Инфузионный раствор “реамберин”

1 Изобретение относится к медицине, а именно к инфузионным солевым растворам,обладающим детоксицирующими свойствами за счет проявления антигипоксических, антиоксидантных и гепатопротекторных свойств. Известны широко применяемые в медицинской практике солевые инфузионные растворы: 0,9% изотонический раствор хлорида натрия, раствор Дисоль (0,6% хлорида натрия,0,2% ацетата натрия), Трисоль (0,5% хлорида натрия, 0,1% хлорида калия, 0,2% гидрокарбоната натрия), Квартасоль (0,6% хлорида натрия, 0,15% хлорида калия, 0,1% гидрокарбоната натрия, 0,20% ацетата натрия), раствор Рингера-Локка (0,9% хлорида натрия, 0,2% гидрокарбоната натрия, 0,2% хлорида кальция, 0,2% хлорида калия, 0,1% раствора глюкозы) (Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 13-е, Харьков: Торинг, 1997, т. 2, с. 143-146). Детоксицирующая активность этих инфузионных растворов обусловлена главным образом за счет нормализации электролитного баланса организма, усилением диуреза с удалением эндотоксинов с мочой через почки. Известные инфузионные растворы не устраняют гипоксических явлений в организме,возникающих при интоксикации, и не оказывают существенного влияния на детоксицирующую функцию печени. В настоящее время в биологии и медицине в качестве биологически активного вещества,обладающего широким спектром фармакологических свойств, предлагают использовать янтарную кислоту и ее различные производные сукцинаты (Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности и сельском хозяйстве. Сборник научных трудов под редакцией М.Н. Кондрашевой, - Пущино, ОНТИ РАМН, 1996,300 с.; патент России 2043101 Способ повышения адаптации человека при физической нагрузке, МКИ: А 61 К 31/20 от 02.11.93). Янтарная кислота и сукцинаты также широко используются в качестве компонента препаратов адаптогенного характера и пищевых добавок (Булдаков А.С. Пищевые добавки. Справочник, - Санкт-Петербург: "VG", с. 75.; патент России 2012350 Средство для снятия алкогольного опьянения, МКИ: А 61 К 35/78 от 17.05.93; патент России 2032421 Стимулирующее и тонизирующее средство, МКИ: А 61 К 35/78 от 27.12.93; патент России 2056842 Сукцинат для лечения внутриутробной патологии, связанной с гипоксией и инфекцией,МКИ: А 61 К 31/19 от 30.06.92.; заявка Японии 56-125,313 Лекарственный препарат, МКИ: А 61 К 31/19 от 09.03.80; патент России 2039556 Фармацевтическая композиция противоалкогольного, стимулирующего энергетический обмен, кислотообразующую и секреторную функцию слизистой желудка, радиопротективного и противохолерного действия, способ профилактики и лечения алкогольного абстинентного 2 синдрома, способ стимуляции и диагностики кислотообразующей и секреторной функции желудка и способ защиты от радиационного поражения теплокровных животных, МКИ: А 61 К 31/19 от 07.07.93). Известны также различные сукцинаты, обладающие гепатопротекторной активностью(Патент США 4,320,146 Лечение заболеваний печени и почек солями арнитина или оргинина с кетокислотами, имеющими разветвленные цепи, МКИ: А 61 К 31/22, А 61 К 31/195 от 02.10.80; патент Японии 09/188,664 Получение производных алкилтиоянтарной кислоты для лечения болезней печени и почек, МКИ: С 07 С 323/51 от 22.07.97). Известно также, что сукцинат натрия в комбинации с естественным метаболитом аденозином и ферментом Цитохром Р используется в качестве антигипоксанта в комплексных противокатарактальных глазных каплях ОфтанКатахром и Витафакол (Справочник ВИДАЛЬ - М., Астрофармсервис, 1998, с. 132,490). В настоящее время в патентной и научнотехнической литературе неизвестны инфузионные растворы, содержащие в качестве компонента в составе янтарную кислоту или ее соли сукцинаты. Ближайшим аналогом заявляемого соединения по фармакологическому действию и медицинскому назначению является солевой инфузионный раствор Мафусол (Патент России 1630043, приоритет от 01.06.84, опубликован 28.02.94), содержащий мас.%: 0,55-0,65 хлорида натрия, 0,025-0,035 хлорида калия, 0,005-0,015 хлорида магния и 1,2-1,4 фумарата натрия в качестве биологически активного компонента. Активный компонент в прототипе - фумарат натрия - получают непосредственно в процессе приготовления инфузионного раствора из расчетных количеств фумаровой кислоты и едкого натра. Мафусол обладает детоксицирующими свойствами за счет нормализации водноэлектролитического баланса и слабого антигипоксического эффекта. Прототип не нормализует детоксицирующую функцию печени. Кроме того, известно, что фумарат натрия (Европейский индекс Е 365) обладает токсичностью и его суточная доза не должна превышать 6 мг/кг веса- Санкт-Петербург, VG, 1996, с. 75). Соответственно, учитывая содержание фумарата натрия в Мафусоле-1,2-1,4 мас.% и средний вес человека 70 кг, безопасная суточная доза солевого инфузионного раствора не должна превышать 33 мл, в то время как при тяжелых формах интоксикации (сепсис, ожоги, химиотерапия опухолей) необходимый суммарный суточный объем вводимых инфузионных растворов может достигать 10 л. Существенным недостатком Мафусола является высокая осмолярность данного раство 3 ра, равная 480-490 мосмоль/л, в то время, как осмолярность плазмы крови составляет всего 290-310 мосмоль/л. Такая высокая осмолярность Мафусола резко ограничивает скорость инфузии и терапевтическое применение ввиду возможных негативных реакций организма в виде резкого скачка давления, спазма сосудов, отека легких и головного мозга при увеличении скорости инфузии. Таким образом, препарат Мафусол мало пригоден для применения в интенсивной терапии и в реанимации ввиду потенциальной опасности развития токсических явлений в организме больного при введении больших доз инфузионного раствора. Задача изобретения - создание детоксицирующего солевого инфузионного раствора, обладающего антигипоксической, антиоксидантной и гепатопротекторной активностью при низкой токсичности и имеющего осмолярность,близкую к осмолярности плазмы крови. Решение поставленной задачи достигается тем, что инфузионный раствор, содержащий хлориды натрия, калия и магния, растворитель и биологически активный компонент, а в качестве растворителя содержит воду для инъекций, а в качестве биологически активного компонента натрия глюкамина сукцинат (номенклатурное название: Н-(1-дезокси-d-глюцитол-1-ил)-Nметиламмония-натрия сукцинат) общей формулы: при следующем соотношении компонентов, маc.%: Хлорид натрия 0,4-0,6 Хлорид магния 0,011-0,013 Хлорид калия 0,027-0,033 Натрия глюкамина сукцинат 1,4-1,6 Вода для инъекций Остальное Заявляемый инфузионный раствор в процессе детоксикации организма позволяет не только нормализовать водно-электролитный баланс, но и существенно снизить гипоксию органов и тканей, а также усилить выделение токсинов клетками печени (гепатопротекторная активность). Кроме того, заявляемый препарат обладает выраженным антиоксидантным действием, защищая мембраны клеток организма от свободно-радикальных частиц, возникающих в процессе интоксикации. В заявляемом растворе гепатопротекторная функция и выраженное антигипоксическое и антиоксидантное действия обусловлены за счет использования в качестве активного компонента натрия глюкамина сукцината формулы(1). Пример конкретного получения Реамберина. 4 Активный компонент заявляемого инфузионного раствора натрия глюкамина сукцинат получается непосредственно в процессе приготовления инфузионного раствора путем растворения расчетных количеств янтарной кислоты,едкого натра и N - метилглюкамина в воде для инъекций. Например, берут: 5,28 г янтарной кислоты НООСCH2CH2(СНОН)4 СН 2 ОН], (Ф.С. 42-2265-97),1,8 г едкого натра и растворяют в 900 мл воды. При этом образуется активное вещество натрия глюкамина сукцинат согласно химической реакции: НООССН 2 СН 2COOH+NaOH+СН 3NHCH2CH3]+[ООССН 2 СН 2 СОО]2-+2H2O. Физико-химические свойства натрия глюкамина сукцината приведены в таблице 1. Затем к полученному раствору добавляют 6,0 г хлорида натрия, 0,12 г хлорида магния и 0,3 г хлорида калия, доводят объем полученного раствора до 1000 мл водой для инъекций, раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Сарториус, герметически закрывают и выдерживают в автоклаве 20 мин при 120 С. Полученный раствор имеет следующий состав (маc.%): Хлорид натрия 0,5 Хлорид магния 0,012 Хлорид калия 0,03 Натрия глюкамина сукцинат 1,5 Вода для инъекций Остальное Количественный и качественный состав инфузионного раствора был подобран заявителем экспериментально таким образом, чтобы: 1) соотношение ионов калий - натрий магний было близким к естественной концентрации в плазме крови человека; 2) осмолярность полученного раствора была близка к осмолярности плазмы крови и находилась в пределах 310-320 мосмоль/л; 3) раствор при этом обладал высокой детоксицирующей активностью за счет проявления антигипоксических, антиоксидантных и гепатопротекторных свойств. Полученный детоксицирующий инфузионный раствор Реамберин не обладает мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим, аллергенным и иммунотоксическим действием. Острая токсичность LD50 Реамберина при парентеральном введении составляет 5600 мг/кг массы в пересчете на активное вещество натрия глюкамина сукцинат, в то время как острая токсичность активного компонента Мафусола на основе фумарата натрия составляет 640 мг/кг массы. Таким образом, заявляемый препарат в 8,75 раза менее токсичен, чем Мафусол в условиях острого опыта. 5 Изучение фармакологической активности раствора Реамберин проведено в эксперименте на различных видах животных по сравнению с прототипом Мафусол и с солевым изотоническим раствором хлорида натрия, при этом выявлен широкий спектр фармакологической активности в сочетании с низкой токсичностью и хорошей переносимостью. Опыт А. Изучение эффективности при острой кровопотере. В качестве экспериментального состава использовали раствор Реамберин, содержащий 1,5% натрия глюкамина сукцината. Эффективность Реамберина в качестве солевого плазмозамещающего инфузионного раствора в остром опыте проводили на 64 линейных крысах Вистар (4 группы по 16 животных). У всех животных тонкой иглой медленно отбирали кровь из сердца в объеме 10 мл. У первой группы животных (контрольной) никакой терапии после забора крови не проводили. Животным второй, третьей и четвертой групп сразу после забора крови внутрибрюшинно вводили по 5 мл соответственно Реамберина, Мафусола или 0,9% физиологического раствора хлорида натрия. За животными всех групп вели наблюдение в течение 24 ч после введения препаратов, оценивая выживаемость каждые шесть часов. Эффективность препаратов оценивали по проценту выживаемости в течение суток. Данные по изучению препарата при острой кровопотере представлены в табл.2. Как видно из данных, приведенных в таблице 2, максимальная эффективность - 24 часовая выживаемость при острой кровопотере наблюдалась у Реамберина (37,5%), по сравнению с Мафусолом (25,0%) и изотоническим раствором хлорида натрия (18,75%). Опыт Б. Детоксицирующая активность. Детоксицирующую активность Реамберина в сравнении с Мафусолом и 0,9%-м изотоническим раствором хлорида натрия исследовали на модели летального отравления гепатотоксином - четыреххлористым углеродом на 48 линейных крысах Вистар. В качестве экспериментального состава использовали Реамберин, содержащий 1,5% натрия глюкамина сукцината. Четыреххлористый углерод вводили ежедневно в сублетальной дозе 2 мг/кг в 2 мл физиологического раствора подкожно животным трех групп в течение 7 дней. В четвертой группе четыреххлористый углерод не вводили (контроль). В первой группе (14 животных) за два часа до введения гепатотоксина вводили Реамберин внутрибрюшинно в объеме 2 мл. Во второй группе (14 животных) за два часа до введения гепатотоксина вводили внутрибрюшинно Мафусол в объеме 2 мл. 6 В третьей группе (14 животных) за два часа до введения гепатотоксина вводили внутрибрюшинно 0,9% изотонический раствор хлорида натрия в объеме 2 мл. За всеми группами животных наблюдали в течение 10 дней от начала опыта. Через 10 дней оценивали детоксицирующую активность Реамберина по сравнению с Мафусолом и 0,9% изотоническим раствором хлорида натрия по выживаемости животных. Экспериментальные данные опыта представлены в табл. 3. Как видно из данных, представленных в табл. 3, Реамберин оказывал гораздо более выраженное детоксицирующее действие при отравлении четыреххлористым углеродом, чем Мафусол или 0,9% изотонический раствор хлорида натрия: процент выживаемости крыс при введении раствора Реамберина был на 14,28% выше, чем у Мафусола и на 28,57% выше, чем у изотонического раствора хлорида натрия. Опыт В. Гепатопротекторная и антиоксидантная активности. Общеизвестно, что соли аммония являются мощными нейро- и гепатотоксинами. Их действие основано на обратимых изменениях энергетического обмена в клетках органов животного. Опыт по изучению гепатопротекторной активности Реамберина проводили на 46 линейных крысах Вистар, разделенных на 4 группы животных. В качестве экспериментального состава использовали Реамберин, содержащий 1,5% натрия глюкамина сукцината. В первой группе животных в течение 7 дней вводили внутрибрюшинно хлорид аммония однократно в суточной дозе 125 мг/кг (1/3 ЛД 50) в двух мл 0,9 %-го изотонического раствора хлорида натрия. Во второй группе хлорид аммония вводили аналогично в 2 мл Реамберина. В третьей группе хлорид аммония вводили аналогично в 2 мл Мафусола. В четвертой (контрольной) группе крысам вводили только 0,9%-й изотонический раствор хлорида натрия. За всеми группами животных вели наблюдение в течение 10 дней, отмечали 7 - дневную и 10 - дневную выживаемость. Оставшихся в живых животных в группах забили электротоком и в печени определяли распределение внутриклеточных метаболитов, отражающих степень поражения печени: пирувата, 3-Д-гидроксибутирата, оксоглутарата, фосфоенолпирувата,креатинфосфата, АТФ. Степень жировой инфильтрации печени оценивали по содержанию гликогена, а пигментообразующую функцию - по содержанию билирубина в сыворотке крови. Антиоксидантную активность оценивали по содержанию продукта окисления клеточных мембран - малонового диальдегида. 7 Все биохимические исследования проводились по стандартным методикам (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Кост Е.А. - М., Медицина,1975). Полученные экспериментальные данные обрабатывались методами математической статистики с использованием критерия Стьюдента и Вилкоксона - Манна - Уитни при Р 0,05. Результаты, полученные в опыте, представлены в табл. 4. Как видно из данных, представленных в табл. 4, Реамберин в большей степени, чем Мафусол способствует сохранению биохимических показателей функционирования печени и ее пигментообразующей функции, на модели химической интоксикации хлористым аммонием, что свидетельствует о выраженной гепатопротекторной активности. Так, например, как видно из строки 5 табл. 4, содержание билирубина при совместном применении Реамберина с хлористым аммонием близко к норме(контрольная группа). Содержание билирубина при применении Мафусола и изотонического раствора ниже нормы, что говорит о подавлении функции пигментообразования и общих нарушениях функции печени. О нормализации работы печени свидетельствуют и биохимические показатели, в частности, содержание гликогена,пирувата, 3-Д-гидроксибутирата, оксоглутарата,фосфоенолпирувата, креатинфосфата и АТФ. Все эти показатели при использовании раствора Реамберина имеют значения, близкие к показателям нормы в контрольной группе. О мембраностабилизирующем действии Реамберина, антиоксидантной активности свидетельствует более низкое содержание основного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида - в клетках печени по сравнению с Мафусолом и, тем более, с изотоническим раствором. Опыт Г. Антигипоксическая активность Реамберина. Острую гистотоксическую гипоксию моделировали на крысах с использованием известного тканевого яда - фторида натрия, блокирующего тканевое дыхание на уровне гликолиза. Опыт проводили на 48 линейных крысах Вистар. В качестве экспериментального состава 8 использовали Реамберин, содержащий 1,5% натрия глюкамина сукцината. В первой группе из 16 животных вводили фторид натрия внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в 5 мл 0,9 %-го изотонического раствора хлорида натрия (контроль). Во второй группе из 16 крыс вводили фторид натрия в дозе 50 мг/кг в 5 мл Реамберина. В третьей группе из 16 крыс вводили фторид натрия в дозе 50 мг/кг в 5 мл Мафусола. По мере всасывания фторида натрия происходило блокирование тканевого дыхания и животные погибали. Об антигипоксической активности Реамберина в сравнении с Мафусолом судили по средней продолжительности жизни крыс. Экспериментальные данные по опыту представлены в табл. 5. Таким образом, Реамберин оказывает более выраженную антигипоксическую активность, увеличивая продолжительность жизни на модели гистотоксической гипоксии на 77% по сравнению с контролем, тогда как Мафусол только на 33%. Учитывая, что инфузионные растворы используются в терапии неотложных состояний, и часто необходимо не только капельное, но и струйное введение инфузионного раствора, заявителем были экспериментально установлены пределы оптимального содержания основного активного компонента - натрия глюкамина сукцината для создания раствора с осмолярностью,близкой к осмолярности плазмы крови в пределах 300-350 мосмоль/л. Такая осмолярность Реамберина позволяет вводить больным любой необходимый объем инфузионного раствора. Экспериментальные данные по осмолярности Реамберина, представленные в табл. 6,показывают, что оптимальным является содержание натрия глюкамина сукцината в пределах 1,4-1,6%. Таким образом, заявляемый детоксицирующий инфузионный раствор Реамберин обладает антигипоксической, антиоксидантной и гепатопротекторной активностями благодаря наличию нового биологически активного компонента - натрия глюкамина сукцината. Таблица 1. Физико-химические свойства натрия глюкамина сукцинатапп Параметр Значение 1 Внешний вид Аморфное гигроскопичное вещество белого цвета 2 Растворимость Хорошо растворимо в воде, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, малорастворимо в спиртах, не растворимо в ацетоне,эфире, бензоле, хлороформе 3 Температура плавления, С 69 - 70 (с разложением) 4 Ультрафиолетовый спектр, нм Прозрачен 5 Спектр ПMP(DMCO-d6) м.д. 2,25 с(3 Н 1 СН 3), 2,35c(4H1CH2), 2,52 л(2 Н 1 СН 2), 3,45M(6H1CH) 6 Спектр ЯMP13C(DMCO-d6) м.д. 28,2(СН 2), 34,2(СН 3), 52,5(СН 2), 63,8(СН), 70,2(СН), 70,5(СН),71,0(СН), 71,4(СН), 173,5(СООН) 7 Брутто-формулаC11H22NO9Na 8 Элементный анализ Найдено, %: С 39,86; Н 7,36; N 4,07; O 43,04 Вычислено,% С 39,40; Н 6,91; N 4,17; O 42,93 9 Молекулярная масса Найдено: 339 (криоскопически в диметилсульфоксиде) Вычислено: 335,3 Таблица 2 Плазмозамещающий эффект Реамберина Препарат Число крыс в опыте Число выживших крыс в течение 6 ч Число выживших крыс в течение 12 ч Число выживших крыс в течение 18 ч Число выживших крыс в течение 24 ч Процент выживаемости в течение 24 ч Таблица 3. Детоксицирующая активность Реамберина Изотонический 0,9% Препарат Реамберин Мафусол р-р хлорида натрия Число животных в опыте 14 14 14 Число выживших животных за 7 дней 9 7 6 Число выживших животных за 10 дней 6 4 2 Процент выживае мости за 10 дней 42,8 28,57 14,28 Таблица 4. Гепатопротекторная и антиоксидантная активность Реамберина 0,9% изотониче- Реамберин Мафусол + 0,9% изотониский р-р хлорида + хлорид ам- хлорид амческий р-р хлоПрепарат натрия + хлорид мония 125 мония 125 рида натрия аммония 125 мг/кг мг/кг мг/кг Таблица 5. Антигипоксическая активность Реамберина 0,9 % изотонический р-р Реамберин + Препарат хлорида натрия + фторид фторид натрия натрия (контроль) Число животных в опыте 16 16 Число выживших крыс 0 0 Средняя продолжительность жизни, мин 484 856 Продолжительность жизни по отноше 100 177 нию к контролю, % Таблица 6. Зависимость величины осмолярности от содержания активного вещества в растворе Реамберина Содержание натрия глю- Осмолярность РеамКомментарии камина сукцината, маc. % берина, мосмоль/л 1,0 260 Гипоосмолярный раствор 1,4 300 Осмолярность, близкая к осмолярности плазмы крови 1,5 320 Осмолярность, близкая к осмолярности плазмы крови 1,6 350 Осмолярность, близкая к осмолярности плазмы крови 2,0 430 Гиперосмолярный раствор 6,0 580 Гиперосмолярный раствор ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Детоксицирующий инфузионный раствор,содержащий хлориды натрия, калия и магния,растворитель и биологически активный компонент, отличающийся тем, что в качестве растворителя содержит воду для инъекций, а в качестве биологически активного компонента содержит натрия глюкамина сукцинат общей формулы:Na+[НОСН 2(СНОН)4 СН 2NH2 СН 3]+[ООССН 2 СН 2 СОО]2 при следующем соотношении компонентов,маc.%: Хлорид натрия 0,4-0,6 Хлорид магния 0,011-0,013 Хлорид калия 0,027-0,033 Натрия глюкамина сукцинат 1,4-1,6 Вода для инъекций Остальное