Стабильный экстракт зверобоя, способ его приготовления и фармацевтические составы на его основе

1 Фармакологические и клинические испытания экстрактов зверобоя (Hypericum, St. John'swort) показали, что они могут быть использованы для лечения в случае легких депрессий и депрессий средней тяжести. Легкий антидепрессивный общий эффект не может быть точно связан с определенным одним или несколькими компонентами (см. публикацию J. Holzl, S. Sattler and H. Schutt, Johanniskraut : Eine Alternativezu synthetischen Antidepressiva (Зверобой: альтернатива синтетическим антидепрессантам),Pharmazeutische Zeitung, No. 46, 139. Jahrgang,17 November 1994, pages 3959 - 3977. Однако,совсем недавно было показано, что гиперфорин вносит существенный вклад в эффективность(ЕР-А-0 599 307). Неочищенный галеновый (травяной) препарат образован надземными частями зверобоя(Hypericum perforatum L.) Компонентами Hypericum perforatum L. среди других являются гиперицин (Hypericin) и гиперфорин (Нуperforin) (см. выше J. Holzl и др.). Приготовление экстрактов зверобоя (Hypericum) с повышенным содержанием гиперицина описано в DT-PS-1 569 849, а также в публикации S. Niesel and H. Schilcher, Arch. Pharm.,Vol. 323 (1990), page 755. Из публикации R. Berghofer and J. Holzl,Deutsche Apothekerzeitung, Vol. 126, No. 47(1986) pages 2569 - 2573 известно, что гиперфорин в экстрактах из запасенных неочищенных галеновых препаратов полностью деградирует(распадается) по истечении одной недели хранения, в то время как он является более стабильным (стойким) в экстрактах свежих растений. Указанные авторы полагают, что свежие растения содержат стабилизатор гиперфорина.pages 601 - 602, сообщают данные о масле зверобоя и о корреляции, которая существует между концентрацией гиперицина и содержанием перекиси. Подверженные воздействию солнечного излучения продукты из зверобоя изменяют содержание перекиси. Однако по данным J.Holzl и др. корреляция между содержанием перекиси и концентрацией гиперицина отсутствует. Р. Maisenbacher and К.-A Kovar, PlantaMed., Vol. 58 (1992) pages 351 - 354 сообщают данные о стабильности масла зверобоя. Это масло также содержит гиперфорин, который разлагается в течение нескольких недель. Из европейского патента ЕР-А-0 599 307(который соответствует немецкому патенту DEOS 4 239 959) известны экстракты зверобоя и процессы их приготовления, причем эти экстракты имеют наименьшее возможное содержание гиперицина и других аналогичных фоточувствительных соединений, но тем не менее обладают эффективностью, которую раньше считали зависящей целиком от гиперицина. Эта эффек 000948 2 тивность может быть объяснена наличием гиперфорина. Более того, известно, что масло зверобоя(Oleum hyperici) может быть приготовлено экстрагированием размолотых свежих цветов зверобоя при помощи жирного масла, такого как оливковое и соевое масло, масло из жира зародышей пшеницы или подсолнечное масло. Масло зверобоя имеет различное содержание гиперфорина и полезно для местного лечения ран,в особенности ожогов и ссадин; см. Р. Maisenbacher and К.-A Kovar, Planta Med., Vol. 58S. Stock, Planta Med., Vol. 55 (1989) pages 601602. Как в этом препарате, так и в обычных экстрактах зверобоя содержание гиперфорина резко уменьшается до полного исчезновения этой субстанции после нескольких месяцев обычного хранения; см. Ph. D. thesis of Р.Berghofer, Marburg L. 1987. В ранних экспериментах с масляными экстрактами зверобоя стабильность составов, содержащих гиперфорин,могла быть наилучшим образом увеличена при хранении в атмосфере аргона; см. выше Ph. D.thesis of P. Maisenbacher. Для указанных экстрактов нет сведений относительно повышения стабильности за счет применения антиокислителей, таких как бутилгидрокситолуол (ВНТ) и бутилгидроксианизол (ВНА). Более того, традиционные антиокислители, такие как Oxinex LM и Oxinex 2004, также не приводят к повышению стабильности. В случае масла зверобоя наивысшая стабильность (в соответствии с Ph. D. thesisof P. Maisenbacher) была достигнута за счет использования октилдодеканола (Eutanol G ) в качестве экстрагирующего вещества; см Ph. D.thesis of P. Maisenbacher, pages 151-154. Экстракты зверобоя, содержащие гиперфорин, могут быть приготовлены при помощи фармацевтически приемлемых неорганических или органических растворителей или при помощи их смеси (Р. List, P. С. Schmidt, Technologie pflanzlicher Arzneizubereitungen, Wissensch.Varlagsgesellschaft mbH, Штугарт, 1084). Обычные водно-спиртовые экстракты зверобоя и готовые фармацевтические составы,приготовленные из них, обычно содержат ориентировочно менее 1% (от всего объема экстракта; в пересчете на экстракт) гиперфорина. При хранении происходит очевидное уменьшение содержания гиперфорина, которое приближается к нулю в зависимости от индивидуальных условий хранения. Можно полагать, что процессы окисления вызывают распад гиперфорина в неочищенных галеновых препаратах и в экстракте. Первой задачей настоящего изобретения является получение содержащих гиперфорин экстрактов зверобоя, которые обладают повышенной стабильностью, так что гиперфорин 3 остается стабильным в течение длительного периода времени. Другой задачей настоящего изобретения является создание способа приготовления таких стабилизированных экстрактов,также как и получения фармацевтических составов, содержащих указанные стабилизированные экстракты, в которых содержание гиперфорина также остается стабильным. В соответствии с настоящим изобретением эти задачи решены за счет создания экстрактов в соответствии с пп.1-8 формулы изобретения,изготовленных по способам в соответствии с пп.9-21 формулы изобретения, а также за счет приготовления фармацевтического состава в соответствии с п.22 формулы изобретения. Настоящее изобретение основано, среди прочего, на том неожиданном результате, что экстракт зверобоя с определенным антиокислителем и/или со стабилизаторами связывания кислорода или с восстановителями, которые способны разлагать окислители, такие как радикалы, перекиси, атмосферный кислород и т.п.,и/или тормозить разложение гиперфорина, при возможном проведении экстрагирования в атмосфере инертного газа, такого как азот и/или при отсутствии света, при помощи растворителя с существенно уменьшенным содержанием кислорода, имеет существенно более высокую стабильность, чем необработанный экстракт зверобоя. В противоречии с наблюдениями R.Berghofer and J. Holzl (см. выше) этот экстракт может быть получен из высушенных и запасенных неочищенных галеновых препаратов. Растворитель с существенно уменьшенным содержанием кислорода может быть приготовлен за счет физической обработки, такой как промывание инертным газом, таким как азот. В случае экстракта зверобоя, который защищен или стабилизирован в соответствии с настоящим изобретением, в частности за счет добавки антиокислителя и преимущественно при исключении света и атмосферного кислорода, гиперфорин в этом экстракте остается главным образом стабильным в течение длительного времени. Защита от воздействия света и атмосферного кислорода может быть также достигнута за счет применения соответствующего фармацевтического состава. В соответствии с предпочтительным вариантом настоящего изобретения, для приготовления стабилизированных экстрактов свежий или преимущественно высушенный препарат зверобоя экстрагируют при помощи водного раствора метилового или этилового спирта, содержание кислорода в котором существенно снижено за счет физической обработки. К раствору экстракта добавляют и растворяют в нем антиокислитель в качестве стабилизатора по причине возможного присутствия окислителей. Среди других примеров преимущественных растворителей для экстракта зверобоя можно указать на группу алканов с низкой точкой кипения, 000948 4 имеющих ориентировочно от 5 до 8 атомов углерода, таких как пентаны, гексаны и гептаны, в частности n-гептан, а также жидкий или сверхкритический диоксид углерода. Под "водным раствором метилового или этилового спирта" понимают метиловый или этиловый спирт, который имеет содержание воды преимущественно до 40% по объему. В качестве примеров преимущественных антиокислительных стабилизаторов или антиокислителей можно указать фармакологически приемлемые вещества, способные тормозить разложение гиперфорина и/или восстанавливать окислители в экстракте или в фармацевтическом составе. В качестве конкретных примеров можно указать вещества, выбранные из группы органических тиоловых соединений, такие как цистеин и глутатион, а также аскорбиновую кислоту и ее производные, такие как эфиры жирных кислот аскорбиновой кислоты, например миристат, палмитат и стеарат. Антиокислительные стабилизаторы добавляют в экстракт раствора зверобоя в количестве,достаточном для стабилизации гиперфорина. Достаточна общая концентрация антиокислительного стабилизатора от 0,01 до 5% от всего объема экстракта зверобоя. В соответствии с другим вариантом настоящего изобретения, обработку осуществляют в соответствии с изложенным, однако добавку стабилизатора производят на этапе после сушки раствора экстракта, например после удаления(выпаривания) растворителя. В соответствии с другим предпочтительным вариантом настоящего изобретения, добавку антиокислительного стабилизатора производят на этапе получения готового фармацевтического продукта совместно с другими фармацевтическими добавками. Преимущественно все варианты осуществляют при исключении воздействия света или кислорода. Полученные экстракты могут быть обработаны совместно с обычными фармацевтическими добавками, возможно после нового добавления стабилизатора к фармацевтическим составам, таким как капсулы, таблетки или таблетки с покрытием. В качестве фармацевтических добавок могут быть использованы наполнители, связующие вещества, дезинтеграторы, смазки и покрытия для таблеток с пленкой и таблеток с покрытием, а также масла и жиры в качестве наполнителей для мягких желатиновых капсул. Указанные ранее и другие характеристики изобретения будут более ясны из последующего детального описания, приведенного со ссылкой на примеры, которые не имеют характера, ограничивающего объем патентных притязаний. Указанные процентные содержания представляют собой объемные процентные содержания,если специально не указано иное. В качестве 5 инертного (защитного) газа использован азот. Следует иметь в виду, что могут быть использованы и другие инертные газы, такие как аргон или криптон. Примеры 1 а) и 1 б) (сравнительные примеры). а) 1 кг неочищенного галенового препарата зверобоя мелко измельчали в мельнице, а затем добавили 7 кг 70% (по объему) этанола. Суспензию 1 кг неочищенного галенового препарата и 7 кг растворителя интенсивно перемешивали при 55 С в течение 1 ч в атмосфере инертного газа. Затем результирующий экстракт был отделен от неочищенного галенового препарата при помощи центрифугирования. Остаток препарата направляли на повторное экстрагирование с 7 кг растворителя. Два раствора экстракта сливали, а сухой остаток в экстракте определяли как аликвот. Экстракт осторожно упаривали при пониженном давлении до ориентировочного содержания 70% сухого осадка, а затем вновь сушили при 40 С при пониженном давлении. Было получено 0,42 кг сухого остатка. Содержание гиперфорина составляло 2,26%, а общее содержание гиперицина составляло 0,27%. б) Сухой остаток примера 1 а) был дополнительно обработан в соответствии с указаниями, которые содержатся в ЕР-А-0 599 307, а именно, при применении обработки поливинилпирролидоном (PVP) для избирательного удаления гиперицина. Содержание гиперфорина составило 2,96%. Пример 2. 24 кг неочищенного галенового препарата зверобоя были мелко измельчены в мельнице, а затем добавили 156 кг 80% (по объему) метанола, который был предварительно промыт азотом. Эту смесь затем перемешивали в течение 1 ч при 55 С. Полученный раствор экстракта был отделен от сухого остатка при помощи центрифугирования. Остаток препарата направляли на повторное экстрагирование. Два раствора экстракта сливали и добавляли 1,0 вес.% аскорбиновой кислоты. Этот раствор перемешивали в течение 15 мин. Экстракт осторожно упаривали при пониженном давлении до ориентировочного содержания 70% сухого осадка, а затем вновь сушили при 40 С при пониженном давлении. Было получено 5,39 кг стабилизированного сухого экстракта с содержанием гиперфорина 3,2%. Общее содержание гиперицина в этом экстракте составляло 0,48%. Пример 3. 8 кг неочищенного галенового препарата зверобоя были мелко измельчены в мельнице, а затем добавили 56 кг 70% (по объему) этанола. Содержание кислорода в использованном растворителе было предварительно снижено за счет промывки инертным газом. Суспензию 8 кг неочищенного галенового препарата и 56 кг растворителя интенсивно перемешивали при 55 С в течение 1 ч в атмосфере инертного газа. Затем полученный экстракт был отделен от неочищенного галенового препарата 6 при помощи центрифугирования при сохранении (поддержании) промывки азотом как инертным газом. Остаток препарата направляли на повторное экстрагирование, которое производили аналогично. Два раствора экстракта сливали и добавляли 0,05% L-цистеина. Полученный раствор интенсивно перемешивали в течение 10 мин в атмосфере азота, который использовали как инертный газ, а затем осторожно упаривали при пониженном давлении до получения ориентировочного содержания 70% сухого осадка, а затем вновь сушили при 40 С при пониженном давлении. Было получено 2,524 кг стабилизированного сухого остатка с содержанием гиперфорина 3,9%. Общее содержание гиперицина составляло 0,28%. Пример 4. 454 кг мелко измельченного свежего зверобоя были отжаты в таблетировочной машине. Добавляли 1,5 г аскорбиновой кислоты в отжатую жидкость (160 мл) и производили растворение. Затем отжатую жидкость вновь добавляли в препарат для отжатия. После этого во влажный препарат добавляли 1 кг nгептана. Затем смесь экстрагировали в течение 1 ч при постоянном перемешивании при 50 С и в отсутствии света. Затем смесь отсасывали при помощи фильтра Seitz Supra 1500 и остаток препарата экстрагировали второй раз аналогичным образом. Слитые растворы экстракта упаривали в роторном испарителе при 35 С в отсутствии света до получения ориентировочного содержания 70% сухого осадка, а затем сушили замораживанием. Было получено 9,11 кг сухого остатка с содержанием гиперфорина 37,2%. Пример 5. 515 кг мелко измельченного свежего зверобоя были отжаты в таблетировочной машине. Добавляли 1,7 г аскорбиновой кислоты в отжатую жидкость (180 мл) и производили растворение. Затем отжатую жидкость вновь добавляли в препарат для отжатия. После этого влажный препарат подавали в экстракционный блок высокого давления и проводили экстракцию под давлением 350 бар при 40 С в атмосфере диоксида углерода. На 1 кг препарата использовали 20 кг диоксида. По завершении экстрагирования давление снижали до 60 бар для разделения экстракта. Экстракт выгружали из блока и разделяли от воды экстрагирования за счет нагревания ориентировочно до 60 С. Было получено 12,3 г сухого экстракта с содержанием гиперфорина 43,1%. Пример 6. Проверка стабильности гиперфорина. В этом примере было произведено сравнение содержания гиперфорина (измеренное при помощи ВЭЖХ) в экстракте, полученном в примере 1, безо всяких мер предосторожности и добавок при приготовлении, с экстрактами, приготовленными в соответствии с примерами 2 - 5 в соответствии с настоящим изобретением. Экстракты, приготовленные в соответствии с настоящим изобретением, хранились в атмосфере азота и в отсутствии света при комнатной температуре. Результаты сведены в табл.1. Эти результаты показывают, главным образом, неизменное содержание гиперфорина по истечении 12 месяцев хранения в экстрактах, приготовленных в соответствии с настоящим изобретением. Полное содержание гиперицина в экстрактах,приготовленных в соответствии с примерами 13, также не изменилось в течение этого периода времени. Таблица 1 Сухой Гиперфо- Содержание гиперфоэкстракт рин рина, % исходное после после после содержа- 13 не- 6 ме- 12 мепример ние, % дель сяцев сяцев 1 а) 2,26 0,0 0,0 0,0 1 б) 2,96 0,0 0,0 0,0 2 3,2 3,2 3,17 3,15 3 3,90 3,90 3,88 3,85 4 37,2 37,2 36,5 36,1 5 43,1 43,1 43,0 42,4 Пример 7. Мягкие желатиновые экстрактом зверобоя. Состав, мг: Сухой экстракт зверобоя Аскорбиновая кислота Октилдодеканол Приготовление. Для приготовления в качестве сухого экстракта были использованы экстракты соответствующих примеров 3 и 4. Сухой экстракт и аскорбиновая кислота были совместно диспергированы в октилдодеканоле и обработаны при исключении атмосферного кислорода для получения мягких желатиновых капсул. Пример 8. Таблетки экстракта зверобоя с пленочным покрытием. Состав, мг: Сухой экстракт зверобоя 300 Целлюлоза 100 Модифицированный крахмал 90Na-карбоксиметилцеллюлоза 30 Мелкопорошковый диоксид кремния 5,0 Аскорбиновая кислота 5,0 Стеарат магния 5,0 Гидроксипропилметилцеллюлоза (покрытие) 20 Приготовление. Для приготовления в качестве сухого экстракта был использован экстракт примера 3. Компоненты были перемешаны в сухом состоянии в смесителе, а затем были непосредственно отпрессованы в таблетки. Полученные 8 таблетки затем были покрыты гидроксипропилметилцеллюлозой. Пример 9. Сравнение между имеющимися на рынке (рынок Германии, сентябрь 1995 г) готовыми фармацевтическими составами зверобоя и готовыми фармацевтическими составами в соответствии с настоящим изобретением. В этом примере был произведен анализ соответствующего содержания гиперфорина в пяти готовых фармацевтических составах зверобоя, которые имелись в наличии на рынке Германии в сентябре 1995 г. по отношению к экстракту (в пересчете на экстракт), который содержится в препарате, и было произведено сравнение с готовыми фармацевтическими составами в соответствии с настоящим изобретением. Результаты сведены в табл.2. Легко можно видеть, что фармацевтические составы, приготовленные в соответствии с настоящим изобретением, имеют существенно более высокое содержание гиперфорина, которое остается главным образом неизменным даже после 12 месяцев хранения. Таблица 2 Содержание Доля эксгиперфорина,тракта в Состав% зверобое,мг А 200 0,58 Б 250 0,20 В 40 0,07 Г 110 0,56 Д 250 0,71 Состав по примеру 3 в соответст 300 3,9 вии с настоящим изобретением ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Стабильный экстракт зверобоя(Hypericum perforatum L.; St. John's wort), содержащий гиперфорин, отличающийся тем, что гиперфорин стабилизирован от разложения или деградации при помощи стабилизатора, выбранного из группы, которая содержит антиокислитель, стабилизаторы связывания кислорода и восстановители. 2. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что количественное содержание стабилизатора, выбранного из группы органических тиоловых соединений, аскорбиновой кислоты и ее производных, достаточно для стабилизации гиперфорина. 3. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что стабилизатор присутствует в концентрации от 0,01 до 5% в пересчете на экстракт. 4. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что стабилизатор присутст 9 вует в концентрации от 0,2 до 1% в пересчете на экстракт. 5. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что стабилизатором является цистеин. 6. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что стабилизатором является глутатион. 7. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что стабилизатором является аскорбиновая кислота. 8. Стабильный экстракт зверобоя по п.1,отличающийся тем, что стабилизатором является жирный кислый эфир аскорбиновой кислоты. 9. Способ приготовления стабильного экстракта зверобоя, содержащего гиперфорин, отличающийся тем, что неочищенный галеновый препарат зверобоя (Hypericum perforatum L.) экстрагируют при помощи обычных фармацевтически приемлемых неорганических или органических растворителей или же их смеси, при условии, что эти растворители не являются масляными агентами экстракции, причем стабилизатор, выбранный из группы органических тиоловых соединений, аскорбиновой кислоты и ее производных, может добавляться в ходе приготовления экстракта или после этого приготовления, в количестве, достаточном для стабилизации гиперфорина, при этом сухой экстракт получают из приготовленного указанным образом жидкого экстракта. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что производят экстрагирование свежего неочищенного галенового препарата зверобоя(Hypericum perforatum L.). 11. Способ по п.9, отличающийся тем, что производят экстрагирование высушенного неочищенного галенового препарата зверобоя(Hypericum perforatum L.). 12. Способ по п.9, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора используют цистеин. 10 13. Способ по п.9, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора использован глутатион. 14. Способ по п.9, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора используют аскорбиновую кислоту. 15. Способ по п.9, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора используют жирный кислый эфир аскорбиновой кислоты. 16. Способ по п.9, отличающийся тем, что стабилизатор добавляют в концентрации от 0,01 до 5%, преимущественно в концентрации от 0,2 до 1% в пересчете на экстракт. 17. Способ по п.9, отличающийся тем, что для экстрагирования используют растворитель,содержание кислорода в котором низкое или существенно сниженное. 18. Способ по п.9, отличающийся тем, что для экстрагирования используют растворитель,выбранный из группы, содержащей водный этанол, водный метанол и алкан, которые имеют 58 атомов углерода, и жидкий или сверхкритический диоксид углерода. 19. Способ по п.9, отличающийся тем, что стабилизатор добавляют после сушки раствора экстракта. 20. Способ по п.9, отличающийся тем, что стабилизатор добавляют только на этапе получения готового фармацевтического состава совместно с обычными фармацевтическими добавками. 21. Способ по п.9, отличающийся тем, что процесс проводят при исключении света и/или кислорода. 22. Фармацевтический состав, отличающийся тем, что он содержит экстракт в соответствии с одним из пп.1-8, а также обычные фармацевтические добавки, причем этот состав предназначен для лечения депрессий или психовегетативных расстройств.