Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, растение и растительная клетка, обладающие такой устойчивостью

1 Область изобретения Данное изобретение относится к способу индуцирования у клетки и растения устойчивости к вирусам, особенно устойчивости клетки и растения сахарной свеклы к вирусу BNYVV. Предпосылки изобретения и уровень техники Широко распространенное вирусное заболевание сахарной свеклы (Beta vulgaris), называемое ризомания, вызывается бенивирусом вирусом некротического пожелтения жилок свеклы (BNYVV) (10, 11), который передается корнеплодам свеклы обитающими в почве грибами Polymyxa betae (12). В Европе, США и Японии заболевание в значительной степени поражает посевные площади, на которых выращивается сахарная свекла для промышленного использования, и до сих пор распространено в отдельных районах Западной Европы (13, 14). Поскольку не существует практического способа для эффективного контроля за распространением вируса в больших масштабах с помощью химических или физических методов ни в растениях, ни в почве, основная цель заключалась в том, чтобы определить природный источник устойчивости, находящийся внутри зародышевой плазмы сахарной свеклы, и вывести путем селекции сорта сахарной свеклы, экспрессирующие гены устойчивости. Разновидности таких толерантных к вирусу генов установлены, и некоторые успешно используются для выведения сортов сахарной свеклы,имеющих промышленное значение (16, 17, 18). Только использование BNYVV-устойчивых либо толерантных сортов позволит фермерам выращивать сахарную свеклу на зараженных вирусом BNYVV территориях, где сахарная свекла является существенным компонентом севооборота и обеспечивает значительную часть дохода растениеводов. Подробные исследования показали, что различие в восприимчивости к BNYVV-инфекции среди генотипов или сортов сахарной свеклы, в основном, отражает различие в распространении или транслокации вируса в тканях корнеплодов (19). Однако все же существует несколько сообщений, которые ясно показывают, что толерантные гены именно из различающихся источников зародышевой плазмы сахарной свеклы или из зародышевой плазмы диких сортов (20) давали различные механизмы устойчивости. Такая ситуация могла бы быть более подходящей для создания долгосрочных стратегий по выработке у растений устойчивости к вирусу BNYVV. С 1986 г. в ряде сообщений и публикаций было описано использование изолированных вирусных генных последовательностей, экспрессирующихся в растениях, для обеспечения высокого уровня толерантности по отношению к данному вирусу или даже для обеспечения широкого спектра устойчивости к ряду родственных вирусов (21, 22, 23). Одна из наиболее 2 обоснованных стратегий создания устойчивости к вирусам во многих культивируемых видах,таких как картофель, тыква, огурец или томат,основанная на генетической инженерии, заключается в использовании вирусной генной последовательности, которая под контролем регуляторных элементов растения кодирует белок оболочки вируса-мишени (24). Однако, что касается устойчивости, опосредованной белком оболочки, экспрессия определенного уровня устойчивости в трансгенном растении могла бы быть приписана другим механизмам, таким как косуппрессия РНК, а не только лишь продукции белковой последовательности. В общих чертах, вирусная последовательность будет переноситься в подходящую культуру клеток или ткани видов растений с помощью системы трансформации, опосредованной агробактериями (Agrobacterium), или методом прямого переноса гена с учетом ограничений метода тканевой или клеточной культуры, который с успехом может применяться к данным видам. Будет регенерировано целое растение и охарактеризована экспрессия трансгена. Несмотря на то, что сахарная свекла известна как вид, не поддающийся воздействию на уровне клеточной культуры, что ограничивает степень практического применения методов генетической инженерии для этого вида, существует ряд отдельных сообщений об успешной трансформации и регенерации целых растений (25). Также опубликовано (26, WO 91/13159) несколько примеров создания толерантности к вирусу BNYVV путем трансформации и экспрессии белковой последовательности оболочки вируса BNYVV в геноме сахарной свеклы, хотя в них редко сообщаются данные о полностью функциональных трансгенных растениях сахарной свеклы (27). В частности, сообщения содержат ограниченные данные об уровне устойчивости, наблюдаемом в условиях инфицирования у трансгенных растений сахарной свеклы, трансформированных с помощью гена, кодирующего белковую последовательность оболочки вируса BNYVV (28, 29). Полная технологическая программа, включающая методтрансформации сахарной свеклы и использование экспрессии белковой последовательности оболочки вируса BNYVV в качестве источника устойчивости в трансгенном растении сахарной свеклы, полученном с помощью упомянутого метода трансформации, описана в патентной заявке WO91/13159. На основании опубликованной информации невозможно сделать вывод о том, что механизм устойчивости, опосредованный белками оболочки, обеспечивает какую-либо возможность для придания растению сахарной свеклы общего иммунитета к BNYVV-инфекции путем полного ингибирования механизмов размножения и распространения вируса. Идентификация механизма устойчивости, который в значительной степени блокирует распространение вируса 3 на ранней стадии процесса заражения, станет важным шагом к успешно развивающейся такой трансгенной устойчивости. Кроме того, такая устойчивость порождала бы многообразие механизмов уже имеющейся устойчивости. Поскольку, как показано, заболевание распространяется во многих странах или районах со скоростью, зависящей от сочетания многочисленных местных условий окружающей среды и сельскохозяйственных факторов, существует значительный интерес к варьированию механизмов генетической устойчивости, которые могут, по отдельности либо в сочетании, предоставлять постоянную и долгосрочную стратегию устойчивости для ныне существующих и будущих сортов сахарной свеклы, которые выращиваются для промышленных нужд. Геном бенивируса (BNYVV) некротического пожелтения жилок свеклы состоит из пяти(+)-цепей РНК, две из которых (РНК 1 и 2) кодируют функции, необходимые для заражения всех растений, тогда как остальные три (РНК 3,4 и 5) принимают участие в вектор-опосредованном заражении корнеплодов растений-хозяев(Beta macrocarpa, Beta vulgaris, Spinacear oleracea,Chenopodium quinoa и др.) (1). Перемещение вируса BNYVV из клетки в клетку управляется набором трех последовательных, слегка перекрывающихся вирусных генов на РНК 2, известных как тройной блок генов (TGB) (2), который кодирует вирусные белки Р 42, Р 13 и Р 15(генные продукты обозначены по их вычисленной молекулярной массе Mr в килодальтонах (3. В последующем описании гены TGB и соответствующие белки будут определяться с помощью следующих терминов: TGB1, TGB2,TGB3 или с помощью кодируемых ими вирусных белков Р 42, Р 13 и Р 15. Аналоги TGB присутствуют в других вирусах растений, и характеристики их TGB позволили классифицировать указанные вирусы по двум группам: вирусы I группы, которая включает гордеивирусы, бенивирусы, пеклавирусы и помовирусы; и вирусы II группы, представленной потексвирусами и карлавирусами (4, 5, 6, 31). Для вирусов II группы в перемещение вируса из клетки в клетку вовлекается также белок капсида. Выработка устойчивости к вирусным инфекциям у растения путем блокирования перемещения из клетки в клетку описано для вируса Х картофеля (PVX) (32) и для вируса мозаики белого клевера (WC1MV) (33) в Nicotiana benthamiana. Оба этих вируса относятся к описанной выше II группе. В обоих случаях некоторые аминокислоты в гидрофильной части TGB последовательности, находящейся ниже N-концевого гидрофобного домена вышеупомянутой аминокислотной последовательности, были замещены аланином. Однако с помощью вышеуказанных мутантов невозможно было получить общую устойчивость, 005168 4 особенно в том случае, когда концентрация контрольного вируса в растении повышалась. Цели изобретения Настоящее изобретение ставит своей целью предоставить новый способ индуцирования в клетке и растении устойчивости к различным вирусам и получения устойчивых к вирусам клетки и растения. Основная цель изобретения заключается в предоставлении нового способа индуцирования в клетке и растении устойчивости к вирусуBNYVV клетки и растения, в частности клетки и растения сахарной свеклы (Beta vulgaris ssp.). Сущность изобретения Данное изобретение предусматривает использование альтернативной последовательности растительного вируса, особенно вируса BNYVV,для получения высокой степени толерантности к вирусной инфекции, в частности для обеспечения быстрого и полного блокирования механизмов размножения и распространения вируса в растении, особенно в растении сахарной свеклы(Beta vulgaris), включая кормовую свеклу, швейцарский мангольд и столовую свеклу, которые также могут подвергаться данной вирусной инфекции. Экспрессия устойчивости будет получена в трансгенной клетке и растении, особенно в клетках и растениях сахарной свеклы, полученных с помощью метода трансформации, представленного в патентной заявке WO95/10178,либо другими методами трансформации, основанными на Agrobacterium tumefaciens, или прямым переносом гена. Благодаря своей высокой эффективности метод трансформации, описанный в заявке WO95/10178, позволяет получить большое количество трансформированных растений, особенно растений сахарной свеклы, и будет предпочтительным для создания трансгенных растений, которые могут быть проанализированы и охарактеризованы по уровню их устойчивости к вирусам, особенно к вирусуBNYVV, включая их оценку в полевых условиях. В таблице представлены вирусы, имеющие 5 Авторы изобретения предлагают новый способ придания растениям устойчивости к растительным вирусам посредством блокирования механизмов размножения и распространения вируса в вышеупомянутом растении, особенно в его корнеплодной ткани. Для того, чтобы продемонстрировать вышеупомянутую устойчивость, авторы описывают влияние сверхэкспрессии TGB2 последовательности, одной или в сочетании, на механизм размножения и распространения вируса BNYVV в растениях С. quinoa,которые также являются хозяевами вирусаBNYVV и с которыми специалистам легче работать. Известно, что вирус BNYVV для создания локальных повреждений на листьях хозяев, таких как Chenopodium quinoa (7), не нуждается в синтезе вирусных белков оболочки, что свидетельствует о том, что для перемещения вируса из клетки в клетку образование вириона не требуется. Однако способ, с помощью которого компоненты TGB принимают участие в процессе движения, непонятен, хотя сравнения последовательностей с помощью компьютера показали характерные консервативные последовательности, которые могут дать ключ к пониманию их функций. Так, 5'-проксимальный белок TGB(TGB1) постоянно содержит ряд мотивов, характерных для АТФ/ГТФ-связывающей геликазы, а второй белок (TGB2) всегда имеет два потенциально мембраносвязывающих гидрофобных домена, разделенных гидрофильной последовательностью, которая содержит высококонсервативный пептидный мотив неизвестного назначения (6). До сих пор не сообщалось ни одного примера вируса I группы, в котором три члена TGB располагались бы иначе в той же РНК или распределялись между различными геномными РНК, что предполагает, что их объединение в определенном порядке может быть важным для регуляции их функции. Данное изобретение касается способа индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу, содержащему последовательность 2 из тройного блока генов(TGB2). Вышеупомянутые вирусы включают гордеивирусы, бенивирусы, пеклавирусы и помовирусы, предпочтительно вирусы, выбранные из группы, состоящей из вируса некротического пожелтения жилок свеклы, вируса штриховатой мозаики ячменя, вируса курчавости верхушки картофеля, вируса кустистости арахиса и вируса свеклы, передаваемого через почву; вышеупомянутый способ включает следующие этапы: получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность TGB2 указанного вируса, или соответствующую ей кДНК, или их варианты, основанные на вырожденности генетического кода, 005168 6 связанные с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении; трансформацию растительной клетки полученной конструкцией нуклеиновой кислоты и, при необходимости,регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки. Предпочтительно, чтобы указанная нуклеотидная последовательность, аналогичная, по крайней мере, на 70% TGB2 нуклеотидной последовательности дикого типа или соответствующей ей кДНК, включала в себя замену, по крайней мере, одной аминокислоты на другую,отличную аминокислоту в TGB2 последовательности дикого типа SEQ ID NO. 1 (фиг. 1). Предпочтительно, чтобы замена, по крайней мере, одной аминокислоты на другую, отличную аминокислоту, осуществлялась в участках,обогащенных гидрофильными аминокислотами,обычно присутствующими на поверхности соответствующего белка в его нативной конфигурации. Предпочтительно, чтобы модификация осуществлялась в гидрофильном участке последовательности дикого типа, находящемся нижеN-концевого гидрофобного домена и несколько выше консервативного центрального домена. В соответствии с предпочтительной реализацией данного изобретения каждая из упомянутых выше аминокислот замещается аланином. Предпочтительно, чтобы растение или растительная клетка являлись растением или растительной клеткой, которые могут быть инфицированы вышеописанным вирусом и предпочтительно выбирались из группы, состоящей из картофеля, ячменя, арахиса и сахарной свеклы. Данное изобретение касается также полученной растительной клетки и трансгенного(или трансформированного) растения (полученного из упомянутых выше растительных клеток), устойчивых к вышеупомянутым вирусам и содержащих вышеупомянутую нуклеотидную конструкцию. Авторы изобретения также неожиданно обнаружили, что можно индуцировать у растения устойчивость к вирусу BNYVV способом,включающим следующие этапы: получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, аналогичную, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90%, нуклеотидной последовательности дикого типа, заключенной между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной либо субгеномной РНК 2 дикого типа вируса BNYVV, или ее соответствующей кДНК, и связанной с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении; трансформацию растительной клетки с помощью вышеуказанной конструкции и, при необходимости, 7 регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки. Нуклеотидная последовательность, заключенная между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК 2, кодирующая белок Р 13, описана на фиг. 1 (SEQ ID NO. 1). Предпочтительная мутантная нуклеотидная последовательность и ее соответствующая мутантная аминокислотная последовательность описаны в следующем перечне как SEQ ID NO. 3 (фиг. 2). Другой аспект данного изобретения касается растительной клетки и трансгенного растения (полученного из вышеупомянутых растительных клеток), устойчивых к вирусу BNYVV и содержащих нуклеотидную конструкцию,имеющую нуклеотидную последовательность,аналогичную, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90%,нуклеотидной последовательности, заключенной между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК 2 дикого типа вируса BNYVV, или ее соответствующей кДНК,и связанной с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении. Предпочтительно, чтобы указанная выше растительная клетка или трансгенное растение(полученное из вышеупомянутых растительных клеток), устойчивые к вирусу BNYVV, были получены способом в соответствии с данным изобретением. Варианты нуклеотидной последовательности дикого типа (SEQ ID NO. 1) включают вставку, замену или делецию нуклеотидов, кодирующих ту же самую или другую аминокислоту(ы) (см. фиг. 2). Поэтому данное изобретение касается также вышеупомянутых вариантов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO. 1,например SEQ ID NO. 3, которая обнаруживает,по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90% сходство с упомянутой выше нуклеотидной последовательностью и которая предпочтительно способна гибридизоваться с указанной выше нуклеотидной последовательностью в жестких или нежестких условиях, как описано у Sambrook etManual, Cold Spring Harbor, Laboratory Press,Cold Spring Harbor, New York (1989). Нуклеотидная последовательность, аналогичная, по крайней мере, на 70%, предпочтительно, по крайней мере, на 80%, еще более предпочтительно, по крайней мере, на 90%,нуклеотидной последовательности, заключенной между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК 2 дикого типа вируса BNYVV, или ее соответствующей кДНК,предпочтительно является последовательностью, включающей в себя замену, по крайней мере, одной аминокислоты на другую, отличную аминокислоту в последовательности РНК 2 8 дикого типа вируса BNYVV или в ее соответствующей кДНК. Предпочтительно, чтобы вышеуказанная замена осуществлялась в участках, в которых гидрофильные аминокислоты обычно присутствуют на поверхности белка в его нативной конфигурации (34), как описано на фиг. 2(А=замена аланином). Предпочтительно, чтобы вышеуказанная замена одной или более аминокислот представляла собой мутацию, позволяющую замену одной или более аминокислот на одну или более аминокислоту аланин. В соответствии с предпочтительной реализацией данного изобретения вышеуказанной нуклеотидной последовательностью являетсяSEQ ID NO. 3. Предпочтительно, чтобы вышеупомянутые последовательности также были способны индуцировать у растения устойчивость к вирусуBNYVV. Термины "индуцировать у растения устойчивость к вирусу(ам)" означают индукцию возможного уменьшения или значительного замедления проявления симптомов заражения, размножения вируса или механизмов его распространения в растении, особенно в тканях корнеплодов. На фиг. 3 представлены результаты, показывающие способность растения, одновременно зараженного вирусом, содержащим репликонную конструкцию, и нуклеотидной последовательностью согласно данному изобретению, главным образом, последовательностью SEQ ID NO. 3,ингибировать перемещение вируса BNYVV в С. Quinoa. Инфекционный фактор вируса BNYVV проявляется появлением локальных повреждений на листьях вышеупомянутого растения после одновременного заражения (соинокуляции) вирусом S12 дикого типа. Фиг. 3 представляет количество локальных повреждений на листьях растения, вызванных изолятом вируса BNYVVS12 (содержащего РНК 1 и РНК 2) при соинокуляции с различными репликонами, включающими в себя либо мутантные последовательности, содержащие SEQ ID NO. 3, определенную на фиг. 2, либо нуклеотидную последовательность дикого типа (Т). Через 8 дней после вышеупомянутой инокуляции определяются локальные повреждения. Результаты трех экспериментов показывают,что уменьшение упомянутого выше воздействия большей частью наблюдается при соинокуляции мутантной последовательностью SEQ ID NO. 3(вплоть до 100% ингибирования). Этот результат не является следствием возможного блокирующего влияния на репликацию РНК 1 и РНК 2,но репликоны согласно данному изобретению позволяют блокировать биохимические механизмы, вовлеченные в процесс перемещения инфекционного вируса из клетки в клетку. Регуляторная последовательность (последовательности) нуклеотидной последовательности согласно данному изобретению представляет со 9 бой промоторную последовательность (последовательности) и терминторную последовательность (последовательности), активные в растении. Нуклеотидная конструкция может включать в себя также селектируемый маркерный ген, который мог бы использоваться для идентификации трансформированной клетки или растения и экспрессии нуклеотидной конструкции согласно данному изобретению. Предпочтительно, чтобы клетка являлась клеткой устьица листа, а растение - сахарной свеклой (Beta vulgaris ssp.), полученной из указанных клеток. Согласно изобретению промоторная последовательность представляет собой конститутивную или чужеродную промоторную последовательность. Примерами таких промоторов являются 35S промоторная последовательность вируса мозаики цветной капусты, полиубиквитиновый промотор Arabidopsis thaliana (30); промотор, который активен, главным образом, в тканях корнеплодов, как, например, par промотор гена гемоглобина из Perosponia andersonii(1988, или их смесь. Последний аспект настоящего изобретения касается ткани трансгенного растения, такой как плод, стебель, корнеплод, клубень, семя трансгенного растения, согласно данному изобретению или структуры, способной воспроизводиться (предпочтительно отобранной из группы,состоящей из каллусов, почек или зародышей),полученной из трансгенного растения или клетки согласно данному изобретению. Методики трансформации растения, тканевой культуры и регенерации, использованные в способе согласно данному изобретению, хорошо известны специалистам в данной области. Предпочтительными являются методики, описанные в международных патентных заявкахWО 95/10178 или WО 91/13159, соответствующих европейской патентной заявке ЕР-В 0517833, которые включены здесь в ссылки. Эти методики предпочтительно используются для получения трансгенной сахарной свеклы согласно данному изобретению. Список литературы 1. Richards K.E.Tamada Т., Аnnu. Rev. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ индуцирования у растительной клетки или растения устойчивости к вирусу,содержащему последовательность 2 из тройного блока генов (TGB2), включающий следующие этапы: получение конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность TGB2 указанного вируса или соответствующую ей кДНК или их варианты, основанные на вырожденности генетического кода, связанные с одной или более регуляторными последовательностями, активными в растении; трансформацию растительной клетки полученной конструкцией нуклеиновой кислоты и, при необходимости,регенерацию трансгенного растения из трансформированной растительной клетки. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что вирус выбирают из группы, состоящей из гордеивирусов, бенивирусов, пеклавирусов и помовирусов, предпочтительно вируса некротического пожелтения жилок свеклы, вируса штриховатой мозаики ячменя, вируса курчавости верхушки картофеля, вируса кустистости арахиса и передаваемого через почву вируса свеклы. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что последовательность конструкции нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность SEQ ID NO. 3 вируса BNYVV. 4. Способ по пп.1-3, отличающийся тем,что растительная клетка представляет собой клетку устьица листа. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что растение выбирают из группы,состоящей из сахарной свеклы, картофеля, ячменя или арахиса. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный вирус представляет собой вирус некротического пожелтения жилок свеклыNO. 1, которая заключена между нуклеотидами 3287 и 3643 5'-цепи геномной или субгеномной РНК 2 вируса BNYVV, а растение представляет собой свеклу, предпочтительно сахарную свеклу (Beta vulgaris). 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что регуляторная последовательность представляет собой промоторную последовательность или терминаторную последовательность, активную в растении. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что промоторная последовательность является конститутивной или чужеродной растительной промоторной последовательностью. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что промоторную последовательность выбирают из группы, состоящей из 35S промотора вируса мозаики цветной капусты и полиубиквитинового промотора Arabidopsis thaliana. 10. Способ по любому из пп.7-9, отличающийся тем, что промоторной последовательностью является промотор, который активен,главным образом, в тканях корнеплодов растений, например par промотор гена гемоглобина из Perosponia andersonii. 11. Трансгенное растение, устойчивое к вирусу, полученное способом, охарактеризованным в п.1. 12. Трансгенное растение по п.11, отличающееся тем, что оно получено с использованием конструкции нуклеиновой кислоты,имеющей последовательность SEQ ID NO. 3 вируса BNYVV. 13. Трансгенное растение по п.11 или 12,отличающееся тем, что вирус выбирают из группы, состоящей из гордеивирусов, бенивирусов, пеклавирусов и помовирусов, предпочтительно из вируса некротического пожелтения жилок свеклы, вируса штриховатой мозаики ячменя, вируса курчавости верхушки картофеля,вируса кустистости арахиса и передаваемого через почву вируса свеклы. 14. Трансгенное растение по пп.11-13, являющееся растением, выбранным из группы,состоящей из сахарной свеклы, картофеля, ячменя или арахиса. 15. Трансгенное растение по п.11, отличающееся тем, что оно является свеклой, предпочтительно сахарной свеклой (Beta vulgaris) вирус представляет собой вирус BNYVV с последовательностью TGB2 SEQ ID NO:1, которая заключена между нуклеотидами 3287 и 3643 5'цепи геномной или субгеномной РНК 2 вирусаBNYVV. 16. Трансгенное растение по любому из пп.11-15, отличающееся тем, что регуляторная последовательность представляет собой промоторную последовательность или терминаторную последовательность, активную в растении. 17. Трансгенное растение по любому из пп.11-16, отличающееся тем, что промоторная 14 последовательность является конститутивной или чужеродной растительной промоторной последовательностью. 18. Трансгенное растение по п.17, отличающееся тем, что промоторная последовательность выбрана из группы, состоящей из 35S промотора вируса мозаики цветной капусты и полиубиквитинового промотора Arabidopsisthaliana. 19. Трансгенное растение по п.17 или 18,отличающееся тем, что промоторной последовательностью является промотор, который активен, главным образом, в тканях корнеплодов,например par промотор гена гемоглобина изPerosponia andersonii. 20. Трансгенное растение по любому из пп.11-19, отличающееся тем, что оно дополнительно имеет природную толерантность к вирусам, указанным в п.2. 21. Трансгенное растение по любому из пп.11-20, отличающееся тем, что оно дополнительно обладает устойчивостью к пестицидам,гербицидам или фунгицидам, устойчивостью к нематодам, предпочтительно глифосатной устойчивостью, глюфосоматной устойчивостью и/или устойчивостью к ацетохлориду. 22. Трансформированная растительная клетка, полученная способом, охарактеризованным в п.1. 23. Трансформированная растительная клетка по п.22, из которой может быть регенерировано трансгенное растение, охарактеризованное в пп.11-21.