Средство для лечения гипергликемии и его применение

009677 Настоящее изобретение относится к лечению и профилактике гипергликемии, а также к стабилизации уровня сахара в крови. Значительное число соединений уже было предложено для профилактики гипергликемии, для лечения гипергликемии и/или для стабилизации уровня сахара в крови, в частности, при диабете. Так, предлагались продукты на основе дрожжей, такие как, в частности, сами дрожжи, экстракт дрожжей, фактор переносимости глюкозы на основе хрома (GTF), экстрагируемый из дрожжей, обогащенных хромом, а также клеточный препарат из пивоваренных дрожжей. Так, в JP-A-61-167622 предложено средство для борьбы с диабетом на основе клеточной фракции пивоваренных дрожжей, называемой в этом документе клеточными стенками и получаемой путем гидролиза пивоваренных дрожжей, обработанных для удаления горечи, в течение по меньшей мере 2 ч при температуре от 50 до 70 С и водной экстракции водорастворимых компонентов. Указанная клеточная фракция пивоваренных дрожжей имеет, в частности, содержание глюканов приблизительно 14,8%, содержание маннанов приблизительно 13,9%. Указанная клеточная фракция также имеет содержание гликогена приблизительно 24,9%. Гликоген, или печеночный крахмал (по-английски: liver starch; понемецки: Leberstrke), является резервным полисахаридом, также присутствующим в мышцах и особенно в печени. Этот гликоген также является резервным веществом для дрожжей, которые используют его в качестве источника энергии для выживания. Являясь одним из основных компонентов клеточной фракции, описанной в этой японской заявке, он не входит в состав клеточной стенки дрожжей. Согласно настоящему изобретению было установлено, что можно получить клеточные стенки дрожжей, которые эффективны в качестве средства для профилактики и лечения гипергликемии и имеют низкое содержание гликогена, причем указанные клеточные стенки дрожжей могут быть получены способом автолиза или простого ферментативного гидролиза. Термин клеточные стенки дрожжей относится к нерастворимой фракции клеток дрожжей, не обогащенных хромом, полученной после автолиза или ферментативного гидролиза, главным образом, с помощью протеаз, приводящего к солюбилизации по меньшей мере 50 вес.%, предпочтительно по меньшей мере 60 вес.% сухого вещества от общей массы клеток дрожжей и сохраняющего структурные полисахариды клеточной стенки, т.е. -глюканы и маннаны, причем эти маннаны находятся в форме маннопротеинов. Этот автолиз или ферментативный гидролиз проводят таким образом, чтобы солюбилизировать основную часть резервных сахаров клеток дрожжей, которыми являются гликоген и трегалоза. Клеточные стенки дрожжей получают разделением фракции, солюбилизированной путем автолиза или ферментативного гидролиза, имеющего продолжительность по меньшей мере 18 ч. Предпочтительные способы автолиза дрожжевого молока описаны на с. 370-377 в работе Yeast Technology, 2-е изд., 1991, G. Reedet T.W. Nogodawithana, опубликованной Van Nostrand Reinhold, New York, ISBN 0-442-31892-8. Полученные таким образом клеточные стенки дрожжей обычно высушивают традиционным способом сушки, таким как сушка распылением или сушка на нагреваемых валках. Клеточные стенки дрожжей по изобретению представляют собой клеточные стенки дрожжей родаSaccharomyces, относящихся предпочтительно к виду Saccharomyces cerevisiae. Указанные дрожжи предпочтительно представляют собой пекарные дрожжи. Пекарными дрожжами являются дрожжи, принадлежащие к виду Saccharomyces cerevisiae, получаемые при помощи в основном размножения или аэробного культивирования, как описано в вышеуказанной работе Yeast Technology, и которые до автолиза ферментативного гидролиза не подвергались какому-либо использованию в отличие, например, от пивоваренных дрожжей, которые представляют собой субпродукт производства пива и, следовательно, до их извлечения для автолиза или ферментативного гидролиза использовались для производства пива. Эти пивоваренные дрожжи размножали преимущественно в анаэробных условиях (поскольку пивоварение представляет собой анаэробный процесс). Клеточные стенки дрожжей по изобретению имеют общее содержание глюканов и маннанов клеточной стенки (систематически выражаемое в массовых эквивалентах, соответственно, глюкозы и маннозы - см. далее способы измерения) по меньшей мере 34 вес.% от массы сухого вещества, а также содержание гликогена (систематически выражаемое в массовых эквивалентах глюкозы - см. далее способы измерения) менее 10 вес.% от массы сухого вещества. Предпочтительно клеточные стенки дрожжей по изобретению имеют общее содержание глюканов и маннанов по меньшей мере 40 вес.% от массы сухого вещества, более предпочтительно по меньшей мере 45 вес.% от массы сухого вещества. Также предпочтительно клеточные стенки дрожжей по изобретению имеют содержание гликогена менее 8 вес.% от массы сухого вещества, более предпочтительно менее 5 вес.% от массы сухого вещества и еще более предпочтительно менее 3 вес.% от массы сухого вещества. Предпочтительно клеточные стенки дрожжей по изобретению имеют содержание белков N6,25 от 17 до 35 вес.% от массы сухого вещества, предпочтительно от 18 до 26 вес.% от массы сухого вещества.-1 009677 Предпочтительно клеточные стенки дрожжей по изобретению имеют содержание сухого вещества по меньшей мере 90 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 94 вес.% и еще более предпочтительно по меньшей мере 96 вес.%. В целом, общее содержание глюканов и маннанов в клеточных стенках по изобретению меньше или равно 70 вес.% от массы сухого вещества. В частности, оно может быть ниже или равно 65 вес.% от массы сухого вещества. Оно также может быть ниже или равно 55 вес.% от массы сухого вещества. Согласно одному из вариантов изобретения для полного или практически полного удаления гликогена из клеточных стенок дрожжей клеточные стенки дрожжей по изобретению, полученные, как описано выше, суспендируют в водной среде, нагревают в щелочной среде при температуре от 70 до 100 С в течение максимум 3 ч и удаляют фракцию, солюбилизированную в результате такой обработки, а оставшуюся несолюбилизированной фракцию собирают и высушивают обычным образом. Например, суспензию, содержащую примерно 12% сухого вещества клеточных стенок дрожжей в водной щелочной натриевой среде, можно нагревать при 85 С в течение 2 ч. Солюбилизированную фракцию, содержащую весь гликоген, а также значительную часть, возможно даже все количество, маннопротеинов, удаляют центрифугированием и промывкой. Такая обработка позволяет получить клеточные стенки дрожжей по изобретению, имеющие общее содержание глюканов и маннанов от 55 до 70 вес.% от массы сухого вещества, предпочтительно от 60 до 70 вес.% и еще более предпочтительно от 60 до 65 вес.% от массы сухого вещества. Такая обработка позволяет, в частности, получить клеточные стенки дрожжей, содержащие менее 1 вес.% гликогена от массы сухого вещества, предпочтительно менее 0,1 вес.% гликогена от массы сухого вещества. Эти клеточные стенки дрожжей могут не содержать маннанов. Эти клеточные стенки дрожжей с высоким общим содержанием глюканов и маннанов соответствуют форме получения средства для лечения или профилактики гипергликемии или для стабилизации уровня сахара в крови по изобретению. Они пригодны для получения препаратов по изобретению для лечения или профилактики гипергликемии или для стабилизации уровня сахара в крови. Они могут быть согласно изобретению использованы в получении терапевтической композиции для лечения или профилактики гипергликемии или для стабилизации уровня сахара в крови. Способ измерения содержания гликогена К образцу 20 мг сухих клеточных стенок дрожжей, т.е. содержащему по меньшей мере 90 вес.% сухого вещества, добавляют 0,5 мл Na2CO3 0,25 М и выдерживают эту смесь при 95 С в течение 4 ч. Затем рН смеси доводят до значения 5,2 путем добавления 0,3 мл 1 М уксусной кислоты и 1,2 мл 0,2 М ацетата натрия и перемешивания ингредиентов. Добавляют дистиллированную воду до общего объема 2 мл. 0,5 мл полученной таким образом суспензии инкубируют в течение 15 ч в присутствии избытка амилоглюкозидазы из Aspergillus niger, такой как поставляемая компанией ROCHE под номеромCat. No. 102 857, при 55 С. После центрифугирования замеряют количество высвобожденной глюкозы с помощью ферментативного дозирования. Ферментативное дозирование глюкозы описано, в частности, в учебнике Methods of BiochemicalD-Glucose/Fructose, Cat. No. 139 106 филиала компании ROCHE: BOEHRINGER MANNHEIM GmbH/RBIOPHARM GmbH, Дармштадт, Германия. Измеренное таким образом количество (в миллиграммах) глюкозы соответствует количеству гликогена, присутствующего в образце, выраженному в массовых эквивалентах глюкозы. Способ измерения общего содержания глюканов и маннанов Образец 20 мг сухих клеточных стенок дрожжей, т.е. содержащий по меньшей мере 90 вес.% сухого вещества, подвергают кислотному гидролизу, смешивая его с 20 мл 2 н. HCl, и выдерживают эту смесь в закрытой пробирке с завинчивающейся крышкой в течение 4 ч при 103 С в сушильном шкафу, встряхивая каждые 15 мин. Затем полученный таким образом кислый раствор нейтрализуют и проводят ферментативное дозирование количества глюкозы и, соответственно, маннозы в нейтрализованном растворе. Это ферментативное дозирование глюкозы и маннозы также описано на с. 50-55 приведенного выше учебника; его предпочтительно осуществляют, используя Test-Combination Cat. No. 139 106. Определяют разницу, с одной стороны, между количеством глюкозы (выраженным в миллиграммах), измеренным согласно этому способу, и, с другой - количеством глюкозы (также выраженным в миллиграммах), измеренным для этих клеточных стенок дрожжей с помощью вышеописанного способа измерения содержания гликогена. Эта разница (в миллиграммах) между двумя измеренными количествами глюкозы соответствует общему количеству глюканов в образце, причем это количество выражено в массовых эквивалентах глюкозы.-2 009677 Измеренное количество (в миллиграммах) маннозы соответствует общему количеству маннанов в образце, причем это количество выражено в массовых эквивалентах маннозы. Настоящее изобретение в первую очередь относится к средству для лечения гипергликемии, состоящему из клеточных стенок дрожжей, таких как определенные выше, т.е. клеточных стенок дрожжей по изобретению. Лечение гипергликемии состоит, главным образом, в снижении уровня сахара в крови,т.е. уровня глюкозы в крови. Это средство согласно изобретению может быть использовано в различных случаях гипергликемии,например в перечисленных ниже случаях:(a) для лечения гипергликемии при диабете 2-го типа (диабет 2-го типа называют далее состояние (а;(b) для лечения гипергликемии при гестационном диабете, или диабете беременных (гестационный диабет, или диабет беременных, далее называют состояние (b;(c) для лечения гипергликемии при преддиабете (преддиабет далее называют состояние (с;(d) для лечения гипергликемии, проявляющейся после приема пищи (такое состояние далее называют состояние (d. Настоящее изобретение также относится к средству для профилактики гипергликемии, причем указанное средство состоит из клеточных стенок дрожжей по изобретению. Профилактика гипергликемии состоит, главным образом, в поддержании уровня сахара в крови ниже уровня гипергликемии. Указанное средство может, в частности, представлять собой средство для профилактики гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d), определенных выше. Настоящее изобретение также относится к средству для стабилизации уровня сахара в крови, причем указанное средство состоит из клеточных стенок дрожжей по изобретению. Стабилизация уровня сахара в крови состоит, главным образом, в поддержании уровня сахара в крови ниже гипергликемии и выше гипогликемии. Указанное средство может, в частности, представлять собой средство для стабилизации уровня сахара в крови в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Средство по изобретению, в своих различных формах осуществления, может быть введено в различных формах или видах, индивидуально или в комбинации с другими ингредиентами, такими как, например, один или несколько других терапевтически активных ингредиентов и/или один или несколько эксципиентов. Так, настоящее изобретение относится к препарату для лечения гипергликемии, содержащему клеточные стенки дрожжей по изобретению, такие как определено выше. Другими словами, указанный препарат содержит средство по изобретению. Указанный препарат может, в частности, представлять собой препарат для лечения гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Настоящее изобретение также относится к препарату для профилактики гипергликемии, содержащему клеточные стенки дрожжей по изобретению. Указанный препарат может, в частности, представлять собой препарат для профилактики гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Настоящее изобретение также относится к препарату для стабилизации уровня сахара в крови, содержащему клеточные стенки дрожжей по изобретению. Указанный препарат может, в частности, представлять собой препарат для стабилизации уровня сахара в крови в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Препарат согласно одной из вышеописанных форм осуществления, в целом, представляет собой препарат для перорального введения. Этот препарат может, в частности, быть представлен в форме таблетки, капсулы, пилюли, порошка,гранул или суспензии. Препарат по изобретению может также включать один или несколько терапевтически активных агентов, в частности один или несколько агентов для понижения уровня сахара в крови. Препарат может также включать один или несколько витаминов, один или несколько пищевых минералов и т.д. Препарат может также включать один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. Препарат по изобретению может, в частности, быть представлен в форме проглатываемой дозы, соответствующей количеству сухого вещества клеточных стенок дрожжей по изобретению менее 10 г,предпочтительно от 1 до 8 г, еще более предпочтительно от 1 до 7 г. Настоящее изобретение также относится к применению в получении терапевтической композиции или лекарственного средства клеточных стенок дрожжей по изобретению, различные формы осуществления которого определены выше. Изобретение, в частности, относится к применению этих клеточных стенок дрожжей в получении одной из композиций по изобретению, определенных выше. Так, настоящее изобретение относится к применению клеточных стенок дрожжей по изобретению в получении терапевтической композиции для лечения гипергликемии.-3 009677 Клеточные стенки дрожжей по изобретению могут, в частности, быть использованы в получении терапевтической композиции для лечения гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний(а), (b), (с) или (d). Настоящее изобретение также относится к применению клеточных стенок дрожжей по изобретению в получении терапевтической композиции для профилактики гипергликемии. Клеточные стенки дрожжей по изобретению могут, в частности, быть использованы в получении терапевтической композиции для профилактики гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Настоящее изобретение также относится к применению клеточных стенок дрожжей по изобретению в получении терапевтической композиции для стабилизации уровня сахара в крови. Клеточные стенки дрожжей по изобретению могут, в частности, быть использованы в получении терапевтической композиции для стабилизации уровня сахара в крови в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Фармацевтическая композиция, как правило, является композицией для перорального введения. Фармацевтическая композиция может, в частности, быть представлена в форме таблетки, капсулы,пилюли, порошка, гранул или суспензии. Клеточные стенки дрожжей по изобретению могут быть, в частности, использованы в получении фармацевтической композиции, содержащей также один или несколько терапевтически активных агентов, и в частности один или несколько агентов,для снижения уровня сахара в крови и/или один или несколько витаминов, один или несколько пищевых минералов и т.д. Фармацевтическая композиция может также включать один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. Клеточные стенки дрожжей по изобретению могут быть, в частности, использованы для получения терапевтической композиции в форме проглатываемой дозы, соответствующей количеству сухого вещества клеточных стенок дрожжей по изобретению менее 10 г, предпочтительно от 1 до 8 г, еще более предпочтительно от 1 до 7 г. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения гипергликемии у пациента, включающему введение пациенту средства для лечения гипергликемии по изобретению или препарата для лечения гипергликемии по изобретению. Способ лечения гипергликемии может, в частности, представлять собой способ лечения гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Настоящее изобретение также относится к применению средства или препарата по изобретению в лечении гипергликемии, в профилактике гипергликемии или в стабилизации уровня сахара в крови пациента. Настоящее изобретение также относится к способу профилактики гипергликемии у пациента,включающему введение пациенту средства для профилактики гипергликемии по изобретению или препарата для профилактики гипергликемии по изобретению. Способ профилактики гипергликемии может, в частности, представлять собой способ профилактики гипергликемии в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Настоящее изобретение также относится к способу стабилизации уровня сахара в крови пациента,включающему введение пациенту средства для стабилизации уровня сахара в крови по изобретению или препарата для стабилизации уровня сахара в крови по изобретению. Способ стабилизации уровня сахара в крови может, в частности, представлять собой способ стабилизации уровня сахара в крови в случае по меньшей мере одного из состояний (а), (b), (с) или (d). Изобретение, в частности, относится к такому из этих способов, в котором средство или препарат вводят пациенту пероральным путем. Различные способы по изобретению могут, в частности, включать введение пациенту средства или препарата в суточной дозе, соответствующей 1-10 г, предпочтительно 2-8 г, еще более предпочтительно 3-6 г клеточных стенок дрожжей по изобретению, причем указанная суточная доза может быть введена в виде единственной дозы или в единственный момент времени, например за завтраком, или в виде нескольких частичных доз, т.е. несколько раз в течение дня. Способы по изобретению могут также включать стадию контроля уровня сахара в крови пациента после введения средства или препарата. Эти способы могут, в частности, включать стадию измерения уровня сахара в крови пациента перед введением пациенту средства или препарата, а также стадию контроля уровня сахара в крови пациента после введения пациенту средства или препарата. Примеры А. Способ получения клеточных стенок дрожжей по изобретению. Водное молоко (т.е. суспензию клеток дрожжей в воде) Saccharomyces cerevisiae, имеющее содержание сухого вещества от 12 до 18 вес.%, подвергают гидролизу с помощью эндогенных ферментов указанных клеток дрожжей с добавлением, в случае необходимости, к клеткам дрожжей экзогенных проте-4 009677 аз, таких как, например, папаин. Гидролиз проводят при 50 С в течение 24 ч таким образом, чтобы солюбилизировать по меньшей мере 60 вес.% сухого вещества дрожжевых клеток. На практике обычно автолиз или ферментативный гидролиз по изобретению осуществляют при температуре от 45 до 55 С в течение 18-36 ч без использования какого-либо фермента, способного солюбилизировать глюканы или маннопротеины. Солюбилизированную фракцию от нерастворимой фракции отделяют с помощью нескольких последовательных стадий центрифугирования и промывки водой. Нерастворимую фракцию высушивают на нагреваемых барабанах до получения содержания сухого вещества 95 вес.%. Образовавшиеся агломераты удаляют просеиванием. Полученные таким образом клеточные стенки дрожжей имеют содержание сухого вещества 95 вес.%; содержание белков N6,25 20,2 вес.% от массы сухого вещества; общее содержание глюканов и маннанов 43% от массы сухого вещества; содержание гликогена 8 вес.% от массы сухого вещества. В. Профилактика и лечение гипергликемии с помощью препарата по изобретению. У пациентки-инвалида, 82 лет, диагностирован диабет 2-го типа. Поскольку пациентка не могла выполнять сложные физические упражнения, начальное лечение было ограничено диетой с низким содержанием расщепляемых жиров и сахаров. Эта диета дала ограниченный эффект. В частности, было отмечено, что уровень сахара в крови пациентки, выраженный в уровне глюкозы, остался на значении 10-12 ммоль/л, при том, что требуемый уровень глюкозы в крови составляет от 4 до 7 ммоль/л, предпочтительно от 4,2 до 6,0 ммоль/л. В дальнейшем в дополнение к вышеуказанной диете было назначено добавление к употребляемым на завтрак злакам 3-4 г клеточных стенок дрожжей, таких, как описано в п.А. Спустя 12 ч после первого потребления указанных клеточных стенок дрожжей уровень сахара в крови пациентки снизился до 6 ммоль глюкозы на 1 л крови. В результате продолжения потребления 3-4 г клеточных стенок дрожжей в день за завтраком уровень сахара в крови пациентки поддерживался от 4,5 до 6 ммоль глюкозы/л в течение по меньшей мере 4 месяцев. В течение этих 4 месяцев не наблюдалось скачков уровня сахара после приема пищи даже в случае нарушения предписанной диеты, например после потребления шоколада. Каких-либо негативных побочных эффектов не наблюдалось. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Средство для лечения гипергликемии, состоящее из клеточных стенок дрожжей рода Saccharomyces cerevisiae, причем указанные клеточные стенки дрожжей имеют общее содержание глюканов и маннанов по меньшей мере 34 вес.% от массы сухого вещества,предпочтительно по меньшей мере 40 вес.% от массы сухого вещества и еще более предпочтительно по меньшей мере 45 вес.% от массы сухого вещества и содержание гликогена менее 10 вес.% от массы сухого вещества, предпочтительно менее 8 вес.% от массы сухого вещества, более предпочтительно менее 5 вес.% от массы сухого вещества и еще более предпочтительно менее 3 вес.% от массы сухого вещества. 2. Средство по п.1, в котором клеточные стенки дрожжей имеют общее содержание глюканов и маннанов менее или равное 70 вес.% от массы сухого вещества. 3. Средство по одному из пп.1 и 2, в котором клеточные стенки дрожжей имеют общее содержание глюканов и маннанов от 55 до 70 вес.% от массы сухого вещества, предпочтительно от 60 до 70 вес.% и еще более предпочтительно от 60 до 65 вес.% от массы сухого вещества. 4. Средство по одному из пп.1-3, в котором клеточные стенки дрожжей имеют содержание гликогена менее 1 вес.% от массы сухого вещества, предпочтительно менее 0,1 вес.% от массы сухого вещества. 5. Средство по одному из пп.1-4, в котором клеточные стенки дрожжей имеют содержание сухого вещества более или равное 90%, предпочтительно более или равное 94% и еще более предпочтительно более или равное 96 вес.%. 6. Средство для профилактики гипергликемии, состоящее из клеточных стенок дрожжей, таких как определены в одном из пп.1-5. 7. Средство по одному из пп.1-6, отличающееся тем, что гипергликемия является гипергликемией при диабете 2-го типа. 8. Средство для стабилизации уровня сахара в крови, состоящее из клеточных стенок дрожжей, таких как определены в одном из пп.1-5. 9. Средство по п.8 для стабилизации уровня сахара в крови при диабете 2-го типа. 10. Композиция для лечения гипергликемии, содержащая средство по одному из пп.1-5. 11. Композиция для профилактики гипергликемии, содержащая средство по одному из пп.1-5.-5 009677 12. Композиция по одному из пп.10 и 11, отличающаяся тем, что гипергликемия является гипергликемией при диабете 2-го типа. 13. Композиция для стабилизации уровня сахара в крови, содержащая средство по одному из пп.1-5. 14. Композиция по п.13 для стабилизации уровня сахара в крови при диабете 2-го типа. 15. Применение средства по одному из пп.1-5 в получении терапевтической композиции для лечения гипергликемии. 16. Применение средства по одному из пп.1-5 в получении терапевтической композиции для профилактики гипергликемии. 17. Применение средства по одному из пп.15 и 16, отличающееся тем, что гипергликемия является гипергликемией при диабете 2-го типа. 18. Применение средства по одному из пп.1-5 в получении терапевтической композиции для стабилизации уровня сахара в крови. 19. Применение средства по п.18 в получении терапевтической композиции для стабилизации уровня сахара в крови при диабете 2-го типа.