет решающей роли. Кипение реакционных смесей в метаноле происходит при температуре примерно 67 С, таким образом,если в качестве растворителя используется неразбавленный метанол, то устанавливают максимальную температуру. Разумеется, когда используются смеси метанола, или когда реакция протекает под давлением, возможны и более высокие температуры. Более низкие температуры могут допускаться, но предпочтительно не ниже, чем примерно 45 С. Идеальным условием для применения цианоборогидрида натрия в качестве восстановителя является использование неразбавленного метанола и проведение реакции при нагревании с обратным холодильником; идеальным условием для применения пиридин-борана в качестве восстановителя также является использование неразбавленного метанола, но при температуре примерно 5863 С. Определенный продукт получается даже за короткое время реакции. Предпочтительным является более продолжительное время реакции,такое как от 6 до 48 ч. Однако, очевидно, что идеальное время реакции составляет приблизительно 20-25 ч. Более продолжительное время реакции может приводить к увеличению выхода продуктов, алкилированных в нежелательных участках гликопептидного антибиотика. При осуществлении настоящего изобретения гликопептидный антибиотик и медь предпочтительно смешивают в растворителе с образованием растворимого медного комплекса гликопептидного антибиотика, и затем добавляют альдегид и восстановители. Однако, точный порядок добавления не играет решающей роли. Добавление восстановителя порциями является предпочтительным и дает хорошие результаты, 11 когда в качестве восстановителя используют пиридин-борановый комплекс. Реакцию продолжают в течение периода времени, после которого получают продукт, и этот продукт может быть выделен из реакционной смеси. По истечении реакционного периода реакционную смесь предпочтительно гасят путем добавления борогидрида натрия. Этот реагент расходует остаточный альдегид или кетон, и таким образом, предупреждает возникновение нежелательных побочных реакций. Продукт выделяют из реакционной смеси в виде медного комплекса алкилированного гликопептида. Выделение достигается путем концентрирования реакционной смеси и осаждения комплекса путем добавления антирастворителя,такого как этилацетат, ацетон, 1-пропанол, изопропилый спирт, или, предпочтительно, ацетонитрил. Этот комплекс может быть разрушен путем водной обработки при рН 24, что приводит к выделению простого алкилированного гликопептидного продукта, который может быть, при необходимости, очищен стандартным способом. Нижеследующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, что позволит специалисту в данной области, применить его на практике. Сравнительный пример А (без меди). А 82846 В [6,0 г; эффективность 76,5%, 4,59 г.д.н. (вес действующего начала); 2,88 ммоль],4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (0,86 г, 3,97 ммоль), и цианоборогидрид натрия (84 мг, 1,34 ммоль) добавляют к 600 мл метанола и раствор нагревают при температуре образования флегмы в течение 3 ч. Затем добавляют дополнительную порцию цианоборогидрида натрия (84 мг, 1,34 ммоль) и смесь нагревают еще 3 ч при температуре образования флегмы. Добавляют последнюю порцию цианоборогидрида натрия(84 мг, 1,34 ммоль) и нагревание при температуре образования флегмы продолжают еще 17 ч. Прозрачный бесцветный раствор охлаждают до температуры окружающей среды и концентрируют до 130 мл на роторном испарителе. Продукт осаждают путем добавления 200 мл изопропилового спирта в течение 2 ч. После охлаждения до 0 С, перемешивания в течение 1 ч, и фильтрации получают N4-(4-(4-хлорфенил)бензил)-А 82846 В в виде белого твердого вещества(5,61 г; эффективность 49,3%, 2,77bg; 53,7%). Пример 1. А 82846 В (0,50 г; эффективность 76,3%,0,38 г.д.н.; 0,24 ммоль), 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (70 мг, 0,32 ммоль), и моногидрат ацетата меди (2) (51 мг, 0,26 ммоль) перемешивают в 50 мл метанола. Затем добавляют цианоборогидрид натрия (20 мг, 0,32 ммоль) и раствор нагревают при температуре образования флегмы в течение 23 ч. Прозрачный пурпурный раствор охлаждают до температуры окружающей среды и добавляют 12% борогид 002925(0,03 мл, 0,14 ммоль). рН раствора доводят до 7,3 путем добавления одной капли уксусной кислоты. После этого добавляют еще одну порцию 12% борогидрида натрия в водном 14 М гидроксиде натрия (0,23 мл, 0,10 ммоль), а затем одну каплю уксусной кислоты для поддержания рН раствора при 7,3. Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч и концентрируют до 12 мл на роторном испарителе. Продукт осаждают путем добавления 25 мл ацетонитрила в течение 20 мин. После перемешивания в течение 20 мин при температуре окружающей среды, и после фильтрации получают медный комплекс N4-(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В в виде твердого вещества пурпурного цвета (0,58 г; эффективность 59,5% 0,35 г.д.н., 80,3%). Пример 2. А 82846 В (6,0 г; эффективность: 78,4%, 4,7 г.д.н., 2,95 ммоль) перемешивают в 600 мл метанола и добавляют ацетат меди (г) (0,66 г, 3,6 ммоль). После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 15 мин добавляют 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (0,95 г, 4,4 ммоль) и цианоборогидрид натрия (0,27 г, 4,3 ммоль), и смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 24 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды,ВЭЖХ-анализ аликвоты реакции дал выход 4,52 г (85,4%) N4-(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В. Пример 3. А 82846 В (2,5 г; эффективность 78,5%, 1,96 г.д.н., 1,23 ммоль) перемешивают в 250 мл метанола, и добавляют моногидрат ацетата меди(г) (0,26 г, 1,32 ммоль). После 10-минутного перемешивания при температуре окружающей среды добавляют 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (0,35 г, 1,6 ммоль) и цианоборогидрид натрия (34 мг, 0,54 ммоль), и смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 3 ч. Затем добавляют дополнительную порцию цианоборогидрида натрия (34 мг, 0,54 ммоль), и смесь нагревают при температуре образования флегмы 3 ч. Затем добавляют последнюю порцию цианоборогидрида натрия (34 мг,0,54 ммоль), и смесь нагревают при температуре образования флегмы 17 ч. Смесь охлаждают до температуры окружающей среды и добавляют 12% борогидрид натрия в 14 М водном гидроксиде натрия (0,14 мл, 0,63 ммоль). рН раствора доводят до 7,3 путем добавления нескольких капель уксусной кислоты. Добавляют вторую порцию 12% борогидрида натрия в водном 14 М гидроксиде натрия (0,13 мл, 0,6 ммоль), и затем несколько капель уксусной кислоты для доведения рН раствора до 8,1. После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 2 ч, реакционную смесь концентрируют до 60 мл на роторном испарителе. По каплям добавляют изопропиловый спирт (175 мл) в течение 1 ч для осаждения медного комплексаN4-(4-(4 13 хлорфенил)бензил)-А 82846 В. После фильтрации получают комплекс в виде твердого вещества пурпурного цвета (6,50 г; эффективность 26,9% в виде влажного осадка, 1,75 г.д.н.,79,1%). Пример 4. А 82846 В (2,5 г; эффективность: 78,5%,1,96 г.д.н., 1,23 ммоль) перемешивают в 250 мл метанола и добавляют моногидрат ацетата меди(г) (0,26 г, 1,32 ммоль). После 10-минутного перемешивания при температуре окружающей среды добавляют 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (0,35 г, 1,6 ммоль) и цианоборогидрид натрия (34 мг, 0,54 ммоль), и смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 3 ч. Добавляют дополнительную порцию цианоборогидрида натрия (34 мг, 0,54 ммоль) и смесь нагревают при температуре образования флегмы 3 ч. Затем добавляют последнюю порцию цианоборогидрида натрия (34 мг,0,54 ммоль) и смесь нагревают при температуре образования флегмы еще 17 ч. Смесь охлаждают до температуры окружающей среды и добавляют 12% борогидрид натрия в 14 М водном гидроксиде натрия (0,14 мл, 0,63 ммоль). рН раствора доводят до 7,3 путем добавления нескольких капель уксусной кислоты. После этого добавляют вторую порцию 12% борогидрида натрия в водном 14 М гидроксиде натрия (0,13 мл, 0,6 ммоль), а затем несколько капель уксусной кислоты для доведения рН раствора до 8,2. После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 1,5 ч реакционную смесь концентрируют до 60 мл на роторном испарителе. Затем по каплям добавляют изопропиловый спирт (175 мл) в течение 1 ч для осаждения продукта. После фильтрации и сушки в вакууме получали медный комплекс N4-(4-(4 хлорфенил)бензил)-А 82846 В в виде твердого вещества пурпурного цвета (2,56 г; эффективность 62,9%, 1,61 г.д.н., 72,9%). Пример 5. А 82846 В (6,0 г; эффективность 76,1%, 4,56 г.д.н., 2,9 ммоль) перемешивают в 600 мл метанола и добавляют моногидрат ацетата меди (г)(0,63 г, 3,15 ммоль). После 15-минутного перемешивания при температуре окружающей среды добавляют 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (0,85 г, 3,9 ммоль) и цианоборогидрид натрия (84 мг, 1,3 ммоль) и смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 3 ч. Затем добавляют дополнительную порцию цианоборогидрида натрия (84 мг, 1,3 ммоль) и смесь нагревают при температуре образования флегмы 3 ч. Добавляют последнюю порцию цианоборогидрида натрия (84 мг, 1,3 ммоль) и смесь нагревают при температуре образования флегмы еще 16 ч. Смесь охлаждают до температуры окружающей среды и добавляют 50% водный раствор гидроксида натрия для доведения рН реакционной смеси до 7,6. Добавляют борогидрид натрия (0,11 г, 2,9 ммоль) и раствор пе 002925 14 ремешивают в течение 3,5 ч при температуре окружающей среды. Реакционную смесь концентрируют до 110 мл на роторном испарителе,и по каплям в течение 4 ч добавляют изопропиловый спирт (250 мл) для осаждения продукта. После охлаждения пурпурной суспензии в течение 1 ч до 0 С и после фильтрации получают комплекс N4-(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В пурпурного цвета (11,03 г; эффективность: 36,2% в виде влажного осадка, 3,99 г.д.н.,77,6%). Сравнительный пример В (без меди). А 82846 В (0,50 г; эффективность: 84,3%,0,42 г.д.н., 0,26 ммоль) перемешивают в 50 мл метанола и добавляют 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид (72 мг, 0,33 ммоль) и комплекс пиридин-борана (0,033 мл, 0,33 ммоль). Смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 6 ч, а затем охлаждают до температуры окружающей среды. ВЭЖХ-анализ аликвоты реакционной смеси дал выход 0,25 г (53,2%) N4(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В. Пример 6. А 82846 В (0,50 г; эффективность 84,3%,0,42 г.д.н., 0,26 ммоль) перемешивают в 50 мл метанола и добавляют ацетат меди (г) (45 мг,0,25 ммоль). После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 10 мин добавляют 4'-хлор-4-бифенилкарбоксальдегид(0,039 мл, 0,39 ммоль). Смесь нагревают при 57 С в течение 24 ч, а затем охлаждают до температуры окружающей среды. ВЭЖХ-анализ аликвоты реакционной смеси дал выход 0,34 г(72,3%) N4-(4-(4-xлopфeнил)бeнзил)-A82846B. Пример 7. А 82846 В (0,50 г; эффективность 76,3%,0,38 г.д.н., 0,24 ммоль) и моногидрат ацетата меди (2) (43 мг, 0,216 ммоль) перемешивают в 50 мл метанола и добавляют 4'-хлор-4 бифенилкарбоксальдегид (84,5 мг, 0,39 ммоль) и комплекс пиридин-борана (0,011 мл, 0,11 ммоль). Смесь нагревают в течение 2 ч при 63 С и добавляют дополнительную порцию пиридинборана (0,01 мл, 0,1 ммоль). После нагревания при 63 С еще в течение 2 ч добавляют третью порцию пиридин-борана (0,005 мл, 0,05 ммоль). Через 2 ч добавляют четвертую порцию пиридин-борана (0,005 мл, 0,05 ммоль), и еще через 5 ч при 63 С добавляют пятую порцию пиридинборана (0,005 мл, 0,05 ммоль). Смесь нагревают при 63 С еще 11 ч, а затем охлаждают до температуры окружающей среды. ВЭЖХ-анализ аликвоты реакционной смеси дал выход 0,34 г(79,2%) N4-(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В. Реакции, описанные в cравнительных примерах А и В и в примерах 1-7, также оценивались: (1) на количество остаточного исходного гликопептида, (2) на количество продуктов, алкилированных на участках, отличных от N4 положения, и (3) на количество многократно алкилированных продуктов. Результаты пред 15 ставлены в нижеследующей таблице, и выражены как процент относительно целевого продукта, моноалкилированного на N4-амине; выходы Прим.Ср. А 1 2 3 4 5 Ср. В 6 7 16 целевого продукта представляют как фактические выходы, указанные в вышеприведенных примерах. или соль одновалентного металла (MX, 1,25 эквивалента), затем добавляют 4'-хлор-4 бифенилкарбоксальдегид (1,25 эквивалентов) и цианоборогидрид натрия (1,25 эквивалентов). Смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 24 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды аликвоту удаляют для проведения ВЭЖХ-анализа. Для мониторинга реакции in situ и вычисления выхода используют следующую ВЭЖХсистему: система ВЭЖХ Waters 600E с интегратором НР 3395 и детектором Applied Biosystems 757, установленном при 230 нм, чувствительность - 0,1 единиц абсорбции, время увеличения фильтрования - 1 с. Колонка: DuPont Zorbax SBPhenyl, 4,6 мм х 25 см. Элюент А: 10% ацетонитрил, 90% буфер (0,2% триэтиламин, 0,25% Н 3 РО 4). Элюент В: 60% ацетонитрил, 40% н буфер (0,2% триэтиламин, 0,25% Н 3 РО 4). Профиль градиента при 1 мл/мин: начало - 100% А, градиент до 80% А, 20% В - 5 мин, удерживание 5 мин, градиент до 100% В - 20 мин, градиент до 100% А - 5 мин, удерживание - 20 мин. Получение образца: 0,5 - 1,0 г реакционной смеси, разбавленной до 25 мл в ацетонитриле - буфере. Удерживание при температуре окружающей среды примерно 30 мин до тех пор, пока не исчезает пурпурная окраска медного комплекса. Продукт алкилирования нужного гликопептида элюируется 16-18 мин, ядро исходного гликопептида - 3-4 мин, продукт алкилирования на участке N6 (моносахар) - 18-19 мин, продукт алкилирования на участке N1 (метиллейцин) 19-21 мин, диалкилированные примеси - 24-26 мин, и альдегид - 35-36 мин. Выход in situ определяют по корреляции со стандартами, полученными для известного контрольного образца продукта. Результаты представлены в нижеследующей таблице. Результаты для алкилированных побочных продуктов выражают как процент от требуемого продукта алкилирования в N4. Эти данные показывают, что настоящее изобретение имеет несколько преимуществ. Вопервых, выход продукта, алкилированного наN4, возрастает. Во-вторых, выходы продуктов,алкилированных на N1 и/или N6, снижаются. Следовательно, настоящее изобретение обеспечивает значительное улучшение в реакционной региоселективности. Пример 8. Медный комплексN4-(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В. А 82846 В (0,50 г, эффективность 75,678,8%, 0,24-0,25 ммоль) перемешивают в 50 мл метанола и добавляют ацетат меди (г) (53-56 мг,0,29-0,31 ммоль), и затем добавляют 4'-хлор-4 бифенилкарбоксальдегид (70-73 мг, 0,32-0,34 ммоль) и цианоборогидрид натрия (20-22 мг,0,32-0,35 ммоль). Реакционную смесь нагревают при температуре образования флегмы в течение 24 ч и охлаждают до температуры окружающей среды. рН доводят до 9,0-9,3 путем добавления 1 М раствора NaOH. Реакционную смесь концентрируют до 10-20 мл на роторном испарителе и по каплям добавляют изопропиловый спирт(13-20 мл) для осаждения пурпурного комплекса гликопептида-меди, который выделяют путем вакуумной фильтрации. После сушки в вакууме при 60 С получают комплекс гликопептидамеди в виде пурпурного порошка. Процедуру повторяют четыре раза, после чего объединенный гликопептидный комплекс анализировали на содержание меди, в результате чего обнаружено, что он содержит 3,0% меди, что подтверждает получение комплекса (1:1) меди и N4-(4(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В. Сравнительный пример С и примеры 9-19. Различные соли меди оценивают с помощью стандартизированной методики. А 82846 В (1 эквивалент соответствует эффективности свободного основания) перемешивают в 50 мл метанола и добавляют соль двухвалентного металла (МХ 2, 0,63 эквивалента) Прим.%по отношению к моно на N4 Ядро Моно на N6 Моно на N1 25,6 7,8 1,8 33,3 6,2 6,1 21,3 4,1 1,6 16,9 3,6 1,8 Те же самые соли меди дополнительно,оценивают на их растворимость в метаноле и на растворимость исходного гликопептидного антибиотика в их присутствии. Для этого осуществляют следующую процедуру: соль меди(0,165 ммоль) добавляют в 50 мл метанола и перемешивают при температуре окружающей Соль Растворимость соли в МеОН Плохо растворимая, мутный белый раствор Плохо растворимая, мутный светло-голубой раствор Растворимая, прозрачный, синезеленый Растворимая, прозрачный, светлоголубой Незначительное помутнение, светлый, сине-зеленый Растворимая, прозрачный, синезеленый Растворимая, прозрачный, бесцветный Растворимая, прозрачный, желтый Растворимая, прозрачный, бесцветный Нижеследующие примеры иллюстрируют несколько аспектов настоящего изобретения. Во-первых, медь должна быть добавлена в реакционную смесь в форме, которая является, по крайней мере, частично растворимой. Соли меди, такие как, CuF2 и Сu(ОН)2, которые являются почти не растворимыми в метаноле, не эффективны. Кроме того, соль меди предпочтительно должна давать полную растворимость исходного гликопептидного антибиотика, и идеально при предпочтительном рН. Наилучшие соли Сu(ОАс)2, Сu(циклогексанбутират)2 и Сu(2-этилгексаноат)2) дают полное растворение ядра и дают растворы ядер при примерно рН 6,7. Соли, которые дают улучшенные результаты по сравнению с результатами, полученными в отсутствие соли, но которые не являются оптимальными (Сu(О 2 ССF3)2, CuCl2, CuBr2), либо дают растворимость ядер, но при менее чем оптимальном рН (СuВr2 и Сu(O2 ССF3)2), либо не дают полной растворимости ядра (CuCl2) при оптимальном рН. Реакция Ср. пр. D Пример 20 среды в течение 15 мин. При этом регистрируют данные растворимости, а также рН. Затем добавляют гликопептидное ядро (0,55 г; эффективность 74,7%, 0,41 г.д.н., 0,26 ммоль), и продолжают перемешивать в течение 15 мин. Растворимость и данные рН регистрируют. РН 5,9 Растворимость ядра в присутствии соли Слегка растворимый, мутный, розовый Таким образом, медь должна быть в форме, которая является, по крайней мере, частично растворимой, и должна обеспечивать или поддерживать полную растворимость исходного гликопептидного антибиотика при приемлемом рН, обычно 6,3-7. Кроме того, эти эксперименты проводились с использованием субоптимальных количеств меди; при этом, дополнительные преимущества настоящего изобретения получают с использованием более высокой концентрации меди. Сравнительный пример D (в отсутствии меди) и пример 20. Осуществляют две реакции с использованием гликопептидного антибиотика А 82846 А,одна без меди (сравнительный пример D) и одна с использованием моногидрата ацетата меди (г). В качестве альдегида используют 4'-хлор-4 бифенилкарбоксальдегид. Эти реакции проводят по существу тем же самым способом, который описан в предыдущих примерах. Результаты представлены в нижеследующей таблице. А 82846 В (3,0 г; эффективность: 78,7%, 2,4 г.д.н., 1,5 ммоль) перемешивают в 300 мл метанола при температуре окружающей среды и до 19 бавляют моногидрат ацетата меди (г) (0,31 г, 1,6 ммоль). После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 20 мин пурпурную смесь нагревают до 35-40 С, и перемешивают дополнительные 30 мин. Раствор концентрируют до 45 мл на роторном испарителе и в течение 2 ч по каплям добавляют 100 мл изопропилового спирта. Суспензию охлаждают до 0 С и фильтруют. После сушки в вакууме при 35 С получают 2,6 г комплекса А 82846 В меди в виде твердого вещества пурпурного цвета. Масс-спектроскопический анализ показывает ожидаемые ионы для комплекса, включая серии пиков вблизи 1653, которые не наблюдались при анализе сравнительного образца А 82846 В,указывая на присутствие комплекса А 82846 Вмеди. Аналогичным образом получают другой образец комплекса А 82846 В-меди, и анализируют с помощью спектроскопии в видимом УФдиапазоне, которая указывает на максимум поглощения при примерно 540 нм, что не наблюдается в спектрах сравниваемого стандарта А 82846 В или ацетата меди, и указывает на присутствие комплекса А 82846 В-меди. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения медного комплекса алкилированного гликопептида, отличающийся тем, что гликопептид алкилируют на аминсодержащем сахариде в положении N4 и который содержит, по крайней мере, один другой амин,включающий следующие стадии: а) обеспечение растворимого медного комплекса неалкилированного гликопептида из растворимой формы меди и неалкилированного гликопептида,б) взаимодействие неалкилированного медного комплекса с кетоном или альдегидом в присутствии восстановителя с получением мед 20 ного комплекса алкилированного гликопептида,и с) выделение медного комплекса алкилированного гликопептида. 2. Способ по п.1, который осуществляют в метаноле. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что растворимый медный комплекс неалкилированного гликопептида получают in situ. 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что неалкилированный гликопептид представляет собой гликопептид типа ванкомицина. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что гликопептид типа ванкомицина представляет собой А 82846 В. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что альдегид представляет собой 4'-хлор-4 бифенилкарбоксальдегид. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что дополнительно включает выделение алкилированного гликопептида из медного комплекса алкилированного гликопептида. 8. Растворимый комплекс меди с А 82846 А или А 82846 В. 9. Комплекс по п.8, отличающийся тем,что представляет собой комплекс меди с А 82846 В (1:1). 10. Комплекс меди с алкилированным гликопептидом, полученный способом по любому из пп.1-6. 11. Комплекс по п.10, где алкилированный гликопептид представляет собой алкилированный А 82846 В. 12. Комплекс по п.11, где алкилированный А 82846 В представляет собойN4-(4-(4xлopфeнил)бeнзил) А 82846 В. 13. Способ получения алкилированного гликопептида из комплекса по пп.10-12, включающий обработку водного раствора медного комплекса алкилированного гликопептида при рН 4.